活性氧测定各种方法及原理
评述与进展 活性氧测定的基本原理与方法
林金明3
屈 锋 单孝全
(中国科学院生态环境研究中心,北京100085)摘 要 综述了过氧化氢(H 2O 2)、一重态氧(1O 2)、超氧阴离子自由基(?O -2)以及羟自由基(?OH )等活性氧的测
定方法。侧重介绍活性氧的化学反应法、捕捉法和直接测定法的基本原理和最新的进展情况,并比较了这几种方法的各自特点。
关键词 活性氧,化学发光,自由基,评述
2001211208收稿;2002205205接受
本文系中国科学院“百人计划”和国家杰出青年科学基金资助项目(N o.20125514)
1 活性氧
氧是生命运动过程中不可缺少的一种气体,人们一旦处于缺氧或者供氧不足的环境中,就会感到憋气的痛苦甚至死亡。所以,自从1770年代初英国人Joseph Priestley 发现氧以来,氧一直被人们认为是一种对人体百益而无一害的气体。可是,科学技术迅速发展起来的今天,我们知道,不管是空气中的氧还是水中的溶解氧都具有较高的氧化性,与一般的金属铁一样,处于空气中的人体各部位都在不断地受到氧的腐蚀而“生锈”,当然这种腐蚀与铁不同,它体现在人体的细胞水平上。特别是人体各种器官随着
年龄的增大不断地老化更是这种腐蚀“生锈”的直观表现。1969年McC ord 与Fridovich 1发现,在生化反
应过程中O 2获得一个电子还原生成超氧自由基(O -2),进而经过红血球的分离精制后获得O -2的清除
灭活酶,并命名为超氧化物歧化酶(superoxide dismultase ,S OD )。这一发现激发了大批的科学研究者致力于O -2的生成过程、反应活性、毒性、生理和病理等等各方面的研究,去探索解明S OD 在生理学上的意义。同时由O -2衍生出来的过氧化氢(H 2O 2)、羟自由基(?OH )、
激发态氧(一重态氧或称单线态氧,1
O 2)也受到了人们的重视。近10多年来,活性氧在人体内的作用受到人们极大的关注,报道了大量有关活性氧,特别是超氧自由基和羟自由基与机体细胞的许多功能活动以及各种疾病,如癌、动脉硬化、糖尿病、心脑血栓、缺氧再灌注综合症、感染以及衰老效应等相关的研究论文和著作2～8,引起人们对活性氧的普遍兴趣,从而激发了人们更深入地去研究活性氧的各种特性,开发各种相关的抗氧化、抗衰老物质,在医学和分子生物学领域已成为一项广泛引起重视的研究课题。
所谓的活性氧,概括地说,是指机体内或者自然环境中由氧组成,含氧并且性质活泼的物质的总称:
主要有一种激发态的氧分子,即一重态氧分子或称单线态氧分子(1O 2);3种含氧的自由基,即超氧阴离
子自由基(O -2)、羟自由基(?OH )和氢过氧自由基(H O 2);2种过氧化物,即过氧化氢(H 2O 2)和过氧化脂质
(ROOH )以及一种含氮的氧化物(NO )等。这些物质化学反应活性强、存在寿命短,如1O 2的平均寿命为2μs 、?OH 自由基200μs 、O -2自由基5s 。正是由于它们寿命短、反应活性高,到目前为止除了H 2O 2以外,其它活性氧的测定仍然是一项国际性难题,还没有特别专一有效的方法。一般情况下采用的分析方法
可大体有化学反应法9～36、捕捉法37～47和直接测定法48～59。本文按这样的3种分类针对不同活性氧的
测定方法作一概括性的总结,比较它们各自特点。
2 化学反应法
由于活性氧具有较高的反应活性,它们可以与许多不同的化合物发生化学反应,由此产生各种不同的反应生成物,根据这些反应生成物或者反应物的变化程度可以进行定量或者定性分析。通常采用的
仪器分析方法有,化学发光法9～16、紫外2可见吸收分光光度法1,17～22、荧光光度法23～25、电子自旋探
第30卷
2002年12月 分析化学(FE NXI H UAX UE ) 评述与进展Chinese Journal of Analytical Chemistry 第12期1507～1514
针26～29以及选择性电极法30～36等。化学反应法的特点是测定灵敏度高、廉价、操作简便等。但是,化学
反应法的特异性相对比较差,一些氧化还原反应或者酶催化反应往往对测定结果的判断产生影响,一般需要其他分析方法作为比较,才能获得满意的结论。
2.1 化学发光法
化学发光测定法是仪器分析中灵敏度最高的方法之一,已在医学、环境以及工业分析等许多领域里得到广泛的应用60～63。活性氧的化学发光研究也是活性氧测定法研究领域中比较活跃的分支之一,特别是针对H
2
O2测定,有许多灵敏度高、选择性好的化学发光体系64～68。进年来,笔者在H2O2测定方面开发了一系列高灵敏度的化学发光分析法69～72。除此之外,目前比较成功的活性氧化学发光测定法主要有鲁米诺法(luminol)、光泽精法(lucigenin)和cypridina luciferin analog(C LA)法。
通常,鲁米诺在碱性溶液(pH10左右)中,首先形成单价阴离子,然后在催化剂,如酶,Fe2+、C o2+、Ni2+和Cu2+等过渡金属离子或者金属络合物的催化下与溶液中的溶解氧或者过氧化氢发生氧化还原反应,生成激发态的两价阴离子氨基肽酸盐(APD),APD经非辐射性跃迁回到基态时,放出光子73,74。自从1928年Albrecht75报道了鲁米诺的化学发光现象以来,70多年过去的今天,鲁米诺的化学发光反应机理仍然没有得到满意的解决。近年来,笔者在研究金属过氧化物的化学发光时发现,在不存在任何
催化剂的条件下,向BaO
2或者MgO2固体粉末中注入鲁米诺溶液,仍然可以观察到很强的发光现象
76,这一发现已被应用于以鲁米诺衍生物ABEI作为标记物的化学发光柱后测定法77,78。利用固2液非均相化学发光体系,在弱酸性或者非缓冲介质条件下,同样能够观察到鲁米诺与过氧化氢的发光现象71。这些结果表明,鲁米诺发光与否取决于活性氧的生成条件,而与鲁米诺溶液的酸碱度似乎没有直接的关系,介质的酸碱度影响了激发态APD的发光强度和发光波长。所以,从理论上来说,鲁米诺化学发光法
可以应用于各种不同介质中的H
2
O2、?O-2、?OH、1O2测定,这就导致了测定选择性差的问题。因此,在许多情况下,活性氧的鲁米诺化学发光法只能作为定量或者定性分析的辅助手段。
在发现鲁米诺化学发光后不久,G leu和Petsch两人79于1935年发表了第一篇光泽精化学发光的论
文。在碱性条件下,光泽精与H
2
O2,O-2等过氧化物作用形成激发态N2甲基吖啶(N2methylacridan)。相比之下,光泽精对于活性氧测定的选择性则相对比较高,有许多报道76,80,81光泽精只有在超氧活性自由基
存在下发生发光现象。但是,在实际应用中,H
2
O2的分解过程同样产生O-2自由基,难以定性地判断分析结果。
还有一类特殊的化学发光试剂,化学名称为22methyl262phenyl23,72dihydroimidazo21,22a pyrazin232 one,简称C LA,1970年代由日本化学家G oto等82合成。C LA的特点是不与生物机体内的H2O2或者?OH发生反应,只与O-2或者1O2发生特异性的化学发光反应,发光波长为380nm83。这一现象已被应用于白血球的功能性检查方面的研究84～86。G oto等87还开发了C LA的衍生物,MC LA、FC LA、Nakano和Fujim ori等88～90对这一类试剂的化学发光机理和反应的动力学作了详细的研究,报道了C LA,MC LA与活性氧的化学反应机理。FC LA是目前化学发光试剂中发光波长(532nm)最长的试剂,发光效率比C LA 高出近10倍,由于这一特点,在进行生物样品中?O-2或者1O2测定时,能够有效地降低酶、?OH等干扰物质的影响。
