LH-20装填和使用说明
Sephadex LH-20 装填指南
Sephadex LH－20 是由葡聚糖G-25羟丙基化工而成，属于分子筛凝胶，尤其适用于天然产物在有机溶剂中的纯化。例如：类固醇、萜类、脂类以及小分子多肽等，Sephadex LH－20同时适用于分子类别非常相似的物质的分离和工业规模的制备，即可用于初步纯化步骤，也可用与最终精制步骤，如非对映同分异构体的分离。
制备凝胶悬浮液
装填的重要原则之一就是需要形成一个稳定均一的柱床。胶颗粒越均一（粒径分布越窄），越容易获得稳定均一的柱床。但是对于Sephadex LH－20而言，25～100μm的粒径范围相对于许多用于制备色谱的填料而言，不能说分布均一，也就是说其粒径分布较宽。然而当胶溶胀后就相对容易得到均一的柱床。这对于长柱（最高至250cm）而言也是同样的。在装柱前，层析柱和储槽都必须进行彻底清洗。
Sephadex LH－20在使用之前必须进行溶胀。在溶胀的过程中，要尽量避免过分搅拌，否则会破坏球形胶粒，且要避免使用磁力搅拌器。
1．在室温下，将凝胶溶胀于层析溶剂中至少三小时，溶胀后胶体积的大小决定于所使用的溶剂系统，请参考后页之胶溶胀表计算特定柱体积所需要干胶的量。
2．使溶胀的胶体积沉淀之后占总体积的75％，上层溶剂占25％，这时，悬浮液从一个容器倒入另一个容器时胶粒可移动。
3．将溶胀后的凝胶根据装柱要求均匀倒入柱内，在保证胶粒不变形的前提下，应在尽可能高的压力下装柱，反压不要超过1.5ba。
表一干胶溶胀表
1．包含1％的乙醇。
2．包含1％的苯。
3．溶胀胶体积小于2.5mL／g的溶剂没有使用价值。
平衡
上样前，用洗脱液平衡层析柱至少两个柱体积直到基线变得平稳为止，如改变溶剂应该注意凝胶在新溶剂中的溶胀性质，并根据性质确定柱高调节器的位置，如使用相同的溶剂，在以后的层析中柱平衡可以省略。
洗脱液
为确保延长层析柱的使用寿命，所有的缓冲液都应该离心或经过0.45um的膜过滤以除去杂质。
样品
样品体积应该占柱总体积的1-2％，同样在使用之前样品应该离心或经过0.45um的膜过滤。洗脱
洗脱流速应根据情况而定，最大线流速约12cm／min（反压1.5ba），建议流速为1-10cm／h。总体来说，较低的流速，具有较高的分辨率。
再生
凝胶再生通常事先用2-3个柱体积的洗脱液进行清洗，如果换洗脱液，则需要重新平衡。体积流速与线性流速的关系
线性流速＝体积流速／横截面积
溶胀体积
由于Sephadex LH－20的溶胀体积依赖于溶剂，所以对于不同直径的柱可根据比例增加或减少旧柱体积以便计算出新体积。
新体积＝旧体积×（新柱体积／旧柱体积）
胶的性质
Sephadex LH－20同时具备亲水和亲脂双重性质，且被分离物质的极性再分离过程中起着重要作用。
?????
葡聚糖凝胶Sephadex LH-20使用说明
1450.00/100g
适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子，天然产物在有机溶剂中的纯化。可以非常经济的大规模制备各种天然产物，尤其在中药有效成分提取中作为大孔吸附树脂解析物的纯化。
结合凝胶过滤﹑分配色谱及吸附层析于一身，能分离结构相近的分子。因此使用中要考略几种色谱的作用机制。
最高载量可达250mg样品/ml凝胶﹑极少需要再生﹑使用得当，分离效果可保持不变。
上样量视被分离物的结构性能的差异而定－差异大，则大；差异小，则小。
凝胶过滤的上样量一般为5－7％的床体积，我们建议初次上样量控制在1－2％的床体积，视分离情况可以逐步增加；柱高的选择也与分离要求相关――难分物质要有一定柱高和流速控制；流动相可参考TLC的条件，正确的流动相可以提高分离度并缩短分离时间。
流动相的常用溶剂为：水甲醇丙酮乙酸乙酯二氯甲烷
上述溶剂的极性依次降低，对带有极性的被分离物而言，保留值和分离度依次递增；同理选用的凝胶柱高可依次降低，流速可以增大（或上样量可以增加，树脂体积在低极性溶剂中明显收缩）。
溶剂的溶解性，极性，沸点，毒性都是要考虑到的，二氯甲烷通常对被分离物质间的极性和碱性差异比较小时采用。
甲醇通常对带环状(包括苯环)物质分离采用，葡聚糖凝胶对环状物质有强烈吸附。LH-20同时具备亲水和亲脂双重性质，且被分离物质的极性在分离过程中起着重要作用。
使用方法：将干粉浸泡于60—70％乙醇中过夜（充分搅拌），洗去可能存在的残留物，抽干然后湿态不间隙装柱，绝对不能出现凝胶断层（否则要重新装柱），动态用一倍柱体积的60—70％乙醇淋洗，再用水洗净乙醇即根据自己选用洗脱液平衡层析柱至少两个柱体积直到基线变得平稳为止，如改变溶剂应该注意凝胶在新溶剂中的溶胀性质，并根据性质确定柱高.如使用相同的溶剂，在以后的层析中柱平衡可以省略。
1. 先讲Sephadex LH-20 的原理。 Sephadex LH-20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH-20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
2.再讲Sephadex LH-20 洗脱溶剂。Sephadex LH-20 洗脱溶剂分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
3.接下来讲样品的处理和洗脱溶剂的选择。如果样品极性大，选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（必须要进行过滤！否则把Sephadex LH-20 堵塞，就必须将Sephadex LH-20 的柱头部分弃去，造成不必要的浪费）。如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
Sephadex LH20使用心得谈：
1 Sephadex LH20是一种价钱较高的填料，使用请千万注意，很贵的哟！（当然，老板有钱就
另当别论拉）
2 先讲Sephadex LH20 的原理。Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3 再讲Sephadex LH20 洗脱溶剂。听我讲完第2点后，其实就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
4 接下来讲样品的处理和洗脱溶剂的选择。如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－
甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
5 分离的技巧，最后说说我的使用心得
（1）流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。
（2）柱子尽可能长，Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。
（3）馏分一定要接的细，可1／10，或1／20 个保留体积接成一馏分。
（4）洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。
（5）鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质（6）Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳，方法很成型，有大量文献参考。（7）填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶
剂将甲醇替换出来，待用
Sephadex LH－20分离黄酮类化合物经验
人们对Sephadex LH20的分离原理目前还主要认为有以下有两方面：一）过滤作用，二）反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用是反向分子筛原理，大分子的化合物被筛出，先被洗脱下来，小分子的化合物保留，最后出柱。在反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还能起一个反相分配的作用，这个时候分子大小相同的化合物，极性大的那个就要被先被洗脱下来，极性小的化合物后出柱。在正相溶剂洗脱，这主要*分子筛作用来分离。
Sephadex LH20在黄酮类化合物分离纯化时比较有意思，对于分离黄酮苷元类化合物，主要起作用的是吸附作用，吸附程度取决于游离酚羟基的数目，但是成苷时，分子筛就起主导作用了。在硅胶板上或聚酰胺薄层上与相对应的单个黄酮苷元几乎分不开，但是用小量氯仿比上大量甲醇混合溶剂溶解成真溶液后，上Sephadex LH20，用甲醇冲洗，很快单个的黄酮苷元就下来了，双黄酮苷元要冲洗17～19个柱床体积才能下来，有黄色色带，肉眼很容易观察到。
关于Sephadex LH20的梯度洗脱，大家意见也不同，这个只能自己对于自己所要分的那系列化合物试着做了，例如我在分离黄酮类化合物时基本上都是纯的甲醇，如果不行才会选用甲醇－水系统，例如好多人喜欢在反相溶剂洗脱中用的是甲醇－水系统。先用水，然后增加甲醇比例，最后用甲醇冲柱；正相以氯仿－甲醇最为常见，起步比例氯仿－甲醇（1：1），然后增加甲醇比例，最后用甲醇冲柱。
其实，在Sephadex LH20使用过程中，分离技巧也是十分重要的，
1）流速要控制好，既不可过快也不可过慢，为了快加压，分子筛效果就会大大降低；过慢会导致样品在柱子扩散严重，达不到分离效果。
2）柱子要长短适应（决不象有些人说的那样，越长越好，我们就两个Sephadex LH20上行为相似的黄酮苷元做过试验，相同的胶体装一根又细又长和长短合适的柱子，前者分离效果反而不好，觉得可是能流速会降低，相应的扩散也变大了）。
3）每一流分一定要细接，千万不要怕麻烦，我们常1／15~1／30 个保留体积一接。
再提两点注意事项：
1）如果黄酮类化合物粗提物中有鞣质，那么你就要小心了，Sephadex LH20对鞣质几乎是死吸附的。为了给老板省钱，最好先考虑除鞣，再用Sephadex LH20。
2）上样量不要超载，使用这么长时间的Sephadex LH20了，不同种类的化合物会不同，但是整体上载样量不大，千万注意不要超载。
生物分子下游纯化的对象一般包括蛋白、酶、重组蛋白、单抗、抗体及抗原、肽类、病毒、核酸等。纯化前首先需要测定生物分子的各物理和化学特性，然后通过实验选择出最有效的纯化流程。
1.测定------分子量、PI
当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中，可简易地测出PI，并选择纯化用缓冲液的最佳PH。
2.选择------层析方法
若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解，可尝试几种不同的纯化方法：
一] 使用最通用的凝胶过滤方法，选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份。
二] 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质，再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。
