生物技术概论
第二章《基因工程》复习题
一、选择题
1. 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是（D）
A 修复自身的遗传缺陷
B 促进自身的基因重组
C 强化自身的核酸代谢
D 提高自身的防御能力
2.生物工程的上游技术是（D）
A 基因工程及分离工程
B 基因工程及发酵工程
C 基因工程及细胞工程
D 基因工程及蛋白质工程
3. 基因工程操作的三大基本元件是:(I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体) （A）
A. I + II + III
B. I + III + IV
C. II + III + IV
D. II + IV + V
4. 多聚接头（ Polylinker ）指的是（A）
A. 含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工 DNA 片段
B. 含有多种复制起始区的人工 DNA 片段
C. 含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段
D. 含有多种启动基因的人工 DNA 片段
5.下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是（D）
A. GAAACTGCTTTGAC
B. GAAACTGGAAACTG
C. GAAACTGGTCAAAG
D. GAAACTGCAGTTTC
6. 若将含有 5' 末端 4 碱基突出的外源 DNA 片段插入到含有 3' 末端 4 碱基突出的载体质粒上，又必须保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶是（D）I T 4 -DNA 聚合酶 II Klenow III T 4 -DNA 连接酶 IV 碱性磷酸单酯酶
A. III
B. I + III
C. II + III
D. I + II + III
7.下列有关连接反应的叙述，错误的是（A）
A. 连接反应的最佳温度为 37 ℃
B. 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%
C. 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mM
D. 连接酶通常应过量 2-5 倍
8. T4-DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是（D）
A. 2' -OH 和 5' –P
B. 2' -OH 和 3' -P
C. 3' -OH 和 5' –P
D. 5' -OH 和 3' -P
9. 载体的功能是(I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力) （D）
A. I
B. I + III
C. II + III
D. I + II + III
10.克隆菌扩增的目的是 (I 增殖外源基因拷贝 II 表达标记基因 III 表达外源基因) （D）
A. I + II
B. I + III
C. II + III
D. I + II + III
11. 下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是（C）
A. 大肠杆菌－繁殖迅速
B. 枯草杆菌－分泌机制健全
C. 链霉菌－遗传稳定
D. 酵母菌－表达产物具有真核性
12.考斯质粒（cosmid）是一种（B）
A. 天然质粒载体
B. 由λ -DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体
C. 具有溶原性质的载体
D. 能在受体细胞内复制并包装的载体
13. 某一重组 DNA （ 6.2 kb ）的载体部分有两个 SmaI 酶切位点。用 SmaI 酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmaI 酶切位点共有（D）
A.4 个
B. 3 个
C. 2 个
D. 至少 2 个
14. 外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是 (I 融合基因能稳定扩增 II 融合蛋白能抗蛋白酶的降解 III 表达产物易于亲和层析分离 ) （D）
A.III
B. I + II
C. I + III
D. II + III
15.提高重组率的方法包括 (I 加大外源 DNA 与载体的分子之比 II 载体分子除磷 III 连接酶过量 IV 延长连接反应时间) （A）
A. I + II
B. I + II + III
C. I + III + IV
D. II + III + IV
16.识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（ B ）
A.同工酶
B.同尾酶
C.同裂酶
D.同位酶
17.pBR322质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（ ABD ）
A.AmP r和Tet r
B.ori复制子
https://www.wendangku.net/doc/e516801925.html,cZ标记
D.多克隆位点
18.λ噬菌体外包装目的基因片段的大小应为（ D ）
A.小于λ噬菌体DNA的50%
B. 小于噬菌体DNA的75%
C.大于λ噬菌体DNA的105%
D.为λ噬菌体DNA的75%～105%
19.DNA连接酶的功能是 ( AB )
A.恢复3’-OH与5’-P之间的磷酸二酯键
B. 恢复缺口
C.恢复裂口
D.可使平末端与粘性末端连接
20.PUC质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件 ( A B C D )
A.AmP r
B.ori复制子
https://www.wendangku.net/doc/e516801925.html,cZ标记
D.多克隆位点
21.下列属于获取目的基因的方法的是( D )