2.2 分光光度法
活性氧的分光光度测定,最常用的方法有细胞色素丙(cytochrome C)的超氧自由基还原法1,20和硝基四氮唑篮(nitro blue tetrazolium,NBT)还原法92。具有氧化活性的细胞色素C被?O-2还原后,形成了在波长550nm处有强吸收的亚铁细胞色素93,可以用于O-2的直接测定,在S OD存在下,O-2受到S OD的
催化形成H
2
O2和O2,以被开发为S OD的间接定量分析法94。
但是,活性氧的细胞色素丙还原法存在着其它还原性物质,如H ADPA和还原性酶的干扰,一般情
况下无法直接用于O-
2的定性分析,需要比较在S OD的存在下,是否还有O -
2与细胞色素丙发生反应的结果,从而判断O-
2的生成与否。
同样,如图1所示,NBT在O-
2的作用下,还原生成不溶于水、蓝色的二甲替(diformazan)92,95,它的
8051 分析化学第30卷
图1 硝基四氮唑蓝与超氧阴离子自由基反应的颜色变化
Fig.1 C olor change of the reaction of nitro blue tetrazolium
with superoxide anionic radical ion 最大吸收波长560nm ,吸光系数达10,000以上,测定
灵敏度相当高。笔者在进行KI O 42H 2O 2化学发光反
应体系的机理过程中70,使用NBT 反应测定O -
2,获得良好的结果。但是,由于二甲替不溶于水,长时间
放置会出现沉淀现象,难以应用于测定细胞或者水
溶液体系中O -2形成的时间推移变化。Sutherland 和
Learm onth 96报道了利用水溶性NBT 衍生物测定O -
2的方法,解决了生成物沉淀所导致的测定困难问题。
应用分光光度法测定活性氧的比较简单方法还
有H 2O 2的T i ?检测法97,辣根过氧酶(HRP )法20,
过氧化物酶法21和乙醇脱氢催化酶法98
等等。
2.3 荧光光度法
与化学发光一样,荧光分光光光度法也是灵敏
度高,操作简便的分析方法之一。利用荧光光度法
测定活性氧的报道不多,这里仅举几个例子,希望能
够起到抛砖引玉的作用。比较典型的例子是,二氯
荧光素(DCFH )在过氧化物酶存在下,被H 2O 2或者
H O -2氧化形成具有有萤光的DCF ,可以有效地应用于H 2O 2定量分析
23。利用2,32二氨基萘(DAN )与NO -2在酸性条件下发生反应,形成荧光性的12(H )2萘三氮茂环,有人提出用2,32二氨基萘(DAN )作为NO 的测定方法24。最近,K ojima 等25开发了可以应
用于生物机体或者细胞培养过程中NO 测定用的二氨基荧光素222联乙酰(DAF 222DA ),检测灵敏度达5nm ol ΠL NO 。随着合成技术的不断提高,相信今后还会出现更灵敏、使用更为方便的活性氧测定用的荧光试剂。
2.4 电子自旋共振法(ESR 法)
ESR 作为活性氧的化学反应后的检测方法,可以理解成是一种自由基的标识反应,即向活性氧生成的反应体系中添加本身带有不对称电子的自由基,这一添加物与活性氧发生反应后失去不对称电子,从
而导致ESR 信号的变化。Utsumi 等27在研究生物机体或者生物膜的构造过程中,使用了硝基木酮自由
基作为反应的添加物,硝基木酮自由基在与O -2,OH 或者生物微粒体(micros ome )等的电子传输系统发
生反应过程中,被还原生成羟胺或者羟氨基,从而失去单自旋电子,在ESR 测定中体现为信号的减弱。
另外,与T MP (2,2,6,62tetramethyl 242piperidone )类似的哌啶衍生物,在1O 2的作用下,可与硝基木酮自由基
发生氧化还原反应,也可应用于1O 2的测定26。但是,这一方法同样存在测定选择性差的问题,除了1O 2以外,其他种类的活性氧或者电子供给体同样可以向硝基木酮自由基提供电子,影响对ESR 信号的判
断,需要得到进一步改进和完善。有关这一方面的详细综述可以进一步参考文献29,99。
2.5 电极测定法
利用选择性电极法测定活性氧的报道相对比较多,比较成功的例子是利用过渡金属镍2扑啉的高分
子膜微电极测定单一细胞中的NO 30,NO 的检测限达10-20m ol ,并且选择性也相当不错。还有一类比较
成功的研究是H 2O 2电极法测定,Lv ovich 与Scheeline 33报道了一种可以同时应用于O -2和H 2O 2测定的
复合电极,他们采用电沉积的方法,把聚吡咯(polypyrrole )ΠHRP 覆盖在玻碳电极表面,作为H 2O 2的传感器;另一玻碳电极在以上处理的基础上,再覆盖上一层聚吡咯ΠS OD 膜,用于O -
2的测定,这种复合电极的可使用酸度范围在pH 5.1～9.0,非常适合于生物样品的分析。从现有的报道来看,活性氧电极大多是建立在酶催化的基础上,在测定过程中,往往出现酶不断脱离作为其支持体的高分子膜,容易导致电9051第12期林金明等:活性氧测定的基本原理与方法
极寿命缩短和测定结果不稳定的问题。所以,从某种程度上来说,寻找和建立有效的酶固定方法是电极法今后发展的方向之一。
3 活性氧的捕获法
捕获法就是利用某些捕捉剂或者捕获剂,把反应活性强、寿命短的活性氧捕获之后加以测定。但是,在许多情况下,活性氧捕获反应所产生的反应生成物一般不只一种甚至两种以上,需要经过分离测定。目前最常用的分离分析法有高效液相色谱法(HP LC )和气相色谱法(G C )。针对一些不稳定的自由基,还有一种方法是可以利用自旋电子捕获法(spin trap ),即向自由基生成的反应体系中,添加一种不对称电子的捕获剂,如最常用的有,5,52二甲基吡咯啉212氧化物(5,52dimethyl pyrroline 212oxide ,DMPO ),在与自由基作用后形成较为稳定的自由基附加生成物,利用ESR 仪进行测定。
3.1 色谱法
Smith 等100,101研究结果表明,1O 2与胆固醇发生特异性反应,生成5α2过氧化胆固醇102,而胆固醇的
自动氧化反应或者自由基反应的生成物分别为7α2过氧化胆固醇和7β2过氧化胆固醇,经过HP LC 分离
后,可以确认不同的反应生成物39。这两类不同的生成物同时也证明1O 2与胆固醇反应的特异性。但
是由于1O 2与胆固醇反应速度慢,导致测定的灵敏度低,在实际应用过程中,往往采用碳14标记胆固醇来提高检测灵敏度。这一方法已被应用于生物微粒体脂质的过氧化反应
103,含有增感剂的磷脂膜中产生的1O 2104的测定。
作为?OH 的捕获剂,水杨酸与?OH 反应生成2,32以及2,52二羟基安息香酸37,通过HP LC 分离后得
以定量分析,这一方法已成功地应用于白兔的贫血、再灌流阻害的研究,其结果表明这些症状与?OH 有
着密切的相关性41。K amiya 等40报道了在生物机体内经过?OH 或者1O 2反应生产82羟基鸟嘌羚(82OH 2
G ua ),利用HP LC 分离分析发现人体的白血球以及尿液中含有82羟基鸟嘌羚的研究事实。从这些例子来看,在各种标准试剂具备的研究条件下,利用各种分离分析法测定自由基反应生成物,可以有效地判断反应物活性氧的类型。
3.2 电子自旋共振法
如图2所示的自由基捕获法的基本原理,DMPO 、P BM (α2pheny 2N 2tert 2butynitrone )等自旋电子捕获剂,
与自由基发生反应后形成相对稳定的自由基附加生成物,然后用ESR 法进行测定
