基因工程考试完整版试题
填空
4．基因工程的两个基本特点是：(1) ，(2) 。4．(1)分子水平上的操作；(2)细胞
水平上的表达
5．基因克隆中三个基本要点是：；和。5．克隆基因的类型；受
体的选择；载体的选择
2. 由于不同构型的DNA 插入EB 的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA 的泳动速度，OC DNA 泳动速度，L DNA 居中，通过凝胶电泳和EB 染色的方法可将不同构型的DNA 分别开来。2．最快；最慢
4. 就克隆一个基因(DNA 片段) 来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部
分：、、。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。4．复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA
的插入
6. 质粒拷贝数是指细胞中质粒的份数同染色体的比值，即质粒／染色体。
13. YAC 的最大容载能力是1000kb，BAC 载体的最大容载能力是300kb。
3．λ噬菌体的基因组DNA 为kb，有多个基因。在体内，它有两种复制方式，扩增时(早
期复制)按复制，成熟包装(晚期复制)则是按复制。它有一个复制起点，进行向复制。
λ噬菌体的DNA 既可以以线性存在又可以环状形式存在，并且能够自然成环。其原因主要是在λ噬菌体
线性DNA 分子的两端各有一个个碱基组成的天然黏性末端。这种黏性末端可以自然成环。成环后的
黏性末端部位就叫做位点。48．5；60；凯恩斯模型；滚环；双；12；COS
4．根据噬菌体的包装能力，将野生型λ噬菌体的基因组DNA 改造成插入型载体，该载体的最小分子大小
约为kb，插入的外源片段最大不超过kb。36；14
5．野生型的M13 不适合用作基因工程载体，主要原因是和。没有合适的限制性内切核
酸酶识别位点；选择标记
6．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS 位点序列来自，最大的克
隆片段达到kb。质粒；丸噬菌体；45
7．有两类改造型的λ噬菌体载体，即插入型和取代型。从酶切点看，插入型为个，取代型为
个。1；2
8．野生型的丸噬菌体DNA 不宜作为基因工程载体，原因是：(1) (2) (3) 。(1)分子量
大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记
11 ．M13 单链噬菌体基因2 和基因4 之间的IG 区有三个最重要的功能，即(1)
(2) (3) 。(1)正链复制起点；(2)负链复制起点；(3)包装信号
12．野生型的M13 有10 个基因，分为三个功能集团，其中与复制有关的两个基因是：
和。基因Ⅱ；基因Ⅴ
13．以λ噬菌体载体和黏粒载体构建文库时，起始DNA 的长度是不同的，前者为
kb，后者为kb。100kb；200kb
14．λ噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA 片段后，总的长度应在噬菌体基因
组的的范围内。75％一105％
5．Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小．一般在20~40kDa，通常由亚基所组成。
它们的作用底物为双链DNA，极少数Ⅱ类酶也可作用于单链DNA，或DNA／RNA 杂合双
链。这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也
有要求，因此，Ⅱ类酶既具有专一性，也具有专一性，一般在识别序
列内切割。切割的方式有，产生末端的DNA 片段或的DNA
片段。作用时需要作辅助因子，但不需要和。2~4 个相同的；切割位点；识别
位点的；平切和交错切；平；具有突出黏睦末端；Mg2+；ATP；SAM
6．完全的回文序列具有两个基本的特点，就是：(1) (2) 。(1)能够在中间划一个对
称轴，两侧的序列两两对称互补配对；(2)两条互补链的5’3’的序列组成相同，即将一条链旋转180°，则
两条链重叠
7．Ⅱ类限制性内切核酸酶一般识别个碱基，也有识别多序列的限制性内切核酸酶。
根据对限制性内切核酸酶识别序列的分析，限制性内切核酸酶识别序列具有倾向，即它们在识别序列中
含量较高。4～6；GC
10．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自，第二、第三
两个字母取自，第四个字母则用表示。属名的第一个字母；种名的前两个字母；
株名
20．限制性内切核酸酶通常保存在50％浓度的甘油溶液中。
1．连接酶(ligase)是一类用于核酸分子连接形成键的核酸合成酶，有DNA 连接酶和RNA 连接
酶之分。磷酸二酯
2．原核生物主要有两种类型的DNA 连接酶：E．coliDNA 连接酶和T4DNA 连接酶。基因工程中使用的
主要是T4DNA 连接酶，它是从T4 噬菌体感染的E．coli 中分离的一种单链多肽酶，分子量为kDa，
由T4 噬菌体基因——编码。E．coli DNA 连接酶是由大肠杆菌基因一编码，也是一条多肽链的单体，分
子量为kDa。这两种DNA 连接酶有两个重要的差异：第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同，T4DNA 连接酶用，而E．coli DNA 连接酶则用作为能源。第二是它们催化平末端连接的能力不同，在正常情况下只有T4DNA连接酶能够连接平末端，E．coliDNA 连接酶则不能。即使是调整反应条件，E．coli DNA 连接酶催化平末端的连接效率也只有T4 DNA 连接酶的。68；30；51；74；ATP；NAD；1／100
选择
3．第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是【A】
(a)EcoRI (b)EcoB (c)EcoC (d)EcoRⅡ
4．下列哪种克隆载体对外源DNA 的容载量最大?【C 】
A 质粒；
B 黏粒；
C 酵母人工染色体(YAC)；
D λ噬菌体；
E cDNA 表达载体
7．ColEl 是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒：【ACD 】
A 是松弛复制型；
B 具有四环素抗性
C 能被氯霉素扩增；
D 能产生肠杆菌素
8．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：【B 】
A OC DNA>SC DNA>L DNA；
B S
C DNA>L DNA>OC DNA
C L DNA>OC DNA>SC DNA ；
D SC DNA>OC DNA>L DNA
9．pBR322 是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自：【C 】
A ColEl ；B；Ri 质粒；C pSCl01；D pUCl8
10．关于质粒的相容性，下面哪一种说法不正确? 【D】
A 不同相容群的质粒能够共存于同一个细胞
B 质粒可以分成若干个不相容群，但不能分成若干个相容群
C 如果a、b 两种质粒不相容，说明它们的复制机制相同
D 属于同一个不相容群中的质粒，不仅复制机制相同，而且拷贝数和分子量也相同
11．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?【B 】
A 在不同的宿主中具有不同的复制机制
B 在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点
C 在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶
D 在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率
