基因工程题库以及答案
一、填空题
1．基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
2．基因工程的两个基本特点是：(1)____________，(2)___________。
3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。
4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。
5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。
6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。
7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。
8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。
9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)____________；(2)________________的活性。
10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。
11．EGTA是____________离子螯合剂。
12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。
15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有____________的作用，可以将DNA-
RNA杂种双链中的___________水解掉。
16．基因工程中有3种主要类型的载体：_______________、_____________、______________。17．就克隆一个基因(DN***段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
18．一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测
不出质粒，这种现象叫。
19．pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于，它的四环素抗性基因来自于，它的氨苄青霉素抗性基因来自于。
20．YAC的最大容载能力是，BAC载体的最大容载能力是。
21．pSCl01是一种复制的质粒。
22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过
和两种质粒改造而来。它的复制子来自，Amp
抗性基因则是来自。
23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是；二是。
24．野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是
和。
25．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS位点序列来自，最大的克隆片段达到kb。
26．野生型的l噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1)
(2) (3) 。
27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是，而来自噬菌体的主要结构是。
28．l噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DN***段后，总的长度应在噬菌体基
因组的的范围内。
29．在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是
。
30．用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc，
其目的是。
31．引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1) (2)
(3) (4) 。
32．Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出
碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的。
33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在
。
34．乙醇沉淀DNA的原理是。
35．假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：
(1)________________________________ (2)_____________________________
(3)_________________________________。
36．受体细胞的感受态是___________________________________。
37．DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)_____________(2)_______________
(3)___________________________(4)___________________________。
38．将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________，各种此类质
粒的集合体称之为构建了一个_________________。
39．将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个____________，源于同一批RNA制备
物的克隆群则构建了一个_________________。
40．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用___________可以将这段DNA
进行百万倍的扩增。
41．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA, ___________时摄人DNA。
42．目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。
大致可以分为：(1)_______________(2)_______________(3)___________________
(4)____________________________等。
43．PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于___________________________。
44．核酸杂交探针可分为两大类：DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为__________ 探针和__________________探针。
45．如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端，则可以用__________进行3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用__________________进行3’末端标记。
46．单链DNA探针的标记可以采用下列方法：(1)____________________________________
(2)__________________________(3)_____________________________________。
47．根据Northern杂交的结果可以说明：__________________________________________。48．差示杂交(differential hybridization)技术需要_________________________________。
49．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)
上，同一放射DNA探针杂交的技术称_______________________。
50．在________________技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。
51．可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。
52．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：(1)_______________
(2)________________________(3)______________________。
53．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：
(1)_______________________________________________________________________
(2)_______________________________________________________________________。
54．放射免疫筛选的原理基于以下三点：(1)__________________________________
(2)___________________________ (3)__________________________________。
答案
1．70
2．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达
3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择
4．限制性酶切图谱
5．属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名
6．(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积
7．EcoK；EcoRl
8．GGCC；异源同工酶
9．枯草杆菌蛋白酶；(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶
10．碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团
11．Ca2+
12．5'-3'合成；3'-5'外切
13．DNA聚合酶I：5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶
14．S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平
15．核酸水解酶H；RNA
16．质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体
17．复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入18．质粒消除(或治愈)
19，pMBl；pSCl01；pSF2124(R质粒)
20．1000kb；300kb
21. 严紧
22．pBR322和M13；pMBl；转座子
23．它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如l噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽
24．没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记
25．质粒；l噬菌体；45
26．(1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记
27．复制区；IG区
28．75％～105％
29．螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性
30．中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力
31．(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析
32．T—载体
33．第二链合成时形成的发夹环?
34．乙醇使DNA分子脱水
35．(1)保持正确的可读框(2)能够使其转录的启动子(3)具有翻译的起始和终止信号
36．接受外源DNA的生理状态
37．(1)黏性末端连接；(2)平末端连接；(3)同聚物接尾连接；(4)接头连接法
38．基因组DNA克隆；基因组DNA文库
39．cDNA克隆；cDNA文库
40．聚合酶链式反应(PCR)
41．0°C；42°C
42．(1)遗传学方法；(2)物理筛选法；(3)核酸杂交法；(4)表达产物分析法
43．插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选
44．基因组DNA；cDNA
45．Klenow酶填补的方法；T4DNA聚合酶
46．(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针；(3)用不对称PCR 合成单链DNA探针
47．外源基因是否进行了转录
48．两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因
49．Northern印迹
50．Southern印迹
51．5’?3’合成酶；3’ ?5’外切核酸酶
52．(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子
53．(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件
54．(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合；(3)抗体能够被标记
二、选择题(单选或多选)
1．因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( )
A．Kornberg W．Gilbert P．Berg B．McClintock
2．第一个作为重组DNA载体的质粒是( )
pBR322 ColEl pSCl01 pUCl8
3．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。
由作用于同一DNA序列的两种酶构成
这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰
不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
4．Ⅱ型限制性内切核酸酶：( )
有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
限制性识别非甲基化的核苷酸序列有外切核酸酶和甲基化酶活性
仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
5．下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( )
限制酶是外切酶而不是内切酶
限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割
同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的
一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端
一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端
6．第一个被分离的Ⅱ类酶是：( )
EcoK HindⅢHindⅡEcoB
7．在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( )
反应时间酶量反应体积酶反应的温度
8．在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?( )
EDTA 柠檬酸钠SDS EGTA
9．在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?( )
S1单链核酸酶末端转移酶碱性磷酸酶Bal 31核酸酶10．限制性内切核酸酶可以特异性地识别：( )
双链DNA的特定碱基对双链DNA的特定碱基序列
