新型肥料双酶尿素研制开发成功

几种尿素酶法检查幽门螺旋杆菌的比较

几种尿素酶法检查幽门螺旋杆菌的比较 幽门螺旋杆菌是寄生在胃粘睽|上皮和粘 液之间的革兰氏阴性细菌，是引起慢性胃炎的主要致病因子，井在消化性溃疡的发生和复发过程中起重要的诱发作用，在慢性胃炎患者中，幽门螺旋杆菌的捻出率为s0嘶～ 7O缅：在胃溃疡患者中的检出率为60 ～80 j 而在十二脂肠溃疡患者中拴瑚率可达7o师一100 。我国的胃病发病率很高，白1985年国内首次分离出此菌以来，不少科研和医疗单位相继开展了此项研究。由于幽门螺旋杆菌能产生大量的尿素酶，分解尿素生成氨和 二氧化碳，因而就使试剂的尿素浓度下降，氯浓度升高，导致试剂pH的改变，使试剂变为红色。 根据幽门螺旋杆菌产生尿素酶的特性， 现已发展了多种对胃内尿素酶检查的方法，以检测患者是否有幽门螺旋杆菌的感染，Marsha]l曾研制出尿素琼脂药盒，当将胃粘膜标本故入药盒内，24小时后那可作出患者是否有幽门螺旋杆菌感染的诊断，Hazet!研 制了尿素液，并加在有孔的反应板上，即微滴法，，当放入胃粘膜后l8小时就可观查患者是否有幽门螺旋杆菌的盛染}随后Arvind 又研制了1分钟尿素酶试验法使反应时间 大为缩短．天律医学院流行病学教研室珊制了尿素酶试纸法，此法能在5 min内测出患 者是否有幽门螺旋杆菌的感染． 目前国内外已有多家生产尿素酶试验药 盒，但如何提高该药盒的敏感度，保持特 异性，使其达到准确，使用方便，反应快速可靠、价廉实用、便于运输和存放，延长有效期更适用于临床、仍然是主要研究课题．虽然橙查幽门螺旋菌的方法很多，如檄氧条件下做细菌培养I胃粘膜病理切片}化验血 清中有无幽门螺旋杆菌抗体I用同位素C 拯测法等，但屎素酶法由于简便易行，而优于其它方法。因此，普遍为临床所采用，是诊断幽门螺旋杆菌感染、筛选药物、观查疗效的理想工具。

脲酶活性的测定

大豆制品中脲酶活性的测定 定性法： 酚红法 一、原理： 酚红指示剂在pH 6.4-8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶在pH=7.0，T=30℃时可将尿素水解产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断脲酶活性的大小。 二、仪器和试剂： 粉碎机：粉碎时不产生强烈发热； 分析天平； 25ml纳式比色管； 恒温水浴锅； 0.1%酚红指示剂：0.1g苯酚红溶于100ml 95%乙醇溶液； 结晶尿素； 三、方法： 将试样粉碎，准确称取0.05±0.001g试样于25ml纳式比色管，加入0.2g结晶尿素及5滴酚红指示剂，加入25ml蒸馏水，摇动10s，立即置于30±0.5℃水浴锅中，开始计时，观察溶液颜色变化， 5min 后，取出比色管，摇匀，观察溶液颜色。 空白试验：不加尿素，其他同上。 品质判定：如果溶液为明显的粉红色，则认为该大豆制品脲酶活性超标，为不合格产品。

?0-1min变红，活性非常强（＞1.0）； ?1-2min变红，活性大概0.5-1.0； ?2-5min变红，活性大概0.3-0.5。 四、注意事项： 1.粉碎样品时，不应产生大量热，否则会影响结果判定； 2.称量样品时，一定要将样品混合均匀，否则会造成试验误差； 3.试样和空白试验同时操作，过程要迅速，防止时间影响。

尿素-酚红法 一、原理： 酚红指示剂在pH 6.4-8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶可将尿素水解产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红样品占所有样品的比例来判断脲酶活性的大小。 二、仪器和试剂： 表面皿； 0.2N氢氧化钠溶液：称取0.8g氢氧化钠溶于100ml蒸馏水； 1.0N硫酸溶液：移取7.0ml浓硫酸溶于500ml蒸馏水； 尿素-酚红试剂：用500ml烧杯将0.8g酚红溶于20ml 0.2N氢氧化钠溶液，用蒸馏水稀释至约300ml，加入60g尿素，并溶解之，转移至2L容量瓶，冲洗烧杯数次,加蒸馏水至约1.5L，加入9.4ml 1.0N 硫酸溶液，用蒸馏水定容至2L；此时溶液应具有明亮的琥珀色；（过段时间溶液会变为深橘红色，可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶液再次变为琥珀色） 三、方法： 将一满匙样品放入表面皿中，摊平，将以调好的尿素-酚红试剂滴入表面皿中的样品上，直至完全浸湿，停留5min，观察样品的颜色反应。如果红斑面积多于20%，则认为该样品脲酶活性超标，为不合格产品。 四、注意事项： 1.对于样品较粗、具有大块状的样品，最好将其稍微粉碎，亦不

山西省化肥、合成氨、尿素行业情况

山西省化肥、合成氨、尿素行业情况 化肥是重要的农业生产资源，是农业生产发展和国家粮食安全的重要保障。科学使用肥料可以提高土壤肥力，促进作物的生长，提高农业生产力。联合国粮农组织的资料显示，肥料对提高我国粮食生产能力的贡献率为45%-50%。化肥行业主要包括氮肥、磷肥、钾肥、复合肥等4个子行业。从产品结构来看，我国的化肥生产以氮肥为主（约占73%），所占比例远高于国际平局水平（60%），钾肥生产比例占（5%）则远低于国际水平（17%）。其中，国内氮肥以尿素为主，占氮肥总量的61%，而国际氮肥则基本为尿素。我省是国内化肥行业大省，产能占全国的1/10以上，为稳定粮食生产发挥了重要作用。 一、化肥产业链及分类 化肥行业主要包括基础化肥生产和化肥的二次加工，基础化肥主要包括的氮肥、磷肥、钾肥；化肥的二次加工主要包括复合肥、混配肥（含微量元素及有机、无机复合肥）

