大鼠基质金属蛋白酶-1MMP-1ELISA试剂盒

大鼠基质金属蛋白酶-1(MMP-1)ELISA试剂盒

(用于血清、血浆、细胞培养上清液和生物体液内)

原理

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗大鼠MMP-1 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的MMP-1与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠MMP-1，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，MMP-1

时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。所有标本测定前用标本稀释液至

少作1：10稀释（取20ul，加标本稀释液180ul,稀释10倍）。

2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成200ng/ml的溶液。设标准管8管，第一管

加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入200ng/ml的标准

品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出

500ul弃去。第八管为空白对照。

3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。

4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。

3.每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。

4.洗板：同前。

5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。

6.洗板：同前。

7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。

8.每孔加入100ul终止液混匀。

9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断

1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。

2.以标准品20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标

纸上作图，画出标准曲线。

3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应MMP-1含量，再乘上稀释倍数即可。

试剂盒性能

1. 灵敏度：最小的MMP-1 检测浓度小于0.15ng/ml。

2.特异性：可同时检测重组或天然的大鼠MMP-1。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。

3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。

注意事项

1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。

3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。

4. 本试剂盒宜置4o C冰箱保存。

5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！

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