宝生物碱性磷酸酶(CIAP)使用说明书

Cloned

Alkaline Phosphatase（CIAP）

（Calf intestine）

使 用 说 明 书

Code No.： D2250

包 装：

Alkaline Phosphatase（10～30 U/μl） 500 Units

10×Alkaline Phosphatase Buffer 1 ml

保 存： -20℃

●制品说明

本酶与大肠杆菌由来的酶同样，催化所有磷酸单酯的水解，不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解，对ATP 等的焦磷酸键水解速度较慢。

●酶贮存溶液

Tris-HCl（pH8.0） 10 mM

KCl 50 mM

MgCl2 1 mM

ZnCl20.1 mM

Glycerol 50 %

●起 源

Yeast carrying the plasmid which encodes the gene of calf intestine alkaline phosphatase。

●活性定义

在37℃、pH9.8的条件下，1分钟内水解对硝基苯磷酸盐（p-nitrophenyl phosphate）生成1 μmol 的对硝基苯酚（p-nitrophenol）所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

●纯 度

1） 30 U的本酶和1 μg的λDNA-Hin d III片段在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

2）30 U的本酶和1 μg 的Closed circular(RFI)pBR322 DNA 在37℃下反应1小时，DNA的电泳 谱带不发生变化。

3） 18 U的本酶和1μg的16S，23S rRNA在37℃下反应16小时，RNA的电泳谱带不发生变化。

●用 途

去除载体DNA片段的5′-末端的磷酸基。

●使用注意

CIAP在保存条件下极其稳定，而在螯合剂存在的条件下，经65℃、30分钟加热处理，99%的活性不可逆失活（根据反应条件不同有时也有例外）。建议失活处理时使用苯酚，可使酶完全失活。

●添附Buffer组成（保存：-20℃）

10×Alkaline Phosphatase Buffer

苯酚/氯仿/异戊醇（25 ：24 ：1）抽提2次。

氯仿/异戊醇（24 ：1）抽提1次。

添加5μl的3 M NaOAC。

添加125 μl的（2.5倍量）冷乙醇，在-20℃下保冷30～60分钟。

离心分离回收沉淀，用200 μl的70％冷乙醇洗净后，减压干燥。

用20μl以下的TE Buffer溶解沉淀。

V2005.09

生物安全柜使用操作步骤

生物安全柜的使用制度 1、在做保养前，应先切断电源。 2、由于对操作时间的统计直接影响对维护需要的判断，因此在使用此柜时应备有 操作时间的详细记录以备参考和查询。 3、表面的清洁： 非工作区的不锈钢：用浸泡在浓缩肥皂液中的柔软毛巾清洁表面，然后用浸泡在干净的热水或温水中的另一块棉布或毛巾擦净工作区的不锈钢：使用医用 酒精擦净。禁止使用强氧化性的试剂或溶液。 外部涂层：任一种非研磨的家庭用清洁剂，使用柔软的棉布或毛巾擦净。 4、在使用过程中每日清洁： 1）消毒和清洗操作区 2）对控制面板进行消毒 3）用柔软的清洁剂或玻璃专用清洁剂清洗箱体外表面和玻璃 4）对设备的各种功能进行检查 5) 将本次工作记录在案 5、每月清洗： 1）用清洗剂将所有外表面的尘埃消除， 2)对设备的工作台面 内壁表面、观察窗内面应以75﹪酒精擦拭。 3）将本次清洗记录在案 6 每年维护： 1）检查前玻璃门驱动装置的松紧度 2）检查紫外线灯管和荧光灯管 3）每年申请厂家对安全柜的整体性能检测 4）将本次维护记录在案。

生物安全柜使用操作步骤 准备工作： 1、物品准备： ⑴操作人员防护用品：无粉乳胶手套及聚氯乙烯手套各1副，一次性防渗透防护衣1件，一次性口罩、帽子（有条件者备N95口罩）、防护镜等； ⑵治疗盘：常规消毒用物1套，无菌纱布、棉球； ⑶一次性注射器、一次性防渗透防护垫、防渗透专用污物袋； ⑷根据医嘱备化疗药物、输液袋等。 2、人员准备：洗手，佩戴一次性口罩、帽子、更鞋，换工作服，外套一次性防渗透防护衣；配药时带双层手套，即：聚氯乙烯手套外戴1副无粉乳胶手套。 操作流程： 1、配药前洗手，穿防渗透护服，佩戴口罩，帽子，带聚氯乙烯手套，其外套一副乳胶手套。 2、配药前启动紫外线灯进行生物安全柜内操作空气消毒30分钟，并在操作前用75%究竟擦拭柜内面及台面，保持洁净的备药环境，柜内操作台面铺一次性防渗防护垫，减少药液污染。 3、取合适的注射器及注射针并检查 4、再次查对医嘱及治疗卡 5、割据安剖前应轻弹其颈部，使附着的药粉降至瓶底，打开安剖时应垫一纱布，以防划破手套。瓶装药物稀释及抽取药液时，应插入双针头以排除瓶内压力,防止针栓脱出造成污染。并且要求在抽取药液后, 瓶内进行排气和排液后再拔针, 不可使药液排于空气中。加药时将化疗药加入瓶装液体后应抽尽瓶内空气, 避免瓶内压力过大导致更换液体时药液外溢。 6、抽取药液时可选用一次性注射器，并注意抽取药液以不超过注射器容量的3 /4为宜。抽取药液后放以垫有聚乙烯薄膜的无菌盘内备用，每次用后按污物处理。 7、再次查对 8、完成配置后，保持安全柜运行5--10分钟，使飞散的气溶胶完全附着到过滤器上，关闭。再用75%酒精擦拭操作台面。 9、整理用物，操作中使用的注射器、输液器、输液袋、敷料及放置化疗药物的安瓿等物品应放在专用的塑料袋内集中封闭处理, 以免药液蒸发污