各类化肥主要分类 化肥包含类别 氮肥氮肥（64%）、硫酸铵、硝酸铵、氯化铵、碳酸氢铵等 磷肥磷酸一铵、磷酸二铵、硝酸磷肥、过磷酸钙 钾肥氯化钾、硫酸钾等 复合肥硝酸磷肥、磷酸铵、氮磷钾复合肥 二、我省化肥行业基本情况 我省化肥行业主要集中在晋东南地区，晋城、长治两市产能占全省产能的70%。已形成天脊集团、天泽集团、兰花集团、丰喜肥业、晋丰集团等五户百万吨级化肥生产企业，五大集团的化肥产量约占全省化肥产量的80%。 2013年1-8月，我省农用氮磷钾化肥产量254.3万吨（折纯），占全国的 5.9%，位居全国第五位。其中，尿素产量218.9万吨（折纯），占全国的12.8%，居全国第二。合成氨产量287.3万吨，占全国的8.7%，居全国第二。化肥行业共有18万吨合成氨、30万吨尿素生产装置17套。8万吨合成氨、13万吨尿素生产装置10套。 三、我省化肥、尿素、合成氨生产企业 到2013年1-8月，我省共有化肥生产企业37户，产能1035万吨（实物量），其中尿素生产企业17户，产能800万吨；碳酸氢铵生产企业12户，产能100万吨；硝酸磷肥生产企业1户，产能110万吨；复混肥生产企业3户，生产能力100万吨。合成氨生产企业23户，产能约500万吨。

植酸酶在饲料中的应用及其研究进展(精)

植酸酶在饲料中的应用及其研究进展 植酸酶是一种新型的、可作为动物饲料添加剂的重要酶制剂。它对提高饲料中磷利用率，提高动物的生产性能，以及减轻高磷粪便对环境水域的磷污染有重要意义。本文综述了植酸酶在饲料中的应用现状及工业化生产方法，讨论了其进一步的研究发展方向。 植酸酶是一种水解酶，它能将植酸磷（六磷酸肌醇）降解为肌醇和无机磷酸。此酶分两类：3-植酸酶和6-植酸酶。植酸酶广泛存在于植物和微生物中。磷在植物中的主要存在形式为植酸磷，由于植酸磷不能被单胃动物直接利用，从而造成磷源浪费和形成高磷粪便污染环境。另外，植酸磷还是一种抗营养因子，它在动物胃肠道的消化吸收过程中会与多种金属离子如Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe2+等以及蛋白质螯合成不溶性复合物，降低了动物对这些营养物质的利用。因此，开展饲用植酸酶的研究，对提高畜禽业生产效益及降低磷对环境的污染有重要意义。１植酸酶的来源及酶学性质 早在1907年Suzuki等就在谷粮中发现了具有植酸酶活性的磷酸酶。第一个纯化的植酸来源于麸皮，研究发现它虽具有植酸酶活性，但植酸并不是它特异性底物。来源于植物的植酸酶均属于６－植酸酶，最适pH范围在5.0~7.5，在单胃动物酸性的胃环境中不起作用。60年代末植酸酶的研究转向最适pH为酸性、酶含量较高的微生物来源的植酸酶。 许多微生物都能产生植酸酶，尤其在曲霉属中。1968年Shien等从68个土样中对2000个菌株进行考察发现，在所用的22株黑霉菌中有21株能产生植酸酶。第一个被分离纯化的植酸酶来源于Aspergillus terreus NO.9A-1,它的最适pH为 ４.5，最适反应温度为70℃,此酶在pH1.2~9.0均能稳定维持活性。从此以后，陆续从十几种微生物中分离得到植酸酶，其中来源于Ａ.ficcum NR-RL3135(A.niger var.awamori)的植酸酶phyA具有较好的耐热性，在酸性的条件下有较高酶活性，被认为是目前最具应用前景的饲用植酸梅，其酶学性质的研究也较为深入。 植酸酶phyA属于３－植酸酶，是一种糖基化蛋白，表观分子量为85KD。它的最适pH为2.5和5.5,最适反应温度为55℃。在37℃、pH2.5的条件下，以植酸为底物的Ｋm值为50mmol,Ca2+、Fe2+对酶活性无影响,Mn2+、Co2+有激活作用，能使酶活性分别提高30%和13%。Cu2+、Zn2+、Fe2+、Cu+对酶活性有抑制作用，其中前两种为非竞争性抑制，后两种为竞争性抑制。对酸性磷酸酶有抑制作用的抑制剂如Ｌ（＋）－酒石酸对它却没有抑制作用。它是目前发现的比活性最高的植酸酶之一，它降解植酸磷形成的终产物是单磷酸肌醇和无机正磷酸。 ２植酸酶在饲料中的应用效果