①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取
③从受体细胞中提取④利用PCR技术
⑤利用DNA转录⑥人工合成
A.①②③⑤
B.①②⑤⑥
C.①②③④
D.①②④⑥
22.的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是 B A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性
B．有利于对目的基因是否导入进行检测
C．增加质粒分子的分子量
D．便于与外源基因连接
23. 有关基因工程的叙述正确的是 D
A．限制酶只在获得目的基因时才用
B．重组质粒的形成是在细胞内完成的
C．质粒都可作为运载体
D．蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料
24.哪项不是基因表达载体的组成部分( B )
A.启动子
B.终止密码
C.标记基因
D.目的基因
25.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法( B )
A．基因枪法 B．显微注射法
C.农杆菌转化法 D．花粉管通道法
26.以下说法正确的是（ C ）
A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列
B、质粒是基因工程中唯一的运载体
C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接
D、基因控制的性状都能在后代表现出来
27.不属于质粒被选为基因运载体的理由是（ D ）
A、能复制
B、有多个限制酶切点
C、具有标记基因
D、它是环状DNA
28.有关基因工程的叙述中，错误的是（ A ）
A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来
B、限制性内切酶用于目的基因的获得
C、目的基因须由运载体导入受体细胞
D、人工合成目的基因不用限制性内切酶
29.有关基因工程的叙述正确的是（ D ）
A、限制酶只在获得目的基因时才用
B、重组质粒的形成在细胞内完成
C、质粒都可作为运载体
D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料
30.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（ C ）
A、人工合成目的基因
B、目的基因与运载体结合
C、将目的基因导入受体细胞
D、目的基因的检测和表达
31.下列获取目的基因的方法中需要模板链是（ B ）
A.从基因文库中获取目的基因
B.利用PCR技术扩增目的基因
C.反转录法
D.通过DNA合成仪利用化学方法人工合成
32.下列有关基因工程的叙述中，错误的是 AC
A 、DNA连接酶将粘性末端的碱基对连接起来
B、基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子
C、基因治疗主要是对有缺陷的进行修复
D、蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因提供资料
二、是非判断题
1.DNA连接酶是一种能催化二条DNA链之间形成磷酸二酯键的酶，因此该酶既可修复基因序列中的缺口，也可修复裂口。（×）
2.质粒提取后，在琼脂糖电泳出现一条带时说明质粒提取纯度高，当为三条带时为纯度不高。（×）
3、入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点，替换型载体有2个成对的限制性酶切点。（√）
4、原核细胞和真核细胞转录的mRNA均具有与rRNA结合的SD序列，以利于进行有效的转录。（×）
5、 cDNA文库是包含有细胞中所有mRNA，因此该文库能包含细胞所有的遗传信息。（ X ）
三、填空题
1、在LacI标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显白色，为阳性克隆，未插入基因的克隆显蓝色，为阴性克隆。
2、理想的质粒克隆载体应具备以下基本条件，如能自主复制、一种或多种限制酶的酶切位点、筛选标记、分子量小易拷贝。
3、点突变的基因系列在碱基替换中，若为一个嘌呤换成另一个嘌呤或一个嘧啶换成另一个嘧啶者称转换，若一个嘌呤换成一个嘧啶或一个嘧啶换成一个嘌呤者称颠换。
4、基因表达的四大表达系统分别为大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞。
5、基因与载体的平末端连接方法有哪些T4连接酶连接法。末端核苷酸转移酶加同聚物尾巴后，再用DNA连接酶进行连接；化学合成衔接物后连接DNA分子。
5、目的基因与载体连接方式有哪些1) 粘性末端连接；2）平头末端连接； 3）人工接头法； 4）同源多聚尾连接法
6、如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆？抗性标记筛选；抗性基因插入失活筛选；LacZ基因失活筛选。
7、核酸操作的基本技术有哪些①核酸提取与纯化②核酸的检测与保存③核酸的凝胶电泳④核酸分子杂交
8、基因工程所需的基本条件1、用于核酸操作的工具酶；2、用于基因克隆的载体；3、用于基因转移的受体菌或细胞。
9、Klenow酶在有 dNTP 情况下，呈现DNA聚合酶活性，在没有dNTP 情况下呈现外切酶活性。
10、利用PCR技术扩增目的基因
①概念：PCR全称为_____聚合酶链式反应__________，是一项在生物__体外__复制____特定DNA片段___的核酸合成技术
②原理：__DNA复制________
③条件：_____已知基因的核苷酸序列______四种脱氧核苷酸______一对引物______、
_____DNA聚合酶____________________.前提条件：
④方式：以_指数____方式扩增，即__2n__（n为扩增循环的次数）
⑤结果使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增
11．PCR技术扩增过程