特定的三联密码以上都正确
11．下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是( )。
Sau3A I E．coRI hind III Sau 3A1
12．限制性内切核酸酶的星号活性是指：( )
在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。活性大大提高
切割速度大大加快识别序列与原来的完全不同
13．下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( )
甘油含量过高反应体系中含有有机溶剂
含有非Mg2+的二价阳离子酶切反应时酶浓度过低
14．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当由作用于同一DNA序列的两种酶构成
这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰
不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
15．在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用( )
T4DNA聚合酶Klenow酶．
大肠杆菌DNA聚合酶I T7DNA聚合酶
16．末端转移酶是合成酶类，( )
作用时不需要模板
在Ca2+的存在下，可以在突出的3，末端延长DNA链
在Ca2+的存在下，可以在隐蔽的3，末端延长DNA链
上述说法有两种是正确的
17．在基因工程中，可用碱性磷酸酶( )
防止DNA的自身环化同多核苷酸激酶一起进行DNA的5，末端标记
制备突出的3，末端上述说法都正确
18．下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性
λ核酸外切酶外切酶Ⅲ单核苷酸激酶碱性磷酸酶
19．下列哪一种酶作用时需要引物? ( )
限制酶末端转移酶反转录酶DNA连接酶
20．S1核酸酶的功能是( )
切割双链的DNA 切割单链的RNA 切割发夹环以上有两项是正确的21．Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了( )的活性。
5，--3，合成酶，3，--5，外切酶5，---3，外切酶转移酶22．下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的
质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，
因而有较多的拷贝数
可以在氯霉素作用下进行扩增通常带有抗药性标记
同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子
23．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载
体中只有( )被视为用作基因工程载体的天然质粒载体
pBR322 pSCl01 pUBll0 pUCl8
24．下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?( )
质粒黏粒酵母人工染色体(YAC) l噬菌体cDNA表达载体25. 松弛型质粒：( )
在寄主细胞中拷贝数较多可用氯霉素扩增
一般没有选择标记上述、两项正确
26．Col El是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒：( )
是松弛复制型（b)具有，四环素抗性
能被氯霉素扩增能产生肠杆菌素
27．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：( )
OCDNA>SCDNA>LDNA SCDNA>LDNA>OCDNA
LDNA>OCDNA>SCDNA SCDNA>OCDNA>LDNA
28．pBR322是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自：( )
ColEl Ri质粒pSCl01 pUCl8
29．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?( )
在不同的宿主中具有不同的复制机制
在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点
在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶
在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率
30．能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是( )
charomid plasmid (C)cosmid phagemid
31．第一个作为重组DNA载体的质粒是( )
pBR322 ColEl pSCl01 pUCl8
32. Ti质粒：( )
可从农杆菌转到植物细胞中作为双链DNA被转移
在植物中导致肿瘤介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素
需要细菌的vir基因帮助转移在植物细胞中作为染色体外质粒
33．黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，( )
它具有COS位点，因而可进行体外包装它具有质粒DNA的复制特性
进入受体细胞后，可引起裂解反应进入受体细胞后，可引起溶源化反应
34．有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。酶学测序法的基本原理／优点是：( )
碱基与特殊染料间不同的相互作用
一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止
限制性位点与DNA末端标记的相关性
可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序
反应是DNA特异的，RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤，也节约了开支。
35．关于cDNA的最正确的说法是：( )
同mRNA互补的单链DNA 同mRNA互补的双链DNA
以mRNA为模板合成的双链DNA 以上都正确
36．用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：( )
染色体DNA断成了碎片染色体DNA分子量大，而不能释放
染色体变性后来不及复性染色体未同蛋白质分开而沉淀
37. 关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确?( )
溶液I的作用是悬浮菌体溶液Ⅱ的作用是使DNA变性
溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性
38. Clark做了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的
末端加一个碱基，主要是加( ) ．
dGTP dATP dCTP dTTP
39．根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。在下列文库中，
( )属cDNA文库
YAC文库MAC文库扣减文库BAC文库
40．下面关于多克隆位点(multiple clone site,MCS)的描述，不正确的—句是( )
仅位于质粒载体中具有多种酶的识别序列
不同酶的识别序列可以有重叠一般是人工合成后添加到载体中
41．在cDNA技术中，所形成的发夹环可用( )
限制性内切核酸酶切除用31外切核酸酶切除
用S1核酸酶切除用51外切核酸酶切除
42．在DNA的酶切反应系统中，通常：( )
用SSC缓冲液加入Mg2+作辅助因子
加入BSA等保护剂上述说法中，有两项是正确的
43．黏性末端连接法，不仅操作方便，而且( )
产生新切点易于回收外源片段载体不易环化影响外源基因的表达44．在下列表型中，( )是基因工程上理想的受体菌表型
r+m+rec* r-m-rec- (C)r-m-rec+ r+m+rec-
45．关于DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确?( )
给外源DNA添加适当的切点人工构建载体
调整外源基因的可读框增加调控元件
46．cDNA文库包括该种生物的( )
某些蛋白质的结构基因所有蛋白质的结构基因
所有结构基因内含子和调控区
47．下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的?( )
从特定组织或细胞中提取DNA或RNA
用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA
以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA
新合成的双链DNA甲基化
48．下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的? ( )
操作方便易于回收片段
易于定向重组载体易于自身环化，降低重组率
49．关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?( )
(功具有可诱导性具有可转移性
细菌生长的任何时期都可以出现不同细菌出现感受态的比例是不同的
50．下面关于用T4多核苷酸激酶标记5' 端制备探针的描述中( )是不正确的。
既能标记DNA，又能标记RNA 既能标记双链DNA又能标记单链DNA
只能标记突出的5' 端不能标记其他类型末端
DNA或RNA必须有5'-OH的存在
51．Southem印迹的DNA探针( )杂交。
只与完全相同的片段可与任何含有相同序列的DN***段
可与任何含有互补序列的DN***段’．
可与用某些限制性内切核酸酶切成的DN***段以上都是
52．用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。
Southem印迹杂交Northem印迹杂交
Western印迹原位菌落杂交
53．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?( )
用限制酶消化DNA DNA与载体的连接
用凝胶电泳分离DN***段DN***段转移至硝酸纤维素膜上
用一个标记的探针与膜杂交
54．报告基因( )
以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列
以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区
能用于检测启动子的活性能用于确定启动子何时何处有活性55．在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( )
诱导宿主的α肽的合成诱导宿主的ω肽的合成
作为酶的作用底物作为显色反应的指示剂
56. 切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。
DNA聚合酶I，RNA DNA聚合酶I，DNA
DNA聚合酶Ⅲ，RNA DNA聚合酶Ⅲ，DNA
57．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的( )
DNA RNA 抗体抗原
58．Southern印迹是用DNA探针检测DN***段，而Northern印迹则是：( )
用RNA探针检测DN***段用RNA探针检测RN***段
用DNA探针检测RN***段用DNA探针检测蛋白质片段
59．用免疫化学法筛选重组体的原理是( )
根据外源基因的表达根据载体基因的表达
根据mRNA同DNA的杂交根据DNA同DNA的杂交
60．随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?( )
双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的不需要用Dnase I预处理
反应时可用Klenow酶反应时可用DNA聚合酶1
61．在切口移位标记DNA探针时只能使用( )
Klenow酶DNA聚合酶I DNA聚合酶ⅡDNA聚合酶Ⅲ
62．要对一双链的DNA分子进行31末端标记，可用( )
Klenow酶DNA聚合酶I T4DNA聚合酶T7DNA聚合酶
答案
1．c；2．c；3．b；4．b 5．b，C，d，e；6．c；7．b；8．d；9．d；10．B；11．d；12．a；13．d；14．b 15．d；16．c；17．a，b；18．a；19．c；20．d；21．c；22．C；23．b；24．C；25．d；26．a，C，d；27．b；28．c；29．b；30．a；31．c；32．a,c,d,e，33．a，b，c；34．b；35．c；36．c；37．d；38．b；39．c；40．a；41．c；42．a，b，c；43．b；44．b；45．d；46．a；47．a；48．c；49．c；50．b；51．c；52．c；53．b；54．a,c,d；55．a；56．b；57．a，b；58．c；59．a；60．d；61．b；62．c；
三．名词解释
1．DNA recombination （标明中文名）
2．Restriction enzyme（标明中文名）
3．DNA 克隆
4．基因组文库
5．cDNA文库
6．Cloning vector（标明中文名）
7．转化（标明英文名）
8．感染（标明英文名）
9．转染（标明英文名）
10．In silico cloning（标明中文名）
答案：
1．DNA重组：不同来源DNA分子通过共价连接（磷酸二酯键）而组合成新的DNA分子的过程。
2．限制性核酸内切酶：是能够识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。限制性内切核酸酶识别DNA的结构顺序为回文结构。限制性内切核酸酶存在于细菌体内，限制外源DNA、保护自身DNA，对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义。
3．就是应用酶学的方法，在体外把目的基因与载体DNA结合成具有自我复制能力的DNA分子一一复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大
量同一DNA分子，即DNA克隆。由于早期研究是从较大的染色体分离、扩增特异性基因，因此DNA克隆又称基因克隆。
4．分离组织或细胞染色体DNA，利用限制性内切核酸酶将染色体DNA切割成基因水平的许多片段，其中即含有我们感兴趣的基因片段。将它们与适当的克隆载体拼接成重组DNA分子，继而转入受体菌扩增，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子的多个拷贝。不同细菌所包含的重组DNA分子内可能存在不同的染色体DN***段，这样生长的全部细菌所携带的各种染色体片段就代表了整个基因组。存在于转化细菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合称基因组DNA文库(genome DNA library)。
5．以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA (cDNA )，再复制成双链cDN***段，与适当载体连接后转入受体菌，即获得cDNA文库(cDNA library)。与基因组DNA文库类似，由总mRNA制作的cDNA文库包含了细胞表达的各种mRNA信息，自然也含有我们感兴趣的编码cDNA。当前发现的大多数蛋白质的编码基因几乎都是这样分离的。
6．克隆载体：能将外源DN***段导入宿主细胞进行扩增或表达，并能在该宿主细胞内进行自我复制和表达的介质。
7．transformation：指将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主菌，并使其获得新的表型的过程。8．infection：利用噬菌体将外源DNA导入宿主细胞的方法。
9．transfection：指真核细胞主动摄取或被动导入外源DN***段而获得新的表型的过程。常用的方法有电穿孔法，磷酸钙共沉淀法，脂质体融合法等。
10．电子克隆：通过基因数据库进行序列搜索，对比分析，拼接整合，预测新的假定的全长基因，然后通过分子生物学实验方法，加以证实，并从相应的组织，细胞中获得这种基因。
四、简答题
1．说明Sanger DNA测序法的原理。
2．某学生在用EcoRI切割外源DN***段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?