13．第一个作为重组DNA 载体的质粒是(C )
A pBR322 ；
B ColEl；
C pSCl01；
D pUCl8
1．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有【B 】不太恰当。
A.由作用于同一DNA 序列的两种酶构成
B.这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
C.这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA 进行修饰
D.不同的宿主系统具有不同的限制—修饰系统
3．Ⅱ型限制性内切核酸酶：【B 】
A.有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
B.仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
C.限制性识别非甲基化的核苷酸序列
D.有外切核酸酶和甲基化酶活性
E.仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
4．Ⅲ型限制性内切核酸酶：【C 】
A.由两个亚基组成，仅识别半甲基化位点。甲基化位点相对于限制位点的位置(上游或下
游)决定了DNA 是被甲基化还是被限制
B.不同亚基的识别位点甲基化和限制活性相互排斥：MS 亚基促使甲基化，R 亚基促使限制
C.由两个亚基组成，在识别位点附近识别并进行甲基化或限制
D.在错配修复中起关键作用，因为酶结合到DNA 上是以结构扭曲为基础而不是序列错误识别
E.是光依赖型酶，是嘧啶二聚体进行“光反应”的关键酶，它们能使胸腺嘧啶二聚体间的共价键断裂9．下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?【BCDE 】
A.限制酶是外切酶而不是内切酶
B.限制酶在特异序列(识别位点)对DNA 进行切割
C.同一种限制酶切割DNA 时留下的末端序列总是相同的
D.一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端
E.一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端
14．在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2＋离子?【D】
A.EDTA
B.柠檬酸钠
C.SDS
D.EGTA
15．在下列工具酶中，那一种可以被EGTA 抑制活性?【D】
A.S1 单链核酸酶
B.末端转移酶
C.碱性磷酸酶
D.Bal 31 核酸酶
16．限制性内切核酸酶可以特异性地识别：【B】
A.双链DNA 的特定碱基对
B.双链DNA 的特定碱基序列
C.特定的三联密码
D.以上都正确
19．限制性内切核酸酶的星号活性是指：【A 】
A.在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。
B.活性大大提高；
C.切割速度大大加快；
D.识别序列与原来的完全不同
20．下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?【D】
A.甘油含量过高
B.反应体系中含有有机溶剂
C.含有非Mg2＋的二价阳离子
D.酶切反应时酶浓度过低
22．关于回文序列，下列各项中，【D 】是不正确的
A.是限制性内切核酸酶的识别序列
B.是某些蛋白的识别序列
C.是基因的旁侧序列
D.是高度重复序列
1．T4DNA 连接酶是从T4 噬菌体感染的E．coli 中分离的，这种连接酶( B)
A.催化连接反应时既能以ATP 又能以NAD 作为能量来源
B.既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接
C.是一种单肽酶，分子量为74kDa
D.既能催化单链DNA 连接又能催化双链DNA 连接
2．DNA 连接酶在体内的主要作用是在DNA 复制、修复中封闭缺口，(A )
A.将双链DNA 分子中的5，磷酸基团同3，-OH 末端重新形成磷酸二酯键
B.作用时不消耗能量
C.需要Mn2+等二价辅助离子
D.也可以连接RNA 分子
6．在基因工程中，可用碱性磷酸酶( AB)
A.防止DNA 的自身环化
B.同多核苷酸激酶一起进行DNA 的5，末端标记
C.制备突出的3，末端
D.上述说法都正确
7．从E．coli 中分离的连接酶：(B )
A.需要ATP 作辅助因子
B.需要NAD 作辅助因子
C.可以进行平末端和黏性末端连接
D.作用时不需要模板
9．下列哪一种酶作用时需要引物? (C )
A.限制酶
B.末端转移酶
C.反转录酶
D.DNA 连接酶
判断;
1．迄今发现的质粒DNA 都是环状的。F
2．线性质粒同环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。F
3．有a、b、c 三个质粒，因为a 和b 能够共存于一个细胞，a 和c 也可共存于同一个细胞，
所以b 和c 一定能够共存于同一个细胞。F
5. 如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和
群。F
6. 一个带有反向重复序列的双链DNA 经变性后，复性时其单链可形成发夹环。T
7. 能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。T
13．所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不同。T
14．一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。F
15．ColEl 是唯一用作基因工程的自然质粒载体，它具有四环素抗性标记，因而很容易选择。F 16．某一染色体DNA 经内切酶Sal I 切割后，产生了若干个具有黏性末端的DNA 片段，将
这些片段分别在T4 DNA 连接酶的作用下自身连接成环，然后导入受体细胞，都可以进
行独立地复制。F
18．基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。F
1．限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA 的修饰和对自身DNA
的限制实现的。F
7．已知某一内切核酸酶在一环状DNA 上有3 个切点，因此，用此酶切割该环状DNA,可得
到3 个片段。T
9．基因工程中使用的Ⅱ类限制性内切核酸酶不仅有内切核酸酶的活性，而且有甲基化酶的
活性。F
16．在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他的限制
性酶就不能切割了。F
1．T4DNA 连接酶和E．coli 连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接。F
5．Bal31 核酸酶(Bal31nuclease)是Ca2+依赖性的，在反应混合物中加入EDTA 便可抑
制它的活性。F
8．T4DNA 连接酶和E．coli 连接酶作用时都需要ATP 和NAD+作为辅助因子。F
名词解释
3．基因工程基因工程(geneengineering)~称基因操作(genemanipulation)、重组DNA(recombinantDNA)。基因工程是以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因(DNA 分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种
DNA 分子，然后导人活细胞，以改变生物原有的遗传特性，获得新品种，生产新产品，
或是研究基因的结构和功能。
3．穿梭载体?
