发酵综合实验实验报告
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摘要.......................................................................... 错误!未定义书签。
1 引言 (4)
2材料与方法 ........................................................... 错误!未定义书签。
3 结果与讨论 .......................................................... 错误!未定义书签。
4 总结...................................................................... 错误!未定义书签。
5 心得体会 .............................................................. 错误!未定义书签。参考文献 .................................................................. 错误!未定义书签。
蛋白酶的发酵工艺研究
摘要中性蛋白酶是最早被发现并广泛应用于工业化生产的蛋白酶制剂，可用于皮革脱毛、软化、畜禽血液蛋白质水解、果酒、啤酒和饮料的澄清以及医学治疗等应用领域中。本文对一株产中性蛋白酶枯草芽孢杆菌（）的发酵条件进行了研究，考察不同因素条件下对产酶的影响。通过摇瓶培养研究碳源浓度，不同接种量对蛋白酶产量的影响。利用酪蛋白培养基的平板实验观察蛋白酶的性质。利用发酵罐培养观察时间对产酶的影响.结果表明:豆饼粉100ml，玉米粉100ml，麸皮粉100ml，磷酸氢二钠100ml，磷酸二氢钾100ml，pH 为最适宜培养基组分。并且发酵罐培养的产酶活性高于摇瓶培养。
关键词：中性蛋白酶；枯草芽孢杆菌；摇瓶培养；发酵罐
The Fermentation Process Research of Protease
Abstract Neutral protease is the first to be discovered and widely used in industrial production of the protease preparation ,which can be used for leather hair removal, softening, animal blood protein hydrolysis, wine, beer and beverage clarification, and in applications such as medical fermentation conditions of a Bacillus Subtilis（）which can produce neutral protease were studied in this paper. Under the condition of different factors to examine the influence of enzyme study discussed concentration of carbon source, different inoculum on protease yield by shake flask. Casein petri dishes has been used in the observation of the nature of the protease. Fermentation tanks culture was used for observing time's effection on the production of enzymes. the results showed that soybean meal 100ml, corn flour 100ml,wheat bran powder 100ml,disodium hydrogen phosphate 100ml,potassium dihydrogen phosphate 100ml, pH was the most appropriate medium composition. Enzyme production activity of Fermentation tanks culture was higher than shaking culture.
Keywords: Neutral protease；Bacillus subtilis；Shaking culture；Fermentation
1 引言
自然界中有大量产泌外蛋白酶微生物，其中以微生物的产酶活性最优。微生物来源蛋白酶一般按蛋白酶的最适pH值分为酸性、中性、碱性蛋白酶三类。中性蛋白酶最早被发现并广泛应用于工业化生产中。本实验采用枯草芽孢杆菌做为研究菌株，其产酶量大，酶的耐热性好，因而被广泛应用于工业化生产中。此菌株在C/N为1:4左右时的产蛋白酶活性最高，并且有机N源优于无机N源，因而其发酵成本较高。探索新的发酵途径，寻找更加经济的组合方式显出了重大的意义。
此次实验主要做蛋白酶摇瓶发酵工艺的优化，改变发酵的C源浓度和接种量，测定蛋白酶酶活，以确定最优的发酵工艺条件。提取发酵液中的蛋白酶，测定酶活算出前后总活力，计算得率。并且进行发酵罐培养实验，比较发酵罐培养与摇瓶培养的产酶活性差异。通过此次实验学习蛋白酶的测定方法和发酵液酶蛋白的初步提取方法，考察不同发酵条件对微生物产酶的影响，以及熟悉小型发酵罐的使用方法，包括灭菌，清洗，加料，接种，取样等环节。
2 材料与方法
菌种
枯草芽孢杆菌（）
试剂
（1）生理盐水：称取NaCl ,用蒸馏水定容至100ml, 即为%生理盐水，121℃灭菌20min。
（2）福林试剂（Folin试剂）:使用时加2倍蒸馏水稀释，即成已稀释的福林试剂。
（3）碳酸钠溶液：称取无水碳酸钠, 用蒸馏水定容至1000ml。
（4）三氯乙酸（TCA）溶液:称取三氯乙酸,用蒸馏水定容至1000ml。
（5）磷酸盐缓冲液：称取磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）,用蒸馏水定容至1000ml,即成溶液（A液）。称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）,定容至1000ml,即成溶液（B液）。
取A液28ml和B液72ml,再用蒸馏水稀释1倍，即成L pH 的磷酸盐缓冲液。
（6）2%酪蛋白溶液：准确称取干酪素2g，称准至,加入氢氧化钠10ml，在水浴中加热使溶解（必要时用小火加热煮沸），然后用pH 磷酸盐缓冲液定容至100ml即成。配制后应及时使用或放入冰箱内保存，否则极易繁殖细菌，引起变质。
（7）100μg/ml酪氨酸溶液：精确称取在105℃烘箱中烘至恒重的酪氨酸，逐步加入6ml1N盐酸使溶解，用盐酸定容至100ml，其
浓度为1000μg/ml，再吸取此液10ml，以盐酸定容至100ml，即配成100μg/ml的酪氨酸溶液。此溶液配成后也应及时使用或放入冰箱内保存，以免繁殖细菌而变质。
培养基
（1）牛肉膏蛋白胨培养基（g/100ml）：牛肉膏，蛋白胨1，氯化钠，pH ,121℃灭菌20min。
（2）酪蛋白培养基A（g/100ml）:牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，奶粉5，琼脂2，灭菌20min。
（3）种子培养基1：牛肉膏蛋白胨培养基。
（4）基本发酵培养基1（g/100ml）:豆饼粉，玉米粉，麸皮粉，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，pH 灭菌20min。
蛋白酶活力的测定（福林-酚法，ZBX66030-87）:
原理：福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色（钼蓝和钨蓝混合物），由于蛋白质分子中含有酚基的氨基酸（如酪氨酸，色氨酸等），可使蛋白质及其水解产物呈上述反应。因此可利用此原理测定蛋白酶活力。通常以酪蛋白为底物，在一定pH值和温度条件下，同酶液反应，经一段时间后终止酶促反应，经离心或过滤除去酪蛋白等沉淀物后取上清液，用Na2CO3碱化，再加入福林-酚试剂显色，蓝色的深浅与滤液中生成产物酪氨酸量成正比；酪氨酸含量用分光光度计在660nm波长处测定，从而计算出蛋白酶的活力。
酪氨酸标准曲线的绘制：取6支干燥试管编号，分别吸取不同浓度酪氨酸1ml,各加入碳酸钠5ml,再加入已稀释的福林试剂1ml。摇
匀置于水浴锅中。40℃保温发色20min,再用721型分光光度计进行测定（波长660nm）。
表一标准曲线绘制加样
编号123456
酪氨酸
/ml
H2O/ml0
555555
Na2CO3/
ml
111111
福林-酚
/ml
蛋白酶活力测定：试管中加入M pH 的磷酸盐缓冲溶液稀释后的酶液1 ml，40℃预热5 min，加入预热过的pH 的%酪蛋白1ml，摇匀，在40℃水浴中准确反应10 min。用2 ml TCA 终止酶反应，静置10 min。过滤后取1ml滤液，加入mol 碳酸钠5ml，再加入已稀释的福林试剂1ml。空白试验测定方法同上，唯有加酪蛋白之前先加mol三氯乙酸2ml,使酶失活，再加入酪蛋白。
蛋白酶酶活力单位的定义：在40℃下每分钟水解酪蛋白产生1μg 酪氨酸，定义为1个蛋白酶活力单位。
蛋白酶活力（μ/ml）=A*4*N/10
式中：
A——由样品测得OD值，查标准曲线得相当的酪氨酸微克数；
N——酶液稀释的倍数；
10——反应10min.
