基础生物化学实验.

生物化学实验

实验基本原理

1 有效数字计算（结合电子天平的应用等）

加减法：

进行数字加减时，最后结果所保留的小数点后的位数应与参与运算的各数中小数点后位数最少者相同，其尾数“四舍五入”。如：0.124+1.2345+12.34=13.6979，应取13.70。

乘除法：

进行数字乘除时，最后结果的有效数字应与参与运算的各数中有效数字位数最少者为准，而与小数点的位数无关，其尾数“四舍五入”。如：1.23×0.12=0.1476,应取0.15。

2 误差分析

误差为实验分析的测定值与真实值之间的差值。误差越小，测定值越准确，即准确度越高。误差可用绝对误差和相对误差表示。

绝对误差= 测定值- 真实值

相对误差= 绝对误差÷真实值×100%

一般用相对误差表示结果的准确度，但因真实值是并不知道的，因此实际工作中无法求出分析的准确度，只得用精确度来评价分析的结果。

3 偏差分析（结合“可溶性蛋白或赖氨酸实验”要求掌握）

精确度表示在相同条件下，进行多次实验的测定值相近的程度。一般用偏差来衡量分析结果的精确度。偏差也有绝对偏差和相对偏差两种表示方法。

绝对偏差= 单次测定值- 算术平均值（不计正负号）

相对偏差= 绝对偏差÷算术平均值×100%

例如：分析某一材料糖含量，共重复测定5次，其结果分别为：16.1%，15.8%，16.3%，16.2%，15.6%，用来表示精确度的偏差可计算如下：

分析结果算术平均值个别测定的绝对偏差（不计正负）

16.1% 0.1%

15.8% 0.2%

16.3% 16.0% 0.3%

16.2% 0.2%

15.6% 0.4%

平均绝对偏差=（0.1%+0.2%+0.3%+0.2%+0.4%）÷5 = 0.2%

平均相对偏差= 0.2÷16.0×100% = 1.25%

在实验中，有时只做两次平行测定，这时就应用下式表达结果的精确度：

两次分析结果的差值÷平均值×100%

4 实验结果的表述：实验结果可用列表法（“影响酶作用的因素”常用）和作图法（综合实验用）表示。

第1章分光光度技术

分光光度技术是光学（光谱）分析技术的一种，它是利用物质的特征吸收光谱来对不同物质进行定性和定量分析的一项技术。我们将重点介绍紫外光-可见光分光光度法。

一、紫外光-可见光分光光度法的基本原理

1、讨论的波长范围：200～400nm的紫外光区和400～760nm的可见光区。

人肉眼可见的光线称可见光，波长范围在400～760nm；

200～400m为紫外光区，760～400000nm为红外光区。

2、发射光谱与吸收光谱：

发射光谱：不同光源发射光谱不同。对电灯来说，钨灯发射可见光源，氢灯发射紫外光源。

吸收光谱：被溶液吸收后的光谱。（在分光镜上呈现暗带的光谱）。

当一束单色光通过溶液时，一部分被溶液吸收，一部分光可反射、折射、吸收、透过，溶液的厚度愈大，光过越少。

3、吸收光谱中的透光度（T）与吸光度（A）：

吸收光谱类仪器的检测读数盘上都有两种数字，T或A（或 E 消光度）

（1）透光度（T ）：表示透过的光占入射光的比例（%表示）

当一束光通过一杯样品溶液时，射光 = 反射光 + 折射光 + 吸收光 + 透过光

当用空白（组成该样品溶液的溶剂）校正后，入射光 = 吸收光 + 透过光

透光度(T）=样品透过光强度/空白透过光强度

此时空白透过光强度是样品真正入射光强度。

（2）吸光度（A）：是物质所吸收的光的一种度量，数值上等于透光度的倒数的对数（透光度的负对数），即 A = -lgT

（3）朗伯-比尔定律：A = K C L，吸光度与溶液浓度（C）和液层厚度（L）成正比。（K 为常数，同种物质K 相同，不同物质K 不同）

如固定L（比色皿厚度），A 只与C 成正比。

朗伯-比尔定律使用条件：待测液是均匀稳定的稀溶液；入射光是严格的单色光。

4、分光光度法（比色法，P23）：

（1）定义：利用分光光度计产生的单色光照射待测溶液，通过检测吸光度，对溶液中存在的具有光吸收能力的物质进行定性或定量分析的方法。

（2）测定方式：用已知标准浓度和未知浓度的待测液进行比色分析，根据两者间的吸光度做比较求得待测液的浓度。还需设置“空白”，以消除光的反射和折射。

(3)光源：通过钨灯或氢灯产生可见光或紫外光。

二、分光光度法的测量方法

1、标准曲线法：配制一系列不同浓度（C）的标准溶液，以纯溶剂为空白，测定标准溶液的A值，以A值为纵坐标，C为横坐标绘制标准曲线。

2、回归方程法：得到的标准曲线数据可通过一元线性回归求出标准曲线方程。（见P27附。具体应用，先确定x和y，再按公式计算）。

3、仪器直读浓度法：7200等分光光度计可直接读出浓度。只需配出一个C标，校正仪器至已知浓度，将待测液推入光路，旋钮拨至C档，即可直接读出浓度。

4、列解联立方程法:对于多组分和二组分混合液可选择多个或两个波长（一般为各组分的最大吸收波长）分别测出吸光度（A），再按方程组计算。（P124，实验29属于此类）