发酵法制取植酸酶的研究

亚热带农业研究第2卷第2期Subtrop i ca lA g ricu lt ure R esearch2006年5月发酵法制取植酸酶的研究 汪财生1,施可友2*,张顺凤1 (1.浙江万里学院生物与环境学院,浙江宁波315100;2.浙江农业函授大学慈溪市观海卫辅导点,浙江慈溪315315) 摘要:以麸皮为主要原料,添加少量稻壳以增加疏松度,加入与物料同重量的水,混匀,经灭菌、冷却后,接种诱变后的黑曲霉3.324菌株。采用曲盘固体发酵法,在保持室温28-30e,干温相差1e的条件下发酵6d,经生化方法提纯得到植酸酶精制品,每克干曲(以麸皮原料计算)产植酸酶约0.145g,精制品植酸酶活力达300U#g-1。 关键词:发酵法;植酸酶 中图分类号:Q55文献标识码:A文章编号:1673-0925(2006)02-0138-04 A study of phytase preparation by fer m entation WANG C a-i sheng,SH I Ke-you,ZHANG Shun-feng (1.Co lleg e o f B io l ogy and Env iron m enta l Sc i ences,Zhe ji ang W anliU n i versity,N ingbo,Zhe ji ang315100,Ch i na;2.Guanhai we i Instructi on Stati on of C i x,i Zheji ang A g ricu lt ura l Correspondence Co llege C i x,i Zhe jiang315315,Chi na) Abstrac t:U si ng of bran as m a i n raw m ater i a,l and a l ow amoun t o f rice hu llw as added to i ncrease the sed i m entation of ra w m ater-i a ls.The same amoun t o f wa ter w asm i x ed equa ll y w ith the raw m ater i a ls.A fter sterilizi ng and coo li ng,the asperg illus n i g er w as i n-oculated to t he processed m ater i a ls.A so li d fer m enta ti on at t he temperature o f28-30e,and te m perature difference of1e w as e mp l oyed and lasted f o r6days.T he amoun t of produced phy tase w as0.145g per kg,and t he enzy m e acti v ity o f pur ified phya tse w as detected at a leve l of300U#g-1. K ey word s:fer m en tati on;phytase 植酸酶是新型动物饲料添加剂的重要酶制剂,它对提高饲料中磷利用率,提高动物的生产性能,以及减轻高磷粪便对水域磷污染有重要意义。植酸酶是一类水解酶,由于化学结构不同,分为2类:3-植酸酶和6-植酸酶。6-植酸酶最适p H为5.0-7.5,动物小肠的p H约5.5,主要在小肠中起作用,在单胃动物胃酸(pH为2.5)环境中不起作用。3-植酸酶在酸性条件下,有较高酶活性,最适p H为2.5-5.5,在单胃动物的胃环境中,能迅速将植酸磷(六磷酸肌酸)降解为肌酸和无机磷,便于动物吸收利用,被认为是目前最具有应用前景的饲用植酸酶[1]。 植酸酶对单胃动物的饲喂效果已在国外得到广泛的肯定。自1991年荷兰首次在畜禽饲料中使用植酸酶以来,植酸酶的应用一直是饲料工业的热点。目前植酸酶代替无机磷应用于养殖业已具规模。据报道,仅1999年全球经植酸酶处理的饲料就达5500万吨。植酸酶使用效果主要表现为如下2个方面[1-2]。 (1)提高植酸磷的利用率。磷在植物中主要存在形式为植酸磷,植酸磷不能被单胃动物直接利用,随粪便排出体外。若饲料中添加植酸酶,植酸酶能促使植酸磷降解为肌酸和无机磷,代替饲料中必须添加的无机磷成分,提高植酸磷的消化率,并减轻养殖业带来的磷污染,保护环境。(2)消除植酸对矿物元素和蛋白质的抗营养作用。植酸有很强的络合力,能与饲料中蛋白质,锌、钙、锰等无机盐离子和维生素等合成稳定的复合物,从而降低这些营养成分的利用。植酸酶水解植酸,破坏了它对矿物元素和蛋白质的络合能力,使被络合的矿物元素大量释放出来,同时由于植酸)蛋白质络合之间的键断裂,也可使蛋白质从络合物中释放出来,从而提高饲料中矿物元素和蛋白质的利用率,提高畜禽生产性能。 植酸酶广泛存在于植物和微生物细胞中,植酸酶的生产方法目前主要采用直接从植物中提取,但由于 收稿日期:2006-02-18 作者简介:汪财生(1969-),男,实验师。研究方向:畜禽养殖。 *通迅作者。

微生物生理生化实验培养基配方

配方1（用于细菌葡萄糖发酵---半固体穿刺培养）： 蛋白胨2g，NaCl5g，K2HPO40.2g，1%溴酚蓝3ml，葡萄糖10g，琼脂8g，水1000ml。115度灭菌20分钟。 小提示：先将蛋白胨和NaCl溶于热水，调pH至7.4（这时总体积接近1000ml），再加入1%溴酚蓝3ml，再加入糖，溶解均匀后分装。 配方2（用于细菌乳糖发酵---半固体穿刺培养）： 蛋白胨2g，NaCl5g，K2HPO40.2g，1%溴酚蓝3ml，乳糖10g，琼脂8g，水1000ml。115度灭菌20分钟。 小提示：先将蛋白胨和NaCl溶于热水，调pH至7.4（这时总体积接近1000ml），再加入1%溴酚蓝3ml，再加入乳糖，溶解均匀后分装。 配方3:MR与VP试验-------请实验员准备 蛋白胨5g，葡萄糖5g，NaCl5g，水1000ml，调pH至7.2-7.4左右，115度灭菌20分钟。甲基红试剂（需新配） 40%KOH，-萘酚（需新配） 配方4:柠檬酸盐利用试验步骤（液体-直接观察现象）-------请实验员准备 NaCl5g，MgSO4.7H2O0.2g，磷酸氢二铵1g，K2HPO41g，柠檬酸钠2g，水1000ml，调pH至6.8-7.0左右后加入1%溴酚蓝10ml。

1%溴酚蓝：称取0.08g溴酚蓝溶于0.5ml95%乙醇中，再加水至总体积到10ml。 以上成分加热溶解后，调pH至6.8，然后加入指示剂，摇匀。制成后为黄绿色，分装试管，121度灭菌20分钟。 配方5:淀粉酶实验 0.2%淀粉2g，蛋白胨1g，1.5%琼脂20g，调pH7.0至7.2，水1000ml。 小提示：可先将琼脂放入水中加热，待完全溶解后，加淀粉。混匀后高压灭菌。 检测用卢戈氏碘液 过氧化氢酶试验 过氧化氢溶液 配方6:吲哚试验------- 胰蛋白胨10g，NaCl5g，水1000ml，调pH至7.2-7.4左右，121度灭菌20分钟。 检测用乙醚及吲哚试剂 配方7:H2S试验：柠檬酸铁铵半固体培养基 1000ml蛋白胨10g，氯化钠5g，Na2S2O3.5H2O0.5g，柠檬酸铁铵0.5g，琼脂8g，pH7.2，121度灭菌20分钟。 配方8:明胶液化实验（穿刺培养）-----不做 明胶15g，牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g，水100mL,将明胶加入肉汤中，水浴加热溶解，调pH7.2-7.4，分装试管，115度高压灭菌20min，取出迅速冷却，使其凝固。