43。DMPO 具有良好 图2 自旋电子捕获法的基本原理和3种重要捕获剂
Fig.2
Basic principle of spin trapping method and three important spin traps DMPO :5,52四甲基吡咯啉212氧化物(5,52dimethyl 212pyrroliue 212oxide ;T MPO :3,3,
5,52四甲基吡咯啉212氧化物(3,3,5,52tetramethyl 212pyrroliue 212oxide );DBNBS :3,
52二溴242亚硝基苯磺酸盐(3,52dibrom o 242nitros obenzene sulfonate )。
的水溶性,有利于实验的操作和溶液
配制,更重要的一点是DMPO 或者P BN
与O -2,?OH 反应后,所测定到的ESR 谱
图有明显的差别,能够快速地区别出
O -2和?OH 。ESR 谱的峰数目及其超精
细结合常数(h fs :hyperfine splitting ,信号
峰之间的距离)是自由基与DMPO 、P BN
形成自由基附加生成物的特有特征,与
ESR 的g 值具有同样重要的意义,可以
应用于O -2或者?OH 的定性分析。但
是,这个方法也存在着它的不足之处,
与O -2形成的自由基附加生成物DMPO 2OOH 在生理条件下,会逐渐地转变为与?OH 的自由基附加生成物DMPO 2OH 类似的ESR 信号,使得O -2,?OH 的判断成为困难,K ohno 等45采用向测定体系
中添加二甲亚枫(DMS O )的方法良好地解决了这一问题。最近,R ouband 等46报道一种新的DMPO 的衍0151 分析化学第30卷
生物,DEPM O 52(dithoxyphosphoryl )252methyl 2pyrroline 2oxide ,这一试剂可与O -2形成稳定的自由基附加生
成物(半衰期约15min ),这种生成物具有特征性的12个峰的ESR 信号,使用方便,易于定性判断。到目前为止,利用自由基捕获法的ESR 测定仍然是氧活性自由基测定的主要手段之一,开发象这样的一类反应特异性高、稳定性好的自旋电子捕获剂将继续是活性自由分析重要的研究方向之一。
4 直接测定法
能够用于活性氧直接测定的方法目前还相当少,已报道的只有1O 2发光测定法和具有不对称电子自由基的ESR 法。下面就这两种方法作简要的介绍。
4.1 1O 2的发光测定法
实际上,1O 2有两种不同的存在状态,16+g 和1Δg ,在水溶液中,1Δg 的存在寿命为4.2μs 105,而16+g 图3 一重氧的分子状态及其共存的迁移分子对状态
Fig.3 Oxygen singlet m olecule state and simultaneous
transition m olecular 2pair states 存在的寿命更短,一般要求1O 2浓度在10
-3m ol ΠL 以上106,存在寿命不到10-10s ,如此短暂的存在时间,
导致了测定上困难,所以,水溶液中参与化学反应的
往往是1Δg 状态的1O 2。从氧的分子轨道的电子排布
可以看出,1Δg 具有亲电子的反应特性,而1Δ+g 的激
发态能量高于1Δg 状态的1O 2,电子由激发态跃迁回基
态时以发光的形式释放出能量,部分已知的发光波
长如图3所示。在这些波长中,还无法肯定634nm
和762nm 是来自于1O 2放射的能量50,但是1268nm
的发光属于1O 2发光的特异性波长已被公认
51,通过测定这一波长的发光来确定1
O 2的方法已被广泛地得到应用53,54,56,57。4.2 电子自旋共振法反应活性高、寿命短的O -2,?OH 自由基的直接测
图4 超氧自由基的电子自旋共振谱图Fig.4 E lectron spin res onance (ESR )spectra of
superoxide radicals 11由黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶在77K 条件下反应产生的超氧自由基离子(the superxide radical ion generated from the reaction of xanthine with xanthine oxidase at 77K );21由过氧化氢与高碘酸钠在77K 下反应生成的超氧自由基离子(the superoxide radical ion generated
from the reaction of H 2O 2with NaIO 4at 77K )。
定法,目前只有ESR 法。但是这一方法在室温条件下无法
进行,必须结合超低温冷冻和快速混合法,以提高可被测定
的自由基浓度。ESR 法灵敏度高,定性分析的可信度好的
同时,也存在着仪器昂贵,操作程序相对复杂,并且要求液
态氮或者其他低温液化气作为冷冻剂等问题。能够同时具
备ESR 仪器和超低温(77K 甚至更低)液化气发生装置的
研究单位还不多。目前研究自由基的方法还是以化学分析
法为主,以直接测定法为对照。图4所示O -2的是两种典
型的ESR 直接测定谱图58,冷冻状态下的O -
2自由基在外部磁场作用下,可以通过ESR 谱图测定计算出不对称电子的旋转方向受到磁场的影响而发生变化,与磁场方向相平行的g ∥和相垂直的g ⊥。每一种自由基都有它特有的g 值,是确认自由基的重要测定数据。尽管ESR 直接测定法被
认为是目前自由基分析选择性最好的手段,但是如图4所
示一样,自由基测定的ESR 信号同样也受到共存离子、溶
剂等条件的影响,同一种自由基在不同测定环境中,所得到
的ESR 谱图往往有一定的差别,给结果的分析带来困难。1151第12期林金明等:活性氧测定的基本原理与方法
2151 分析化学第30卷
5 结 语
从以上的各种方法的比较来看,能够进行直接测定的活性氧的种类不多,直接测定的方法也相当有限,而到目前为止化学反应法和捕获法的分析选择性和可信度还难以令人满意。而在医学、环境等许多领域里,迫切需要开发高灵敏度、高选择性的活性氧以及其他一些活性自由基的测定方法。特别是活性氧的in viv o测定,对于解释生命机体的各种生理、病状等有着重要的意义,建立简便可靠的活性氧以及其他自由基的测定方法,对于获取人体内的各种变化的情报将与DNA的解释具有同等重要的意义,有关in viv o测定方法可以进一步参考文献8和99。
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Determinations of Active Oxygen Species and
Their B asic Principles
Lin Jinming3,Qu Feng,Shan X iaoquan
(Research Center for Eco2Environmental Sciences,Chinese Academy o f Sciences,Beijing100085)
Abstract The detection methods of s ome im portant active oxygen species,e.g.,hydrogen peroxide,singlet oxygen,superoxide anionic free radical and hydroxyl free radical are reviewed with106references.