三] 体积大的样品，往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品，可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理，洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。
3.纯化------大量粗品
处理大量原液时，为避免堵塞柱子，一般使用sepharose big beads、sepharoseXL、sepharose fast flow等大颗粒离子交换介质。扩张柱床吸附技术利用多种STREAMLINE介质，直接从含破碎细胞或组织萃取物的发酵液中俘获蛋白。将离心、超滤、初纯化结合为一。提高回收率，缩短纯化周期。
4.纯化------硫酸氨样品
硫酸氨沉淀方法常被用来初步净化样品，经处理过的样本处于高盐状态下，很适合直接上疏水层析。若作离子交换，需先用Sephadex G-25脱盐。疏水层析是较新技术，随着介质种类不断增多，渐被融入各生产工艺中。利用Hitrap HIC Test Kit 和RESOURCE HIC Test Kit可在八种疏水介质中选择最适合介质及最佳的纯化条件。低盐洗脱的样品可稍加稀释或直接上其它吸附性层析。
5.纯水-----糖类分子
固化外源凝订素如刀豆球蛋白、花生、大麦等凝集素，可结合碳水化合物的糖类残基，很适合用作分离糖化细胞膜组份、细胞、甚至亚细胞细胞器，纯化糖蛋白等。两种附上外源凝集素的Sepharose 6MB亲和层析介质，专为俘获整个细胞或大复合物，如膜囊等。
6.纯化------膜蛋白
膜蛋白分离常使用去污剂以保持其活性。离子性去污剂应选用与目标蛋白相反电荷者，避免在作离子交换时和目标蛋白竞争交换介质，籍此除去去污剂。非离子性去污剂可以疏水层析除去。
7.纯化------单抗、抗原
*单抗多为IgG。来源主要是腹水和融合瘤培养上清液。腹水有大量白蛋白、转铁蛋白和宿主抗体等。Mabselect、Protein G和Protein A对IgG的Fc区有专一性亲和作用，能一步纯化各种不同源的IgG。血清互补剂如小牛血清可先用蛋白G预处理，在培养前除去IgG。重组蛋白A介质Mabselect和rProtein A Sepharose FF对IgG有更高的载量和专一性，基团脱落更少。脱落的rProtein A用离子交换Q Sepharose HP或凝胶过滤Superdex 200，很容易去除。
*疏水层析Phenyl Sepharose HP亦很适合纯化IgG。宿主抗体和污染IgG可用凝胶过滤Superdex 200在精细纯化中去除。
*纯化IgG抗原最有效的方法是用活化偶联介质如CNBr、NHs activated Sepharose FF偶联IgG，再进一步获取IgG抗原。
*HiTrap IgM是用来纯化融合瘤细胞培养的单抗IgM，结合量达5mg IgM。HiTrap IgY是专门用来纯化IgY，结合量达100mg纯IgY。
8.纯化------重组蛋白
重组蛋白在设计、构建时应已融入纯化构想。样品多夹杂了破碎细胞或溶解产物，扩张柱床吸附技术STREAMLINE便很适合做粗分离。Amersham biosciences提供三个快速表达、一步纯化的融合系统。
一] GST融合载体使要表达的蛋白和谷胱甘肽S转移酶一起表达，然后利用Glutathione Sepharose 4B作亲和层析纯化，再利用凝血酶或因子Xa切开。
2．蛋白A融合载体使要表达的蛋白和蛋白A的IgG结合部位融合在一起表达，以IgG Sepharose 6 FF纯化。
二] 含组氨酸标记（Histidine-tagged）的融合蛋白可用Chelating Sepharose FF螯合Ni2+金属，在一般或变性条件（8M尿素）下透过组氨酸螯合融合蛋白。HisTrap试剂盒提供整套His-Tag蛋白的纯化方法。
9.纯化------包涵体蛋白
包涵体蛋白往往需溶于6M盐酸胍或8M尿素中。高化学稳定性的Superose 12及Sepharose 6FF凝胶过滤介质很适合在变性条件下做纯化。变性纯化后的蛋白需要复性至蛋白的天然构象。Superdex 75、Q Sepharose FF和Phenyl Sepharose FF分别被发现有助包涵体蛋白的复性。一般包涵体蛋白样品的纯度越高，复性效果越好。SOURCE 30 RPC反相层析介质很适合纯化复性前的粗品，并可以1MnaOH 重生。此方法纯化后的包涵体蛋白，复性回收率明显提高。
10.包涵体蛋白固相复性
*近年许多文献报导将包涵体蛋白在变性条件下固定（吸附）在层析介质上，一般用各种Sepharose FF离子交换层析介质。去除变性剂后，蛋白在介质上成功复性，再将复性好的蛋白洗脱下来。固相复性避免了一般复性过程中蛋白质聚体的形成，所以复性得率更高，而且无需大量稀释样品，并将复性和初纯化合二为一，大大节省时间及提高回收率。
*固相复性方法也被用于以HiTrap Chelating金属螯合层析直接复性及纯化包涵体形式表达的组氨酸融合蛋白；以HiTrap Heparin肝素亲和层析直接复性及纯化包涵体形式表达的含多个赖氨酸的融合蛋白。两种亲和层析预装柱均可反复多次重复使用，比一般试剂盒更方便、耐用。
11.纯化------中草药有效成分
中药的化学成分极其复杂。传统中药多是煎熬后服用，有效成份多较为亲水，包括生物碱、黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸、多糖、肽和蛋白质。灵活及综合性地利用多种层析方法。如离子交换、分子筛、反相层析，更容易分离到单一活性成分。Sephadex LH-20葡聚糖凝胶同时具备吸附性层析和分子筛功能，例：如用甲醇分离黄酮甙，三糖甙先被洗下来，二糖甙其次，单糖甙随后，最后是甙元。Sephadex LH-20可使用水、醇、丙酮、氯仿等各种试剂，广泛用于各种天然产物的分离，包括生物碱、甙、黄酮、醌类、内脂、萜类、甾类等。
*生物碱在酸性缓冲液中带正电，成为盐，HiTrap SP阳离子交换层析柱可以分离许多结构非常近似的生物碱。相反，黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸等可溶于偏碱的缓冲液中，在HiTrap Q阴离子交换柱上分离效果良好。
*一般多糖纯化大多使用分子筛如Sephadex，Sephacryl。若分子量在600KD以下，并需更高分辨率，可选择新一代的Superdex。一般植物可能含水溶性、酸溶性、碱溶性多种多糖。综合利用分子筛及离子交换层析有助进一步获各组份纯品。另外，多糖药物需去除可引起过敏的蛋白质，传统Sevag方法用丁醇脱蛋白需反复数十次。阴阳离子交换法可以一、两步快速去除多糖中残存的蛋白质。SOURCE5、15、30RPC反相层析也很适合各种中药有效成分的检测、分离和放大制备。由于中药的成分非常复杂，SOURCE反相层析可用范围为PH1-14 ，并可用1M NaOH，1M HCL清洗、再生。比传统硅胶反相层析更易于工艺优化及在位清洗，寿命也更长。
12.纯化------肽类
肽类的来源有天然萃取，合成肽和重组肽三种。肽容易被酶降解，但可从有机溶剂或促溶剂中复性，所以多以高选择性的反相层析如SOURCE 30RPC、SOURCE 15RPC、SOURCE 5RPC或离子交换Minibeads、Monobeads作纯化。Superdex Peptide HR是专为肽分子纯化设计的凝胶过滤预装柱，能配合反相层析做出更精美的肽图。肽分子制备可用离子交换配合凝胶过滤Superdex 30 PG。
13.纯化------核酸、病毒
核酸的纯化用于去除影响测序或PCR污染物等研究。核酸可大致上分为质粒DNA、噬菌体DNA和PCR产物等。病毒也可视作核酸大分子，和质粒DNA一样，可用分离大分子的Sephacry S-1000 SF、Superose或Sepharoce 4FF凝胶过滤介质去除杂蛋白，再配合离子交换如Mono Q、SOURCE Q 分离核酸。
14.纯化------寡核苷酸
寡酸苷酸多应用在反义(anti-sense)DNA、RNA测序、PCR和cDNA合成等研究。合成后含三苯甲基的寡核苷酸以阴离子交换的Mono Q或快速低反压的SOURCE Q在PH12下可除副产物，并避免凝集和保护基的脱落。载量大大高过反相层析，可用做大量制备。不含三苯甲基的失败序列可用反相柱ProRPC去除。
15.脱盐、小分子去除
使用凝胶过滤介质Sephadex G10，G15，G25，G50等去除小分子，效率高，处理量可达床体积30%。只需在进样后收集首1/3-1/2柱体积的洗脱液，就可以去除该填料分离范围上限以下的小分子，简单直接。由于只是去除小分子，柱高10cm以上即可。整个过程一般可于数分钟至半小时完成。Sephadex G25系列介质专为蛋白质脱盐而设计，预装柱HiTrap Desalting（5ml）可用针筒操作。HiPrep Desalting(26ml)可在数分钟为多至10ml样品脱盐。
16.疫苗纯化
使用凝胶过滤介质Sepharose 4FF纯化疫苗，去除培养基中的杂蛋白，处理量可大于床体积10%。柱高一般40-70cm，整个过程约半至一小时。目前使用此法生产的疫苗品种有乙肝、狂犬、出血热、流感、肺结核、小儿麻痹疫苗等。分子量较小的疫苗可使用Sephacryl S-500HR，如甲肝疫苗等。
17.抗生素聚合物分析
中国药典从2000年版起要求抗生素头孢曲松钠需要找出聚合物占产品的白分比，规定使用Sephadex G10凝胶过滤法测定。
18.纯化-基因治疗用病毒载体
SORRCE 15Q
19.纯化-基因治疗用质粒
Q Sepharose XL，SOURCE 15Q，STREAMLINE Q，Sephacryl S500，Plasmidselect
在下游纯化中,可应用不同层析技术在纯化生物分子的同时,去除各种污染物。
1.去除——内毒素
内毒素又称热原。含脂肪A、糖类和蛋白，是带负电的复合大分子。
内毒素的脂肪A部份有很强的疏水性。但在高盐下会凝集，无法上疏水层析。利用疏水层析试验盒（17-1349-01）可选择结合目标蛋白的介质而去除内毒素。
内毒素与阴离子交换介质Q或DEAE Sepharose Fast Flow有较强结合。可在洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除。
利用CNBr或NHS Sepharose FF可偶联内毒素底物如LAL，PMB，自动成亲合层析介质结合内毒素。内毒素经常是多聚体，凝胶过滤层析可有效地将之去除。
2.去除——蛋白中的核酸
大量核酸增加样本黏度，令区带扩张，反压增加，降低分辨率和流速。药审和食检对核酸含量也有严格限制。
胞内表达蛋白的核酸问题尤其严重。核酸带阴电荷，在初步纯化时利用阳离子交换介质如STREAMLINESP，SP Sepharose Big Beads,SP或CM Sepharose FF,SP SepharoseXL结合目标蛋白，可除去大量核酸。
核酸在高盐下会和蛋白解离,疏水层析介质很适合用来结合目标蛋白,在纯化蛋白的同时去除核酸。
利用核酸酶将核酸切成小片断,用凝胶过滤做精细纯化时便很容易去除了。
3.去除——病毒和微生物
病毒和微生物可成为病原,应尽量减除。结合不同层析技术，使用注射用水，用NaOH定期进行仪器和凝胶的在位消毒和在位清洗，皆可避免污染物增加。