尿素操作法

恒盛工业园 年产18万吨合成氨30万吨尿素工程 尿 素 操 规 程 江苏恒盛化肥有限公司 2009年2月20日

第一章尿素车间主要制度及常识 第一节八大制度 一、岗位责任制： 1、岗位操作人员必须严格执行操作规程。严各控制各项工艺指标，确保安全、优质、高产、低耗运行。发现问题及时处理，遇到紧急情况可先处理问题，后汇报。 2、岗位操作人员要掌握操作技术、事故处理及主要设备的原理、构造、性能和简单维修。 3、岗位操作人员要管好、用好本岗位所属设备，对不正常的设备有权要求修理和倒换。 4、严守劳动纪律，不得擅自离岗。有事必须经班长和车间值班干部同意，把工作妥善交给接替人员后，方可离岗。 5、认真贯彻执行各项规章制度，认真填写操作报表和岗位记录，字体仿宋化，数据准确无误，干净整洁。 6、岗位卫生区和操作时卫生要班班打扫，做到地面、墙壁、门窗、玻璃净，设备、管道净。 二、质量责任制： 1、牢固树立“质量第一”的思想，严格执行工艺技术规程，严格按技术标准、工作标准和质量标准办事，对本岗位的产品质量和工作质量负责。 2、认真学习和掌握全面质量管理知识，不断增强质量意识，积极参加群众性QC小组活动，促进产品质量和工作质量的提高。 3、严格遵守工艺纪律和岗位责任制，认真做好原始记录，对各种报表记录做到规格化、标准化、书面整洁，数据准确无误。 4、严格执行检查制度，加强质量监督，经常开展自检、互检和

专检，认真填写检查记录，做到数据准确、齐全、无涂改。 5、熟悉质量标准，努力完成质量考核指标。 6、及时掌握质量动态，认真处理生产中的质量问题，做好质量信息传递工作，对信息传递的及时和准确负责。 三、安全生产责任制 1、认真贯彻执行国家的安全方针、政策、指示、法令、法规。经常对职工进行生产和安全技术知识的学习教育，牢固树立“安全第 一、预防为主”的思想。 2、定期组织安全大检查，及时交流安全生产经验，坚持安全活动日，严格遵守“四十一条”禁令条款和对事故坚持“四不放过”的原则。 3、自觉遵守各种安全规章制度、劳动纪律，严格执行工艺纪律，坚守岗位，精心操作，按时巡回检查，发现异常情况及时查找原因，及时处理，并向班长或有关领导报告，发生事故及时处理，防止事故扩大，并及时向领导汇报。 4、严格各项规章制度，杜绝违章指挥和违章作业，每个职工均有权拒绝违章作业命令，并有权制止他人违章作业。 四、交接班制度: 1、交接班制度是上班和下班之间交接情况，保证生产连续稳定运行的制度。交接班必须严肃认真的按交接班标准认真执行。要求做到“五交”“五不接”，“五交”：交任务、交指标、交原料、交操作和交提示、交质量、交设备、交问题和经验、交工具、交记录、交安全和卫生。“五不接”：设备润滑不好不接；操作情况不清不接；工具不全不接；记录不全不接卫生不好不接。 2、交接是要严格按“三一”“四到”“五报”的内容进行，“三一”：对重要的生产部位一个一个的交接；对重要的生产参数一个一个的交接；对主要的生产工具一个一个的交接：“四到”：应看到的要看到：

第五次全国幽门螺旋杆菌专家共识

一、H、pylｏrｉ根除指征 【陈述1】不管有无症状与并发症，H、pylori胃炎就是一种感染性疾病。证据质量：高;推荐强度:强；共识水平：100%. 【陈述2】根除Ｈ、pyloｒi得获益在不同个体之间存在差异。 证据质量:中;推荐强度:强；共识水平:１00%. 【陈述３】H、pｙlｏｒi“检测与治疗(ｔest and ｔreaｔ)”策略对未经调查消化不良（uninvｅsｔigated dyｓpeｐsｉa)处理就是适当得.这一策略得实施应取决于当地上消化道肿瘤发病率、成本－效益比与患者意愿等因素.它不适用于年龄＞35岁、有报警症状、有胃癌家族史或胃癌高发区患者. 证据质量：中;推荐强度:条件;共识水平:1００%。 【陈述４】H、ｐylorｉ胃炎可在部分患者中引起消化不良症状. 证据质量：高;推荐强度：强；共识水平：10０%。 【陈述5】在做出可靠得功能性消化不良诊断前，必须排除Ｈ、ｐyｌｏri相关消化不良。 证据质量:高;推荐强度:强；共识水平：100%. 【陈述６】H、pyloｒｉ胃炎伴消化不良症状得患者,根除Ｈ、ｐylｏri后可使部分患者得症状获得长期缓解，就是优选选择。 证据质量：中;推荐强度：强;共识水平：１0０%。 【陈述7】H、pｙlori感染就是消化性溃疡主要病因,不管溃疡就是否活动与就是否有并发症史，均应该检测与根除H、pylori。 证据质量：高;推荐强度：强；共识水平:1０0%。 【陈述8】根除Ｈ、pylｏri就是局部阶段胃（MAＬＴ）淋巴瘤得一线治疗。

证据质量：中;推荐强度：强;共识水平:100％。 【陈述9】服用阿司匹林或NSＡID增加H、pylori感染患者发生消化性溃疡风险。 证据质量：高；推荐强度:强；共识水平:100％。 【陈述10】长期服用ＰＰI会使H、pylori胃炎分布发生改变,增加胃体胃炎发生风险，根除H、pylｏri可降低这种风险. 证据质量：中；推荐强度：强;共识水平:100%。 【陈述1１】有证据显示H、pｙlorｉ感染与不明原因得缺铁性贫血、特发性血小板减少性紫癜、维生素B１２缺乏症等疾病相关。在这些疾病中，应检测与根除H、ｐｙloｒｉ。 证据质量:低;推荐强度:条件；共识水平:１０0%。 【陈述１２】Ｈ、pylori胃炎可增加或减少胃酸分泌,根除治疗可逆转或部分逆转这些影响. 证据质量：高；推荐强度；强;共识水平：１00％。 【陈述13】H、pｙloｒi与若干胃十二指肠外疾病呈正相关或负相关，但这些相关得因果关系尚未证实。 证据质量：中;推荐强度：条件；共识水平：90、４%. 【陈述14】根除H、ｐｙlｏri可显著改善胃黏膜炎性反应，阻止或延缓胃黏膜萎缩、肠化生发生与发展,部分逆转萎缩，但难以逆转肠化生。 证据质量：中;推荐强度：强；共识水平:100%。