三、分光光度法的应用（见P26）参考原则：

?有紫外吸收的可选用紫外分光光度计测定，如蛋白质、核酸、生物碱、硝酸盐等

?无色的物质可通过显色用可见分光光度计测定，如蛋白质、氨基酸、核酸、酶、糖类等

?有色的物质可直接用可见分光光度计测定，如色素。

四、紫外-可见分光光度法测定物质浓度的一般操作（P27）

1、配制标准溶液，制标准曲线

2、样品准备和提取：称样→浸提（加热或研磨）→稀释至一定浓度→显色（紫外不必）

3、测定：选择适当波长→选择适当比色皿→倒入待测液→调节仪器→读数→记录

4、计算：根据公式，带入各数据计算结果。

思考题

（1）分光光度法的基本原理如何？应用在哪些方面？

（2）结合实验，总结分光光度法测定物质含量的一般操作过程和注意事项。（3）简述分光光度计的组成及使用方法。

（4）名词：透光率，吸光度，吸收光谱，标准曲线

第2章离心技术

1、概念：

1）离心：是利用离心机产生离心力来分离具有不同沉降系数的物质的方法。2）离心技术（centrifugal method）是利用离心机旋转运动产生的离心力，将悬浮液中的悬浮微粒快速沉降，而达到分离、浓缩或提纯等目的的一门技术。

应用：在生物科学，尤其是在生物化学和分子生物学方面的应用已经十分广泛。

2、基本原理：物质颗粒在离心过程中受到的作用力主要有离心力、介质阻力和介质浮力等。

1）离心力（F）：

定义：物质颗粒在离心场中受到一个远离旋转轴的力即为离心力。

表示：常用地球引力的倍数表示，“数字×g”（g为重力常数）。例如25000×g，则表示相当于地球引力的25000倍（高速离心）。

实际应用中，特别是低速离心，常用每分钟转数v 表示（r·min-1或rpm）。2）浮力密度：物质的质量减去在一定介质中所受的浮力即为浮力密度。

只有物体的密度大于介质密度的情况下，该物体才会发生沉降。

3）沉降阻力：物体在介质中沉降时，所受到的介质阻力。

沉降阻力取决于介质的粘度。

4）沉降速度：即单位时间内物质颗粒移动的距离。

它与物体的密度成正比，与介质的摩擦系数（粘度）成反比。

3、离心机的分类（P10）

可从转速、用途、离心形式、转子形式、使用温度等方面对离心机进行分类。根据离心机转速不同，可分为三类：低速（普通）、高速和超速离心机。

(1)普通离心机：转速在8000 rpm或6000×g以下，一般性制备用（一般实验中用）。

(2)高速离心机：转速可达25000 rpm或89000×g，需要带有冷却离心腔的制冷设备，以控制转子高速旋转产生的磨擦热。

(3)超速离心机：转速在30000 rpm以上，可产生高达500,000×g的离心力；可使亚细胞器、病毒分级分离，也可用于测定蛋白质、核酸的相对分子量等。由于转速极高，因此它除带有制冷设备外，还具备真空系统。

4、常用离心技术

1）差速离心法：基于待测物质颗粒的大小、密度不相同，其沉降速度不一样而得到分离。

2）速率区带离心（沉降速度超速离心）：样品中粒子（大分子）因大小和沉降速度不同，在梯度介质中呈分离的区带状沉降，（管中形成区带）。同样的粒子处于同一区带（图1-1-4 ）

首先在离心管中灌装好预制的一种密度梯度介质液，在其上面小心铺上一层样品溶液（图1-1-4 ），离心期间，样品中各组分会按照各自的沉降速率沉降，被分离成一系列的样品组分区带，故称率区带离心。

3）等密度梯度离心（沉降平衡超速离心）：样品中粒子（大分子）因浮力密度不同，粒子移至它本身相同密度的地方形成区带（管中形成区带）（图1-1-5）。如果离心管中介质中的密度范围包括待分离样品中所有组分的密度，离心过程中，各组分将逐渐移至与它本身密度相同的地方形成区带。

速率区带法和等密度梯度法的区别：

●开始介质有无梯度（前者有，后者无但在离心中自动生成）；

●介质不同（前者可用蔗糖、甘油等，后者常用碱金属的盐溶液）。

5、离心技术的应用

1）物质的分离：将固体与液体分离，或将互不相溶的液体分开。

2）测定沉降系数和分子量：超速离心

6、离心操作的一般过程

1）仪器选择：根据需要选择

2）离心准备：样品装入离心管，做好标记并进行平衡。再按对称方向放到离心机中。

3）离心：关闭离心腔盖，调整旋钮或按钮至设定时间及转速（低速离心机逐渐增速）开始离心。

4）检测、分离已离心样品：取出离心管，用长吸管、移液器、注射针头等工具吸取所需的液体分离层，或直接倾去液体层，留下所需的固体层。

思考题

（1）何为离心技术？它有什么用处？

（2） 简述离心机的分类。

（3） 结合实验，说明普通离心操作应注意哪些问题。

（4） 名词：离心力，沉降系数，沉降速度，差速离心，等密度梯度离心

第3章 层析技术 定义：层析技术（层析法）是根据物质的理化性质而建立的分离、分析物质的

方法。（P15）

? 发现历史：层析法也称色谱法，是1906年俄国植物学家将植物叶片提取的

色素通过装填有CaCO3的柱子，各种色素以不同速率流动后形成不同的色

带而被分开，由此得名为“色谱法”。

? 层析法不断发展，相继出现气相层析、高压液相层析、薄层层析、亲和层析、

凝胶层析等。层析法是生物化学中常用的分离分析技术之一。

一、 层析法的基本原理

层析法是利用混合物中各组分物理、化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分在两相（固定相和流动相）中发生相互作用（吸附、溶解、结合等）使各组分以不同速度移动而达到分离的目的。