3．在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?
4．下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是Ⅱ类酶的识别序列：
GAATCG，AAATTT，GATATC，ACGGCA? 为什么?
5．当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?
为什么?
6．为什么反转录酶在聚合反应中会出错?
7．什么是测序酶(sequenaseTM)?
8．什么是S1核酸酶作图(S1 nuclease mapping)?
9 YAC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时，YAC具有优越
性?
10．列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
11．什么叫穿梭载体？
12．如何将野生型的l噬菌体改造成为一个理想的载体?
13．PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?
14．cDNA克隆与基因组克隆有何不同?
15．怎样将一个平末端DN***段插入到EcoR I限制位点中去?
16．简述以黏粒为载体构建基因文库的原理。
17．酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构?
18．何谓YAC? 主要特性是什么?
19．Muller的PCR反应同大肠杆菌体内的DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在
哪里?
20．欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物(如E．coli)中进行表达，克隆时应
注意哪些问题?
21．假定你分离到一个E．coli的Thy- 突变体，并推测有可能是ThyA基因突变。请设计
一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的ThyA基因，测定突变的序列。(注：E．coli
野生型的ThyA基因的序列是已知的)
22．你在做Southern印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤
是用NaOH溶液浸泡凝胶，使DNA变性为单链。为了节省时间，你略过了这一步，
直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自
显影片是空白。错在哪里?
23．切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些?
24．用EcoRI和Hind Ⅲ分别切割同一来源的染色体DNA，并进行克隆，在前者的克隆
中筛选到A基因，但在后者的克隆中未筛选到A基因，请说明原因。
25．什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?
26．用一限制性内切核酸酶切割Lac+ Tet+的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，
并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在lac基因内有切割位点，并在第二个氨基
酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化Lac- Tets
受体菌，筛选Tetr转化子，问：Lac的基因型是什么?并说明原因。
27．在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA
而不用基因组DNA?为什么要在cDNA前加上细菌的启动子?
答案
1．答：
Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上：(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的
作用下由5'端向3'端聚合(DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程)；(2)可延
伸的引物必须能提供游离的3'羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3'羟基末
端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获
得4组长度不同的DN***段。通过比较所有DN***段的长度可以得知核苷酸的
序列。
2．答：
盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。
3．答：
回文序列是：5'-CATATG-3，
4．答：
GATATC；AAATTT，因为它们是回文序列。
5．答：
注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一
种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星活性。或使用通用缓冲液。
6．答：
由于反转录酶缺少在E．coli DNA聚合酶中起校正作用的3'-5'外切核酸酶活性，所以聚合反应往往会出错，在高浓度的dNTP和Mg2+下，每500个碱基中可能有一个错配。
7．答：
所谓测序酶即是修饰了的T7 DNA聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸，
这样使T7 DNA聚合酶完全失去了3'-5'的外切核酸酶活性，只有5'---3'聚合酶的活性，而且聚合能力提高了3～9倍，测序时常用此酶。
8．答：
S1核酸酶作图是一种对RNA转录产物的末端和剪接位点进行作图的方法。
9. 答：
YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。
10．答：
(1)独立复制；(2)有选择标记；(3)有独特的酶切位点；(4)能转化但不扩散。
11．答：
含有细菌质粒和克隆的真核生物DN***段的杂种质粒，有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主(来回穿梭)。
12. 答：
(1)削减分子量(除去非必需区和整合区)；(2)削减酶切位点；(3)添加选择标记；
(4)引入终止突变
13．答：
(1)DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。
(2)至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。
14．答：
基因组克隆包含所有不在cDNA中出现的内含子。
15．答：
化学合成一些长为10bp含有EcoRI识别位点的短的DN***段，然后与待克隆片段两端连接起来，如果用EcoRI切割这种连接片段，就会产生EcoRI的单链末端。这种片段就可以插入到任何EcoRI的限制性内切酶位点中。
16．答：
(1)COS位点可以自身环化；(2)可以利用COS位点包装l噬菌体颗粒；
(3)可以感染寄主细胞；(4)利用质粒复制子复制，不整合、不裂解。
17．答：
(1)着丝粒；(2)端粒；(3)ARS序列。
18．答：
(1)含有来自其他生物DNA的酵母人工染色体，叫YAC；
(2)主要特性是可以克隆较大的外源片段。
19．答：
PCR用双引物，体内复制用单引物。
20．答：
应注意的问题有：启动子、密码子、剪接、分泌。
21．答：
为了扩增突变体的thyA基因，先设计一对引物，其中一个引物的序列与thyA基因的5’端相同，另一个引物同该基因的3’端互补。在引物的5’端加上合适Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，以便于后来的克隆。将染色体DNA同引物混合后，进行PCR扩增。然后进行琼脂糖凝胶电泳，纯化扩增片段，可以直接测序或克隆到合适的载体再测序。
22．答：
如果你的杂交探针是双链的，可能因为在加人杂交混合物之前忘记将探针变性而得到空白的放射自显影结
果。
23．答：
(1)DNaseI造成切口；
(2)DNA聚合酶III的5’ ?3’外切核酸酶进行切割；
(3)DNA聚合酶Ⅲ的5’?3’合成酶进行修补；
(4)在修补过程中，随着切口(nick)的移动，将放射性的底物掺人到双链DNA中。
24．答：
原因是：HindⅢ的切点在A基因内。
25．答：
Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上，然后用特异性的抗体进行检测。它与Southern的不同在于探针的性质不同，在Western印迹中使用的探针是抗体(蛋白质)。
26．答：
基因型是lac-．原因是在该密码子中插入了两个碱基，造成了移码突变，所以Lac的基因是缺陷的。27．答：
这是因为细菌没有内含子剪接系统，并且不能识别真核生物的启动子之故。
四、问答题：
1．说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
2．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影向?
3．影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些?
4．什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?
5．细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同?在基因工程中有什么用途?
6．λ外切核酸酶(1ambda exonuclease)基本活性是什么?在基因工程中有什么应用?
7．Mn2+、Mg2+对Dnase I(deoxyribonuclease ?)的活性有什么影响?Dnase I在基因工程中有什么作用? 8．质粒如何维持在细胞中的稳定？
9．由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行
严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。请问质粒载体的安全条件包括哪几
个方面?
10．为什么野生型的l噬菌体DNA不宜作为基因工程载体?
11．什么是蓝白斑筛选法?
12．蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性?
13．M13系列载体具有哪些优缺点?
14．黏粒载体具有哪些特点与不足?
15．辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的?
16．如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法
克隆该基因?
17．什么是基因文库?
18．什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗
传学上的基因库有什么不同?
19．什么是cDNA文库(complementDNAlibrary)?同基因组文库有何差别?
20．黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出
这些不足之处。
21．什么是同聚物加尾连接法(homopolymer tails joining)?用何种方法加尾?具有哪些优
缺点?
22．何谓接头连接法(1inker ligation)?
23．什么是同裂酶?为什么说用同裂酶进行体外重组效率最高?
24．为了大量获得许多用于生化鉴定的产物，你想将拟南芥中的一个序列已知、编码单
体酶蛋白的基因在单细胞微生物中表达，你如何确保最终能得到产物?