第六章 2微生物的代谢实验

与分解代谢有关的生化实验（二） 1、了解各生化实验的原理 2、能配制相应的培养基，选用合适的指示剂 3、能准确判断结果，并进行表示 1、VP试验 2、硫化氢试验 3、尿素酶试验 4、复合生化试验 ①动力靛基质尿素酶试验 MIU ②克氏双糖铁培养基试验 KIA 克氏双糖铁培养基试验 KIA KIA可能出现的四种颜色所表示的意义 讲授为主 实验报告 反复强调微生物实验操作的注意事项

复习：相关理论知识 引入：不同种类的微生物能产生不同的酶类，因此，不同的微生物能够利用的营养物质是不同的。即使是针对相同的营养物质，不同的微生物有不同的利用方法（导致最终产物不同）。 人为的设计一些培养基和检测方法，可以比较方便的了解微生物的生理过程。 实验二与分解代谢有关的生化试验 5.VP试验 ①培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基（葡胨水） ②指示剂：VP试剂（VP甲液和VP乙液） ③原理： ④结果判断和表示方法 培养基颜色变红—————— + 培养基颜色不变（或变棕色）——————－ 注意： 若滴加甲液和乙液后没有变色，不能马上判断结果为阴性。 乙酰甲基甲醇在碱性条件下被氧化需要一段时间。 再放入培养箱培养2—4h以后，判 断结果。

原理： 含硫氨基酸 2S + Fe 2+ ， + Pb 2+ 7. 尿素酶试验 尿素培养基配方： 蛋白胨 1g NaCl 5g 葡萄糖 1g 磷酸二氢钾 2g 尿素 终浓度2% 酚红溶液 3ml 蒸馏水 1000ml ①培养基：尿素培养基（pH6.8） ②指示剂：酚红 ③原理： 尿素3， 指示剂变色，桔黄色红色 ④结果判断和表示方法： 培养基颜色变红———— + 培养基颜色不变（桔黄） ————— — 6、硫化氢试验

尿素性质

水分/%≤0.50 1.00 粒度(φ0.8～2.5mm)/%≥ 90 90 工业制法 生产方法：工业上用液氨和二氧化碳为原料，在高温高压条件下直接合成尿素，化学反应如下： 2NH3+CO2→NH2COONH4→CO(NH2)2+H2O 农业应用： 尿素是一种高浓度氮肥，属中性速效肥料，也可用于生产多种复合肥料。在土壤中不残留任何有害物质，长期施用没有不良影响。畜牧业可用作反刍动物的饲料。但在造粒中温度过高会产生少量缩二脲，又称双缩脲，对作物有抑制作用。我国规定肥料用尿素缩二脲含量应小于0.5%。缩二脲含量超过1%时，不能做种肥，苗肥和叶面肥，其他施用期的尿素含量也不宜过多或过于集中。 尿素是有机态氮肥，经过土壤中的脲酶作用，水解成碳酸铵或碳酸氢铵后，才能被作物吸收利用。因此，尿素要在作物的需肥期前4～8天施用。 分析 方法名称：尿素—尿素的测定—中和滴定法 应用范围：本方法采用滴定法测定尿素中尿素的含量。 本方法适用于尿素。 方法原理：供试品照氮测定法测定，用盐酸滴定液滴定，根据滴定液使用量，计算尿素的含量。 试剂： 1. 盐酸滴定液(0.2mol/L) 仪器设备： 试样制备： 1. 盐酸滴定液(0.2mol/L) 配制：取盐酸18.0mL，加水适量使成1000mL，摇匀，得0.2mol/L盐酸滴定液。标定：取在270~300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.3g，精密称定，加水50mL使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色转变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。每1mL盐酸滴定液（0.2mol/L）相当于10.60mg的无水碳酸钠。根据本液的消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度。 取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4mL使溶解，再加水稀释至200mL。取0.1%甲基红的乙醇溶液20mL，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30mL，摇匀。 操作步骤：精密称取供试品约0.15g，置凯氏烧瓶中，加水25mL、3%硫酸铜溶液2mL与硫酸8mL，缓缓加热至溶液呈澄明的绿色后，继续加热30分钟，放冷，加水100mL，摇匀，沿瓶壁缓缓加20%氢氧化钠溶液75mL，自成一液层，加锌粒0.2g，用氮气球将凯氏烧瓶与冷凝管连接，并将冷凝管的末端伸入盛有4%硼酸溶液50mL的500mL锥形瓶的液面下，轻轻摆动凯氏烧瓶，使溶液混合均匀，加热蒸馏，俟氨馏尽，停止蒸馏，馏出液中加甲基红指示液数滴，用盐酸滴定液(0.2mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL盐酸滴定液(0.2mol/L) 相当于6.006mg的CH 4N 2 O。