病毒大都有脂外壳。可用与目标蛋白电荷相反的S/D（solvent/detergent)处理，使病毒失活，如Triton和Tween。再用适当的离子交换介质如CM Sepharose FF结合目标蛋白，去除S/D。
其它污染物可以改变pH和离子强度使其从目标分子中解离或失活，凝胶过滤介质Superdex及多种吸附性介质，SOURCE都是很好的精细纯化介质,可去除多种微量污染物。
阅读(17)
评论(0)
01-07
葡聚糖凝胶
绍凝胶层析的理论（分子筛理论），重点介绍Sephadex葡聚糖凝胶层析方法和试验。
简介：
凝胶过滤（gel filtration）技术是60年代兴起的一种简便有效的生物分离纯化方法。当混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，因凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排阻于外部，在过滤的过程中，溶液中的物质按不同分子量筛选分开，达到分离纯化的目的。这一技术又称为分子筛层析，
或者称为凝胶层析。
凝胶是不溶于水，在水中却有较大膨胀度和较好的分子筛功能的一类化合物。目前主要有葡聚糖凝胶（商品名为Sephadex），天然琼脂糖凝胶（商品名为Sapharose）、聚丙烯酰胺凝胶（商品名为Bio-Gel），其后还发展了凝胶的各种衍生物，如羧甲基-交联葡聚糖（CM-Sephadex），二乙基氨乙基-交联葡聚糖
（DEAE- Sephadex）等种类。
由于凝胶过滤技术设备简单、操作方便，重复性能好和样品得率高等特点。广泛应用于生命科学领域，如蛋白质、核酸、多糖氨基酸、激素和抗生素等物质的分离纯化。凝胶层析在载脂蛋白的分离纯化中，
属于使用最多的技术手段。
凝胶过滤装置种类很多，其基本操作过程大同小异，操作步骤主要有：①凝胶种类的选择，按被分离物的性质及分子量大小而定；②凝胶柱的制备；③加样与洗脱；④分部收集透析，浓缩。
一、基本理论
（一）分子筛效益
一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小有差别，也不会有好的分离效果。因此，一定的分子筛有它一定的使用范围。综上所述，在凝胶色谱中会有三种情况，一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙；三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床，这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外，凝胶本身具有三维网状结构，大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大，小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时，按照
分子量大小“排队，凝胶表现分子筛效应。
（二）色谱柱的重要参数
⑴柱体积：柱体积是指凝胶装柱后，从柱的底板到凝胶沉积表面的体积。在色谱柱中充满凝胶的部
分称为凝胶床，因引柱体积又称“床”体积，常用Vt 表示。
⑵外水体积：色谱柱内凝胶颗粒间隙，这部分体积称外水体积，亦称间隙体积，常用Vo表示。
⑶内水体积：因为凝胶为三维网状结构，颗粒内部仍有空间，液体可进入颗粒内部，这就分间隙的
总和为内水体积，又称定相体积，常用Vi表示。不包括固体支持物的体积（Vg）。
⑷峰洗脱体积：是指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液有体积，常用Ve 表示。当使用样品的体积很少时，（与洗脱体积比较可以忽略不计），在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。当样品体积与洗脱体积比较不能忽略时，洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰顶位置。当样品很大时，洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗脱峰升高的弯曲点（或半高处）。
二、凝胶的种类及性质
（一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）
⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。
⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于
水的物质。
（二）琼脂糖凝胶：
商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。
（三）聚丙烯酰胺凝胶：
是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的
数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。
（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可
用甲基亚砜。
三、实验技术
（一）层析柱层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外，直径加大，洗脱液体体积增大，样品稀释度大。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度，分离度与柱高的平方根相关，但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞，一般不超过1米。分族分离时用短柱，一般凝胶柱长20-30厘米，柱高与直径的比较5:1─10:1，凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1，常用凝胶柱有50×25厘米，10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小，如果支掌滤板下的死体积大，被分离组分之间重新混合的可能性就大，其结果是影响洗脱峰形，出现拖尾出象，降低分辩力。在精确分离时，死体积不
能超过总床体积的1/1000。
（二）凝胶的选择根据所需凝胶体积，估计所需干胶的量。一般葡聚糖凝胶吸水后的凝胶体积约为其吸水量的2倍，例如Sephadex G-20的吸水量为20，1 克Sephadex G─200吸水后形成的凝胶体积约40ml。凝胶的粒度也可影响层析分离效果。粒度细胞分离效果好，但阻力大，流速慢。一般实验室分离蛋白质采用100-200号筛目的的Sephadex G-200效果好，脱盐用Sephadex G-25、G-50，用粗粒，短
柱，流速快。
（三）凝胶的制备商品凝胶是干燥的颗粒使用前需直接在欲使用的洗脱液中膨胀。为了加速膨胀，可用加热法，即在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温至近沸，这样可大大中速膨胀，通常在1-2小时内即可完成。特别是在使用软胶时，自然膨胀需24小时至数天，而用加热法在几小时内就可完成。这种方法不但节约时间，而且还可消毒，除去凝胶中污染的细菌和排除胶内的空气。
（四）样品溶液的处理样品溶液如有沉淀应过滤或离心除去，如含脂类可高速离心或通过Sephadex G-15短柱除去。样品的粘度不可大，含蛋白为超过4％，粘度高影响分离效果。上柱样品液的体积根据凝胶床体积的分离要求确定。分离蛋白质样品的体积为凝胶床的1-4％（一般约0.5-2ml），进行分族分离时样品液可为凝胶床的10％，在蛋白质溶液除盐时，样品可达凝胶床的20-30％。分级分离样品体积要小，
使样品层尽可能窄，洗脱出的峰形较好。
（五）防止微生物的污染交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类物质，防止微生物的生长，在凝胶层析中
十分重要，常用的抑菌剂有:
⑴叠氨钠（NaN3）在凝胶层析中只要用0.02％叠氮钠已足够防止微生物的生长，叠氮钠易溶一水，在20℃时约为40％；它不与蛋白质或碳水化合物相互作用，因此叠氮钠不影响抗体活力；不会改变蛋白质和碳水化合物的层析我特性。叠氮钠可干扰荧光标记蛋白质。
⑵可乐酮[Cl3C-C(OH)(CH3)2]在凝胶层析中使用浓度为0.01-0.02％。在微酸性溶液中它的杀菌效果
最佳，在强碱性溶液中或温度高于60℃时易引起分解而失效。
⑶乙基汞代巯基水杨酸钠在凝胶层析中作为抑菌剂使用浓度为0.05-0. 01％。在微酸性溶液中最为有效。重金属离子可使乙基代巯基的物质结合，因而包含疏基的蛋白质可在不同程度上降低它的抑菌效果。
⑷苯基汞代盐在凝胶层析中使用浓度为0.001-0.01％。在微碱性溶液中抑效果最佳，长时间放置时可与卤素、硝酸根离子作用而产生沉淀；还原剂可引起此化合物分解；含疏基的物质亦可降低或抑制它的
抑菌作用。
选择层析方法
在对目标蛋白的特性或样品成分不太了解，可尝试几种不同的纯化方法：
一、使用最通用的凝胶过滤方法，选择分离范围广泛的介质如Superose、Sephacryl HR根据分子量
将样品分成不同组份。
二、用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。也可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的
底物、受体等自制亲和介质，再用以结合目标蛋白。一部即可得到高纯度样品。
三、大体积的样品、常使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品，可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理，洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常
被交替使用于纯化流程中。
脱盐、小分子去除使用凝胶过滤介质Sephadex G10、G15、G25、G50等去除小分子，效率高，处理量可达床体积30%。只需在进样后收集1/3-1/2柱体积的洗脱液，就可以去除该填料分离范围上限以下的小分子，简单直接。由于只是去除小分子，柱高10cm以上即可。整个过程一般可于数分钟至半小时完成。Sephadex G25系列介质专为蛋白质脱盐而设计，预装柱HiTrap Desalting(5ml)可用针筒操作。HiTrap
Desalting(26ml)可在数分钟为多至10 ml样品脱盐。
跟大家分享，凝胶柱层析关键的一环——如何选择凝胶填料
作者: zhouchao2006 发布日期: 2008-03-15
如何选择凝胶
做分离纯化工作的人都知道，选择合适的填料是至关重要的。
1.测定------分子量、PI
当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中，可简易地测出PI，并选择纯化用缓冲液的最佳PH。
2.选择------层析方法
若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解，可尝试几种不同的纯化方法：一] 使用最通用的凝胶过滤方法，选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份。
