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电泳技术在生化分离领域的运用
ABC
（厦门大学化学工程与生物工程系，厦门361005）
摘要: 电泳技术，是指在电场作用下带电颗粒在由于所带的电荷不同以及分子大小差异而有不同的迁移行为从而彼此分离开来的一种实验技术。在生化分离领域，主要运用的电泳技术包括凝胶电泳，薄膜电泳，等电聚焦等。本文将着重介绍毛细管电泳和凝胶双向电泳的运用。
关键词: 双向凝胶电泳，毛细管电泳，生化分离
Applications of Electrophoresis in the Field of Biochemistry
Separation
ABC
(Department of Chemical and Biochemical Engineering, Xiamen Univeristy, Xiamen 361005,
China)
Abstract：Electrophoresis is a method basically used for separating macromolecules, such as nucleic acids or proteins, in terms of molecular sizes, electric charges, and other physical properties under applied electrical field. This paper introduces the development of the electrophoresis technique, discusses some important methods including gel electrophoresis, film electroprssis, isoelectric focusing and so on. The applications of the two-dimensional electrophoresis and the capillary electrophoresis are analyzed in detail.
Key words：Two-dimensional electrophoresis; capillary electrophoresis; biochemical separation
前言
许多生物分子都带有电荷，但由于混合物中各种组分所带电荷性质、电荷数量以及相对分子质量的不同，在同一电场的作用下，在一定时间内各组分移动的距离不同，从而达到分离鉴定各组分的目的，这是电泳的基本原理。从19世纪开始的电泳技术研究到现今电泳技术在生化分离领域的广泛运用，先后出现了胶体电泳，滤纸电泳，凝胶电泳，和目前广受重视的毛细管电泳等多种电泳技术。作为生化分离，分析的重要手段，电泳技术在稳定性，分辨率和保持产物活性方面已取得了巨大的进步，当然还存在着电泳结果不能直接分析，必须进行染色，而不同蛋白质与染料的结合差异较大，还不能广泛应用质谱技术、高敏感检测技术直接分析双向凝胶电泳结果，实现分析自动化等问题。本文介绍了电泳技术的原理，发展和现状，并着重分析了目前广泛运用和研究的毛细管电泳以及双向凝胶电泳，展望电泳技术将不断发展，日渐完善。
1.电泳技术的产生，发展与现状
已经有大量的相关文献对电泳技术的发展作过详细的描述[1]。
1809年俄国物理学家Рейсе首次发现电泳现象。他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极，加电压后发现正极玻璃管中原有的水层变混浊，即带负电荷的粘土颗粒向正极移动，这就是电泳现象。
1909年Michaelis首次将胶体离子在电场中的移动称为电泳。他用不同pH的溶液在U 形管中测定了转化酶和过氧化氢酶的电泳移动和等电点。
1937年瑞典Uppsala大学的Tiselius对电泳仪器作了改进，创造了Tiselius电泳仪，建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法，并首次证明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白组成的，由于Tiselius在电泳技术方面做出的开拓性贡献而获得了1948年的诺贝尔化学奖。
1948年Wieland和Fischer重新发展了以滤纸作为支持介质的电泳方法，对氨基酸的分离进行过研究。
从本世纪50年代起，特别是1950年Durrum用纸电泳进行了各种蛋白质的分离以后，开创了利用各种固体物质（如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉凝胶等）作为支持介质的区带电泳方法。
1959年Raymond和Weintraub利用人工合成的凝胶作为支持介质，创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳，极大地提高了电泳技术的分辨率，开创了近代电泳的新时代。30多年来，聚丙烯酰胺凝胶电泳仍是生物化学和分子生物学中对蛋白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍，分辨率最高的分析鉴定技术，是检验生化物质的最高纯度：即"电泳纯"（一维电泳一条带或二维电泳一个点）的标准分析鉴定方法，至今仍被人们称为是对生物大分子进行分析鉴定的最后、最准确的手段，即"Last Check"。
由80年代发展起来的新的毛细管电泳技术，是化学和生化分析鉴定技术的重要新发展，己受到人们的充分重视。
1．1 毛细管电泳的产生和发展
毛细管电泳技术（Capillary Electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳（HPCE）或毛细管分离法（CESM），毛细管电泳方法虽新工艺，但历史悠久，它是在电泳技术的基础上发展的一种分离技术[2]。电泳作为一种技术出现，已有近百年的历史，但真正被视为一种在生物化学中有重要意义的技术，是由1937年A. Tiselius 首先提出。传统电泳最大的局限是难以克服由高电压引起的焦耳热，1967年Hjerten最先提出在直径为3mm的毛细管中做自由溶液的区带电泳（Capillary Zone Electro-phoresis, CZE）。但他没有完全克服传统电泳的弊端。现在所说的毛细管电泳技术（CE）是由Jorgenson和Lukacs在1981年首先提出，他们使用了75mm的毛细管柱，用荧光检测器对多种组分实现了分离。1984年Terabe将胶束引入毛细管电泳，开创了毛细管电泳的重要分支：胶束电动毛细管色谱（MEKC）。1987年Hjerten等把传统的等电聚焦过程转移到毛细管内进行。同年，Cohen发表了毛细管凝胶电泳的工作。近年来，将液相色谱的固定相引入毛细管电泳中，又发展了电色谱，扩大了电泳的应用范围。
1．2双向凝胶电泳的产生和发展
双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1 000个E.coli蛋白，并表明蛋白质谱不是稳定的，而是随环境而变化。目前，随着技术的飞速发展，已能分离出10 000个斑点[3]。
2.电泳的基本原理
2. 1 电泳原理
电泳技术，是指在电场作用下，带电颗粒在由于所带的电荷不同以及分子大小差异而有不同的迁移行为从而彼此分离开来的一种实验技术。许多生物分子都带有电荷，其电荷的多少取决于分子结构及所在介质的pH值和组成。由于混合物中各种组分所带电荷性质、电荷数量以及相对分子质量的不同，在同一电场的作用下（如图1所示），各组分涌动的方向和速率也各异。因此，在一定时间内各组分移动的距离也不同，从而达到分离鉴定各组分的目的。
图1 电泳分离原理[4]
2. 2 电泳方法的分类
按分离原理，电泳分为如下四类[5]：（1）区带电泳：电泳过程中，不同的离子成分在均一的缓冲液体中分离成独立的区带，这是当前最广泛的电泳技术。(2) 移界电泳：是最早建立的电泳，它是在U型管中进行的，由于分离效果较差，已为其他电泳技术所取代。(3) 等速电泳：必需用电泳仪，当电泳达到平衡后，各区带相分成清晰的界面，并以等速移动。(4) 等电聚焦：由于具有不同等电点的两性电解质载体在电场中，自动形成pH梯度，使被分离物移动至各自等电点的pH处聚集形成很窄的区带，且分辨率较高。
按有无固体支持物分为自由电泳和支持物电泳[6]。前者包括（1）显微电泳（也称细胞电泳），是在显微镜下观察细胞或细菌的电泳行为；（2）移界电泳；（3）柱电泳(在层析柱中进行，可利用密度梯度的差別，使分离的区带不再混合，如再配合pH梯度则为等电聚焦柱电泳)；（4)自由流动幕电泳；（5)等速电泳。后者中支持物是多种多样的，也是目前应用最多的一种方法。其电泳过程可以是连续的或是不连续的可进行常压电泳、高压电泳、免疫电泳、等电聚焦电泳及等速电泳。根据支持物的特点又分为：1)无阻滯支持物，如滤纸、醋酸纤维薄膜、纤维素粉、淀粉、玻璃粉、凝胶颗粒等。2)高密度的凝胶，如淀粉凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂或琼脂糖凝胶。