K eyw ords Active oxygen species,chemiluminescence,free radical,review
(Received8N ovember2001;accepted5M ay2002)
水准测量的原理
水准测量的原理 一、几种常见的水准测量方法 1.几何水准测量(简称水准测量); 2.三角高程测量; 3.气压高程测量(物理高程测量)。 二、水准测量原理 水准测量 就是利用水平视线来求得两点的高差。例如图2－1中,为了求出A 、B 两点的高差AB h ,在A 、B 两个点上竖立带有分划的标尺——水准尺,在A 、B 两点之间安置可提供水平视线的仪器——水准仪。当视线水平时,在A 、B 两个点的标尺上分别读得读数a 与b,则A 、B 两点的高差等于两个标尺读数之差。即: b a h AB -= (2－1) 如果A 为已知高程的点,B 为待求高程的点,则B 点的高程为: AB A B h H H += (高差法) (2－2) 读数a 就是在已知高程点上的水准尺读数,称为“后视读数”;b 就是在待求高程点上的水准尺读数,称为“前视读数”。高差必须就是后视读数减去前视读数。高差AB h 的值可能就是正,也可能就是负,正值表示待求点B 高于已知点A,负值表示待求点B 低于已知点A 。此外,高差的正负号又与测量进行的方向有关,例如图2－2中测量由A 向B 进行,高差用AB h 表示,其值为正;反之由B 向A 进行,则高差用BA h 表示,其值为负。所以说明高差时必须标明高差的正负号,同时要说明测量进行的方向。 图 2－1 由图2－1可以瞧出,B 点高程还可以通过仪器的视线高程H i 来计算,即 H i ＝H A ＋a (2－3) H B ＝H i －b (仪高法) (2－4) 三、转点、测站 当两点相距较远或高差太大时,则可分段连续进行,从图2－2中可得: b a h h b a h b a h b a h AB n n n ∑-∑=∑=-=-=-=Λ Λ2 221 11 (2－5)
水准测量原理
第二章 水准测量 高程是确定地面点位置的要素之一，在工程建设的设计、施工与管理等阶段都具有十分重要的作用。测定地面点高程的工作称为高程测量。高程测量按所使用的仪器和施测方法不同，主要有水准测量和三角高程测量等。水准测量是高程测量中最常用的一种方法。本章主要介绍水准测量原理、水准仪的构造及其使用、水准测量的施测方法与成果整理以及仪器的检验与校正等内容。 2-1 水准测量原理 水准测量不是直接测定地面点的高程，而是测出两点间的高差。即在两个点上分别竖立水准尺，利用水准测量的仪器提供的一条水平视线，瞄准并在水准尺上读数，求得两点间的高差，从而由已知点高程推求未知点高程。 如图2-1所示，设已知A 点高程为A H ，用水准测量方法求未知点B 的高程B H 。在A 、B 两点中间安置水准仪，并在A 、B 两点上分别竖立水准尺，根据水准仪提供的水平视线在A 点水准尺上读数为a ，在B 点的水准尺上读数为b ，则A 、B 两点间的高差为： b a h AB -= （2-1） 图2-1 水准测量
原理 设水准测量是由A 点向B 点进行，如图2-1中箭头所示，则规定A 点为后视点，其水准尺读数a 为后视读数；B 点为前视点，其水准尺读数b 为前视读数。由此可见，两点之间的高差一定是“后视读数”减“前视读数”。如果a >b ，则高差AB h 为正,表示B 点比A 点高；如果a 角度测量的原理及其方法
角度测量的原理及其方法 角度测量原理 一、水平角测量原理 地面上两条直线之间的夹角在水平面上的投影称为水平角。如图 3-1所示，A、B、O为地面上的任意点，通OA和OB直线各作一垂 直面，并把OA和OB分别投影到水平投影面上，其投影线Oa和Ob 的夹角∠aOb，就是∠AOB的水平角β。 如果在角顶O上安置一个带有水平刻度盘的测角仪器，其度盘 中心O′在通过测站O点的铅垂线上，设OA和OB两条方向线在水 平刻度盘上的投影读数为a1和b1，则水平角β为： β= b1 - a1(3-1) 二、竖直角测量原理 在同一竖直面内视线和水平线之间的夹角称为竖直角或称垂直 角。如图3-2所示，视线在水平线之上称为仰角，符号为正；视线在 水平线之下称为俯角，符号为负。
图3-1 水平角测量原理图图3-2 竖直角测 量原理图 如果在测站点O上安置一个带有竖直刻度盘的测角仪器，其竖盘中心通过水平视线，设照准目标点A时视线的读数为n，水平视线的读数为m，则竖直角α为： α= n - m (3-2) 光学经纬仪 一、DJ6级光学经纬仪的构造 它主要由照准部(包括望远镜、竖直度盘、水准器、读数设备)、水平度盘、基座三部分组成。现将各组成部分分别介绍如下：１．望远镜 望远镜的构造和水准仪望远镜构造基本相同，是用来照准远方目标。它和横轴固连在一起放在支架上，并要求望远镜视准轴垂直于横轴，当横轴水平时，望远镜绕横轴旋转的视准面是一个铅垂面。为了控制望远镜的俯仰程度，在照准部外壳上还设置有一套望远镜制动和
微动螺旋。在照准部外壳上还设置有一套水平制动和微动螺旋，以控制水平方向的转动。当拧紧望远镜或照准部的制动螺旋后，转动微动螺旋，望远镜或照准部才能作微小的转动。 ２．水平度盘 水平度盘是用光学玻璃制成圆盘，在盘上按顺时针方向从0°到360°刻有等角度的分划线。相邻两刻划线的格值有1°或30′两种。度盘固定在轴套上，轴套套在轴座上。水平度盘和照准部两者之间的转动关系，由离合器扳手或度盘变换手轮控制。 ３．读数设备 我国制造的DJ6型光学经纬仪采用分微尺读数设备，它把度盘和分微尺的影像，通过一系列透镜的放大和棱镜的折射，反映到读数显微镜内进行读数。在读数显微镜内就能看到水平度盘和分微尺影像,如图3-4所示。度盘上两分划线所对的圆心角，称为度盘分划值。 在读数显微镜内所见到的长刻划线和大号数字是度盘分划线及其注记，短刻划线和小号数字是分微尺的分划线及其注记。分微尺的长度等于度盘１°的分划长度，分微尺分成６大格，每大格又分成10，每小格格值为1′，可估读到0.1′。分微尺的0°分划线是其指标线，它所指度盘上的位置与度盘分划线所截的分微尺长度就是分微尺读数值。为了直接读出小数值，使分微尺注数增大方向与度盘注数方向相反。读数时，以在分微尺上的度盘分划线为准读取度数，而后读取该度盘分划线与分微尺指标线之间的分微尺读数的分数，并估读
水准测量的原理
水准测量的原理 一、几种常见的水准测量方法 1．几何水准测量（简称水准测量）； 2．三角高程测量； 3．气压高程测量（物理高程测量）。 二、水准测量原理 水准测量 是利用水平视线来求得两点的高差。例如图2－1中，为了求出A 、B 两点的高差AB h ，在A 、B 两个点上竖立带有分划的标尺——水准尺，在A 、B 两点之间安置可提供水平视线的仪器——水准仪。当视线水平时，在A 、B 两个点的标尺上分别读得读数a 和b ，则A 、B 两点的高差等于两个标尺读数之差。即： b a h AB -= (2－1) 如果A 为已知高程的点，B 为待求高程的点，则B 点的高程为： AB A B h H H += （高差法） (2－2) 读数a 是在已知高程点上的水准尺读数，称为“后视读数”；b 是在待求高程点上的水准尺读数，称为“前视读数”。高差必须是后视读数减去前视读数。高差AB h 的值可能是正，也可能是负，正值表示待求点B 高于已知点A ，负值表示待求点B 低于已知点A 。此外，高差的正负号又与测量进行的方向有关，例如图2－2中测量由A 向B 进行，高差用AB h 表示，其值为正；反之由B 向A 进行，则高差用BA h 表示，其值为负。所以说明高差时必须标明高差的正负号，同时要说明测量进行的方向。 图 2－1 由图2－1可以看出，B 点高程还可以通过仪器的视线高程H i 来计算，即 H i ＝H A ＋a (2－3) H B ＝H i －b （仪高法） (2－4) 三、转点、测站 当两点相距较远或高差太大时，则可分段连续进行，从图2－2中可得： b a h h b a h b a h b a h AB n n n ∑-∑=∑=-=-=-= 2 221 11 (2－5)
抗氧化剂抗氧化活性的测定方法