含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA片段的杂种质粒，有两个复制起点和既能在
细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿
主(来回穿梭)乙
5．动物乳腺生物反应器?能够分泌乳汁的转基因动物生产其他来源的基因产品，并通过乳腺分泌出来。1．细菌的限制—修饰系统细菌中有作用于同一DNA 的两种酶，即分解DNA 的限制酶和改变DNA 碱基结构使其免遭限制酶分解的修饰酶。而且，这两种酶作用于同一DNA 的相同部位，把这两种酶所组成的系统称为限制与修饰系统。
2．同裂酶:不同来源的限制性内切核酸酶具有相同的识别序列，产生完全相同的黏性末端，将这些酶称为同裂酶(isoschizomer)。如BsuRI 和HaeⅢ的来源不同，但识别序列都是GG CC。有些同裂酶的识，gU 序列在另一酶的识别序列之内，如：BamHI 的识别序列为G GATCC，而Sau3AI 的识别序列为GATC，完全在BamHI 的识别序列之内。
简答
3．如何理解基因工程的两个特点?
基因工程的两个基本特点是分子水平的操作和细胞水平的表达。分子水平的操作包
括DNA 分离、切割和连接(还有其他一些DNA 的修饰等)。由于体外重组DNA 的
最终目的是要改变生物的遗传性，所以分子水平的操作和细胞水平的表达是基因工
程的两个最基本的特点。
2．列举质粒载体必须具备的4 个基本特性。
答：(1)独立复制；(2)有选择标记；(3)有独特的酶切位点；(4)能转化但不扩散。
2.什么是质粒的相容性?什么是不相容群?机制是什么?
质粒的相容性(compatibility)是指两种质粒是否可以共存于同一个细胞，如果能够共
存则叫相容(又叫亲和)，不能共存则称为不相容。从本质上说，能够共存于同一个
细胞中的质粒具有不同的复制机制，因而复制时互不于涉，并保持稳定。根据质粒
的这一特性将质粒分为若干个不相容群(incompatibility group)。同一个不相容群中
的质粒不能共存于同一个细胞，因为它们的复制机制相同，因此凡能共存于同一个
细胞中的质粒属于不同的不相容群，因为它们的复制机制不同。
11．自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，即使是ColEl 和pSCl01 这两个自然质粒
也不尽人意，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本内容?
(1)删除一些非必要的区段及对宿主有不良影响的区段，削减载体的分子量，使载体
具有更大的容纳外源片段的能力。
(2)加上易于选择或检测的标记。
(3)限制性内切核酸酶的酶切位点的改造，便于外源基因插入到载体中的特定位置。
(4)加上一些调控元件，有利于克隆基因的表达。
(5)安全性改造，限定载体的宿主范围
2．如何将野生型的九噬菌体改造成为一个理想的载体?
(1)削减分子量(除去非必需区和整合区)；(2)削减酶切位点；(3)添加选择标记；
(4)引入终止突变
1．为什么野生型的λ噬菌体DNA 不宜作为基因工程载体?
答：(1)噬菌体DNA 没有容载能力，因为噬菌体的头部对DNA 包装的量是有限制的，
不能大于基因组的105％，所以要将λ噬菌体改造成载体，必须削减分子量。
(2)野生型的λDNA 对于一些常用的酶都有多个识别和切割位点，不便于克隆。
(3)没有可供选择的标记。
(4)野生型的λ噬菌体具有感染性，因此不够安全。
2．什么是蓝白斑筛选法?
答：这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在λ载体的非必要区插入一
个带有大肠杆菌β—半乳糖苷酶的基因片段，携带有lac 基因片段的λ载体转入lac—
的宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚—β—D—半乳糖苷(X-gal)平板上形成浅
蓝色的噬菌斑。外源基因插入lac(或lac 基因部分被取代)后，重组的噬菌体将丧失分解
X-gal 的能力，转人lac—的宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚—β—D—半乳
糖苷(X-gal)平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。
5．λ噬菌体载体具有哪些优点与不足?
答：优点：(1)λ基因组中有1／3 的非必需区，可以被置换，改造成载体后，克隆的片段较大(可达20kb)，而质粒载体的克隆片段只有几个kb；
(2)用噬菌体DNA 作为载体，即使不进行体外包装，转染的频率也比质粒转化的
效率高，包装后的效率就更高了；
(3)λ可通过溶源化反应整合到寄主染色体上，当不需要外源基因大量表达时，可让
它以溶源性存在，若要表达，可通过诱导即可进入裂解途径，释放出大量的噬菌体，得
到的重组DNA 的拷贝数就会很多。
不足：(1)需要包装比较麻烦，包装率又不稳定，购买包装蛋白的费用又高；
(2)没有质粒的用途广泛。
8．以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组体？
答：改造的置换型噬菌体载体，重组人外源片段之后，总体积不能超过λ基因组的105％，
不能少于λ基因组的75％。以置换型λ噬菌体DNA 作为载体，首先要分离左、右两
臂同外源DNA 重组。如果没有外源片段，仅是两臂连接，长度短于λ基因组的75％，
不能被包入噬菌体颗粒，就不能感染寄主，也就不能形成噬菌斑。如果插入了外源片
段后，总长度超过丸基因组105％后，也不能包入噬菌体颗粒，自然不能形成噬菌斑
9．M13 系列载体具有哪些优缺点？
答:M13 克隆系统具有很多优点：
(1)克隆的片段大：M13 噬菌体的DNA 在包装时不受体积的限制，所以容载能力
大，有报道，有些噬菌体颗粒可以包装比野生型丝状噬菌体DNA 长6～7 倍的
DNA(插入片段可达40kb)。
(2)可直接产生单链DNA，这对于DNA 测序、DNA 诱变、制备特异的单链DNA
探针都是十分有用的。
(3)单链DNA 和双链DNA 都可以转染宿主，并可根据人工加上的选择标记进行筛
选。
M13 克隆系列的不足：
(1)较大的外源片段插入后，在扩增过程中往往不够稳定，一般说，克隆的片段越
大，发生丢失的机率越大。
(2)单链载体分子感染的细胞中，往往是单链和双链混杂，分离双链比较麻烦。
2．细菌的限制—修饰系统有什么意义?