二] 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质，再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。
三] 体积大的样品，往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品，
可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理，洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。
3.纯化------大量粗品
处理大量原液时，为避免堵塞柱子，一般使用sepharose big beads、sepharoseXL、sepharose fast flow等大颗粒离子交换介质。扩张柱床吸附技术利用多种STREAMLINE介质，直接从含破碎细胞或组织萃取物的发酵液中俘获蛋白。将离心、超滤、初纯化结合为一。提高回收率，缩短纯化周期。
4.纯化------硫酸氨样品
硫酸氨沉淀方法常被用来初步净化样品，经处理过的样本处于高盐状态下，很适合直接上疏水层析。若作离子交换，需先用Sephadex G-25脱盐。疏水层析是较新技术，随着介质种类不断增多，渐被融入各生产工艺中。利用Hitrap HIC Test Kit 和RESOURCE HIC Test Kit可在八种疏水介质中选择最适合介质及最佳的纯化条件。低盐洗脱的样品可稍加稀释或直接上其它吸附性层析。
5.纯水-----糖类分子
固化外源凝订素如刀豆球蛋白、花生、大麦等凝集素，可结合碳水化合物的糖类残基，很适合用作分离糖化细胞膜组份、细胞、甚至亚细胞细胞器，纯化糖蛋白等。两种附上外源凝集素的Sepharose 6MB亲和层析介质，专为俘获整个细胞或大复合物，如膜囊等。
6.纯化------膜蛋白
膜蛋白分离常使用去污剂以保持其活性。离子性去污剂应选用与目标蛋白相反电荷者，避免在作离子交换时和目标蛋白竞争交换介质，籍此除去去污剂。非离子性去污剂可以疏水层析除去。
7.纯化------单抗、抗原
*单抗多为IgG。来源主要是腹水和融合瘤培养上清液。腹水有大量白蛋白、转铁蛋白和宿主抗体等。Mabselect、Protein G和Protein A对IgG的Fc 区有专一性亲和作用，能一步纯化各种不同源的IgG。血清互补剂如小牛血清可先用蛋白G预处理，在培养前除去IgG。重组蛋白A介质Mabselect和rProtein A Sepharose FF对IgG有更高的载量和专一性，基团脱落更少。脱落的rProtein A用离子交换Q Sepharose HP或凝胶过滤Superdex 200，很容易去除。
*疏水层析Phenyl Sepharose HP亦很适合纯化IgG。宿主抗体和污染IgG 可用凝胶过滤Superdex 200在精细纯化中去除。
*纯化IgG抗原最有效的方法是用活化偶联介质如CNBr、NHs activated Sepharose FF偶联IgG，再进一步获取IgG抗原。
*HiTrap IgM是用来纯化融合瘤细胞培养的单抗IgM，结合量达5mg IgM。
HiTrap IgY是专门用来纯化IgY，结合量达100mg纯IgY。
8.纯化------重组蛋白
重组蛋白在设计、构建时应已融入纯化构想。样品多夹杂了破碎细胞或溶解产物，扩张柱床吸附技术STREAMLINE便很适合做粗分离。Amersham biosciences提供三个快速表达、一步纯化的融合系统。
一] GST融合载体使要表达的蛋白和谷胱甘肽S转移酶一起表达，然后利用Glutathione Sepharose 4B作亲和层析纯化，再利用凝血酶或因子Xa切开。2．蛋白A融合载体使要表达的蛋白和蛋白A的IgG结合部位融合在一起表达，以IgG Sepharose 6 FF纯化。
二] 含组氨酸标记（Histidine-tagged）的融合蛋白可用Chelating Sepharose FF螯合Ni2+金属，在一般或变性条件（8M尿素）下透过组氨酸螯合融合蛋白。HisTrap试剂盒提供整套His-Tag蛋白的纯化方法。
9.纯化------包涵体蛋白
包涵体蛋白往往需溶于6M盐酸胍或8M尿素中。高化学稳定性的Superose 12及Sepharose 6FF凝胶过滤介质很适合在变性条件下做纯化。变性纯化后的蛋白需要复性至蛋白的天然构象。Superdex 75、Q Sepharose FF和Phenyl Sepharose FF分别被发现有助包涵体蛋白的复性。一般包涵体蛋白样品的纯度越高，复性效果越好。SOURCE 30 RPC反相层析介质很适合纯化复性前的粗品，并可以1MnaOH重生。此方法纯化后的包涵体蛋白，复性回收率明显提高。
10.包涵体蛋白固相复性
*近年许多文献报导将包涵体蛋白在变性条件下固定（吸附）在层析介质上，一般用各种Sepharose FF离子交换层析介质。去除变性剂后，蛋白在介质上成功复性，再将复性好的蛋白洗脱下来。固相复性避免了一般复性过程中蛋白质聚体的形成，所以复性得率更高，而且无需大量稀释样品，并将复性和初纯化合二为一，大大节省时间及提高回收率。
*固相复性方法也被用于以HiTrap Chelating金属螯合层析直接复性及纯化包涵体形式表达的组氨酸融合蛋白；以HiTrap Heparin肝素亲和层析直接复性及纯化包涵体形式表达的含多个赖氨酸的融合蛋白。两种亲和层析预装柱均可反复多次重复使用，比一般试剂盒更方便、耐用。
11.纯化------中草药有效成分
中药的化学成分极其复杂。传统中药多是煎熬后服用，有效成份多较为亲水，包括生物碱、黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸、多糖、肽和蛋白质。灵活及综合性地利用多种层析方法。如离子交换、分子筛、反相层析，更容易分离到单一活性成分。Sephadex LH-20葡聚糖凝胶同时具备吸附性层析和分子筛功能，
例：如用甲醇分离黄酮甙，三糖甙先被洗下来，二糖甙其次，单糖甙随后，最后是甙元。Sephadex LH-20可使用水、醇、丙酮、氯仿等各种试剂，广泛用于各种天然产物的分离，包括生物碱、甙、黄酮、醌类、内脂、萜类、甾类等。
*生物碱在酸性缓冲液中带正电，成为盐，HiTrap SP阳离子交换层析柱可以分离许多结构非常近似的生物碱。相反，黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸等可溶于偏碱的缓冲液中，在HiTrap Q阴离子交换柱上分离效果良好。
*一般多糖纯化大多使用分子筛如Sephadex，Sephacryl。若分子量在600KD以下，并需更高分辨率，可选择新一代的Superdex。一般植物可能含水溶性、酸溶性、碱溶性多种多糖。综合利用分子筛及离子交换层析有助进一步获各组份纯品。另外，多糖药物需去除可引起过敏的蛋白质，传统Sevag方法用丁醇脱蛋白需反复数十次。阴阳离子交换法可以一、两步快速去除多糖中残存的蛋白质。SOURCE5、15、30RPC反相层析也很适合各种中药有效成分的检测、分离和放大制备。由于中药的成分非常复杂，SOURCE反相层析可用范围为PH1-14 ，并可用1M NaOH，1M HCL清洗、再生。比传统硅胶反相层析更易于工艺优化及在位清洗，寿命也更长。
12.纯化------肽类
肽类的来源有天然萃取，合成肽和重组肽三种。肽容易被酶降解，但可从有机溶剂或促溶剂中复性，所以多以高选择性的反相层析如SOURCE
30RPC、SOURCE 15RPC、SOURCE 5RPC或离子交换Minibeads、Monobeads作纯化。Superdex Peptide HR是专为肽分子纯化设计的凝胶过滤预装柱，能配合反相层析做出更精美的肽图。肽分子制备可用离子交换配合凝胶过滤Superdex 30 PG。
13.纯化------核酸、病毒
核酸的纯化用于去除影响测序或PCR污染物等研究。核酸可大致上分为质粒DNA、噬菌体DNA和PCR产物等。病毒也可视作核酸大分子，和质粒DNA 一样，可用分离大分子的Sephacry S-1000 SF、Superose或Sepharoce 4FF凝胶过滤介质去除杂蛋白，再配合离子交换如Mono Q、 SOURCE Q分离核酸。
14.纯化------寡核苷酸
寡酸苷酸多应用在反义(anti-sense)DNA、RNA测序、PCR和cDNA 合成等研究。合成后含三苯甲基的寡核苷酸以阴离子交换的Mono Q或快速低反压的SOURCE Q在PH12下可除副产物，并避免凝集和保护基的脱落。载量大大高过反相层析，可用做大量制备。不含三苯甲基的失败序列可用反相柱ProRPC去除。
15.脱盐、小分子去除
使用凝胶过滤介质Sephadex G10，G15，G25，G50等去除小分子，效率高，处理量可达床体积30%。只需在进样后收集首1/3-1/2柱体积的洗脱液，
就可以去除该填料分离范围上限以下的小分子，简单直接。由于只是去除小分子，柱高10cm以上即可。整个过程一般可于数分钟至半小时完成。Sephadex G25系列介质专为蛋白质脱盐而设计，预装柱HiTrap Desalting（5ml）可用针筒操作。HiPrep Desalting(26ml)可在数分钟为多至10ml样品脱盐。
16.疫苗纯化
使用凝胶过滤介质Sepharose 4FF纯化疫苗，去除培养基中的杂蛋白，处理量可大于床体积10%。柱高一般40-70cm，整个过程约半至一小时。目前使用此法生产的疫苗品种有乙肝、狂犬、出血热、流感、肺结核、小儿麻痹疫苗等。分子量较小的疫苗可使用Sephacryl S-500HR，如甲肝疫苗等。
17.抗生素聚合物分析
中国药典从2000年版起要求抗生素头孢曲松钠需要找出聚合物占产品的白分比，规定使用Sephadex G10凝胶过滤法测定。
18.纯化-基因治疗用病毒载体
SORRCE 15Q
19.纯化-基因治疗用质粒
Q Sepharose XL，SOURCE 15Q，STREAMLINE Q，Sephacryl S500，Plasmidselect
在下游纯化中,可应用不同层析技术在纯化生物分子的同时,去除各种污染物。
1.去除——内毒素
内毒素又称热原。含脂肪A、糖类和蛋白，是带负电的复合大分子。
内毒素的脂肪A部份有很强的疏水性。但在高盐下会凝集，无法上疏水层析。利用疏水层析试验盒（17-1349-01）可选择结合目标蛋白的介质而去除内毒素。
内毒素与阴离子交换介质Q或DEAE Sepharose Fast Flow有较强结合。可在洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除。
利用CNBr或NHS Sepharose FF可偶联内毒素底物如LAL，PMB，自动成亲合层析介质结合内毒素。内毒素经常是多聚体，凝胶过滤层析可有效地将之去除。
2.去除——蛋白中的核酸
大量核酸增加样本黏度，令区带扩张，反压增加，降低分辨率和流速。药审和食检对核酸含量也有严格限制。
胞内表达蛋白的核酸问题尤其严重。核酸带阴电荷，在初步纯化时利用阳离子交换介质如STREAMLINESP，SP Sepharose Big Beads,SP或CM Sepharose
FF,SP SepharoseXL结合目标蛋白，可除去大量核酸。