植酸酶的来源与应用1

植酸酶的来源与应用 1 植酸酶的来源 1. 1 植物来源的植酸酶植酸酶最早是在植物中发现的,早期的研究都集中在植物和动物器官中。尽管植酸酶存在于多种植物的种子和花粉中,其活性却因植物的种类不同而有很大差别, 如在豆类、谷类和油料作物中,植酸酶的活力一般都较低。许多谷物饲料中含有一定数量的植酸酶,如小麦来源的植酸酶可以使含小麦日粮中的植酸磷降解,但它们的酶活性变异很大。在机械制粒过程中小麦的植酸酶活性并未被破坏。在含豆科籽实的日粮中,鸡可以产生利用植酸的适应性,肉鸡降解植酸磷的能力受日粮钙[3]和磷[4]水平的影响,但玉米、高粱和油籽饼中的植酸酶活性很低[5] 。Viveros 等[6] 测定了24 种饲料的植酸酶活性,发现黑麦籽实的酶活性在所有谷物籽实中最高,其活性超过5 000 U/ kg ,黑小麦2 030 U/ kg ,小麦1 500 U/ kg ,而玉米胚、燕麦和高粱籽实几乎无植酸酶活性(小于100 U/ kg) 。此外,来源于植物的植酸酶多属于62植酸酶, 最适pH 值在5. 0～7. 5 , 不适合在单胃动物的酸性胃中起作用, 而且植酸酶在植物中含量较低,因而从应用角度出发,自20 世纪60 年代末植酸酶的研究转向最适pH值为酸性、酶含量较高的微生物来源的植酸酶。 1. 2 动物来源的植酸酶动物植酸酶存在于哺乳动物的红血球和血浆原生质中。比起植物和微生物植酸酶, 动物植酸酶方面的研究非常少,Patwardhan[7]首先证实小白鼠有从植酸磷释放磷的能力,从此,大量研究证实不同动物的小肠黏 膜具有植酸酶活性[8] 。植酸酶活性存在于小肠黏膜的刷状缘,十二指肠的酶活性最高。尽管在小鼠、鸡和牛的肠粘膜上植酸酶降解植酸盐的活性已得到证实,已测定了人体部分组织中植酸酶的活性,但仍不了解植酸酶在人胃和小肠中降解植酸盐的活性如何。有学者认为哺乳动物小肠中的植酸酶与碱性磷酸酶相同,因为碱性磷酸酶确实有水解植酸磷的作用,而且两种酶有类似的亚细胞分布,它们对镁、锌的依赖性以及最适pH 值也类似,两种酶的活性都受日粮因素如维生素D 或低磷水平的修饰。但是其他的一些证据又支持两种酶是不同的酶,如酶的底物依赖性不同,被苯丙氨酸和氟化钠的抑制特性不同。还有一个值得探讨的问题就是动物来源的酶是否是动物体内的微生物产生的。动物来源的植酸酶活性受动物的遗传特性和日粮营养因素的影响,如小白鼠的酶活性比兔的高[9] 。小白鼠成年后的酶活性比幼鼠的低,相反,猪和鸡则随年龄的

黑曲霉植酸酶液体发酵工艺研究

第14卷第3期武汉科技学院学报Vo1.14No.3 2001年9月JOURNAL OF WUHAN INS TITUTE OF SCIE NCE AND TECHNOLOGY Sep.2001 黑曲霉植酸酶液体发酵工艺研究 王亚林严建芳 (武汉工业学院生物与化学工程系武汉430022) 摘要研究了黑曲霉液体培养生产植酸酶的发酵工艺,研究了培养基碳源、诱导物、表面活性剂等因素对产酶的影响,对发酵时间、p H变化规律等进行了研究和分析。 关键词植酸酶黑曲霉发酵X 中图分类号Q815;Q814.9 植酸酶作为一种饲料和食品添加剂,在国内外已开始得到广泛应用,特别是由于其在改善环境方面的作用,更是受到人们的极大关注。植酸酶主要存在于植物及微生物中,由于在微生物中含量较高而具有较大的开发价值。目前,美国、荷兰和丹麦等国已先后运用发酵法生产植酸酶,我国也已在进行这方面的研究开发。可以预计,植酸酶制剂将有良好的市场前景。 1材料与方法 1.1菌种 黑曲霉(Aspergillus niger)W S201,武汉工业学院微生物室保存。 1.2培养基 1.2.1种子培养基:豆芽汁蔗糖培养基。 1.2.2摇瓶发酵培养基(%):葡萄糖3.0,淀粉7.0,NH4NO30.5,蛋白胨0.2,CaCl20.2,MgSO4# 7H2O0.05,KCl0.05,MnSO4.4;H2O0.03,pH值5.5。 1.3培养方法 配制培养基时适当加热、摇动或搅拌,使淀粉溶解成液态或胶状,121e灭菌20min。在30?1e下摇床培养3~5d(转速220~250r/min)。 1.4植酸酶的测定 植酸酶活力的定义:37e,pH5.5条件下每分钟从植酸钠中释放出1L mol无机磷所需的酶为1u。 酶活测定方法:取0.1ml含酶液加至一洁净试管中;加入0.9ml反应液,反应液为含0.5%植酸钠的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH5.5),在37e恒温反应30min;加入1ml10%三氯醋酸终止反应;加入2ml显色液,摇匀后静置15~30min显色,显色液由1%钼酸铵50ml与3.66 X收稿日期:2001-06-26 作者简介:王亚林,男,副教授,在读博士生;研究方向:发酵工程、生化工程

尿素生产工艺流程

. 化肥厂尿素生产工艺流程简介分子量为CO(NH2)2,,分子式为1.尿素的物理性质:化学名称叫碳酰二胺因为人类及哺乳动物的尿液是含氮量最高的固体氮肥46.65%,.60.06.含氮量为尿故称为尿素.年蒸发人尿是发现了它,中含有这种物质,并且由鲁爱耳在17731.335,晶体的比重为在20-40度温度下无味素为无色,,无臭的针状或棱状结晶.. ,包装和贮存要注意防潮尿素易溶于水和氨,也溶于醇克/cm3.在工业上尿素作.主要用作肥料,饲料和工业原料2.尿素的用途和产品标准.尿素也用.用于生产塑料,涂料和黏合剂为高聚物的合成原料,用来制成甲醛树脂,. 尿素技术指标国家指标GB2440--91,制革,颜料等部门.于医药,液氨是合成氨厂的主要产品生产尿素的原料主要是液氨和二氧化碳气体,3.合成尿素用的液氨要求纯度高于二氧化碳气体是合成氨原料气净化的副产品.铁锈等固体杂并不含催化剂粉,油含量小于10PPm,水和惰性物小于0.5%99.5%,15mg/Nm3. 硫化物含量低于98.5%,质.要求二氧化碳的纯度大于主要化学反应,尿素的生产办法和过程尿素的合成分两步进行4.)==NH4COONH3=Q 气液)+CO2(为:NH3(液氨与二氧化碳的净化与提压工业过程为 NH4COONH2==CO(NH2)+H2O-Q1. 2.液氨与二氧化碳合成输送. 造粒4.尿素溶液的蒸发,3.尿素尿素熔融物与未反应物的分离与回收该法是利用碳酸稀溶液吸收未反应的氨与二氧.老系统选用的是水溶液全循环法由于未反应的氨和二氧化,再利用循环泵送回合成塔化碳生成甲胺或碳酸氨溶液,. ,,,碳呈水溶液形态进行循环故动力消耗较小流程也较简单投资也省.. . ..