不同种的细菌或不同的细菌菌株具有不同的限制酶和修饰酶组成的限制与修饰系统。修饰的本质是通过甲基化酶将DNA 中某些碱基进行甲基化修饰，由于宿主自身DNA 上的这些位点进行了修饰，限制酶就不能进行切割。由于外来的DNA 在相应的碱基上没有被甲基化，宿主的限制酶通过对该位点的识别来分辨敌我，并将人侵的外来DNA 分子降解掉。所以DNA 限制作用和修饰作用为细胞提供了保护。
3．说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株名的各一个首字母，再加上序号。
基本原则：3—4 个字母组成，方式是：属名+种名+株名+序号；
首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写；
第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写；
第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写；
(2)若种名有词头，且已命名过限制酶坝，j 取词头后的第一字母代替。
第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而
定，但用正体。
顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。
4．I 类限制酶具有哪些特点?在基因工程中有什么作用?
I 类限制性内切核酸酶的分子量较大，一般在30 万道尔顿以上，通常由三个不同的亚基所组成。例如限制性内切核酸酶EcoB 是由R(135kDa)，M(62kDa)和S(55kDa) 三种亚基组成的复合酶，这三个亚基分别由不同的基因编码。全酶的总分子量为449kDa，共5个亚基，其中R 亚基和M 亚基各两分子。
I 类酶不仅是一种内切核酸酶，同时在酶分子上还具有甲基化酶和ATPase 的活性，所以是具有多种酶活性的复合酶类。作用时除了需要Mg2+作辅助因子外，还要求ATP 和S—腺苷甲硫氨酸(SAM)的存在。I 类酶具有特异的识别序列，大约15 个碱基对。
I 类酶虽然能够在一定序列上识别DNA 分子，并能同DNA 分子作用，因其识别DNA 后，要朝一个方向或两个方向移动一段距离(通常为1000 个碱基左右)，并且要形成一个环才能切割DNA，所以识别位点和切割位点不一致，产生的片段较大。因此在基因工程中作用不大。
5．Ⅲ类限制酶有哪些特点?
Ⅲ类酶是基因工程中不常用的酶，分子量和亚基组成类似于I 类酶，作用方式基本同Ⅱ类酶。如EcoPI 是由两个亚基组成，一个亚基(M 亚基)负责位点识别和修饰，另一个亚基(R 亚基)具有核酸酶的活性。切割DNA 时需要ATP、Mg2+，也能被SAM激活，但并非必须。
7．什么是限制性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影响?
Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星活性。
概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量＞5％，v／v)；(2)限制性内切核酸酶用量过高(>100U／μg DNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8.0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。
基因工程考试试题.doc
基因工程 一名词解释 DNA，1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外 来 从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护 自身的 DNA不被讲解。限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。 2、各种限制与修饰系统的比较 Ⅱ型Ⅰ型Ⅲ型 识别位点4~6bp，大多为回文序列二分非对称5~7bp 非对称 切割位点在识别位点中或靠近识别位点无特异性，至少在识别位点外100bp 识别位点下游 24~26bp 简答 1. 何谓 Star activity？简述Star activity的影响因素及克服方法？ 答：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。 pH 引起星星活性的的因素：①高甘油浓度（>5%）；②酶过量（ >100U/μl ）；③低离子强度（ <25mmol/L）；④高(> ；⑤有机溶剂如DMSO （二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等；⑥用其它二价阳离子 星星活性的抑制措施：①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；②保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；③提高离子强度到100 ～ 150mM（在不抑制酶活性的前提下）；④降低反应pH至；⑤使用Mg2+作为二价阳离子。 2. 试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？（影响酶活性的因素？） 答：外因：反应条件、底物纯度（是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当，反应体系的选择、反应时间的长短 内因：星星活性、底物甲基化、底物的构象 3、 DNA末端长度对酶切割的影响 答：限制酶切割 DNA 时，对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的 核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。在设计PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切 割扩增的 PCR产物，应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。一般需加 3 ～4 个碱基对。 4、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？ 答：将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：①在宿主细胞内必须能够自主复制（具 备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA 片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于 筛选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。 5 抗性基因（ Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？ 答：氨苄青霉素抗性基因（ ampr）、四环素抗性基因（tetr ）、氯霉素抗性基因（ Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（ kanr , neor ）以及琥珀突变抑制基因supF 。 ⑴青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。氨苄青霉素抗性Ampr 编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化β - 内酰胺环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。 ⑵四环素与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。 Tetr 编码一个由 399 个氨基酸组成的膜 结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。 6. 何为α - 互补？如何利用α - 互补来筛选插入了外源DNA 的重组质粒？ 答：α - 互补指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β - 半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。α - 互补是基于在两个不同的缺陷β－半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。实现α- 互补主要有两部分组成：LacZ △ M15 ，放在 F 质粒或染色体上，随宿主传代；LacZ' ，放在载体上，作为筛选标记，当在 LacZ' 中插入一个片断后，将不可避免地导致产生无α- 互补能力的β－半乳糖苷酶片断。在诱导物IPTG 和底物 X-gal （同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有活性的β－半乳糖苷酶，不能分解 X-gal ，呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。 7、试简述λ噬菌体的裂解生长状态Lytic growth 和溶原状态 Lysogenic state 两种循环的分化及其调节过程？ 答：裂解生长状态是λ噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代λ噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂 解。溶原状态为λ噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA 中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程：由感染复数
基因工程习题及答案
第二章习题 一、单选题 1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ） A．I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶 E. RNAase 2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B ) A. 是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。 B. 它们的识别序列完全相同。 C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。 D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。 3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是（ A ） A. 37℃ B.30℃ C.25℃ D.16℃ E.33℃ 4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B ) A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。 B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。 C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。 D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。 E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。 5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D ) A. 1/44 B. 1/66 C. 1/64 D.1/46 E. 1/106 6. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C ) A. PH:2-4 B. PH:4-6 C. PH:6-8 D. PH:8-10 E. PH:4-10 7. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D ) A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。 B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。 C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。 D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。 E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。 8. II类限制酶反应中必须的阳离子是（ C ）