a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板
在热作用下，氢键断裂，形成____单链DNA
b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部__双链______。
c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的__DNA链______。
四、名词解释
1.同尾酶某些限制性内切酶识别的碱基顺序不同，但酶切后产生同样粘性末端的两种酶
2.柯斯（C0S）质粒带有λ噬菌体的COS位点和整个pBR322的DNA顺序的大肠杆菌质粒。
3.SD序列为mRNA能在细菌核糖体上产生有效结合和转译的特殊序列。
4.质粒不亲和性：在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象。
5.cDNA文库：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。
6.穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。
7.基因(gene) 具有特定功能的DNA片段，这些片段有的编码蛋白质，有的编码rRNA、tRNA，有的则是与复制、转录调控有关的DNA序列。
8.基因重组: 由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合，形成新DNA 分子的过程。
9.基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。
是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的新的生物类型和生物产品
10.目的基因(objective gene)：又叫靶基因(target gene)，是指根据基因工程的目的,设计的所需要的某些DNA分子片段，它含有一种或几种遗传信息的全套密码(code)
五问答题
1.真核细胞基因组中的基因常有内含子存在，能否在原核细胞中表达？能，为什么？不能，为什么？
不能，因为原核细胞缺乏对真核基因中内含子的剪接功能和转录后加工系统。原核生
物必须有相应的原核RNA聚合酶可识别原核细胞的启动子, 以催化RNA的合成。
基因表达是以操纵子为单位，操纵子由数个相关的结构基因和调控功能的部位组成的。因此在构建原核表达载体时必须有1个强的原核启动子及其两侧的调控序列。
2.质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？
目的基因片断与载体由相同的单一限制性核酸内切酶（如EcoRI）消化酶切后, 两者的
两端均具有相同的粘性末端, 称为单酶切点的粘性末端, 又称全同源性粘性末端
⑴高背景
载体经单一限制性核酸内切酶切割后, 载体分子易于自我环化, 既不利于目的基因的重组连接, 大大降低阳性克隆效率, 又可使非重组性载体造成高背景。为了防止载体的自我环化，通常用碱性磷酸酶去除载体粘性末端的5’-P以抑制DNA的自我环化。在连接反应中, 具有5’-P，的目的基因DNA片断可有效地与去磷酸化质粒DNA载体通过粘性末端发生互补连接, 尽管产生的重组DNA分子于连接点含有两个缺口的开环分子,尽管在转化时其转化效率高于线性低于闭和环, 但转化大肠杆菌后,在菌体内其缺口可获得修复。
⑵双向插入
经单一限制核酸内切酶（如EcoRI）切割的目的基因和载体, 因二者的粘性末端是相同的, 因此在连接反应中, 目的基因可发生双向插入, 载体对目的基因表达是有方向的, 而目的基因可双向与之相连, 这种连接若以克隆目的基因片段为目的没有影响, 若以表达为目的, 我们就要对插入的片段进行方向鉴定, 因目的基因由起始密码子向终止密码子方向表达是定向转录的, 一旦启动子与目的基因编码顺序方向相反就不能正确转录目的基因的mRNA。若构建表达DNA重组体选用双酶切切割目的基因和载体，可使目的基因与载体的连接发生定向连接重组, 以便定向克隆。
3.将外源性DNA克隆到 -LacZ区段的插入型噬菌体上后，如何筛选重组噬菌体？
β-半乳糖苷酶失活的插入型载体，在其基因组中含有一个大肠杆菌的lacZ区段，此区段编码有β-半乳糖苷酶基因lacZ，在诱导物IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）存在下，β-半乳糖苷酶能作用X-gal(5-溴-4-氯3-吲哚-β-D-半乳糖苷)形成蓝色化合物（5-溴-4-氯靛蓝）。这样由这种载体感染的大肠杆菌lac-指示菌（lac基因缺陷菌），涂布在补加有IPTG 和X-gal的培养基平板上，会形成蓝色的噬斑，但若在lacZ区段上插入外源DNA片段，就会阻断β-半乳糖苷酶基因lacZ的编码序列，这种λ重组体感染的lac-指示菌由于不能合成β-半乳糖苷酶，只能形成无色的噬菌斑，相反未发生外源基因插入则出现蓝色噬菌斑，以利筛选。
4.基因与载体的平末端连接方法有哪些？简要或图示说明均可。
（1）T4DNA连接酶法
连接平末端DNA分子的方法有2种，一种是直接用T4连接酶连接，另一种是先用末端核苷酸转移酶给平末端DNA分子加上同聚物尾巴之后再用DNA连接酶进行连接。T4DNA连接酶同一般的大肠杆菌DNA连接酶不同。T4DNA连接酶除了能够封闭具有3’-OH和5’-P末端的双链DNA的缺口之外,在存在ATP和加入高浓度酶的条件下,它还能够连接具有完全配对碱基的平末端DNA分子,但其连接效率比粘性端要低的多。
（2）同聚物加尾法
运用末端核苷酰转移酶，能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3’-OH基因上,它并不需要模板链的存在,它一个一个加上核苷酸,构成由核苷酸组成的尾巴,长度可达100个核苷酸。
5.如何从所克隆到基因重组体中鉴定目的基因的存在和正确性？
根据插入基因的遗传性状进行筛选
只有当已知需克隆基因所编码蛋白质的功能, 且该蛋白质又为细菌的生命活动所必需时, 即可用该方法筛选。如：已知蛋白质中的亮氨酸（Leu）为Leu营养缺陷菌所必需, 当外源目的基因可表达亮氨酸, 将该基因的重组子转入Leu缺陷菌中, 在不含亮氨酸的基本培养基平板中, 只有重组子表达的亮氨酸才能被Leu缺陷菌所利用而能生长繁殖,形成菌落。因而能生长的细菌集落，均为阳性的重组子克隆，而无该重组子的Leu缺陷菌在不含亮氨酸的平板上则不能生长，不能形成菌落。