1、 分配系数（K ）：通常被用来描述一种化合物在互不相溶的两个相中的分配状况。

溶质在移动相中的浓度溶质在固定相中的浓度

K

2、 分离原理（P15）（见图1-2-1 ）

3、 层析法分类

1）按层析过程的机理（依据的理化性质）分类

2）按两相的物态（固、液、气）分类

3）按操作形式（支持物、装置等）分类（见P17,表1-2-1 层析法分类表)

4、几种层析方法简介

1） 分配层析

（1）原理：利用混合物在两种不相混溶的液相（固定相和流动相）中的分配系数不同，分配系数小的溶质在流动相中的分配的数量多，移动快；分配系数大的溶质在固定相分配的数量多，移动慢。

（2）应用：纸层析，以滤纸上吸附的水为固定相，以有机溶剂为流动相，常用于分离鉴定氨基酸、核苷酸、色素等小分子有机物。

物质在纸上的移动速率可以用R f 值表示：

距离

溶剂前沿至起点中心的心距离物质斑点中心至起点中 f R 在相同条件下，Rf 值是固定的，可用于鉴定被分离的物质。

2）吸附层析

（1）原理：利用固定相的固体吸附剂表面对不同组分吸附力的大小及流动相对它的溶解作用（解吸作用）的差异进行分离。

（2）应用：薄板层析是常用的吸附层析方法之一。它用水作粘合剂将硅胶G 均匀铺在玻璃板上形成一薄层作为固定相，由展开剂作为流动相，可用于分离氨基酸、单糖、寡糖、脂类等。

3）离子交换层析

（1）原理：固定相的离子交换剂对各种离子有不同的亲和力，它们结合的牢固程度不同，选用不同pH 的洗脱液做流动相便可将混合物中的各种离子逐个洗脱下来。

（2）应用：离子交换柱层析常填充不溶性高分子化合物（树脂，纤维素等），以分离各种可解离的物质，如蛋白质、氨基酸、核酸、生物碱等。

4）凝胶层析（分子筛层析或分子排阻层析）

（1）原理：根据混合物中各分子的大小和形状不同而进行分离。固定相为多孔网

络结构的凝胶颗粒。当各种分子流过层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能进入胶孔，在凝胶颗粒间的空隙向下移动，最先被洗脱出来；比网孔小的分子能自由出入胶孔内外，在柱内经过的路程较长，移动慢，最后被洗脱出来。

（2）应用：大分子分离提纯，测蛋白质分子量。

5、层析技术的一般操作过程：以柱层析薄层层析为例，对层析的操作过程简介如下：

1）层析柱（板）的制作：

?装柱：将层析介质（如树脂、葡聚糖颗粒等）均匀、致密地填充于层析柱中，

并用洗脱液或样品缓冲液平衡一定时间（见下图）

?制板：层析介质（如硅胶G）用溶剂调匀后平铺于玻板上，待晾干后进行活

化。

2）加样或点样：

?加样：用于柱层析，待分离样品溶解后加于层析柱顶上；点样：用于薄层层

析或纸层析，用毛细管等细小管状物将待分离样品点于薄层的一端。

3）洗脱或展层：

?用流动相流过固定相的过程在柱层析中称为洗脱，在薄层层析中称为展层4）检测与鉴定：根据样品性质特征用不同方法

思考题

（1）简述层析法的基本原理及分类？

（2）凝胶层析的原理如何？

（3）简述层析技术的一般操作过程，层析技术可应用在哪些方面？

（4）名词：展层，洗脱，制板，分配系数

第4章电泳技术

?定义：电泳技术是根据带电颗粒在电场中向着与其所带电荷相反电极移动的

原理建立的分离分析物质的方法。（P30）

?历史：1808年就发现电泳现象，但作为一种生物化学研究方法，在1937年

后才得到了较大发展。

?目前，电泳技术已成为生物化学、免疫学、分子生物学以及与其密切相关的

医学、农、林、牧、渔、制药分析中必不可少的手段。

一、电泳的基本原理

1、带电质点：

不同物质由于本身解离或其表面吸附有其它带电质点，在电场中便会向一定电极移动。aa、Pr和核酸都可两性解离，带有电荷。

2、迁移率（m）：表示不同带电颗粒在电场中的泳动速度，其单位为cm2·V-1·s-1：

m = 颗粒泳动速度(cm·s-1) / 电场强度(cm·V-1)

3、影响迁移率的主要因素:

(1)内因：带电颗粒的性质和颗粒的大小、形状。一般说颗粒带净电荷越多，直径越小，越接近球形，在电场中迁移率越快，反之越慢。

(2)外因：电场强度、溶液pH值、溶液的离子强度、电渗现象、温度的影响。

二、电泳的分类

1、按分离原理分类：（P32）

?分为区带电泳、移界电泳、等速电泳和聚焦电泳等4种。区带电泳最常用，

电泳过程中，不同的离子成分在均一的缓冲液体系中分离成独立的区带。2、按有无固体支持物分类：

?分为自由电泳和支持物电泳两大类。

支持物电泳的支持物有多种，应用最多。根据支持物的特点又可分为：（1）无阻滞支持物，如滤纸、醋酸纤维膜、纤维素粉、淀粉、聚酰胺粉末，凝胶颗粒等。

（2）有阻滞支持物，通常为高密度的凝胶，如淀粉凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等。

用于放置支持物的电泳槽的形式也是多种多样的，有垂直的、水平的、柱状的（花篮式）、毛细管的、湿小室及幕状的等。

聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是以聚丙烯酰胺凝胶作支持物的区带电泳。

PAGE分离物质的三种效应：

（1）电荷效应：按所带电荷分离物质。

（2）分子筛效应：凝胶聚合成三维网状结构，通过控制网孔大小分离不同大小的分子。

（3）浓缩效应：当使用不连续凝胶系统时，分离物质快速通过浓缩胶（大网孔）、而聚集于分离胶（小网孔）上呈一薄层，使分离物质处于同一起跑线。

?因为以上三种效应，使分离物质的分辨率提高。

2、聚丙烯酰胺凝胶的聚合：

?聚丙烯酸胺凝胶是由单体、丙烯酰胺（简称Acr）和交联剂、双体的N,N-

甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）在加速剂（四甲基乙二胺）和催化剂（过硫酸铵）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。（见图l-4-2）

三、聚丙烯酰胺凝胶电泳

?凝胶孔径大小，主要受凝胶浓度的影响。凝胶浓度越大，孔径越小。凝胶浓度过大，胶硬而脆，易折断。

3、PAGE的应用

（1）分离蛋白质和同工酶：（P38）

?形成不同的蛋白带和酶带（参见实验10及下图）

（2）测定蛋白质分子量：

?采用SDS-PAGE。在样品中加十二烷基硫酸钠（SDS）降低天然蛋白质分子

间的电荷差别，蛋白质结构变得松散，形状趋于一致，使各种SDS-蛋白复合物在电泳时产生迁移率差异只与分子量有关。

（3）测蛋白质等电点：

?采用等电聚焦电泳法（IEF-PAGE）。在凝胶柱中加入两性电解质载体，造成

一定的pH梯度，使具有不同pI值的蛋白质聚焦在相应的pH中，这时所带净电荷为零，不再泳动，而浓缩成狭窄的区带（参见P36及P55）。

4、凝胶电泳的一般操作方法：

(1) 根据所分离物质的特性及要求选择相应的凝胶、电泳仪及电泳槽（园盘、垂直板、多用途）

(2) 配制相应凝胶溶液（烧杯中，参见P65 ）

(3)灌胶：花篮式电泳装置，在玻管中倒入凝胶溶液，直接加水覆盖胶液

(4) 胶凝固后倾出水，将玻管固定于电泳槽，倒入电极缓冲液并检查是否漏液

(5) 点样：将样品加至凝胶上的上样孔中

(6) 电泳：接上电泳仪开始电泳

(7) 剥胶、显色

(8) 分析：条带比较或照相或光密度扫描

思考题

?什么叫电泳？简述电泳的基本原理。

?什么叫迁移率？电场强度、pH、温度对迁移率有何影响？

?凝胶电泳技术可应用在哪些方面？

?名词：等电聚焦，区带电泳，分子筛效应，浓缩效应。

实验1 影响酶作用的因素

1、酶具有什么特性？

（1）高效性：酶的催化效率一般比无机催化剂高1000万至10万亿倍，因此在生物体内的各种酶只需要极少的量就能催化大量底物发生反应。

（2）专一性：指酶对催化的底物及反应类型具有选择性，所以酶的种类很多。（3）易变性：酶是蛋白质，要求温和的反应条件；在一定范围内，温度、PH值等变化都会使酶的催化能力发生变化。

（4）可调性：植物通过调节酶的活性进行不同的反应和适应不同的环境。

2、什么是酶的活性？酶催化效率的高低。

3、酶的活性需要什么条件？需要适应环境的条件——其中适宜的温度和PH值

就是其中之一。

根据酶的特性及需要的条件，下面分别给出不同的温度环境、不同的PH环境和催化底物，来探讨酶的活性需要的条件。

原理：淀粉酶活性高低不同，淀粉水解的程度就不同，生成的产物也不同；其水解产物遇碘也会呈现不同的颜色。故可根据加碘呈现的不同颜色来判断淀粉的水解程度，从而了解温度、pH对酶促反应速度的影响。

淀粉在酶的作用下，逐步降解成的分子量大小不一的中间产物糊精，最后再水解成葡萄糖和麦芽糖；不同的糊精遇碘显不同的颜色。

淀粉+淀粉酶水解淀粉糊精水解紫糊精水解红糊精水解消色糊精水解葡萄糖+麦芽糖

遇I2 遇I2 遇I2 遇I2 遇I2 遇I2

蓝色蓝紫色紫色红褐色无色无色

（1）温度对酶活性的影响：由于酶是蛋白质，所以受温度影响，在高温下，酶变性而失去活性；低温下，酶的活性被抑制；适宜温度，酶的活性最强。

（这种变性用什么来验证呢？用不同温度（冰水、40℃水浴和沸水浴）作用淀粉酶，使淀粉部分、完全和不分解后与碘（I2）出现的不同颜色来观察。其中，冰水属低温，酶的活性被抑制，淀粉只能少部分分解，所以遇I2变为紫红色；40℃水浴，酶的活性最强，淀粉完全分解，遇I2变为无色或碘色；沸水浴，酶变性而失去活性，遇I2变为兰色）