酶制剂——植酸酶

酶制剂——植酸酶 早在1915年，Anderson提出天然植酸磷利用率不同于化学分离纯化产品的一个可能原因是饲料成分中存在水解植酸磷为无机磷的酶——植酸酶，并对植酸酶的来源、理化特性及作用机理进行了研究，从而引起了许多学者的广泛关注。近年来，随着发酵工程和生物技术的迅速发展以及人们环境保护意识的提高，采用DNA重组技术使微生物产生植酸酶活性大幅度提高，大大降低了植酸酶生产成本，从而使之得到广泛应用。植酸酶现已成为饲料酶制剂研究的一个热点，尤其在一些畜禽饲养密度大、环境污染严重的国家如美国、加拿大、芬兰、荷兰、法国、瑞士等。许多科学家对这一课题的研究很感兴趣，欧洲、北美和其它地区对此的兴趣也与日俱增。1994年欧共体、美国、芬兰、丹麦、德国等国的生产企业均前后推出各种植酸酶制剂,并利用DNA重组技术获得生产植酸酶的工程菌,为广泛应用植酸酶提供了可能。 一、植酸酶结构及性质 植酸酶，又称为肌醇六磷酸水解酶，是一种可使植酸磷复合物中的磷变成可利用磷的酸性磷酸酯酶。植酸酶广泛存在于动植物组织中，也存在于微生物（细菌、真菌和酵母）。目前分离出的植酸酶主要有两种：3-植酸酶（EC 3.1.3.8）和6-植酸酶（EC 3.1.3.26），前者最先水解的是肌醇3号碳原子位置的磷酸根，主要存在于动物和微生物；后者最先水解的是6号碳原子的磷酸根，主要存在于植物组织。因此，动物胃肠道可能有三种来源的植酸酶，但主要来源于饲料本身以及来源于微生物合成。 大量高浓度的植酸酶主要存在于无花果曲霉和黑曲霉与小麦麸的培养物中。因此饲料植酸酶的生产目前主要使用微生物曲霉菌株。霉菌植酸酶分子量一般在60 ~ 100KDal之间，曲霉植酸酶分子量较大。如土曲霉为214Kdal，无花果曲霉为85 ~ 100KDal，黑曲霉为200KDal。细菌植酸酶分子量一般较小，如大肠杆菌为42Kdal，枯草杆菌为38KDal。霉菌植酸酶通常有一个最适pH，在4.2 ~ 5.5范围内。细菌植酸酶最适pH稍高一些。据报道,某些霉菌植酸酶，特别是曲霉植酸酶具有多个最适pH值。酶的最适温度因酶来源不同而有差异。霉菌植酸酶适宜温度通常在45 ~ 57℃范围内，黑曲霉为53℃，无花果曲霉为55℃。

确诊消化性溃疡首选的检查方法是

确诊消化性溃疡首选的检查方法是

1、确诊消化性溃疡首选的检查方法是 A.B超 B. X线 C.幽门螺旋杆菌检测 D.胃镜 E.胃液分析 2、作为幽门螺旋杆菌根除治疗后复查的首选方法是 A.胃组织学检查 B.快速尿素酶试验 C.幽门螺旋杆菌培养 D.C14尿素呼气试验 E.血清学检查 3、引起上消化道出血最常见的原因是 A.胃癌 B.胃十二指肠溃疡 C.肝硬化 D.出血性胃炎 E.胆道出血 4、下列哪项不符合由胃泌素瘤引起的消化性溃疡 A.多发生在球后十二指肠降部和横段,或空肠近端 B.常规胃手术后不易复发 C.易并发出血、穿孔、梗阻 D.基础胃酸分泌过度 E.常伴腹泻 5、下列疾病中，骨髓有核红细胞出现“核老浆幼”现象的是 A.巨幼红细胞性贫血 B.急性红血病 C.缺铁性贫血 D.骨髄增生异常综合症 E.再障 6、结肠癌患者中血清CEA水平高于正常的约占 A. 30% B. 40% C. 50% D. 60% E.70% 7、继发性腹膜炎最常见的病原菌是 A.链球菌 B.葡萄球菌 C.变形杆菌 D.大肠杆菌 E.厌氧菌

B.咳嗽后咯出鲜红色血 C.鲜红色血中含泡沫痰 D.鲜血经酸碱测定呈酸性 E.咯血后3天痰中仍带血 16、溃疡性结肠炎的好发部位是 A.升结肠 B.空肠和回肠 C.直肠和乙状结肠 D.横结肠 E.回盲部 17、右侧结肠癌最多见的大体形态是 A.浸润型 B.溃疡型 C.肿块型 D.浸润溃疡塑 E.弥漫型 18、男性，50岁，腹股沟三角突出半球形包快，易还纳，未进入阴囊，不透光,主要考虑为 A.鞘膜积液 B.隐睾 C.股疝 D.斜疝 E.直疝 19、溃疡病致瘢痕性幽门梗阻最典型的临床表现是 A.呕吐 B.腹胀 C.消痩 D.贫血 E.脱水 20、细菌性痢疾的病理改变的主要部位是 A.盲肠 B.回肠末端 C.直肠和乙状结肠 D.升结肠 E.降结肠 21、肠梗阻病人血清钾检测值为2.9mmol／L，临床上一般不表现为 A、四肢无力 B、ST段降低 C、皮肤苍白

