单核细胞增生李斯特菌

单核细胞增生李斯特菌

形态特征：

①革兰氏阳性的类球形杆菌

②大小约为0.4~0.5μm x 0.5～2.0μm

③两端钝圆

④在有些培养基中稍弯，单个、成V形或成对平行排列

⑤在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性

⑥兼性厌氧，无芽孢，一般不产生荚膜

⑦在20~25℃时以4根周毛运动，在37℃时只有较少的鞭毛或1根鞭毛

培养特性：

①需氧和兼性厌氧

②生长范围为2-42℃

③最适温度为35-37℃

④pH中性至弱碱性（pH9.6）

⑤在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。

⑥在20-25℃培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。

⑦在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。

⑧在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。

⑨在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。

生化特性：（甘露醇、木糖为阴性，其他为阳）

1.该菌触酶阳性，氧化酶阴性。

2.发酵多种糖类，产酸不产气。

发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。

不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。

3.不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解。

4.吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。

5.MR-VP试验和精氨酸水解阳性。

生化试验：

①动力试验+

原理：有动力的细菌扩散生长，培养基浑浊，无动力的细菌培养基澄清。（结果：有动力，呈伞状生长，底为弯月牙形）

②过氧化氢酶试验（触酶试验）+

原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。（结果：汽包产生为+）

应用：葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。

③MR-VP试验+

原理：葡萄糖→丙酮酸→大量混合酸→pH4以下→（+甲基红指示剂）→培养基变红

V-P试验：葡萄糖→丙酮酸(脱羧)→乙酰甲基甲醇(强碱+V-P试剂)→二乙酰(胍基)→培养基变红

糖发酵试验

葡萄糖和麦芽糖发酵试验+

原理：有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸产气，培养基由紫（蓝）变黄（指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（－），培养基仍为紫（蓝）色。（结果：黄+）

七叶苷水解试验+

原理：某些细菌（如类肠球菌）可水解七叶苷，生成葡萄糖和七叶素。七叶素可与培养基中的柠檬酸铁试剂的二价铁离子反应生成黑色化

合物沉淀，是培养基变黑。（结果：黑+，黄-）

甘露醇发酵试验-

原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖类的能力各不相同，有的能分解多种糖类，有的仅能分解1~2种糖类，还有的不能分解。细菌分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点鉴别细菌。（结果：黄+，绿-)

木糖发酵试验-

原理：某些细菌能利用D-木糖作为碳源。木糖本身有抗细菌和霉菌的功能，尤其是革兰氏阴性菌及白色念珠菌。(结果：黄+）

鼠李糖发酵试验+

原理：鼠李糖在细菌中以多糖或脂多糖存在与细胞表面。（结果：黄+）

24h

1℃，

单核细胞增生李斯特菌

单核细胞增生李斯特菌 形态特征： ①革兰氏阳性的类球形杆菌 ②大小约为0.4~0.5μm x 0.5～2.0μm ③两端钝圆 ④在有些培养基中稍弯，单个、成V形或成对平行排列 ⑤在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性 ⑥兼性厌氧，无芽孢，一般不产生荚膜 ⑦在20~25℃时以4根周毛运动，在37℃时只有较少的鞭毛或1根鞭毛 培养特性： ①需氧和兼性厌氧 ②生长范围为2-42℃ ③最适温度为35-37℃ ④pH中性至弱碱性（pH9.6） ⑤在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。 ⑥在20-25℃培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。 ⑦在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。

⑧在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。 ⑨在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。 生化特性：（甘露醇、木糖为阴性，其他为阳） 1.该菌触酶阳性，氧化酶阴性。 2.发酵多种糖类，产酸不产气。 发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。 不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。 3.不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解。 4.吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。 5.MR-VP试验和精氨酸水解阳性。 生化试验： ①动力试验+ 原理：有动力的细菌扩散生长，培养基浑浊，无动力的细菌培养基澄清。（结果：有动力，呈伞状生长，底为弯月牙形）

我院首例李斯特菌感染病例分析报告

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/f813496885.html, 我院首例李斯特菌感染病例分析报告 作者：李凌洁杜余新 来源：《中国社区医师》2019年第18期 关键词李斯特菌;感染;治疗方案 单核细胞增生李斯特菌（简称李斯特菌）属于李斯特菌属，为革兰阳性杆菌、兼性胞内寄生菌，是重要的食源性人兽共患病原菌，能够引起人类严重感染;广泛存在于自然界、水源、食品等;主要通过粪一口传播，常侵犯婴幼儿、妊娠妇女、老年人以及一些严重基础病的免疫受损宿主，导致皮肤黏膜感染、中樞系统感染、败血症、心内膜炎等1-1。本例口腔癌患者，其血液培养及鉴定分离出此菌，可能与患者有基础疾病，免疫力下降有关。李斯特菌感染应该选择适宜的抗生素，足量、足疗程治疗。本研究分析I例李斯特菌感染病例，旨在为临床不常见细菌感染经验治疗提供参考。病历资料 患者，男，56岁，2018年5月23日人院。人院诊断为口底癌化疗后复发;化疗后骨髓抑制;发热原因待诊。人院时查体：T39.6C，P102次/min，R21次/min，BP115/80mmHg，体重 60kg。确诊口底癌3年多，发热1d，夜间急入我院肿瘤科治疗，给予柴胡注射液4mL肌内注射，地塞米松磷酸钠注射液10mg静脉滴注，葡萄糖注射液500mL+维生素C注射液2g静脉滴注，葡萄糖注射液500mL+氯化钾注射液1g静脉滴注，葡萄糖注射液250mL+浓氯化钠60mL 静脉滴注，葡萄糖注射液250mL+艾迪注射液100mL静脉滴注。治疗3d，相关检查逐步完善，患者体温36.2～39.5C，反复发热。5月26日经验性抗感染治疗，给予注射用哌拉西林钠他唑巴坦2.25g，1次/8h，静脉滴注，1个疗程为3d，患者仍反复发热（体温36.3～39C）。5月28日报血培养及鉴定（5月24日血样）提示：产单核李斯特菌。5月29日报血培养及鉴定（5月26日血样）结果提示：产单核李斯特菌。诊断为口底癌化疗后复发;化疗后骨髓抑制;菌血症;右侧股骨下段坏死;2型糖尿病。因患者反复发热，且我院无法进行单核细胞增生性李斯 特菌的药敏试验，5月29日请临床药学科会诊，协助抗生素药物的选择，临床药师会诊后建 议使用青霉素2.4g，1次/6h+阿米卡星注射液0.6g，1次/d，静脉滴注，1个疗程>3周，患者血培养及鉴定结果连续3次阴性即停用抗生素。使用该方案抗感染治疗第1天，监测患者体温，最高温度37.59C，直至2018年6月18日患者出院，未再出现高热症状且血，培养及鉴定结果连续3次均为阴性报告。此次抗感染治疗有效。 讨论 病因分析：患者系口腔癌化疗患者，属于免疫力低下的易感人群。病原菌侵袭该患者，出现反复发热。经过抗感染治疗后患者体温逐渐恢复正常水平。 治疗方案分析：青霉素属于时间依赖性抗生素，半衰期约30min，500万～2400万U/d，给药频次1次/6h。阿米卡星注射液属于浓度依赖性抗生素，半衰期长，给药频次l次/d，1个