扬州大学基因工程期末试题复习要点整理
基因工程期末试题复习要点整理 基因工程是70年代出现的一门科学，是生物学最具生命力和最引人注目的前沿科学之一，是现代生物技术的代表，是生命科学类专业中的一门重要的专业课。本课程主要介绍基因工程概述、重组DNA基本技术及原理、基因克隆、基因的分离及鉴定、基因工程的表达系统、基因工程的应用等。通过本课程的学习，使学生掌握基因工程技术的基本原理和了解该技术在动物、植物和微生物等方面的应用，为今后从事生物学教学、生物技术研究和产品开发，或进一步的研究生学习科研打下坚实的理论及专业基础。扬州大学试题纸 一、名词解释：共10题，每题2分，共20分。 1. 基因: 是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。 2. 定位克隆: 获取基因在染色体上的位置信息，然后采用各种方法对该基因进行定位和克隆 3. 融合基因: 是指应用DNA体外重组技术构建的一类具有来自两个或两个以上的不同基因核苷酸序列的新型基因。 4. 转化子: 导入外源DNA后获得了新遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞，又称重组体。 5. 人工接头：是人工合成的具有一个或数个特定限制性内切酶识别和切割序列的双股平端DNA短序列。 6. RT-PCR: 是指以mRNA在反转录酶作用下合成cDNA第一链为模板进行的PCR。 7. ORF : 起始于AUG、止于UAA、UGA、UAG的连续的密码子区域，是潜在的编码区。 8. MCS: 指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。 9. gene targeting : 基因工程中利用活细胞染色体DNA可与外源DNA的同源性DNA序列发生重组的性质，来进行定点修饰改造染色体上某一目的基因的技术 10. 5’RACE: 是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到5’端之间未知序列的方法。 四、简答题：共4题，共20分。 1．简述获得目的基因常用的几种方法。（5分）
基因工程选择题试题库,很全
2. 第一个作为重组DNA载体的质粒是() (a) pBR322 (b)ColEI (c)pSCI01 (d)pUCI8 3. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当 (a) 由作用于同一DNA序列的两种酶构成 (b) 这一系统中的核酸酶都是U类限制性内切核酸酶 (c) 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d) 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4. H型限制性内切核酸酶：() (a) 有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b) 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c) 限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e) 仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5?下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?() (a) 限制酶是外切酶而不是内切酶 (b) 限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c) 同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的 (d) 一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端 (e) 一些限制酶在识别位点内相同的位臵切割双链DNA，产生平末端
6 .第一个被分离的U类酶是：() (a) EcoK (b)Hind 川(c)Hind U(d)EcoB 7?在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?() (a) 反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度 8. 在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?() (a) EDTA (b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA 9. 在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?() (a) S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶 10 .限制性内切核酸酶可以特异性地识别：() (a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列 (c)特定的三联密码(d)以上都正确 11.下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是()。 (a) Sau3A I (b)E . coRI (c)hind III (d)Sau 3A1 12 .限制性内切核酸酶的星号活性是指：() (a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。(b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快(d)识别序列与原来的完全不同 13 .下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?() (a)甘油含量过高(b)反应体系中含有有机溶剂 (c)含有非Mg2+的二价阳离子(d)酶切反应时酶浓度过低 14. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当
基因工程测试题
基因工程测试题 一、选择题： 1.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成。通过转基因技术可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A.大肠杆菌 B.酵母菌 C.肺炎双球菌 D.乳酸菌 2.下列有关基因工程的叙述，正确的是( ) A．DNA连接酶将碱基对之间的氢键连接起来 B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变 C．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大 D．常用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等 3.我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是( ) A.抗虫基因的提取和运输需要专用的工具酶和载体 B.重组DNA分子中替换一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失 C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递到近缘作物，从而造成基因污染 D.转基因抗虫棉是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的 4.如图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因(kan r)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养
基上生长。下列叙述正确的是( ) A.构建重组质粒过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶 B.愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株 C.卡那霉素抗性基因(kan r)中有该过程所利用的限制性核酸内切酶 的识别位点 D.抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传 5.上海医学研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍，以下与此有关的叙述中正确的是( ) A.“转基因动物”是指体细胞中出现了新基因的动物 B.“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因 C.只有从转基因牛乳汁中才能获取人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在牛乳腺细胞中含有 D.转基因牛的肌肉细胞中也有人白蛋白基因，但不发生转录、翻译，不能合成人白蛋白 6.下列关于蛋白质工程和基因工程的比较，不合理的是( )
【精品】2021年高中高三生物二轮复习专题练习含答案解析4：基因工程
2021年高三生物二轮复习专题练习4含答案解 析：基因工程 一、选择题 1.下列关于基因工程应用的叙述，正确的是( ) A．基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因 B．基因诊断的基本原理是DNA分子杂交 C．一种基因探针能检测水体中的各种病毒 D．利用基因工程生产乙肝疫苗时，目的基因存在于人体B淋巴细胞的DNA中 2.1970年，特明和巴尔德摩证实了RNA病毒能依赖RNA 合成DNA的过程，并发现了催化此过程的酶。下面为形成cDNA 的过程和PCR扩增过程示意图。请根据图解分析，下列说法不．正确的是( ) A．催化①过程的酶是逆转录酶 B．从图示可以看出要将碱基对之间的氢键断开可以用核酸酶H和高温处理 C．从图中信息分析可知，②⑤过程为DNA复制，催化⑤过程的酶能耐高温 D．如果RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶30