（2）p H 对酶活性的影响：酶的活性受环境pH的影响极为显著，通常只在一定的pH范围内，酶才表现出活性。植物酶的最适pH在4.5-6.5之间，而对今天萌发的小麦种子来说，主要起催化作用的酶为淀粉酶，最适pH是5。[今天淀粉酶在不同PH（3、5、7）下，使淀粉部分和完全分解后与碘（I2）出现的不同颜色来观察。其中，PH为3属强酸性环境，大部分酶已变性失活，淀粉只有一小部分水解，遇I2变为蓝紫色； PH为5属酶的最适PH，酶的活性最强，

淀粉完全分解，遇I2变为无色或碘色；PH为7属中性环境，酶的活性被部分抑制，淀粉只有少部分不分解，遇I2变为红紫色色]

（3）酶的催化特异性（专一性）：酶对作用的基质具有严格的选择性，即酶具有专一性。

[如淀粉酶只能催化淀粉水解，而不能催化蔗糖水解，所以今天我们用淀粉和蔗糖做底物来验证。即：

淀粉+淀粉酶完全水解葡萄糖+麦芽糖Cu2+生成Cu2O砖红色沉淀；

蔗糖+淀粉酶不水解没有Cu2O砖红色沉淀生成]

Ⅰ温度对酶活性的影响

甲组：颜色变化为：紫红色、无色或碘色、蓝色

乙组：颜色变化为：无色或碘色、无色或碘色、蓝色

Ⅱ pH 对酶活性的影响

颜色变化为：紫红色、无色或碘色、蓝紫色

Ⅲ酶的催化特异性

鉴定：颜色变化：蓝色、蓝色、蓝绿色，说明淀粉酶液中含有还原性杂质

测定：淀粉 +淀粉酶完全水解葡萄糖 +麦芽糖Cu2+生成Cu2O砖红色沉淀；

蔗糖 +淀粉酶不水解没有Cu

O砖红色沉淀生成）

2

思考题

（1）实验中为什么要检验淀粉酶溶液，淀粉溶液或糖溶液?

（2） 温度对酶活性有影响，说明酶具有什么性质？实验中如何观察？

为说明酶具有易变性。由于酶是蛋白质，所以易受温度影响，在高温下，酶变性而失去活性；低温下，酶的活性被抑制；适宜温度，酶的活性最强。实验中通过在冰水、40℃水浴和沸水浴中淀粉底物的消失情况进行观察，即冰水中，酶的活性被抑制，淀粉部分分解，遇碘（I 2）显紫红色；沸水浴中，酶变性而失活，淀粉不分解，遇I 2变兰色；40℃水浴，酶的活性最大，淀粉完全分解，遇碘不显色。

（3） P H 对淀粉酶活性有影响，其最适PH 是多少？实验中如何判断？

淀粉酶的最适PH 值是5。实验中通过PH 为3、5、7检验淀粉酶的最适pH 为5，即pH 值为3时，酶的活性丧失，淀粉不分解，遇碘（I 2）显蓝色；pH 值为5时，酶的活性最大，淀粉完全分解，遇碘不显色；PH 值为7时，酶的活性被部分抑制，部分淀粉已分解，遇碘显紫红色。

实验2 谷物蛋白含量的快速测定——双缩脲法（P46） 在研究植物营养、代谢作用及生长发育等生命活动中，往往需要测定样品中蛋白

质的含量。那么怎样测定呢？用碱性铜溶液。因为肽键在这种溶液中会产生紫色化合物，其颜色的深浅与肽键的数量成正比，也就是跟蛋白质含量成正比。颜色的深浅我们用一种仪器来测定，即用分光光度法测定，以此得出蛋白质的含量。碱性铜溶液又称为双缩脲试剂、肽键试剂，所以我们的实验方法就叫双缩脲法。 原理：在浓碱液中，蛋白质中的肽键（与双缩脲相似的肽键），能与Cu 2+结合，生成紫色和紫红色化合物，颜色的深浅与蛋白质含量成正比，故可用分光光度法测定其含量。

思考题

‖

O

(1)试验为什么要加无水乙醇（从蛋白质的结构上考虑）、KOH及碳酸铜？答：加无水乙醇的原因:一是做溶剂，使蛋白质溶解出来；二是破坏蛋白质的空间结构使其次级键断裂，让肽键暴露出来，利于反应进行。加KOH的原因：提供强碱条件。加碳酸铜的原因：提供反应所需的Cu2+。

{注意在实验中：加入碳酸铜0.5g、无水乙醇10ml、10%氢氧化钾10ml的顺序不能颠倒。

如果先加KOH，再加碳酸铜及无水乙醇、测定的蛋白质含量会降低，这是为什么？（从蛋白质的性质上考虑）——因为没有无水乙醇的作用，既不能使蛋白质溶解在其中，也没有破坏蛋白质的空间结构，没有使肽键暴露出来，不利于反应进行，所以测定的蛋白质含量会降低。}