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3．电泳技术的应用
电泳技术主要用于分离各种有机物（如氨基酸、多肽、蛋白质、脂类、核苷酸、核酸等）和无机盐；也可用于分析某种物质纯度，还可用于分子量的测定。电泳技术与其他分离技术（如层析法）结合，可用于蛋白质结构的分析，“指纹法”就是电泳法与层析法的结合产物。用免疫原理测试电泳结果，提高了对蛋白质的鉴别能力。电泳与酶学技术结合发现了同工酶，对于酶的催化和调节功能有了深入的了解。所以电泳技术是生化分离领域中的重要研究技术。
3. 1 电泳技术的常用方法
3. 1. 1 纸电泳和醋酸纤维薄膜电泳[7]
纸电泳用于血清蛋白质分离已有相当长的历史，在实验室和临床检验中都曾经广泛应用。自从1957年Kohn首先将醋酸纤维薄膜用作电泳支持物以来，纸电泳已被醋酸纤维薄膜电泳所取代。因为后者具有比纸电泳电渗小、分离速率快、分离清晰、血清用量少以及操作简单等优点。
醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象，又因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分由样品传导，所以分离速度快，电泳时间短，样品用量少。醋酸纤维素膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化有利于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存。
3. 1. 2 琼脂糖凝胶电泳[8]
琼脂经处理去除其中的果胶成分即为琼脂糖。由于琼脂糖中硫酸根含量较琼脂为少，电渗影响减弱，因而使分离效果显著提高。例如血清脂蛋白用琼脂凝胶电泳只能分出两条区带（α-脂蛋白、β-脂蛋白），而琼脂糖凝胶电泳可将血清脂蛋白分出三条区带（α-脂蛋白、前β-脂蛋白和β-脂蛋白）。所以琼脂糖为较理想的凝胶电泳的一种材料。琼脂糖凝胶孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，但适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸等应用较广。由于凝胶是透明的，因此可与免疫法技术结合进行免疫电泳和对流免疫电泳。
3. 1. 3 聚丙烯酰胺凝胶电泳[9]
聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)是一种人工合成的凝胶，具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小（1~100ug）、分辨率高等优点，并可通过控
制单体浓度或单体与交联剂的比例，聚合成不同孔径大小的凝胶，可用于蛋白质、核酸等分子大小不同的物质的分离、定性和定量分析，还可结合解离剂十二烷基硫酸钠（SDS），以测定蛋白质亚基的相对分子质量，是目前分离分子的最好方法。其分离是以物质的物理差异，分子大小和净电荷为基础的，即分离除了利用物质所带电位的差别外，还具有分子筛的特殊作用，这种性质为分开电泳率很相近的大分子提供了简单有效的方法，例如用它进行血清蛋白质分离时，可以分离出几十个区带，分辨率很高，其它电泳方法则通常只能分离出5～6
条区带。除此之外，多肽SDS- PA GE 和含尿素的多肽SDS- PA GE都是很好的分离小分子质量多肽(5～20 ku) 的电泳方法。
3. 1. 4 等电聚焦电泳技术（IEF）[10]
等电聚焦是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。
在等电聚焦的电泳中，具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极，pH值逐渐增大。如前所述，蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征，这样在碱性区域蛋白质分子带负电荷向阳极移动，直至某一pH位点时失去电荷而停止移动，此处介质的pH恰好等于聚焦蛋白质分子的等电点（pl）。同理，位于酸性区域的蛋白质分子带正电荷向阴极移动，直到它们的等电点上聚焦为止。可见在该方法中，等电点是蛋白质组分的特性量度，将等电点不同的蛋白质混合物加入有pH梯度的凝胶介质中，在电场内经过一定时间后，各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH位置上，形成分离的蛋白质区带。
3. 2 最新电泳技术在蛋白质分离中的运用
3. 2. 1 双向凝胶电泳技术[11]
随着后基因组时代的到来，对许多生物体的研究已经进入蛋白质组学研究阶段。蛋白质组(proteome) 是指由一个细胞或一个组织的基因组所表达的全部相应的蛋白质，1994 年由澳大利亚学者Wilkins 和Williams 首次提出。蛋白组研究的手段主要是高通量双向电泳
（2DE）进行蛋白质的分离，再由专业计算机软件进行图像分析，然后通过质谱技术及蛋白质数据信息处理技术对凝胶上的蛋白质进行分离和鉴定。其中一个关键步骤就是细胞或样品中蛋白质的分离，目前最佳的方法就是2DE。传统的单向电泳方法最多只能分析100种蛋白质样品，而一块典型的2DE胶大约能分离2000个蛋白点，最好的大约能分离10000多个蛋白点。
1975 年，O’ Farrel首先建立了等电聚焦/ SDS - 聚丙烯酰胺双向凝胶电泳( IEF/ SDS
-PAGE) 分离和分析蛋白质组分的技术[12]。这一技术应用两个不同分离原理依据蛋白质的特性进行分离。第一相依据蛋白质所带电荷量的不同，用等电点( PI) 聚焦技术分离蛋白质。在此方法中引入固定p H 梯度技术( IPG) 可以实现等电点仅有0. 01 pH 单位差别的蛋白质的分离。从而大大提高了分析的灵敏度。第二相是依据蛋白质分子量大小的差别，通过蛋白质与SDS 形成复合物后，在聚丙烯酰胺凝胶电泳中迁移速率不同达到分离蛋白质的目的。虽然O ’Farrel 于1975 年就采用蛋白双向电泳法进行蛋白质的分离及检验，但当时采用两性电解质载体(carrier ampholyte) 聚丙烯酰胺凝胶电泳法，从而限制了蛋白双向电泳的稳定性及可靠性. 随着近来技术的进步与更新，蛋白双向电泳在不同方面得到改进与完善. 尤其是固定pH梯度胶( immobilized pH gradient) 概念的出现，采用固定于塑料支撑条上的固定pH 梯度胶代替过去的两性电解质载体毛细管胶进行蛋白等电聚焦。这大大地提高了蛋白等电聚焦的分辨率与稳定性。
根据第一向等电聚焦条件的不同，可将2 - DE 分为三种方法：第一种方法是在丙烯酰胺胶中进行，两性电解质在外加电场作用下形成pH 梯度，该方法称为ISO- DALT。其主要
缺点pH梯度不稳定，上样量低，重复性差，不利于不同实验室间进行图谱比较。如果第一向电泳使烯酰胺和固相化的两性电解质immobilines(商品名)共聚，可形成具有pH 梯度的凝胶，这种方法IPG- DALT 系统，是现在主要和常用的方法。该方法的优势表现在：1)pH 梯度稳定，聚焦确，精度高，梯度分辨率可以达到0. 001pH，目前在一块胶上最多可分离10300 多个点；2) 无阴极漂移及碱性蛋白丢失的现象；3) 蛋白上样量大，可以提高低丰度成分的分辨效果；4) 样品中盐的干扰少，无边缘效应；5)pH 梯度和分离结果的重复性好。第三种方法是非平衡pH 梯度电泳( nonequilibrium pH gradient electrophoresis , NEPhGE) ，主要用于碱性蛋白的分离。鉴于分辨率、重复性的限制和IPG - DAL T分离碱性蛋白的优势，NEPhGE 电泳已不是分离碱性蛋白的优选方法[12]。
蛋白质点染色最好采用自动凝胶染色仪编制程序进行染色，它使染色各个操作步骤的时间、温度、染色盘的振荡控制有较高的可控性和重复性，进而使2DE 胶染色有较好的可比性，便于后续的2DE 胶分析。但由于自动凝胶染色盘中溶液的体积受限制，对于较厚和较大的凝胶洗涤不彻底，致使染色背景较深，这时最好采用大染色盘，保证需要比较的凝胶在同一条件下染色。染色后，使用高分辨率的扫描仪，对电泳后的湿胶直接扫描，可避免干燥保存后固缩造成的波纹对凝胶图像分析的影响。
随着超灵敏度质谱技术的发展，发现双向凝胶电泳并不能将所有蛋白质完全分离，许多斑点仍为两个或更多蛋白的混合物。此外，在其应用中仍然存在很多局限：(1) 样品上样量小，使蛋白检测的灵敏度受到限制，(2) 电泳结果须经染色处理，不能直接分析。并且不同蛋白质与染料的结合差异较大，(3) 分子量过大( > 100000) ，过小( < 10000) 不适于此法分离检测，(4) 一些疏水性膜蛋白(常常是很多药物作用的靶点) 因不能溶于提取溶剂而不适合上样于凝胶电泳，(5) 目前，尚不能实现完全自动化处理，(6) 实验结果表明当蛋白质的拷贝数低于1000时，双向电泳技术是不能分辨出来的。为了分析低拷贝蛋白质，必须简化样品的处理步骤，减少蛋白质的流失。可应用超声组织粉碎仪，超速离心机等措施，提高蛋白质的提取量[13]。