个 3.在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是( ) A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 4.如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是( ) A．将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法 B．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌 C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌 D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长 5.在基因工程操作中限制性核酸内切酶是不可缺少的工具酶。下列有关限制性核酸内切酶的叙述错误的是( )
武生院基因工程期末试题
2013-2014年度第二学期基因工程期末考试 卷型：A 考试时间：90分钟满分：100分 一、名词解释（3×5） 限制性内切酶(或其它工具酶)：能在特异位点上催化双联DNA分子断裂，产生相应的限制性DNA片段 荧光定量PCR:所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 （半定量PCR:是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过mRNA反转录成cDNA，再进行PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量） 星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段 同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端 转基因技术（或转基因动植物等）：就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。 二、填空（1×15） 1.Cosmid 实际上是由cos 位点和质粒构成的杂合载体，也可以说是带有cos 序列的质粒。 2.超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA 在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒>线状质粒>开环质粒。 3.质粒DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。 4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。
5.设计引物是一般要求C+G的比例在40%-60%，长度在17-30bp 。 6.BAC载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。 三、选择题（2×15，实卷应是1×35） 1.基因工程创始人（D） A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen 2.迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C） A. 既可以作用于双链DNA ，又可以作用于单链DNA B.只能作用于单链DNA C. 只能作用于双链DNA D.只能作用于RNA 3.氨苄青霉素的工作原理为（A ） A.可以抑制细胞壁肽聚糖的合成 B.可以抑制核糖体的转位 C.可以与核糖体50S 亚基结合并抑制蛋白质合成 D.可以与核糖体30S 亚基结合并抑制蛋白质合成 4.反转录酶是一种（C ） A. 依赖DNA的DNA聚合酶 B. 依赖DNA的RNA聚合酶 C. 依赖RNA的DNA聚合酶 D. 依赖RNA的RNA聚合酶 5.II 类限制性内切核酸酶( A ) A．仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 B．限制性识别非甲基化的核苷酸序列 C．有外切核酸酶和甲基化酶活性
基因工程测试题经典
xxxXXXXX 学校XXXX 年学年度第二学期第二次月考 XXX 年级xx 班级 姓名：_______________班级：_______________考号：_______________ 一、选择题 （每空？ 分，共？ 分） 1、下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是 A ．蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的 B ．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质 C ．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作 D ．基因工程完全不同于蛋白质工程 2、PCR 是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术，下列有关PCR 过程的叙述，不正确的是 A ．变性过程中破坏的是DNA 分子内碱基对之间的氢键 B ．复性过程中引物与DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C ．延伸过程中需要DNA 聚合酶、ATP 、四种核糖核苷酸 D ．PCR 与细胞内 DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高 3、35．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。下列有关叙述，正确的是（ ） A ．人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目，小于凝血因子氨基酸数目的3倍 B ．可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA 分子导入羊的受精卵 C ．在该转基因羊中，人凝血因子基因只存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D ．人凝血因子基因开始转录后，DNA 连接酶以DNA 分子的一条链为模板合成mRNA
4、ch1L基因是蓝细菌拟核DNA上控制叶绿素合成的基因．为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞．技术路线如图所示，对此描述错误的是（） 5、下图表示基因工程中目的基因的获取示意图，不正确的是： A、同种生物的基因组文库大于cDNA文库 B、③表示PCR技术，用来扩增目的基因 C、从基因文库中要得到所需目的基因，可根据目的基因的有关信息来获取 D、只要基因的核苷酸序列已知，就只能通过人工合成的方法获取 6、图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序 列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正确的是：
基因工程和细胞工程测试题(附答案,可用于考试)
5 高二生物《基因工程和细胞工程》测试题姓名班级 （时间：90分钟分数：100分） 一．选择题（本大题包括25题，每题2分，共50分。每题只有一个选项符合题意。） 1．以下说法正确的是（） A.所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B．质粒是基因工程中惟一的运载体 C．运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 2．植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不．相符的是（） A．纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理——酶的专一性 B．植物组织培养和动物细胞培养——细胞的全能性 C．植物体细胞杂交和动物细胞融合——生物膜的流动性 D．紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞分裂 3．有关基因工程的叙述正确的是（） A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用 B.重组质粒的形成在细胞内完成 C.质粒都可作运载体 D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 4．能克服远缘杂交障碍培育农作物新品种的技术是（） A.基因工程 B.组织培养 C.诱变育种 D.杂交育种 5．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是( ) A．培养人的效应T细胞能产生单克隆抗体 B．培养人的B细胞能够无限地增殖 C．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株 D．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞 6．PCR技术扩增DNA,需要的条件是( ) ①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体 A、①②③④ B、②③④⑤ C、①③④⑤ D、①②③⑥ 7．以下对DNA的描述，错误的是（） A.人的正常T淋巴细胞中含有人体全部遗传信息 B.同种生物个体间DNA完全相同 C.DNA的基本功能是遗传信息的复制与表达 D.一个DNA分子可以控制多个性状 8. 蛋白质工程中直接需要进行操作的对象是（） A.氨基酸结构 B.蛋白质空间结构 C.肽链结构 D.基因结构 9．细胞工程的发展所依赖的理论基础是（） A.DNA双螺旋结构模型的建立 B.遗传密码的确立及其通用性的发现 C.生物体细胞全能性的证明 D.遗传信息传递的“中心法则”的发现 10．下列不是基因工程中的目的基因的检测手段的是：（） A.分子杂交技术 B.抗原—抗体杂交 C.抗虫或抗病的接种 D.基因枪法 11．在以下4种细胞工程技术中，培育出的新个体中，体内遗传物质均来自一个亲本的是（） A.植物组织培养 B. 单克隆抗体 C. 植物体细胞杂交 D.细胞核移植 12．动物细胞融合与植物细胞融合相比特有的是（） A.基本原理相同 B.诱导融合的方法类 C.原生质体融合 D.可用灭活的病毒作诱导剂 13．下列哪一项属于克隆（） A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内 C．将鼠骨髓细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
基因工程练习题(附答案)