（2）用本组的实验数据计算绝对偏差和相对偏差。（见教材P3的第3点，实验数据用4个人的，要求写在实验报告上）

（3）进行有效数字的计算。（见教材P3的第1点）

实验 3 谷物中可溶性糖的测定——蒽酮法（P71）什么是可溶性糖？溶于冷水的可溶性糖包括所有的单糖（如葡萄糖）和寡糖（如蔗糖），溶于热水的可溶性除所有的单糖（如葡萄糖）和寡糖外，还有部分多糖（如淀粉和果胶等）。

1、为什么测可溶性糖呢？有以下两方面的因素

1）糖在植物体内的功能有：

①作为能量物质为植物提供能量。如：呼吸作用中糖氧化分解后产生ATP，为

植物生长发育和吸收水分、矿物质提供能量。

②作为结构物质。如细胞壁的结构物质中就有糖等。

③作为原料物质。如呼吸作用中氧化分解的中间产物，为进一步合成脂肪、有

机酸、蛋白质提供最初的原料。以前没有大量的肉满足人们的需要，吃的饭就多，通过吃进去的淀粉水解为糖，糖在分解产生中间产物，在合成蛋白质。

故糖与植物体内各种代谢均有密切关系。

2）测糖的意义：

①研究植物的代谢。如果生长得快的植株，光合作用形成的糖都用于新器官、

新组织的生长发育，而不会在茎杆和叶片中积累。

②农产品品质分析的指标之一。可溶性糖是农产品品质指标和营养指标；如新

米中可溶性糖的含量高时，吃起来甜；陈米中含量少，吃起来不甜。

2．原理：糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内（10-100μg），颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量分析。由于糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm，所以在620nm下进行比色，通过回归方程求得糖的含量。

注意事项:

1.将侵提液过滤在烧杯中时，如果烧杯不干燥，先过滤出来的不要，用来润洗烧

杯和移液管。

2.蒽酮—硫酸试剂中含有的是浓H2SO4，大家一定要小心，不要乱移试剂，摇动

时勿将硫酸溅出来，溅到自己或其他同学身上。

思考题

（1）植物组织中的可溶性糖包括哪些？溶于冷水的有哪些？

植物组织中的可溶性糖包括所有的单糖、寡糖和部分溶于热水的多糖（淀粉和果胶）；溶于冷水的有所有的单糖和寡糖

（2） 总结分光光度法测定可溶性糖的一般操作程序及注意事项。

实验4 氨基酸的薄层层析——薄板层析

薄层层析亦称薄板层析，是近年来发展起来的一种新型的层析法。因其具有快速、简易、灵敏度高等许多明显的优点，所以、已经广泛应用于有机化学、生物学、药物化学等各个领域。

原理：根据吸附层析和分配层析两原理将物质分开的。简单的说：根据硅胶G 对各种氨基酸的吸附能力不同，以及各种氨基酸在水（静相，与硅胶G 结合在一起）和有机溶剂（动相，展开剂）中的分配系数不同而达到分离不同氨基酸的目的。

（实验中：硅胶加入水后，通过碾磨，水把硅胶G 粘连在一起附着在玻璃板上，形成一薄层有极性的多孔固体，在有机溶剂（即展开剂）的推动下，由于不同氨基酸的极性不同，通过硅胶孔隙的速度也不同，而把不同的氨基酸分开。此实验中，丝氨酸是极性氨基酸，被硅胶吸附后跑得最慢，在薄板的最下面；缬氨酸的极性比亮氨酸大，所以缬氨酸在薄板的中间，亮氨酸在最上边）

原点到溶剂前沿距离到层析中心距离

样品原点＝比移值值)()(f R

思考题

（1） 薄层层析基本原理是什么？它与纸层析有何不同？

薄层层析则是根据吸附层析和分配层析两原理将物质分开的；而纸层析主要是根据分配层析的原理进行的。

（2） R f 值的意义是什么？

（3） 氨基酸的薄层层析中，固定相和流动相分别是什么？固定相是水和硅胶G ，流动相是有机溶剂

实验5 PAGE （聚丙烯酰胺）凝胶盘状电泳分离同

2015高级生物化学及实验技术试题答案

高级动物生化试题 问答题： 1. 简述非编码RNA（non-coding RNA）的种类、结构特点及其主要功能。 非编码RNA的种类结构和功能 1tRNA转运RNA（transfer RNA，tRNA） 结构特征之一是含有较多的修饰成分，核酸中大部分修饰成分是在tRNA中发现的。修饰成分在tRNA分子中的分布是有规律的，但其功能不清楚。5’末端具有G（大部分）或C。3’末端都以ACC的顺序终结。有一个富有鸟嘌呤的环。有一个反密码子环，在这一环的顶端有三个暴露的碱基，称为反密码子（anticodon）.反密码子可以与mRNA链上互补的密码子配对。有一个胸腺嘧啶环。tRNA具有三叶草型二级结构以及“L”型三级结构，tRNA 的不同种类及数量可对蛋白质合成效率进行调节。tRNA负责特异性读取mRNA中包含的遗传信息，并将信息转化成相应氨基酸后连接到多肽链中。 tRNA为每个密码子翻译成氨基酸提供了结合体，同时还准确地将所需氨基酸运送到核糖体上。鉴于tRNA在蛋白质合成中的关键作用，又把tRNA称作第二遗传密码。tRNA还具有其他一些特异功能，例如，在没有核糖体或其他核酸分子参与下，携带氨基酸转移至专一的受体分子，以合成细胞膜或细胞壁组分；作为反转录酶引物参与DNA合成；作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。 2rRNA核糖体RNA（ribosomal RNA, rRNA） 核糖体RNA是细胞中最为丰富的RNA，在活跃分裂的细菌细胞中占80%以上。