单核细胞增生李斯特氏菌检验操作规程

单核细胞增生李斯特氏菌测定 1 提示 1.1 注意无菌操作。 2目的 用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）的测定 3检测依据 《食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌测定（GB 4789.30-2016）》。 4适用范围 本法适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的测定。 5试验材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 5.1冰箱。 5.2 恒温培养箱。 5.3 均质器。 5.4 显微镜。 5.5 电子天平。 5.6 锥形瓶。 5.7 无菌吸管、微量移液器及吸头。 5.8 无菌平皿。 5.9 无菌试管。 5.10 离心管。 5.11 无菌注射器。 5.12 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)ATCC19111或CMCC54004,或其他等效标准菌株。 5.13 英诺克李斯特氏菌(Listeriainnocua)ATCC33090,或其他等效标准菌株。 5.14 伊氏李斯特氏菌(Listeriaivanovii)ATCC19119,或其他等效标准菌株。 5.15 斯氏李斯特氏菌(Listeriaseeligeri)ATCC35967,或其他等效标准菌株。 5.16 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC25923或其他产β-溶血环金

5.17 马红球菌(Rhodococcusequi)ATCC6939或NCTC1621,或其他等效标准菌株。 5.18 小白鼠:ICR体重18g～22g。 5.19 全自动微生物生化鉴定系统。 6.培养基和试剂 6.1 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE):。 6.2 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂(TSA-YE):。 6.3 李氏增菌肉汤LB(LB1,LB2):。 6.4 1%盐酸吖啶黄(acriflavineHCl)溶液:。 6.5 1%萘啶酮酸钠盐(naladixicacid)溶液:。 6.6 PALCAM 琼脂:。 6.7 革兰氏染液:。 6.8 SIM 动力培养基:。 6.9 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR)和V-P试验用]:。 6.10 5%～8%羊血琼脂:。 6.11 糖发酵管:。 6.12 过氧化氢试剂:。 6.13 李斯特氏菌显色培养基。 6.14 生化鉴定试剂盒或全自动微生物鉴定系统。 6.15 缓冲蛋白胨水:见A.11。 7检验程序 第一法单核细胞增生李斯特氏菌定性检验

单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)

单核细胞增生李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes） 荧光定量PCR检测试剂盒说明书 规格：48份/盒 用途：单核细胞增生李斯特氏菌PCR体外检测。 检测原理： 试剂盒中含有单增李斯特氏菌特异的引物，当样品中含有单增李斯特氏菌时，前增菌后提取的单增李斯特氏菌DNA通过PCR成指数扩增，在反应过程中单增李斯特氏菌特异的荧光探针跟靶核酸杂交,同时被Taq酶水解,把探针上的荧光基团和淬灭基团分开,从而通过荧光增量来实时判断单增李斯特氏菌的存在。 产品盒组成： 试剂盒的保存条件及有效期： 1．本试剂盒于-20℃保存。 2．有效期为6个月。 适用仪器： ABI7500，9600系列，MJopticon2，Bio-Rad等荧光定量PCR仪均可。 实验方法： 1．取增菌液1ml加到1.5ml无菌离心管中，10,000rpm离心5min，弃去上清；采纳经典酚氯仿提取法，将提取到的模板进行检测或保存于-20℃以待检测。 2．将PCR反应液置室温平衡，融化后取Taq酶,按2U/管加入Taq酶，即每个测试反应体系配制为：PCR反应液22.5ul+0.4ulTaq 酶。 3．加入模板：将保存在-20℃的核酸提取物置室温解冻，以13,000rpm离心5min。阴、阳性对比使用前置室温解冻。在每个PCR反应管中分别加入步骤1中处理过的模板或阴、阳性对比各2ul，盖好管盖，置于PCR仪上，记录相应样品号。 4．上机扩增、检测区：反应条件为95℃：3min，1个循环；95℃：5sec，60℃：40sec〔信号采集〕，40个循环。反应体系设为25ul。 关于多通道荧光PCR仪，信号采集时设定为Fam荧光素。 结果分析： 关于MJOpticon2系列荧光定量PCR检测仪进行结果分析时，扣除本底后再输入1-15之间的荧光值，进行Ct值的设置或拖动基线到合适的位置以确定ct值。 关于ABI7500，9600系列荧光PCR检测仪进行结果分析时基线的确定：取3-10或3-15个循环的荧光值，阈值设定原那么为阈值线刚好超过正常阴性对比品扩增曲线的最高点，而不显示Ct值为宜。 质控标准： 本试剂盒灵敏度为100拷贝/ml。定量检测线性范围为：10-1010拷贝/ml。 阴性对比无Ct值显示或Ct值为40，阳性对比的Ct值≤30.0，否那么为实验失败。 结果判断： 1．检测样本Ct值≤35.0时，报告阳性。 2．检测样本Ct值>35.0且Ct值<40时，需重复检测一次，假如Ct值仍<40，但曲线有明显的对数增长特性，报告本阳性，否那么报告阴性。 3．样本不显示Ct值时，报告阴性。 试剂盒使用本卷须知 1．本试剂盒仅用于体外检测和研究用途，开始使用前请认真阅读本说明书全文。 2．实验必须严格分区操作：PCR前预备区——预备实验试剂；样本处理区——待测样本、模板处理；检测区——PCR扩增、检测。

