供者淋巴细胞回输对异基因造血干细胞移植后急性白血病复发的影响
体外刺激淋巴细胞增殖作用检测
体外刺激淋巴细胞增殖试验 1 样品配制 精确称取样品于灭过菌的eppendorf管中，用无菌的PBS配制成浓度5mg/mL 的样品液。充分溶解然后以15000g离心30min，无菌条件下将上清转移至新的无菌eppendorf管中，将样品稀释成所需浓度待用。 2 小鼠淋巴细胞的制备 选取8-10周龄，体重22±1g的Balb c或C57BL/6小鼠颈椎脱臼处死，取脾脏，用PBS冲洗3~4次。将脾脏磨碎后过100目筛，过筛后的混悬液以400g/min 离心6min。吸去上清液，沉淀中按每只小鼠1.5mL的量加入氯化铵红细胞裂解液，反复冲打，静置10min后，加PBS至50mL，然后以400g/min离心6min，吸去上清液，加PBS缓冲液冲洗并离心2遍后，吸去上清，加入RPMI1640培养基（含双抗及10％胎牛血清）混匀，用细胞计数仪计数并稀释成2×106个/mL细胞液备用。 3 细胞培养 将2×106个/mL淋巴细胞悬浮液加至96孔板中，每孔加180μL，同时加入20μL样品液，以20μL PBS和20μL 60μg/mL的PHA溶液分别作阴、阳性对照。于37℃、含5%的CO 条件下培养3d，加入相应试剂测定 2 4 淋巴细胞增殖率的测定 4.1 Alamarblue试剂测定法 在上述细胞培养的96孔板中，每孔分别加入20μL Alamar Blue试剂，再培养，加Alamar Blue试剂前及变色后分别用ELISA自动读板仪测定570nm和600nm处的吸光度，然后根据Alamar Blue试剂的公式计算各种样品对淋巴细胞增殖率。计算公式为： 增殖率(%)=[117216×Aλ570(sample)-80586×Aλ600(sample)] /[117216×Aλ570(control)-80586×Aλ600(control)]×100% 4.2 MTT法测定 4.2.1 MTT 溶液的配制方法 称取MTT 0.5g溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）中，用0.22μm滤膜过滤分装，－20℃避光保存。在配制和保存的过程中容器最好用铝箔纸包住。在用酶标仪检测结果的时候为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0-0.7 范围
免疫细胞表面标志Mark
辅助性T细胞的典型表面标志：CD3+CD4+CD8-。（Th1主要分泌IL-2，IFN-γ或TNF-β等辅助细胞免疫或参与迟发型超敏反应；Th2主要分泌IL-4/5/6/10等辅助体液免疫、参与速发型超敏反应） 细胞毒性T细胞的典型表面标志是CD3+CD4-CD8+。（CD3+CD8+CD30-可认定为Tc1细胞；CD3+CD8+CD30+可认定为Tc2） 调节性T细胞：自然存在的，其典型标志为CD4+CD25+Foxp3+ （最重要的分子标记是一种转录因子Foxp3） 成熟B细胞均表达CD19，B1细胞CD19+CD5+，B2细胞CD19+CD5- NK细胞的典型标志：CD3-CD16+CD56+。 单核-巨噬细胞的典型表面标志为CD14。 人成熟DC的主要特征表面标志为CD1a、CD11c和CD83，但不表达MPS T/B/NK细胞的典型表面标志（CD14/3/19和CD20/16/56）。
小结 淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形态基本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法， 而要依靠对其表面标志的检测。常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的表面 标志是CD抗原。 进一步区分淋巴细胞亚群可使某一类淋巴细胞的功能趋向一致和单一。 但目前看来，还很少有只通过一个CD抗原就能将某一类淋巴细胞亚群 指示出来的CD抗原，CD抗原指示出来的淋巴细胞亚群多数都是相对特 异。 根据T细胞的免疫效应功能和表面CD分子表达至少可以分为：辅助性T 细胞、细胞毒性T细胞和调节性T细胞；SmIg为B细胞所特有，是鉴定B 细胞可靠的指标，以CD5和CD19为标志可将B细胞分为B1和B2两个亚群； 目前多以CD3一、CD16+、CD56+作为NK细胞的典型标志。
封闭抗体治疗新技术活化淋巴细胞主动免疫治疗
封闭抗体治疗新技术---活化淋巴细胞主动免疫治疗 l 您是否有封闭抗体经过治疗后仍然长期阴性的烦恼么？ l 您是否仍然为找不到淋巴细胞的第三供者所困扰？ l 您是否在为丈夫无法每次来抽取新鲜血液提取淋巴细胞而忧愁？ 中山大学孙逸仙纪念医院生殖免疫专科和生物治疗技术中心合作提供了一项新技术，为您解决上述问题，这就是活化淋巴细胞主动免疫治疗。这，将带给你新的希望！ 什么是封闭抗体？ 在妊娠过程中，封闭抗体是母体接触父源性抗原所产生的抗体，能与胎盘细胞表面抗原结合，从而阻断母体细胞毒性T细胞对胚胎发动免疫攻击，发挥保护胎儿、维持妊娠的作用。 封闭抗体与习惯性流产的关系 习惯性流产的妇女约80%～90%测不到这种特异性的封闭抗体，其体内存在未被抑制的细胞毒性细胞。这些细胞可直接作用于胎盘，或通过释放炎性介质间接损害胎儿或胎盘，从而导致流产的发生。 什么是淋巴细胞主动免疫治疗？
淋巴细胞主动免疫治疗是用丈夫或第三者的淋巴细胞注入习惯性流产患者的体内，诱导产生同种免疫反应，并获得封闭抗体及微淋巴细胞毒抗体。这样，母体免疫系统就不会对胎儿产生免疫攻击，提高再次妊娠的成功率。 活化淋巴细胞主动免疫治疗比一般的淋巴细胞主动免疫治疗有什么优势？ 1、一次少量抽血，够用全疗程。抽取丈夫或第三者血液40m l分离淋巴细胞，经体外活化增殖，用增殖的淋巴细胞行免疫注射，将剩余的淋巴细胞冻存备用。可以维持1年左右，注射10次以上。 2、疗效更佳。活化的淋巴细胞纯度更高，活性更强，更易激起患者体内的封闭抗体。 3、保证健康的供给。丈夫患有乙肝等传染病不宜供血时，活化淋巴细胞可以解决找不到第三者供血的难题。 什么是活化淋巴细胞主动免疫治疗 活化淋巴细胞是指抽取丈夫或者第三者的血液，分离淋巴细胞，并用细胞因子进行体外刺激，使其活化并增殖。得到纯度更高、活性更强的淋巴细胞，注入患者体内后更容易刺激封闭抗体的产生。 活化淋巴细胞主动免疫治疗的适应人群：
中国异基因造血干细胞移植治疗血液系统疾病专家共识(Ⅱ)——移植后白血病复发(完整版)