根据重组子的结构特征筛选
(1). 重组子大小鉴别筛选
重组子中因装有一段较大分子量的外源基因DNA, 因此其分子量明显比原载体大得多, 因此可从平板上挑取菌落分别提取重组载体（如质粒重组子）和原载体（质粒），无需用限制性内切酶消化，直接进行凝胶电泳，携带外源性目的基因的重组子质粒因分子量大，电泳迁移率较小，其电泳条带在后，而原载体质粒因分子量较小，电泳迁移率较大，其电泳条带在前。通过比较可初步判断重组子中是否插入外源基因片段。本方法适用于插入片段较大的重组子的初步筛选。
(2). 酶切鉴定
对于筛选出的具有重组子的菌株，应经小量培养后，再分别提取原载体或重组体载体（重组质粒或重组噬菌体DNA），根据已知重组时外源基因两端的酶切位点，分别用相应的两种内切酶进行酶解，经琼脂糖电泳后，原载体因无外源性目的基因，切开后变成线性，电泳呈一条带，若载体上有外源性目的基因插入，切开后电泳出现两条带：一条为载体质粒线性条带，一条为释放出的插入基因片断的小分子条带，这样就可以看出载体中是否有插入的目的基因片断，以及由DNA marker条带对比分析可得知插入基因片段的大小
(3). 目的基因序列测定
6.基因工程诞生的理论基础是什么？
是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。
理论上的三大发现：
①证实了DNA是遗传物质
②揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理
③遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定
技术上的三大发明：
①限制核酸内切酶的发现与DNA切割
②DNA连接酶的发现与DNA片段的连接
③基因工程载体的研究与应用
7.如何有效地提高外源基因的表达效率？
⑴提高启动子强度⑵缩短启动子同克隆基因间距离⑶高效的翻译起始序列⑷高效的转录终止区⑸提高质粒拷贝数及稳定性⑹用以下方法提高翻译水平：①调整SD 序列与AUG间的距离②用点突变的方法改变某些碱基③增加mRNA的稳定性的⑺减轻细胞的代谢负荷：①诱导表达②表达载体的诱导复制⑻提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：①克隆一段原核序列，表达融合蛋白②采用某种突变菌株③表达分泌蛋白质
8.大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？
优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。
缺点：在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。
9.什么是α-互补筛选？
质粒载体具有β-半乳糖苷酶基因（lac Z），当外源DNA插入到它的lac Z，可造成表达后的β-半乳糖苷酶失活，利用这一点就可以通过大肠杆菌转化子菌落在添加有X-gal-IPTG 培养基中的颜色变化鉴别出重组子和非重组子。有些大肠杆菌上带有lac Z基因的部分编码序列，质粒载体中含有别一部分编码序列，当质粒转入载体后，可形成具有酶活性的蛋白质。这种lac Z基因上缺失了一部分编码序列的突变体与带有这一部分编码序列的突变体之间实现互补的现象叫α互补。
10.真核细胞基因结构和原核细胞的有何相同点和不同点？
1）相同点：
都是由能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区组成。
2）不同点：
原核细胞基因的编码区是连续的，真核细胞基因的编码区是间隔的，不连续的。
11.基因克隆常用的载体必须具备的基本条件？
⒈具有独立复制能力
⒉具备多个限制酶的识别位点(多克隆位点)
⒊具有遗传表型或筛选标记
⒋有足够的容量以容纳外源DNA片段
⒌可导入受体细胞。
《细胞工程》复习题
一、选择题：
1．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（Ｂ）
A．结果是相同的
B．杂种细胞的形成过程基本相同
C．操作过程中酶的作用相同
D．诱导融合的手段相同
2. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞
诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在
这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ C ）
①淋巴细胞
②小鼠骨髓瘤细胞
③B淋巴细胞自身融合细胞
④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞
⑤杂交瘤细胞
A．②④ B．①③⑤
C．①②③④ D．②③
3．动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的有（ D ）A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段完全相同
C．所采用的原理完全相同D．都能形成杂种细胞
4.单克隆抗体是指（ C ）
A．单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体
B．单个B淋巴细胞增殖产生的抗体
C．单个杂交瘤细胞增殖产生的抗体
D．单个抗体通过克隆化，产生大量抗体
5.将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体，其依据是（多选）（AC ）A．B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖
B．B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体
C．骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体