十单核细胞增生李斯特氏菌检验标准操作程序

DBS22 DBS22/019-2012 吉林省食品安全地方标准 食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测 2013年发布 2013年实施 吉林省卫生厅发布

前言 本标准根据GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的要求编写。 本标准分为两种检测方法： 第一法：单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法； 第二法：MPN计数法。 其中第一法适用于污染较严重的食品，第二法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较低而杂菌含量较高的食品。 本标准负责起草单位：吉林省疾病预防控制中心、长春市疾病预防控制中心。 本标准负责起草人:刘桂华、龚云伟、李月婷、赵薇

吉林省食品安全地方标准 食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测 1 范围 本操作程序规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）的定量检验方法。本操作程序适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量检验。 2 设备和材料 除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1 冰箱：2℃～5℃和-18℃。 2.2 恒温培养箱：30℃±1℃、36℃±1℃。 2.3 均质器。 2.4 显微镜：10×～100×。 2.5 电子天平：感量0.1 g。 2.6 锥形瓶：100 mL、500 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）。 2.8 无菌平皿：直径90 mm。 2.9 无菌试管：16 mm×160 mm.。 2.10 离心管：30 mm×100 mm。 2.11 无菌注射器：1 mL。 2.12 金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）。 2.13 马红球菌（Rhodococcus equi）。 2.14 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3.1 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤（TSB-YE）：见附录A中A.1。 3.2 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）：见附录A中A.2。 3.3 李氏增菌肉汤LB（LB1，LB2）：见附录A中A.3。 3.4 1%盐酸吖啶黄（acriflavine HCl）溶液：见附录A中A.3.2.1。 3.5 1%萘啶酮酸钠盐（naladixic acid）溶液：见附录A中A.3.2.1。 3.6 PALCAM琼脂：见附录A中A.4。 3.7 革兰氏染液：见附录A中A.5。 3.8 SIM动力培养基：见附录A中A.6。 3.9 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红（MR）和V-P试验用]：见附录A中A.7。3.10 5%-8%羊血琼脂：见附录A中A.8。 3.11 糖发酵管：见附录A中A.9。 3.12 过氧化氢酶试验：见附录A中A.10。 3.13 李斯特氏菌显色培养基。 3.14 API listeria 10300生化鉴定试剂盒。

食品中单增李斯特菌检验方法的应用分析

食品中单增李斯特菌检验方法的应用分析 发表时间：2019-10-30T11:36:20.520Z 来源：《健康世界》2019年13期作者：杨瑞娟 [导读] 结论：实时荧光PCR检测和MPN计数法相结合，避免样品细菌培养法检测出阳性结果，定量检测时重新取样而导致的结果差异，减短检验周期和工作量，使工作效率得到提升。 云南省丽江市疾病预防控制中心 674100 摘要：目的：单增李斯特菌定性检测结合实时荧光PCR和MPN计数法，在食品源性致病菌检测中快速进行定性和定量检测。方法：将单增李斯特菌的菌悬液样品依据不同浓度用细菌培养法和实时荧光PCR法进行比较；分别对当日、冷冻2小时和6小时的增菌液进行MPN计数法定量检测，对三种情况下MPN计数结果进行比较。结果：细菌培养法和实时荧光PCR法检测两者结果一致；MPN计数法定量检测，（1）和（2）结果吻合，与（3）结果有差异。结论：实时荧光PCR检测和MPN计数法相结合，避免样品细菌培养法检测出阳性结果，定量检测时重新取样而导致的结果差异，减短检验周期和工作量，使工作效率得到提升。 关键词：食品；单增李斯特菌；检验方法 连年来，因食品污染单增李斯特菌导致食品中毒的事件逐渐增多，引起社会各界的广泛关注。单增李斯特菌是一种人畜共患病的病原菌[1]，多存在于土壤、水产品和动物中，食物中涉及较多的是急冻食品、生菜食物和熟食店食物等。易感人群为新生儿、孕妇和40岁以上的成年人，临床症状表现为发热、化脓性结膜炎和败血症等，死亡率高达30%以上。本文将从实时荧光定量PCR法和MPN计数法相结合，对单增李斯特菌定量检测进行研究，有关情况如下。 1.材料与方法 1.1仪器和试剂 标准菌株采用我市提供的50000株单增李斯特菌，使用实时荧光定量PCR仪和离心机，选取实时荧光定量PCR试剂、全自动微生物鉴定仪和革兰氏阳性细菌鉴定卡，培养基选自李氏增菌肉汤等，均在有效期内使用培养基和试剂。用脑心浸液培养基将80℃标准菌株过夜培养温度控制在30℃，科玛嘉单李斯特显色琼脂平板培养24小时，温度设置为36℃至37℃。菌落的挑选规格为天蓝色、大小适中和周围有白色晕环，将菌落接种于脑心浸液琼脂平板分纯24小时30℃，菌液的浓度利用生理盐水控制在0.5至0.6麦氏单位，将调整好的菌液作为原液，1ml菌液和9ml无菌生理盐水放在试管中，把试管的液体进行均匀搅拌，制作成10-1菌液，重复上面的步骤，菌液制作成10位系列菌液。每进行稀释一次菌液，都要换用1次1ml的无菌吸管[2]，依次稀释到10-9，将2ml菌悬液分别加入2个无菌平皿，将单增李斯特显色培养基放满平皿，培养24小时，温度控制在36℃，计数平皿中天蓝色、大小适中，周围有白色晕环的菌落数，作好空白对照。 1.2制备样品和检验样品 制备样品：从市场采集10份熟食制品，检验阴性结果使用细菌培养法，得出检验结果为阴性结果后，按照每份50g分为5份，分别加入每个标准菌液混合拍打，再取出样品25g，加入225ml混合搅匀。将剩余的25ml保存在冰箱中。检验样品：将LB1增菌液取出40ml保存在冰箱，剩余的LB1按照单增李斯特的检验方法用MPN计数法进行定量检测和细菌培养法检测。将LB1和LB2分别进行荧光定量RCR检测。按照2d至6d后，将样品进行MPN计数法定量检测。 1.3统计学分析 利用统计学软件SPSS20.0对数据进行统计并加强分析，用（x±s）表示计量资料，组间差异用t进行检验，用（%）表示计数资料，组间比较用X2检验，P＜0.05具有统计学意义。 2.结果 2.1比较两种方法检测结果 在研究中，样品增菌LB1经过24小时培养和LB2经过18小时培养后，分别进行实时荧光定量PCR法检测。在10-7细菌培养法和PCR法LB1增菌培养比较时，10-7具有统计学意义（P<0.05）。细菌培养法和PCR法LB2增菌培养后进行比较，差异不具有统计学意义 （P>0.05），具有可比性。 2.2不同时间MPN计数法检验结果比较 经检测，加标识的样品定量检测同时进行MPN计数法定量检测，2d后用冷藏的LB1增菌液定量检测结果和MPN定量检测结果一致，6d 后冷冻加标样品和冷冻6d后重新取样定量检测的结果有差别，差异具有统计学意义（P<0.05）。 表1比较两种方法检测结果（x±s） 3.讨论 利用实时荧光定量PCR法检测单增李斯特具有准确性和快捷性。国标中单增李斯特菌常用的三种检验方法为单核细胞增生李斯特氏菌定性检验、单核细胞增生李斯特菌MPN计数法和单核细胞增生李斯特菌平板计数法[3]，主要通过制备培养基、处理样品增菌和生化试验等，用时较长，分离培养受到多种因素的影响。实时荧光定量PCR法是利用荧光信号的积累实时监测整个PCR进程，通过标准的曲线对未知模板进行定量分析，有效解决PCR污染问题，使结果更加直观明确。 在本次检测中，实时荧光定量PCR法优于细菌分离培养法。样品增菌LB124小时和LB218小时培养后，分别进行实时荧光定量PCR法