中国异基因造血干细胞移植治疗血液系统疾病专家共识(Ⅱ)——移 植后白血病复发(完整版) 白血病复发是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)失败的主要原因之一。国际骨髓移植登记组(CIBMTR)的资料显示，复发在非血缘和同胞相合移植后的死因中分别占33％和47%[1]。北京大学血液病研究所的资料显示，单倍型和同胞相合移植后的复发相关死亡率在总体人群中分别为15.6％和16.7%[2]，在死因中分别占32％和42%。移植后一旦复发预后很差，目前治疗选择仍然有限；各移植中心在处理移植后复发方面各自进行了探索。本共识综合各移植中心的经验和临床研究，并参考国外文献，进行归纳总结，旨在对移植后白血病复发的诊断和处理原则进行推荐。 一、定义和分类 根据复发时肿瘤负荷分为血液学复发、细胞遗传学和(或)分子生物学复发；根据肿瘤细胞来源可分为供者型复发和受者型复发；从复发部位上可分为髓内复发、髓外复发和髓内伴髓外复发。 1．血液学复发： 指移植后完全缓解的患者外周血中又出现白血病细胞或骨髓中原始细胞≥5％或出现新的病态造血或髓外白血病细胞浸润。 2．细胞遗传学复发： 指移植后已达细胞遗传学完全缓解的患者又出现原有细胞遗传学异常，或性别染色体由完全供者型出现受者一定比例的嵌合(比例界值尚无统一标准，且不等同于白血病细胞的增加)，尚未达到血液学复发的标准。
3．分子生物学复发： 是近年研究的热点，指应用流式细胞术(FCM)和(或)聚合酶链反应(PCR)等分子生物学方法检测到特异或非特异分子生物学标志异常或超过一定界值、尚未达到血液学复发的标准。参见以下微小残留病(MRD)判定标准。 二、MRD检测 (一)常用MRD检测方法 1．染色体： G显带、R显带和(或)荧光原位杂交(FISH)分析证明有白血病细胞或肿瘤细胞特异的染色体易位和融合基因存在，是检测MRD的标志技术。FISH 检测MRD的敏感度为10-2~10-3，检测结果阳性即表明患者体内有残留白血病细胞。 2．FCM ： FCM检测的MRD为白血病相关免疫表型(LAIP)，敏感度达10-4左右。FCM检测MRD在急性淋巴细胞白血病(ALL)尤其是B-ALL中的预测意义较急性髓系白血病(AML)敏感、特异，但移植后各监测时间点的意义、抗体的组合及界值等尚未达到标准化。多个研究在ALL中将<10-4定义为MRD阴性，提示复发率较低、预后良好[3]。 3．PCR技术： PCR技术检测的MRD包括特异分子生物学标志(TEL-AML1、BCR-ABL、AML-ETO、CBFβ-MYH11、NPM1等)和非特异标志(IgH/TCR 重排、WT1等)，敏感性可达到10-5~10-6。 4．供受者嵌合状态的检测：
淋巴细胞主动免疫治疗母胎免疫识别低下型反复性流产疗效分析
淋巴细胞主动免疫治疗母-胎免疫识别低下型 反复性流产疗效分析 白 静1,赵 芳1,李 岩1,马红丽2 (1.洛阳市妇女儿童医疗保健中心生殖医学研究所,河南 洛阳 471002;2.洛阳市中心血站) 摘 要:目的 分析淋巴细胞主动免疫疗法治疗母-胎免疫识别低下型反复性流产(RSA)的临床疗效和作用机制。方法 以临床筛查封闭抗体确诊为母-胎免疫识别低下型R S A未孕患者86例为研究对象,采用淋巴细胞主动免疫疗法治疗,将妊娠患者与同期不明原因反复性自然流产(UR S A)已孕患者治疗情况对比观察疗效,对母-胎免疫识别低下型R S A患者治疗后不同归向原因进行对比分析该方法的作用机制。结果 治疗后妊娠56例,妊娠成功51例,成功率91 07%,与对照组比较P<0 01,主动免疫治疗疗效与患者年龄、反复流产次数有相关性,与注射淋巴细胞密度无相关性。结论 母-胎免疫低下型RSA患者宜早期治疗,淋巴细胞主动免疫疗法是治疗母-胎免疫识别低下型RSA的有效方法。 关键词:反复性早期自然流产;主动免疫;母-胎免疫低下型;封闭抗体 中图分类号:R714 21 文献标识码:A 文章编号:1006-9534(2009)10-0067-02 E ff ect ana lysis on m other-f oe t us hypo m i m uno log ic recogn ition recurren t spon t aneous abortion us e l y m phocyt e ac tive m i m un ity me thod.BA I J i ng1,Z H AO Fang1,LI Yan1,M A H ong-li2.(1.Luoyang W o m en and Chil dren H ealt h Car eH osp it al ReproductiveM edicine Unit;2.the B lood Cen ter of Luoyang H enan471002) Abstrac:t Ob j ec ti ve:Ana l ys i s t he curati ve effect and f unction m echanis m about l ymphocyte active i m m un ity t herapy m other-foe-t us hypo i m muno l og ic recognition recu rrent spontaneous abortion(RSA).M ethods:86mo t her-foetus hypo i m m unolog i c recogn ition recurrent spontaneous aborti on through check block i ng anti body as i nvestigate b j ec t,treat w ith ly m pho cy te active i m m un ity,con trast w it h unexp lai ned recurrent spontaneous abortion(UR S A)i n t he sa m e per i od,ana l y si s the function m echanis m t h rough compareing therapeutic resu lt.R esults:A fter treat ment,56person g esta ted,51person gestate conti nuousl y,achiev e m ent ra ti o91 07%,co m-pared w ith contro l g roup P<0 01,the the rapeutic effec t of active i m m un