他们是核糖体的组分，并直接参与核糖体中蛋白质的合成。核糖体是rRNA 提供了一个核糖体内部的“脚手架”，蛋白质可附着在上面。这种解释很直接很形象，但是低估了rRNA在蛋白质合成中的主动作用。较后续的研究表明，rRNA并非仅仅起到物理支架作用，多种多样的rRNA可起到识别、选择tRNA以及催化肽键形成等多种主动作用。例如：核糖体的功能就是,按照mRNA的指令将氨基酸合成多肽链。而这主要依靠核糖体识别tRNA 并催化肽键形成而实现。可以说核糖体是一个大的核酶( ribozyme)。而核糖体的催化功能主要是由rRNA来完成的,蛋白质并没有直接参与。 3 tmRNA tmRNA主要包括12个螺旋结构和4个“假结”结构，同时还包括一 个可译框架序列的单链RNA结构。tmRNA中H1由5’端和3’端两个末端形成，与tRNA的氨基酸受体臂相似。H1和H2的5’部分之间有一个由10-13nt 形成的环，类似tRNA中的二氢尿嘧啶环，称为“D”环。H3和H4，H6和H7，H8和H9，H10和H11之间分别形成Pk1，pK2，pK3，pK4。H4和H5之间则由一段包含编码标记肽ORF的单链RNA连接。H12由5个碱基对和7nt 形成的环组成，类似tRNA中的TΨC臂和TΨC环，称为“T”环。tmRNA 结构按照功能进行划分可分为tRNA类似域（TLD）和mRNA类似域（MLD），TLD主要包括H1,H2,H12,“D”环和“T”环，MDL则包括ORF和H5，这两部分分别具有类似tRNA和mRNA的功能。tmRNA是一类普遍存在于各种细菌及细胞器（如叶绿体，线粒体）中的稳定小分子RNA。它具有mRNA分子和tRNA分子的双重功能，它在一种特殊的翻译模式——反式翻译模式中发挥重要作用。同时，它与基因的表达调控以及细胞周期的调控等生命过程密切相关，是细菌体内蛋白质合成中起“质量控制”的重要分子之一。识别翻译或读码有误的核糖体，也识别那些延迟停转的核糖体，介导这些有问

生化实验操作考核要点(新)

【实验操作考核要点】 一、目的要求 1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。 2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。 3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。 4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。 5．正确掌握溶液转移的操作。 6．正确操作使用分光光度计。 二、操作考核内容 按百分制计。 1．吸量管操作（20分）； 2．可调式微量移液器操作（20分）； 3．溶液混匀操作（视具体情况，采用合适的混匀方法）（15分）； 4．溶液转移操作（10分）； 5．分光光度计比色操作（25分）。 6．整体表现（10分）。 三、操作考核标准 （一）吸量管操作（20分，每项操作5分） 1．执管 要求右手拿吸量管，左手拿橡皮球，只能用食指而不能用拇指按压吸量管上口来调节吸取液量的刻度；吸液、排液整个操作过程吸量管应始终保持垂直。 2．坐姿 要求腰、背保持竖直，看刻度时眼睛保持平视。 3．吸取溶液 吸量管插入液面深度约0.5cm，不能一插到底，也不能插入过浅而吸进空气致使溶液进入橡皮球内；调控吸量管吸取液量的刻度时，吸量管尖应离开液面靠在容器内壁上。 4．排出液体

吸量管尖应靠上受纳容器内壁，让管内溶液自然流出。不能用橡皮球吹压，而且在流净后吸量管尖停靠受纳容器内壁至少3秒。 （二）可调式微量移液器操作（20分，每项操作5分） 1．设定容量值 转动加样器的调节旋钮，反时针方向转动旋钮，可提高设定取液量。顺时针方向转动旋钮，可降低设定取液量。在调整设定移液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意使取液器显示的数值不超过其可调范围。 2．吸液 （1）选择合适的吸头安放在取液套筒上，稍加扭转压紧吸嘴使之与套筒之间无空气间隙； （2）把按钮压至第一停点，垂直握持加样器,使吸头浸入液面下2~3毫米处,然后缓慢平稳地松开按钮，吸入液体，等一秒钟，然后将吸头提离液面，贴壁停留2-3秒，使管尖外侧的液滴滑落。 3．放液 （1）将吸头口贴到容器内壁底部并保持100°~40°倾斜； （2）平稳地把按钮压到第一停点，等一秒钟后再把按钮压到第二停点以排出剩余液体； （3）压住按钮，同时提起加样器，使吸头贴容器壁擦过，再松开按钮。按吸头弹射器除去吸头。 4．压放按钮时保持平稳；加样器不得倒转；吸头中有液体时不可将加样器平放。取液器吸嘴为一次性使用。实验完毕，将取液器读数调至最大量程值，竖立放于支架上。 （三）溶液的混匀（操作流程中下划实线的三处，每项操作5分，共15分）1．肝糖原的提取与鉴定操作中，肝匀浆上清液中加5ml 95%乙醇后的混匀最好用倾倒混匀，也可用滴管或吸量管吸、吹混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。 2．肝糖原定量测定中，肝组织消化液沸水浴后全部转入100 ml容量瓶，加水至刻线后的混匀应采用倒转混匀。 3．肝糖原定量测定中，加蒽酮溶液后的混匀，可将试管倾斜约45o再作旋转混匀。因蒽酮溶液（浓硫酸配制）比重大于样品水溶液很多，一加入便沉于管

基础生物化学实验.