ISO标准(参考译文)单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法

国际标准ISO11290-1 第一版1996-12-15 食品和动物饲料微生物学---单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法第一部分 检测方法 目录 内容页次 1 范围 1 2 参考标准 1 3 定义 1 4 原理 2 5 培养基和试剂 2 6 设备和玻璃仪器 3 7 取样 3 8 取样前处理 3 9 步骤 3 10 结果表述7 11 检验报告7 附录 A 检验步骤图8 B 培养基和试剂的组成和配制9 C 亨氏证明试验16

食品和动物饲料微生物—单核增生李斯特氏菌检测和计数的水平方法 第一部分 检测方法 警告：为了保障实验室人员的安全，强烈推荐执行单核增生李斯特氏菌检验应在具备相应设备条件的实验室进行，在有经验的微生物专家控制下，保温后的一切丢弃物应小心处理。特别是，强烈推荐孕妇不能操作单核增生李斯特氏菌的培养。 1 范围 本ISO11290详细说明了单核增生李斯特氏菌检测和计数的水平方法。 限于简介中讨论的条件，本ISO11290适用于给人消费和作为动物饲料的产品。 2 参考标准 以下标准包含的条件；通过参照这些内容，组成了这部分ISO11290的条件。出版时，引用的这些版本是有效的。所有标准都需要修订，而各机构对本部分基于ISO11290的批准应鼓励调查和应用以下引用标准的最近版本。IEC和ISO成员保留目前有效的国际标准的注册。 ISO6887：1983，微生物学---微生物检验中稀释液制备的一般导则 ISO7281：1996，食品及动物饲料微生物学---微生物检验通则 3 有关定义 本部分ISO11290适用以下定义： 3.1 单核增生李斯特氏菌依据本部分ISO11290实施检验，在固体选择性培养基上形成典型菌落并呈现固有形态、生理生化特征的微生物。 3.2单核增生李斯特氏菌的检验依据本部分ISO11290实施检验，在给定产品的质量和体积的条件下，检验这些微生物的存在或不存在。 4.原理 在本部分ISO11290范围内，单核增生李斯特氏菌检验需要四个连续的阶段（见附录A检验流程图） 注意1：李斯特氏菌可能存在量少并与大量的其它种类细菌混杂，因此需要选择性富集。同时也必须检测受破坏的李斯特氏菌，初级选择性富集培养基，含有降

食品微生物检验——单增李斯特菌

食品中单增李斯特检测技术 李斯特氏菌属包括七个种： 单核细胞增生李斯特氏菌 绵羊李斯特氏菌 英诺克李斯特氏菌 威尔斯李斯特氏菌 西尔李斯特氏菌 格氏李斯特氏菌 默氏李斯特氏菌 其中单核细胞增生李斯特氏菌对人类致病性强，绵羊李斯特氏菌对人类也有一定的致病性，其余李斯特氏菌无致病性。 单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。

它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。 它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。 该菌为革兰氏阳性短杆菌，大小约为0.5μmх 1.0-2.0μm,直或稍弯，两端钝圆，常呈V字型排列，偶有球状、双球状。 兼性厌氧、无芽胞，一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜，在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性。 该菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脱落。 该菌营养要求不高，在20--25℃培养有动力，穿刺培养2－5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。 该菌的生长范围为2--42℃（也有报道在0℃能缓慢生长），最适培养温度为35--37℃，在pH中性至弱碱性（pH9.6）、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好，在pH3.8－4.4能缓慢生长，在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。 在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。 在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。 在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45度角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。 该菌触酶阳性，氧化酶阴性。 发酵多种糖类，产酸不产气。 如发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。