3. 2. 2 毛细管电泳( CE) 技术
毛细管电泳是目前广泛应用的高效分离分析技术，CE 与高效液相色谱(HPLC) 一样同是液相分离技术，很大程度上CE与HPLC 互为补充，但无论从效率、速度、用量和成本来说，CE 都显示了它的优势。CE 没有泵输运系统，成本相对要低，且可通过改变操作模式和缓冲液成分，根据不同的分子性质(如大小、电荷数、手征性、疏水性等) 对极广泛的物质进行有效分离，相比之下，为达到相同目的，HPLC 要用价格昂贵的柱子和溶剂。毛细管电泳的主要优点有[13]：①极高的分离性能，其每米的理论塔板数为几十万到100 万以上，远高于离子色谱。②超微量进样，其进样量为纳升级。③快速简便。毛细管区带电泳适用于小离子的测定，其峰容量是离子色谱法的10 倍，如可在30 s 内完成对样品中硝酸根和亚硝酸根的测定。毛细管电泳仪的结构及操作也比离子色谱简单。④试剂消耗少，维持费用低，对环境污染少。相对于离子色谱，其所用毛细管的价格远低于色谱柱。
EC应用于蛋白质组的研究，主要包括[14]：（1）毛细管区带电泳(CZE) ，主要依据不同蛋白质的电荷质量比差异实现分离。CZE可以实现阴阳离子的同时分离，但对中性组分无分离效果。（2）毛细管等电聚焦(C IEF) 用两性电解质在毛细管内建立pH 梯度，使各种不同等电点的蛋白质在电场作用下迁移到等电点的位置，形成一条非常窄的聚焦区带。可用于测定蛋白质的等电点，分离异构体和其他方法难以分离的蛋白质。分离效果与双向凝胶电泳结果相关性良好。（3）筛板（SDS – CE）依据SDS - 蛋白质复合物在网状骨架中迁移速率的不同实现分离。CE 对蛋白质的分离与双相凝胶电泳比较，可以实现在线自动分析，并可用于分子量范围不适于双相凝胶电泳的样品分析。缺点在于复杂样品的分离尚不完全。（4）
毛细管电色谱(CEC)[14]是将HPLC 发展起来的众多固定相填充到毛细管中或涂敷在毛细管壁上，使之如同色谱固定相一样参与分离。可以说CEC 是CE 与HPLC 的有机结合，既有CE 的高柱效，又有HPLC 的高选择性，利用涂层还可有效减少生物大分子如蛋白分子在毛细管壁的吸附，改善峰形，提高选择性，是一种很有发展前景的模式。（5）胶束电动毛细管色谱（MECC）是在电泳缓冲液中加入离子型表面活性剂!如十二烷基硫酸钠（SDS）.当溶液中表面活性剂浓度超过临界胶束浓度时，表面活性剂分子之间的疏水基团聚集在一起形成胶束假固定相，通过分离对象在胶束相和水相之间的分配系数不同而实现分离。胶束电动毛细管色谱的突出优点是不仅能分析离子化合物，还能分析不带电荷的中性化合物，把电泳分离的对象从离子化合物扩展到中性化合物，从而拓宽了毛细管电泳的应用范围。（6）为了满足大批量样品的分离要求，特别是在人类基因组和蛋白组计划中的应用，毛细管阵列电泳(CAE) 的分离模式渐渐呈现出了广阔的应用发展前景和趋势。与传统聚丙烯酰胺凝胶板电泳可以进行多道平行分析相似，毛细管阵列电泳即是采用多根毛细管组成的阵列进行多道分析的一种分离模式。
随着芯片技术的发展，电泳芯片尤其引起了人们的关注，毛细管电泳的分析模式几乎都可能转移到芯片平台。Li 等[12]已经成功地将电泳芯片与质谱联用分离检测蛋白质水解产物。他们把CE 芯片与纳电喷雾质谱联用，建立一套chip2CEPQqTOF MS 系统用来分析痕量膜蛋白。样品处理简单，只需一维电泳分离，水解成肽段后直接进样，分离时间不到1. 5 min。毛细管电动色谱芯片也已被提出，用于多肽的分离。
作为DNA测序最重要的、在蛋白质分析中也广泛应用的检测器—激光诱导荧光(LIF)
检测，发展尤其迅速。一系列新的荧光标记试剂不断研究出来，柱前标记、在柱标记及柱后标记等多种标记方法也逐步成熟。
虽然毛细管电泳有很多优点，但其缺点也是明显的。毛细管电泳法检测目标物质的原理是同一缓冲液中不同离子运动速率的差异，这是不同离子在同一缓冲液中形成不同离子区带的基础。同样，由于不同离子运动速率的差异，其形成的区带的宽度不同，单位体积缓冲液中离子的数量不同，造成了先期到达的离子区带“紧实”，峰形尖削，而后面到达的离子形成的区带不明显，单位体积缓冲液中离子的数量小，因此当这种“松散”区带经过检测窗口时需要的时间长，峰矮而胖，与基线的界限不明显，造成待测物质的检测不准确甚至困难。该技术运用于细胞和细胞组分分析领域还存在许多难点[15]，如：缓冲液的选择对细胞颗粒电泳时候完整性的影响；如何保证每次细胞进样量的恒定；不同细胞中同一成分的含量不同对单细胞分析是否有影响，如何选择对照的指标等等，都值得进一步探讨。毛细管电泳今后发展方向仍是继续提高分辨率、速度和检测器的选择性。同时，增加自动进样装置和使之微机化、商品化。另外，将它与质谱仪更好地结合，可对生物分子特性作出更快、更准确的分析，以进一步拓宽毛细管电泳在生物领域的应用范围。
3．3其它电泳技术在生化分离领域的运用
3．3．1等速电泳法检测无机和有机阴离子[16]
毛细管电泳法可同时分离检测多种阴离子，具有高效，快速等特点。等速电泳法也可以同时分离检测多种阴离子也有其优点；（1）区带界面有“自身校正”效应，两个区带界面清晰，因此等速电泳法有较高的分辨率；（2）对低含量样品，等速电泳法具有自富集效应，监测限较低；（3）易与其它技术联用。
3．3．2 介体电泳技术[16]
介体电泳技术(preparative electrophoresis) 是生物纯化技术的一个革命，它将电泳分离技术的原理与膜过滤分离技术的原理的相结合，利用分子的大小和其所带电荷的性质不同，对复杂的生物溶液进行纯化、浓缩和盐析。澳大利亚著名科学家Joel Margolis ，即第一块梯度
电泳胶的构思者，根据介体电泳技术原理发明了Gradiflow仪，经过10 多年的研制和改进后，于1998年开始进入市场。介体电泳技术的优越性具体体现在：①减少了生物活性物质的降解，纯化条件温和，无强酸强碱、强电解质溶液，无高压，可在适宜的温度下操作；②纯化费用低，操作容易，Gradiflow仪无需柱子、电泳胶，无需高压、梯度处理和冷冻室，且仪器设备的价格低廉；③产量高，纯化时间短，纯化速度可达80 gPh；④纯化的同时可进行浓缩和脱盐，所以适用于未经加工的原溶液；⑤因每次更换新的分离膜片，无交叉污染；⑥Gradiflow仪在纯化的同时可以除去病毒、细菌和内毒素等病原体。
3．3．2单细胞凝胶电泳(SCGE) [15]
单细胞凝胶电泳(SCGE)又称彗星试验(comet assay) ，是由Ostling等于1984年首次提出，并利用该技术在中性条件下检测γ射线引起的DNA双链断裂。1997年，Santos 等首次将SCGE 技术与DNA荧光原位杂交技术(FISH) 结合起来，为SCGE 技术的应用开辟了新的途径。我国朱志良博士率先在国内建立了彗星2荧光原位杂交技术体系，并利用该技术体系发现人9 号染色体是苯代谢产物的靶染色体。2001 年，Nadin 等建立了SCGE 银染法，进一步提高了损伤DNA分析的灵敏度。其原理是：包埋在琼脂糖凝胶中的细胞经裂解和解螺旋，使断裂的DNA碎片进入凝胶，在电场作用下，带负电荷的DNA断片向阳极迁移，形成彗星影像。由于该方法具有敏感、简便、快速、低耗等优点，广泛应用于遗传毒理、环境监测、临床、饮食以及氧化应激和细胞凋亡的研究。
4．展望
运用电泳技术解决生化分离中的各种难题，已取得重大进展，双向凝胶电泳和毛细管电泳更是近年来研究的重点，但是要应用于实际领域，还有很多问题尚待解决。就当前进展来看，今后的研究主要集中在以下两个方面：(1) 质谱技术、高敏感检测技术直接分析双向凝胶电泳结果，实现分析自动化。当前，各种自动化电泳分析仪（如美国Helena 公司PEP/SPIEF 全自动电泳系统，法国Sebia 公司Hydrasys 全自动电泳技术等）多采用半干技术，检测灵敏度高，特异性强，重复性好，仅需1～2h就可获得清晰结果，且胶片干后可保存，目前还在推广中。(2) 以CE、HPLC - MS - MS 技术取代传统双向凝胶电泳，实现上样、分离、分析的完全自动化。因此，随着电泳技术的不断深入研究，其在生化分离过程的运用将日臻完善。
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[11] E. Bertakis, I. Lemonis, S. Katsoufis, E. V outsas, R. Dohrn, K. Magoulas, D. Tassios, Measurement and thermodynamic modeling of solid-liquid-gas equilibrium of some organic compounds in the presence of CO2, Journal of Supercritical Fluids, 41 (2007) 238-245.