25．某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl I的切点。现用
Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培
养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片
段的重组体?
26．以pBR322 DNA作为载体，从四环素抗性基因区克隆外源DNA时，可采用环丝氨
酸富集法筛选重组体，说明其基本原理和基本操作过程。
27．放射性抗体检测法(radioactive antibody test)的基本原理是什么?
28．什么是随机引物(random primer)?如何标记DNA?
29．什么是印迹(blotting)杂交?
30．什么是原位菌落杂交(colony hybridization)?
31．说明Southern杂交的原理和方法。
32．Northern印迹与Southern印迹有什么不同?
33．建立了一个基因文库后，如何鉴定一个携带目的基因的克隆?
答案：
1．答：
限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株名的各一个首字母，再加上序号。基本原则：3-4个字母组成，方式是：属名+种名+株名+序号；首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写；
第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写；
(2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。
第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，
但用正体。顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、… 等，用正体。2．答：
Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限
制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松
动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因
条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星
活性。
概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性
内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0
以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；有非Mg2+的二价阳离子存在(如
Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。
3．答：
影响DNA连接酶催化连接反应的因素有很多，但温度对连接反应的影响较大。黏性末端链通常以12°C一15°C最好，这种温度有利于末端退火和连接酶的活性稳定。温度高了难以进行末端退火，低于上述温度会降低连接酶的活性。平末端连接以室温为宜，因为平末端连接不存在DNA的退火问题，但是温度高于30℃，连接酶特别不够稳定。平末端连接时连接酶的浓度要比黏性末端连接时高10-100倍。DNA中有残存的tRNA 不会抑制DNA连接酶的活性，但是，如果NaCl的浓度高于150mmol／L，则对连接反应有强的抑制作用。
另外反应体系中有NH4+离子的存在，对E．coli DNA连接酶具有激活作用。E．coli DNA
连接酶需要NAD+作辅助因子，而T4 DNA连接酶需要ATP。
4．答：
Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，它具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸酶的活性，小片段具有5'-3'外切核酸酶活性。由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5'引物的5'-3'外切核酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。
Klenow酶主要有下列用途：
(1)修复反应，制备平末端
可用Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5'或3'突出末端，制备平末端，这样可以使原来具有不相容的黏性末端的DN***段通过平末端重组。如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸，用这种末端填补的方法可以制备3'末端标记的探针。
用Klenow酶修复5'突出末端的反应主要是利用了Klenow酶的DNA聚合酶活性，是填补反应；而修复3'突出末端则是用Klenow酶的3'-5'外切核酸酶的活性，是切割反应。用Klenow酶的切割反应来修复3'突出末端是不理想的，改用T4DNA聚合酶或其他的酶是更好的选择。
(2) 标记DNA3'突出末端(protruding end)
该反应分两步进行：先用3'-5'的外切核酸酶活性除去3'突出末端，产生3'隐含末端，然后在高浓度的标记底物( -32p-dNTP)存在下，使降解(3'-5')作用与聚合(5'-3')作用达到平衡。这种反应也叫交换或取代反应(exchange／replacement reaction)。不过这一反应用T4DNA聚合酶的效果更好，因它的3'-5'外切核酸酶活性较强。
(3)其他的一些用途：包括用双脱氧末端终止法进行DNA序列分析、用于cDNA第二链的合成、在定点突变中用于合成第二链、用引物延伸法(primer extension)制备单链DNA探针等。
5．答：
主要差别是：CIP68°C时失活，而BAP68°C稳定，且耐酚抽提。应用：
(1)dsDNA的5'端脱磷酸，防止DNA的自身连接。但是用CIP处理后，最好将CIP除去后，再进行连接反应。
(2)DNA和RNA脱磷酸，然后用于多核苷酸激酶进行末端标记。
6．答：
外切核酸酶是从噬菌体感染的E．coli中分离纯化的，能够从双链DNA上依次切下5'单核苷酸，作用底物是双链DNA的5'磷酸末端，不能切割羟基化5'端。该酶虽然能切割单链DNA,但效率较低(下降200倍)。不能切割带切口或缺口的dsDNA。该酶作用时是行进性的，一步一步进行的。在基因工程中主要用于除去双链DNA突出的5'末端，以便让末端转移酶加尾。
7．答：
DNase I是一种内切核酸酶，在Mg2+存在下，DNase I随机切割DNA两条链中的任意一条链；当Mn2+代替Mg2+时，DNase I几乎是在双链DNA两条链相对的位置上打开缺口，使双链DNA断裂，产生的末端几乎是平末端或只突出1～2个核苷酸的DN***段。
DNase I有许多用途：(1)在切口移位标记中，制造切口；(2)在足迹法中保护DNA；
(3)除去RNA制备物中的DNA；(4)体外转录中除去DNA模板；(5)检测染色体中的转录活性区；产生
可在噬菌体M13载体上进行测序的随机克隆。
8．答：
质粒通过以下几种机制维持在细胞中的稳定：
(1)多聚体质粒的分解
如果质粒在复制时形成多聚体的话，在细胞分裂过程中质粒丢失的可能性就会增加。一个多聚体是由多个单体相互连接而成的。多聚体的形成可能是由于在复制终止时发生错误或者是由于单体间重组的结果。由
于多聚体在细胞分裂时将作为一个质粒进入一个子细胞，这样，多聚体的形成就大大降低了质粒的有效拷贝数，因此，多聚体也就大大增加了细胞分裂时质粒丢失的机会。为了避免这种情况的发生，很多质粒都具有位点专一性重组的系统，可以破坏多聚体。
(2)分离(partitioning)
质粒通过一种分离系统来防止在细胞分裂过程中质粒的丢失，这种机制保证在细胞分裂过程中每个子细胞至少可得到一个质粒拷贝，这是由称为par功能(Par functions)完成的。所谓par功能是指某些质粒，包括F、R1等质粒上具有的一些短的区域，这些区域能够增强质粒拷贝的合适分配。如果从质粒中将这种区域拿掉，质粒丢失的频率就会相当高。已经深入研究过P1质粒的分离系统，发现P1质粒的分离系统由一个顺式激活par序列和两个蛋白ParA和，ParB的基因构成，其中一个蛋白同par位点结合。
关于par位点是怎样增强质粒适当分离的机制有两种模型，按照这两种模型，细菌的膜具有真核生物有丝分裂纺锤体的功能，在细胞分裂之前将质粒分开。par位点是质粒同质膜结合的区域，在细胞分裂时，由于膜的生长，质粒的两个拷贝就被拉到两个子细胞中。这两个模型对于细胞分裂时，质粒同质膜的结合是怎样保证每个细胞至少得到一个质粒的解释是不同的。
模型．A：par位点同细菌质膜的一个假定位点结合。在这个模型中，每一种质粒都有它自己独特的同质膜结合的位点。当细胞生长时，位点也加倍，每一个质粒拷贝结合一个位点。由于这些位点随着细胞分裂而分开，每一个质粒拷贝将分配到一个子细胞。这就保证了质粒不会丢失。该模型要解决的问题是质膜上必须有许多独特的位点以供不同的质粒拷贝结合，这似乎不太可能。
将模型A稍微改动一下，就可以满足质粒分离所需的位点。如果我们假定质粒结合的位点不在质膜而是在细菌的染色体上就可以了。染色体上有很多的位点，并且随着DNA的复制而加倍，这些位点可供质粒结合。剩下的唯一问题就是在质膜上有同染色体结合的独特位点，这样，质粒将随着染色体的分离而分离。
模型B同模型A基本类似，在这个模型中，质粒的两个拷贝在同质膜结合之前必须通过它们的par位点相互配对。然后这两个质粒在细胞分裂过程中随着质膜位点的分离而分离。高拷贝数的质粒常常具有增加质粒适当分离的位点，但是这些区域并没有相同的结构，并不以相同的机制起作用。例如，质粒pSCl01的par区可以增加质粒的超螺旋，至于超螺旋的增加如何帮助质粒的适当分离是不清楚的。可能是增强了质粒分离后的迅速复制，防止了下次分裂时的丢失。
(3)质粒溺爱(plasmid addiction)
即使质粒具有分离功能，质粒也会从增殖的细胞中丢失。在一类复仇的细胞中，质粒能够编码一些杀死丢失了质粒的细胞。像F质粒、R1质粒、以及P1噬菌体都有这种功能。这些质粒编码一些毒性蛋白质，这些蛋白质一旦表达就会杀死细胞。根据质粒的来源不同，毒性蛋白质可通过各种方式杀死细胞。
例如，质粒的毒性蛋白Ccd,通过改变DNA螺旋酶来杀死细胞，由于螺旋酶的改编，引起了双螺旋DNA的断裂。质粒R1的杀手蛋白Hok,破坏细菌细胞质膜的功能，引起细胞活力的丧失。为什么毒性蛋白仅仅是在细胞丢失了质粒之后立即杀死细胞?当细胞含有这种质粒时，沉溺系统的蛋白质或RNA可作为一种解毒药，既能阻止毒蛋白的合成，又能同毒蛋白结合并阻止毒蛋白起作用。
然而，这些其他基因的产物要比毒性蛋白不稳定得多，所以它们会很快失活。如果一个细胞丢失了质粒，既没有毒性蛋白也没有解毒剂的合成。但是，由于解毒剂更不稳定，当解毒剂失活后，毒性蛋白就可以起杀伤作用。这些系统使细胞对质粒产生溺爱，并防止细胞丢失质粒。
9．答：
(1)非传递性和不被带动转移。对于多数基因克隆操作来说，都不希望载体能够进行自主传递，也不希望被带动转移。
(2)具有条件致死突变，如温度敏感质粒pJC307(ColEl的衍生质粒)在哺乳动物正常体温下就丧失复制能力，可防止克隆基因扩散，只存在于限定的宿主细胞中。(3)一般情况下不希望与宿主染色体发生重组，因为重组后有可能给宿主带来突变。
(4)有较小的宿主范围。
10．答：
(1)菌体DNA没有容载能力，因为噬菌体的头部对DNA包装的量是有限制的，不能大于基因组的105％，所以要将l噬菌体改造成载体，必须削减分子量。
(2)野生型的lDNA对于一些常用的酶都有多个识别和切割位点，不便于克隆。
(3)没有可供选择的标记。
(4)野生型的l噬菌体具有感染性，因此不够安全。
11．答：
这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在l载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌b—半乳糖苷酶的基因片段，携带有lac基因片段的l载体转入lac的宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚—b—D—半乳糖苷(X-gal)平板上形成浅蓝色的噬菌斑。外源基因插人lac(或lac基因部分被取代)后，重组的噬菌体将丧失分解X-gal的能力，转入lac-宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚—b—D—半乳糖苷(X-gal)平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。
12．答：
b—半乳糖苷酶的N末端是非必需的，，可以进行修饰，并不影响酶的活性或a肽的互补性。如果插入的外源DNA引起a肽的可读框的改变，或者插入片段在正确的可读框中含有终止密码的话，就会形成白色噬菌斑。如果插入DNA的碱基数正好是3的倍数，或者插入的DNA中不含有终止密码的话，仍然会形成蓝色噬菌斑。这种插入物的长度可达几百个碱基对。M13载体的这种性质可以用来检测和选择产生新的终止密码或改变可读框，即移码突变。
13．答
M13克隆系统具有很多优点：
(1)克隆的片段大：M13噬菌体的DNA在包装时不受体积的限制，所以容载能力大，有报道，有些噬菌体颗粒可以包装比野生型丝状噬菌体DNA长6—7倍的DNA(插人片段可达40kb)。
(2)可直接产生单链DNA，这对于DNA测序、DNA诱变、制备特异的单链DNA探针都是十分有用的。
(3)单链DNA和双链DNA都可以转染宿主，并可根据人工加上的选择标记进行筛选。
M13克隆系列的不足：
(1)较大的外源片段插入后，在扩增过程中往往不够稳定，一般说，克隆的片段越大，发生丢失的机率越大。
(2)单链载体分子感染的细胞中，往往是单链和双链混杂，分离双链比较麻烦。
14．答：
主要特点有：
(1)具有质粒复制子，进入寄主细胞后能够像质粒一样进行复制，并且能够被氯霉素扩增。
(2)具有质粒载体的抗生素抗性基因的选择标记。
(3)具有l噬菌体的包装和转导特性。
(4)容载能力大。克隆的最大片段在45kb，最小片段为19kb。
(5)简化了筛选。如果载体的分子量在5kb的话，得到的转导子几乎排除由载体自连的可能性，因为要被成功包装，至少要7个分子的载体自连，尽管如此，也是不能被包装的，因为COS位点太多了。