李斯特菌检验应用

李斯特氏菌 李斯特菌 李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，为纪念近代消毒手术之父、英国生理学家约瑟夫·李斯特（1827～1912），1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。 单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。 李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的 李斯特菌快速检测试剂盒 1、分布广：存在于土壤、水域(地表水、污水、废水)、昆虫、植物、蔬菜、鱼、鸟、野生动物、家禽。 2、生存环境可塑性大：能在2-42℃下生存(也有报道0℃能缓慢生长)能在冰箱冷藏室内较

长时间生长繁殖。 3、适应范围大：酸性、碱性条件下都适应。 4、带菌较高的食品有：牛奶和乳制品；肉类(特别是牛肉)；蔬菜；沙拉；海产品；冰淇凌 单核细胞李斯特菌在半固体培养基上生长情况 李斯特菌具有较强的反抗力，秋冬时期在土壤中能存活5个月以上，在冰块内也可存活3～5个月，许多冷冻肉类都是它的“温床”。这种细菌对高温的反抗力也比较强，能在100℃下挺15～30分钟，在70℃下可存活30分钟以上。 单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中，不易被冻融，能耐受较高的渗透压，在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播。据报道，健康人粪便中单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70%的人可短期带菌，4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。 该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成感染，孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接触也是本病传播的可能途径，且有 1、形态与染色

单核细胞增生性李斯特菌研究进展_郭宏华

基金项目：吉林省科技项目资助（２０１００７４２）吉林省卫生厅项目资 （３Ｄ５１１ＢＣ４３４３０ ）＊通讯作者 文章编号：１００７－４２８７（２０１３）０１－０１９７－０３ 单核细胞增生性李斯特菌研究进展 郭宏华１，贾芙蓉２，韩晓英３，何成彦１＊ （１．吉林大学中日联谊医院，吉林长春１３００３３；２．解放军第２０８医院；３． 长春八一医院） 单核细胞增生性李斯特菌是一种短小的革兰氏 阳性无芽胞杆菌， 是一种人畜共患病的致病菌，可使人和动物患李斯特菌病。李斯特菌属（１ｉｓｔｅｒｉａ）现在有２个群７个种，分别是单核细胞增生性李斯特菌（Ｌ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ，ＬＭ）（亦称产单核细胞李斯特菌）、伊氏李斯特（Ｌ．ｉｖａｎｏｖｉｉ）（亦称绵羊李斯特菌）、英诺克李斯特菌（Ｌ　ｉｎｎｏｃｕａ）（亦称无害李斯特菌）、韦氏李斯特菌（Ｌ　ｗｅｌｓｈｉｍｅｉ）、塞氏李斯特菌（Ｌｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）、格氏李斯特菌（Ｌ．ｇｒａｙ ｉ）和莫氏李斯特菌（Ｌ．ｍｕｒｒａｙｉ）。１　生物学特性 ＬＭ的幼龄菌（取１６ｈ－２４ｈ的培养物进行革兰染色），呈革兰阳性小杆菌，长０．５μｍ－２μｍ，宽０．４ μ ｍ－０．６μｍ，直或稍弯，常呈Ｖ字形，成对排列。在营养肉汤中２Ｏ℃－２５℃培养２４ｈ可形成４根小鞭毛，有动力；３６℃培养时无鞭毛，动力消失。此菌营养要求不高，在普通营养琼脂平板上３６℃培养２４ｈ呈细小、半透明、微带珠光的露水样菌落，直径约０．２ｍｍ－ ０．４ｍｍ，在斜射光下，菌落呈典型的蓝绿色光泽。在血平板上３６℃培养２４ｈ－ ９６ｈ，菌落呈β溶血［ １］ 。２　流行病学 ＬＭ是一种人畜共患的致病菌，也是重要的食源性致病菌之一。ＬＭ感染家畜后可引起脑膜炎、脑炎以及自发性流产等，可暴发流行。ＬＭ引起人类的疾病统称为李斯特菌病（１ｉｓｔ—ｅｒｉｏｓｉｓ ），人感染后主要表现为脑膜炎、 败血症和单核细胞增多。婴幼儿、怀孕妇女和免疫耐受病人的感染死亡率可高 达２０％－３０％［２］ 。 ３　毒力基因 ３．１　李斯特菌溶解素（ＬＬＯ）是由ｈｌｙ基因编码的蛋白，是一种孔形成毒素，是主要的毒力因子，可破 坏吞噬体，使细菌进入胞液并在其中繁殖，失去后导致细菌毒力的丧失。不产生ＬＬＯ的ＬＭ可在非吞噬细胞的胞液中生存一段时间， 但却不能繁殖，可被吞噬细胞杀灭［３］ 。近年的研究表明ＬＬＯ是一个多 功能的毒力因子，能引起宿主细胞很多反应，如细胞增殖、 黏膜细胞外渗作用、巨噬细胞中细胞因子的表达树突状细胞的凋亡、磷脂代谢及引起机体产生免 疫反应等［ ４］ 。３．２　Ｐ６０蛋白是一种胞壁质水解酶，由ｉａｐ基因编 码，它是单核细胞增生性李斯特菌重要毒力因子［５］ 。通常Ｐ６０蛋白于细胞表面产生，并大量分泌到生长介质中，对于细胞的分裂是必不可少的。分析Ｐ６０蛋白编码基因的突变体显示，对于ＬＭ的吞噬细胞溶解作用以及对机体的感染过程，Ｐ６０蛋白是一个 重要的因素［ ６，７］ 。３．３　单增李斯特菌能产生两种磷脂酶ｃ：ＰＩ－ ＰＬＣ和ＰＣ－ＰＬＣ。ｐｌｃＡ基因编码一个特异的作用于磷脂酰肌（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏ１）的磷脂酶ｃ（ＰＩ－ＰＬＣ）。ｐ ｌｃＢ基因编码磷脂酶Ｃ（ＰＣ－ＰＬＣ）。ＰＩ－ＰＬＣ毒性相对较小，对细菌在细胞间扩散作用不大，主要是协同ＰＣ—ＰＬＣ发挥作用。ＰＣ－ＰＬＣ使细菌从吞噬泡中逃逸出来，能破坏宿主细胞的信号通路，能调节细胞因子和化学因子的合成，还能通过二酰基甘油、神经酰胺、肌醇磷酸盐等调节细胞的生长、分化、凋亡 等［４，８－ １２］。ＰＩ－ＰＬＣ系以活化的形式合成，而ＰＣ－ ＰＬＣ则先以非活化的前肽被分泌出来，然后在胞外由ｍｐｌ的基因产物Ｍｐ ｌ蛋白酶加工。ＰＩ－ＰＬＣ可辅助细菌逸出初级吞噬体，而细菌在细胞与细胞之间的 扩散过程中，ＰＣ－ ＰＬＣ则表现出一定的活性作用［１３］ 。Ａｎｇｅｌｉｋａ　Ｇｒｕｎｄ１ｉｎｇ等通过利用诱导Ｐ Ｃ－ＰＬＣ表达系统证明，缺乏ＬＬＯ的ＬＭ，ＰＣ－ＰＬＣ的活性不仅对在人类上皮细胞中初级吞噬体的溶解是必需的， 而且对细胞与细胞之间的扩散也是必需的［ １４］ 。３．４　Ｐｒｆ　 Ａ编码ＰｒｆＡ蛋白，是单增李斯特茵毒力基因簇上各种毒力基因的调节蛋白，直接检测ＰｒｆＡ可以减少其他毒力基因突变或缺失所造成假阴性 — ７９１—中国实验诊断学　２０１３年１月　第１７卷　第１期