D．骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖
6.要想获得大量的单克隆抗体就必须用单个的B淋巴细胞进行无性繁殖，形成细胞群。其原因是（ D ）
A．在体外培养条件下B淋巴细胞可以无限增殖
B．在动物体内B淋巴细胞可产生多达百万种以上的抗体
C．每一个B淋巴细胞都参与特异性免疫反应
D．每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
7.关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是（D ）
A、可以制成诊断盒．用于疾病的珍断
B、可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗
C、可以利用基因工程技术生产
D、可以在生物体内生产，不能体外生产
8. 以下不属于生长素的是(D)
A IAA
B NAA
C 2,4-
D D 6-BA
9.植物细胞有而动物细胞没有的结构是(D)
A细胞质 B线粒体 C内质网 D叶绿体
10.拥有接触抑制的是(B)
A原核细胞 B动物细胞 C植物细胞 D真核细胞
11.产生自胸腺的淋巴细胞是(A)
A T淋巴细胞
B B淋巴细胞
C C淋巴细胞
D G淋巴细胞
12.细胞直接摄取外源DNA的过程叫(B)
A转导 B转化 C转移 D转入
13.世界上第一种克隆成功的生物是(C)
A牛 B人 C羊 D鸡
14.培养基中可能含有血清的是(A)
A动物细胞培养基 B植物细胞培养基 C愈伤组织培养基 D微生物培养基
15.以下不是动物细胞生物制药的是(D)
A干扰素 B单克隆抗体 C病毒疫苗 D人工胚乳
16.下列不是干细胞特征的是(B)
A对称分裂 B无限增殖 C缓慢性 D自稳性
17.离体培养的动物细胞分为以下类型，除了(B)
A贴壁依赖型 B瓶底依赖型 C兼性贴壁细胞 D悬浮型
18.植物体细胞融合完成的标记是（A ）
A 产生新的细胞壁
B 细胞质发生融合
C 细胞膜发生融合
D 细胞核发生融合
19.人工获得一个杂种植株，需要下列哪项步骤（ A ）
A 分离原生质体诱导原生质体融合组织培养得到杂种植株
B 分离原生质体原生质体融合杂种植株
C 获取细胞原生质融合组织培养杂种植株
D 获取细胞原生质直接融合组织培养
20.植物体细胞杂交尚未解决的问题是 C ）
A 去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体
B 将杂种细胞培育成植株
C 让杂种细胞按照人们的需求表现出亲代的优良性状
D 尚未培育出属间杂种植物
21.动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于：( A )
A．培养基不同；
B．动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；
C．动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；
D．动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。
22．单克隆抗体与血清抗体相比，优越之处在于：( C )
A．单克隆抗体能够制成“生物导弹”；
B．单克隆抗体可以在体外制备；
C．单克隆抗体的特异性强，灵敏度高，产量也大大高于血清抗体；
D．单克隆抗体的制备过程简单。
23.诱导试管苗生根时，培养基的调整应（ D ）。
A、加大盐的浓度
B、加活性炭
C、加大分裂素的浓度
D、加大生长素的浓度
24.植物体细胞杂交可以解决不同生物之间的（ B ）问题。
A、亲缘关系远
B、生殖隔离
C、地理隔离
D、组织分化
25.植物体细胞杂交尚未解决的问题有：( C )
A、去掉细胞壁,分离出有活力的原生质体
B、将杂种细胞培育成植株
C、让杂种植物按照人们的需要表现出亲代的优良性
D、尚未培育出属间杂种植物
26.不能人工诱导原生质体融合的方法是：( D )
A、振动
B、电刺激、
C、PEG试剂、
D、重压
27.植物组织培养形成的愈伤组织进行培养，又可以分化形成根、芽等器官，这一过程称为：( C )
A、脱分化
B、去分化
C、再分化
D、脱分化或去分化
28.当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，下列有可能使其表现出全能性，发育成完整的植株的是（ D ） A、细胞分裂素
B、生长素
C、一定的营养物质
D、以上三者均是
29.细胞工程是一门综合科学技术。下列哪项技术不属于细胞工程（ A ）
A、有性杂交
B、体细胞杂交
C、组织培养
D、细胞核移植
30.在生物体的所有细胞中，全能性最高的是( D )
A、卵细胞
B、植物花粉
C、体细胞
D、受精卵
31.在生物体内，细胞没有表现出全能性，而是分化为不同的组织、器官，是因为（ B ）
A.细胞丧失了全能性
B.基因的表达有选择性 C、不同的细胞内基因不完全相同
D、在个体发育的不同时期，细胞内的基因发生了变化
32.植物体细胞杂交尚未解决的问题是（ B ）
A、去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体
B、让杂种植物按照人们的需要表现出亲代的优良性状
C. 杂种细胞培育成植株
D、尚未培育出属间杂种植物
33. 通过细胞杂交,获得一个杂种植株,需要的步骤是( A )
A.分离原生质诱导原生质融合生出细胞壁组织培养法得到杂种植株
B.分离原生质原生质自然融合组织培养杂种植株
C.获取细胞原生质融合组织培养杂种植株
D. 获取细胞原生质直接融合组织培养杂种植株
34.在一个生物体内，细胞没有表现出全能性，原因是（ C ）
Ａ．细胞失去了全能性Ｂ．细胞中的基因部分丢失
Ｃ．细胞中的基因选择性表达Ｄ．细胞中的基因变异不同
35.植物细胞融合完成的标志的是（ A ）
A、产生新的细胞壁
B、细胞膜发生融合
C、细胞质发生融合
D、细胞核发生融合
36.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞
诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在
这种培养基上能存活增殖的细胞是（ D ）
A淋巴细胞
B小鼠骨髓瘤细胞
CB淋巴细胞自身融合细胞
D杂交瘤细胞
37.动物细胞培养的特点（ A ）
①细胞贴壁②有丝分裂③细胞分化④接触抑制⑤减数分裂⑥原代培养一般传1－10代
A、①②④⑥
B、②③④⑤
C、①③④⑥
D、③④⑤⑥
38.一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（ D ）
①无毒的环境②无菌的环境③培养基需要加入血清④温度与动物体温相似⑤需要O2，不需要CO2 ⑥CO2能调节培养液PH
A、①②③④⑤⑥
B、①②③④
C、①③④⑤⑥
D、①②③④⑥
39.在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（ B ）
A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞分泌蛋白
B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散
C、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡过程中
D、培养至50代后传代细胞遗传物质没有发生改变
40.动物细胞工程技术的基础是（ D ）
A.动物细胞融合
B.单克隆抗体
C.胚胎移植
D.动物细胞培养
二、是非题
1.植物体细胞杂交能够在一定程度上克服远缘杂交不亲和的障碍，大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围。（√）
2.秋海棠的叶、马铃薯的块茎\成熟的花粉、木质部中的导管细胞都能作为植物组织培养的材料（×）
3.细胞的全能性是指生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。但是不是生物体的每一个细胞都要包含有该物种所特有的全套遗传物质。（×）
4.愈伤组织的形成是离体植物细胞分裂的结果（√）
5. 组织的形成是离体植物细胞愈伤脱分化的结果（×）
三、填空题：
1.由A、B两种细胞人工融合成C细胞的过程中，常用PEG(聚乙二醇)(或灭活的病毒) 作为诱导剂。融合过程包括膜融合和核融合两方面，D细胞称为杂种细胞。
2.若由D细胞培育成植株，可用—植物细胞培养—技术，这一培养过程要经过脱分化和再分化两个阶段。目前，植物体细胞杂交还有许多理论和技术问题没有解决，如杂种植物还不能按照人们的需要表现出亲代的优良性状，从遗传学角度分析，其内在因素很可能是控制优良性状的基因还不能表达。
3.如需制备单克隆抗体，骨髓瘤细胞还应满足两个独特的性质：
①为了避免杂交瘤细胞分泌的抗体不纯，骨髓瘤细胞系自身不能具有产生抗体的能力；②用于融合的骨髓瘤细胞体内嘌呤核苷酸合成的补救途径必须丧失，即磷酸核糖转移酶或嘧啶核苷酸激酶的活力丧失。
4.细胞融合的方法有化学法，如（PEG诱导融合），物理法，如（电脉冲），生物法，如（仙
台病毒诱导细胞融合法）
5.人工种子的结构包括人工种皮外层、人工胚乳、胚状体或芽
6.干细胞的来源分为胚胎干细胞)和成体干细胞两大类
7. 糖在植物组织培养中是不可缺少的，作用体现在碳源、能源、维持渗透压
8.常用的生长素有___ NAA、IAA、2，4-D、_____ 等，常用的细胞分裂素__ 6-BA、KT、ZT__
9.植物细胞表现出全能性的必要条件是细胞离体、一定的营养物质、激素和其他外界条件
10.植物单细胞培养的方法有：平板培养；看护培养；微室培养；双层滤纸培养
11.动物细胞的融合方法主要有以下几种 1.病毒诱导融合; 2.化学融合剂诱导融合 ;
3.电场诱导融合
12. 植物体内的细胞为什么没有表现出全能性，而是分化成不同的组织器官，原因是基因在
特定时间和空间条件下选择性表达的结果。
四、名词解释：
1.细胞的全能性：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能，细胞的这种特性
2.人工种子：任何一种经人工种皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖体均可称之
为人工种子。
3.细胞融合：也称体细胞杂交，又叫无性杂交，是指利用现代科学技术，分别取出两种生物
的单个细胞，然后使这两种不同的生物细胞在同一培养器中，用无性的人工方法促使两者互
相凝集并发生细胞之间的融合，进而导致基因重组，产生能同时表达两个亲本细胞有益性状
的细胞杂交技术。
4.花粉培养：是将花粉从花药中分离出来,接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或
愈伤组织进而分化成植株的过程。
5.花药培养：是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚
或愈伤组织进而分化成植株的技术。
6.原生质体培养：是将植物的体细胞经过纤维素酶等处理后去掉细胞壁，获得的原生质体在
无菌培养基上上长、分裂，最终长成植株。
7.无血清培养基由基础培养基和替代血清的补充成分组成。
即：在基础培养基中补充各种必需因子，如激素、生长因子、结合蛋白、贴壁和扩展因子等。
8.单克隆抗体：如果把能分泌某种特异抗体的一个B型淋巴细胞分离出来，通过纯种培养，所产生的抗体则只有一种，可以特异地和体内一种抗原结合，这种单一的特异性抗体即为单一B细胞克隆抗体，即单克隆抗体，简称单抗。
9.干细胞：未分化的细胞，是一类具有自我更新和分化发育潜能的原始细胞.可分为胚胎干细胞和组织干细胞
10.接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。
五、问答题：
1.什么是细胞的全能性?为什么？什么细胞的全能性最强？
细胞的全能性是指生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。原因是生物体的每一个细胞都要包含有该物种所特有的全套遗传物质。受精卵的全能性最强。其次是生殖细胞，再次是体细胞
2．为什么运用植物组织培养技术能把植物离体器官、组织或细胞培养成完整植物体?