黏粒载体也有如下不足：(1)如果两个黏粒之间有同源序列，可能会发生重组，结果会使被克隆的片段重排或丢失。
(2)含不同重组DN***段的菌落生长速度不同，会造成同一个子板上菌落大小不一。另外由于不同大小的插入片段对宿主细胞的作用不同，会造成文库扩增量的比例失调。
(3)包装过程复杂，包装效率不稳定，代价高。
15．答：
虽然噬菌粒载体携带有M13的IG区，能够合成单链DNA，但是它没有M13的功能基因，没有M13基因2的产物存在，所以不能合成单链DNA。而辅助噬菌体具有M13的所有功能基因，但是IG区是缺陷的，辅助噬菌体本身的DNA不能进行单链复制，于是就可以为噬菌粒提供基因2产物和包装蛋白。
辅助噬菌体必需具备如下条件：
(1)助噬菌体的DNA IG区必需失去功能，其本身的DNA不会被包装到成熟的噬菌体颗粒中；
（2）由于辅助噬菌体的IG区失活，其本身的基因不能表达，要使辅助噬菌体的所有功能基因都能进行表达，必须在辅助噬菌体的基因组中导人新的复制起点；
(3)辅助噬菌体的基因组中具有选择标记，便于识别和收集一定数量的辅助噬菌体。
16．答：
可以通过合成核苷酸探针或设计简并PCR引物从cDNA文库或基因组文库中筛选。或者利用相应的抗体从cDNA表达文库中筛选相应的克隆。
17．答：
基因文库，或克隆文库，是一群细菌克隆，每个克隆含有一个带有某一供体生物不同DN***段的质粒或噬菌体载体；这群克隆有95％-99％的可能性使基因组DNA的每一片段至少存在于一个克隆中。一个基因文库一旦建立，任一特定的克隆都可被回收用于研究其所携带的基因，因而在需要克隆某一特定基因时就避免了逐个巡查克隆的耗时过程。为减少所要收集的克隆的数目，最普遍采用的载体是l噬菌体的一种衍生载体，它可容纳12~20kb的供体DN***段，这点与pBR322不同，它可插入的外源DNA最大约为5kb．18．答：
基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA的各种片段的克隆群。一般以改造的噬菌体DNA或黏粒作为载体，包括下列过程：(1)高分子量染色体DNA的制备；(2)体外重组连接；(3)
包装蛋白的制备；(4)重组体的体外包装；(5)将重组DNA导人寄主细胞；筛选。基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。基因库(gene pool)是指在进行有性生殖的某一群体中，能进行生殖的个体所含总的遗传信息。在基因组文库的构建中，由于使用的载体不同，分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因组文库、YAC文库、BAC文库等。
19．答：
同mRNA互补的DNA称为cDNA。cDNA文库是以某一生物的总mRNA为模板，在无细胞系统中，在反转录酶的作用下，首先合成一互补的DNA, 即第一链，破坏RNA模板后，再以第一链为模板合成第二链，得到的双链DNA称为cDNA。选用适合的载体，将合成的cDNA重组导人寄主细胞，经筛选得到韵cDNA克隆群称为cDNA文库。由于cDNA技术合成的是不含内含子的功能基因，因此是克隆真核生物基因的一种通用方法。
由于细胞内的基因在表达的时间上并非是统一的，具有发育的阶段性和时间性．有些则需要特殊的环境条件。所以，cDNA文库是不可能构建得十分全，也就是说任何一个cDNA文库都不可能包含某—生物全部编码基因。
cDNA文库与基因组文库的主要差别是：
(1)基因组文库克隆的是任何基因，包括未知功能的DNA序列，cDNA文库克隆的是具有蛋白质产物的结构基因，包括调节基因；
(2)基因组文库克隆的是全部遗传信息，不受时空影响；cDNA文库克隆的是不完全的编码DNA序列，因它受发育和调控因子的影响；
(3)基因组文库中的编码基因是真实基因，含有内含子和外显子；而eDNA克隆的是不含内含子的基因。20．答：
黏性末端连接法不足之处有：(1)载体易自身环化；(2)若是用同一种限制性内切核酸酶产生的黏性末端连接又不易定向克隆；(3)难插入特定的基因；(4)再者就是大片段DNA的重组率较低，即使用碱性磷酸酶处理了载体，防止了载体的自身环化，载体也有成环的倾向；(5)用这种方法产生的重组体往往含有不止一个外源片段或不止一个载体连接起来的串联重组体，增加筛选工作的困难。
21．答：
所谓同聚物加尾法就是利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3’端各加上一段寡聚核苷酸，制成人工黏性末端，外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸，如dA(dG)和dT(dC),然后在DNA连接
基因工程考试试题.doc
基因工程 一名词解释 DNA，1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外 来 从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护 自身的 DNA不被讲解。限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。 2、各种限制与修饰系统的比较 Ⅱ型Ⅰ型Ⅲ型 识别位点4~6bp，大多为回文序列二分非对称5~7bp 非对称 切割位点在识别位点中或靠近识别位点无特异性，至少在识别位点外100bp 识别位点下游 24~26bp 简答 1. 何谓 Star activity？简述Star activity的影响因素及克服方法？ 答：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。 pH 引起星星活性的的因素：①高甘油浓度（>5%）；②酶过量（ >100U/μl ）；③低离子强度（ <25mmol/L）；④高(> ；⑤有机溶剂如DMSO （二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等；⑥用其它二价阳离子 星星活性的抑制措施：①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；②保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；③提高离子强度到100 ～ 150mM（在不抑制酶活性的前提下）；④降低反应pH至；⑤使用Mg2+作为二价阳离子。 2. 试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？（影响酶活性的因素？） 答：外因：反应条件、底物纯度（是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当，反应体系的选择、反应时间的长短 内因：星星活性、底物甲基化、底物的构象 3、 DNA末端长度对酶切割的影响 答：限制酶切割 DNA 时，对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的 核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。在设计PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切 割扩增的 PCR产物，应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。一般需加 3 ～4 个碱基对。 4、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？ 答：将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：①在宿主细胞内必须能够自主复制（具 备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA 片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于 筛选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。 5 抗性基因（ Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？ 答：氨苄青霉素抗性基因（ ampr）、四环素抗性基因（tetr ）、氯霉素抗性基因（ Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（ kanr , neor ）以及琥珀突变抑制基因supF 。 ⑴青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。氨苄青霉素抗性Ampr 编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化β - 内酰胺环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。 ⑵四环素与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。 Tetr 编码一个由 399 个氨基酸组成的膜 结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。 6. 何为α - 互补？如何利用α - 互补来筛选插入了外源DNA 的重组质粒？ 答：α - 互补指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β - 半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。α - 互补是基于在两个不同的缺陷β－半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。实现α- 互补主要有两部分组成：LacZ △ M15 ，放在 F 质粒或染色体上，随宿主传代；LacZ' ，放在载体上，作为筛选标记，当在 LacZ' 中插入一个片断后，将不可避免地导致产生无α- 互补能力的β－半乳糖苷酶片断。在诱导物IPTG 和底物 X-gal （同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有活性的β－半乳糖苷酶，不能分解 X-gal ，呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。 7、试简述λ噬菌体的裂解生长状态Lytic growth 和溶原状态 Lysogenic state 两种循环的分化及其调节过程？ 答：裂解生长状态是λ噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代λ噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂 解。溶原状态为λ噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA 中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程：由感染复数
基因工程习题及答案
第二章习题 一、单选题 1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ） A．I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶 E. RNAase 2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B ) A. 是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。 B. 它们的识别序列完全相同。 C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。 D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。 3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是（ A ） A. 37℃ B.30℃ C.25℃ D.16℃ E.33℃ 4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B ) A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。 B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。 C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。 D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。 E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。 5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D ) A. 1/44 B. 1/66 C. 1/64 D.1/46 E. 1/106 6. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C ) A. PH:2-4 B. PH:4-6 C. PH:6-8 D. PH:8-10 E. PH:4-10 7. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D ) A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。 B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。 C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。 D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。 E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。 8. II类限制酶反应中必须的阳离子是（ C ）
基因工程选择题试题库,很全