1.抗氧化剂是指在低浓度下能有效延缓或阻止底物氧化的物质。被氧化的底物包括蛋白质、脂质、糖和DNA。 2.初始型抗氧化剂(AH)可通过与脂质自由基L.、过氧自由基LOO.或烷氧自由基LO.反应抑制脂质氧化链反应。 L.+ AH--- LH + A. LOO.+ AH--- LOOH + A. LO.+ AH--- LOH + A. 抗氧化剂自由基A.也能与过氧自由基、烷氧自由基反应从而终止脂质氧化反应。 LOO.+ A.---LOOA LO.+ A.---LOA 次级型抗氧化剂可通过各种机理延缓脂质氧化,如螯合过渡金属、给初始型抗氧化剂补充氢、清除氧以及使活性物质失活等。 抗氧化剂的活性分为在生物体外(如食品中)的活性和在生物体内的活性。本文综述了体外测定抗氧化剂抗氧化活性的方法,不包括在生物体中测定生物活性的方法。 3.评价或表征抗氧化活性的方法为了说明在特定条件下被测物抑制底物氧化的效力或清除自由基的能力 实际测定时至少要说明在测试条件下被测物是抗氧化剂还是促氧化剂;在指定浓度下比较不同测试材料(如被测物与标准抗氧化剂或添加有被测物的测试体系与空白体系)对底物的作用。 评价或表征抗氧化活性的方法有: (1)在指定的时间测量氧化产物或官能团的浓度或吸光度值;( 2)测量反应的速率;
( 3)测量诱导期(延滞期)或氧化达到一定程度所需的时间;( 4)测量速度的积分(即动力学曲线下的面积) ; ( 5)测量被测物产生与标准抗氧化剂相当作用的浓度。4.参数 4.1诱导期( induction period) 诱导期tIND(也叫延滞期, lag period)常定义为化学反应的速度。诱导期是一个相当不确定的值,受检测方法、使用仪器的灵敏性以及一些其他因素的影响。对于脂质氧化,诱导期通常是指链增长阶段动力学曲线的切线和时间轴的交点。 4.2抑制率( percentag e of inhibition)和IC50 抑制率和IC50 (抗氧化剂提供50%抑制作用时的浓度,也可用EC50表示的)常用来表征抗氧化能力。它们不仅与被测抗氧化剂的反应性能和氧化的底物有关,而且受其他因素的影响,如脂质氧化链反应的长度和抑制速率等。此外,用IC50表征抗氧化剂 的活性与比较活性的时间点有关。只有在其他参数相同的情况下,在某一研究中测得的抑制率和IC50才可以与另一研究中测得的值进行直接比较。TEC50是指抗氧化剂提供50%抑制作用所需的时间,也常用来表征抗氧化活性 5.对测定方法的要求 测定抗氧化剂抗氧化活性的方法应满足如下要 求: ( 1)能说明测试体系中发生的反应,并能用明确的动力学图解描述;( 2)测试要有再现性; ( 3)测试效率要足够高; ( 4)方法要相对简单; ( 5)能连续检测; ( 6)应使用与体内或食品有关的活性自由基;
活性氧检测试验方案
活性氧检测试验方案 一：实验原理 活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup，以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合物(compound mixture),浓度为50mg/ml。二：实验步骤 ⑴取20 ul DCFH-DA（试剂盒有100ul)按照1:1000用无血清培养液即20ml稀释DCFH-DA，使 终浓度为10微摩尔/ 升。 ⑵吸取12ml细胞培养液（细胞浓度为一百万至二千万/毫升）加入24孔板中（设3个阳性对照， 3个浓度梯度分别做3个重复，每孔加入1ml细胞培养液），放入细胞培养箱中培养。 ⑶培养24小时后去除细胞培养液，每孔加入稀释好的DCFH-DA 1ml （加入的体积以能充分 盖住细胞为宜）。 ⑷ 37℃细胞培养箱内孵育20分钟。
⑸去除孵育后的DCFH-DA稀释液，每孔加入1ml无血清细胞培养液洗涤细胞（重复洗涤三次， 以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA）。洗涤完后每孔加入1ml细胞培养液。 ⑹在酶标仪下使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前荧光的强 弱即OD值。 ⑺实验组中每孔加入已配制好的松茸多糖20ul(浓度分别为5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml), 对照组中加入阳性对照物Rosup 20ul，放入细胞培养箱内继续培养。 ⑻4小时后，在酶标仪下使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激后 荧光的强弱即OD值。 三：数据处理 实验组：癌细胞活性氧降低率=（刺激前OD值－刺激后OD值)/刺激前OD值×100% 阳性对照组：癌细胞活性氧升高率=（刺激后OD值－刺激前OD值)/刺激前OD值×100% 四：注意事项 ⑴探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
PH0630 活性氧检测试剂盒实验操作手册 Phygene
PH0630|活性氧检测试剂盒 Reactive Oxygen Species Assay Kit Catalog No：PH0603Size：?100~500Tests Store at-20℃ 活性氧检测试剂盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）是一种基于荧光染料DCFH-DA（2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate）的荧光强度变化，定量检测细胞内活性氧水平的最常用方法。 DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜。进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不会通透细胞膜，因此探针很容易被积聚在细胞内。细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。在最大激发波长480nm，最大发射波长525nm处，使用荧光显微镜，流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号。Rosup为活性氧阳性诱导药物，根据其荧光信号强度，可分析活性氧的真正水平。 根据检测体系和检测方法的不同，本试剂盒可测定100~500次。 试剂存储 冰袋运输。-20℃干燥避光保存，有效期一年。 试剂组分 编号组分规格保存方法 PH0630-A DCFH-DA（10mM）0.1mL-20℃，避光保存 PH0630-B活性氧阳性对照（Rosup,100mM） 1.0mL-20℃，避光保存 使用说明 检测步骤 1.装载探针 1.1原位装载探针（仅适用于贴壁细胞） ①细胞准备：检测前一天进行细胞铺板，确保检测时细胞汇合度达到50~70%。 【注】：必须保证细胞状态健康，且检测时不会过度生长。 ②药物诱导：去除细胞培养液，加入适量经合适的缓冲液或无血清培养基稀释到工作浓度的药物，于37℃细胞培养箱内避光孵育，具体诱导时间根据药物本身特性，以及细胞类型来决定。 （可选）阳性对照：先用无血清培养基等稀释阳性对照（Rosup,100mM）到常用工作浓度100μM，加入细胞，一般37℃避光孵育30min-4h 可显著看到活性氧水平提高，但依细胞类型会有比较明显差异。【如，HeLa细胞孵育30min；MRC5人胚胎成纤维细胞1.5h；】 ③探针准备：探针装载前按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使其终浓度为10μM。 ④探针装载：吸除诱导用药物，加入适当体积稀释好的DCFH-DA工作液。加入的体积以能充分盖住细胞为宜。如，对于6孔板通常不少于1000μl，对于96孔板通常不少于100μl。37℃细胞培养箱内避光孵育30min。
活性氧检测试剂盒 Reactive oxygen species assay kit使用说明
活性氧检测试剂盒Reactive oxygen species assay kit使用说明 货号：CA1410 规格：100-500T 产品内容： 10mM DCFH-DA in DMSO0.1ml?20oC保存 活性氧供体1ml?20oC保存 说明书1份 产品简介： 活性氧(Reactive oxygen species,ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物(O2??,H2O2,?OH,ONOO?,?NO)等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。采用2,7-dichlorofluorescin diacetate(DCFH-DA)是迄今最常用、最灵敏的细胞内活性氧检探针。DCFH-DA没有荧光，进入细胞后被酯酶水解为dichlorofluorescin(DCFH)。在活性氧存在时DCFH被氧化为不能透过细胞膜的强绿色荧光物质dichlorofluorescein(DCF)，其荧光在激发波长502 nm，发射波长530nm附近有最大波峰，强度与细胞内活性氧水平成正比。此活性氧检测系统本底低，灵敏度高，重复性好，操作简便。 本试剂盒适于荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等图像检测，荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪定量ROS检测。 工作波长： 最佳激发波长500、485(500±15nm)，最佳发射波长525(530±