实验步骤
摇瓶培养
（1）种子培养：在无菌条件下自斜面菌种挑取一环菌体，接入装有30ml种子培养基的250ml三角瓶中，在30±1℃振荡培养12-16h。
（2）涂平板：取种子培养液1ml，用无菌生理盐水稀释，取10-5，10-6稀释度，涂布在酪蛋白培养基平板上。每个稀释度涂2套平板，每套平板加稀释菌液，用无菌玻璃凃棒均匀地涂满整个平板表面。
（3）发酵培养：按1%的接种量，将种子液接种到发酵培养基中，振荡培养72h。
（4）蛋白酶摇瓶发酵工艺优化：改变发酵的某一条件，如碳源种类，氮源种类，C/N，pH，装液量，接种量等，测定蛋白酶酶活，以确定较优的发酵工艺条件。
（5）提取：将培养物合并，抽滤除菌体，取30ml滤液测定的蛋白酶酶活，算出总酶活。向滤液加入硫酸铵使浓度达饱和，静置过夜，过滤得湿固体（初步提取物），称重后溶解于30ml磷酸缓冲液，测定酶活，算出总酶活。
发酵罐发酵
（1）种子培养：在无菌条件下自斜面菌种挑取一环菌体，接入装有50ml种子培养基的500ml三角瓶中，在30±1℃振荡培养16-18h。
（2）接种：将浸有酒精的脱脂棉围绕在接种口周围，点火打开接种口，将种子培养液注入。接种量为1%-5%，盖好接种口，调节搅拌转速至所需数值，培养开始。
（3）取样：为了解培养过程中的变化，需定时取样进行样品分析。由于罐内为正压，打开取样管时，样品自然流出。取样时应将上一次残留在取样管中的培养液去除后再取样。另外，取样后应通过加热蒸汽，以防取样管路污染杂菌。
（4）培养结束：将电极与培养液全部取出，发酵罐冲洗干净。
3 结果与讨论
酪氨酸标准曲线
在λ=660nm 时,酪氨酸浓度在20~100ug/ml 范围内，线性关系良好。
标准曲线见图1。
图1 酪氨酸标准曲线
发酵工艺研究
碳源浓度对发酵的影响
采用50ml基本发酵培养基的摇瓶培养，通过改变豆粉含量来改变碳源浓度，以研究浓度对发酵产蛋白酶的影响。测定发酵液蛋白酶活力，以酶活力高低作为指标，以初始发酵培养基的酶活力作为对照。
图2 碳源浓度对产酶的影响
注：1 豆饼粉浓度为100ml；2 豆饼粉浓度为100ml；3 豆饼粉浓度为100ml。从图2可以看出，豆饼粉浓度为100ml时，枯草芽孢杆菌的产酶活性最高。豆饼粉浓度为100ml时，由于碳源量不足，限制了菌体生长，因而导致产酶量较低。豆饼粉浓度为100ml时，碳源量充足，导致C/N 升高而限制了产蛋白酶的活性，故而，最适豆饼粉浓度为100ml为产蛋白酶的最适宜浓度。
接种量对发酵的影响
将种子液以1%，2%，3%分别接种到50ml基本发酵培养基上，摇瓶培养，测定酶活。
图3 接种量对发酵的影响
注：1 接种量1%；2 接种量2%；3 接种量3%。
由图3可以看出，接种量对发酵的影响不大，图中显示由1%~3%接种量，菌株的产蛋白酶活力逐渐增加，未达最大值。
发酵罐培养
按所述方法进行发酵培养
图4 发酵罐培养时，随时间变化对产酶的影响
注：1 24小时；2 42小时；3 48小时。
由图4可以看出，前24h发酵产酶活性很低，这主要是由于接种后24h 发酵罐中主要发生菌体生长的反应，蛋白酶是生长偶联型产物，此时产量很低。到48h达到高点，蛋白酶积累量很高。
蛋白酶的提取
按（5）所述方法进行酶的提取，结果如下：
表二酶蛋白提取得率
酶活总酶活得率30ml母液2230u/ml66900u
%湿固体131559u/g44730u
平板实验观察蛋白酶性质
取种子培养液不同稀释度10-1 ~10-6分别接种于平板上，30o C培养48h 观察平板上的透明圈。
图5 10-5稀释度下的透明圈
图6 10-6稀释度下的透明圈
图5、6平板所用培养基为酪蛋白培养基，枯草芽孢杆菌由于能产生泌外蛋白分解酪蛋白而出现透明圈。
4 总结
本实验对一株产中性蛋白酶的枯草芽孢杆菌进行性质研究，对C源浓度及接种量进行单因素实验。结果表明，最适宜豆饼粉浓度为100ml,最适接种量为3%。通过比较发酵罐培养实验与摇瓶培养实验发现，发酵罐培养产中性蛋白酶的能力强于摇瓶培养。这是由于，发酵罐培养的传质与溶氧条件优于摇瓶培养。
5 心得体会
此次实验由于时间和条件的限制，并不能对影响发酵产酶的所有因素进行单因素试验，因而局限了实验结果的利用价值。通过此次实验我
系统的认识到，做发酵条件优化实验的具体方法和步骤，以及注意事项。并且初步掌握了蛋白酶酶活测定和蛋白酶提取的方法。对小型发酵罐的使用积累了一定的知识。总的来说，此次实验收获颇丰。
参考文献
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发酵工程实验方案
生物发酵工程实验 实验一................................ 利用酵母富集培养基分离酵母菌 实验二... ......................... 分离纯化酵母菌 实验三... ......................... 酵母菌的保藏 实验四............................... 大肠杆菌生长曲线测定及pH对生长曲线 的影响 实验五.............................. 发酵罐的构造及操作 实验六.............................. 发酵罐实灌灭菌操作 实验七.............................. 利用7L发酵罐对地衣芽孢杆菌进行补 料分批发酵培养 实验八..............................淀粉酶生成曲线的测定
实验一、利用酵母富集培养基分离酵母菌 一实验目的 1、通过本实验加深理解酵母富集培养基的原理和应用； 2、掌握涂布分离技术； 3、熟悉从自然样品土壤中分离酵母菌的具体操作方法 二实验原理 酵母菌主要分布于含糖高和酸度较高的自然环境中，在果园表土和浆果、蔬菜、花蜜和蜜饯等的表面很容易找到它们。在土壤中，由于各种微生物混杂在一起且酵母菌的数量相对比较少，故可以利用酵母菌富集培养基进行富集培养，该培养基含有较高的葡萄糖（5%）和较酸（pH为4.5）的环境，以及能抑制多种杂菌（许多细菌、放线菌和快速生长霉菌）的孟加拉红（玫瑰红），故十分有利于酵母菌的增值。 三实验材料 土壤（标注采集地点） 培养基：酵母富集培养基（5%葡萄糖、0.1%尿素、0.1%硫化铵、0.25%磷酸二氢钾、0.05%磷酸氢二钠、0.1%七水合硫酸镁、0.01%七水合硫酸铁、0.05%酵母膏、0.003%孟加拉红、1.9%琼脂 pH4.5） 移液枪、培养皿、天平、涂布棒、棉绳、250ml三角瓶、75%酒精棉花、摇床等 四实验步骤 1、采集土样：采集葡萄园或其他果园、菜地等的土壤若干（要求：先铲去2~3cm 的表土，再采集土样）适当研碎。 2、称取1g土样装入准备好的30/250ml蒸馏水中震荡均匀。 3、准备平板：将酵母菌富集培养基加热融化，待冷却至50℃左右后，倒2个平板，冷却待用。 4、用移液枪吸取200ul样品，用涂布法分离菌种。 5、恒温培养：将培养皿倒置后防于37℃恒温培养箱中培养2d。 五结果记录 将土壤来源，平板上得到的菌落特征和菌落数做表记录 六思考题 酵母菌富集培养基中为什么要加孟加拉红
