茶薪菇多孢快速育种简报

中国食用菌２００８，２７（３）：１４～１６

ＥＤＩＢＬＥＦＵＮＧＩＯＦＣＨＩＮＡ

ＣＮ５３—１０５４／ＱＩＳＳＮ１００３－８３１０

茶薪菇多孢快速育种简报

张筱梅１，张焕英２，张渊１，苗晓燕１

（１．保定学院生物系，河北保定０７１０００；２．北京印刷学院教务处，北京１０２６００）

摘要：采用担孢子多孢诱变、群体杂交与组织分离进行茶薪菇育种比较，确定简单快速的多孢育种方法。经多孢杂交。筛选出高产稳定菌株Ａ２０７，该株长势快，产量高，菇形好，其鲜菇效率较原株增加１６．１％，畸菇率下降３．４％。

关键词：茶薪菇；担孢子；育种；产量性状

中图分类号：￥６４６．９文献标识码：Ａ文章编号：１００３—８３１０（２００８）０３—００１４－０３

茶薪菇香味浓郁盖滑柄脆，营养丰富，可鲜食Ｔ．制，近几年在我国栽培发展迅速，产量不断增加。但连续栽培．生产菌株存在着产量明显下降，形状不断退化等现象…。需每年育种。传统的单孢子分离育种过程复杂１２１，时问长，组织分离选种效果较差１３Ｊ。不能满足生产的需求。为解决生产上快速育种选优汰劣，简化操作，满足生产需要，自２０００年起采用茶薪菇担孢子多饱诱变群体杂交，连续进行育种试验。获褥了明显效果。简报如Ｆ：

１材料与方法

１．１菌株

茶薪菇亲本菌株。由河北农、Ｉｋ大学同艺学院提供，Ａ２０７为多孢杂交选育出的优良菌株。

１．２培养基

母种培养基：ＰＤＡ

原种、栽培种培养基：棉籽壳８２％～８７％、麦麸８％～１３％、玉米粉３％、红糖１％、石膏ｌ％、料水比１：（１．３～１．４）。

１．３担孢子分离及诱变处理

选生长健壮典型的头潮子实体，放入具纸条的无荫罐头瓶中．２５℃培养２４ｈ取出子实体，担孢子２℃～４℃保藏备用。纸条孢子加水室温下浸泡０～５０ｈ计数．稀释至每毫升１０４～１０ｓ孢子，孢子液充分混均，取ｌＯｍＬ于平皿中，置２０ｅｍ处紫外线照射０、１０ｓ、２０ｓ、３０ｓ、６０ｓ、９０ｓ，注射器平板（含链霉素３００，ｇ?ｍＬ一）点样，２５℃避光培养４８ｈ，７ｄ后选色白健壮菌落转接斜面测定生长势。

１．４组织分离

选头潮幼嫩典型子实体．消毒后掰开，在盖柄交界处取适量荫丝组织接种于斜面培养基，２５℃培养８ｄ—ｌＯｄ转斜面。比较生长势。

１．５菌丝生长势测定

经孢子或组织分离，斜面比较．优选出萌发早，生长快健壮的初筛菌株进行出菇复筛。

１．６出菇试验

初筛菌株接入栽培种袋，每袋干料０．２５ｋｇ，重复１０次，室温发菌培养。常规出菇管理，记录满袋现蕾时间及予实体，批量状态。

１．７拮抗性试验

优选菌株与原菌株成对接入平板（相距２ｅｍ），２５０Ｃ培养１４ｄ观察拮抗现象。

１．８同工酶分析

取待测菌株子实体１９冰浴下研成糊状，离心后取上清液置冰箱备用。采用聚丙烯酰胺。

凝胶屯泳（分离胶７％，浓缩胶３％，Ｔｒｉｓ—Ｇｌｙ缓冲液系统）进行同工酶谱分析，比较其酶带相对迁移率、数量、活性等１４１。

２结果与分析

２．１浸泡及诱变对孢子萌发的影响

平板观察发现，未经紫外线照射的担孢子经１５ｈ－２０ｈ浸泡，萌发较对照提前ｌｄ～３ｄ；浸５ｈ、１０ｈ、３０ｈ提前ｌｄ；浸泡５０ｈ未萌发。表明浸泡１５ｈ～２０ｈ效果较好，浸泡５０ｈ以上，对萌发不利；紫外线照射后手日孢子萌发推迟ｌｄ一３ｄ．表明紫外线对担孢子萌发有抑制作用。未浸泡孢子对紫外线照射不敏感（表１）。