血清碱性磷酸酶ALP测定

血清碱性磷酸酶ALP测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 实验原理 本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。 ALP 对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸 在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。 3 标本采集与处理： 3.1 病人准备：无特殊要求。 3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。

3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。 3.4 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。 3.5 标本运输：常温条件下运输 3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。 4 实验材料： 4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成 试剂1（R1）： 乙酸 镁 3.0mmol/ L 硫酸锌 1.5mmol/L HEDTA 3.0mmol/ L AMP缓冲液420mmol/L

试剂2（R2）：对-硝基 苯磷酸盐 81.5mmol /L AMP缓冲液420mmol/L HEDTA 5.0mmol/L 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。 4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。 4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服。 4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的ALP校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。 5 仪器

天根 一步法逆转录PCR试剂盒说明书

通用型一步法RT-PCR试剂盒说明书 前言 本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行PCR 检测。用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman 荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。 一步法RT-PCR可使RT及PCR过程在单管中完成，比分开进行RT及PCR更方便。由于不需要在RT完成后打开反应管，尽可能地避免了样品间的相互污染。 规格 20人份 适用仪器 适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。 试剂盒组成 试剂准备 根据下表配制反应液： 振荡混匀后，按每管 40 μl(可根据需要调整)分装，备用。 PCR扩增 将均一化后的RNA提取样本10 μl加入各反应管，混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实

时检测。 结果判断 扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。 保存及有效期 -20℃保存，有效期为6个月。 注意事项 1. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。 2. 整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。 3. 操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。 4. 试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。 5. 进行实时荧光分析时，应使用透光性能较好的一次性薄壁离心管；.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行扩增。 6. 注意适当处理检测中遗留的样品、扩增产物及可能被污染的试剂。 生产企业： 上海蓝创生物科技发展有限公司

骨碱性磷酸酶250的平衡方法

如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 骨碱性磷酸酶250的平衡方法 导语：骨碱性磷酸酶250是关于我们身体成长的指标，我们应该尽可能的去平衡骨碱性磷酸酶250的值，可能我们大家对于这种问题还不是很熟悉吧，我们这 骨碱性磷酸酶250是关于我们身体成长的指标，我们应该尽可能的去平衡骨碱性磷酸酶250的值，可能我们大家对于这种问题还不是很熟悉吧，我们这方面的内容关注的比较少，但是骨碱性磷酸酶250却与我们每天的生活息息相关，但是现在很多人出现了骨碱性磷酸酶250不平衡的情况，如果出现问题就会威胁我们的身体健康，所以我们一定要想办法平衡它，那么骨碱性磷酸酶250怎么平衡呢，下面就让我们跟随文章来一起了解一下吧。 平衡方法： 1.碱性磷酸酶升高主要与肝脏和胆囊疾病有关，但是任何检查项目判断疾病都是要相互联系的，不可单一来看。如果仅仅是ALP升高，且升高幅度不大，转氨酶、胆红素、GGT、B超等都正常的话，基本没有什么大碍。小孩母亲是大三阳，有可能在怀孕或生产过程中将病毒传染给孩子，小孩如果也是乙肝病毒携带者的话，只要转氨酶、胆红素正常，B超没问题就可以不予治疗，只要做到每半年检查肝功能、B 超一次即可。肝功能正常的乙肝病毒携带者是不需要任何治疗的，平时做到饮食均衡，不要熬夜，不要喝酒，不要服用有损害肝脏副作用的药物，心情开朗就可以避免发病。但由于免疫激活，有些人到一定年龄后就可能发生肝炎，这时才需要服用护肝、抗病毒药物治疗。 2.如果是生理性的原因，就属于正常现象，大家不必担心。如果是病理性的原因，患者首先要弄清楚是哪种病引起的，并在医生的指导下积极主动地进行治疗。乙肝患者碱性磷酸酶偏高，主要还是由于乙 预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏

生物安全柜标准操作规程

1. 目的: 规范生物安全柜的操作与维护保养工作，确保设备的正常运作，以保障操作人员的安全。 2. 范围: 无菌实验室阳性间菌检员使用的BHC-1300A2生物安全柜。 3．职责：菌检员负责设备的正常操作与维护保养，由质量部经理复核相关文件记录。 4. 内容 4.1 安全柜应放置于十万级以下的初级净化间。操作前应打开紫外灯，照射30min，后将本次操作所需的全部物品移入安全柜，避免双臂频繁穿过气幕破坏气流；并且在移入前用75%酒精擦拭物品表面消毒，以去除污染。 4.2 打开风机10min，待柜内空气净化并气流稳定后再进行实验操作。将双臂缓缓伸入安全柜内，至少静止2min，使柜内气流稳定后再进行操作。 4.3 生物安全柜内不放与本次实验无关的物品。物品应尽量靠后放置，不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。 4.4 操作时应避免交叉污染。为防止可能溅出的液滴，应准备好75%的酒精棉球或用消毒剂浸泡的小块纱布，避免用物品覆盖住安全柜的格栅。 4.5 在实验操作时，不可完全打开玻璃视窗，应保证操作人员的脸部在工作窗口之上。在柜内操作时动作应轻柔、舒缓，防止影响柜内气流。 4.6 安全柜应定期进行检测与保养，以保证其正常工作。工作中一旦发现安全柜工作异常，应立即停止工作，采取相应处理措施，并通知质量部经理。 4.7 检验完成后，关闭玻璃视窗，保持风机继续运转10min，同时打开紫外灯，照射30min。 4.8 安全柜应定期进行清洁消毒，可用75%酒精或0.2%新洁尔灭溶液擦拭工作台面及柜体外表面；每次检验工作完成后应全面消毒。 4.9 柜内使用的物品应在消毒缸消毒后再取出，以防止将标准菌株残留带出而污染环境，造成生物危害。 4.10 使用方法： 4.10.1 安全柜采用LED液晶面板控制，控制面板包括的功能键有：电源开关键、杀菌灯键、风挡键（快速、慢速、无风）、照明键。 4.10.2 插上220V交流电源后，按下控制面板上的所示电源开关开启即可使用；需要灭菌时，按灭菌灯键；风挡键有三级（快速、慢速、无风）循环，默认为无风，按一次为慢速，再按为快速，第三次则回到无风，如此循环；平时操作照明，只需按照明键即可。 5.设备的维护保养 5.1 每次检验操作后用75%的酒精（其他杀菌剂视用户使用的材料而定）彻底对安全柜内部工作区域表面、侧壁、后壁、窗户进行表面净化。切勿使用含有氯的杀菌剂，因为它可能对安全柜的不锈钢结构造成损坏。同时对紫外灯和电源输出口表面进行清洁。当清洁安全柜内部区域时，操作人员除了手放以外，身体的其他任何部位不能进入安全柜。 5.2 长时间未实验时也得每两周进行清洁维护，按5.1进行，定期清洁不锈钢表面会使之保持表面的光滑美观。 5.3 每月用湿布对安全柜外部表面进行擦拭，尤其是安全柜的前面和上部，把堆积的灰尘打扫干净。并检查所有的维护配件的合理使用情况。 5.4 根据实际情况，每个季度或者半年检查安全柜的任何物理异常或故障，如有异常及时报修；将初效过滤器拆下清洗，防止积尘将导致进风量不足，而降低洁净效果。 5.5 每年请具备资格的认证技术人员对安全柜进行性能认证，依据紫外灯使用寿命效果，进行紫外灯的更换；当正常调节或清洗初效空气过滤器后，仍达不到理想的截面风速时，则应调节风机的工作电压（旋动旋钮），从而达到理想的均匀风速（将调节风速旋钮从左向右，从低速向高速缓慢调节，新工作台不应调至最高风速）。 5.6 在使用十八个月后当风机工作电压调整至最高点时，仍不能达到理想风速时，则说明高效空气过滤器积尘过多（滤料上滤孔已基本被堵，要及时更新），一般高效空气过滤器的使用期限为十八个月；更换高效空气过滤器时，应注意型号规格尺寸（原生产厂家配置），按箭头风向装置，并注意过滤器的周边密封，绝对无渗漏现象发生。

通用反转录试剂盒(M-MLV)使用说明

通用反转录试剂盒(M-MLV)使用说明 货号：RP1105 规格：50T/100T 保存：-20℃保存，避免反复冻融，复检期为1年。 产品内容： 试剂盒组成50次100次 M-MLV(200U/μL)50μL50μL×2 5×M-MLV Buffer200μL400μL (10uM)100μL200μL Oligo(dT) 16 RNasin(40U/μL)25μL50μL dNTPs(10mM)50μL100μL O1mL1mL×2 RNase-free ddH 2 说明书1份1份 产品简介： 通用反转录试剂盒适用于各种RNA制品的反转录反应。它采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物用于后续的PCR扩增和分子克隆实验。 通用反转录试剂盒中配置的酶为进口的酶。RT酶采用进口的M-MLV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。通用反转录试剂盒可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。 操作步骤： 一、反转录反应 1、在冰浴的无RNase的离心管中加入如下反应成分：