2. 第一个作为重组DNA载体的质粒是() (a) pBR322 (b)ColEI (c)pSCI01 (d)pUCI8 3. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当 (a) 由作用于同一DNA序列的两种酶构成 (b) 这一系统中的核酸酶都是U类限制性内切核酸酶 (c) 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d) 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4. H型限制性内切核酸酶：() (a) 有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b) 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c) 限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e) 仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5?下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?() (a) 限制酶是外切酶而不是内切酶 (b) 限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c) 同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的 (d) 一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端 (e) 一些限制酶在识别位点内相同的位臵切割双链DNA，产生平末端
6 .第一个被分离的U类酶是：() (a) EcoK (b)Hind 川(c)Hind U(d)EcoB 7?在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?() (a) 反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度 8. 在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?() (a) EDTA (b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA 9. 在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?() (a) S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶 10 .限制性内切核酸酶可以特异性地识别：() (a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列 (c)特定的三联密码(d)以上都正确 11.下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是()。 (a) Sau3A I (b)E . coRI (c)hind III (d)Sau 3A1 12 .限制性内切核酸酶的星号活性是指：() (a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。(b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快(d)识别序列与原来的完全不同 13 .下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?() (a)甘油含量过高(b)反应体系中含有有机溶剂 (c)含有非Mg2+的二价阳离子(d)酶切反应时酶浓度过低 14. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当
基因工程测试题
基因工程测试题 一、选择题： 1.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成。通过转基因技术可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A.大肠杆菌 B.酵母菌 C.肺炎双球菌 D.乳酸菌 2.下列有关基因工程的叙述，正确的是( ) A．DNA连接酶将碱基对之间的氢键连接起来 B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变 C．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大 D．常用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等 3.我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是( ) A.抗虫基因的提取和运输需要专用的工具酶和载体 B.重组DNA分子中替换一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失 C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递到近缘作物，从而造成基因污染 D.转基因抗虫棉是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的 4.如图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因(kan r)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养
基上生长。下列叙述正确的是( ) A.构建重组质粒过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶 B.愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株 C.卡那霉素抗性基因(kan r)中有该过程所利用的限制性核酸内切酶 的识别位点 D.抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传 5.上海医学研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍，以下与此有关的叙述中正确的是( ) A.“转基因动物”是指体细胞中出现了新基因的动物 B.“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因 C.只有从转基因牛乳汁中才能获取人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在牛乳腺细胞中含有 D.转基因牛的肌肉细胞中也有人白蛋白基因，但不发生转录、翻译，不能合成人白蛋白 6.下列关于蛋白质工程和基因工程的比较，不合理的是( )
【精品】2021年高中高三生物二轮复习专题练习含答案解析4：基因工程
2021年高三生物二轮复习专题练习4含答案解 析：基因工程 一、选择题 1.下列关于基因工程应用的叙述，正确的是( ) A．基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因 B．基因诊断的基本原理是DNA分子杂交 C．一种基因探针能检测水体中的各种病毒 D．利用基因工程生产乙肝疫苗时，目的基因存在于人体B淋巴细胞的DNA中 2.1970年，特明和巴尔德摩证实了RNA病毒能依赖RNA 合成DNA的过程，并发现了催化此过程的酶。下面为形成cDNA 的过程和PCR扩增过程示意图。请根据图解分析，下列说法不．正确的是( ) A．催化①过程的酶是逆转录酶 B．从图示可以看出要将碱基对之间的氢键断开可以用核酸酶H和高温处理 C．从图中信息分析可知，②⑤过程为DNA复制，催化⑤过程的酶能耐高温 D．如果RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶30
个 3.在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是( ) A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 4.如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是( ) A．将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法 B．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌 C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌 D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长 5.在基因工程操作中限制性核酸内切酶是不可缺少的工具酶。下列有关限制性核酸内切酶的叙述错误的是( )
高二生物选修三基因工程测试题(含答案)详细解答
基因工程测试题 姓名____________ 一、选择题 1．已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现在多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶切后， 这些线性DNA分子最多能 产生长度不同的DNA片段 种类数是( c ) A．3 B．4 C．9 D．12 2．下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是( c ) A．将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法钙离子处理法B．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌普通质粒A和重组质粒都含有抗氨苄青霉素基因。都能生长因为目的基因在四环素 C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A 的细菌导入重组质粒的细菌不能生长，因为目的基因插在抗四环素基因中，抗四环素基因的结构被破坏。 D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长受体细胞通过转录、翻译合成相应的蛋白质，即人的生长激素。 3．下列关于基因工程的叙述，错误的是（D ） A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达基因工程中目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶；人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性,只有经过一定的物质激活以后,才有生物活性.载体上的抗性基因主要是有利于筛选含重组DNA的细胞,不能促进目的基因的表达.所以D错误. 4.将ada（腺苷酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是（C ） A、每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B、每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C、每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada不同的限制性核酸内切酶识别位点不同，不是每个限制性核酸内切酶的识别位点都能插入ada。 D、每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 5.北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是（B ）农杆菌转化法 A、过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序图中①是获取目的基因的过程，获取的目的基因，可用于基因工程，但不能用于比目鱼基因组测序，故A错误； B、多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白将多个抗冻基因编码区相连形成的能表达的新基因可能不再是抗冻基因，所以可能得不到抗冻性增强的抗冻蛋白，故B 正确；， C、过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选②是基因表达载体的构建过程，基因表达载体通常由启动子、目的基因、终止子和标记基因构成，其中标记基因的作用是筛选重组质粒，利用农杆菌转化法只能将质粒导入受体细胞，不能对重组质粒进行筛选，故C错误； D、应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达利用DNA探针技术检测目的基因是否导入到受体细胞，利用抗原-抗体杂交技术检测目的基因是否表达出来，故D错误．6.在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是（A ） A 用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸限制性核酸内切 酶只能识别DNA的核苷酸序列,并在特定的位点切割,而烟草花叶病毒的核酸是RNA,限制性核酸内切酶对其不能发挥作用. B 用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C 将重组DNA分子导入原生质体 D 用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞目的基因为抗除草剂 基因，所以成功导入目的基因的细胞具有抗除草剂的能力，筛选时应该用还有除草剂的培养基筛选转基因细胞 7.下列关于基因工程的叙述，正确的是: ( D ) A.基因工程往往以细菌抗药性基因为目的基因基因工程经常以抗菌素抗性基因为标记基因，便于重组质粒的筛选，A错误； B.重组DNA的形成和扩增是在细胞内完成的比如PCR技术在体外 C.