[12] J. Li, Particle formation techniques using supercritical fluids, Recent patents on Chemical Engineering, 1 (2008) 157-169.
[13] K. V ezzu, A. Bertucco, F.P. Lucien, Solid-liquid equilibria of multicomponent lipid mixtures under CO2 pressure: Measurement and thermodynamic modeling, AIChE Journal, 54 (2008) 2487-2494. [14] X. Wang, H. Chen, Y.N. Guo, Y.Z. Su, H.T. Wang, J. Li, Preparation of ibuprofen/lipid composite microparticles by supercritical fluid technique, Frontiers of chemical engineering in China, 2 (2008) 361-367.
[15] J.D. Hong, H. Chen, J. Li, H.A. Matos, E.G. de Azevedo, Calculation of solid-liquid-gas equilibrium for binary systems containing CO2, Industrial & Engineering Chemistry Research, 48 (2009) 4579-4585.
[16] J.D. Hong, D. Hua, X. Wang, H.T. Wang, J. Li, Solid-Liquid-Gas Equilibrium of the Ternaries Ibuprofen+myristic Acid+CO2 and Ibuprofen+Tripalmitin+CO2, Journal of Chemical and Engineering Data, 55 (2009) 297-302.
附：摘要翻译（
文翻译）
英文摘要来源于参考文献[11]：E. Bertakis, I. Lemonis, S. Katsoufis, E. V outsas, R. Dohrn, K. Magoulas, D. Tassios, Measurement and thermodynamic modeling of solid-liquid-gas equilibrium of some organic compounds in the presence of CO2, Journal of Supercritical Fluids, 41 (2007) 238-245.
Abstract
Rapid analysis of nitrate and nitrite by capillary electrophoresis (CE) has been limited by the ions’ very similar electrophoretic mobilities. With a p K a of 3.15, the mobility of nitrite can be selectively reduced using a low pH buffer in CE. A much shorter capillary can be used and separation voltages can be increased. With this method, nitrate and nitrite are separated in just over 10 s. This is roughly 20 times faster than current separation methods. Direct UV detection at 214 nm was employed and offered sub μM detection limits. Total analysis time (pre-rinse,
injection, and separation) was less than 1 min, making this method ideal for high-throughput analysis.
摘要：毛细电泳技术快速分析硝酸和亚硝酸盐受限于硝酸和亚硝酸根离子的相近的电泳迁移率。当对毛细电泳技术应用低pH值缓冲液时(p K a= 3.15)，亚硝酸根离子可以选择性地降低其迁移率。这样，可以方便地使用短的毛细管并使用较高的分离电压。用该方法，硝酸和亚硝酸盐可以在约10秒可以得到分离，这比目前使用的分离方法差不多快20倍。分析时，可以直接用UV检测器于214纳米处进行检测，其检测限为亚微米。该方法总分析时间小于1min（包括预洗、注射和分离）。因此该方法是一种快速分析的理想方法。
教育毕业论文自考学前教育论文范文
自考学前教育论文范文 随着教学事业的不断发展和进步，我国对学前教学质量越来越重视，接下来搜集了自考学前教育论文范文，欢迎查看，希望帮助到大家。 关键词：继续教育；自考学生；管理 一、继续教育自考学生管理模式存在的问题 （一）自考学生日常管理欠缺。 自考学生考试科目的通过率高低直接决定了继续教育学院自考学生报考数，所以一些高校继续教育学院为了提高学生报考率，追求办学规模，学生管理也紧盯自考学生考试。 部分高校继续教育学院的教学管理也剑走偏锋，不以提高学生的学习能力和知识水平为目的，而是到处组织教师猜题、押题，组织进行集中复习，对于学生的日常课堂管理和教学效果不加过问。学生的到课率和自学效果不再是继续教育学院管理的重点。学生是否到课，教师是否按照自考学生培养目标进行了授课，学生的学习能力和综合素质是否得到了提高，都被部分继续教育学院忽略。 自考学生的文凭仅仅是一种学习经历的证明，不能作为自考学生的能力证明，自考学生在就业、工作实践过程中，无法发挥自己所学的知识，甚至有些自考学生仅仅是为了应付考试而参加自考，自身能力根本没有提高，从长远角度来看，继续教育学院不重视自考学生日常管理的行为无异于杀鸡取卵。 （二）管理制度不到位。
相对于全日制学生而言，从国家到学校都有一套严密的法律法规和管理制度进行约束。但是，同样作为学生，自考学生的管理制度就严重欠缺，很多继续教育学院对自考学生的管理制度没有系统性的全面的规定。部分继续教育学院自考学生管理沿用全日制学生的管理模式，这样无法有的放矢，做到有效管理自考学生。 （三）自考学生管理机构不健全。 目前，高校的全日制学生管理机构都很完善，有教务部门、学生管理部门、招生就业部门、团委、各个二级学院等等管理机构，从学生的日常管理到跟踪服务，都有一套完善的管理机构，并且管理人员都是有着高学历、高素质的人才，对全日制学生的学习和生活都有着很大程度的指引作用。 继续教育学院办学本身就具有不确定性，自考学生的规模也不具有长期稳定性，所以继续教育学院的学生管理机构也不够健全，有临时设立的，有些机构人员是返聘退休人员，有些机构人员甚至是临时聘请，工作人员责任心与全日制学生管理人员的不可相提并论。 这样直接影响到自考学生的学习和生活，让自考学生没有归属感和存在感，对学习的兴趣也随之递减。 （四）自考学生评介模式不科学。 学生管理的一个重要环节就是对学生的评介。对于自考学生而言，考试通过率是一个重要的评介指标，但绝对不能是唯一的指标。
毕业论文任务书范文参考
毕业论文任务书范文参考 论文(设计)题目浅谈藏文编码国际标准的产生对西藏文化发展的影响 学生姓名xxx院系、专业xxxx院 xxxx专业指导教师xxx 选题目的和意义：少数民族语言文字及其所承载的民族文化是中华民族大家庭文化的重要组成部分，同时又与世界民族文化有着千丝万缕的联系。面对各民族间政治、经济和文化交流日趋密切的社会发展现实，面对开放的世界，少数民族语言文字信息化，特别是跨境民族语言文字信息化对提高我国国际地位，扩大国际影响力有不可忽视的积极作用。少数民族语言信息化理论的研究、少数民族语言的资源与信息处理技术的开发和利用等工作，关系到少数民族语言政策的贯彻和落实，关系到少数民族语言文字的学习、使用和发展，关系到少数民族语言文字信息技术的科学化，关系到民族文化兴衰，促进各民族共同繁荣与发展，并涉及国家稳定与安全以及国际影响的重要社会问题。因此，加速少数民族语言文字信息化进程，具有重要的社会意义和科学意义。 本课题在国内外的研究状况及发展趋势： 从网络检索的资料看，藏文编码的国家标准和国际标准于20世纪90年代初开始正式启动实施。通过西藏自治区和国内相关研究机构和大专院校专家们精诚合作和艰辛努力，
最终使藏文编码字符集国际标准成为我国少数民族文字中的第一个国际标准。藏文编码方案在传统藏文字素的认知和计算机字符代码处理上做到了合理的继承和创新，体现了藏文应用开发的本土化和国际化的有机结合。藏文编码标准在各种藏文信息处理领域的正式启用，将带动藏语文在信息技术发展和国际化交流方面发挥更加广泛和积极的社会作用，推动藏语文的使用和发展上一个新的台阶，为少数民族地区的物质文明建设和精神文明建设服务。 主要研究内容： 藏文编码国际标准研制提案的研究制定工作主要涉及4个方面的内容;即字汇、字序、字符名称及相关规则的制定。字汇就是要确定收字的范围，字序就是要确定字符的编码及其位置，字符名称就是要给出每个字符标准的、明确的名称，相关规则就是要给出一系列用于技术实现的规则。 进度安排 xx-11-19--xx-11-22 确定论文题目、填写任务书 xx-11-23--xx-11-30 毕业设计(论文)任务书及进度表 xx-12-01--xx-12-20 查找资料、写出论文大纲 xx-12-21--xx-03-31 完成系统总体设计 xx-04-01--xx-04-15 完善系统，并完成初稿 xx-04-16--xx-04-25 第二次稿交给老师批阅. xx-04-26--xx-05-03 完成论文终稿交老师批阅