科学研究表明，当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。科学家用植物组织培养的方法，已经把许多种植物的离体的器官、组织或细胞，培养成了完整的植物体。
3．表现全能性的基础和条件
基础：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传信息，都有发育成为完整个体所必需的全部基因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。
条件：①离体
②提供营养物质
③激素
④其他适宜条件（如温度等）
4.萝卜根细胞培养产生出完整植株，克隆羊“多莉”的诞生说明了什么？
高度分化的植物细胞仍然有发育成完整植株的能力；高度特化的动物细胞的细胞核仍然有全能性。受精卵的全能性最高；卵细胞仍具有较高的潜在全能性；体细胞的全能性比生殖细胞低的多。
5．决定植物细胞脱分化、再分化的关键因素是什么?
影响脱分化的一个重要因素是植物激素。当细胞分裂素与生长素共同使用时，能强烈促进愈伤组织的形成，而两者不同的浓度配比在再分化过程中，分别对诱导根或芽的产生起关键作用。当细胞分裂素与生长素浓度比高时，有利于芽的发生；浓度比低时，有利于根的发生。
6.胚状体是怎样形成的？培养胚状体有何意义？
愈伤组织的形态发生主要有不定芽方式和胚状体方式两种。而后者需要在愈伤组织形成后，
对其进行处理，形成分散的单个细胞，再诱导其分化出具有胚芽、胚轴、胚根的胚状体，进而发育成完整植株。诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构，包裹上人造种皮．制成人工种子可以解决有些作物品种繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问题。
7.如何大量生产单克隆抗体？
利用B淋巴细胞产生抗体的功能；利用肿瘤细胞无限增殖的特性；利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞；利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。
8.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？
哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。
9.一个成功的悬浮细胞培养体系应满足什么样的条件？
（1）悬浮培养物分散性良好，细胞团较小
（2）均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同。
（3）细胞生长迅速，悬浮细胞的生长量一般2～3天甚至更短时间便可增加一倍。
10.什么是HAT培养基？单克隆抗体制备过程中利用HAT培养基选择杂交瘤细胞的原理是什
么？
HAT是含一定浓度次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）及胸腺嘧啶核苷（T）的一种选择性培养基。
DNA合成途径有两种：从头合成和补救途径。免疫脾细胞没有培养特性，不能存活，瘤细胞从头途径被A阻断，自身是HPRT-或（TK-），补救途径被阻断，杂交瘤细胞可以通过融合的脾细胞弥补瘤细胞缺陷，从而在HAT培养基上存活。
11.动物细胞培养有什么特点？
动物细胞无细胞壁，多数动物细胞需附着在固体或半固体表面才能生长；动物细胞培养除了需要与微生物、植物细胞一样的培养基成分外，还需要血清成分，特别需要动物激素的存在；动物细胞培养对环境更敏感，培养条件的控制更为严格；反应器要适应无菌状态高密度、长时间培养。
发酵工程复习题
一、选择题：
1.厂用谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸，结果代谢产物没有谷氨酸而产生乙酰谷氨酰胺，其
原因是（）
A．温度控制不适 B．通气量过多 C. pH呈酸性 D.溶氧不足
2.青霉素生产的叙述,正确的是（ B）
A．青霉素是青霉菌生长代谢中重要的初级代谢产物
B．用紫外线、激光、化学诱变剂处理青霉菌再经筛选的方法可以选育高产菌种
C．发酵罐接种后必须进行灭菌处理
D．在青霉菌生长的稳定期，活菌数不再增加，青霉素产量也不再增加
3.有关谷氨酸棒状杆菌的生长和谷氨酸发酵的叙述．错误的是（ B）
A．组成酶是维持菌体基本生活的必要条件
B．菌体能合成各种生长因子，不需要从外界补充
C．发酵液pH呈酸性时，就会生成乙酰谷氨酰胺
D．细胞膜透性的改变，可解除代谢产物对有关酶活性的抑制
4.属于生长因子的是（ D ）
A 葡萄糖
B 蛋白胨
C NaCl
D 维生素