实验报告发酵现象实验报告范文_0613
2020 实验报告发酵现象实验报告范文 _0613 EDUCATION WORD
实验报告发酵现象实验报告范文_0613 前言语料：温馨提醒，教育，就是实现上述社会功能的最重要的一个独立出来的过程。其目的，就是把之前无数个人有价值的观察、体验、思考中的精华，以浓缩、系统化、易于理解记忆掌握的方式，传递给当下的无数个人，让个人从中获益，丰富自己的人生体验，也支撑整个社会的运作和发展。 本文内容如下：【下载该文档后使用Word打开】 澄清的石灰水可以检测气体中有二氧化碳，重铬酸钾溶液遇到酒精由橙色变为灰绿色。实验操作： 1.将（100ml）40℃温水倒入锥形瓶，再用汤匙将一大勺糖及适量干酵母加进来，搅拌均匀后，将锥形瓶放在大烧杯中水浴保温温度保持在30―40℃左右。（先让酵母菌进行有氧呼吸，是酵母菌迅速繁殖，并把葡萄糖分解成二氧化碳和水。） 2.观察到酵母菌培养液有气泡产生，塞上橡胶塞（这样做既可以避免气体散失，影响后面实验效果，也为酒精的产生提供保障）。过一段时间后就可看到干瘪的气球慢慢膨胀起来了。（酵母菌的无氧呼吸） 3.将夹子打开，挤压气球，使瓶内产生的气体徐徐通过胶管导入试管内的澄清石灰水中，石灰水变浑浊了(检测气体中有二氧化碳。原理：二氧化碳遇石灰水，石灰水变浑浊)。
4.将重铬酸钾试剂分别滴在比色板的凹槽内，并分别标注1号、2号（作对照）、3号。在3号试剂上滴1滴酒精，在1号试剂上滴1滴酵母菌发酵液。发现1号和3号都由橙色变成了灰绿色。 通过上述实验，让我们对酵母菌“发酵现象”所需要的原料、条件及产生的物质都有了较直观的感受，比较容易理解课本上阐述的“酵母菌可以把葡萄糖转化为酒精和二氧化碳”等有关内容，而且印象深刻。使我们养成很好的节约意识。 1.闻到了发酵后特殊的甜酒的芳香气味。 2.详见【实验操作4】 3.澄清的石灰水变浑浊 实验一摇瓶发酵法制备糖化酶 （1）掌握摇床发酵法制备糖化酶的工艺流程及操作方法 （2）了解利用黑曲霉菌菌种发酵时的生长条件及注意事项 （3）熟练掌握实验过程中的无菌操作和培养条件的选择 菌种：黑曲霉 仪器：锥形瓶（500ml)、移液管、恒温水浴锅、秒表、50mL 比色管、牛皮纸、纱布（8层）、pH计。 药品：三水乙酸钠、冰醋酸、硫代硫酸钠、碘、氢氧化钠、硫酸、可溶性淀粉、玉米粉、豆饼粉、麸皮
(完整版)馒头发酵方法与过程实验报告
馒头发酵方法与过程实验报告 馒头的发酵方法很多，有老面发酵法、酒曲发酵法、化学膨松剂发酵法、酵母发酵法等等。实验证明无论从食品营养的角度，还是从操作的角度，酵母发面都有很强的优势。用酵母发面不仅适合家庭和工业化生产线，也适合小型作坊式馒头房，特别是对于要求不增加成本的用户也是非常合适的。酵母发酵是馒头生产中最关键的环节，它对于馒头质量的好坏有着直接的关系。 一．常见的酵母发酵工艺 酵母的发酵原理是利用面粉中的糖份与其他营养物质，在适宜的生长条件下繁殖产生大量的二氧化碳气体，使面团膨胀成海绵状结构。 在酵母馒头的生产中，常见的发酵工艺简单的归纳起来主要有以下两种： 1．一次发酵法 原辅料: 和面、压面、成型、发酵、汽蒸 （1）操作方法： 和面: 将所有的原辅料一次加入和成面团，干酵母用量0.3%，鲜酵母用量为1%左右，加水量38-40%，和好的面团温度一般应控制在28℃。 成型: 馒头成型由馒头成型机来完成，家庭制作由手工完成，根据需要制成各种形状和大小的馒头坯。 发酵: 在温度30-32℃，湿度为75-80%的条件下让面团发酵35分钟。没有恒温恒湿条件的，也可以采取其它相应的保温措施。 蒸煮: 面团发酵完成以后，沸水上笼蒸20分钟。 （2）发酵特点： 用一次发酵法生产馒头，具有工艺线路短，生产周期短，生产效率高劳动强度低等许多优点，并且生产出来的馒头有很好的咀嚼感。因此该方法被许多馒头厂家广泛使用。 2．二次发酵法 部分原辅料：第一次和面、第一次发酵、第二次和面 压面、成型、第二次发酵、汽蒸 （1）操作方法： 第一次和面取30%左右的面粉加入所需的干酵母（添加量以第一次所加面粉量的0.16%计）再加上50%左右的水（加水量以第一次所加面粉量计），和成面团。 第一次发酵和好的面团在温度26-28℃，湿度70-80%的条件或温暖的自然条件下发酵8-12小时。发酵时间也可以根据自己生产的实际情况通过调整酵母的用量、两次和面时面粉的配比以及发酵温度、湿度来灵活调节。
发酵实验报告四甜酒酿的制作
发酵实验报告四甜酒酿 的制作 集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]
发酵工程学实验报告实验四、甜酒酿的制作 学院生命科学学院 专业应用生物教育 班级12应生A班 姓名李顺昌 学号124120218 实验课程甜酒酿的制作 指导教师许波 开课学期2014—2015学年下学期
实验四、甜酒酿的制作小组合作：是小组成员：李顺昌、李媛媛、方淑萍、周玉坤一、实验目的 学习并掌握甜酒酿的酿制方法 二、实验设备与材料 1.设备：天平、灭菌锅、盆、容器（口缸）、保鲜膜、培养箱等 2.材料：糯米（约400g/人）、市售甜酒药、冷开水 三、实验原理 1、将蒸熟的米饭经接种酒酿种曲后，在适宜的培养条件下，让种曲中的根霉孢子萌发菌丝体，大量繁殖后通过淀粉酶等的作用，将淀粉转化为葡萄糖，从而使甜酒酿具有独特的甜醇口味。 2、从微生物的观点来看，酿制的关键在于： 要有优质的酒酿种曲，即种曲中应含有糖化率很高的优质根霉孢子或菌丝体；应选择优质的糯米作原料；严格无菌操作规程，尽量避免杂菌污染；制作甜酒酿的器具都要清洗干净；合理控制酿制条件等。 四、实验方法步骤 浸米→蒸饭→淋饭→拌酒药→搭窝→保温培养 1、蒸饭：将滤干水分的糯米，扎紧纱布口后放入灭菌锅；于115-121℃灭菌20~25min，到米饭熟透为止。 2、淋饭：加少许冷开水淋洗糯米饭，边淋边拌，使米饭迅速冷却至35℃左右。 3、拌酒药（接种）：按干糯米的重量换算接种量( 0.35% ) ；将酒药均匀地撒在冷却的糯米饭中（稍微留下一点点酒曲最后用），拌匀。 4、搭窝：将拌好酒药的米饭装入容器后（不能压太紧），将饭粒搭成中心下陷的凹窝（中间低、周围高）；饭面和凹窝中均匀撒上少许酒药，倒入少量的冷开水，盖上盖子或保鲜膜； 5、保温培养：28℃培养约24-48小时，待凹窝内有少许液体渗出即可食用
干红葡萄酒酿造实验报告
开放性实验报告干红葡萄酒的酿造 专业： 班级： 学号： 姓名： 2016年 11 月 12 日