乡镇企业专业毕业论文(范文)1
毕业设计(论文)评审表 题目_______________________________ ________________________________ 姓名_________ 教育层次__________ 学号_________ 专业___________ 分校__________ 教学点____________ 指导教师___________
浙江广播电视大学制 指 导 教 师 评语指导教师（签名） 年月日 市 级电大初审意见 专业责任教师（签名）： 年月日初审意见： (盖章) 年月日 省电大终 审意见 (盖章) 年月日初评成绩： 论文（设计）成绩： 论文(设计)成绩： 论文（设计）成绩：
台州社区大学直属学院 “一村一”农民大学生 乡镇企业管理（专业）专科调查报告 题目：关于台州市黄岩凌峰纸箱厂薪酬管理的调查报告分析 学生姓名 学号 指导教师 专业乡镇企业管理 年级 2010 学校台州电大 二○一二年五月
目录（注：三号黑体居中，中间空四个字）（空两行，以下小四宋体，行距20磅） 一、 （一） （二） 二、 （一） （二） 三、
（空一行） 如：关于完善黄岩凌峰纸箱厂薪酬管理体系的调查报告 （注：三号、黑体、加粗、居中） （空一行） （小四黑体）调查目的：通过调查，了解凌峰纸箱厂员工心理以及薪酬管理存在的漏洞，并加以解决。 调查时间：2011年10月10日 调查地点：黄岩区北城街道办事处长塘村工业区822号 调查对象：台州市黄岩凌峰纸箱厂全体员工 调查方式：问卷调查、访谈 经过与方法：通过现实状况、突出问题等基本情况了解，进而提出主要观点来； 如：关于黔东南州乡镇企业集聚区调查研究报告 调查目的：…… 调查时间：…… 调查地点：…… 调查对象：…… 调查方式：…… （正文篇幅要求不少于4000字）（正文行间距为20磅。段落开头空2字） 根据黔乡企局通〔2007〕52号文件《关于进一步开展乡镇企业集聚发展调查研究工作的通知》精神，为进一步加强对产业集聚发展工作的研究和指导，按照省局和州政府关于突出抓好城镇型工业，以工业化带动城镇化发展，壮大县域经济实力，努力增加城乡人民经济收入，促进城乡各项事业和谐发展，我局抽调专人对全州乡镇企业集聚区开展一次摸底调查，现将调研情况汇报如下： 一、黔东南州乡镇企业集聚发展的基本概况（一级标题，四号黑体，左起空2字，下同） （二级及以下标题小四黑体，左起空2个字。下同）
自考本科毕业论文基本格式规范
自考本科毕业论文基本格式规范 一、论文题目：居中；使用小二号黑体字，加粗。 二、内容摘要：居左，这四个字使用四号宋体字加粗，起行空两格，后加冒 号与内容隔开。内容使用小四号宋体字，字数在250—300字之间，回行顶格。 三、关键词：居左，这三个字使用四号宋体字加粗，起行空两格，后加冒号 与关键词隔开。关键词内容使用小四号宋体字，各关键词之间用逗号隔开。 关键词一般从论文题目中找3—8个。 四、正文内容：使用小四号宋体字，重点文句加粗。全文起行空两格，回行 顶格。 1、标题层次。 毕业论文的全部标题层次应整齐清晰，相同的层次应采用统一的表示体例，正文中各级标题下的内容应同各自的标题对应，不应有与标题无关的内容。 各层标题均单独占行，起行空两格，回行顶格。第一级标题居左放置； 第二、三、四等级标题序数顶格放置，后空一格接标题内容，末尾不加标点。 正文中对总项包括的分项采用一、二………1、2……(1)、（2）……①、②…… 的层次,括号后不再加其他标点. 2、标点符号。 标点符号应按照国家新闻出版署公布的“标点符号使用方法”的统一规定正确使用，忌误用和含糊混乱。 五、注释：采用页末注释（将注文放在加注页的页脚）或篇末注（将全部注 文集中在文章末尾），不可行中加注。注释编号选用带圈阿位伯数字，注文使用小四号宋体字。 以下为引用各类文献注释格式： 专著：注释编号.作者.专著.书名(M).出版社,出版年.起止页码 期刊：注释编号．作者．期刊．题名（Ｊ）．刊名，出版年（卷、期）：起
止页码 论文集：注释编号．作者．论文名称：论文集名（Ｃ）．出版地：出版社，出版年度．起止页码；互联网：注释编号．责任者．文献题名．电子文献网址．访问时间（年－月－日） 文献作者３名以内的全部列出；３名以上则列出前３名，后加＂等＂六、参考文献：这四个字居左顶格放置，使用四号宋体字，加粗。内容使用小四号宋体字，居左空两格放置。需要有10篇以上所查阅的文献。 七、论文打印与装订：论文一律采用电脑A4纸双面打印，要有前封面和底封面（底封面为空白页），封面不加页码，正文页末居中标注页码，从第1页开始；其他方面采用电脑默认设置。 装订形式为：封面+目录+正文（正文包含：中文摘要+主要内容+页末注释+参考文献） 1、页面设置： 毕业论文要求纵向打印，页边距的要求为： 上（T）：2.5cm；下（B）: 2.5cm 左（L）: 2.5cm；右（R）: 2.5cm 装订线（T）: 0.5cm；装订线位置（T）：左 其余采取系统默认设置。 2、排式与用字 文字图形一律从左至右横写排。文字一律通栏编辑。论文除特定要求外，一律采用宋体，字迹清楚整齐，除特殊需要外，一般不使用繁体字。 3、段落设置 采用多倍行距，行距设置值为：1.25，其余采取系统默认设置 4、页眉、页脚设置 论文题目居中；使用小二号黑体字，加粗。页脚需设置页码，采用小五号宋体字，加粗，居中放置，格式如：1，2，3…页 八、论文封面内容：考生只把个人信息填写清楚即可。评语、指导老师栏不需填写。
大专化工毕业论文范文
大专化工毕业论文范文 一：在工业设计领域应用系统论的思考 摘要：随着全球经济一体化，工业设计越发现示其重要的行业价值，设计师必须以更 开阔和创新的设计思路去迎接市场挑战。本文分析了系统论的概念、基本思想，通过对系 统设计对工业设计领域的应用实践进行介绍和探究，阐释了系统设计方法在设计过程运用 中的重要性。 关键词：系统;系统论;工业设计;应用 所谓系统，就是相互联系、相互制约的若干个有序元素的集合。系统论是以系统整体 的观点来分析和解决问题的科学方法论，已被广泛地用于科学技术各个领域，工业设计也 不例外，系统论为设计师提供了全面考察和分析解决设计问题的理论依据及分析方法。 1系统论的概念和思维方法 系统一词最早源于古希腊语，即部分构成整体。早在古代，人们在认识和改造自然社 会的过程中，已经萌发了各种各样的对世界进行整体性认识的系统观点和思想，这些观点、思想经过总结、整理和加工上升到了理论化、系统化的层面。现代系统论的基本思想是由 奥地利生物学家贝塔朗菲首先提出的。[1]他将系统定义为相互作用着的若干要素的复合体，一般系统理论是研究系统中整体和部分、结构和功能、系统和环境等等之间的相互联系、相互作用。贝塔朗菲的思想之所以具有里程碑的意义，并不仅仅是因为它的多样化学 科性质，更重要的是以一种整合之力的深刻洞察的思想，启发着后人用整体的理念来看待 世界及解决问题。系统设计的基本思想就是把所研究和处理的对象当作一个系统，分析系 统的功能、结构及研究系统、要素、环境三者之间的互动关系，以实现系统的最优化。[2]系统论是一种思维模式，为我们提供解决设计问题的理论依据，并作为探寻设计方法的指 导方向。 2系统论在工业设计的应用与发展 科特勒和拉思是这样评价设计的“：设计师通过对主要设计要素的创造性应用，来寻 求消费者满意度和公司盈利最大化的过程。”商业模式的变化往往要求设计也要有及时的 响应。[3]工业设计作为一个系统工程的设计，其涉及的领域也在不断地演化和扩充，下 文就是系统论设计方法在工业设计领域应用的研究总结。 2.1产品系统设计 系统论早期在工业设计的应用就是如何使产品系列化、模块化，既满足市场多样化的 需求又能批量化生产。在系统论的基本思想指导下，乌尔姆在早期的设计过程中，尝试将 系统设计分为两种基本的方式：一种是以一个主件为基础，依据用户自身的需求配置部件;第二种是系统单元的组合，单元本身已具有独立的功能，但可以通过增加更多的单元将系 统扩展为更有效的系统。这种模块化、系统化的产品系统设计思想成为设计史上非常重要
自考论文的致谢范文
自考论文的致谢范文 每一个人的任何阶段的成长中，总有一些人陪着走过。无论他们在学习、生活中给予的哪怕是微小的指导，那也是值得感恩与永远怀念的!值此学位论文完成之际，我谨向在学习和生活中给予过我帮助的老师和同学们给予最由衷、最真挚的感谢! 本文是在我的导师韦娟老师的悉心指导下完成。韦老师治学态度严谨、学识渊博、经验丰富。在做科研时，认真尽责，具有不断创新的精神，使我在两年半的学习过程中受益匪浅。老师对我的悉心指导与帮助，加深了我对科研内容的理解，对我解决科研难题起着指导性的作用。其次，韦老师对人特别温和，对待我们学生像自己的孩子一般，在生活中时刻关心我们，让我觉得特别温暖。借此，谨向韦老师表示衷心的感谢和崇高的敬意。 由于项目需要，xx 年 1 月至 9 月期间，我一直在西北工业大学做项目。在那边，由宁方立老师负责指导我的科研。宁老师对我们要求很严格，我们的项目虽然也会遇到问题，但宁老师都会和我们一起探讨研究，所以，问题会很快解决。 在这 9 个月的时间，我感受了西北工业大学不同于西安电子科技大学的教学理念，也感受了宁老师认真负责，耐心指导学生，与学