1-5μg总RNA或50-500ng mRNA 2μL Oligo(dT) 或2pmole基因特异性引物 16 O至14.5μL 补RNase-free ddH 2 2、70℃保温5min后迅速在冰上冷却2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分： 4μL5×M-MLV Buffer 1μL dNTPs 0.5μL RNasin 1μL M-MLV 3、42℃温浴60min，如果是用随机引物，请先将离心管置25℃温浴10min，再42℃温浴60min。 4、95℃加热5min终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。 5、若用于后续PCR扩增,用RNase-free ddH2O将反应体系稀释到50μL，取2-5μL作为PCR 反应模板。 注意事项： 1、用于cDNA合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。 2、试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期12个月。 3、RNA样品要避免反复多次冻融，应使RNA在冰浴中处于融化状态。 相关试剂： PC2440Random PC2450Oligo T16 R1600DEPC处理水

1一步法荧光定量反转录PCR试剂盒

TUREscript One Step qRT-PCR Kit 使用说明书 包装量： 产品组成、储存、浓度： 储存：－20℃保存，有效期6个月。 制品说明：本制品是采用SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR 的专用试剂，用本制品进行Real Time qRT-PCR 可在同一反应管内连续进行。反应过程中无需打开管盖添加试剂并可对扩增产物进行 实时检测，避免了污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。非常适合于微量RNA 的检测。本 试剂盒包括最适合Real Time PCR的突变改造M-MuLV H Minus逆转录酶、热启动HotMaster Taq DNA聚合酶和RNasin抑制剂mix、同时包含适用于逆转录和PCR扩增的优化独特反应体系。本 酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性。 同时该酶提高了耐热性，可以在42-50℃反转录，提高了复杂二级结构，GC含量丰富模板反转录 效率。而采用优质热启动酶Hotmaster Taq DNA Polymerase可以最大限度的减少PCR扩增全程中 的非特异性扩增产物产生，大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。本制品可以在宽广的定量 区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。 适用范围：适用于高拷贝、低拷贝基因检测；部分高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板。 注意事项： ●当同时需要进行数次Real Time One Step qRT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master Mix；其中包括RNase-free ddH2O、Buffer、各种酶等），然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。 ●使用Enzyme Mix和TRUEscript RTase时，分取之前要小心地瞬间离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有高浓度的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。 ●2×qRT-PCR Mix内含Sybr Green I，保存或配制One Step qRT-PCR反应液时应避免强光照射。 ●为保证反应成功建议使用高质量的RNA模板。 ●不同的片段，所需最佳RNA模板用量不同，过多的RNA会抑制反应，建议根据反应调整模板用量。 ●只能使用特异性引物，不能使用Oligo(dT) 和Random Primer 进行反应。

Takara说明书

Code No. RR047A 研究用 PrimeScript TM RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) 说明书

目录 内容页码 ●制品说明1 ●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ●Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8

●制品说明 为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。 PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA 合成的全过程。 使用本制品合成的cDNA适用于SYBR? Green分析法和TaqMan?探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR?Premix Ex Taq II（Tli RNaseH Plus）、Premix Ex Taq（Probe qPCR）等定量试剂组合使用。注意：Takara Bio使用SYBR? Green I作为研究试剂已得到Molecular Probes Inc.的许可。SYBR?为Molecular Probes Inc.的注册商标。 ●制品内容（20 μl反应×100次） 1. gDNA Eraser 100 μl 2. 5×gDNA Eraser Buffer*1200 μl 3. PrimeScript RT Enzyme Mix I*2100 μl 4. 5×PrimeScript Buffer 2（for Real Time）*3400 μl 5. RT Primer Mix*4 400 μl 6. RNase Free dH2O 1 ml×2 7. EASY Dilution（for Real Time PCR）*5 1 ml *1：5×gDNA Eraser Buffer在反转录反应前使用，请务必进行基因组DNA的除去反应。 *2：含有RNase Inhibitor。 *3：含有dNTP Mixture。 *4：含有Oligo dT Primer和Random 6 mers。 *5：制作标准曲线时梯度稀释DNA或RNA标准品的稀释液。模板DNA或RNA如果用水或TE Buffer稀释时，由于受Microtube吸附作用等的影响，往往不能准确地进行稀释，导致实验结果精 度降低。使用本制品时，即使稀释至低浓度也能够进行准确地稀释，容易在宽广范围内获得准确定 量的标准曲线。本制品不影响反转录和PCR反应，用其稀释后的样品可直接使用。EASY Dilution 也可以单独购买（Code No.9160）。 注意：EASY Dilution请与本公司Real Time PCR试剂组合使用，对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。 ●试剂盒外必备材料 热循环仪（或37℃水浴，42℃水浴和85℃加热块） 反转录反应所用0.2 ml和1.5 ml的微量反应管 微量移液器和枪头（高压灭菌） ●保存：-20℃。