学习葡萄酒的酿造原理，掌握干红葡萄酒的酿制工艺 二实验原理 葡萄酒+果糖→酒精+CO2(条件：人工酵母或天然酵母)（酒精发酵） 高级醇+脂肪酸+挥发酸+酯类（陈酿） 色素+单宁+有机酸+果香物质+无机盐（葡萄酒原料） 三实验材料和仪器设备 （1）材料：新鲜葡萄、活性酵母、果胶酶、偏重亚硫酸钾、白砂糖、纱布、明胶； （2）仪器设备：分柄天平、烧杯、量筒、玻璃棒、称量纸、水浴锅、温度计、比重计、3L发酵瓶、纱布袋、漏斗、干净瓶子。 四实验操作步骤 （1）清洗容器或仪器，冷开水清洗。 （2）分选和清洗葡萄：剔除生的，有破损的，发霉的果实。清洗过后的葡萄自然晾干（为节约时间也可以用吹风机冷风吹干） （3）手工去梗，将葡萄的蒂部微微捏破，直接放入发酵瓶中。 （4）装瓶:装量不超过容量的75%，同时加入克的偏重亚硫酸钾搅匀，并加入克果胶酶，搅匀。 （5）酵母复水活化：称取7克冰糖溶解于少量冷开水定容100ml，加入2克酵母，混匀，放置于水浴锅30℃静置3小时活化，每10分钟搅拌一次，活化结束后直接加入葡萄醪中发酵。 （6）酒精发酵：酵母菌活化结束后取15ml加入发酵罐搅匀，当有酒帽形式时，加入25克白砂糖，每天测量一次比重、温度，并定期挥帽。 （7）当比重降至—时，酒精发酵结束。使用纱布袋与漏斗过滤皮渣，酒液用干净的瓶子装瓶，满瓶。 （8）陈酿：在装入干净的瓶子的同时加入克偏重亚硫酸钾摇匀，在适宜的温度下放置。
1 整理干红葡萄酒发酵实验过程中，每天测量发酵温度和比重的结果，作出发酵 第二天葡萄酒温度较高，可能是受室温影响，总的来看，发酵较为正常。 2整理葡萄酒酿造过程中的相片，从气泡产生的多少、葡萄皮的浮沉、葡萄汁和葡萄籽的位置等参数的变化进行描述。 气泡由一开始的无气泡，到后来发酵搅拌时产生气泡。 葡萄皮由一开始挤入时的分布不均，到最后的悬浮在上层。 葡萄汁由一开始的堆积在下层，到最后的中层，位于沉淀之上。
发酵实验报告结果
（一）实验结果 1．详细描述枯草芽孢杆菌固态培养物（外观、气味、培养物状态等） 答：枯草芽孢杆菌淡黄色，中间色深，表面较平整，无光泽，边缘不整齐，形成的菌落为圆形。培养基中的枯草芽孢杆菌有腥臭味，长势良好，观察培养基，无明显染菌现象。 2．记录个人活菌测定中各平行数据，计算最终平均值。 答：平行试验中，其他几个由于菌落连成一片，无法计数。只有如图一个平板中大约有100 个透明圈，因为是稀释了5亿倍，所以600亿\克。 （二）思考题： 在枯草芽孢杆菌固态培养过程中，为了防止霉菌与酵母的污染，可采用什么方法？ 答：可以加入抗真菌制剂。 （三）注意事项 1. 实验所用稻壳应尽量剪碎，使固体发酵培养基混合均匀 2. 无菌水高压灭菌时，应向三角瓶中加入玻璃珠防止暴沸。 3. 使用涂布器时，注意使用用酒精灯灭菌，待涂布器冷却后再进行涂布，以免杀死菌体。
（一）实验结果 1、详细记录实验过程中各参数及数据。 结果记录如表： 糖化后，加入可乐瓶中的上清：400ml, 活化的酵母种液：10ml ，置于28℃的培养箱中静置培养36h左右。 2、对实验结果的判断与分析。 实验结果检验：○1二氧化碳生成的检验培养约48h后，观察瓶中混合液，淀粉大部分沉降在瓶底，上清浓度较稀，靠瓶壁边缘有一连串微小气泡 ○2酒精生成的检验打开瓶塞，闻到有浓重酒精气味。取发酵液5ml, 加10%硫酸2ml,加1%K2Cr2O7溶液10-20滴，颜色由黄色变为黄绿色，稍加热后现象产生更快，更明显。 图示：酒精生成的检验结果左侧：蒸馏水5ml,颜色偏黄，透明度高右侧：发酵液5ml,黄绿色，与对照管有明显差异 1、思考题：现有3株不同来源的酒精酵母，请设计实验判断哪株酵母发酵酒精能力最强？
发酵大实验实验报告
2010级发酵大实验（1） 实验报告 任课老师： 姓名： 专业：生物技术 班级： 学号： 日期：2013年6月
实验报告 一、目的要求： 了解筛菌的基本操作，包括：培养基配制，灭菌，接种，涂板，摇菌，紫外分光光度计的使用等。 二、实验材料 1、菌种来源：英语公园葡萄树下土壤和生物学院院楼门口土样。 2、培养基： （1）淀粉液体培养基：可溶性淀粉1%、蛋白胨1% 、葡萄糖0. 5%、NaCl 0. 5%、牛肉膏0. 5% （2）淀粉固体培养基: 可溶性淀粉1%、蛋白胨1% 、葡萄糖0. 5%、NaCl 0. 5%、牛肉膏0. 5%、琼脂粉1.5% 。 3、器皿：试管，量筒，烧杯，移液管，培养皿，洗耳球，玻璃棒，酒精灯，接菌环，三角瓶，玻璃棒等。 4、仪器：高压蒸汽灭菌锅，水浴锅，恒温培养箱，摇床，天平、紫外可见分光光度计等。 5、试剂：1%碘液、1M NaOH、DNS、pH 5.6 0.05M 乙酸/乙酸钠缓冲液、1%淀粉溶液、1mg/mL的麦芽糖，结晶紫溶液。 6、其他：封口膜、纱布，棉花，试管架等。 三、实验步骤： 1、初筛： （1）配制培养基：按照上述培养基成分及数量称取各物质，放入三角瓶中，加水到100ml，包扎。和包扎好的试管、移液管、涂布器、培养皿等一起放入灭菌锅中121℃高压灭菌20min。然后干燥后使用。 （2）倒平板：把培养基置于无菌工作台上，待冷却到55℃左右后，倒入灭菌后的平板中，每个平板中约15-20ml，之后待冷却凝固。 （3）菌悬液制备：我们组分别从英语公园的葡萄树下和生物学院院楼门口采集土样，各称取10g，放入装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡20min后静置5min。（4）浓度稀释：在无菌试验台上进行浓度梯度稀释,把土样摇匀，从中吸取1ml 置于事先灭好菌的试管中，再加入9 ml无菌水，再从该试管中吸取1ml土样置
酸奶实验报告
酸奶制作实验报告 一、实验目的 通过实验使同学们对酸奶从原材料到成品生产的全过程以及生产组织管理等知识，在生产现场将科学的原理知识加以验证、深化、巩固和充实。并培养学生进行调查、研究、分析和解决工程实际问题的能力。激发学生向实践学习和探索的积极性，为今后的学习和将从事的技术工作打下坚实的基础。 二、实验原理 酸奶是以乳为原料(或加入蔗糖)，杀菌后经乳酸发酵而制成，且具有细腻的凝块和特别芳香风味的乳制品，也叫酸凝乳或酸牛奶，是发酵乳制品。酸奶可以是牛乳在自然状态下进行发酵，也可以经巴氏杀菌或超高温瞬时灭菌后，加入乳酸菌发酵而成。现在生产中采用将原料乳灭菌后加入乳酸菌的方法生产酸奶。因为在自然状态下进行发酵会有杂菌污染，造成酸奶出现异味或发酵失败。 酸奶发酵过程中，原料乳中的乳糖在乳酸菌的作用下转化成乳酸，随着乳酸的形成，溶液的pH逐渐达到酪蛋白的等电点(酪蛋白是乳中的一种蛋白质，等电点时pH为4.64.7)，使酪蛋白聚集沉降，从而形成半固体状态的凝胶体物质。 三、实验材料 纯牛奶、盒装酸奶、白糖、勺子、一次性杯子、保鲜膜、筷子、恒温箱、水浴锅 四、实验步骤
①消毒。将容器（一次性杯子等）、搅拌的工具(勺或筷子)放在超净工作台上，用紫外线对其进行杀菌消毒。牛奶如果是新开封的，本身已消毒得很好，可以不用煮开消毒，可直接放在40℃的水浴锅中预热。若是鲜奶一定要先煮沸消毒，待温度降到40℃左右以不烫手为宜。 ②接种。将温牛奶从水浴锅中拿出，在超净工作台接种。准备工作完成后（用酒精对手进行消毒处理），先将100毫升纯牛奶倒入一次性杯子中，再在往其中加入酸奶（一般比例为5:1-10:1），最后加入6克白糖。原料加完后用筷子搅拌均匀，用保鲜膜将杯子全面封紧。 ③前发酵。放恒温箱中(40℃左右)。一般发酵8一10小时即可，可以根据自己的口味来调整发酵时间，发酵时间越长酸度越大。 ④后发酵。刚做好的酸奶酸味比较淡，口感不够好，应将其放入冰箱冷藏。8一12 h以后即可食用，口感较好，酸甜适中。品尝时还可酌情加入蜂蜜或糖、各种水果。 五、实验结果 牛奶中有乳糖，生物的无氧呼吸可以把糖类分解成乳酸;酸奶制作需要的菌种主要是乳酸菌，由于操作不是在无菌条件下，所以实验前要将器具消毒，保证乳酸菌为优势种;带盖子的瓶子或盒子要拧紧、盖严目的是创造无氧环境。 学生制作的酸奶感觉酸度够，甜度不够，因是加糖比较少。生加糖量以中等大小勺子为单位调节用糖量，因为学生不愿意用天平称蔗糖，觉得那是在做实验而不是食物。