20nm)。也可按照FITC荧光检测条件检测。 操作步骤： 一、试剂准备： 1.DCFH-DA可稀释于培养基或缓冲液中。血清或培养基颜色并不影响DCFH-DA及细胞内荧光产生，但可能会影响荧光显微镜观察，干扰荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪荧光测定。可将DCFH-DA稀释于无酚红培养基或适宜的缓冲液如PBS中。这依赖于使用何种荧光设备进行测定。 2.加入DCFH-DA的时机或孵育时间，以最终能顺利检测细胞内活性氧为目的。药物处理时间较短(<2小时)或预计ROS效应较弱，可先加或同时加入DCFH-DA。反之，treat刺激时间较长(>6小时)或预计产生ROS效应较强，可后加DCFH-DA。 3.活性氧供体含高纯度12mM H2O2。加入细胞后其本身即是一种活性氧，而且在代谢过程中可产生其它类型的活性氧，均可使DCFH-DA氧化为DCF呈现强绿色荧光。因而，用户可使用该试剂作为测试实验系统或仪器的阳性试剂，以初步观察细胞活性氧所产生的荧光的一般特征，并且也可以将该实际作为实验的一个阳性对照。推荐该试剂的细胞工作浓度为20~100μM 或更低浓度，但超过200μM将产生细胞毒。如果用户熟悉ROS荧光或实验没有必要采用阳性对照，可以不加该试剂。 二、加入荧光探针： 1.加入DCFH-DA于培养基，推荐初始工作浓度为10μM。对不同的细胞和处理，DCFH-DA工作浓度可为100nM~20μM，需进行预实验确定合适的浓度。总体稀释倍数应在1:500~1000以上以避免DMSO对细胞的影响。以DMSO作为溶剂对照。
水准测量的方法及其实施
水准测量的方法及其实施 水准测量原理 水准测量的基本测法是：在图2-1中，已知A点的高程为H A，只要能测出A点至B点的高程之差，简称高差h AB。，则Ｂ点的高程 H B就可用下式计算求得： H B=H A+h AB (2-1) 差h AB。的原理如图2-1所示， 在A、B两点上竖立水准尺， 并在A、B两点之间安置— 图2-1 水准测量原理示意图架可以得到水平视线的仪器 即水准仪，设水准仪的水平视线截在尺上的位置分别为M、N，过A 点作一水平线与过B点的竖线相交于C。因为BC的高度就是A、B 两点之间的高差h AB。，所以由矩形MACH就可以得到计算h AB的式： h AB = a - b (2-2) 测量时，a、b的值是用水准仪瞄准水准尺时直接读取的读数值。 因为A点为已知高程的点，通常称为后视点，其读数a为后视读数，
而B点称为前视点，其读数b为前视读数。即 h AB = 后视读数-前视读数 视线高H i=H A+a （2-3）Ｂ点高程H B=H i-b (2-4）综上所述要测算地面上两点间的高差或点的高程，所依据的就是一条水平视线，如果视线不水平，上述公式不成立，测算将发生错误。因此，视线必须水平，是水准测量中要牢牢记住的操作要领。 水准仪和水准尺 一、微倾式水准仪的构造 如图2-2所示，微倾式水准仪主要由望远镜、水准器和基座组成。水准仪的望远镜能绕仪器竖轴在水平方向转动，为了能精确地提供水平视线，在仪器构造上安置了一个能使望远镜上下作微小运动的微倾螺旋，所以称微倾式水准仪。 1．望远镜 望远镜由物镜、目镜和十字丝三个主要部分组成，它的主要作用是能使我们看清远处的目标，并提供一条照准读数值用的视线。 十字丝是在玻璃片上刻线后，装在十字丝环上，用三个或四个可
水准仪测量高程的方法和步骤
水准仪测量高程的方法和步骤 2010-11-28 01:58:11| 分类：工程测量|举报|字号订阅 [教程]第二章水准测量 未知2009-12-13 16:21:06 网络 内容：理解水准测量的基本原理；掌握 DS3 型微倾式水准仪、自动安平水准仪的构造特点、水准尺和尺垫；掌握水准仪的使用及检校方法；掌握水准测量的外业实施（观测、记录和检核）及内业数据处理（高差闭合差的调整）方法；了解水准测量的注意事项、精密水准仪和电子水准仪的构造及操作方法。 重点：水准测量原理；水准测量的外业实施及内业数据处理。 难点：水准仪的检验与校正。 §2.1 高程测量（ Height Measurement ）的概念 测量地面上各点高程的工作 , 称为高程测量。高程测量根据所使用的仪器和施测方法的不同，分为： （1）水准测量 (leveling) （2）三角高程测量 (trigonometric leveling) （3）气压高程测量 (air pressure leveling) （4）GPS 测量 (GPS leveling) §2.2 水准测量原理 一、基本原理 水准测量的原理是利用水准仪提供的“水平视线”，测量两点间高差，从而由已知点高程推算出未知点高程。
a ——后视读数 A ——后视点 b ——前视读数 B ——前视点 1、A 、 B 两点间高差： 2、测得两点间高差后，若已知 A 点高程，则可得B点的高程： 。 3、视线高程： 4、转点 TP(turning point) 的概念：当地面上两点的距离较远，或两点的高差太大，放置一次仪器不能测定其高差时，就需增设若干个临时传递高程的立尺点，称为转点。 二、连续水准测量
水准测量基本原理教案
水准测量基本原理（教案）
水准测量基本原理 课型：讲授 教学目的与要求： 了解高程测量常用的方法。 理解水准测量基本原理。 掌握高差法、仪高法及连续水准测量计算未知点高程的方法。教学重点、难点： 重点：水准测量基本原理。 高差法、仪高法及连续水准测量计算未知点高程的方法。 难点：水准测量基本原理。 采用教具： 多媒体课件 复习、提问 1、高程的定义、高差的定义。
第一讲 水准测量基本原理 一、高程测量（测定地面点高程）的方法 高程是确定地面点位置的要素之一，在工程建设的设计、施工与管理等阶段都具有十分重要的作用。测定地面点高程的工作称为高程测量。按所使用的仪器和施测方法分：水准测量、三角高程测量、气压高程测量和GPS 高程测量。 二、水准测量基本原理 水准测量不是直接测定地面点的高程，而是测出两点间的高差。即在两个点上分别竖立水准尺，利用水准测量的仪器提供一条水平视线，瞄准并在水准尺上读数，求得两点间的高差，从而由已知点高程推求未知点高程。 如图1-1所示，设已知A 点高程为A H ，用水准测量方法求未知点B 的高程B H 。在A 、B 两点中间安置水准仪，并在A 、B 两点上分别竖立水准尺，根据水准仪提供的水平视线在A 点水准尺上读数为a ，在B 点的水准尺上读数为b ，则A 、B 两点间的高差为：b a h AB -= 图1-1 水准测量原理
设水准测量是由A 点向B 点进行，如图1-1中箭头所示，则规定 A 点为后视点，其水准尺读数a 为后视读数； B 点为前视点，其水准 尺读数b 为前视读数。由此可见，两点之间的高差一定是“后视读数”减“前视读数”。如果a >b ，则高差AB h 为正,表示B 点比A 点高；如果 a < b ，则高差AB h 为负，表示B 点比A 点低。 在计算高差AB h 时，一定要注意AB h 的下标A B 的写法： AB h 表示A 点至B 点的高差，BA h 则表示B 点至A 点的高差，两个高差应该是绝对值相同而符号相反，即：BA AB h h ＝－ 测得A 、B 两点间高差AB h 后，则未知点Ｂ的高程B H 为： )(b a H h H H A AB A B -+=+= （1-1） 水准测量：水平视线（水准仪）+水准尺→待定点与已知点高差+已知点高程→未知点高程。 三、推导以下几种计算未知点高程的公式： 1、高差法（由一点求另一点）：直接利用高差计算未知点高程。 b a h AB -=（后视读数－前视读数）；AB A B h H H += 2、视线高法（仪高法，由一点求多点）：由仪器视线高程H i 计算未知点B 点高程。H A 为A 点的高程，a 为水准尺读数，b 为待求高程点水准尺读数。 ?? ? -=+=b H H a H H i B A i 注意事项： ①区别仅在与计算方法不同；