i ty has assoc i a tiv ity on pa ti ent s age、recurrent spontaneous aborti on par ity and unassoc i a tiv ity on l ymphocyte density.C onc l usi on:M othe r-foetus hypo i m muno l og ic recognition recurren t sponta-neous aborti on shou l d be ear l y treated,t he ly m pho cy te acti ve i m mun ity therapy ism odus operandi on it. Key w ords:R ecurren t spontaneous abo rti on;A c tive i m munity;M other-foetus hypo i m m uno l og ic recogn iti on recu rrent spontane-ous abo rti on;B l ocki ng anti body 反复性自然流产(RSA)是一种常见的妊娠并发症,临床发病率约为1%,其病因复杂,80%以上原因不明,约2/3为母-胎免疫识别低下型反复性流产[1]。2006年5月~2008年12月,我们运用配偶淋巴细胞皮内注射法对母-胎免疫识别低下型RSA患者进行治疗,疗效满意,报道如下。 对象与方法 1.对象 以06年5月~08年12月就诊的母-胎免疫识别低下型RSA未妊娠患者为治疗对象,所有患者具备以下条件并签署知情同意书:(1)流产次数 2次;(2)夫妻染色体核型分析正常;(3)系统检查:无生殖道结构异常、内分泌检查正常、抗心磷脂抗体阴性、病毒四项(TORC H)Ig M阴性;(4)封闭抗体阴性;(5)男方精液分析正常。治疗后妊娠56例为治疗组,同期就诊的UR S A患者就诊时已妊娠者(所有患者具备:上述(1)、(2)、(3)、(5)条)57例对照组。 2.方法 以微量淋巴细胞毒理学试验方法判定R S A患者封闭抗体情况,无菌条件下分离配偶血液淋巴细胞。治疗组:将淋巴细胞悬液1m l于患者左右前臂内侧分3点皮内注射。疗程:每隔3~4周一次,3~4次后复查封闭抗体,转阳性者安排怀孕;如未孕4~8周加强一次,同时检查不孕原因;妊娠后治疗间隔同前,同时联合给予黄体支持和中药保胎直至孕5月。对照组:仅给予黄体支持。 3.疗效判断标准及统计学方法 妊娠达16周以上,或分娩正常新生儿为妊娠成功,再次流产、死胎及新生儿畸形作为妊娠失败。采用SPSS10 0软件进行数据分析。 结果 治疗组治疗后妊娠56例,其中分娩29例,妊娠超过16周22例,再次流产5例;对照组57例,两组患者年龄、反复流产次数比较无差异性,治疗组妊娠成功率明显高于对照组。结果见表1。 67 中国优生与遗传杂志2009年第17卷第10期
细胞治疗临床注册登记
细胞治疗临床注册登记 可行性计划 版本：1.0 第七届细胞治疗国际研讨 会—6月17-18
目录 1. 介绍 (3) 2. 背景 (3) 3. 目标 (4) 3.1 短期目标 (4) 3.2 长期目标 (5) 4. Med-CTR 平台与相关数据库的建立 (5) 4.1 研究点的筛选 (5) 4.2 Med-CTR 平台与数据库的建立 (6) 5. 已具备的基础 (6) 6. 阶段实施内容与工作措施 (6) 6.1 第一阶段——专家委员会与执行方的建立（2016-2017年） (6) 6.2 第二阶段——Med-CTR 平台的建立与推广（2016-2017年） (6) 6.3 第三阶段——示范性注册登记中心的建立（2016-2017年） (6) 6.4 第四阶段——细胞治疗登记研究的多中心发展及数据库的建立 （2017-2018年） (6) 6.5 第五阶段——数据共享与成果建立 (6) 7. 参考文献................................................................................................................. 7 第七届细胞治疗国际研讨会 —6月17-18
1. 介绍 梅斯医学集团（包括梅斯医学、生物谷、Bioinsight ）联合细胞治疗临床研究资质机构、细胞治疗企业、科学家联合发起“细胞治疗注册”（Cell Therapy Registry, CTR ）的研究平台计划。此计划旨在建立收集各参与研究点细胞治疗数据的注册登记平台（Med-CTR ），促进细胞治疗关联方的协同合作,数据包括基础研究、临床研究、教学培训、标准化、质量控制和治疗评估等。期望推动基于临床数据的细胞治疗循证研究，为临床细胞治疗的科学家和医生提供分享临床治疗经验和发展研究的合作平台。 2. 背景 随着细胞生物学的飞速发展，细胞治疗在基础研究领域取得了很大的研究价值，尤其是干细胞治疗。越来越多的基础研究在多种疾病领域开展临床试验，特别是CAR-T 疗法在多个临床研究中都取得了良好效果，在实体瘤的治疗上也取得一定的进展[1-2]。国际上已经有部分产品获得审批并且应用于临床取得成效。但是，由于细胞治疗作为一种人类多种退行性疾病的新的治疗手段，确切的作用机制尚未完全阐明，无论从临床应用还是商业发展的视角来看，细胞治疗对患者的治疗是否安全有效，并且效果持续稳健依旧是目前关注和争论的焦点[3-5]。 新的细胞治疗包括各种标准定义的细胞制剂，可适用于患有自身免疫性疾病、神经系统、血液系统和心脏病的患者。除此之外，通过应用细胞毒性T 细胞、肿瘤疫苗和间质干细胞（Mesenchymal Stem Cell,MSC ）的细胞治疗也通过一系列的临床试验证明对癌症、结缔组织疾病相关的组织修复和免疫调解中的干细胞移植等疾病的治疗具有潜在的临床应用价值。在类风湿性关节炎和血管炎一类的免疫 性疾病的治疗中，MSC 治疗也逐步进入临床领域。目前，对细胞治疗的研究缺乏长期有效的治疗监测，对注入患者的细胞产品的体内外风险也了解甚少。尽管介于临床试验的良好设计，研究的准确性是毋庸置疑的，细胞治疗的发展前景也受到了越来越多的关注，但是由于临床试验样本量及研究规模的局限性，使得细胞治疗的长期疗效和安全性无法得到进一步的验证。为了进一步了解从动物研究中观察到的细胞治疗风险是否可以真实反映人类临床结果，对细胞治疗进行长期 第七届细胞治疗国际研讨会—6月17-18
淋巴细胞主动免疫治疗反复性流产的步骤及原理
淋巴细胞主动免疫治疗反复性流产的步骤及原 理 Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT
淋巴细胞主动免疫治疗反复性流产的步骤及原理 步骤：抽取丈夫静脉血20ml,用淋巴细胞分离液分离提取出淋巴细胞。用生理盐水洗涤2次后,加生理盐水1ml稀释,于妻子前臀内侧处作皮内放射状6～8点接种,淋巴细胞数为2～×10(7)/ml。注射后24～72小时局部出现直径3～10mm不等红润硬结,每疗程注射4次,每次间隔3周。第一疗程结束后鼓励怀孕,怀孕后再注射2次。对孕期治疗2次后仍有先兆流产症状的患者,再增强治疗2～4次。 原理：从现代生殖免疫观点来看,原发性习惯性流产,可能是由于患者对胚胎父系抗原的免疫低反应性所致。基于该理论国内外学者采用丈夫或无关个体白细胞、淋巴细胞等对母体进行免疫治疗。目的是诱导母体对胚胎抗原或相关同种异体抗原产生免疫反应性。 妊娠是成功的半同种异体移植过程,胚胎所携带的夫源性HLA抗原能刺激母体免疫系统,并产生一类IgG型抗体,称之为封闭抗体,它存在妊娠妇女血清中,可抑制针对丈夫HLA特异性抗体的淋巴细胞毒活性,并可抑制异体移植物的排斥,原因不明的习惯性流产妇女血清中缺乏该封闭抗体,但通过注射丈夫的淋巴细胞可获得。 注射部位皮肤反应与疗效的关系,皮肤反应的轻重可判断免疫疗法的效果非常有用的观察指标之一,第1次注射后皮肤反应重,即24～48小时局部出现红润硬结直径为3～10mm,而几次注射皮肤反应逐渐减轻者妊娠预后良好。免疫疗法治疗习惯性流产的疗效肯定且安全简
便。但由于治疗后并非所有患者封闭抗体都转阳性,而正常妊娠妇女封闭抗体也可能为阴性,作用机理尚待进一步研究。
淋巴细胞主动免疫治疗对反复自然流产的疗效分析及其护理策略
·论著·淋巴细胞主动免疫治疗对反复自然流产的 疗效分析及其护理策略 黄华英 孙鸿燕 廖运梅 【摘要】 目的 探讨采用淋巴细胞主动免疫治疗对反复自然流产（ＲＳＡ）的疗效及其护理策略。方法 选择２０１０年４月至２０１１年９月于本院确诊为ＲＳＡ后完成淋巴细胞主动免疫治疗，并成功随访的１５４ 例患者为研究对象。淋巴细胞主动免疫治疗方法为：采集配偶（健康）淋巴细胞，若配偶不宜作为免疫原提 供者，则选用无关健康个体的淋巴细胞。外周血淋巴细胞治疗方法：患者治疗前应严格避孕。将淋巴细胞 悬液１ｍＬ于患者前臂内侧分６～８点皮内注射，治疗１个疗程后检测抗磷脂抗体（ＡＰＬＡ），每隔３～４周皮 内注射１次，４次为１个疗程。治疗１个疗程结束后，医师指导下妊娠，妊娠后继续巩固治疗１个疗程。疗 效判断标准：维持妊娠至２０孕周后者判断为治愈。对接受采用淋巴细胞主动免疫治疗患者的护理策略包 括：健全登记管理制度、良好的心理疏导、严格护理操作规范（本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会 所制定的伦理学标准，得到该委员会批准，征得受试对象本人的知情同意，并与之签署临床研究知情同意 书）。结果 ①１５４例ＲＳＡ患者接受免疫治疗２个疗程后，ＡＰＬＡ呈阳性为１４６例（９４．８１％），与治疗前 比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。②１５４例患者中，１３６例再次妊娠，妊娠率为８８．３１％；妊娠至２０周 后为９８例，２８例在妊娠后治疗疗程中，４９例足月分娩，２例早产，所产婴儿体格、智力发育正常。实施护理 策略后，患者满意度提高。结论 淋巴细胞主动免疫治疗对治疗ＲＳＡ安全有效，但是否值得临床推广应 用，尚需进一步研究证实。健全登记管理制度、良好的心理疏导、严格护理操作规范、适时的健康指导等护 理策略，可提高对本病患者护理质量。 【关键词】 自然流产； 反复自然流产； 淋巴细胞免疫治疗； 护理 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ Ａｃｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ Ａｂｏｒｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ Ｎｕｒｓｉｎｇ Ｍｅａｓｕｒｅｓ ＨＵＡＮＧ Ｈｕａ－ｙｉｎｇ，ＳＵＮ Ｈｏｎｇ－ｙａｎ，ＬＩＡＯ Ｙｕｎ－ｍｅｉ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｌｕｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｌｕｚｈｏｕ６４６０００，Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ．（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ： ＨＵＡＮＧ Ｈｕａ－ｙｉｎｇ，Ｅｍａｉｌ：５９２３７２８２７＠ｑｑ．ｃｏｍ） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｃｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ａｂｏｒｔｉｏｎ（ＲＳＡ）ａｎｄ ｉｔｓ ｎｕｒｓｉｎｇ ｍｅａｓｕｒｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｒｏｍ Ａｐｒｉｌ ２０１０ｔｏ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１１，ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １５４ＲＳＡ ｃａｓｅｓ ｗｈｏ ｕｎｄｅｒｗｅｎｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｃｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ．Ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ，ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｏｆ ｈｕｓｂａｎｄ （ｈｅａｌｔｈｙ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ）ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．