食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验

食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验 1原理与范围 本标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法。 本标准适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。 2、培养基、试剂和血清 2.1含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤； 2.2含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂； 2.3李氏增菌肉汤LB(LB1，LB2)； 2.4 1%盐酸吖啶黄溶液； 2.5 1%萘啶酮酸钠盐溶液； 2.6 PALCAM 琼脂； 2.7 革兰氏染液； 2.8 SIM动力培养基； 2.9 缓冲葡萄糖蛋白胨水【甲基红（MR）和V-P试验用】；2.10 5%～8%羊血琼脂； 2.11 糖发酵管； 2.12 过氧化氢酶试验； 2.13 李斯特氏菌显色培养基； 2.14 李斯特氏菌生化鉴定试剂盒； 3 、仪器设备 除微生物室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1 高压蒸汽消毒灭菌器； 3.2 冰箱； 3.3 恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃； 3.4 生物显微镜； 3.5 电子天平：感量0.1g； 3.6 均质器；

3.7 吸管：1mL，10mL； 3.8 培养皿（直径90mm）； 3.9 培养瓶或三角瓶：容量500mL,250mL； 3.10 试管（，16 mm×160mm）； 3.11 离心管：30 mm×100 mm； 3.12 全自动微生物生化鉴定系统。 4 、检验程序 单核细胞增生李斯特氏菌检验程序见图1.

图1 单核细胞增生李斯特氏菌检验程序 5 操作步骤 5.1 增菌 以无菌操作取样品25g(mL)加入到含有225mL LB1 增菌液的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1min —2min ；或放入盛有225mL LB1 增菌液的均质杯中，8000 r/min---10000 r/min 均质1min —2min 。于30℃±1℃培养24h ，移取0.1mL ，转种于10mL LB2 增菌液内，于30℃±1℃培养18h--24h 。 5.2 分离： 取LB2 二次增菌液划线接种于PALCAM 琼脂平板和李斯特氏菌显色培养基上，于36℃± 1℃培养24h--48h ，观察各个平板上生长的菌落。典型菌落在PALCAM 琼脂平板上为小的圆形灰绿色菌落，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹陷；典型菌落在李斯特氏菌显色培养基上的特征按照产品说明进行判定。 5.3 初筛 自选择性琼脂平板上分别挑取 5 个以上典型或可疑菌落，分别接种在木糖、鼠李糖发酵管，于 36 ℃±1 ℃培养 24 h ；同时在 TSA-YE 平板上划线纯化，于 30 ℃±1 ℃培养 24 h ～48 h 。选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定。 5.4 鉴定 5.4.1 染色镜检：李斯特氏菌为革兰氏阳性短杆菌，大小为（0.4 μm ～0.5 μm ）×（0.5 μm ～2.0 μm ）； 用生理盐水制成菌悬液，在油镜或相差显微镜下观察，该菌出现轻微旋转或翻滚样的运动。 5.4.2 动力试验：李斯特氏菌有动力，呈伞状生长或月牙状生长。 5.4.3 生化鉴定：挑取纯培养的单个可疑菌落，进行过氧化氢酶试验，过氧化氢酶阳性反应的菌落继续进行糖发酵试验和 MR-VP 试验。单核细胞增生李斯特氏菌的主要生化特征见表 1。