水准测量的原理
水准测量的原理 、几种常见的水准测量方法 1．几何水准测量（简称水准测量） ； 2．三角高程测量； 3．气压高程测量（物理高程测量） 。 二、水准测量原理 水准测量 是利用水平视线来求得两点的高差。例如图 2－1中，为了求出 A 、B 两点的 高差 h AB ，在 A 、B 两个点上竖立带有分划的标尺—— 水准尺 ，在 A 、B 两点之间安置可提 供水平视线的仪器—— 水准仪 。当视线水平时，在 A 、B 两个点的标尺上分别读得读数 a 和 b ，则 A 、 B 两点的高差等于两个标尺读数之差。即： （2－1） 如果 A 为已知高程的点， B 为待求高程的点，则 B 点的高程为： H B H A h AB （高差法） 读数 a 是在已知高程点上的水准尺读数，称为“后视读数” 准尺读数，称为“前视读数” 。高差必须是后视读数减去前视读数。高差 hAB 的值可能是正， 也可能是负，正值表示待求点 B 高于已知点 A ，负值表示待求点 B 低于已知点 A 。此外， h BA 表示，其值为负。所以说明高差时必须 由图 2－ 1可以看出， B 点高程还可以通过仪器的视线高程 H i 来计算，即 H i ＝ H A ＋ a （2－ 3） H B ＝ H i －b （仪高法） （2－4） 三、转点、测站 当两点相距较远或高差太大时，则可分段连续进行，从图 2－2 中可得： h 1 a 1 b 1 h 2 a 2 b 2 h n a n b n h AB h a b （2－2） ； b 是在待求高程点上 高差的正负号又与测量进行的方向有关，例如图 2－2中测量由 A 向 B 进行，高差用 h AB 表 （2－5） 示，其值为正；反之 由 B 向 A 进行，则高差用
活性氧检测试剂盒
凯基活性氧检测试剂盒 凯基活性氧检测试剂盒 Cat number：KGT010-1 For Research Use Only Store at-20℃ for one year Expire date：20120830 一、试剂盒说明 活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFHDA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup，以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合物(compound mixture),浓度为50mg/ml。 本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。 本试剂盒可以测定100-500个样品。 二、试剂盒组份 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA的胰酶消化液 四、使用注意事项 1.探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。 2.探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。DCF的激发光谱和发射光谱请参考下页图谱。 3.尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外)，以减少各种可能的误差。 4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 五、操作方法 1. 装载探针 对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针。 原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA不少于1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
DCFHDA活性氧检测方法.pdf
ROS活性氧检测试剂盒-DCFHDA法 产品组成： 产品编号BB-47053 规格200-1000T DCFHDA100ul 活性氧阳性对照诱导剂1000ul 储存条件： -20℃保存。 有效期： 一年。 注意事项： ● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。 ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管 底，避免开盖时试剂损失。 ● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 ● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 ● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。 产品简介： 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 贝博活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被标记到细胞内。在活性氧存在的条件下，DCFH被氧化生成荧光物质DCF，绿色荧光强度与细胞内活性氧水平成正比，检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 在激发波长502 nm，发射波长530 nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测DCF 荧光，从而测定细胞内活性氧水平。 本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂，以便于活性氧的检测。 产品特点： ● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测； ● 背景低，灵敏度高； ● 线性范围宽，使用方便。
水准测量的基本原理及测量方法
水准测量的基本原理及测量方法 内容：理解水准测量的基本原理；掌握DS3 型微倾式水准仪、自动安平水准仪的构造特点、水准尺和尺垫；掌握水准仪的使用及检校方法；掌握水准测量的外业实施（观测、记录和检核）及内业数据处理（高差闭合差的调整）方法；了解水准测量的注意事项、精密水准仪和电子水准仪的构造及操作方法。 重点：水准测量原理；水准测量的外业实施及内业数据处理。 难点：水准仪的检验与校正。 §2.1 高程测量（Height Measurement ）的概念 测量地面上各点高程的工作, 称为高程测量。高程测量根据所使用的仪器和施测方法的不同，分为： （1）水准测量(leveling) （2）三角高程测量(trigonometric leveling) （3）气压高程测量(air pressure leveling) （4）GPS 测量(GPS leveling) §2.2 水准测量原理 一、基本原理 水准测量的原理是利用水准仪提供的“水平视线”，测量两点间高差，从而由已知点高程推算出未知点高程。
a ——后视读数A ——后视点 b ——前视读数B ——前视点 1、A 、 B 两点间高差： 2、测得两点间高差后，若已知A 点高程，则可得B点的高程： 。 3、视线高程： 4、转点TP(turning point) 的概念：当地面上两点的距离较远，或两点的高差太大，放置一次仪器不能测定其高差时，就需增设若干个临时传递高程的立尺点，称为转点。 二、连续水准测量
如图所示，在实际水准测量中，A 、 B 两点间高差较大或相距较远，安置一次水准仪不能测定两点之间的高差。此时有必要沿A 、 B 的水准路线增设若干个必要的临时立尺点，即转点（用作传递高程）。根据水准测量的原理依次连续地在两个立尺中间安置水准仪来测定相邻各点间高差，求和得到A 、 B 两点间的高差值，有： h 1 = a 1 － b 1 h 2 = a 2 － b 2 …… 则：h AB = h 1 + h 2 +…… + h n = Σ h = Σ a －Σ b 结论：A 、 B 两点间的高差等于后视读数之和减去前视读数之和。 § 2.3 水准仪和水准尺 一、水准仪(level) 如图所示，由望远镜、水准器和基座三部分组成。
活性氧检测