基因工程练习题 1、在基因工程中使用的限制性核酸内切酶，其作用是( ) A、将目的基因从染色体上切割出来 B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列 C、将目的基因与运载体结合 D、将目的基因导入受体细胞 2、基因工程中常用细菌等原核生物作受体细胞的原因不包括( ) A、繁殖速度快 B、遗传物质相对较少 C、多为单细胞，操作简便 D、DNA为单链，变异少 3、基因工程是DNA分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、限制酶只用于切割获取目的基因 B、载体与目的基因可以用同一种限制酶处理 C、基因工程所用的工具酶是限制酶，DNA连接酶 D、带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测 4、运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有( ) A、抗虫基因 B、抗虫基因产物 C、新的细胞核 D、相应性状 5、转基因动物转基因时的受体细胞是( ) A、受精卵 B、精细胞 C、卵细胞 D、体细胞 6、基因工程中常见的载体是( ) A、质体 B、染色体 C、质粒 D、线粒体 7、水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中Asp、Gly、Ser构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是( ) A、促使目的基因导入宿主细胞中B、促使目的基因在宿主细胞中复制 C、使目的基因容易被检测出来 D、使目的基因容易成功表达 8、运用现代生物技术的育种方法，将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中，培育出转基因抗虫的油菜品种，这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白质，对菜青虫有显著抗性，能大大减轻菜青虫对油菜的危害，提高油菜产量，减少农药使用，据以上信息，下列叙述正确的是( ) A、Bt基因的化学成分是蛋白质 B、Bt基因中有菜青虫的遗传物质 C、转基因抗虫油菜能产生杀虫蛋白是由于具有Bt基因 D、转基因抗虫油菜产生的杀虫蛋白是无机物 9、人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A、大肠杆菌 B、酵母菌 C、T 噬菌体 D、质粒DNA 4 10、不属于质粒被选为基因运载体的理由是（） A．能复制 B.有多个限制酶切点C．具有标记基因D．它是环状DNA
华东理工大学2004–2005学年第二学期基因工程期末考试
华东理工大学2004–2005学年第二学期 《基因工程》课程期末考试试卷B2005.6 开课学院：生物工程学院，考试形式：开卷，所需时间：120分钟 考生姓名：学号：专业：班级 一、问答题（共15分） 某表达质粒上含有一个能在大肠杆菌中可溶性表达的基因A，若将外源基因B插入到基因A的3' 末端，使之产生可溶性融合蛋白A-B，试设计合理的重组方案。（15分） ___ 起始密码子 A 基因全序列ATGATCGGGATTCGCTGGGATAAAGTGCACCTCAATATAGCACACGCTTGCAACGCAAAGAGC CCCGATTTCTGTAACCGCCAGCACAAAGATGCGGAACACCCAAAAGTGGCGGCAAACGCCTTC AACCGGATCCCGGGATATCAGCTGAGATCTGCTTTCTAG ___ 终止密码子 ___ 起始密码子 B 基因部分序列TCCCGGGATCCATGCTC.........................CGCTAAGAGGATCCTCCCGGGT ___ 终止密码子 BamHI：G\GATCC BglII：A\GATCT EcoRV：GAT\ATC EcoRI： G\AATTC SmaI：CCC\GGG PvuII：CAG\CTG 二、问答题（共15分） 简述基因洗牌术（DNA Shuffling）的工作原理及用途。 三、问答题（共10分） 为什么说多型汉逊酵母表达系统有可能比巴斯德毕赤酵母表达系统更优越？
四、问答题（共20分） 人促红细胞生长素（EPO）系一糖蛋白，其生物活性严格依赖于糖基侧链的序列和大小，临床上主要用于改善癌症患者由于放疗化疗所引起的红细胞降低症侯群。试设计一种高产人EPO的重组表达系统，内容包括： （1）选择合适的受体系统，并说明理由；（6分） （2）选择合适的载体系统，并说明理由；（6分） （3）确定合适的高效表达方案，并简述其机制。（8分） 五、问答题（共20分） 随着植物转基因技术的日趋成熟，世界范围内被批准上市的转基因农作物也不断涌现，然而人们对转基因产品的安全性仍有争论，至少他们要求对餐桌上的食物是否由转基因植物加工而成拥有知情权。为此，建立一种能区分转基因植物和天然植物的检测方法十分重要。目前，世界各国批准上市的转基因植物种类繁多，但绝大多数使用花椰菜花斑病毒（CaMV）的35S启动子。请设计一种能快速灵敏地检测转基因植物的实验程序，并简述其机制。 六、问答题（共20分） 下图是链霉菌的某段DNA序列，试分析其可能的开放阅读框（ORF），并写出： （1）N端10个氨基酸序列；（7分） （2）C端10个氨基酸序列；（7分） （3）潜在的SD序列。（6分） 5’CGCTTGAATTCGTTCCATCTGGAGTCTGTACATGACCAGCCGATACGGCAGCCGGCAGGAACT CGGCCAGAAGTTCCTCGTCGACCCCGACATCATCAAGCTGATACGCCGAGCCGCCGAACGAACGG AAGGTCCCATCGTTGATCTGGGCGCCGGAGACGGCGCCCTGACGCTGCCCTTGAGTCGATTGGGC CGCCCTGTCACCGCGGTTGAGCTCGATCCCCGCCGGGTCAAACGGCTTTCGGCGCGTGCCCCGGA AAACGTCAAGGTCGTCGGCGAGGACATTCTGCGCTTTCGGCTTCCGACCGTTCCGCACACCGTCG TGGGGAACATCCCCTTCCATGTCACGACGGCCACGATGCGCCGGATCCTGGTGGCTCCCGCATGG GTGTCGGCCGTCCTCGTGGTGCAGTGGGAAGTGGCGCGCCGCCGGGCCGGCATCGGCGGCTGCTC GCTGGTCACGGCGGAGTCCTGGCCGTGGTTCGACTTCTCGGTGCTCAAGCGGGTGCCGAGGTTCG CCTTCCGGCCCGCGCCCTCCGTGGACGGCGGGATCCTCGTCATCGAGCGGCGGCCCGAGCCACTG GTGCGGGAGCGCAGGGAGTACCAGGACTTCGTCAGACAGGTCTTCACCGGGCGCGGTCACGGGCT GCGGGAGATCCTCCAACGCATCGGGCGGGTCCAGGACAGCGACCTGTCCGCGTGGTTCAGGGCAC ATGGAGTCTCGCCGCAGGCGCTGCCGAAGGACCTCACCGCCGAGCAGTGGGCGTCGCTCTGGGGC ATGGCGCGTGGCGGCCGGTCCGTGCCGCGGACGCGGATACTCCGGGACCTGCCGCACCGCACGTC CCTCGGGCCGCGGCGCAACAGCGGCTGACGCGGGCGGCAACCGGCGTGGCGGGCCGG 3’
基因工程试题及答案
基因工程试题及答案 【篇一：基因工程题库以及答案】 因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是： (1)____________， (2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和 __________。 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。 5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。 8．限制性内切核酸酶bsuri和haeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．dna聚合酶i的klenow大片段是用_____________切割dna聚合酶i得到的分子量为76kda的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。 10．为了防止dna的自身环化，可用_____________去双链 dna__________________。 11．egta是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的t7 dna聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记dna的基本原理在于利用 _________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链dna分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化dna的合成外，还具有____________的作用，可以将dna- rna杂种双链中的___________水解掉。
基因工程实验考试试题(答案)
1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？ 答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。 2.如何正确使用微量移液器？ 答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。 3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？ 答：loading Buffer。主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。 溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。 4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。 答：①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂糖溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线； ④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。 5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75） 答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否； 6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31） 答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。 7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？ 答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。 8.提取DNA实验中，通常可选用哪些试剂沉淀DNA？ 答：冷的无水乙醇、冷的异丙醇、终浓度为0.1～0.25mol/L 的NaCl 9.简述在DNA提取实验中个试剂的作用（SDS，EDTA，酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇，70%乙醇）。 答：SDS——破坏细胞膜，解聚核蛋白；EDTA——整合金属离子，抑制DNase活性；酚/氯仿/异戊醇——见第7题；无水乙醇——沉淀DNA；70%乙醇——洗涤DNA沉淀。 10.简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用（Mg2+，dNTP，引物，DNA，缓冲液，Taq DNA聚合酶）。 答:(1)利用半保留复制的原理，以待扩增的DNA为模板，通过一系列酶在体外引物介导下，
