iTRAQ技术

同位素相对标记与绝对定量技术（iTRAQ 技术）

简介：

iTRAQ 技术（同位素相对标记与绝对定量技术）是近年来最新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术能够得到：一般500至600种蛋白，以及不同样品间蛋白质表达的差异。 。i TRAQ 试剂盒包括八种同量的胺活性试剂，能对蛋白质水解的肽段进行标记，因此采用串联质谱方法，可以对肽段进行精确的鉴别和定量。

应用：

? 同时标记8个样品，一次实验实现多达8个样品的蛋白质鉴定和定量 ? 非常高的通量

? 可以进行多个时间点蛋白质组动态变化的监测，

? 可以分析详细分期／型的临床疾病样本，并可设计样本重复

? 甚至可以进行个体样本的研究

? 细胞周期、细胞信号传导整个过程的蛋白质组动态学

技术特点和优势

? 定量敏感、反应速度快

? 标记完全，标记效率高达97%以上

? 较高的重复性，能简化谱的复杂程度、提高离子强度

? 可对多达八种不同样本同时进行定量分析

? 定性与定量同时进行

实验大致流程：

操作时首先是对不同蛋白质样品分别进行酶解，并采用不同的标记对酶解片段进行标记后混合，结合多维色谱分离和后续的串联质谱鉴定，从而实现对不同来源样品蛋白进行分离和鉴定的目的，我们可以提供8重标记iTRAQ 标记，可以对多达8种不同样本同时进行定量分析。

原理：

i TRAQ 试剂包含八种不同的胺活性试剂。每种胺活性试剂与水解后肽段结合。胺活性试剂包含报告基团和平衡基团。

下图为整个的实验流程：

1.不同的蛋白质样品S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7和S8,首先分别进行蛋

白酶水解（通常为胰蛋白酶Trypsin）.

2.采用不同的标记对酶解片段进行标记后混合。

3.使用液体色谱和质谱的联用进行一级质谱。

4.8个不同来源的，同一蛋白的同一个标记肽段在一级质谱上表现为一个

峰。

5.对加入标记的肽段进行二级质谱，这时，平衡基团从报告基团上脱落。

6.二级质谱后，报告基团在二级质谱低质量区域产生8个报告离子信号：

113、114、115、116、117、118、119和121，其强度分别代表8个标记的样品的同一个肽段。

7.报告离子的峰面积比值就是同一蛋白质同一肽段在不同样品间的比值.

（1）所得到的一级质谱图（MS）：下图

（黄色部分为报告基团的峰，因为横坐标比例大，没显示出多条峰）

（3）下图为上图的黄色部分报告基团的峰的放大图（横坐标的数量

级小，所以显示出多个单峰）

8、对质谱仪所得的数据进行生物信息分析，定性和定量研究。

所使用的部分搜索软件与网址：

SEQUEST https://www.wendangku.net/doc/ea4428528.html,

MASCOT https://www.wendangku.net/doc/ea4428528.html,

pFind https://www.wendangku.net/doc/ea4428528.html,/