南方医科大学微生物实验报告全解
2016年南方医科大学医学微生物学实验报告 日期 2016年5月22号 一、实验目的 1、掌握培养基制备的原则和一般方法。 2、掌握病原菌的分离与培养方法。 3、掌握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法，熟悉细菌基本形态。 4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。 5、掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。 6、熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法。 7、掌握玻片凝集试验的原理、方法、结果观察与判断。 二、实验器材 1、天平、称量纸、干粉培养基、锥形瓶、量筒、15支试管、试管架、试管筐、5ml 刻 度吸管、平皿、洗耳球、酒精灯 2、脓汁标本1支，粪便标本1支；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个，伊红美蓝 平板2个，接种环，酒精灯 3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板） 题目 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 成绩 实验者 作者：马浩楠 3140020007 参与者名字：马浩楠 丁超 王尧鑫 桂文茁 年级专业 2014级医学影像专业 指导老师 罗军
4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1 本，载玻片4张，染色瓶，染色架 5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4 个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把 6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 三、方法与步骤 1、培养基的制备： 培养基称量干粉培 养基(g) 水量(ml) 煮沸(次）分装(ml) 备注 营养琼脂11.4 300 3瓶，500ml 瓶，平板 营养琼脂 2.7 70 3 5 14支×3，中试管，斜面 营养肉汤 1.3 60 1 3 20支×2，小试管，肉汤 半固体琼脂 1.7 60 3 4 14支×3，小试管，高层 （1）营养琼脂培养基的制备：称量11.4g琼脂，置于三角烧瓶中，加入300ml蒸馏水，分2瓶装，用于倒平板。 （2）营养琼脂培养基的制备（用于制作斜面）：称量2.9g琼脂，置于三角烧瓶中，加入75ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管5ml。 （3）肉汤培养基的制备（用于制作液体培养基）：称量1.1g琼脂，置于三角烧瓶中，加入50ml蒸馏水，放在电炉上，煮沸1次，分15支小试管装，每支试管5ml。 （4）半固体琼脂培养基的制备：称量1.7g琼脂，置于三角烧瓶中，加入60ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管4ml。 2、细菌的分离培养 平板划线分离法
发酵工程实验结果淀粉发酵产酒精
五、实验报告 (一)实验结果 1. 详细记录实验过程中各参数及数据。 结果记录如表： 糖化后，加入可乐瓶中的上清：约400ml. 加入400ml蒸馏水。活化的酵母种液：5ml 2.对实验结果的判断与分析。 ○1二氧化碳生成的检验：培养约一星期后，观察瓶中混合液，淀粉大部分沉降在瓶底，上清浓度较稀，靠瓶壁边缘有一连串微小气泡 接种完，擦干瓶外壁，于天平上称量W1=727.5g；培养结束，取出瓶轻轻摇动，使二氧化碳尽量溢出，在同一天平上称量W2=725.0g 计算得：二氧化碳生成量= W1-W2=2.5g ○2酒精生成的检验：打开瓶塞，闻到有明显酒精气味。 取发酵液5ml, 加10%硫酸2ml,加1%K2Cr2O7溶液 10-20滴，颜色由黄色变为黄绿色。 左：蒸馏水5ml,颜色偏黄，透明度高 右：发酵液5ml,黄绿色，与对照管有明显差异 左图：酒精生成的检验结果 （二）思考题 现有3株不同来源的酒精酵母，请设计实验判断哪株酵母发酵酒精能力最强？ 答：按实验步骤配制等量的三组醪液，加入等量糖化酶进行糖化作用，将原料中的淀粉转化为可发酵性糖，向三组糖化后的淀粉上清中加入等量3株不同来源的酒精酵母种液，相同条件下培养一段时间，分别测定三组实验产生的CO2的质量，进行比较。产CO2越多表示发酵酒精能力越强。 （三）注意事项 1. 淀粉糖化过程中，需要不断进行搅拌，直至粘度下降到一定程度，使淀粉完全糖化。 2. 检验酒精生成时需要用到H2SO4,使用时应该注意安全，不要溅到皮肤上。 3. 使用天平测量可乐瓶质质量时，应遵守天平使用规则用镊子夹取砝码。以免出现误差，导致CO2质量测量不准确。
酿酒实验报告
、目的 全校任选实验课《白酒和葡萄酒酿造与酒评》，是食品、生物工程类专业课。通过本课程的学习，使学生能运用基础课和专业基础课中学过的机械、化学和生物等学科的基础理论和专业知识，来认识与解决各类酿造过程中的具体生产技术问题，熟悉原料的特点和生产菌种的特性，选择合理的工艺流程和操作控制要点。通过本课程的学习，要求学生掌握米酒、黄酒、白酒、葡萄酒和白兰地的发酵工艺与新型白酒勾兑，以及培养学生通过用感官品评技术评价烈酒和葡萄酒酒质量，掌握品酒技能与评酒技术等。 本课程旨在培养学生能在酿酒行业、风味食品和调味品行业以及相关的食品发酵、 酶制剂行业从事技术、工艺和产品开发等研究工作。 本任选实验课专门提供学生酿制米酒、黄酒、小曲白酒、葡萄酒、白兰地酿造实验条件，以及提供白酒与葡萄酒品评实践条件，把酿造学的基本工艺与现代科学技术相结合，在弘扬祖国古代酒文化瑰宝的基础上，结合现代酿酒工艺及科学调酒勾兑方法，使学生能更深刻地体会到我国传统酿造工艺技术的博大精深，从而能利用所学知识不断提高我国酿造工艺技术水平的目的。 实验课共设7个实验项目和白酒香型分类实验，分别是：①米酒酿造②黄酒③小曲白酒酿造④葡萄酒酿造⑤白兰地酿造⑥新型白酒勾兑⑦烈酒和葡萄酒酒评与白酒香型分类。 二、原理与方案 1、米酒酿造原理 糯米（或者大米）含有丰富的淀粉，淀粉在根霉菌淀粉酶的作用下，先转化为麦芽糖，再转化为葡萄糖。受到酒曲里酒化酶的作用部分葡萄糖变为酒精。其味甘甜柔顺，所以称为甜酒。 2、小曲白酒酿造原理 用谷物、薯类或糖分等为原料，经糖化发酵、蒸馏、陈酿和勾兑制成的酒精浓度大于20%(V／V)的一种蒸馏酒。 