生共同进退的精神。这对我走出学校，进入工作岗位，如何更好地做好自己工作有了很大的影响。在此，对宁老师表示衷心的感谢。 在科研教室学习期间，感谢 337 教室所有同学对我的帮助，我们每天一起吃饭，晚上一起回宿舍，周末有时一起出去玩。本科期间，和班上同学交集不多，但实验室的同学，却陪着我一起经历科研难题，一起解决生活中的困难。谢谢，曾经有你们的陪伴。在此，还要感谢西北工业大学 B913 的所有同学，虽然仅相处了 9 个月的时间，但每天在他们学校吃饭得用他们的饭卡，其实特别麻烦，他们却一点也没抱怨。遇到科研问题，帮助我一起解决。心情不好，他们会和我聊天安慰我。谢谢 B913 的兄弟们，我会永远记得你们。 感谢我的父母和家人，谢谢他们在我求学生涯中一直支持与鼓励我，永远是我最坚强的后盾。 感谢国家自然科学基金面上项目“基于压缩感知联合稀疏重构的起落架气动噪声源分析研究”(批准号：51375385)对本论文工作的资助。 最后衷心的感谢正在评阅论文和参加答辩评审的各位老师们! 谢谢你们的帮助!!!
本科毕业论文范文格式(最新篇)
本科毕业论文文格式参考 本科毕业论文文格式参考 、注释、参考文献、附录、致等。本科毕业论文字数文科类不少于8000字，理科类不少于6000字，外语、艺术类不少于5000字。 一、毕业论文撰写的容要求 标题 毕业论文的标题应简短、明确、有概括性，使读者大致了解论文的容、专业特点和学科畴。标题字数要适当，不宜超过20字，必要时可加副标题。 摘要与关键词 1.摘要 中文摘要标题为摘要，英文摘要标题为 Abstrat 。中文摘要执行GB 6447标准，字数在300字左右，英文摘要在250个实词左右，撰写具体要求为： ①摘要应具有独立性和自含性，即不阅读正文，就能从摘要中获得必要的信息; ②摘要应用第三人称的方法记述论文的性质和主题，不使用、作者等作为主语，应采用对进行了研究、报告了现状、进行了调查等表达方式; ③摘要应突出论文的创造性成果和新见解，不要表述本学科领域常识性的容;
④摘要书写要合乎逻辑关系，同正文的文体保持一致; ⑤结构要严谨，表达要简明，语义要确切，一般不分段; ⑥对某些缩略语、简称、代号等，首次出现时必须加以说明; ⑦摘要常不用图表、化学结构式以及非公知公用的符号和术语。 关键词 关键词的选取执行GBT3860标准，以3 5个为宜，必须反映出论文所属学科和论文的基本信息。中文关键词前加关键词三字、英文关键词前加 Ke ords 作为标识。 正文 一般包括前言、本论、结论三个部分。 1.前言部分： 是论文的开头部分，主要说明论文写作的目的、现实意义、对研究问题的认识，并提出论文的中心论点等。前言要简明扼要，概括性、准确性强。 本论部分： 是毕业论文的主体，包括研究、论述的容、实验材料、实验结果与分析等，要反映出作者的科研能力和学术水平。 3.结论部分： 是毕业论文的收尾部分，是围绕本论所作的结束语，旨在总结全文，加深题意。 注释
大学生毕业论文范文大全
大学生毕业论文范文大全
图书分 类号： 密 级： 毕业论文企业财务风险分析与防范 班级08财务管理1班学号 学生姓名陶禹竹 学院名称管理学院 专业名称财务管理 指导教师李佰阳
徐州工程学院毕业论文 2011年12月1日
徐州工程学院毕业论文 徐州工程学院学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用或参考的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标注。 本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名：日期：年月日 徐州工程学院学位论文版权协议书 本人完全了解徐州工程学院关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：本校学生在学习期间所完成的学位论文的知识产权归徐州工程学院所拥有。徐州工程学院有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的纸本复印件和电子文档拷贝，允许论文被查阅和借阅。徐州工程学院可以公布学位论文的全部或部分内容，可以将本学位论文的全部或部分内容提交至各类数据库进行发布和检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 论文作者签名：导师签名： 日期：年月日日期：年月日
徐州工程学院毕业论文 摘要 随着时代进入21世纪，企业面临的风险随着新经济环境的变化向更广范围、更深层次的方向发展，在企业发展的同时企业财务风险管理愈来愈成为企业财务管理的核心问题。财务风险是企业面临的一种风险，而财务风险的控制就是企业在识别、评估和分析的基础上，充分预见、有效控制财务风险，通过对财务风险的风险研究，找出风险成因，从而采取相应的预防策略或建立预警体系，用最经济的方法把财务风险可能导致的不利后果减少到最低限度的管理方法。本文针对加强企业财务风险管理进行论述，在系统分析财务风险的本质及我国企业财务风险成因的基础上，建立我国企业的财务预警指标，进行适当的财务风险决策，以期为财务风险管理及防范提供参考。 随着现代市场经济的建立，市场环境瞬息万变，各种不确定性影响因素日益增多，企业财务风险问题显得越来越复杂多变。因此，加强财务风险管理已经成为各层次管理者密切关注的问题。资企业财务风险预测研究的需求日益迫切。急需建立有效的财务预警系统来预测、预控和处理财务风险。以期降低风险，提高效益，实现预期财务收益。 关键词财务风险；风险分析；风险防范；财务危机。
化工毕业论文范文
化工毕业论文范文 一：防护桥梁钢筋锈蚀中化学工程的作用 1锈蚀现象及其原因 1气候因素我国领土幅员辽阔，沿海省市有十多个，这些省市受到较强的季风气候影响，自南向北依次划分为热带季风气候、亚热带季风气候、温带季风气候。不仅如此，由 于我国大部分沿海地区都处于中纬度地带，气候文化，因此在春冬两季其冷暖空气的交替 活动较为活跃，尤其是在夏季梅雨之后，此类地区往往会有较长时间的伏旱天气，秋冬两 季也会出现连续阴雨的气候与天气，这类天气将会对防护桥梁钢筋产生极为不良的影响， 造成防护桥梁钢筋锈蚀。 2钢筋锈蚀的工艺因素分析 ①混凝土密实度不足混凝土孔隙率高是导致混凝土密实度不足的主要原因，桥梁一般 处于较为潮湿的环境当中，如果混凝土密实度较低，那么在空气中存在的大量氧气、水分、二氧化碳必然会通过混凝土空隙深入到混凝土内部，降低混凝土碱性，从而使得钢筋锈蚀 问题的出现。 ②保护层较薄桥梁钢筋保护层厚度不够，一旦混凝土在外界因素影响下发生碳化，那 么必然会深入到钢筋范围内，使得钢筋碱性大量丢失，不利于钢筋保护作用的保持，锈蚀 问题也更加容易出现。 ③钢筋保护层遭到破坏一般而言，在混凝土的搅拌、浇筑、施工及养护过程当中，表 层存在问题的现象屡见不鲜，如裂缝、开裂、掉角、露筋等问题，如果这些问题得不到恰 当处理，钢筋处于外界环境下，在水分、氧气、二氧化碳等因素的共同影响与作用下，防 护桥梁钢筋锈拙问题势必会难以控制。 2桥梁结构钢筋锈蚀的预防和修复 2.1预防混凝土钢筋锈蚀 1混凝土材抖的选择在某种程度上来说，化学工程在防护桥梁钢筋锈拙的作用上主要 体现在混凝土材料选择上。通常，混凝土材料的劣化能与耐破坏能力是决定混凝土结构刚 度与强度的重要指标，因此如何正确选用水泥品种对于保证工程质量非常关键，同时正确 选用混凝土也是进行成本控制的关键点。另外，在混凝土材料的选用上，其粗细材料选择 也要以前你重视，由于集料反应很容易导致混凝土结构出现问题，因此混凝土材料的选择 必须要严加筛选与控制。除此之外，混凝土骨料、砂石在选择上也要尽量确保其质量合格、技术指标达标，科学、正确选用方能够让混凝土结构耐久性得到提升。值得一提的是，混 凝土拌合、用水、级配、养护、外加剂也至关重要，就混凝土外加剂来看，它本身应用就 较为广泛，当前混凝土外加剂品种有百余种，不同的外加剂适用于不同的混凝土材料，因 此是否能够合理选择外加剂，将会直接影响到钢筋防锈的水平与质量。
自考毕业论文范文
自考毕业论文范文 毕业论文范文一：中小企业融资问题研究 摘要 中小企业是企业规模形式的概念，是相对于同行业的大企业在包括企业的组织形式、融资方式、所处行业地位、雇员人数、实收资本、资产总值等都比较小的经济单位。中小企业发展对经济增长的贡献是随着改革开放进程的不断深化而逐渐凸显出来的。特别是在20世纪90年代以后，中小企业日益成为推动我国整个经济高速增长的主要力量。在中小企业不断发展壮大的同时矛盾与困难也逐渐显现。中小企业融资难问题已经成为制约中小企业经营发展的主要瓶颈之一。本文采用了历史分析法和社会调查法对中小企业融资问题现状、原因做出了分析，提出了启动民间投资、促进经济发展的积极建议。 