植酸酶

植酸酶在饲料工业中的应用 大家都知道酶是具有催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体。是生物催化剂，能通过降低反应的活化能加快反应速度，但不改变反应的平衡点。绝大多数酶的化学本质是蛋白质。具有催化效率高、专一性强、作用条件温和等特点。今天向我大家介绍的是饲料生产工业中非常重要的一种酶——植酸酶 植酸酶产品在动物和人类营养方面有非常广泛的应用，他可分解植酸(即肌醇六磷酸)，植酸是植物体内磷酸盐和肌醇的重要储存形式。植酸酶是一种新型的食品添加剂，能降低食物中的植酸而提高磷、锌、钙和铁等的利用率，改善动物对矿物质的吸收。其中磷是维持动物生长发育等生命活动必需的重要矿物质，同时也是饲料中最昂贵的组分之一，植酸酶可催化植酸盐水解，使植酸盐中的磷以磷酸根的形式分离出来从而被动物吸收，提高磷的利用率，降低环境污染。 1．1植酸酶的种类 1)按来源不同可分为微生物植酸酶、植物性植酸酶和动物性植酸酶。 2)按作用方式可分为3一植酸酶和6一植酸酶，其中3一植酸酶存在于 植物、霉菌和细菌中，需Mg2+参与反应，性质稳定，耐酸和耐高温，在饲料工业中已被广泛使用。而6一植酸酶只存在于植物中，适宜pH 5．0～5．5，对温度较敏感，超过60～65℃极易被破坏。 3)按加工工艺不同可分为粉状、颗粒状和液体状植酸酶。粉状植酸酶在 高温和高湿环境中易失活；脂肪包被颗粒型植酸酶在高温下脂肪膜易被融化，使植酸酶被释放出来而失活；因植酸酶在饲料中添加量极小，对喷涂精度要求高，故液体状植酸酶在饲料工业中较少使用；经特殊镶嵌的颗粒状植酸酶，热稳定性高，储存期长，在动物体内释放速度快，流动性好。 4)按酶促反应的pH有效作用范围可分为酸性植酸酶和中性植酸酶。适用 于畜禽的pH 2．5~5．5有效作用范围为酸性植酸酶，适用于鲤科鱼类的pH7．0～7．5有效作用范围为中性植酸酶。 1．2植酸酶的特性 植酸酶属于磷酸单酯水解酶，是一种特殊的酸性磷酸酶，适合pH为4～6，对温度的适应性要求较高，一般适宜温度在46～57℃，当超过60℃时，植酸

新产品-中化化肥绿植泉尿素硝铵溶液

新产品-中化化肥绿植泉尿素硝铵溶液（UAN） 一、技术指标： 1、剂型：液体，总氮含量：≥422克每升（其中硝态氮≥102克每升、铵态氮≥102克每升、酰胺态氮≥218克每升） 2、成分：硝酸铵 37-48%、尿素: 28-36%、水份: 19-31%、游离氨: 500ppm maximum、腐蚀抑制剂: 150-250ppm 3、物理性质： ? 比重 : 1.32 在60°F （约15.6℃）条件下； ? 密度：磅/加仑: 在60°F （约15.6℃）条件下； ? 蒸汽压: 0； ? 硝酸铵盐析出温度点: 32°F (0°C)。 二、包装： 该产品为灌装进口，根据国内需求采用不影响质量的PVC桶分装，现有包装为4升每桶（≥5.3千克）。 三、产品特性： （1）稳定、腐蚀性极低、不可燃、无色、常压条件下为液态，安全性能好，便于运输和存储； （2）全世界通行标准，品质如一，施用后植物硝酸盐含量指标远远低于国家安全标准； （3）氮肥中的复合肥，三种形态氮元素，兼有速效加长效的作用，极大拓宽植物对氮元素的吸收利用率，提高作物品质； （4）内含促进植物快速生长因子，养分可快速到达植物根、茎、叶细胞组织，为植物提供快速且持久的营养补给； （5）水溶性100%，无任何杂质，利用率达90%以上，尤其适用于喷灌、滴灌和叶面施肥，节水、省时、环保、高效。 （6）极高稳定性，可与其他化学农药及肥料混合施用，能很好的兼容其它肥料和化学品，与可混合的

植物化学保护助剂一并使用，一次施肥，多种用途，既省时又省力省钱。 四、施用方法： （1）适用于各种农作物，在蔬菜、瓜茄、水果等作物上施用后增产效果尤为明显； （2）可用做播种前底（基）肥，也可在播种后立即施用（可避免灼伤叶子），后期追肥效果更佳； （3）冲施、滴灌、喷施均可； （4）喷施稀释比例（直接加水冲淡）； a、幼苗期1∶100 以上，生长期、果实膨大期、成熟期1∶50 以上； b、稀释度视不同作物及其生长情况而定，浓度可随作物的生长而加大； c、叶面喷施主要用于追肥，每亩施用量（原液）：3 ～ 5 公斤； d、冲施、滴灌稀释比例（直接加水冲淡）； e、基肥1∶3 以上，追肥1∶4 以上。 （5）叶菜类：以追肥每亩施用量（原液）为主，在缓苗后或每采收一茬后追肥 5-10公斤； （6）茄果类：基肥10-15公斤，追肥在缓苗后、第一花坐果后、开始采收及采收盛期各追肥1次，追肥要结合浇水进行，每次追肥5-10公斤； （7）西瓜：基肥15-20公斤，追肥8-12公斤； （8）茶叶：在新芽萌发前15天进行2次施用。亩施10-15公斤，如果喷施，用量减半； （9）果树：幼果期、果实膨大期、灌浆成熟期各追肥一次，每次10公斤左右并配合高钾肥使用； （10）水稻：分蘖期追肥5-10公斤，穗肥3.5-7公斤； （11）越冬作物（如冬小麦）：基肥10-15公斤，春季追肥可在雪期后、重新进入生长期、分蘖期追肥3-5公斤 五、施用效果： 澳大利亚尿素硝铵溶液与尿素对小麦作用的对比试验，其中20个实验，UAN麦田的增产量是尿素麦田产量的近一半，同时棉花和草莓试验效果也证明UAN在增强作物根茎叶长势和产量方面显著。 六、注意事项： 1、不建议直接施用原液，稀释度低于1∶30时要避免直接施于叶面（会灼伤叶面，苗期会烧苗），对于对氨态氮很敏感的种子（苜蓿、甜菜等）不能在播种前或期间使用。 2、不宜在多雨季节使用，特别是雨前雨后；忌讳阳光强烈直射下使用(最佳时间为气温不高于20℃时或傍晚)。 3、液肥与氨水混合后会产生较强腐蚀性，请勿将这两种液体混合。 4、UAN液肥不可燃，无火灾和爆炸危险性，非违禁品，属于无毒害产品，但要避免直接接触眼睛和皮肤，否则，请用流动清水清洗；如发生误食情况，请喝2-3杯温水催吐，再使用加入硫酸钠（1茶匙溶于1/4杯水）或活性炭的温水洗胃，必要时可以送医诊治。