Ｉｆ ｔｈｅ ｓｐｏｕｓｅ ｓｈｏｕｌｄ ｎｏｔ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ，ｔｈｅｎ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｕｎｒｅｌａｔｅｄ ｈｅａｌｔｈｙ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｗａｓ ｔｈｅ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｔｏ ２０ ｇｅｓｔａｔｉｏｎ ｗｅｅｋｓ．Ｔｈｅ ｎｕｒｓｉｎｇ ｍｅａｓｕｒｅｓ ｗｅｒｅ：ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ，ｇｏｏｄ ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｕｎｓｅｌｉｎｇ ａｎｄ ｓｔｒｉｃｔ ｃａｒｅ ｐｒａｃｔｉｃｅｓ．Ａｌｌ ｏｆ ｔｈｅ １５４ｐａｔｉｅｎｔｓ ｃｏｍｐｌｅｔｅｄ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ．Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｗａｓ ａｐｐｒｏｖｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｅｔｈｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｂｅｉｎｇ ｏｆ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｌｕｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ．Ｉｎｆｏｒｍｅｄ ｃｏｎｓｅｎｔ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｅａｃｈ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ①Ａｆｔｅｒ ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｔｗｏ ｃｏｕｒｓｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｏｒ ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＡＰＬＡ）ｗａｓ １４６ ｃａｓｅｓ（９４．８１％），ｔｈｅｒｅ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（Ｐ＜０．０１）． ②Ａｍｏｎｇ １５４ｐａｔｉｅｎｔｓ，１３６ｃａｓｅｓ（８８．３１％）ｗｅｒｅ ｒｅ－ｐｒｅｇｎａｎｃｙ；ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｔｏ ２０ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ９８ｃａｓｅｓ， ２８ｃａｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｃｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｓ ｓａｆｅ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ．Ｂｕｔ ｗｈｅｔｈｅｒ ｉｔ ｉｓ ｗｏｒｔｈｙ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｉｅｓ ａｒｅ ｎｅｅｄｅｄ ｔｏ ｃｏｎｆｉｒｍ．Ｔｈｅ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ，ｇｏｏｄ ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｕｎｓｅｌｉｎｇ，ｓｔｒｉｃｔ ｃａｒｅ ｐｒａｃｔｉｃｅｓ ａｎｄ ｔｉｍｅｌｙ ｇｕｉｄａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅａｌｔｈ ｃａｒｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｃａｎ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｃａｒｅ ｔｏ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ．【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 ａｂｏｒｔｉｏｎ； ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ａｂｏｒｔｉｏｎ； ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ； ｎｕｒｓｉｎｇ ＤＯＩ：１０．３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－５２５０．２０１２．０３．０１４ 作者单位：６４６０００四川泸州，泸州医学院附属医院生殖部通讯作者黄华英（Ｅｍａｉｌ：５９２３７２８２７＠ｑｑ．ｃｏｍ） 对妊娠２８孕周前连续发生自然流产≥３次，称为反复自然流产（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ａｂｏｒｔｉｏｎ，ＲＳＡ），与母体缺乏抗磷脂抗体（ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄａｎｔｉｂｏｄｙ，ＡＰＬＡ）有关，可分为免疫性ＲＳＡ和非免疫 · １ ０ ３ · 中华妇幼临床医学杂志（电子版）２０１２年６月第８卷第３期
供者淋巴细胞输注的研究进展