2015-2017基因工程高考题附答案
选修3——基因工程高考题 1．（2017?新课标Ⅰ卷.38）（15分） 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A（有内含子）可以表达出某种特定蛋白（简称蛋白A）。回答下列问题： （1）某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是_____________________________________________。 （2）若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用______________作为载体，其原因是_______________________________________________________________。（3）若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比，大肠杆菌具有_____________________________________________________（答出两点即可）等优点。 （4）若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是___________________（填“蛋白A 的基因”或“蛋白A的抗体”）。 （5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是_______________________________________________________________________________。2．（2017?新课标Ⅱ卷.38）（15分） 几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题： （1）在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是________________________________。提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是______________________________________。 （2）以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是________________________________。 （3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是________________________________________________________（答出两点即可）。（4）当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是__________________________。 （5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是____________________________________________。 3.（2017?新课标Ⅲ卷.38）（15分）编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。 回答下列问题： （1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是_____________________________________________________________。（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为________________，加入了________________作为合成DNA的原料。 （3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。 ①由图2 可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是________________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是________________________。 ②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少______________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。 4．（2017·天津理综卷9）（20分）玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤I、II试验。 Ⅰ．获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。 （1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是______（单选）。 ①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点 ②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
基因工程期末考试重点知识整理教学文案
基因工程期末考试重点知识整理
基因工程 第一章基因工程概述 1、基因工程的概念(基因工程基本技术路线PPT) 基因工程（Gene Engineering）,是指在基因水平上的遗传工程,它是用人为方法将大分子(DNA)提取出来,在离体条件下用适当的工具酶进行切割后,把它与作为载体的DNA分子连接起来,然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中,以让外源遗传物质在其中“安家落户”,进行正常的复制和表达,从而获得新物种的一种崭新的育种技术. 2、基因工程的历史 基因工程准备阶段：1972，第一个重组DNA分子的构建，构建人：Paul Berg 及其同事PPT 基因工程诞生：1973，Cohen & Boyer首次完成重组质粒DNA对大肠杆菌的转化 基因工程发展阶段的几个重要事件： 一系列新的基因工程操作技术的出现； 各种表达克隆载体的成功构建； 一系列转基因菌株、转基因植物、转基因动物等的出现 3、基因工程的内容（P9） 4、基因克隆的通用策略（P12）(基因组文库(鸟枪法)+分子杂交筛选)
第二章分子克隆工具酶 5、限制性核酸内切酶的概念、特点、命名、分类(问答) 概念：一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶，主要存在于细菌体内 特点（参加PPT） 命名：依次取宿主属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后加上序号。如：从Haemophilus influenze Rd中提取到的第三种限制型核酸内切酶被命名为Hind Ⅲ，Hin指来源于流感嗜血杆菌，d表示来菌株Rd，Ⅲ表示序号。 分类：依据酶的亚单位组成、识别序列的种类以及是否需要辅助因子可分为：Ⅰ型酶、Ⅱ型（Ⅱs型）酶和Ⅲ型酶。 真核细胞中有4中DNA聚合酶：α，β，γ，线粒体DNA聚合酶 原核生物中3中DNA聚合酶：Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ
基因工程作业题及答案
第二章 1. 名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶 答： 核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。 核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。 同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。 同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。 核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。 末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA 3’-OH端随机 添加dNTPs的酶 2. 限制性内切核酸酶的命名原则是什么？ 答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号； 首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写； 第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写； 第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写； (2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。 第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。 顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。 3．部分酶切可采取的措施有哪些？ 答：1）缩短保温时间 2）降低反应温度 3）减少酶的用量 4. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp 的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么? 答：回文序列是：5'-CATA TG-3， 5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响? 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松 动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因 条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星 活性。 概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性 内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如 Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 第三章 1．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体? 答：①删除λ噬菌体的非必需区，留出插入空间；并在余下的非必须区内制造限制酶切点 ②引进某些突变表型，作为选择标记 ③突变某些基因，使它成为安全载体 ④删除λDNA必须区段上常用的限制酶切点