基因工程育种能够定向地改造生物性状，快速形成新物种定向地改造生物的遗传性状，培育新的农作物优良品种的生物技术 D.限制性内切酶和DNA连接酶是构建重组DNA必需的工具酶8．下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是( B ) A．基因工程需对基因进行分子水平操作，蛋白质工程不对基因进行操作基因工程和蛋白质工程都是分子水平操作，且直接操作对象都是基因。 B．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质基因工程合成的是天然存在的蛋白质，而蛋白质工程合成的可以是自然界不存在的蛋白质，但不是只能合成天然不存在的蛋白质。 C．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作基因工程和蛋白质工程都是分子水平操作 D．基因工程完全不同于蛋白质工程蛋白质工程是以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。所以蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程。 9．PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，下列有关PCR过程的叙述，不正确的是( C ) A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键跟解旋酶的作用相同 B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配 对原则完成 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸四种脱氧核糖核苷酸热稳定DNA聚合酶 D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高 10.“工程菌”是指（C） A．用物理或化学方法诱发菌类自身某些基因得到高效表达的菌类细胞株系用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系一般称为“工程菌” B．用遗传工程的方法，使同种不同株系的菌类杂交，得到的新细胞株系 C．用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系 D．从自然界中选取能迅速增殖的菌类 二、非选择题 11.为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 植 线性DNA分子的酶切示 意图
基因工程测试题经典
xxxXXXXX 学校XXXX 年学年度第二学期第二次月考 XXX 年级xx 班级 姓名：_______________班级：_______________考号：_______________ 一、选择题 （每空？ 分，共？ 分） 1、下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是 A ．蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的 B ．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质 C ．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作 D ．基因工程完全不同于蛋白质工程 2、PCR 是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术，下列有关PCR 过程的叙述，不正确的是 A ．变性过程中破坏的是DNA 分子内碱基对之间的氢键 B ．复性过程中引物与DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C ．延伸过程中需要DNA 聚合酶、ATP 、四种核糖核苷酸 D ．PCR 与细胞内 DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高 3、35．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。下列有关叙述，正确的是（ ） A ．人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目，小于凝血因子氨基酸数目的3倍 B ．可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA 分子导入羊的受精卵 C ．在该转基因羊中，人凝血因子基因只存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D ．人凝血因子基因开始转录后，DNA 连接酶以DNA 分子的一条链为模板合成mRNA
4、ch1L基因是蓝细菌拟核DNA上控制叶绿素合成的基因．为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞．技术路线如图所示，对此描述错误的是（） 5、下图表示基因工程中目的基因的获取示意图，不正确的是： A、同种生物的基因组文库大于cDNA文库 B、③表示PCR技术，用来扩增目的基因 C、从基因文库中要得到所需目的基因，可根据目的基因的有关信息来获取 D、只要基因的核苷酸序列已知，就只能通过人工合成的方法获取 6、图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序 列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正确的是：
基因工程和细胞工程测试题(附答案,可用于考试)
5 高二生物《基因工程和细胞工程》测试题姓名班级 （时间：90分钟分数：100分） 一．选择题（本大题包括25题，每题2分，共50分。每题只有一个选项符合题意。） 1．以下说法正确的是（） A.所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B．质粒是基因工程中惟一的运载体 C．运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 2．植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不．相符的是（） A．纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理——酶的专一性 B．植物组织培养和动物细胞培养——细胞的全能性 C．植物体细胞杂交和动物细胞融合——生物膜的流动性 D．紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞分裂 3．有关基因工程的叙述正确的是（） A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用 B.重组质粒的形成在细胞内完成 C.质粒都可作运载体 D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 4．能克服远缘杂交障碍培育农作物新品种的技术是（） A.基因工程 B.组织培养 C.诱变育种 D.杂交育种 5．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是( ) A．培养人的效应T细胞能产生单克隆抗体 B．培养人的B细胞能够无限地增殖 C．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株 D．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞 6．PCR技术扩增DNA,需要的条件是( ) ①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体 A、①②③④ B、②③④⑤ C、①③④⑤ D、①②③⑥ 7．以下对DNA的描述，错误的是（） A.人的正常T淋巴细胞中含有人体全部遗传信息 B.同种生物个体间DNA完全相同 C.DNA的基本功能是遗传信息的复制与表达 D.一个DNA分子可以控制多个性状 8. 蛋白质工程中直接需要进行操作的对象是（） A.氨基酸结构 B.蛋白质空间结构 C.肽链结构 D.基因结构 9．细胞工程的发展所依赖的理论基础是（） A.DNA双螺旋结构模型的建立 B.遗传密码的确立及其通用性的发现 C.生物体细胞全能性的证明 D.遗传信息传递的“中心法则”的发现 10．下列不是基因工程中的目的基因的检测手段的是：（） A.分子杂交技术 B.抗原—抗体杂交 C.抗虫或抗病的接种 D.基因枪法 11．在以下4种细胞工程技术中，培育出的新个体中，体内遗传物质均来自一个亲本的是（） A.植物组织培养 B. 单克隆抗体 C. 植物体细胞杂交 D.细胞核移植 12．动物细胞融合与植物细胞融合相比特有的是（） A.基本原理相同 B.诱导融合的方法类 C.原生质体融合 D.可用灭活的病毒作诱导剂 13．下列哪一项属于克隆（） A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内 C．将鼠骨髓细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
基因工程练习题(附答案)
基因工程练习题 1、在基因工程中使用的限制性核酸内切酶，其作用是( ) A、将目的基因从染色体上切割出来 B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列 C、将目的基因与运载体结合 D、将目的基因导入受体细胞 2、基因工程中常用细菌等原核生物作受体细胞的原因不包括( ) A、繁殖速度快 B、遗传物质相对较少 C、多为单细胞，操作简便 D、DNA为单链，变异少 3、基因工程是DNA分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、限制酶只用于切割获取目的基因 B、载体与目的基因可以用同一种限制酶处理 C、基因工程所用的工具酶是限制酶，DNA连接酶 D、带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测 4、运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有( ) A、抗虫基因 B、抗虫基因产物 C、新的细胞核 D、相应性状 5、转基因动物转基因时的受体细胞是( ) A、受精卵 B、精细胞 C、卵细胞 D、体细胞 6、基因工程中常见的载体是( ) A、质体 B、染色体 C、质粒 D、线粒体 7、水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中Asp、Gly、Ser构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是( ) A、促使目的基因导入宿主细胞中B、促使目的基因在宿主细胞中复制 C、使目的基因容易被检测出来 D、使目的基因容易成功表达 8、运用现代生物技术的育种方法，将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中，培育出转基因抗虫的油菜品种，这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白质，对菜青虫有显著抗性，能大大减轻菜青虫对油菜的危害，提高油菜产量，减少农药使用，据以上信息，下列叙述正确的是( ) A、Bt基因的化学成分是蛋白质 B、Bt基因中有菜青虫的遗传物质 C、转基因抗虫油菜能产生杀虫蛋白是由于具有Bt基因 D、转基因抗虫油菜产生的杀虫蛋白是无机物 9、人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A、大肠杆菌 B、酵母菌 C、T 噬菌体 D、质粒DNA 4 10、不属于质粒被选为基因运载体的理由是（） A．能复制 B.有多个限制酶切点C．具有标记基因D．它是环状DNA
基因工程试题及答案
基因工程试题及答案 【篇一：基因工程题库以及答案】 因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是： (1)____________， (2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和 __________。 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。 5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。 8．限制性内切核酸酶bsuri和haeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．dna聚合酶i的klenow大片段是用_____________切割dna聚合酶i得到的分子量为76kda的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。 10．为了防止dna的自身环化，可用_____________去双链 dna__________________。 11．egta是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的t7 dna聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记dna的基本原理在于利用 _________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链dna分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化dna的合成外，还具有____________的作用，可以将dna- rna杂种双链中的___________水解掉。
基因工程实验考试试题(答案)