小曲白酒的生产分为固态发酵法和半固态发酵法两种，半固态发酵法又分为先培菌糖化后发酵和边糖化边发酵两种典型的传统工艺。广东主要的方法是先培菌糖化后发酵工艺。此工艺特点是采用药小曲为糖化发酵剂，前期固态培菌糖化，后期半固态发酵，再经蒸馏、陈酿和勾兑而成。 3、葡萄酒酿造 葡萄酒是用新鲜的葡萄或葡萄汁经发酵酿成的酒精饮料。通常分红葡萄酒和白葡萄酒两种。前者以带皮的红葡萄为原料酿制而成；后者以不含色素的葡萄汁为原料酿制而成。 4、烈酒和葡萄酒酒评与白酒香型分类 4.1白酒品评 白酒是一种味觉品，它的色、香、味、格的形成不仅决定于各种理化成分的数量，还决定于各种成分之间的协调平衡、微量成分衬托等关系，而人们对白酒的感官检验，正是对白酒的色、香、味、格的综合性反映。这种反映是很复杂的，仅靠对理化成分的分析不可能全面地、准确地反映白酒的色、香、味、格的特点。因此，对白酒品质的鉴定，更多地是依靠感觉器官的尝评方法来弥补其不足。就现阶段的实际情况而言，任何精密仪器都代替不了人的味觉和嗅觉，用气相色谱仪分析白酒类微量香味成分对1/10万g含量的物质是可测定出来的，但超过这个极限则无法检测。而人的感官对1／100万g的含量的微量成分却能感觉出来，尤其有的感觉指标是不能用数据表示的。因此虽然现代的科学仪器能把白酒的微量成分分析出来，但是仍然不能准确地测定白酒内在质量，只能作为一种辅助
果酒实验报告
果酒制作的实验报告 组长： 组员： 一、实验目的： 掌握果酒发酵技术、澄清处理技术及产品分析。 二、实验内容： 1、葡萄酒酵母的扩大培养； 2、掌握果酒发酵技术； 3、果酒的澄清处理技术。 三、实验材料：新鲜葡萄一斤，玻璃瓶 4 个， 75% 酒精 四、原理： （1 ）用到的微生物是酵母菌，它的代谢类型是兼性厌氧。 ①有氧呼吸的反应式： C6H12O6+6O2+6H2O→ 6CO2+12H2O+能量 ②无氧呼吸的反应式： C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+能量 （ 2 ）影响酒精发酵的主要环境条件有温度、氧气和pH 。 ①酵母菌生长的最适温度是20℃ ； 酒精发酵一般将温度控制在18～25℃ 。 ②酒精发酵过程中，要保持缺氧、酸性环境。 五、实验步骤： 1 、清洗消毒实验用具，先用温水反复冲洗几次, 再用体积分数为75% 的酒精擦拭消毒，晾干待用。 2 、取葡萄一斤，去除枝梗和腐烂的子粒。用清水冲洗葡萄 1 ～2 遍除去污物（注意不要反复多次冲洗）。
3 、将 1/ 4 左右的葡萄放入榨汁机中，榨汁。其余 3/4 的葡萄用手挤碎（手上套塑料布， 以防杂菌污染）。 4 、将其装瓶（但注意注入的果汁量不要超过塑料瓶总体积的 2/3 ），密封瓶口 六、 对照实验 ： 实验组 适宜温度（ 20 ℃），其 避光，其余条件正常 不与金属接触，其余条件正常 大瓶，其余 余条件正常 条件正常 室温 光照正常， 其与金属接触（对口感和质量均 小瓶，其余 （≤18 ℃）， 余条件正常 有影响），其余条件正常 条件正常 对照组 其余条件正常 七、 实验记录 ： 实验起止日期： 2013 年 5 月 7 日 ~2013 年 5 月 17 日 日期 正常 光照 匀浆（榨汁机） 小瓶 10 、 瓶中无气体，表面长毛 瓶内气体较多，表面长毛 液体内有气泡，但瓶内 瓶内有气体，酒味较浓 20 无气体，颜色较深，表 面长毛数最多。 10 、 瓶内无气体，有酒味 瓶内气体较多，有油漆味 颜色深，酒味最浓，表 瓶内有气体，有酒味 21 面长毛数最多 10 、 瓶中物质尚未分层，属 瓶内有较多的气体，瓶中 瓶内物质已分层， 1/3 瓶内中产生的气体的 22 于混合状态，毛几乎消 物质尚未分层，属于混合 固体 ,2/3 液体，表面长 含量最多，酒味最大， 失 状态，毛几乎消失，有油 毛，但毛变少 瓶内物质尚未分层，属 漆味 于混合状态。 10 、 瓶中葡萄皮上的色素部 颜色较深，酒味大，开始 颜色最深，酒味较大， 颜色不深，分层不明 23 分进入液体中， 为分层，分层，葡萄颗粒较完整 分层，毛较多（与 22 显，葡萄颗粒最明显 有酒味，葡萄粒较多 日相同） 10 、 颜色加深，有酒味，葡 颜色加深，酒味大 酒味中混有异味，毛较 酒味浓，与 23 日相同
糯米甜酒发酵实验报告
发酵工艺实验—— 糯米甜酒发酵 xxxxxxxx xxx xxxxxxx 指导老师：xxx 一、实验目的 1、初步学会制作糯米甜酒。 2、学习糯米甜酒发酵的原理和方法。 3、学习糯米甜酒的鉴定、品评。 二、实验原理糯米甜酒是我国传统的发酵食品，其产热量高，酒度低，风味独特，具有良好的营养价值。由于酵母不能直接利用淀粉，因此大多数的甜酒酿是将糯米或大米经过蒸煮糊化，利用酒药中的根霉和米曲霉等微生物将糊化后的淀粉糖化，将蛋白质水解成氨基酸，然后酒药中的酵母菌利用糖化产物进行生长和繁殖，并通过糖酵解途径将糖转化成酒精，经长时间酿制而成的产品。三、实验材料 糯米1斤，酒曲酵母，蒸锅 1 个，多空蒸盘 1 个，托盘 1 个，纱布，筷子1双，试管 1 支，恒温箱，带盖玻璃瓶，pH 试纸，酒精计，温度计等 四、实验方法与步骤实验流程： 洗米，浸泡T蒸饭T摊冷T拌酒曲T落缸搭窝T培养成熟T检测 1、洗米，浸泡：称米、洗米至水清、泡米水高出水面10cm以上，浸泡12到16小时, 至可以 用手碾碎即可，沥干水分。 2、蒸饭：在蒸锅里放上水，蒸屉上垫一层白布，烧水沸腾至有蒸汽。将沥干的糯米放在布上 蒸熟，中间掏窝方便蒸汽上行，约 1 小时。自己尝一下就知道了。没有这层布，糯米会将蒸屉的孔堵死，蒸不熟。尝一尝糯米的口感，如果饭粒偏硬，就洒些水拌一下再蒸一会。 3、摊冷：将蒸好的糯米端离蒸锅，倒在托盘中冷却至室温。间或用筷子翻翻以加快冷却。在 冷却好的糯米上洒少许水，将酒曲均匀的拌在糯米中，用手将糯米弄散摊匀，用水要尽量少。 4、落缸搭窝：转入容器，压实，中间扒一个小窝，然后密封。 5、培养成熟：置于30C的恒温箱中培养，如果米饭变软，表示已糖化好；有水有酒 香味，表示已有酒精和乳酸，即可停止保温。扭松盖子放在约80C热水中烫10min , 杀死其中的微生物和酶，停止其活动。这样，甜酒酿就制作成功。 6、检测：测定酒精度，酸度，可溶性固形物含量，品评。 五、实验结果 (1)实测温度：21.0C； (2)酒精度：10.0； ( 3)可溶性固形物含量：35.1 ； ( 4) pH： 3.6 ； ( 5)品评结果：有黄酒应有的香气，有醇香，但不浓郁( 22 分)；甜美尚爽口，酒味较淡薄( 36 分)；具有本类黄酒的风格，成分较为协调( 12分)； 品评总分：70 分 六、结果分析 （1）糖的分析：大米中的淀粉转化成单糖和低聚糖，这更有利于它快速补充人体的能量，以及改变口味。主要的单糖和双糖有葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、异麦芽糖。糯米酒甜度较淡，原因可能是加曲量略少。当淀粉被糖化越充分，它的糖度就越高，所以酒就越甜。还有可能在糯米拌酒药时不够均匀，导致糯米粒之间的水分含量不同，这些因素都会引起酒的糖度的变化。
发酵工程综合实验报告