供者淋巴细胞输注的研究进展 [摘要] 供者淋巴细胞输注(DLI)是治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发的恶性血液病患者的有效方法之一。DLI主要通过移植物抗肿瘤效应(GVT)来诱导和维持缓解。在有些病例,DLI诱导的缓解非常持久,并能治愈一些其他治疗方法无效的患者。作者综述了DLI的细胞成分、剂量、疗效、并发症及应用展望。 ［关键词］供者淋巴细胞输注；移植物抗肿瘤效应；移植物抗宿主病；免疫治疗; 综述 供者淋巴细胞输注(DLI)是指通过输入异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后供者的淋巴细胞来治疗恶性疾病的一种方法。其目标是通过移植物抗肿瘤效应(GVT)来诱导和维持缓解。DLI除用于治疗移植后复发外,还可用于预防高危患者移植术后复发。作为T细胞去除移植术后的辅助治疗,DLI可用于治疗植入失败、病毒感染及移植后淋巴组织增生紊乱性疾病,促进移植后免疫功能重建［1-3］。 1 DLI的细胞成分 最近的证据表明,除T细胞(供者或受者源)外,其余细胞成分对移植物抗白血病（GVL）和移植物抗宿主病（GVHD）亦有重要作用。因此,DLI的细胞组成影响着疗效［4］。通常地,DLI细胞成分是通过采集未经动员的外周血获得,约含有2×108个单个核细胞,其中约50%为CD3+细胞,此外还含有B细胞、树突细胞和其他细胞［5］。由于确切的GVL效应机制未明,未纯化的DLI能提供一系列异基因反应细胞及其他免疫辅助细胞。这样可能会增加DLI的疗效,但也经常与GVHD的发生相关。 理想的细胞成分应能最大限度地发挥GVL疗效和尽量降低GVHD。CD4+细胞可能是诱导GVL效应而无GVHD的最关键的细胞。纯化富集CD4+细胞的DLI已经在治疗复发的慢性粒细胞白血病（CML）和骨髓瘤患者中显示疗效,而无明显GVHD［6］。Soiffer等［7］进行了一个预防性使用纯化富集CD4+细胞与未经纯化富集的DLI治疗T细胞去除移植术后的白血病/骨髓增生异常综合征(MDS)患者的对比研究,结果显示纯化富集CD4+细胞提高无病生存率,减少了GVHD的发生。 DLI细胞成分的另一争议的方面是采集前是否采用粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员。因为骨髓衰竭是DLI的并发症之一,增加了DLI中的干细胞成分可以减少这种风险的假设似乎是合理的。G-CSF动员除了明显增加CD34+干细胞的数量外,也使CD3+细胞数量增加近3倍,并对细胞因子的表达有着重要影响,包括增加IL-10、转化生长因子-β和IFN-α的水平［8］。这些细胞因子的改变促进了辅助2型T细胞分化,增加了调节性T细胞,扩展了不成熟的抗原提呈细胞(APC),所有这些均可能有利于降低急性GVHD的发生。然而,从西雅图研究小组
淋巴细胞培养后主动免疫治疗反复自然流产疗效评价
#生殖医学# 淋巴细胞培养后主动免疫治疗反复自然流产疗效评价 武美丽 柳肃芬 作者单位:730050 甘肃,甘肃省妇幼保健院生殖免疫诊疗 反复自然流产(recurrent sp i n taneous abo rtion,RSA )是妇科常见病之一,除遗传、内分泌、感染、自身免疫、解剖因素外,80%以上原因不明 [1] ,成为临床难治性不育症。近年来国内外学 者根据Beer 等[2] 在1981年创立的淋巴细胞主动免疫疗法,对原因不明的反复自然流产(unexpla i n ed recurrent spontaneous aborti o n ,URSA )患者大胆采用丈夫和无关个体淋巴细胞进行主动免疫治疗,大大提高了URSA 的临床诊治水平。2006年3月~2007年6月,我们运用配偶淋巴细胞培养后皮内注射法对40例URSA 患者进行治疗,并观察妊娠预后,取得了较好的治疗效果,现报道如下。 对象与方法 11对象:2006年3月至2007年6月,就诊本院生殖免疫诊疗中心门诊的RSA 患者。详细询问病史、经妇科检查、子宫输卵管造影或宫腔镜检查证实无生殖器器质性病变,内分泌化验正常,体温双相,黄体期不少于12d,且较平稳,夫妻染色体核型正常,TORC H 常规检查无异常,排除血型不合,自身免疫无异常(抗心磷脂抗体、抗核抗体、抗精子抗体、抗透明带抗体等阴性),配偶精液常规在正常范围者诊断为URSA 。对其符合条件的66例URSA,经征求意见表示愿意参加研究,并签知情同意书,根据患者的自愿分为3组,孕前实行主动免疫治疗(孕前治疗组)20例,确诊妊娠后实行主动免疫治疗(孕后治疗组)20例,对照组26例。对照组采用黄体酮保守治疗。3组年龄(23~35岁,平均年龄29岁)、健康状况、流产次数(既往曾发生自然流产2~10次,平均流产次数314次)及流产时间(流产时孕周为5~12周,平均孕周7周),差异无统计学意义(P >0105)。 21淋巴细胞的培养:全部采用RSA 患者配偶 为供血对象,身体健康,传染病4项正常(甲肝病毒、乙肝病毒、梅毒螺旋体、爱滋病病毒检测阴性)。无菌技术抽取配偶外周抗凝全血30m ,l 常规肝素抗凝,与等量磷酸缓冲液(phosphate ba-l anced so l u ti o n ,PBS)混合,使用Fico ll-H ypaque 法密度离心分离外周血单个核细胞(periphera l b l o od m ononuc lear cel,l PB M C)。用RP M I 1640培养液洗涤离心2次,加入培养液后置于培养瓶中于37e 5%CO 2培养箱内。培养液配制,每1m l 含RP M I 1640为0173m ,l 其中含重组人C -干扰素0105万U /m ,l 植物血凝素(phytohe m agg l u ti n i n ,P HA )0102m g /m ,l 5%小牛血清(012m l)。培养细胞内毒素和细菌培养阴性,酚红染色细胞活率\85%,培养72h 后的细胞再用019%氯化钠溶液洗涤2次,调整至细胞数为20~30@106 /m l 方可用于治疗。 31免疫治疗方法:孕前治疗组20例孕前治疗3次后嘱其妊娠,如3月内未受孕,行输卵管通液,并在排除不育症的情况下重新加强1次主动免疫治疗。妊娠35d 加强免疫1次,此后每3周治疗1次。孕后治疗组20例在确定怀孕后开始主动免疫治疗。2组均每3周给患者双侧前臂皮内多点免疫注射1次,每次每点为013~015m ,l 直至妊娠14周。课题组人员固定,接受本免疫疗法者不接受对该病的其它治疗。对照组26例URSA 患者再次妊娠后仅以黄体酮常规保胎药物治疗到妊娠12周停药。 41疗效判断标准:妊娠达28周以上,或分娩正常新生儿为成功妊娠,再次流产、死胎及新生儿畸形作为妊娠失败。 51统计学处理:采用SPSS 1010软件进行数据 分析,分析方法为V 2 检验,P <0105判定差异有统计学意义。 结果 40例URSA 患者经配偶淋巴细胞免疫治疗后,
淋巴细胞主动免疫治疗反复性流产的步骤及原理