关键词：中小企业融资渠道企业经营 2 Abstract The small and medium-sized enterprise is the concept of enterprise scale form, is compared with the same industry in large enterprises including corporate forms of organization, financing way, the status of the industry, the number of employees, the paid-in capital, total assets are relatively small economic units. The development of small and medium-sized enterprises with the continuous deepening of reform and opening-up process and gradually highlighted the contribution to economic growth. Especially after the nineteen ninties, small and medium enterprises is increasingly becoming the main force to promote the rapid economic growth in china. In the development of small and medium-sized enterprises at the same time contradictions and difficulties are gradually. The difficult problem of financing of SMEs has become one of the main bottlenecks restricting the development of small and medium-sized enterprises. This paper uses the method of historical analysis and social investigation situation, the financing of small and medium-sized enterprises reasons to make analysis, put forward the suggestions of private investment, to promote economic development. key words: minor enterprises financing channel enterprise operation 3 目录 1我国中小企业的融资现状. (6)
毕业论文参考范文讲解
莆田学院 毕业论文 论文题目： 学院： 专业年级： 学号： 姓名： 指导教师、职称：
目录 摘要 (1) 1引言 (1) 2高速公路建设的发展现状 (2) 2.1高速公路建设的现状 (2) 2.2高速公路建设的发展趋势 (3) 3福建省几种主要运输方式的现状与特点分析 (3) 3.1公路运输 (4) 3.1.1公路运输的优点 (4) 3.1.2公路运输存在的主要问题 (4) 3.2铁路运输 (5) 3.2.1铁路运输的优点 (5) 3.2.2铁路运输存在的主要问题 (5) 3.3水路运输 (6) 3.4航空运输 (6) 4高速公路建设的快速发展对我省物流业的影响 (7) 4.1对物流业运输成本的影响 (8) 4.2对公路物流业运输量和运输结构比例的影响 (9) 4.3 对公路物流业运输速度的影响 (10) 4.4 对公路物流业运输效率的影响 (10) 5结束语 (11) 参考文献 (11)
高速公路的快速发展对我省物流业的影响 摘要：近年来我省高速公路发展很快，里程数已突破千里，而且建成“四小时交 通经济圈”，大大加强了全省各地市各项经济和社会活动的往来，对各地的经济发 展有很大的促进作用。其中物流业是一个新兴产业，高速公路的发展势必对物流 业产生影响，基于对我省几种主要运输方式的调查结果，进而研究高速公路对物 流业各方面因素的影响，报告了我省物流业的发展现状，探讨了在高速公路快速 发展的趋势下，物流运输的发展状况，肯定了高速公路对物流运输的推动作用， 为明确我省物流业的发展方向提供有利的依据。 关键词：高速公路物流运输成本运输量运输效率运输速度 1 引言 随着我国改革开放的进一步深入，中国加入WTO的实现，随着世界经济一体化进程的加快，中国经济的发展已与世界经济的兴衰不可分割。在世界与中国经济的发展过程中，交通运输担当着不可或缺的角色，如果离开了交通运输，经济如何发展不可想象。我省属沿海省份，在五种主要的运输方式中，对我省经济发展产生重要影响的当属道路运输和水路运输。随着高速公路建设投资的加大，以及高速公路通车里程的延长，道路运输在我省经济发展中的地位愈显重要。 2 高速公路建设的发展现状 2.1 高速公路建设的现状 1997年12月15日，泉州至厦门高速公路建成通车，实现我省高速公路零的突破，该线路是全国“五纵七横”公路主骨架中沿海大通道同江至三亚的组成部分，是国家“八五”跨“九五”期间的重点工程项目，也是福建省第一条高速公路。泉厦高速公路起于泉州市的西福，经沉洲、牛山、朴里、仑头、后安、田厝，止于厦门市的官林头。它北与即将通车的福泉高速公路相连，南与已建成通车的厦漳高速公路相接，主线全长81.9km，路基宽度26m，双向四车道，设计行车速度120km/h。泉厦高速公路也是我省第一条利用世界银
2020年企业管理毕业论文范文
企业管理毕业论文范文 战略成本管理是企业经营战略的一个核心组成部分,是以企业经营战略目标为目标,并加以具体化。合理调整企业结构和分配企业的全部资源是企业经营战略的内容之一;成本是资源的耗费,控制成本、降低资源的耗费,也是企业经营战略的内容及目标。经营战略中,这二体系就构成了战略成本管理。随着企业经营环境的急剧变化,战略管理已经被提高到日益重要的地位。战略成本管理完善了现代成本管理的体系,为成本管理提供了新的思路与方法,相比传统成本管理具有很强的优越性。 一、战略成本管理的内涵和特点 1、战略成本管理的涵义。战略成本管理是指管理会计人员提供企业本身及竞争对手的分析资料,帮助管理者形成和评价企业战略,从而创造竞争优势,以达到企业有效地适应外部环境持续变化的目的。它是在传统成本管理系统的基础上,按照战略管理的要求而发展起来的新的成本管理系统。由于不同国家、地区的文化背景不同,经济发展程度不一样,对战略成本管理内涵的表述也不尽相同,但其实质都是将成本管理会计信息贯穿于战略管理循环,通过战略性成本信息的提供、分析和利用,帮助企业管理者形成和评价企业战略,促进企业竞争优势的形成和成本持续降低环境的建立,从而达到有效地适应企业外部环境变化的目的。
战略成本管理的提出是基于战略管理的需要,当企业管理伴随竞争环境的变化进入战略管理新阶段,传统的成本管理也应该向战略成本管理转变,将成本管理置于战略管理的广阔空间,从战略高度对企业及其关联企业的成本行为和成本结构进行分析,为战略管理服务。战略成本管理的首要任务就是关注成本战略空间、过程、业绩,通过对企业成本结构、成本行为的全面了解、控制与改善,寻求长久的竞争优势。可以说,战略成本管理的核心是成本优势。 2、战略成本管理的特点。(1)长期性。战略成本管理以企业长期发展战略作为管理基础,它立足于企业长远的战略目标,是为取得长期、持久的竞争优势而实施的。所以,战略成本管理超过了一个会计期间的界限,分析了较长时期竞争地位的变化,争取到较长时期的竞争优势,并随着企业长期发展战略的改变而改变。(2)外延性。战略成本管理将注意力更多地投向于企业的外部环境,将成本管理外延向前延伸到采购环节,乃至研究开发与设计环节,向后还必须考虑售后服务环节,把企业成本管理纳入整个市场环境中予以全面考察,通过正确分析和判断企业所处的环境,根据企业自身的特点确定和实施正确适当的管理战略。(3)全局性。战略成本管理是全方位的成本管理方式。它需要对企业经营活动进行全面的价值链分析,不仅注重产品生产阶段,同时也关注产品生命周期中的其他阶段;同时,它也将供应商、顾客方面的成本纳入管理视野,做到人尽其责、物尽其力、才尽
南京师范大学自考论文写作格式及要求(模板)
`（请耐心地读完此文，否则，论文稿很可能问题百出、错误百出；同时将此信保留，以便撰写论文期间随时核对时间安排 ．．．．。） ．．．．和论文格式 考生：你好！ 现将论文撰写的时间安排、撰写格式规定如下： 一．撰写时间安排：（I、II、III时段都可以提前完成） I.2013年8月1日之前：（邮寄或发送电子邮件）提交论文提纲 II.2013年9月20日之前：（邮寄）提交论文初稿（初稿必须严格按照论文模版的格式撰写，务必电脑打印、装订、存盘、自留电子及文字底稿） III.2013年10月10日之前：（邮寄）提交论文终稿（终稿必须电脑打印、装订成册（沿左边）、一式三份，也必须严格按照论文模版的格式撰写。） IV.2013年10月中旬：外国语学院成人教育办公室寄发论文答辩时间通知 V.2013年10月下旬或11月上旬：按照答辩通知时间到南师大外国语学院参加毕业论文答辩 VI.指导教师的联系方式为： 南京宁海路122号南京师范大学外国语学院ⅹⅹ老师收邮编：210097 VII.论文严禁抄袭。如有抄袭，一经查实，按作弊处理。 VIII.请各位同学严格按照要求撰写论文及按时提交，否则将不安排答辩。 祝各位同学论文撰写顺利！ 以下为论文撰写格式，请严格执行！ 二．论文纸张大小：A 4 （210 x 297毫米）；字号：小四；字体：Times New Roman；行间距：1.5倍。 三．提纲（Outline）格式如下：