骨型碱性磷酸酶在骨肿瘤诊断中的价值

作者单位:100044北京大学人民医院检验科[葛艳玲(现工作单位100035北京积水潭医院检验科)] 通讯作者:张正,电子信箱:zhangzh4768@https://www.wendangku.net/doc/d212900056.html, ?临床实验诊断研究? 骨型碱性磷酸酶在骨肿瘤诊断中的价值 葛艳玲　张正 　【摘要】　目的　检测恶性骨肿瘤、良性骨肿瘤及转移性骨肿瘤患者血清中的总碱性磷酸酶 (T ALP)和骨型碱性磷酸酶(BALP)活性,以观察T ALP和BALP在骨肿瘤的鉴别诊断中的价值及在监 测恶性骨肿瘤治疗中的作用。方法　对2004年积水潭医院骨肿瘤科收治的40例恶性骨肿瘤、40例 良性骨肿瘤及14例转移性骨肿瘤患者,采用法国临床化学会推荐的速率法测定血清T ALP及酶联免 疫吸附(E L I S A)方法测定BALP水平。结果　恶性骨肿瘤组的T ALP活性为(325155±356136)U/L, BALP活性为(177119±240167)U/L,与同龄对照组T ALP(120170±70159)U/L,BALP(61130± 44145)U/L比较有统计学意义(P<0105)。转移性骨肿瘤组的T ALP(100114±35139)U/L,BALP (32193±15168)U/L,与同龄对照组T ALP(57164±11106)U/L,BALP(19192±7153)U/L比较有 显著性统计学意义(P<0101)。而良性骨肿瘤组与同龄对照组相比无统计学意义(P>0105)。同时 恶性骨肿瘤与其他两组比较也都有统计学意义(P<0101),并且恶性骨肿瘤组患者化疗前后的结果 也有统计学意义(P<0105)。结论　血清T ALP和BALP是反映骨肿瘤骨代谢的一个灵敏而简便的 生化指标,并对骨肿瘤的鉴别诊断及疗效观察具有一定的临床意义。作为骨肿瘤的检测指标,血清 BALP比T ALP更为特异和敏感。 【关键词】　碱性磷酸酶;　骨肿瘤 Appli ca ti on of bone2spec i f i c a lka li n e phospha t a se i n bone tu m or GE Yan2ling,ZHAN G Zheng1 D epart m ent of C linical L aboratory,B eijing U niversity Renm ing Hospital,B eijing100044,China(G E Yan2ling, D epart m ent of C linical L aboratory,B eijing J ishuitan Hospital,B eijing100035,China) Corresponding author:ZHAN G Zheng,Em ail:zhangzh4768@yahoo.co https://www.wendangku.net/doc/d212900056.html, 【Abstract】　O bjecti ve　To deter m ine the seru m levels of t otal alkaline phos phatase(T ALP)and bone2s pecific alkaline phos phatase(BALP)in patients with malignant bone tu mor,benign bone tu mor and malignant tu mor metastasized t o the bone and t o exp l ore the value of T ALP and BALP in identifing and diagnosing of bone tu mor,als o in monit oring the effect of therapy about malignant bone tu mor1M ethods　 Seru m T ALP and BALP in40malignant bone tu mor patients,40benign bone tu mor patients and14malignant tu mor metastasized t o the bone patients in2004were studied1Seru m T ALP was assayed by SF BC rate method and BALP by enzy me linked i m mu mo abs orbence assay(E L I S A)1Results　The seru m levels of T ALP and BALP were(325155±356136)U/L and(177119±240167)U/L res pectively in malignant bone tu mor gr oup were significantly higher than those of the sa me age contr ol gr oup(120170±70159)U/L and (61130±44145)U/L(P<0105)1The seru m levels of T ALP and BALP were(100114±35139)U/L and (32193±15168)U/L res pectively in malignant tu mor metastasized t o the bone gr oup were als o significantly higher than those of the sa me age contr ol gr oup(57164±11106)U/L and(19192±7153)U/L(P<0101) 1The seru m levels in benign bone tu mor gr oup were higher than those of the sa me age contr ol gr oup,but the t w o gr oup s have no significantly statistics(P>0105)1A t the sa me ti m e,the seru m levels in malignant bone tu mor gr oup were significantly higher than those of benign bone tu mor gr oup and malignant tu mor metastasized t o the bone gr oup(P<0101)1The seru m levels of T ALP and BALP in p re2therapy malignant bone tu mor gr oup were significantly higher than those of post2therapy(P<0105)1Conclusi on　Seru m T ALP and BALP were sensitive and convenient bi oche m ical indexs which reflected metabolis m of patients of bone tu mor1Moreover,they have clinical i m portance f or differential diagnosis and observati ons of therapy1 A s an index of bone tu mor,seru m BALP was more s pecific and sensitive than T ALP1 【Key words】　A lkaline phos phatase;　Bone tu mor 骨肿瘤虽不是常见病,但在骨科领域内占有重 要地位。骨肿瘤的诊断必须是临床、影像和病理三

骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比

骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比 目的对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果。方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测，记录患儿两种检测结果，给予统计学分析后得出结论。结果80例佝偻病患儿经不同方法检测后，骨源性碱性磷酸酶检测结果准确率高达97.50%，显著高于血钙检测准确率73.75%，对比结果具有统计学意义（P＜0.05）。结论骨源性碱性磷酸酶与血钙检测结果均可作为佝偻病诊断依据，但血钙误诊率较高，而骨源性碱性磷酸酶检测准确率较高，临床医生应根据患儿实际情况进行综合判断，从而提高患儿诊断正确率及治疗效果，保障其预后及生活质量。 标签：骨源性碱性磷酸酶；血钙；对比 佝偻病是威胁儿童身心健康的严重疾病，发病原因主要为机体中钙营养严重丢失，目前主要通过临床实验室及影像学检查诊断此类疾病。本文将对我院自2013年1月1日～12月31日前来就诊的80例佝偻病患儿给予临床研究，从而对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果，为提高佝偻病患儿检出率提供可靠依据，现总结如下。 1资料与方法 1.1一般资料80例佝偻病患儿中男童49例、女童31例，年龄1～6岁，平均年龄（ 2.98±1.02）岁。 1.2方法 1.2.1纳入与排除标准①经临床检查符合世界卫生组织（WHO）制定的佝偻病诊断标准；②无肝脏、肾脏、心脏等机体重要器官严重器质性疾病；③无胃肠道疾病、血液系统疾病、恶性肿瘤疾病、精神类疾病、免疫系统疾病、内分泌系统疾病；④体温正常，无骨折、强直性骨关节炎等疾病；⑤对本次研究具有知情权。 1.2.2研究方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测，记录患儿两种检测结果，给予统计学分析后得出结论。抽取患儿静脉末梢血液2ml作为检测样本，骨源性碱性磷酸酶检测方法为碘硝基四氮唑紫法，由北京中生金域诊断技术有限公司提供ZS0iso APNB试剂盒，以检测结果不大于200U/L为阴性，反之为阳性；血钙采用偶氮砷法检测，由深圳迈瑞公司提供BS-800生化分析仪及其配套试剂，以检测结果不小于1.55mmol/L为阴性，反之为阳性。 1.3统计学方法使用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析，计量资料采用t检验（由x±s表示），计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

碱性磷酸酶偏高的原因

碱性磷酸酶偏高的原因 当肝脏受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。[1] 碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因，具体讨论如下： 1、生理性原因儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期，这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃，所以检测时值会偏高。 2、病理性原因当人体患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起血清中的碱性磷酸酶偏高。 3、骨骼有病时，例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。 4、其他不是很常见的疾病，例如肾病、严重性贫血、甲状腺机能不全、白血病等[2]。 有何影响 心肌梗死、巨幼细胞性贫血及溶血性疾病后，首先要考虑恶性肿瘤。虽不是恶性肿瘤唯一的诊断，但确实对肿瘤诊断有重要的临床意义，最好做进一步检查，防患于未然。 糖的吸收途径：

小肠绒毛上皮细胞吸收小肠内葡萄糖的方式为二级主动运输。小肠内钠离子浓度高于小肠绒毛上皮细胞内的钠离子浓度，因而两者之间存在钠离子浓度差的梯度，通过该钠离子的浓度梯度差，葡萄糖和钠离子可以从小肠内通过离子通道进入小肠绒毛上皮细胞；随着钠离子的不断流入，造成钠离子浓度梯度逐渐减小，为了维持钠离子内外的浓度梯度差以便于吸收葡萄糖，此时，小肠绒毛上皮细胞内钠离子--钾离子泵打开，消耗ATP，使小肠绒毛上皮细胞内的钠离子流回小肠中，再次形成运输葡糖糖所需要的钠离子浓度梯度。依次循环。 食物中的淀粉经唾液中的α淀粉酶作用，催化淀粉中α-1，4-糖苷键的水解，产物是葡萄糖、麦芽糖、麦芽寡糖及糊精。由于食物在口腔中停留时间短，淀粉的主要消化部位在小肠。小肠中含有胰腺分泌的α淀粉酶，催化淀粉水解成麦芽糖、麦芽三糖、α糊精和少量葡萄糖。在小肠黏膜刷状缘上，含有α糊精酶，此酶催化α极限糊精的α-1，4-糖苷键及α-1，6-糖苷键水解，使α-糊精水解成葡萄糖；刷状缘上还有麦芽糖酶可将麦芽三糖及麦芽糖水解为葡萄糖。小肠黏膜还有蔗糖酶和乳糖酶，前者将蔗糖分解成葡萄糖和果糖，后者将乳糖分解成葡萄糖和半乳糖。 糖被消化成单糖后的主要吸收部位是小肠上段，己糖尤其是葡萄糖被小肠上皮细胞摄取是一个依赖Na+的耗能的主动摄取过程，有特定的载体参与：在小肠上皮细胞刷状缘上，存在着与细胞膜结合的Na+-葡萄糖联合转运体，当Na+经转运体顺浓度梯度进入小肠上皮细胞时，葡萄糖随Na+一起被移入细胞内，这时对葡萄糖而言是逆浓度梯度转运。这个过程的能量是由Na+的浓度梯度（化学势能）提供的，它足以将葡萄糖从低浓度转运到高浓度。当小肠上皮细胞内的葡萄糖浓度增高到一定程度，葡萄糖经小肠上皮细胞基底面单向葡萄糖转运体（unidirectional glucose transporter）顺浓度梯度被动扩散到血液中。小肠上皮细胞内增多的Na+通过钠钾泵(Na+-K+ ATP酶)，利用ATP提供的能量，从基底面被泵出小肠上皮细胞外,进入血液，从而降低小肠上皮细胞内Na+浓度，维持刷状缘两侧Na+的浓度梯度,使葡萄糖能不断地被转运。