活性氧检测试剂盒（Reactive oxygen species assay kit）是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF 的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup以便于活性氧的检测。Ro sup是一种混合物（compound mixture），浓度为50mg/ml。 一、注意事项 1、探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。 2、探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。 3、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 二、使用说明 1、装载探针 对于刺激时间较短（通常为2小时以内）的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长（通常为6小时以上）的细胞，先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针。原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1：1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA的体积为1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。 通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。 收集细胞后装载探针：按照1：1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。细胞收集后悬浮于稀释好的DCFH-DA中，细胞浓度为一百万至二千万/毫升，37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳
水准测量的原理说课讲解
水准测量的原理
水准测量的原理 一、几种常见的水准测量方法 1．几何水准测量（简称水准测量）； 2．三角高程测量； 3．气压高程测量（物理高程测量）。 二、水准测量原理 水准测量是利用水平视线来求得两点的高差。例如图2－1中，为了求出 A 、 B 两点的高差AB h ，在A 、B 两个点上竖立带有分划的标尺——水准尺，在 A 、 B 两点之间安置可提供水平视线的仪器——水准仪。当视线水平时，在A 、B 两个点的标尺上分别读得读数a 和b ，则A 、B 两点的高差等于两个标尺读数之差。即： b a h AB -= (2－1) 如果A 为已知高程的点，B 为待求高程的点，则B 点的高程为： AB A B h H H += （高差法） (2－2) 读数a 是在已知高程点上的水准尺读数，称为“后视读数”；b 是在待求高程点上的水准尺读数，称为“前视读数”。高差必须是后视读数减去前视读数。高差AB h 的值可能是正，也可能是负，正值表示待求点B 高于已知点A ，负值表示待求点B 低于已知点A 。此外，高差的正负号又与测量进行的方向有关，例如图2－2中测量由A 向B 进行，高差用AB h 表示，其值为正；反之由B 向A 进行，则高差用BA h 表示，其值为负。所以说明高差时必须标明高差的正负号，同时要说明测量进行的方向。 图 2－1 由图2－1可以看出，B 点高程还可以通过仪器的视线高程H i 来计算，即 H i ＝H A ＋a (2－3) H B ＝H i －b （仪高法） (2－4) 三、转点、测站 当两点相距较远或高差太大时，则可分段连续进行，从图2－2中可得：
S0033活性氧检测试剂盒
活性氧检测试剂盒 产品简介： 活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup，以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合物(compound mixture),浓度为50mg/ml。 本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。 本试剂盒可以测定100-500个样品。 保存条件： -20℃保存，一年有效。 注意事项： 探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。 探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。DCF 的激发光谱和发射光谱请参考下页图谱。 尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外)，以减少各种可能的误差。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1.装载探针 对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针。 原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA不少于1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。 收集细胞后装载探针：按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。细胞收集后悬浮于稀释好的DCFH-DA中，细胞浓度为一百万至二千万/毫升，37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞，或把细胞等分成若干份后刺激细胞。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。 说明：仅在阳性对照孔中加入Rosup作为阳性对照，其余孔不必加入Rosup。 2.检测 对于原位装载探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察也可以。 3.参数设置 使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置检测DCF。DCF的激发光谱和发射光谱参考下图。
水准测量的原理和使用方法
水准测量的原理和使用方法 确定地面点高程的测量工作，称为高程测量。高程测量又是测量三项基本工作之一。根据使用仪器和施测方法的不同，高程测量可分为水准测量、三角高程测量和气压高程测量。用水准仪测量高程，称为水准测量，它是高程测量中最常用、最精密的方法。 水准测量的原理： 水准测量是利用一条水平视线，并借助水准尺，来测定地面两点间的高差，这样就可由已知点的高程推算出未知点的高程。测定待测点高程的方法有高差法和仪高法两种。 1．高差法 如图2-1所示，若已知A 点的高程A H ，欲测定B 点的高程B H 。在A 、B 两点上竖立两根尺子，并在A 、B 两点之间安置一架可以得到水平视线的仪器。假设水准仪的水平视线在尺子上的位置读数分别为A 尺（后视）读数为a ，B 尺（前视）读数为b ，则A 、B 两点之间的高程差（简称高差AB h ）为 b a h AB -= （2-1） 于是B 点的高程B H 为 AB A B h H H += （2-2） b a H h H H A AB A B -+=+= （2-3） 这种利用高差计算待测点高程的方法，称高差法。这种尺子称为水准尺，所用的仪器称为水准仪。 图2-1 水准测量原理
2．仪高法 由式2-3可以写为 b a H H A B -+=)( （2-4） 如图2-2所示，即 b H H i B -= 上式中i H 是仪器水平视线的高程，常称为仪器高程或视线高程。仪高法是，计算一次仪高，就可以测算出几个前视点的高程。即放置一次仪器，可以测出数个前视点的高程。 综上所述，高差法和仪高法都是利用水准仪提供的水平视线测定地面点高程。必须注意 ①前视与后视的概念一定要清楚，不能误解为往前看或往后看所得的水准尺读数。 ②两点间高差AB h 是有正负的，计算高程时，高差应连其符号一并运算。在书写AB h 时，注意h 的下标，AB h 是表示B 点相对于A 点的高差；BA h 则表示是A 点相对于B 点的高差。AB h 与BA h 的绝对值相等，但符号相反。 图2-2 仪高法水准测量