Outline 论文标题：__________________________________ Thesis statement（中心论点句）：_____________________________ __________________________________________________. 1 Introduction（序号一律以阿拉伯数字表示） 1.1 ##################################################################### 1.1.1 ################################################################ 1.1.2 ################################################################# 1.2 ################################################################# 1.2.1 ################################################################# 1.2.2 ################################################################# 2 ########################################################################## 2.1 ########################################################################## 2.1.1 ################################################################### 2.1.2 ################################################################### 2.2 ############################################################################ 2.2.1 ################################################################### 2.2.2 ################################################################## 2.3 ############################################################################ 2.3.1 #################################################################### 2.3.2 #################################################################### 3 ############################################################################# 3.1 ########################################################################## 3.1.1 ################################################################### 3.1.2 ################################################################### 3.2 ############################################################################ 3.2.1 ################################################################### 3.2.2 ################################################################## 3.3 ############################################################################ 3.3.1 #################################################################### 3.3.2 #################################################################### 4 ########################################################################## 4.1 ########################################################################## 4.1.1 ################################################################### 4.1.2 ################################################################### 4.2 ############################################################################ 4.2.1 ################################################################### 4.2.2 ##################################################################
化工工艺毕业论文范文
化工工艺毕业论文范文 1当下的发展水平 下面我们来具体的分析一下：第一，生产的效率低下。就我国来看，我国的工业生产存在一个盲区，重点就在于生产的效率较低。 在化学工程的研究的过程中，生产技术首先没有达到预期的效果， 环境污染的现象依旧没有被制止。举个例子来说，在进行的化学生 产的实验的过程中，材料的运用做不到理想的反应，反应现象达不 到预计的效果。在这一系列的生产实验的过程中，事实上，环境污 染的现象已经在悄然的发生了，化学实验所产生的残留物、化学实 验败北过程中所造成的化学污染。实验过程造成了资源浪费的现象 十分的严重，经济浪费更是不在话下，极大的降低了生产的效率水平。另一方面，实验没有达到预期的效果，化学产品的使用效率低下，根本不能够满足人们的生活所需。第二，化学工程的生产过程，给环境造成了较大程度的影响。化学污染在当下我国的环境污染的 比重中占了较大成分。重工业，尤其是金属工业所产生的污染现象 尤为严重。在对水资源的检测的过程中发现，废弃水中的金属含量 严格的超过了安全性能的指标。水资源的污染，也会对地下的土质 产生影响，而土质又会影响农业的产值，这样看来，化学生产所造 成的污染现象是严重的。另外，在工业生产的过程中，废弃水的直 接排放，给自然环境同样造成了污染。第三，化学工程的不连贯性，很容易生产的间断性，从而影响生产的进度，尤其是当它发生了不 合理的间断的时候，很快就会对整个生产的过程产生影响。由此看来，生产效率的低下、生产过程中产生的污染以及生产的不合理的 间断等等这一系列的问题，都在阻碍着化学工程的发展和进步。 2我国化工生产工艺解析 从上文中，对于我国目前的化工生产过程中，存在着主要的问题就在于我国的化工生产工艺还不是非常完善。针对这些存在的问题，化学的生产工艺需要有哪些改进呢?在化工生产过程中，采取哪些最 新的化学生产工艺能够降低化学生产所产生的污染呢?第一，化学生
自考英语毕业论文范文
2012级华南理工大学自考本科英语毕业论文 高等教育自学考试 毕业论文 Bronte sisters in the literary history 毕业学校：华南理工大学 办学单位：广东XX职业技术学院 班级：英语10级 学生：钟 X X 指导老师：曹老师 提交日期：2012年9月30日 华南理工大学高等教育自学考试 二○一二年六月
附表4华南理工大学高等教育自学考试 毕业设计（论文）任务书 注：1．毕业设计（论文）任务书由指导教师填写，由指导教师签发，经毕业设计（论文）指导小组组长审核后生效。 2．“课题来源”一栏： A．指导教师的科研课题； B．指导教师收集的科研和生产实际中的课题； C．学生在科学活动和工程实践中自立的课题； D．自拟课题。 在表中相应栏内打“√”。
华南理工大学自考办制表 附表5 华南理工大学高等教育自学考试 毕业设计（论文）水平指导教师审阅评语书 注：平时成绩评定依据：1、出勤、纪律、协作精神；2、独立工作能力；3、工作勤奋及刻苦精神； 4、独立思考与主动性； 5、外文资料翻译情况（本科）。
Abstract The Bront?s were a nineteenth-century literary family associated with the village of Haworth in the West Riding of Yorkshire, England. The sisters, Charlotte (born 21 April 1816), Emily (born 30 July 1818), and Anne (born 17 January 1820), are well known as poets and novelists. They originally published their poems and novels under masculine pseudonyms, following the custom of the times practised by female writers. Their stories immediately attracted attention, although not always the best, for their passion and originality. Charlotte's Jane Eyre was the first to know success, while Emily's Wuthering Heights, Anne's The Tenant of Wildfell Hall and other works were later to be accepted as masterpieces of literature. Key words: Bronte Sister, novel, literature