5.菌培养液中常含有一定浓度的葡萄糖，但当葡萄糖浓度过高时，反而会抑制微生物的生长，原因是（A ）
A．碳源供应太充足 B．细胞会发生质壁分离
C．改变了酵母菌的pH值 D．葡萄糖不是酵母菌的原料
6.作为生产菌种和科研材料的细菌群体，应该是代谢旺盛、个体形态和生理特性比较稳定的。所以应选择在它的（B ）
A 迟滞期
B 对数期
C 稳定期
D 衰亡期
7.与调整期缩短有关的因素中，最全面的一组是(C )
①用与菌种相同的培养基②营养丰富的培养基
③稳定期获得的菌种④对数期获得的菌种
⑤接种时间提前⑥接种量加大
⑦接种量减少⑧接种种类增多
A．①③⑤⑦B．②③⑤⑦
C．①④⑥D．②④⑤⑥⑧
8.谷氨酸发酵过程中，如果环境条件控制不当，则可能使代谢产物成为乳酸，那么乳酸是下列哪种条件下的产物（D ）
A．PH值过小B．PH值过大
C．溶氧过多D．溶氧不足
9.能影响发酵过程中温度变化的因素是（D）
A．微生物分解有机物释放的能量
B．机械搅拌
C．发酵罐散热及水分蒸发
D．A、B、C都对
10.应用发酵工程生产的产品不包括（D）
A．初级代谢产物B．次级代谢产物
C．单细胞蛋白质D．目的基因
二、名词解释：
1.发酵工程(fermentation engineering):研究发酵工业生产过程中，各个单元操作的工艺和设备的一门科学。发酵工程具体包括菌种选育、菌体生产、代谢产物的发酵以及微生物机能的利用等
2.培养基: 原料其化学成分明确、稳定适合于研究菌种基本代谢和过程的物质变化规律培养基营养单一，价格较高，不适合用于大规模工业生产
3.培养基: 80%～90%是水，其中配有可溶性的或不溶性的营养成分，是发酵工业大规模使用的培养基。
4.生理性酸性物质；生理性碱性物质
经微生物生理作用（代谢）后能形成酸性物质的营养物叫生理酸性物质，若菌体代谢后能产生碱性物质的营养物称为生理碱性物质
5.连续培养
指在向反应器中添加培养基的同时，从容器中放出等体积的培养液，就可以形成一个生产细胞的连续过程，即在培养器中所形成的新细胞数量与从容器中流失的细胞数目相等，反应体系达到稳态；
菌的积累速率=生长速率-流出速率,
6.抗生素：是生物在其生产活动过程中所产生，并能在低微浓度下有选择性地抑制或杀灭其他微生物或肿瘤细胞的有机物。
三、填空题：
1.发酵类型微生物菌体发酵；.微生物酶发酵；微生物代谢产物发酵；微生物转化发酵；生物工程细胞发酵
2.厌氧发酵：发酵是在厌氧条件下进行，如酒类发酵、酒精发酵、丙酮丁醇发酵、乳酸发酵；通风发酵：发酵是在通风条件下进行，如酵母菌生产、抗生素发酵、有机酸发酵、氨基酸发酵和酶制剂生产等。
3.常用工业微生物有细菌，放线菌、酵母、霉菌四大类。
4.微生物生长所需要五大要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、水
搅拌则能使新鲜氧气更好地与培养液混合，保证氧的最大限度溶解，并且搅拌有利于热交换，使培养液的温度一致，还有利于营养物质和代谢物的分散。此外，挡板则有助于搅拌，使其效果更好。
四、问答题：
1.自然界分离微生物的一般操作步骤？
样品的采取→预处理→培养→菌落的选择→初筛→复筛→性能的鉴定→菌种保藏
2.什么是培养基?发酵培养基的特点和要求？
培养基：广义上讲培养基是指一切可供微生物细胞生长繁殖所需的一组营养物质和原料。同时培养基也为微生物培养提供除营养外的其它所必须的条件。
发酵培养基的特点和要求
①培养基能够满足产物最经济的合成。
②发酵后所形成的副产物尽可能的少。
③培养基的原料应因地制宜，价格低廉；且性能稳定，资源丰富，便于采购运，适合大规
模储藏，能保证生产上的供应。
④/所选用的培养基应能满足总体工艺的要求，如不应该影响通气、提取、纯化及废物处理等。必须提供合成微生物细胞和发酵产物的基本成分。
3.用的碳源有哪些？常用的糖类有哪些，各自有何特点？
碳源:糖类（淀粉、葡萄糖、蔗糖等）、油脂（动、植物油）、有机酸（琥珀酸、柠檬酸、乳酸、乙酸等）和低碳醇（甲醇、乙醇等）。
葡萄糖，所有的微生物都能利用葡萄糖，但是会引起葡萄糖效应
糖蜜，是制糖生产时的结晶母液，它是制糖工业的副产物。主要含有蔗糖，总糖可达50%～75%。一般糖蜜分甘蔗糖蜜和甜菜糖蜜葡萄糖蜜。除糖份外，含有较多的杂质，其中有些是有用的，但是许多都会对发酵产生不利的影响，需要进行预处理。
淀粉、糊精，缺点：难利用、发酵液比较稠、一般>2.0%时加入一定的α-淀粉酶。成分比较复杂，有直链淀粉和支链淀粉等等。优点：来源广泛、价格低，可以解除葡萄糖效应。
4.的无机氮源和有机氮源有哪些？有机氮源在发酵培养基中的作用？
常用的有机氮源有花生饼粉、黄豆饼粉、酵母粉、蛋白胨等；常用的无机氮源有氨水、铵盐和硝酸盐。
有机氮源在发酵培养基中的作用有：除提供氮源外，有些有机氮源还提供大量的无机盐及生长因子。诱导某些酶的产生。