发酵工程综合实 验报告 实验题目 蛋白酶的发酵工艺研究 院系名称 生物与食品工程学院 学院：生物与食品工程学院 2015年 7月 31日 学生姓名 杨益坤 学 号 2012214114 专业班级 生物技术12-1班 指导教师 杨 柳
目录 标题错误!未定义书签。 摘要错误!未定义书签。 关键词2 1.引言2 2.材料与方法3 2.1材料3 2.1.1菌种3 2.1.2试剂3 2.1.3培养基4 2.1.4实验仪器4 2.2方法4 2.2.1蛋白酶酶活测定4 2.2.2总可溶性糖测定5 2.2.3枯草芽孢杆菌发酵实验6 2.2.4发酵罐实验6 2.2.5蛋白酶性质实验7 3.结果与分析7 3.1透明圈观察7 3.2标准曲线8 3.2.1酪氨酸标准曲线8 3.2.2葡萄糖标准曲线9 3.3不同装液量摇瓶发酵实验9 3.4小型发酵罐发酵实验11 3.5蛋白酶性质研究12 3.5.1最适pH测定及pH影响酶稳定性的研究12 3.5.2最适温度测定及p温度影响酶稳定性的研究13 3.6小结15 4.致16 5.参考文献17
蛋白酶的发酵工艺研究Study on Protease Fermentation Conditions 摘要： 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)能够产生大量的蛋白酶，是进行蛋白酶研究的良好材料。本次实验目的在于学习蛋白酶的定性定量测定方法，考察营养及环境对酶生产的影响，以及熟悉小型发酵罐的使用。 我们控制装液量为唯一变量，测定酶活及总糖变化，最终确定最佳装液量条件为60ml。在此基础上，我们进一步确定了最适温度为40℃，最适pH为5。我们挑选透明圈较大的菌落在小型发酵罐进行发酵，定时取样测定酶活与总糖，绘制发酵曲线，从而了解菌体生长情况。 Abstract: Bacillus subtilis can produce much protease and can be a good meterial for research about protease.The purposes of this experiment are learning how to measure protease qualitatively and quantificationly,investigating how the nutrition and environment influence the output of protease,and trying to be familiar with small-sized fermentation cylinder. We controlled fluid volume as the only variable quantity,measured enzyme activity and total sugar quantity,finally confirmed that the best fluid colume condition is 60ml.On this basis,we moved forward a single step to conclude that the best temperature is 40℃ and the best pH is 5.We chose the bacterial colony with bigger transparent circle to ferment in the small-sized fermentation cylinder,measured enzyme actity and total sugar quantity at regular time,then drew the fermentation curve,consequently we could know how was the situation of the growing bacterium.
酒精发酵实验报告课件
生物工程专业综合（设计）性大实验 报告书 (酒精发酵实验) 学生姓名：吴丁柱 学号：3102106216 班级：生工2102 专业：生物工程 指导教师：魏胜华
生物工程专业设计（综合）实验 安徽工程大学实验报告书 学生姓名：吴丁柱学号：3102106216 专业班级：生工2102 实验类型：□验证■综合□设计□创新实验日期：2013.12.17 实验成绩： 一、当前酒精生产工艺的技术进展及现状 1.1现状 酒精是广泛应用在食品、化工、医药、国防和科研等各个领域的重要有机工业原料。 中国工业化生产酒精始于1900年俄国人在哈尔滨建的酒精厂，但发展非常缓慢，新中国成立时，我国酒精产量不到1万吨，专业性酒精厂生产规模大都是千吨小厂，基础十分薄弱。 五十多年来，特别是改革开放以来，随着国民经济的发展，我国酒精生产取得了巨大的发展。现有酒精生产企业450多家，产量在3万吨以上的共26家，其中30万吨以上的3家、10～20万吨7家、3～5万吨9家。2005年酒精产量达368.13万千升（按年销售收入500万元以上的企业计）（不包括自产自用的酒精），比2004年增长33.6%，居世界第三位。 2004年出口酒精74.44万吨比2003年增2.28倍，每吨酒精创汇418.73美元。进口3433吨，其中变性酒精1802.18吨，用汇686.03美元/吨。酒精生产实现了连续化、使用专用酶制作和商品酒精酵母，固定化酒精酵母，淀粉利用率达到90%以上，淀粉出酒率好的企业可以达到55~56%，（96°V/V）原料出酒率可到40~40.88%。随着食用酒精和工业酒精国家标准的4次制订、修订和实施，高纯度特级酒精企业的日益增多，标志着我国酒精生产技术和产品质量水平得到了很大的提高。但是，国外酒精生产技术自石油危机和美国大力发展汽油醇以来，有了更快的进步，特别是在节能、综合利用和自动化等方面，与我国拉开了差距。我国每吨酒精平均能耗酒精800公斤以上，世界水平为300~400公斤。随着我国燃料乙醇的发展，引进、消化、吸收、创新，我国酒精生产技术正在得到飞跃发展和提高，深信21世纪初期一定可以赶上世界先进水平。 1.2国内酒精蒸馏流程的进展 淀粉质原料→ 蒸煮→ 发酵→ 蒸馏→ 酒精 （糖质含糖蜜）（糖质原料无需蒸煮） 1.2.1两塔 （1）50年代初，天津、地方国营哈尔滨（顾乡屯）等酒精厂采用的两塔间断蒸馏流程。 （2）50年代初间歇流程生产能力低、消耗大，相继改为连续蒸馏。上海新亚酒精厂采用的两塔液相过塔流程。 （3）山东黄台酒精厂采用的两塔半液相过塔流程。 （4）1953年南阳酒精厂为降低煤耗采用了两塔气相过塔蒸馏流程生产95%（V）酒精。 （5）1956年部颁医药用酒精标准实施后，上海酒精厂、资中糖厂采用的两塔气相 1
发酵实验报告四甜酒酿的制作
发酵实验报告四甜酒酿的 制作 Last revision on 21 December 2020
发酵工程学实验报告实验四、甜酒酿的制作 学院生命科学学院 专业应用生物教育 班级12应生A班 姓名李顺昌 学号 实验课程甜酒酿的制作 指导教师许波 开课学期2014—2015学年下学期