1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？ 答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。 2.如何正确使用微量移液器？ 答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。 3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？ 答：loading Buffer。主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。 溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。 4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。 答：①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂糖溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线； ④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。 5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75） 答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否； 6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31） 答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。 7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？ 答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。 8.提取DNA实验中，通常可选用哪些试剂沉淀DNA？ 答：冷的无水乙醇、冷的异丙醇、终浓度为0.1～0.25mol/L 的NaCl 9.简述在DNA提取实验中个试剂的作用（SDS，EDTA，酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇，70%乙醇）。 答：SDS——破坏细胞膜，解聚核蛋白；EDTA——整合金属离子，抑制DNase活性；酚/氯仿/异戊醇——见第7题；无水乙醇——沉淀DNA；70%乙醇——洗涤DNA沉淀。 10.简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用（Mg2+，dNTP，引物，DNA，缓冲液，Taq DNA聚合酶）。 答:(1)利用半保留复制的原理，以待扩增的DNA为模板，通过一系列酶在体外引物介导下，
2015-2017基因工程高考题附答案
选修3——基因工程高考题 1．（2017?新课标Ⅰ卷.38）（15分） 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A（有内含子）可以表达出某种特定蛋白（简称蛋白A）。回答下列问题： （1）某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是_____________________________________________。 （2）若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用______________作为载体，其原因是_______________________________________________________________。（3）若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比，大肠杆菌具有_____________________________________________________（答出两点即可）等优点。 （4）若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是___________________（填“蛋白A 的基因”或“蛋白A的抗体”）。 （5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是_______________________________________________________________________________。2．（2017?新课标Ⅱ卷.38）（15分） 几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题： （1）在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是________________________________。提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是______________________________________。 （2）以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是________________________________。 （3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是________________________________________________________（答出两点即可）。（4）当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是__________________________。 （5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是____________________________________________。 3.（2017?新课标Ⅲ卷.38）（15分）编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。 回答下列问题： （1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是_____________________________________________________________。（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为________________，加入了________________作为合成DNA的原料。 （3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。 ①由图2 可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是________________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是________________________。 ②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少______________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。 4．（2017·天津理综卷9）（20分）玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤I、II试验。 Ⅰ．获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。 （1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是______（单选）。 ①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点 ②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
基因工程原理练习题及其答案
基因工程原理练习题及其答案 一、填空题 1．基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是：(1)____________，(2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。 4．碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用________________、_______________、______________________________。 5．同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。7．第一个分离的限制性切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性切核酸酶是_____________。 8．限制性切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)____________；(2)________________的活性。10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。11．EGTA是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有____________的作用，可以将DNA- RNA杂种双链中的___________水解掉。 16．基因工程中有3种主要类型的载体：_______________、_____________、______________。 17．就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18．琼脂糖凝胶的分辨力与胶浓度的关系是。 19．如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称为________________。20．影响限制性切酶活性的因素________________、________________、________________、________________。 21．连接反应的实用温度为________________。 22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过 和两种质粒改造而来。它的复制子来自，Amp 抗性基因则是来自。
基因工程作业题及答案
第二章 1. 名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶 答： 核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。 核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。 同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。 同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。 核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。 末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA 3’-OH端随机 添加dNTPs的酶 2. 限制性内切核酸酶的命名原则是什么？ 答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号； 首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写； 第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写； 第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写； (2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。 第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。 顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。 3．部分酶切可采取的措施有哪些？ 答：1）缩短保温时间 2）降低反应温度 3）减少酶的用量 4. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp 的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么? 答：回文序列是：5'-CATA TG-3， 5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响? 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松 动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因 条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星 活性。 概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性 内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如 Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 第三章 1．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体? 答：①删除λ噬菌体的非必需区，留出插入空间；并在余下的非必须区内制造限制酶切点 ②引进某些突变表型，作为选择标记 ③突变某些基因，使它成为安全载体 ④删除λDNA必须区段上常用的限制酶切点