核酸在高盐下会和蛋白解离,疏水层析介质很适合用来结合目标蛋白,在纯化蛋白的同时去除核酸。
利用核酸酶将核酸切成小片断,用凝胶过滤做精细纯化时便很容易去除了。
3.去除——病毒和微生物
病毒和微生物可成为病原,应尽量减除。结合不同层析技术，使用注射用水，用NaOH定期进行仪器和凝胶的在位消毒和在位清洗，皆可避免污染物增加。
病毒大都有脂外壳。可用与目标蛋白电荷相反的S/D
（solvent/detergent)处理，使病毒失活，如Triton和Tween。再用适当的离子交换介质如CM Sepharose FF结合目标蛋白，去除S/D。
其它污染物可以改变pH和离子强度使其从目标分子中解离或失活，凝胶过滤介质Superdex及多种吸附性介质，SOURCE都是很好的精细纯化介质,可去除多种微量污染物。
三、Sephadex LH-20再生:
1 Sephadex LH20柱子被弄脏了，大多数情况下是由于样品没滤, 将柱头堵住,或由于样品的死吸附(一般很少发生),使柱子的柱头部分污染,一般的处理是将被污染的柱头部分的填料弃去,具体做法很简单,只将被污染的柱头部分的填料用玻棒轻轻搅起,倒掉即可,
2 如果柱子整个被污染,如果是将Sephadex LH-20用反相被污染，办法如下
依次用水,NaOH-NaCl水溶液，水，甲醇洗涤被污染的柱子。因为是整个柱子被污染，所以污染物一定不会完全死吸附在柱上（如果完全死吸附在柱上，污染物一定会只在柱头部分），所以用合适的溶剂一定可以将之洗下来。NaOH-NaCl水溶液配法：8g NaOH ,30g NaCl，1000ml水
填报说明及指标解释
填报说明及指标解释 1.统计表统计期限内容为时期指标。时期指标的统计年度为2019年1月1日至2019年9月30日。 2.统计表内所有价值量指标均以人民币为计量单位；凡以外币形式计算的价值量指标，均以2019年9月30日的汇率折合成人民币填写；所有价值量指标数字保留至小数点后两位，其他所有数字一律取整。 3.统计表内填写项，有对应财务记录的，据实填列。 从业人员情况（A） 1.广告从业人员：指单位内从事广告经营业务活动的人员。主营广告企业的全部人员为广告从业人员，兼营广告企业内专业从事广告经营活动的人员为广告从业人员。 2.管理人员：指广告从业人员中从事行政、财务等管理工作的非业务人员。 3.创意设计人员：指广告从业人员中从事广告策划方案研究制定，以及从事广告文案、画面、声像等创意设计的人员。 4.业务人员：指除创意设计人员以外的，从事市场调查、销售推广、客户服务、后期制作、媒介执行等工作的人员。 5.其他人员：指上述第2－4条之外的其他广告从业人员。 经营情况（B） 企业单位填报 1.营业收入：指企业在报告期内从事销售商品、提供劳务及转让资产使用权等日常活动中所形成的总收入。根据会计“利润表”中对应指标计算填列。未执行2006年《企业会计准则》的企业，则以主营业务收入加其他营业收入代替填列。 2.广告业务收入：指企业经营广告业务所取得的收入总额。 3.营业成本：指企业在报告期内从事业务活动而发生的成本。根据会计“利润表”中对应指标计算填列。未执行2006年《企业会计准则》的企业，以主营业务成本加其他业务成本代替填列。 4.广告业务成本：指企业营业成本中，用于广告业务的部分。
实训项目十七塞规的使用.doc
实训项目十七塞规的使用实验 一、实验目的 1.观察塞规，掌握塞规的结构。 2.正确掌握塞规测量方法并保证工件测量精度。 二、实验设备和工具 1. 塞规。 2.被测零件。 三、实验原理 塞规是一种专用量具。 塞规是批量检测孔径的量具，有两个圆头，一头称为通规，是孔径的下 偏差，另一头称为止规，是孔径的上偏差。在检测孔径时，通规能塞进去 而止规塞不进去，则此孔径是合格的，就是在公差范围之内的，否则就是 不合格的。 四、塞规的结构、种类 塞规用来测量工件的孔、槽等尺寸，常用的形式如图44-1 所示。 图 44-1塞规的结构 塞规规格：Ф3—Ф 500mm，特殊型号可以根据产品尺寸公差定做。 塞规种类： 1.光面塞规：光面塞规是一种用来测量工件圆孔内尺寸的精密量具，光面塞规可做成最大 极限尺寸和最小极限尺寸两种。 2.孔用塞规：孔用塞规是光滑极限量规中的一种，是没有刻度的定尺寸的专用量具，用 于检验光滑孔的直径尺寸。 3.键槽塞规：键槽塞规主要用以检验键槽的宽度，为方便测量，故加工为通端和止端， 外形是片形。因其具有测量方便，测量误差小等优点。 4.锥度塞规：锥度塞规主要用于检验产品的大径、锥度和接触率，属于专用综合检具， 锥度塞规可以根据客户提供的图纸或大头直径尺寸，锥柄长度，锥度比加工定做。 - 1 -
五、实验步骤 1.实验准备工作 做好检测准备（工件、塞规）。 2.塞规的“通规”，是用来控制孔的体外作用尺寸，其基本尺寸应按孔的最小极限尺寸制造：“止规”则是用来控制孔的局部实际尺寸，其基本尺寸应按孔的最大极限尺寸制造。 3.测量时的三种结果如图 44-2 所示。 图 44-2 六、注意事项： 塞规是固定尺寸的量具，长期使用会磨损，需定期检测。否则会造成误判。 七、完成实验报告并回答思考题 实验结果 误差及合格判断序号项目检测结果 误差是否合格1零件内径检测 思考题 : （1）如何用塞规检测零件尺寸？ （2）用塞规检测零件的注意事项有哪些？ - 2 -
基层报表填报说明及指标解释——基表三
基层报表填报说明及指标解释——基表三 一、统计时间 统计时间：年月日至月日 二、主要指标解释 教财基表《企业办学民办学统计报表基层表》 教财基表填报范围：国有或国有控股企业（中央、地方）办普通高等学校（含独立学院）和成人高等学校、普通中等专业学校和成人中等专业学校、职业高中、技工学校、普通中学（高级中学、完全中学、初级中学）和成人中学、十二年一贯制学校、九年一贯制学校、普通小学、成人小学、幼儿园；公民个人、社会团体、其他社会组织办普通高等学校和成人高等学校、普通中等专业学校和成人中等专业学校、职业高中、技工学校、普通中学（高级中学、完全中学、初级中学）和成人中学、十二年一贯制学校、九年一贯制学校、普通小学和成人小学、特殊教育学校、幼儿园。 ——企业办学民办学校中，凡涉及多类学校合在一起的，如完全中学、十二年一贯制学校和九年制学校，办学条件和教育经费收支可采取手工拆分和软件拆分两种方式填报；但凡涉及到幼儿园（学前班）的拆分只能采取手工拆分方式。 、手工拆分：填报单位按实际情况拆分，分别填入相应学校类别的报表中，其机构数按就高不就低只填报一个。 、软件拆分：由统计软件按学生数的一定比例自动拆分。 教财基表 ．在职教职工。编制在学校或学校正式聘用（半年或一学期及以上，不含临时兼课教师），并从事教学、管理和后勤保障工作的固定人员。企业办各类学校的教职工数的划分还需以工资关系为准。 （）年初数：填报统计年度月日在职教职工。 （）年末数：填报统计年度月日在职教职工。 ．年末离退休人员:填报学校离退休人员年末数，包括已纳入社会保障部门统一管理并发放离退休费用的退休人员。 ．学生数。填报经上级主管部门批准的各级各类具有学籍的在校学生数，其中：义务教育阶段学校按实际在校学生数填列；中等职业学校填报具有学籍的全日制在校学生数。 （）年初数：填报统计年度月日的在册学生数。 （）年末数：填报统计年度月日的在册学生数。 说明： ——高等教育学校填报由教育主管部门下达招生计划、并具有正式学籍的学生数，包括博士生、硕士生、普通本科生、普通专科生、高职生、函授夜大学生、来华留学生、中专生等。 高等教育学校学生数＝博士生×＋硕士生×＋普通本专科生（高职生）＋函授夜大生÷＋来华留学生×＋中专生÷。 ——技工学校在校生数填报经政府有关部门批准的，具有正式学籍，国家承认学历的学生。不包括短期技能培训的学生数。 ．年末校舍面积: 按统计年度月日实际数填报。校舍面积指产权归学校所有的各种教学及教学辅助用房、行政办公用房、生活服务用房及其他用房的建筑面积。不包括已交付使用但未完成固定资产移交的各种用房的建筑面积及尚未竣工的在建工程、借用（租用）的房舍或临时搭用的棚舍、房改中已售给教职工个人并完成固定资产移交的房屋面积。 “其中：危房”填报统计年度月日校舍建筑总面积中由授权机关按照建设部颁发的《危险房屋鉴定标准》（中华人民共和国行业标准〔〕）进行鉴定，并出具危险房屋安全鉴定报告的校舍面积，包括、、三个级别。 ．年末固定资产总值：填报统计年度末学校固定资产总价值，即会计报表固定资产科目的期末数。 （）房屋和建筑物：填报统计年度末学校固定资产中按固定资产分类的房屋和建筑物原值。 （）专用设备：填报统计年度末学校固定资产中按固定资产分类的专用设备原值。
单体建筑物详细信息表填报说明及指标解释[1]
单体建筑物详细信息表填报说明与指标解释1．建筑物编号：两位编码，以学校为单位按建筑物依次排序填报。如01、02、03……以此类推，不得重复，并注意在各表中的一致性。 2．建筑物用途代码：按单体建筑物具体用途选择填报，多栋相同用途的建筑物应单独填报，多种用途的建筑物按照主要用途填写。该指标按以下编码选择填报：“11－教学楼（含平房，下同）、12－综合楼、13－实验楼、14－图书馆（室）、15－体育活动室、16-礼堂、21－学生宿舍、22－食堂、23－厕所、24－锅炉房（开水房）、25－浴室、26－教工宿舍、31－办公楼、32-卫生保健室，41-其他用房，51-其他配套设施”。 3．建筑物名称：指单体建筑物的习惯称谓，名称中应包含该单体建筑物的主要使用功能含义，如教室、办公室等，对2层及以上的单体建筑物一般应命名XX楼，如教学楼、实验楼、办公楼;具有同一使用功能建筑物有2个以上单体建筑时，应在名称中填加序列数字或其他区别称谓，如教室一，教室二或第一教学楼、第二教学楼或东教学楼、西教学楼；具有2类及以上使用功能的综合用房，在名称中应包含两种主要使用功能含义，如教学实验楼、教学办公楼、办公宿舍楼等。
4．开工日期：指该单体建筑物开始建设的年月，应从建筑物基槽开挖当日算起。 5．竣工日期：指该单体建筑物按设计图纸和文件的内容全部建成，经验收合格并办理竣工验收手续的时间。 6．结构类型：指该单体建筑物的结构类型。该指标按以下编码选择填报： “1-土木结构、2-砖木结构、3-砖混结构、4-框架结构、5-钢结构、6-其他”。 土木结构：土木结构是指墙、柱等竖向承重构件采用土建造（如夯土墙、土坯墙等），楼盖和屋盖采用木结构的房屋，称为土木结构。 砖木结构：砖木结构是指墙、柱等竖向承重构件采用砖、木、石或砌块砌体建造，楼盖和屋盖等水平承重构件采用木结构的房屋，称为砖木结构。 砖混结构：砖混结构是指墙、柱等竖向承重构件采用砖、木、石或砌块砌体建造，楼盖和屋盖等水平承重构件采用钢筋混凝土或球网等钢结构屋盖建造的房屋称为砌体结构房屋，也称为砖混结构。 框架结构：框架结构是指由钢筋混凝土梁和柱组成的能承受垂直和水平荷载的结构称为框架结构。包括框架-剪力墙结构，即在框架结构的基础上增加了剪力墙，提高结构稳定性，也称框剪结构。
天地伟业网络视频服务器故障快速排查手册