RACE cDNA反转录说明书

RACE cDNA反转录说明书 1.准备cDNA合成反应液 2.0 ul 5×First-Strand Buffer 1.0 ul DTT (20uM) 1.0 ul dNTP Mix (10mM) 总共体积：4ul 2.准备以下试剂： 5’-RACE-cDNA: 1.0—2.75ul RNA, 1.0ul 5’-CDS Primer A 3’-RACE-cDNA: 1.0—3.75ul RNA, 1.0ul 5’-CDS Primer A Control-cDNA: 只需要1ul mouse heart total RNA（1ug/ul） 3.加入H2O于上一步反应液至5’-RACE为3.75ul，3’-RACE为 4.75ul，然后轻轻吸打混匀。 4.放入PCR仪反应：72℃3min, 42℃2min 然后14000g离心10s。 5.对于5’-RACE-cDNA的合成，加入1ul SMARTerⅡA oligo至4.75ul。 6.配混合液： 4.0ul Buffer mix from step 1 0.25ul RNase inhibitor (40U/ul) 1.0ul SMARTScribe reverse transcriptase (100U) 总体积：5.25ul 7.将第6步混合液加入第2步微离心管中，使总体积达到10ul。用枪轻轻吸打混匀。 8.42℃反应90min，然后70℃反应10min。 9.用Tricine-EDTA buffer稀释反应产物： 如果：起始RNA<200ng,加入20ul； 起始RNA>200ng,加入100ul； Poly A+ RNA，加入250ul。 10. 将稀释好的cDNA模板保存于-20℃，最长时间达3个月。

骨源性碱性磷酸酶在骨质疏松及类风湿性关节炎诊治中的意义

骨源性碱性磷酸酶在骨质疏松及类风湿性关节炎诊治中的意义 【摘要】目的：探讨血浆骨源性碱性磷酸酶(BAP)在骨质疏松及类风湿性关节炎（RA）诊治中的意义。方法：选择30例骨质疏松症和30例RA患者和30例健康体检者(对照组)，进行血浆BAP浓度水平测定，计算其血浆浓度并进行比较。结果：30例骨质疏松症患者与健康对照组及30例RA患者与健康对照组BAP 水平差异均有显著性意义（P<0.01），而30例骨质疏松症患者与30例RA 患者血浆BAP浓度比较，无显著性差异。结论：BAP在骨质疏松及RA患者诊断及治疗过程中有很好的临床指导意义。 【关键词】血清骨源性碱性磷酸酶；类风湿性关节炎；骨质疏松；诊断治疗。 骨质疏松和内风湿性关节炎（RA）是危害中老年人身体健康的常见病，都可造成患者骨关节骨质丢失和破坏，而且这两种疾病本身又有一定相关性，严重危害人类健康，而在其发生、发展过程中，患者大多存在不同程度骨代谢标志物骨源性碱性磷酸酶(BAP)水平的升高。现就我院2004年6月~2007年11月收治的30例骨质疏松症患者和30例RA患者BAP水平的测定情况，与同期在我院体检的30例健康人群做对比，以了解BAP在该类疾病中的临床应用价值。 1 材料与方法 1.1 对象：30例骨质疏松症患者和30例RA患者均系我院住院患者，年龄42~76岁，30例骨质疏松症患者中男14例，女16例，30例RA患者中男12例，女18例，以上病例均为确诊病例，（其中RA符合美国风湿病学院1987年制定的诊断标准；骨质疏松症经临床及放射线检查符合WHO1994年确立的诊断标准）。对照组：体检中筛选的健康人30例，年龄30~56岁，男15例，女15例。 1.2 方法：对所选病例组及健康对照组由专人负责采集空腹肘静脉血，按要求做BAP测定。标本检测使用美国Metra公司提供的试剂盒，将抗凝血以3 000 r/ min 离心15 min，取血浆检测。 1.3 统计方法：测定结果用均数±标准差表示，采用配对t 检验。 2 结果

反转录PCR-步骤和方法

反转录PCR 科技名词定义 中文名称：反转录PCR 英文名称：reverse transcription PCR;RT-PCR 定义：扩增mRNA的一种实验技术。先将mRNA反转录成cDNA，然后再以cDNA为模板，用 PCR方法加以扩增。 应用学科：遗传学（一级学科）；基因组学（二级学科） 以上内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 目录 一、反转录酶的选择 二、合成cDNA引物的选择 三、操作步骤 四、注意事项 RT-PCR反应原理 [1] 反转录PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）又称为逆转录PCR。其原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、