淋巴细胞主动免疫治疗反复性流产的步骤及原理 步骤：抽取丈夫静脉血20ml, 用淋巴细胞分离液分离提取出淋巴细胞。用生理盐水洗涤2 次后, 加生理盐水1ml 稀释, 于妻子前臀内侧处作皮内放射状6～8 点接种, 淋巴细胞数为2～2.5×10(7)/ml。注射后24～72 小时局部出现直径3～10mm 不等红润硬结, 每疗程注射4 次, 每次间隔3 周。第一疗程结束后鼓励怀孕, 怀孕后再注射2 次。对孕期治疗2 次后仍有先兆流产症状的患者, 再增强治疗2～4 次。 原理：从现代生殖免疫观点来看, 原发性习惯性流产, 可能是由于患者对胚胎父系抗原的免疫低反应性所致。基于该理论国内外学者采用丈夫或无关个体白细胞、淋巴细胞等对母体进行免疫治疗。目的是诱导母体对胚胎抗原或相关同种异体抗原产生免疫反应性。 妊娠是成功的半同种异体移植过程, 胚胎所携带的夫源性HLA 抗原能刺激母体免疫系统, 并产生一类IgG 型抗体, 称之为封闭抗体, 它存在妊娠妇女血清中, 可抑制针对丈夫HLA 特异性抗体的淋巴细胞毒活性, 并可抑制异体移植物的排斥, 原因不明的习惯性流产妇女血清中缺乏该封闭抗体, 但通过注射丈夫的淋巴细胞可获得。 注射部位皮肤反应与疗效的关系,皮肤反应的轻重可判断免疫疗法的效果非常有用的观察指标之一, 第1 次注射后皮肤反应重, 即24～48 小时局部出现红润硬结直径为3～10mm, 而几次注射皮肤反应逐渐减轻者妊娠预后良好。免疫疗法治疗习惯性流产的疗效肯定且安全
简便。但由于治疗后并非所有患者封闭抗体都转阳性, 而正常妊娠妇女封闭抗体也可能为阴性, 作用机理尚待进一步研究。
供者淋巴细胞输注治疗白血病的研究进展
供者淋巴细胞输注治疗白血病的研究进展 第四军医大学西京医院输血科(西安710032) 陈 蕤 综述 张献清 审校 对白血病的治疗,目前较好的选择仍是采用联合化疗取得完全缓解后,以HLA匹配的骨髓进行异基因骨髓移植(A llo2BM T),这一方案确能延长白血病患者的生存期。然而不少患者最终还是会因微量残留病灶(M RD)导致的复发而死亡。如何有效治疗A llo2BM T后复发的白血病成为临床所关注的重要问题。自从Ko lb等1报告首例A llo2BM T后慢性髓系白血病复发的患者,经采用供者淋巴细胞输注(Dono r L ym p hocyte Infu si on,DL I)诱导可再次完全缓解,开创了同种异基因白细胞输注治疗白血病的先河。随后,DL I 已被广泛应用于治疗造血系统肿瘤A llo2BM T后的复发和微小残留病变,并将应用范围逐渐扩展到A llo2BM T后的非复发并发症和未经骨髓移植预处理患者的过继免疫治疗2。至今,全世界已有数百名异基因骨髓移植后复发的病人接受了这种异基因细胞治疗,包括急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤等血液系统恶性肿瘤和重度Β地中海贫血、范可尼贫血等血液系统非恶性疾病。 1 DL I的作用机制 现在认为DL I的作用与输入的异体免疫活性细胞诱导的过继性免疫反应有关,这种异源性供者淋巴细胞可以介导受者体内一种重要的免疫攻击,即移植物抗白血病(GVL)效应,以消除宿主体内残留的白血病细胞。DL I 诱导GVL效应消除白血病复发这一临床现象已得到人们的普遍认识,但其详细机制尚不甚明了。多种移植模型和体外实验研究表明T细胞包括CD4+T h1、CD8+T c2及N K细胞可能是GVL的重要效应细胞3。异基因骨髓移植后,移植物在宿主体内植活,产生嵌合体,使其可以耐受同一种供者来源的T细胞,这些T细胞不能识别宿主的白血病细胞和非白血病细胞,它们在次要组织相容性抗原的协同下,通过直接的细胞接触产生异基因反应,这种反应可能是异体抗原特异性的,而不是疾病特异性的,但这种反应可以清除宿主体内残存的肿瘤细胞。目前一般认为GVL可能通过以下三种方式发挥作用4,5:①细胞毒淋巴细胞(CD4+,CD8+,N K)通过释放钙依赖的穿孔素直接杀伤白血病细胞;②T细胞(CD4+,CD8+)通过缓慢的非钙依赖的Fas Fas LL途径诱导凋亡:如白血病细胞高表达Fas抗原,TN FΑ可以通过Fas抗原诱导凋亡,优先杀伤白血病细胞,而正常细胞由于缺乏Fas抗原可以免受损害;③细胞因子介导白血病细胞死亡或生长抑制(主要为CD4+)。如I L22既能活化T细胞、自然杀伤细胞(N K细胞),促进和增强其杀伤、溶解白血病细胞,也可以诱导TN F、IFN2Χ及巨噬细胞集落刺激因子(M2CSF)的释放,并与这些细胞因子相互作用发挥GVL效应6。在异源T细胞免疫反应过程中,CD4+细胞可以分泌多种细胞因子,如I L22以及I L212的产生能够增强N K,CD8+ T细胞的细胞毒活性,增加DL I效应,使患者得到缓解。 2 DL I治疗方案的选择 在临床上GVL和GV HD经常相伴发生。如何在保留并加强GVL效应的同时抑制GV HD的发生是目前血液学和移植免疫学所面临的难题。目前临床工作者已在此方面做了多方面的探索。 2.1 合适的输注时机:移植后白血病复发是DL I输注的金标准。但什么时候给予DL I能使所发生GVL的作用最大而GV HD的作用小而轻,此点尚无定论。动物实验及许多临床资料表明,移植后过早输注T细胞,能加重GV HD的发生;移植后期输注T细胞,GV HD发生率明显下降,故多认为在BM T后30d以后比较合适。 2.2 合适的细胞剂量:理论上DL I的量与GVL和GV HD呈正相关,但GVL和GV HD的发生受多种因素影响,GVL和GV HD并无确切的平行关系,在临床上常见到低量DL I后,白血病获得缓解而并无GV HD的发生。减少输注的淋巴细胞数量和去除CD8+细胞成分是减少GV HD的两种有效方法,对C M L患者输注<1×107 kg T细胞或去除CD8+淋巴细胞能很好地防止GV HD发生,目前临床预防GV HD的主要方法包括:①去除CD8+ T细胞;②T细胞转导自杀基因;③控制T细胞输注量和分次低量,逐渐增加输注的细胞量等方法。此外还需考虑供体来源、HLA相合性、疾病种类、白血病复发时的情况、DL I治疗的目的等因素。 2.3 细胞因子的作用:其中比较重要的有白细胞介素(I L22)及干扰素(IFN)。I L22可加强A llo2BM T的移植物抗白血病作用,它可直接激活N K细胞增加抗白血病效应,在T细胞清除后的BM T中也可加强GVL作用。干扰素的作用不似I L22明显,但与DL I合用似可加强DL I 对A llo2BM T后复发白血病的治疗作用。
淋巴细胞主动免疫治疗复发性流产的疗效研究