天地伟业网络视频服务器故障快速排查手册 首先感谢您选用天地伟业网络视频产品，在使用之前，请详细阅读网络视频服务器使用说明书，熟悉产品使用方法，如果遇到问题可以按照以下方法进行故障排查。 为保证系统得正常运行，我们必须保证机器达到如下要求： 说明： 现场机器最好达到建议PC的配置，并安装相应硬件最新的驱动，此配置能满足16画面显示的要求，配置越高机器运行越流畅。 1.故障现象: IP搜索器搜索不到服务器 排查步骤： 1．确认网络视频服务器是否正常上电，主机网卡及驱动是否正常，网线是否做的没问题，网络拓扑连接是否通畅； 2．直接用交叉网线直接连接主机和网络视频服务器，如仍不通，给服务器复位再测试； 3．如有备件主机和网络视频服务器都做可更换测试； 4．如仍有问题请与我们联系； 2. 故障现象: IP搜索器能够正常搜索到服务器，但是IE不能正常连接视频 排查步骤： 1．确认主机IP地址和网络视频服务器地址设置在同一网段内，如不在同一网段改为同一网段； 注意：如在不同网段必须保证此两个网段做了路由； 2．确认IE的版本，建议安装IE6.0； 3．确认正常安装显卡驱动和DirectX，建议安装最新的显卡驱动和DirectX； 4．确认开启ActiveX相关插件； 5．暂时关闭杀毒软件自带防火墙测试；如是XP系统，暂时关闭系统自带防火墙； 6．删除之前曾经连接时下载的控件，重新连接测试； 7．更换主机测试； 8．如仍然有问题，请与我们联系； 3. 故障现象: 如果IE连接视频正常，但是软件连接视频不正常 排查步骤： 1．确认软件版本是否正确；如果版本不正确，重新安装正确的版本软件； 2．确认软件中“服务器编辑信息”的“IP地址”和“服务器类型”的正确；在局域望网建议采用“主码流+UDP”方式，广域网建议采用“副码流+TCP”方式； 3．确认在软件的主界面连接了视频； 4．重启软件连接；
螺纹塞规使用
Rev.0 Sophia 07.04.04 : 1. Objective 目的 Provide detail information for every step about how to perform the test about the tapered male thread. Standardize the actions of the inspectors and clarify the determining way in different conditions of the test. 就如何检验锥形内螺纹提供详细的各步骤说明. 规范检验人员动作及阐明各种情形 下的判断方法． 2. Scope 范围 It is applicable for all the female tapered threads such as NPT,BSPT etc. 适用于所有锥形内螺纹，比如ＮＰＴ，ＢＳＰＴ等． 3. Definitions 定义 3.1 Thread螺纹 There are two main types of threads used presently around the world, one being a normal straight thread and the other is tapered thread. Tapered threads are used when pressure tight joint are made on the threads. Straight thread is only otherwise. Tapered thread is also known as conical thread.The angle of the tapered thread is 1?47’. NPT and BSPT are tapered threads mostly used whin the faucet industry. 目前世界上主要有两种螺纹．一种是平形螺纹，另一种是锥形螺纹．锥形螺纹主 要用于压力密封连接上．而平形螺纹则用于其它方面．锥形螺纹锥度为 1?47’．NPT和ＢＳＰＴ是两种主要用于水龙头行业的锥形螺纹 NPT: National Pipe Tapered；The angle of thread is 60?.美标管锥螺纹，牙形角60?． BSPT: British Standard Pipe Tapered;The angle of thread is 55?．英标管锥螺纹，牙形角 55?. 3.2 Plug Gauge 塞规 Thread plug gauge is the tool for an all-around checking about the female threads which with the male threads. 螺纹塞规是一个对内螺纹进行全面综合检查的一个工具．
2014全国植保专业统计报表指标解释(填表说明)
全国植保专业统计报表填表说明及指标解释（2014） 一、主要农作物病虫草鼠发生、防治面积及挽回损失[农市（农植）1表] 1．全国范围统计的病虫草鼠对象。 （1）农作物病虫害在全国范围统计的农作物病虫害（除检疫对象）共306种（类），这些病虫在本省（自治区、直辖市）有发生的都要统计。其他病虫统计对象由各省自定。 水稻病虫28种：〈1〉水稻稻瘟病（其中：穗颈瘟），〈2〉水稻纹枯病，〈3〉水稻白叶枯病，〈4〉水稻稻曲病，〈5〉水稻恶苗病，〈6〉水稻病毒病，〈7〉水稻线虫病，〈8〉水稻赤枯病，〈9〉水稻粒黑粉病，〈10〉水稻胡麻叶斑病，〈11〉二化螟，〈12〉三化螟，〈13〉稻纵卷叶螟，〈14〉稻飞虱（其中：褐飞虱、白背飞虱、灰飞虱），〈15〉大螟，〈16〉稻苞虫，〈17〉稻螨，〈18〉稻叶蝉，〈19〉稻赤斑黑沫蝉，〈20〉稻蓟马，〈21〉稻象甲，〈22〉稻负泥虫，〈23〉稻瘿蚊，〈24〉稻秆潜蝇，〈25〉稻螟蛉，〈26〉稻水蝇，〈27〉稻摇蚊，〈28〉稻蝗； 麦类病虫16种：〈1〉小麦锈病（其中：小麦条锈病、小麦叶锈病），〈2〉小麦赤霉病，〈3〉小麦白粉病，〈4〉小麦纹枯病，〈5〉小麦黑穗病，〈6〉小麦病毒病（其中：小麦丛矮病、小麦黄矮病），〈7〉小麦根腐病，〈8〉小麦全蚀病，〈9〉小麦霜霉病，〈10〉小麦黑胚病，〈11〉小麦线虫病，〈12〉小麦蚜虫，〈13〉麦蜘蛛，〈14〉小麦吸浆虫，〈15〉麦叶蜂，〈16〉麦杆蝇； 玉米病虫23种：〈1〉玉米大斑病，〈2〉玉米小斑病，〈3〉玉米丝黑穗病，〈4〉玉米锈病，〈5〉玉米纹枯病，〈6〉玉米褐斑病，〈7〉玉米灰斑病，〈8〉玉米弯孢菌叶斑病，〈9〉玉米尾孢菌叶斑病，〈10〉玉米青枯病，〈11〉玉米疯顶病，〈12〉玉米瘤黒粉病，〈13〉玉米根腐病，〈14〉玉米干腐病，〈15〉玉米茎腐病，〈16〉玉米顶腐病，〈17〉玉米病毒病（其中：玉米矮花叶病，玉米粗缩病），〈18〉玉米螟，〈19〉玉米蚜虫，〈20〉玉米叶螨（红蜘蛛），〈21〉玉米铁甲虫，〈22〉玉米蓟马，〈23〉玉米蛀茎夜蛾； 大豆病虫12种：〈1〉大豆锈病，〈2〉大豆霜霉病，〈3〉大豆病毒病，〈4〉大豆白粉病〈5〉大豆菌核病，〈6〉根结线虫病，〈7〉大豆胞囊线虫病，〈8〉大豆蚜虫，〈9〉大豆食心虫，〈10〉豆芫菁，〈11〉豆荚螟，〈12〉豆天蛾 马铃薯病虫13种：〈1〉马铃薯早疫病，〈2〉马铃薯晚疫病，〈3〉马铃薯环腐病，〈4〉马铃薯病毒病，〈5〉马铃薯黑胫病，〈6〉马铃薯青枯病，〈7〉马铃薯干腐病，〈8〉马铃薯疮痂病，〈9〉根结线虫病，〈10〉二十八星瓢虫，〈11〉蚜虫，〈12〉豆芫菁，〈13〉马铃薯块茎蛾； 其他粮食作物病虫8种：〈1〉高粱蚜，〈2〉粟灰螟，〈3〉甘薯天蛾，〈4〉甘薯黑斑病；〈5〉甘薯根腐病，〈6〉甘薯茎线虫病，〈7〉谷子黑穗病，〈8〉谷子白发病； 棉花病虫18种：〈1〉棉花苗病（其中棉立枯病、棉瘁倒病），〈2〉棉花铃病，〈3〉棉花枯黄病，〈4〉棉花炭疽病、〈5〉棉花角斑病，〈6〉棉花轮纹斑病，〈7〉棉蚜，〈8〉棉铃虫，〈9〉棉红铃虫，〈10〉棉红蜘蛛，〈11〉棉盲椿象，〈12〉棉小造桥虫，〈13〉棉大造桥虫，〈14〉棉花象甲，〈15〉棉花象鼻虫，〈16〉棉蓟马，〈17〉玉米螟，〈18〉烟粉虱； 油菜病虫7种：〈1〉油菜菌核病，〈2〉油菜病毒病，〈3〉油菜霜霉病，〈4〉油菜白锈病，〈5〉油菜蚜虫，〈6〉油菜甲虫，〈7〉油菜茎象甲； 花生病虫7种：〈1〉花生病毒病，〈2〉花生根结线虫病，〈3〉花生叶斑病，〈4〉花生炭疽病，〈5〉花生青枯病，〈6〉花生锈病，〈7〉花生蚜虫； 其他油料病虫7种：〈1〉向日葵菌核病，〈2〉向日葵锈病，〈3〉向日葵黄萎病，〈4〉向日葵列当，〈5〉胡麻枯萎病，〈6〉向日葵螟，〈7〉胡麻漏油虫； 苹果病虫18种：〈1〉苹果树腐烂病，〈2〉苹果炭疽病，〈3〉苹果轮纹病，〈4〉苹果白粉病，〈5〉苹果褐斑病，〈6〉苹果斑点落叶病，〈7〉苹果干腐病，〈8〉苹果锈病，〈9〉苹果叶螨，〈10〉山楂叶螨，〈11〉二斑叶螨，〈12〉桃小食心虫，〈13〉苹果小吉丁虫，〈14〉苹小卷
指标解释和填报说明
指标解释和填报说明 Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】
附件9 指标解释和填报说明 报告年度：指评价表中指标统计年度，时间范围从填写评价表的上一年1月1日到12月31日。所有指标的填报时间范围，如无特殊指明，均为报告年度。（T-1）年指报告年度的前一年。（T-2）年指报告年度的前二年。 一、制造业指标解释 1、企业营业收入总额：指技术中心所在企业总部和其下属分公司、子公司、控股企业（按实际控投权）等应该列入会计合并报表范围的所有企业的营业收入（销售收入），经按合并报表原则处理后的合并营业收入。包括工业性企业产品销售收入、房地产与旅游酒店服务等第三产业的营业收入。 2、企业利润总额：指企业生产经营过程中各种收入扣除各种消耗后的盈余。反映企业在报告期内实现的盈亏总额（亏损以“-”号表示）。包括企业的营业利润补贴收入，各种投资净收益和营业外收支净额。 3、企业产品销售收入总额：指企业销售产成品、试制半成品的收入和提供工业性劳务收入总额。 4、企业产品销售利润总额：指企业销售收入扣除成本、费用、税金后的余额。 5、企业科技活动经费支出额：指企业实际支出的全部科技活动费用，包括列入技术开发的经费支出以及技创技改等资金实际用于科技活动的支出。不包括生产性支出和归还贷款支出。科技活动经费支出总额分为内部支出和外部支出。
科技活动经费内部支出：指企业用于内部开展科技活动实际支出的费用，包括外协加工费。不包括委托研制或合作研制而支付外单位的经费。科技经费内部支出按用途分为科技活动人员劳务费、原材料费、购买自制设备支出、其他支出。 科技活动经费外部支出：指企业委托其他单位或与其他单位合作开展科技活动而支付给其他单位的经费，不包括外协加工费。 6、企业研究与试验发展经费支出额：指在企业科技活动经费内部支出中用于基础研究、应用研究和试验发展三类项目以及这三类项目的管理和服务费用的支出。 7、资产负债率：指负债总额除以资产总额的百分比，也就是负债总额与资产总额的比例关系。参考公式：资产负载率=（总额/总额）*100% 8、年缴纳的税金：主要指企业缴纳的各项税收之和。主要包括所得税、流转税、资源税、行为税等。 9、银行信用等级：衡量企业的偿债能力、获利能力、经营管理、履约情况、发展能力与潜力。信用等级分为AAA级、AA级、A级、BBB级、BB级、B级、CCC级、CC级、C级和D级，共十个信用等级。 10、企业全部科技项目数：指企业立项并开展研发（制）工作、以前年份立项（当年）仍继续进行研发（制）的科技项目，包括当年完成、年内仍在进行、年内研发工作已告失败的项目，不包括委托外单位进行研发的项目。从开发项目的性质看，包括新产品开发项目数、新技术开发项目数、新工艺开发项目数、新服务开发项目数与基础研究项目数之和。 11、研发周期三年及以上的项目数：指研究开发周期在三年以上（含三年）的技术开发项目数。
EasyDecoder视频解码管理软件V3.0T-用户使用说明.
