大学 细胞工程试题及答案

细胞模拟试题及答案

一、填空（每空一分，共25分）

1.实验室的物理防护是由隔离的设备、实验室的设计、实验实施等三个方面组成，根据其密封程度的不同，分为P1、P2、P3、P4四个生物安全等级。典型的P4实验室由更衣区、过滤区、缓冲区、消毒区、核心区组成。

2.细胞系是原代培养经初步纯化获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一细胞群体。

3.细胞株是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。

4.干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。干细胞的增殖特性为缓慢性和自稳性。

5.培养细胞的生长特点为贴附、接触抑制和密度抑制。

6.植物细胞培养的原理是基于动物细胞的全能性。

7.植物细胞悬浮培养的方法为分批培养法、连续培养法和半连续培养。

8.植物组织培养中培养材料的消毒过程中，消毒的基本原则是既要杀死附着其上的微生物又不损伤材料。

9.细胞生长测定的一般方法为：细胞计数、测定细胞密实体积、细胞鲜重或干重。

10.体外培养的细胞根据其生长方式主要分为贴附型细胞和非贴附型细胞。

11.人工种子的组分包括胚状体、人工胚乳和人工种皮。

12.细胞融合主要经过了两原生质体或细胞互相靠近、细胞桥形成、胞质渗透、细胞核融合几个步骤。其中细胞桥形成是最关键的一步。

13.花粉单倍体植株的鉴定方法有形态鉴定、细胞学鉴定、杂交鉴定、分子标记鉴定。

14.胚胎工程主要是对哺乳类动物的胚胎进行某种人为的工程技术操作，然后让它继续发育，获得人们所需要的成体动物。

15.人工诱导单倍体形成的方法包括：远缘杂交、延迟授粉、核置换、射线照射、花药培养等。

二、单项选择题（每题1分，共10分）

1.人参皂甙粉是人参中重要的药用成分，以前只能从人参中提取产量极低，因而价格昂

贵。目前人参皂甙粉可以通过下列哪项技术迅速大量获取（B）

A．基因工程B．植物组织培养

C．植物体细胞杂交D．发酵工程

2.下列有关动物细胞培养的叙述不正确的是（C）

A．通过动物细胞培养可获得大量的细胞分泌蛋白

B．动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理，以使细胞分散

C．细胞癌变都发生于原代培养过程中

D．目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内的，以保持其正常核型

3. 尽管各种合成培养基给动物细胞培养带来极大方便，但许多实验表明，单纯使用合成培养基细胞的贴壁增殖效果常常不理想。因此，在使用时通常仍然需要加入一定量的 (C) A．平衡盐溶液 B. 琼脂糖

C. 动物血清

D. 甘露醇

4.制备人工种子的关键是控制(A)