现代预防医学2011年第38卷第9期Modern Preventive Medicine，2011，Vol.38，NO.9文章编号：1003-8507（2011）09-1626-02中图分类号：R714.21文献标识码：A【儿少卫生与妇幼保健】淋巴细胞主动免疫治疗复发性流产的疗效研究 崔艳萍，钟小烨，班清媚，胡克，肖淑君 摘要：［目的］探讨淋巴细胞主动免疫治疗复发性流产的疗效研究。［方法］将临床筛查确诊为封闭抗体缺乏所致的复发性流产患者100例随机分为2组，研究组50例，采用淋巴细胞主动免疫治疗；对照组50例，未行任何处理，比较两组妊娠结局。研究组治疗后常规复查封闭抗体，比较封闭抗体阳性组及阴性组妊娠结局。［结果］研究组及对照组妊娠成功率分别为82.00%（41／50）及48.00%（24／50），两组比较差异有统计学意义（P﹤0.05）；免疫治疗后，封闭抗体阳性组及阴性组妊娠成功率分别为88.24%（30／34）及56.25%（9／16），两组比较差异有统计学意义（P﹤ 0.05）。［结论］淋巴细胞主动免疫治疗封闭抗体缺乏所致复发性流产可显著提高妊娠成功率，有较可靠的临床效果及 应用价值。 关键词：淋巴细胞；免疫治疗；复发性流产；封闭抗体 STUDY OF IMMUNOTHERAPY WITH LYMPHOCYTES IN WOMEN WITH RECURRENT SPONTANEOUS ABORTION CUI Yan-ping，ZHONG Xiao-ye，BAN Qing-mei，et al.（Maternal and Child Health Care Hospital of Guangdong，Qingyuan511515，China） Abstract：［Objective］To investigate the curative effect of immunotherapy with lymphocytes in women with recurrent spontaneous abortion.［Methods］100patients diagnosed as RSA caused by lacking blocking antibodies were divided into two groups：50cases as group of immunotherapy（control group），another50cases with no therapy（comparison group）.［Re-sults］In control group and comparison group，the success rates of pregnancy were82.00%（41／50）and48.00%（24／50）respectively.There was a significant difference for the rate of pregnancy between these two groups（P﹤0.05）.After immunother-apy，in positive-blocking antibodies group and negative-blocking antibodies group，the success rates of pregnancy were 88.24%（30／34）and56.25%（9／16）respectively.There was a significant difference for the rate of pregnancy between these two groups（P﹤0.05）.［Conclusion］Immunotherapy with lymphocytes in women with RSA caused by lacking blocking anti-bodies may increase pregnancy rate and have credible curative effect and application value. Key words：Lymphocytes；Immunotherapy；Recurrent spontaneous abortion（RSA）；Blocking antibodies RSA是指临床上孕20周前连续2次或以上的自然流产。近代生殖免疫研究表明，RSA可能的病因包括染色体异常，母体生殖道解剖结构异常，内分泌失调，生殖道感染，自身免疫等，而原因不明的RSA称之为不明原因复发性流产（URSA）。不明原因RSA约占所有RSA的40%～50%。免疫因素除一部分与自身抗体有关外，另一部分被认为是母胎双方免疫不适应，其中封闭抗体缺乏是主要原因。本课题采用淋巴细胞主动免疫治疗，探讨该方法治疗封闭抗体缺乏所致复发性流产的临床疗效，为临床治疗RSA提供有效地治疗手段。2009年12月～2010年12月共收治RSA患者50例，均行淋巴细胞主动免疫治疗。现报道如下。 1资料和方法 1.1研究对象 本研究对象为门诊及住院连续流产2次或2次以上复发性流产共100例，经筛查后确诊为封闭抗体阴性的RSA。随机分 基金项目：广东省清远市科技局科研项目（2010B33） 作者简介：崔艳萍（1970-），女，本科，副主任医师，研究方向：妇产科 作者单位：广东省清远市妇幼保健院妇产科，清远，511515为2组，研究组50例，使用丈夫淋巴细胞主动免疫治疗，对照组50例，未行任何处理。研究组年龄20~40岁，平均28.5岁。流产次数：2次流产33例，3次流产10例，4次以上流产7例；对照组年龄23～42岁，平均29.6岁。流产次数：2次流产32例，3次流产12例，4次以上流产5例。 1.2方法 1.2.1流产病因筛查及方法选择100例不明原因RSA患者，所有患者进入研究前均签署了知情同意书，所有RSA患者符合以下条件：（1）有2次或2次以上早期自然流产史；（2）夫妇双方染色体核型分析正常，无家族遗传病史；（3）常规妇科盆腔检查、B超检查排除明显的生殖道畸形和形态学异常；（4）阴道白带常规和宫颈支原体、衣原体检查排除生殖道感染；（5）生殖内分泌激素测定：PRL、FSH、LH、E2、P、T等排除内分泌疾病，空腹血糖正常；（6）抗心磷脂抗体（-）、抗子宫内膜抗体（-）、抗精子抗体（-）；（7）封闭抗体（-）；（8）接受本治疗前3个月未经任何免疫治疗和接种，也未使用过调节免疫功能药物；（9）男方精液分析正常。 1.2.2封闭抗体检测方法抽取患者外周血2ml，分离血清，用ELISA法进行测定，操作按试剂盒说明书，试剂由美国One Lambda公司生产的封闭抗体检测试剂盒进行检测。 1.2.3淋巴细胞主动免疫治疗方法首先抽取丈夫外周血（排 1626··