EasyDecoder视频解码管理软件 用户使用说明
目录 目录 (2) 1.系统说明 (5) 1.1概要 (5) 1.2功能简介与特点 (5) 1.3硬件配置 (5) 1.4软件平台与运行环境 (5) 1.5术语 (5) 1.6阅读指导 (6) 2.系统安装 (6) 2.1安装软件 (6) 3.系统主界面 (7) 4.系统运行操作 (7) 4.1进入系统／退出系统 (7) 进入系统 (8) 退出系统 (8) 4.2系统初始化 (8) 4.2.1服务器设置 (9) 4.2.1.1添加服务器 (9) 4.2.1.2智能添加服务器 (10) 4.2.1.3删除服务器 (11) 4.2.1.4修改服务器 (12) 4.2.1.5批量修改服务器 (14) 4.2.1.6反选功能 (14) 4.2.1.7检索服务器 (14) 4.2.1.8修改通道信息 (15) 4.2.2监控点管理 (15)
4.2.3解码器设置 (16) 4.2.3.1手动添加 (16) 4.2.3.2智能添加 (17) 4.2.3.3删除解码器 (17) 4.2.3.4修改解码器名称 (17) 4.2.3.5连接解码器 (18) 4.2.3.6断开解码器 (18) 4.2.3.7解码器设置 (18) 4.2.3.7.1网络设置 (19) 4.2.3.7.2DNS设置 (19) 4.2.3.7.3解码器参数设置 (20) 4.2.3.7.3.1485设置 (20) 4.2.3.7.3.2协议设置 (21) 4.2.3.7.4LOGO设置 (21) 4.2.3.7.5报警设置 (21) 4.2.4联机切换设置 (22) 4.2.4.1添加切换序列 (22) 4.2.4.2删除切换序列 (23) 4.2.4.3连接监控点 (23) 4.2.4.4停止预览 (24) 4.2.4.5打开/关闭音频 (24) 4.2.4.6开始/关闭对讲 (24) 4.2.4.7设备控制 (25) 4.2.4.8开始/停止切换 (26) 4.2.4.9显示模式设置 (26) 4.2.4.10其他 (26) 4.2.4.10.1切换不在线跳过显示 (26)
贫困户信息采集表填表说明和指标解释
贫困户信息采集表填表说明和指标解释 一、填表说明 1．本表包括基本信息、家庭成员信息、致贫原因、收入情况、生产生活条件，以及帮扶责任人信息等六个部分。 填表人、联系电话、户主签字、填表日期等内容为纸质版采集表归档使用，不录入系统。 2．指标类型及填写说明 （1）字符型：填写数字或汉字，如家庭住址、联系电话、证件号码等。 （2）数值型：需填写数字，如务工时间、工资性收入等。 （3）选择项：需要勾选，如识别标准、贫困户属性等。 （4）是否项：需填写“是”或“否”，如饮水是否安全、是否通生产用电等。 3．有些指标，如是否独生子女户、是否双女户为部分省（区）选填指标，不需要的可以不采集，省里可以在纸质版采集时将该项内容剔除。 4．除选填项（联系电话、开户银行和银行账号）外，其他指标项不得为空。如没有外出务工的贫困人口，“务工时间”填“0”。 二、指标解释 基本信息 1．联系电话（字符型） 一般为户主电话号码，也可以填写能够联系该户主的家庭成员、亲戚、邻居、村负责人电话。若为固定电话，需填写区号。 2．开户银行和银行账号（字符型） 是指贫困户用于存取各类到户补贴资金所使用的具体开户银行和银行账号。
3．A17识别标准（字符型） 指贫困户所属范围，包括国家标准、省定标准和市定标准。国家农村扶贫标准是指依据国家统计局公布的扶贫标准。省、市级农村扶贫标准是指某些省根据自身财力和农村低保标准，自行确定的省、市级农村扶贫标准。本指标由省级统一填报口径，由登记员填报。执行国家农村扶贫标准的省，登记员填写国家农村扶贫标准；执行省级农村扶贫标准的省，登记员填写省级农村扶贫标准。 4．A18贫困户属性（字符型） 包括一般贫困户、低保贫困户、五保贫困户。 “一般贫困户”是指狭义的贫困户，指家庭有劳动能力，且家庭人均纯收入低于国家贫困识别标准的农户。 “低保贫困户”是指享受了国家低保待遇，家庭人均纯收入仍低于国家贫困识别标准的农户。低保贫困户享受国家低保和扶贫双重待遇。 “五保贫困户”是指享受了国家五保待遇，家庭人均纯收入仍低于国家贫困识别标准的农户，五保贫困户享受国家五保和扶贫双重待遇。五保贫困户一般为分散供养的五保户。 5．A19是否军烈属（是否项） 因公牺牲军人遗属的简称，在役军人因公牺牲，其家属称军烈属。 6．A20是否独生子女户、A20是否双女户（是否项） 是指具有《独生子女证》或《二女证》的农户或经县级计生部门甄别并出具证明的农户。 家庭成员信息 1．A1姓名（字符型） 填写家庭成员的姓名，以本人身份证登记的名字为准，如无身份证，则以户口薄上登记的名字为准。
填表说明和指标解释
2011年年度“中小企业信用担保业务信息报送系统”填报说明 一、填表对象要求 取得融资性担保机构经营许可证 以中小企业为主要服务对象的企业 一、名词解释 1.期初：年报报表中的期初是指年初，比如2011年年报中的期初是指2011年1月1日。 2.期末：年报报表中的期末是指年末，比如2011年年报中的期末是指2011年12月31日。 3.代偿回收额：填写本期实际回收的担保代偿金额。 4.担保代偿额：指担保机构发生代偿的金额，报表中担保代偿额的“本期增加值”指本年新增的担保代偿额，不扣除追偿额。 5.担保损失额：担保损失额指有诉讼判决书或仲裁书和强制执行书，或者其他足以证明损失已形成的证据，证明担保代偿已无法收回的部分。 6.委贷：委贷是由政府部门、企事业单位及个人等委托人提供资金，由金融机构（即受托人）根据委托人确定的贷款对象、用途、金额、期限、利率等发放的贷款。受托金融机构只负责代为发放、监督使用并协助收回，从中只收取手续费，不承担任何形式的贷款风险。
7.存入保证金：指担保机构按照担保合同约定向受保企业收取的一定数量的保证金，构成担保机构的一项流动负债。 8.贷款担保：担保机构与银行业金融机构（含小额贷款公司或信托公司）约定，当被担保人不履行对银行业金融机构的贷款债务时，由担保机构依法承担合同约定的担保责任。主要包括企业融资类贷款担保及个人消费类贷款担保等。 9.票据承兑担保：指债务人以外的第三人对票据承兑所发生的债务予以保证的行为，包括银行承兑汇票担保、商业汇票担保及其他票据担保等。 10.信用证担保是指客户向银行申请开立信用证时，融资性担保机构就客户依约偿债能力向银行提供的担保 11.信托计划担保：为保证购买信托计划的投资人利益，为信托计划的发行人，对投资人投资本金的安全以及约定的收益而担保的一种担保。 12.短期融资券担保：为短期融资券的发行人提供担保，以保证债券到期本金、利息的及时偿还。 13.融资租赁担保：融资租赁担保是指承租人采用租赁方式取得设备时，委托担保人为出租人提供保证。当承租人未按租赁合同规定的期限给付租金时，由担保人代为给付。 14.非融资性担保：包括诉讼保全担保及履约担保，如投标担保、预付款担保、工程履约担保、尾付款如约偿付担保等。 15.履约担保：受保企业履行了其所应履行的合同义务之后，保证人将保证购销合同中有关货款支付、货物供应等结算条款或违约金支付条款得到执行的业务。
《学生基本信息表》指标解释及填报说明
《学生基本信息表》指标解释及填报说明 篇一：学生信息采集表、指标解释及填报说明1 学生基本信息表 学校名称: 填表人：填表日期：审核人：审核日期： 指标解释及填报说明（带星号的为必填项）： ★1.姓名：在公安户籍管理部门正式登记注册、人事档案中正式记载的中文姓名（包括外国人正式的汉字姓名）。★2.性别：1-男，2-女。★3.出生日期：在公安户籍部门正式登记注册、人事档案中记载的时间日，年填4位数字、月填2位数字、日期填2位数字。如：“20110101”。★4.出生地：学生出生所在的行政区划。请先查找出生地行政区划，并在代码后加6个0，如：“430105000000”。★5.籍贯：祖居或本人出生的地方，现多用于父辈以上的居住地。★6.民族：学生的民族，以户口本为准。★7.国籍/地区：学生所属的国籍/地区。 ★8.身份证类型：可证明学生身份的证件类型：1-居民身份证，6-香港特区护照/身份证明，7-澳门特区护照/身份证明，8-台湾居民来往大陆通行证，9-境外永久居住证，A-护照，Z-其他。身份证件类型为Z-其他时，身份证件号可不填，但学校需提供学生在本校就读证明（需学生和家长签字，学校盖章，提交上级教育主管部门备案）。 ★9.身份证件号：身份证件类型对应的证件号码。身份证件类型
为Z-其他以外的证件类型时，身份证件号必填。★10.港澳台侨外：在大陆上学，持非大陆身份证明的学生的来源类型，分为：‘00-否，01-香港同胞，02-香港同胞亲属，03-澳门同胞，04-澳门同胞亲属，05-台湾同胞，06-台湾同胞亲属，11-华侨，12-侨眷，13-归侨，14-归侨子女，21-归国留学人员，31-非华裔中国人，41-外籍华裔人，51-外国人，99-其他。★11.政治面貌：分为：“01-中共党员，02-中共预备党员，03-共青团员，13-群众”。★12.健康状况：学生的身体情况，分为：“10-健康或良好、20-一般或较弱、30-有慢性病、40-有生理缺陷、50-残疾”。★13.照片：导入学生的照片。 14.姓名拼音：姓名全称的汉语拼音。 15.曾用名：曾正式使用过的姓名。 16.身份证件有效期：身份证件上显示的有效期限。★17.户口所在地：公安户籍部门确认的学生户口所在行政区划。请先查找户口所在地行政区划，并在代码后加6个0，如：“430105000000”。★18.户口性质：公安户籍部门确认的学生户口的类别，分为“1-农业户口，2-非农业户口”。 19.特长：填写学生特长信息。 20.学籍辅号：填写各省本地的学生编号，用于地方系统与中央系统对接。★ 21.班内学号：学生班级内编码。★22.年级：学生就读年级。如：“小学2013级，中学2013级”。 ★ 23.班级：学生就读班级。4位入学年份+1位学段编号+2位班级编号，其中学段编号为1-小学，2-初中。如：2013101。★24.入学年月：入小学一年级或初中一年级的时间，年填4位数字、月填
数字化公检法系统软件便携式标准版V7.1T_用户操作说明书(天地伟业)
数字化公检法系统软件便携 式标准版 用户操作说明书 V7.1
目录 1.审讯中心服务器系统设置说明 (1) 1.1服务器设置 (1) 1.2审讯室设置 (2) 1.3压缩预览参数设置 (3) 1.4用户管理： (4) 1.5设备管理 (8) 1.6日志及文件 (10) 1.7系统安全管理 (10) 2.审讯中心服务器使用操作说明 (11) 2.1登录 (13) 2.2视频显示区 (14) 2.3在线信息显示区 (16) 2.4功能使用 (16) 3.审讯中心服务器各种温湿度叠加器的设置和使用 (19) 3.1温湿度叠加设置方法 (19) 3.2TC-W8667测试软件 (20) 3.3TC-W8901DC (22) 3.4YL-S018SR (23) 3.5TC-H307P (31) 4.审讯终端软件操作使用说明 (33) 4.1登录主机 (33) 4.2添加案件 (34) 4.3审讯功能 (37) 4.4笔录管理 (41) 4.5案卷查询 (43) 4.6资料回放 (43) 5.数字化公检法系统软件便携式标准版安装部分 (44) 5.1卸载旧压缩卡驱程 (44) 5.2开始安装 (44) 5.3安装加密狗驱动 (45) 5.4安装专用数据库 (46) 6.故障查找与排除 (47)