表１浸泡时间及紫外线照射对担孢子萌发的影响

项目来源：本课题２００１年在保定学院立项．２００２年推荐为河北省教育厅指导项目。收稿日期：２００８一０３一０８

第２７卷第３期张筱梅等：茶薪菇多孢快速育种简报１５

２．２初筛斜面培养基菌丝生长势测定

初筛选出２７２株（多孢分离１７９株，组织分离９３株），进行生长势测定。比较发现组织分离菌丝稀弱长势较差；孢子分离菌丝普遍浓密粗壮，生长快，其中多孢分离紫外线照射１０ｓ～６０ｓ处理有３．８％的菌丝长速增加０．７％一１２．１％．尤以孢子浸泡１５ｈ一２０ｈ．紫外照射１０ｓ一３０ｓ效果较好。３０ｓ以上处理菌丝长速普遍下降２％一２ｌ％。部分初筛结果见表２。

表２斜面培养基菌丝生长势比较

２．３复筛棉籽壳培养基菌丝生长势测定

复筛选出２２株（孢子分离１６株．组织分离６株），进行吃料测定及出菇试验。比较发现，多孢分离菌株在棉籽壳培养基上生长迅速．满袋及现蕾时问普遍提前，其中Ａ２０７较原株提前５ｄ～６ｄ（表３）。该株菌丝粗壮生长快，抗污染强．具有较强的覆盖绿霉优点；组织分离菌株普遍长势较弱抗霉能力差，满袋及现蕾时间一般较原株推迟２ｄ一７ｄ。

表３棉籽壳培养基菌丝生长势比较

２．４子实体产量性状比较

栽培表明，菌株Ａ２０７子实体丛生盖厚，菇彤好．产量高．鲜菇效率达７５．３％，较原株增产１６．１％（表４），该株经棉籽壳、乇米芯等原料多次栽培均表现出稳定特性，具有生Ｋ快出菇早。产量高菇形好等优点，生产栽培鲜菇效率达６６％～７３％，发菌期污染率低于７％。相比之下组织分离产量普遍下降２０％一３０％，畸菇率上升３％一ｌｌ％。２．５同工酶试验分析

由图谱可知。与原株相比Ａ２０７菌株酶谱在位置、浓淡以及数量方面均出现了一定的差异。从位置上看。茶薪菇的酯酶同工酶丰要分布在ＡＢ２区．Ｂ区的Ｒｉ０．８１６、

表４栽培袋子实体产量性状比较

Ｒｆｏ．８６０、Ｒ∞．９０４、３条酶带为２

菌株共有。表明是茶薪菇的特

征性酶带．此外２０７菌株在Ａ

区Ｒｆ０．３６７处有ｌ弱带．Ｂ区除

特征性酶带外。还多出１条

Ｒｔ０．９３８强带．说明该株已发生

了不同程度的遗传物质的改变。

２．６菌丝拮抗性分析

平板拮抗试验表明，Ａ２０７

菌株与原菌株之间可形成明显

围Ｉ同工酶比较

的拮抗线。

２．７多孢杂交与组织分离育种效果｝Ｂ较

初筛发现茶薪菇组织分离的菌丝长势纤弱密度小．９３株中８４株长势下降．下降率９２．５％，７株与原株接近，占７．５％（表５）。多孢分离的菌丝长势普遍强壮浓密，５６．５％的未诱变株茼丝长势与原株接近．２．２％的性状明显提高：诱变后２１．８％菌株与原株接近．１．５％的性状明显提高。说明紫外线提高了菌株的突变率（正变及负变），同时无论诱变与否多孢杂交均比组织分离菌丝长势强壮。

表５筛选菌株与原株菌丝生长势比较

复筛试验组织分离的６株子实体菇期延后。产量性状均鼹著下降：多孢杂交的１６株中３株子实体产量性状略有增加．１株明显提高。再次表明组织分离菌株生产性状退化明显，孢子分离菌株生活力较强。

２种方法育种时间均在３个月４个月。无明显的差异。

３小结与讨论

担孢子多孢分离，群体杂交．方法简便，用时短，选

优率高．是茶薪菇快速育种的一种有效方法．适宜生产上

中国食用菌２００８，２７（３）：１６

ＥＤＩＢＩ．ＥＦＵＮＧｌ０ＦＣＨＩＮＡ

ＣＮ５３——１０５４／ＱＩＳＳＮ１００３—－８３１０

高出草率的冬虫夏草优良菌种分离驯化成功

何荣华

（四Ｊ中图分类号：￥６４６．９文献标识码：ＡＩ省绵阳市食用茼研究所，绵阳６２１０００）文章编号：１００８３—８３１０（２００８）０３—００１６－０１

冬虫夏草是一种非常名贵的中药．它神奇的功效受到历代医学界的高度赞赏，在这个世界上．中药类最珍贵的就是冬虫夏草了。它的价格超过了黄金价。目前药店的售价每公斤高达３０多万元。