妊娠期李斯特菌感染

妊娠期李斯特菌感染 发表时间：2016-12-13T16:38:47.093Z 来源：《系统医学》2016年15期作者：余欣梅 [导读] 李斯特菌是一种革兰阳性、兼性厌氧杆菌，是一种环境致病菌，感染后可以引起李斯特菌病。 第三军医大学第三附属医院妇产科重庆 400042 【摘要】李斯特菌是一种环境致病菌，是重要的食源性人兽共患病原体，摄入被李斯特菌污染的食物后，可引起李斯特菌病。与普通人相比，孕期妇女是高危人群，一旦感染了李斯特菌可能会导致自然流产或早产；胎儿及新生儿感染，病情凶险，死亡率高。早期诊断、尽早治疗可以改善李斯特菌感染的母婴预后。 【关键词】妊娠期；感染性疾病；李斯特菌 【中图分类号】R714.2 【文献标识码】A 【文章编号】2096-0867（2016）15-238-02 李斯特菌是一种革兰阳性、兼性厌氧杆菌，是一种环境致病菌，感染后可以引起李斯特菌病。目前国际上公认的李斯特菌属有6个种，分别是产单核细胞李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM），英诺克李斯特菌，伊氏、格氏、莫氏、塞氏李斯特菌。产单核细胞李斯特菌（LM）为细胞内寄生的革兰阳性无芽孢杆菌，是重要的人兽共患病病原体，其为李斯特菌属中唯一人类致病菌，可通过食用被污染的食物在人畜间传播，引起人和动物的局灶性感染、败血症、脑膜炎、流产、早产、死胎、新生儿感染及死亡等。普通人群的发病率报道不一，在0.1/10万～1.1/10万，而妊娠期为12/10万，明显高于普通人群。LM可侵袭母胎界面导致胎儿严重感染，胎儿死亡率高达30%［1-5］。李斯特菌感染危险对象还包括免疫力低下人群、老年人群。本文主要目的是了解妊娠期感染李斯特菌的临床相关性。 一、李斯特菌生物学特性及流行病学特点 李斯特菌感染后患者病死率高达30％［6］，该菌在自然界分布广泛，如土壤、水、腐败蔬菜等，亦可以从正常人粪便中分离培养。其对各种应激（低温、高盐、低 pH、氧化应激等）条件有很强的耐受性，进一步增大了该菌的危害性［7］。此菌不产生内毒素，可产生一种溶血性外毒素，对人类致病性强［8］。该致病菌还被列为20世纪90年代威胁食品安全的4大致病菌(产单核细胞李斯特菌、致病性大肠埃希菌、肉毒梭菌、亲水气单胞菌) 之一[9]。高温烹饪食物可杀灭李斯特菌，化学杀虫剂及紫外线照射对其较敏感，75%酒精5min、1‰紫外线照射15min均能将之杀死［10］。 1926年首次报道家兔感染李斯特菌；1936年首次报道人类感染李斯特菌。WHO和 FDA于1986年设立了李斯特菌研究中心，专门协调该菌的病原学、流行病学及临床等研究工作［11］。美国早在2000年就将李斯特菌病定为国家法定传染病进行管理。近10余年来世界各地，特别是美国、英国、法国、日本和西班牙等发达国家因产单核细胞李斯特菌污染食品而引起食源性疾病暴发日益增多［12］。到目前为止，我国虽未出现有关产单核细胞李斯特菌引起食物中毒暴发流行的报道，但从国内目前的多篇报道了解，此菌多年来在我国猪、羊、鸡、牛、兔等家禽家畜中有流行，并已经报告的临床散发病例有数十例。目前由产单核细胞李斯特菌污染引起的食品中毒已受到世界各国的重视［13］。随着饮食习惯逐渐变化，食用生冷及半熟食的人群增多，致使李斯特菌感染率增高。感染后主要临床表现为发热、上呼吸道感染、肺炎、腹泻、血流感染、脑膜炎，甚至死亡。 二、母婴感染途径及临床表现 １、母婴感染途径：李斯特菌是一种细胞内寄生菌，侵犯宿主后被巨噬细胞吞噬并在其中寄生繁殖，其能穿越感染宿主的3道屏障（肠道屏障、血脑屏障、胎盘屏障）。该菌不产生内毒素，但可产生溶血性外毒素，且致病力强。该菌的清除依赖于细胞免疫，其特异性保护能力依赖于巨噬细胞，体液免疫对该菌感染无保护作用，因此细胞免疫功能低下和使用免疫抑制剂的患者都较易感。孕妇由于体内孕酮升高，而导致细胞免疫力下降［14］，使得孕妇极容易感染此细菌［15］。李斯特菌有嗜胎盘特性，妊娠期感染很容易引起宫内感染，其机制尚不清楚［16］。动物实验发现，李斯特菌通过其两个表面蛋白内化蛋白InlA和InlB可以和宿主细胞的钙黏着蛋白、c—Met酪氨酸激酶结合侵入宿主细胞［17-18］，可以通过胎盘屏障侵犯胎盘形成小脓肿，绒毛膜羊膜炎、绒毛炎等。感染常从子宫蜕膜开始，虽然胎盘屏障可以防止感染发生，但因妊娠期的特殊性，胎盘免疫功能受到抑制，从而感染LM的危险性更大［19］。胎儿在宫内受细菌感染的途径有3种：上行性羊水感染、上行性胎盘胎儿感染和血行性胎盘胎儿感染［20］，其中最主要的感染途径可能是血行性胎盘胎儿感染。研究显示，新生儿感染李斯特菌病例均能在母亲的相关检测中找到李斯特菌感染证据，包括血、羊水及胎盘培养。母亲与新生儿的李斯特菌菌株的血清型及基因检测亦显示感染为同源性，再次证实母婴垂直传播是新生儿李斯特菌病发病的最主要方式。 ２、临床表现：妊娠期LM感染可发生于任何孕期，但更多见于妊娠晚期；感染后常表现为高热、腹痛、白细胞增高、胎动减少或消失，伴或不伴胃肠道症状。妊娠早、中期感染可导致流产、死胎，妊娠晚期则导致胎儿及新生儿发生感染，可出现胎儿心率减慢、胎动减少、胎粪污染以及新生儿窒息、死亡等。新生儿感染LM有两种表现形式，根据发病时间分为早发型和晚发型。（1）早发型：即出生时或出生后2 d内临床表现异常，多为早产儿，表现为窒息、呼吸困难、发热、循环障碍等早期感染症状，主要临床表现为血流感染，可伴有急性呼吸窘迫及肺炎等，本型多由母婴传播、宫内感染所致，产单核细胞李斯特菌首先感染胎盘，引起胎盘炎性改变再感染胎儿。（2）晚发型：多发生于出生7 d后至数周，多为足月儿，主要表现为脑膜炎，有报道显示94％晚发型表现为脑膜炎［21］。产单核细胞李斯特菌可直接通过血脑屏障进入脑实质及脑干引起脑膜及脑干脑炎，存活婴儿约30％～50％留有严重神经系统后遗症。新生儿李斯特菌病易引起新生儿死亡，欧美国家报道新生儿病死率为20％～30％［22］。 三、诊断与治疗 1、诊断：围产期发生LM感染，如诊断和治疗不及时可导致产妇死亡；新生儿感染LM，病情凶险，病死率高，因此早期诊断是治疗的关键和前提。围产期高危因素有: （1）母亲孕期有食用生冷食物史；（2）母亲既往有不良孕产史，包括不明原因流产、死胎、早产或有新生儿早期感染者；（3）母亲围产期不明原因发热；（4）早产儿；（5）胎膜早破时间＞18ｈ；（6）有围产期窒息史，羊水浑浊、有异味［23］。目前最常用的诊断方法是血培养或胎盘细菌培养［24］，确诊须获得阳性的细菌培养结果。对于高度怀疑有宫内感染的孕产妇，在分娩时应采集阴道及宫腔分泌物、胎盘胎膜组织进行病原菌培养及病理检查。同时对其新生儿做血液、脑脊液、胃液及咽拭子等细菌培养，严密监测新生儿Ｃ反应蛋白及白细胞的变化，密切观察临床表现，必要时给予抗生素抗感染治疗，减少围产期感染引起的新生儿死亡[25,26]。 2、治疗：如果孕妇发生李斯特菌感染，进行积极有效的治疗可以避免不良妊娠结局。由于LM细胞膜上存在至少5种青霉素结合蛋白，可与阿莫西林结合而不能与头孢类抗生素结合，因此对头孢类抗生素天然耐药［27］。目前在治疗LM感染的抗菌药物选择上，氨苄西林或氨苄青霉素是最佳首选药物，对于青霉素过敏的患者首选复方新诺明［28］。氨苄西林或氨苄青霉素联合氨基糖苷类抗生素有协同作用。本病虽少见，但应高度警惕，及时进行细菌培养可提高确诊率。在细菌培养结果回示前，目前的经验治疗是对有羊膜炎的孕妇静脉用药，选用氨苄青霉素4～6g/d，每天分4次静脉点滴。无羊膜炎或恢复期患者可口服阿莫西林2～3 g/d，疗程均需多于2周［29］。临床上还需根据具体情况及早结束妊娠。对于有上述高危因素且有严重感染表现的新生儿，应及时给予正确的抗感染治疗。对青霉素过敏者，可选用氨基糖苷类、红霉素、万古霉素等。 四、预防 产单核细胞李斯特菌（LM）是一种重要的食源性人兽共患病原菌，中国自2000年起开展食品LM监测，中国食品中LM污染率较高的食品主要为生肉及肉制品，污染率可达30％，其中生鸡肉、生猪肉分列前两位［30］。降低妊娠期李斯特菌病应采取以下措施：（1）提高妇产科医师对本病传播和预防知识的学习，在围产保健过程中，加强围产期保健宣传，让孕产妇在孕早期就得到预防李斯特菌病的相关知识；同时需对内科和急诊科医师加强宣传。（2）因为李斯特菌病主要通过食物经消化道传播，应告知孕妇避免食用生冷食物，不吃久存冰箱的食物，如动物制品、乳制品、生食蔬菜等；如孕期有相关饮食史，且出现发热等表现需要警惕产单核细胞李斯特菌感染，并及时就医，严密观察病情变化、检测感染原，并给予早期、积极、合理、足量的药物治疗，严密监测感染指标，并根据具体情况及早中止妊娠，同时对出生后的新生儿需要预防性或治疗性应用抗菌药物，在细菌培养和药敏结果未明确之前，建议首选青霉素类或联合其他类抗菌药