实验四、甜酒酿的制作 小组合作：是小组成员：李顺昌、李媛媛、方淑萍、周玉坤 一、实验目的 学习并掌握甜酒酿的酿制方法 二、实验设备与材料 1.设备：天平、灭菌锅、盆、容器（口缸）、保鲜膜、培养箱等 2.材料：糯米（约400g/人）、市售甜酒药、冷开水 三、实验原理 1、将蒸熟的米饭经接种酒酿种曲后，在适宜的培养条件下，让种曲中的根霉孢子萌发菌丝体，大量繁殖后通过淀粉酶等的作用，将淀粉转化为葡萄糖，从而使甜酒酿具有独特的甜醇口味。 2、从微生物的观点来看，酿制的关键在于： 要有优质的酒酿种曲，即种曲中应含有糖化率很高的优质根霉孢子或菌丝体；应选择优质的糯米作原料；严格无菌操作规程，尽量避免杂菌污染；制作甜酒酿的器具都要清洗干净；合理控制酿制条件等。 四、实验方法步骤 浸米→蒸饭→淋饭→拌酒药→搭窝→保温培养 1、蒸饭：将滤干水分的糯米，扎紧纱布口后放入灭菌锅；于115-121℃灭菌20~25min，到米饭熟透为止。 2、淋饭：加少许冷开水淋洗糯米饭，边淋边拌，使米饭迅速冷却至35℃左右。 3、拌酒药（接种）：按干糯米的重量换算接种量( % ) ；将酒药均匀地撒在冷却的糯米饭中（稍微留下一点点酒曲最后用），拌匀。
4、搭窝：将拌好酒药的米饭装入容器后（不能压太紧），将饭粒搭成中心下陷的凹窝（中间低、周围高）；饭面和凹窝中均匀撒上少许酒药，倒入少量的冷开水，盖上盖子或保鲜膜； 5、保温培养：28℃培养约24-48小时，待凹窝内有少许液体渗出即可食用（下周一取）；酿成的甜酒酿应是醪液清澈、半透明而甜醇爽口。 五、实验报告 （一）实验现象、数据及结果 透过容器瓶壁可以看到瓶中的糯米已经膨大发白；瓶中液体已经与水明显不同；打开瓶盖和保鲜膜，能闻到一股酒香；未搅动时，上层吃起来与商品米酒口味相差不大，但是有一点淡淡的酸味，搅动后有一股明显的馊味。 （二）分析与讨论 造成发酸和有馊味的原因应该是发酵过度，而发酵过度的原因可能是：①糯米太少、洒在最上层的酒曲过多；②发酵温度比较适宜，但是发酵时间过长，导致发酵过度了。 （三）结论 本次甜酒酿的制作实验已经基本完成，我们酿造的米酒虽然达不到商品标准，但是我们已经掌握了甜酒酿的基本方法，并进行了初步尝试取得了一定的成果。 （四）实验总结 1、本次实验成败之处及其原因分析 ①米饭一定要蒸熟，这样才能被酒曲利用；②酒药的量一定要合
发酵实验报告四甜酒酿的制作
发酵工程学实验报告实验四、甜酒酿的制作 学院生命科学学院 专业应用生物教育 班级12应生A班 姓名李顺昌 学号 实验课程甜酒酿的制作 指导教师许波 开课学期2014—2015学年下学期
实验四、甜酒酿的制作 小组合作：是小组成员：李顺昌、李媛媛、方淑萍、周玉坤 一、实验目的 学习并掌握甜酒酿的酿制方法 二、实验设备与材料 1.设备：天平、灭菌锅、盆、容器（口缸）、保鲜膜、培养箱等 2.材料：糯米（约400g/人）、市售甜酒药、冷开水 三、实验原理 1、将蒸熟的米饭经接种酒酿种曲后，在适宜的培养条件下，让种曲中的根霉孢子萌发菌丝体，大量繁殖后通过淀粉酶等的作用，将淀粉转化为葡萄糖，从而使甜酒酿具有独特的甜醇口味。 2、从微生物的观点来看，酿制的关键在于： 要有优质的酒酿种曲，即种曲中应含有糖化率很高的优质根霉孢子或菌丝体；应选择优质的糯米作原料；严格无菌操作规程，尽量避免杂菌污染；制作甜酒酿的器具都要清洗干净；合理控制酿制条件等。 四、实验方法步骤 浸米→蒸饭→淋饭→拌酒药→搭窝→保温培养 1、蒸饭：将滤干水分的糯米，扎紧纱布口后放入灭菌锅；于115-121℃灭菌20~25min，到米饭熟透为止。 2、淋饭：加少许冷开水淋洗糯米饭，边淋边拌，使米饭迅速冷却至35℃左右。 3、拌酒药（接种）：按干糯米的重量换算接种量( 0.35% ) ；将酒药均匀地撒在冷却的糯米饭中（稍微留下一点点酒曲最后用），拌匀。 4、搭窝：将拌好酒药的米饭装入容器后（不能压太紧），将饭粒搭成中心下陷的凹窝（中间低、周围高）；饭面和凹窝中均匀撒上少许酒药，倒入少量的冷开水，盖上盖子或保鲜膜； 5、保温培养：28℃培养约24-48小时，待凹窝内有少许液体渗出即可食用（下周一取）；酿成的甜酒酿应是醪液清澈、半透明而甜醇爽口。 五、实验报告 （一）实验现象、数据及结果 透过容器瓶壁可以看到瓶中的糯米已经膨大发白；瓶中液体已经与水明显不同；打开瓶盖和保鲜膜，能闻到一股酒香；未搅动时，上层吃起来与商品米酒口味
发酵实验报告
综合性实验报告 实验名称：小型发酵罐的使用与发酵 过程中主要生化指标测定 实验性质：综合性实验 所属课程名称：发酵工程工艺原理 班级：2012级食品营养3班 学号：姓名： 实验指导教师： 实验时间：2014.12.01 – 2014.12.03
小型发酵罐的使用与发酵过程中主要生化指标测定 摘要： 关键词： 1 前言 2 材料与方法 2.1 材料 2.1.1 菌种 大肠杆菌（E.coli） 2.1.2 培养基 种子培养基：葡萄糖10g，蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，氯化钠5g，水1000mL。pH7.0。 发酵培养基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏10g，氯化钠5g，氯化铵5g，水1000mL。pH7.0。 全部用自来水配制培养基。 2.1.3 其他材料 泡敌、斐林试剂、0.1%标准葡萄糖溶液、40%氢氧化钠等。 2.1.4 设备 BIOTECH-7BGZ发酵罐1套（配套蠕动泵、pH电极、溶氧(DO)电极、空压机及所
3 实验方法3.1 流程管口表
图1 发酵过程流程 3.2 菌种准备 3.2.1 配制培养基 配制种子固体培养基100mL ，分装试管，0.1Mpa （121℃）灭菌20min ，摆成斜面。 配制种子培养液600mL ，分别分装50mL 于两个250mL 三角瓶中（作一级种子瓶），余下550mL 平均分装于三个500mL 三角瓶中（作二级种子用），同上灭菌备用。 3.2.2 接种与培养 （1）菌种活化 上罐前两天，从冰箱中取出菌种转接斜面，37℃培养24h 。 （2）接一级种 上罐前一天，由斜面菌种转接一级种子瓶，37℃振荡（125r/min ）培养12h 。分别测接种前和培养结束时的OD 值，计算出净增OD ，并作记录。 （3） 接二级种 将一级种转接二级种子，接种量5%。之后，37℃振荡（125r/min ）培养10h 。 3.3 上罐前的准备 洗净发酵罐及各联接胶管。 配制发酵培养基5000mL ，置发酵罐内，加入几滴泡敌。 校正pH 电极和溶氧(DO)电极。 安装好发酵罐，把电极插口、取样管、补料口、消泡剂料瓶等固定、密封好后，开夹套出、进水阀V2、W1，使夹套充满水。 3.4 实罐灭菌 用保护罩盖住罐盖及发酵罐，用倾倒螺钉锁紧法兰，开保护罩顶部排气阀V4，启动蒸气发生器，启动搅拌马达，调转速300r/min ，开启冷凝水出水阀V1，开启蒸气阀门S1， 菌种斜面 一级种子 （250mL 摇瓶二级种子培养10h 37℃37℃ )(500mL 摇 发酵罐 管路准备 实罐 灭菌 罐 酵 8～10h 取分析测定