冬虫夏草野生于青减高原。主产于谣藏、青海、四川、云南、甘肃五省海拔４０００ｍ～５０００ｍ的雪域高原。随着人类过渡采挖和资源减少。冬虫夏草已面临濒危灭绝．因此人类就有研究它的欲望，并想揭开它的神秘面纱。

冬虫夏草是由一种专一性的真菌感染特定的昆虫，再通过特殊的环境生长发育而成．要想弄清楚这种菌和这种虫之间的关系。以及它们的生物学特性，并想获得它们都不是一件容易的事。

在国内外．由于很多人都末见过真正的冬虫夏草，能出草的菌种和蝙蝠蛾幼虫，根本无法进行研究。有人把它看得太简单了．认为自已能分离到冬虫夏草菌种，只＿１１ｒ亲自研究过的人才知道．冬虫夏草菌种分离、驯化难度太大了。过去有些大专院校花ｒ几千万元的科研经费，都没有分离驯化出能在瓶内培养基上长出草的薷种。

四川省绵阳市食用菌研究所所长、高级工程师朱斗锡从事冬虫夏草菌种分离和昆虫饲养１０多年来．每年一到冬虫夏草生长季．他都要亲自剑西藏、青海、四川的甘孜、阿坝地区海拔５０００ｍ的高原采挖大量的新鲜冬虫夏草进行分离，对于分离技术来说，朱教授有３０多年的各类菌类分离技术和丰富的实践经验．结果都以失败而告终。直到有一次春天出差嘲来。在实验室检查冬虫夏草菌种时。突然惊奇的发现了１支试管内长出一根草，仔细一

推广使用。试验发现。组织分离与多孢分离育种效果差异较大，分析认为．扭孢子分离菌株源自有性繁殖细胞，再生能力强。体现了自然群体中优势个体的强势竞争能力，筛选的止变率高：组纵分离菌株源自营养菌丝组织，再生能力较弱，筛选的负变率较高。

研究表明紫外线对浸泡孢子的诱变效果较好，其中以浸泡１５ｈ～２０ｈ，照射１０ｓ一３０ｓ的选优率最高。笔者认为，浸泡后细胞由休眠状态转至开始生长．ＤＮＡ复制合成期对紫外线极敏感，可导致菌丝细胞变异．但大剂量照射对ＤＮＡ损伤较大，造成菌株负变率高．故偏低剂量有利于菌丝细胞正向突变。

多孢分离诱变。孢子接受紫外线照射不一定十分均看．确实是一根与

野生冬虫夏草头上

的草一模一样。无

论是形状和颜色都

无任何差别．接着

又发现了第２支试

管也长｝“了川样的

草。这是８２０批分

离中的第９号菌

种，编号为：８２０—９＃，就是说经过了８２０批的那次分离巾．有９个小Ｉ叫的菌株，当时按照菌株以及菌丝生长好坏表现分别排名编号．其巾９号菌种是８２０批中生长表现较差的最后一个号．因此编为８２０一嘶。一般都是把排前儿名的着为重点观察，根本没有把它当回事，结果出乎我们的预料．竟然是它会Ⅱ；草，也没有见过这样奇怪的菌丝生长．在成千上万支的冬虫夏草菌种中，８２０—９＃只彳ｒ４支，其中２支都出草．另２支正在萌发，但含有杂菌污染，这２支菌利ｔ成为无价之宝。有了它就可以栽培出冬虫夏草了．有了它就町以利用这种营养丰富的菌幺幺体制作各种药品和保健品了。

回想起来．在过去分离的很多冬虫夏草菌种，尽管菌丝体颜色与虫体内部颜色相Ｉ叫。虽然后来有的已长草，但长的草始终有一定的筹异，不像野生的，有很多的菌种被注入和感染虫体而冤枉致死长不出虫草。现在才明白，过去走了不少的弯路，花了不少的代价，要想分离、驯化出这样能在培养基上出草的冬虫夏草优良菌种确实不容易。

匀．可能会｝“现不纯的菌落，故此诱变时，孢子悬液须稀释至一定浓度，并充分混匀。初筛巾须多次转管比较，复筛出菇更是育种的关键环节。

参考文献

【１］吕作舟．食用菌栽培学［Ｍ］．北京：商等教育｝Ｈ版社，２００６，６８－８０．［２Ｊ张筱梅．猴头单孢诱变育种初撤［Ｊｊ．中国食用菌，１９９５，（４）：２０～２１．

【３］张焕英，张筱梅，张渊．三株鸡腿菇组织分离培［Ｊ］．食用菌，２００３．（３）：１６一１７．

【４１邓功成，刘朝贵．鸡腿蘑菌丝体的同工酶研究［Ｊ］．中国食用菌，

２００３，２２（６）：４２～４４．