1 感谢您选用我公司数字化公检法系统软件便携式标准版产品。 数字化公检法系统软件便携式标准版是根据最高检颁布的《人民检察院讯问职务犯罪嫌疑人实行全程同步录音录像系统建设规范》文件要求。通过加强计算机技术、图像数字化技术和信息技术的应用，实现司法系统对审讯室的标准化建设，利用现有的网络对审讯的讯问和询问过程进行有效的监督和管理，实现同步录音录像，提高侦查办案、协查办案的效率，加强办案、取证过程的真实性和有效性。 1. 审讯中心服务器系统设置说明 在使用数字化公检法系统软件便携式标准版前需要先初始化系统数据和配置参数，包括服务器设置、审讯室设置、指挥终端设置、压缩预览参数、用户管理、设备管理、日志文件、系统安全管理和短信设备管理。系统设置初始化后可以投入使用，进行审讯录像、电子笔录、远程指挥等操作。 在桌面上点击 图标，显示“系统设置--用户登录”界面，输入正确的用户名密码（系统默认用户名admin ，密码1111），登录系统设置软件。 1.1 服务器设置 系统设置的第一页为【服务器设置】，如下图：
天地伟业键盘说明书-5810网络键盘安装使用手册上课讲义
网络键盘安装使用手册
目录 第一章键盘简介 (1) 1.1 功能特点 (1) 1.2 产品外观 (1) 1.3 技术指标 (1) 第二章键盘安装 (2) 2.1 放置 (2) 2.2 接口 (2) 2.3 安装 (2) 第三章键盘设置 (3) 3.1 设置 (3) 3.2 键盘开机 (3) 3.3 键盘登录 (3) 3.4 设置键盘 (4) 3.4.1网络管理 (4) 3.4.2用户管理 (4) 3.4.3 密码管理 (5) 3.4.4 设备管理 (5) 3.4.5 硬件设置 (5) 3.4.6 锁定设置 (5) 3.4.7 硬件检测 (6) 3.4.8摇杆校准 (6) 第四章矩阵控制 (8) 4.1 登录矩阵 (8) 4.2 矩阵操作界面 (8) 4.3 切换操作 (9) 4.4前端控制 (10) 4.5报警控制 (10) 4.6宏操作 (10) 4.7 越权控制 (10) 4.8 码分配器设置 (10) 4.9 锁定 (11) 4.10 列表 (11) 第五章网络升级 (12)
第一章键盘简介网络键盘配合智能网络矩阵使用，功能丰富、操作简单。 1.1 功能特点 ●中文编程操作界面 ●中文硅胶按键 ●大屏幕液晶屏幕 ●详细的矩阵及前端信息 ●以太网通讯 ●二维变速摇杆 ●使用简捷方便 1.2 产品外观 1.3 技术指标 工作温度：-10℃～50℃ 工作湿度：<90% 工作电压：DC12V 功耗：4W 以太网接口：10BaseT UDP（局域网） 外形尺寸（mm）：300×160×43（长×宽×高）
第二章键盘安装 2.1 放置 键盘采用工学设计，水平放置控制台面即可。 2.2 接口 网络键盘背部有两个接口：一个为电源接口，外接DC12V电源给键盘供电；另一个为RJ45网络接口，连接智能网络矩阵。 2.3 安装 标准版本的网络键盘硬件只支持控制智能网络矩阵(控制其它监控设备需要在标准版本的硬件基础上稍作调整)，所以标准版网络键盘只能将当前设备选择为矩阵。用网线将矩阵接到键盘的网络接口，接上电源，即完成了键盘和矩阵的物理连接。 注：由于智能网络矩阵内置交换机单元，所以网络键盘连接智能网络矩阵采用直通线序的标准网线。
道路运输企业等级评定填表说明及指标解释
道路运输企业等级评定填表说明及指标解释 一、《道路旅客（货物）运输企业等级评定申请表》 该表由申报企业填写，由受理申报道路运输协会进行初审，并将初评意见填写在相应的栏目，申请材料审查合格后，对于不属本级评定的，连同原始材料一起报送上一级道路运输协会。 （一）基本情况 1. 企业名称：是指经工商行政管理部门核准，进行企业法人登记的名称，填写时必须是企业全称。 2. 主管单位：是指企业的上级主管部门单位，企业无主管部门的，应填“无”。 3. 成立时间：是指企业经工商行政管理部门核准，登记注册的时间。 4. 经济性质：是指企业类型，按照企业营业执照上的经济性质填写。 5. 开户银行及帐号：是指企业基本账户的所在银行与帐号。 6. 营业执照号：是指企业营业执照登记编号。 7. 经营许可证号：是指道路运输管理部门核发的道路运输企业经营许可证的编号。
8. 注册资本：是指工商行政管理部门登记注册的资金。 9. 详细地址及邮编：是指企业总部所在地的地址及邮编。 10. 联系电话、传真：是指企业主要行政部门（经理办公室等）的电话、传真。 （二）资产情况 11. 资产总额：是指企业过去的交易、事项形成并由企业拥有或者控制的资源，该资源预期会给企业带来经济利益。包括流动资产、长期投资、固定资产、无形资产和其他资产。 12. 企业资本金：是指投资者按照企业章程或者合同、协议的约定，实际投入企业的资本总额。按照投资主体分为国家资本金、法人资本金、个人资本金和外商资本金。 （1）国家资本金：指有权代表国家投资的政府部门或者机构以国有资产投入企业形成的资本金。 （2）法人资本金：指其法人单位以其依法可以支配的资产投入企业形成的资本金。 （3）个人资本金：指社会个人或企业内部职工以个人合法财产投入企业形成的资本金。 （4）外商资本金：指外国投资者以及我国香港、澳门和台湾地区投资者投入企业形成的资本金。 13. 客（货）运资产原值：指企业客（货）运总资产。
EasyView V4.0T使用说明书
天地伟业EASYVIEW V4.0T网络视频监控 软件使用手册 2010年3月
目录 目录 (2) 一、系统需求 (4) 1.1 安装需求 (4) 1.2 运行需求 (5) 二、EASYVIEW视频监控管理软件安装手册 (5) 2.1 软件安装 (5) 三、EASYVIEW视频监控管理软件使用手册 (5) 3. 1搜索器的使用说明 (6) 3.1.1 搜索设置IP地址 (6) 3.1.2 网络设备的搜索 (6) 3.1.3计算机网络设置 (7) 3.1.4 H系列服务器设备搜索 (7) 3. 2 视频浏览模块使用说明 (7) 3.2.1 监控软件EasyView登录系统 (7) 3.2.2 选取、退出软件功能模块 (8) 3.2.3 视频浏览模块使用说明 (9) 3.2.4系统功能模块使用说明 (11) 3.2.4.1 系统设置功能说明 (11) 3.2.4.1.1【设备管理】操作说明 (11) 3.2.4.1.2【用户管理】操作说明 (19) 3.2.4.1.3【用户权限管理】操作说明 (20) 3.2.4.1.4【图像设置】操作说明 (21) 3.2.4.1.5【报警设置】操作说明 (24) 3.2.4.1.6【报警联动】操作说明 (28) 3.2.4.1.7【视频遮挡设置】操作说明 (32) 3.2.4.1.8【日志管理】操作说明 (33) 3.2.4.1.9【切换设置】操作说明 (35) 3.2.4.1.10【域名注册信息设置】操作说明 (36) 3.2.4.2 抓怕浏览功能说明 (37) 3.2.4.3电子地图功能说明 (38) 3.2.5云镜控制模块使用说明 (39) 3.2.6 监控点列表模块使用说明 (40)
财政拨款补助行政事业单位人员信息库指标解释及填报说明
财政拨款（补助）行政事业单位人员信息库指标解释及填报说明 一、统计范围 由财政拨款（补助）的独立核算的行政事业单位，包括由一般预算、基金预算或预算外收入供给经费的独立核算的事业单位。 二、统计对象 纳入统计范围的行政事业单位中经政府组织人事部门办理任用、聘用手续的在职人员（含长休）及离、退休人员。 行政事业单位中的遗属、临时工作人员；民政优抚对象、村干部、下岗职工、城镇居民最低生活保障对象等财政适当补助人员不纳入统计对象。 安全等部门涉密人员不纳入统计对象。 三、统计方法及分工 1．由独立核算单位按照单位隶属关系对人员进行分部门分层次统计。 对于编制部门核定属于独立的部门和单位，但其财务不独立核算的，应统一由独立核算的单位负责填报，但填报时需按其隶属部门将其归入所属部门单位类别。如：乡镇政府内设有非独立核算的人大、政协等机构，其财务归入乡镇政府统一核算，则其统计统一由乡镇政府负责，但其机构和人员归入相应的人大、政协等隶属部门统计，不归入政府部门统计。再如：县委组织部、宣传部属于独立的部门，但其财务由县委办公室统一核算，填报时，由县委办公室统一负责填报，但组织部、宣传部的机构和人员应作为独立的部门和单位填报，不并入县委办统计。 2．原则上人员工资由哪个单位发放，就归入哪个单位统计。没有编制的临时办公室、领导小组等临时机构不单独统计。在两个以上单位兼职的人员，负责统计填报的单位，要主动与兼职的单位联系，防止重复遗漏。 3．已到新单位任职，但其工资关系暂保留在原单位的人员，按“工资由哪个单位发放，就归入哪个单位统计”的原则，由其工资关系所在单位进行统计。对口支援、挂职锻炼的人员，由派出单位负责统计。 4．随着机构改革职能划分的变化，一些地方的工商行政管理局、地方税务局、技术监督局以及药品监督管理局等部门相继改为由省业务主管部门条条管理（垂直管理），统计工作相应调整为由省主管部门负责进行条条统计。农村中小学上划县级管理后，统计工作相应调整为由县负责进行统计。 部分对垂直管理部门实行人事管理权限上划、经费不上划的地区，由供给其经费的地方同级政府部门负责统计。 5．计划单列市数据统计、汇总、上报事宜与所在省商定。 四、统计数字截止时间 统计数字截止时间为上年12月31日。 部分地区因行政区划调整、单位撤并、变更等原因，无法填报上年数据的，可按行政区划调整、单位撤并、变更后的初始资料填报（相应调整行政区划编码）。
天地伟业卫士系列网络摄像机硬件用户手册
天地伟业卫士系列网络摄像机 用户手册 V1.0
重要声明 一、感谢您选用由天津天地伟业数码科技有限公司出品的卫士系列网络摄像机产品。使 用本产品之前，请认真阅读本使用手册。在您开始使用此产品时，天地伟业数码科技有限公司将认为您已经阅读过本产品使用手册。 二、本手册所涵盖的内容均参考此使用手册编写时最新的消息，当涉及的内容发生改变 时，恕不另行通知。 侵犯版权警告 一、卫士系列网络摄像机产品的使用方式不得触犯或侵害国际与国内之法律和法规。一 旦因使用不当而发生触犯或侵犯国际和国家法律及法规的行为，天地伟业数码科技有限公司将不为此负担任何民事和刑事责任。 二、请注意，即使摄录的视频仅供个人使用，在某些情况下使用该摄像机复制表演、展 览或商业资产的图像，仍有可能侵犯版权或其他法律权益。
本品仅限室内（温度-20℃-60℃、湿度10%-90%）使用，电源适配器只限工作于AC 90V-264V 50/60HZ交流电源下。如在此范围之外工作，有可能引起设备工作不正常甚至损坏设备。 本产品不适合于在强磁环境下使用，如使用需采用可靠的第三方防磁设备保护。 请使用随机附件中的电源适配器，选用其他电源可能带来故障。 请勿将摄像头正对阳光或者强烈光线，有可能导致图像失真或者损坏图像传感器。 请将此器材存放于儿童及婴儿触及不到的地方，若遇意外损坏，可能导致身体损伤，如：破 损的外壳可能导致皮肤划伤，SD卡可能导致意外吞食。 请勿试图拆开或改装本指南没有说明的任何部分，请勿让器材触及、浸入水或液体。 如果外壳接触到液体或盐分空气，请用吸水软布擦干外壳。 请勿使用酒精、汽油、稀释剂、或其他易燃物质清洁或护理本器材。 请勿切割、损坏、改装电线或放置重物于电线上。 如双手潮湿，请勿接触本产品及附属电源线路。 采用壁装或吊装方式安装本产品时，请确保支架安装牢固，以免发生意外事故。 长期不使用本产品时，应切断产品的电源将产品妥善包装，并采取必要的防潮措施。