单增李斯特氏菌显色培养基使用说明书

单增李斯特氏菌显色培养基使用说明书CRM013 单增李斯特显色培养基 单增李斯特ATCC19115 (Chromogenic Listeria monocytogenes Agar ) 【包装规格】 环凯货号CRM013（干粉）；SR0590(配套试剂) ；（平板） 包装形式47.3g/瓶；10支/盒；20套（φ9cm) /盒【产品用途】 用于分离和初步鉴别单增李斯特菌。 【检验原理】 蛋白胨、酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;色素与单增李斯特氏菌具有的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在平板上，单增李斯特氏菌呈现绿~蓝绿色的光滑规则的小菌落;抑制剂和配套试剂可抑制杂菌的生长。 【培养基配方成分】 配方（每升）含量 蛋白胨15.0g 酵母膏粉 5.0g 琼脂15.0g 氯化钠 5.0g 色素 2.3g 抑制剂 5.0g 去离子水（平板）1000ml 最终pH 7.1±0.2（25℃） 【使用方法】

1.称取显色培养基干粉47.3g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，充分溶解，121℃高压灭菌15min，冷至50℃左右。 2.取10支配套试剂分别加入1mL无菌水，使之完全溶解。 3.将配套试剂加入到已冷至48℃左右基础培养基中，充分混匀后倾注无菌平皿。 4.按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液，进行增菌培养后，用接种环取1环增菌液，划线接种于显色平板上，置于36±1℃培养24-48小时。 5.观察结果。致病性李斯特24h后开始出现蓝绿色，至36～48h蓝绿色明显。挑取显色平板上呈蓝绿色光滑规则，直径约1～2mm的可疑单菌落进行进一步的试验。 6.对疑似单增李斯特氏菌菌落可使用HK-MID Listeria或API20E或生化管进行下一步的鉴定。 注：如产品类型为干粉，按上述1-6进行操作;若为即用型平板，按4-6进行操作即可。