A.胚状体的同步发育

B.人工种皮的同步发育

C.胚状体的单独发育

D.人工种皮的单独发育

5.细胞融合中使用（C）方法可以在显微镜下直接定向诱导细胞融合。

A.仙台病毒法

B.PEG诱导

C.电融合诱导法

D.高Ca+和pH诱导法

6.中胚层来源的细胞在体外培养时一般表现为哪种形态（A）

A.成纤维细胞型细胞

B. 多形型细胞

C.上皮型细胞

D.游走型细胞

7.在每一代贴附生长细胞的生长过程中,哪一个时期的细胞数随时间变化成倍增长,活力最佳,最适合进行实验研究（D）

A.稳定期

B.衰亡期

C.潜伏期

D.对数生长期

8.以下哪种方法或技术适合进行动物细胞的大规模培养？（D）

A.悬滴培养法

B.培养瓶培养法

C.旋转管培养法

D.多孔载体培养技术

9.单克隆抗体制备选择亲本时应选择（A）

A.骨髓瘤细胞系和免疫动物属于同一品系

B.骨髓瘤细胞系和免疫动物属于不同品系

C.B淋巴细胞和骨髓瘤属细胞属于不同品系

D.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞无亲缘关系

10. 下列关于哺乳动物胚胎发育和胚胎工程的叙述，正确的是（D）

A．卵裂期胚胎中细胞数目和有机物总量在不断增加

B．胚胎分割时需将原肠胚的内细胞团均等分割

C．胚胎干细胞具有细胞核大、核仁小和蛋白质合成旺盛等特点

D．胚胎干细胞是一类未分化细胞，可从早期胚胎中分离获取

三、多项选择（每题3份，共15分）

1.由外植体或单个细胞形成愈伤组织一般要经过三个步骤（ABD）

A.启动期

B.生长期

C.分裂期

D.分化期

2.植物单细胞培养方法有（ABCD）

A.平板培养法

B.看护培养与饲养层培养法

C.液体浅层静置培养法

D.细胞悬浮培养法

3.动物细胞培养室，无论细胞种类和供体的年龄如何，在细胞的全生长过程中大致都要经过三个主要阶段（ABC）

A.原代培养期

B.传代期

C.衰退期

D.稳定期

4.干细胞从所具有的分化功能上分为（ABC）

A.单能干细胞

B.多能干细胞

C.全能干细胞

D.胚胎干细胞

5.动物多倍体育种的方法有（ABC）

A.温度休克法

B.水静压法

C.细胞松弛素B

D.秋水仙素

四、简答题(共35分)

1.二级生物安全适用于处理什么材料，具体要求有哪些（8分）

答：适用于：（1）来自于来自于灵长类动物的材料和细胞系

(2)接触过灵长类的病毒或被其转化了的细胞系

(3)含有支原体的细胞系。

要求：

（1）所有可能产生气溶胶的操作都应使用垂直层流生物安全小室；

（2）所有污染物都应放入装满蒸馏水的防漏的不锈钢桶中；

（3）大的塑料器皿盖紧后放入高压消毒袋中进行高压消毒；

（4）在处理或冲洗用过的器皿前，应先进行高压消毒；

（5）进行操作时要带乳胶手套。

2.原生质体分离的方法有哪些，各有何优缺点（6分）

答：（1）机械法

优点：可避免酶制剂对原生质体的破坏。

缺点：获得完整原生质体的数量少，使用此法的植物种类有限。

（2）酶解法

优点：可获得大量原生质体，条件温和，原生质体完整性好，几乎所有植物都可用此法。

缺点：影响原生质体的活力。

3.植物组织培养的基本步骤（6分）

答：（1）培养材料的采集

（2）培养材料的消毒

（3）制备外植体

（4）接种和培养

（5）根的诱导

（6）组织苗的练苗移栽

4.细胞系和细胞株的鉴定指标及方法（8分）

答：鉴定指标：（1）纯度：分析以何种细胞为主，所占比例为多少，混杂有哪些其他细胞。

（2）细胞生物学特征：细胞形态、结构、染色体组型、生长曲线、分裂指数、倍增时间是否与来源细胞一致。

（3）稳定性：传代过程中细胞学特征是否发生变化。

（4）污染情况：检查是否有微生物或其他细胞系的污染。

鉴定方法：细胞形态学观察；绘制生长曲线，计算分裂指数；染色体组型和带型分析；同工酶谱检测

4.植物细胞固定化的方法及特点

答：吸附法：利用固体吸附剂将细胞吸附在其表面而使细胞固定化的方法。

包埋法：将细胞包埋在多孔载体内部而制成固定化细胞的方法。

特点：（1）由于载体的保护作用，减小剪切力作用，提高细胞存活率和稳定性。

（2）细胞束缚在一定空间内，不易聚集成团，促进代谢产物的分散。

（3）可简便地在不同培养阶段更换不同的培养液。

（4）固定化植物细胞可连续反复使用，可缩短生产周期，提高生产效率。

（5）容易与培养液分离，有利于产品的分离纯化，提高产品的质量。

五、综合分析题（15分）

植物单细胞培养的程序及各步中应注意的事项

答：1.建立细胞株

（1）材料准备

a.确定植物种类品种

b.选择单细胞或愈伤组织或叶肉、下胚轴等

c.借助酶处理：酶的种类、浓度、处理时间都对材料有一定影响

（2）制备细胞悬浮液

a.培养基成分筛选

b.悬浮培养，振荡次数为80~90次/min

c.用200~300目钢网过滤盒离心沉降

2.选择细胞株

平板筛选

a.细胞起始密度（0.5-2.5）*105个/ml

b.固体薄层培养基

c.按目标反复进行测定

3.扩大培养（或分化培养）

（1）扩大培养（悬浮）

（2）分化培养（固体）

抗性分析（生化分析）

4.鉴定分析

（1）扩大培养：鉴定提取：多次重复测定（生化分析）

（2）分化培养：植株再生

鉴定遗传分析：抗性测定、生化分析、遗传分析