合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。 RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆转录PCR，是将RNA的逆转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增反应（PCR）相结合的技术。RT-PCR 技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞/组织中基因表达水平，细胞中RNA 病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列等。 编辑本段一、反转录酶的选择 1． Money 鼠白血病病毒（MMLV）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA 酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃。 2．禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适作用温度为42℃。 3．Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在Mn2 存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。 4．MMLV反转录酶的RNase H-突变体：商品名为SuperScript 和SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。 编辑本段二、合成cDNA引物的选择 1．随机六聚体引物：当特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的cDNA 中96%来源于rRNA。 2． Oligo(dT)：是一种对mRNA特异的方法。因绝大多数真核细胞mRNA 具有3’端Poly(A )尾，此引物与其配对，仅mRNA可被转录。由于 Poly(A )RNA仅占总RNA的1-4%，故此种引物合成的cDNA比随机六聚体作为引物和得到的cDNA在数量和复杂性方面均要小。 3．特异性引物：最特异的引发方法是用含目标RNA的互补序列的寡核苷酸作为引物，若PCR反应用二种特异性引物，第一条链的合成可由与mRNA 3’端最靠近的配对引物起始。用此类引物仅产生所需要的cDNA，导致更为特异的PCR扩增。 编辑本段三、操作步骤 1. 总RNA的提取。 2. cDNA第一链的合成（Reverse Transcription）：目前试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售，其原理基本相同，但操作步骤不一。现以

骨型碱性磷酸酶

骨型碱性磷酸酶的检测方法和临床应用 文章来源：医学网发表时间：2007-07-04 09:51:00 关键字：磷酸酶 碱性磷酸酶(ALP，EC3. 1.3.1)是在碱性条件下水解多种磷酸酯并具有转磷酸基作用的一组酶，包括由不同结构基因编码的小肠、胎盘、生殖细胞和非特异型4种同工酶。前三者基因定位于染色体重2q34-37的相邻位点，后者基因定位于染色体的1q36-34之间，其中非特异性型碱性磷酸酶在基因表达后经过不同的修饰形成肝、肾、骨等次级同工酶。对这些同工酶的理化性质、分子生物等特性、作用机制的深入研究以及准确的定量测定将有助于其在临床上的应用。本文拟就年来国际上常用的骨型碱性磷酸酶(BAP)研究方法及其在临床上的应用研究进展作一综述。 1骨型碱性磷酸酶的特性 骨型碱性磷酸酶是成骨细胞的一种细胞外酶，为糖蛋白，分子量约为12000道尔顿。该酶在细胞内合成时新生的酶蛋白先在内质网糖基化，再通过高尔基体转运到细胞膜表面，通过多糖链与磷酯酰肌醇相连嵌合到细胞膜的外浆膜。在多糖-肌醇磷酸特异水解酶的作用下，骨型碱性磷酸酶能被释放到血循环中。骨型碱性磷酸酶在机体的生理功用主要是在成骨过程中水解磷酸酯，为羟磷灰石的沉积提供必须的磷酸；同时，水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨过程。骨型碱性磷酸酶在体内的其他生化功用有待进一步的阐明。 2骨型碱性磷酸酶的检测

人血清中含有的碱性磷酸酶同工酶分别来自骨骼、肝脏、小肠和胎盘组织(在妊娠时)。胎盘型和小肠型碱性磷酸酶同工酶的活性能相对容易被区分，而区别骨型和肝型这两种同工酶活性就相当困难，因为这两种同工酶来源于同一基因，其动力学性质、电泳迁移率和其他理化性质均十分相似，且相互间有交叉免疫反应，目前鉴别和定量测定骨型碱性磷酸酶的方法可以分为两大类：电泳法和非电泳法。 电泳法主要利不同的同工酶之间物理性状、分子大小及荷电量的不同而进行。根据所用的支持特和操作的方法可分为：醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳和亲和电泳等。其中以等电聚焦电泳和亲和电泳的分辨效果较好。等电聚焦电泳分辨率高特别适合次级同工酶的分离。Sinaha等报告的一种固相pH梯度等电聚焦电泳以聚丙烯酰胺为载体，用两性电解质制成固定的pH梯度凝胶，避免了由于不稳定的pH梯度而引起的所谓“阴极漂移”现象。该法可将等电点准确到小数点后两位并把正常血清的10条酶带压缩在pH3.90～4.79范围。Rosalki等建立的亲和电泳法是利用麦胚植物血凝素(WGA)能特异地和骨型碱性磷酸酶结合形成WGA-骨型碱性磷酸酶复合物，该复合物在电场中不泳动或泳动很慢，从而将骨、肝型碱性磷酸酶清楚地分开。该方法简便，重复性好，骨型碱性磷酸酶的批内与批间CV分别为3.2％和5.2％。亲和电泳的分离效果与WGA的浓度有关，其最适浓度随电泳条件而异。因此，采用不同的电泳载体和不同的缓冲液时均应重新评价WGA的最适用量。