生物化学实验 实验基本原理 1 有效数字计算（结合电子天平的应用等） 加减法： 进行数字加减时，最后结果所保留的小数点后的位数应与参与运算的各数中小数点后位数最少者相同，其尾数“四舍五入”。如：0.124+1.2345+12.34=13.6979，应取13.70。 乘除法： 进行数字乘除时，最后结果的有效数字应与参与运算的各数中有效数字位数最少者为准，而与小数点的位数无关，其尾数“四舍五入”。如：1.23×0.12=0.1476,应取0.15。 2 误差分析 误差为实验分析的测定值与真实值之间的差值。误差越小，测定值越准确，即准确度越高。误差可用绝对误差和相对误差表示。 绝对误差= 测定值- 真实值 相对误差= 绝对误差÷真实值×100% 一般用相对误差表示结果的准确度，但因真实值是并不知道的，因此实际工作中无法求出分析的准确度，只得用精确度来评价分析的结果。 3 偏差分析（结合“可溶性蛋白或赖氨酸实验”要求掌握） 精确度表示在相同条件下，进行多次实验的测定值相近的程度。一般用偏差来衡量分析结果的精确度。偏差也有绝对偏差和相对偏差两种表示方法。 绝对偏差= 单次测定值- 算术平均值（不计正负号） 相对偏差= 绝对偏差÷算术平均值×100%

例如：分析某一材料糖含量，共重复测定5次，其结果分别为：16.1%，15.8%，16.3%，16.2%，15.6%，用来表示精确度的偏差可计算如下： 分析结果算术平均值个别测定的绝对偏差（不计正负） 16.1% 0.1% 15.8% 0.2% 16.3% 16.0% 0.3% 16.2% 0.2% 15.6% 0.4% 平均绝对偏差=（0.1%+0.2%+0.3%+0.2%+0.4%）÷5 = 0.2% 平均相对偏差= 0.2÷16.0×100% = 1.25% 在实验中，有时只做两次平行测定，这时就应用下式表达结果的精确度： 两次分析结果的差值÷平均值×100% 4 实验结果的表述：实验结果可用列表法（“影响酶作用的因素”常用）和作图法（综合实验用）表示。 第1章分光光度技术 分光光度技术是光学（光谱）分析技术的一种，它是利用物质的特征吸收光谱来对不同物质进行定性和定量分析的一项技术。我们将重点介绍紫外光-可见光分光光度法。 一、紫外光-可见光分光光度法的基本原理 1、讨论的波长范围：200～400nm的紫外光区和400～760nm的可见光区。 人肉眼可见的光线称可见光，波长范围在400～760nm；

生物化学实验的答案

生物化学实验的答案 一、理论考试部分 1.醋酸纤维薄膜电泳时，点样的一端应靠近电极的哪一端？为什么？ 答：负极。因为血清中各种蛋白质在PH 为的环境中均带负电，根据同性相吸，异性相斥原理，点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。 2.用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照管的意义是什么？ 答：空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度，但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响。 3.简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳的原理？ 答：血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动，而各种蛋白质等电点不同，且在PH为时所带电荷不同，分子大小不等，形状各有差异，所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。 4.xxR f 值？影响R f 值的主要因素是什么？ 答：Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度有关， 5.什么是盐析？盐析会引起蛋白质变性吗？一般我们用什么试剂做盐析的实验？ 答：盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性。一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析。 6?简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理？ 答：还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而DNS被还原为棕红色的

3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5 硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光光度计测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5 硝基水杨酸的浓度，从而得出还原糖的浓度。 7.依据我们所做的实验，说明影响蛋白质沉淀的因素是什么？影响蛋白质变 性的因素是什么？沉 xx 变性有何联系？ 答：水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。这些因素包括溶液的酸碱度、盐溶液的浓度、温度、重金属离子以及有机溶剂等。变性蛋白质不一定沉淀，沉淀的蛋白质不一定变性。 8.什么是碘值？脂肪的不饱和程度越大，碘值越大吗？在测定碘值的实验中，氯仿的作用是什么？ 答：每100g 脂肪所吸收的碘的克数，即脂肪的碘值。脂肪的不饱和度越大，碘值就越大。氯仿作为溶剂，去溶解脂肪。 9.简述薄层层析法分离糖类的原理？答:薄层层析的实质就是吸附层析，也就 是在铺有吸附剂的薄层上，经过反 复地被吸附剂吸附以及被扩展剂扩展的过程。而吸附剂对不同的物质的吸附力不同，从而使糖在薄层上的泳动速度不同达到分离的目的。 10.等电点的定义？蛋白质在等电点时有哪些特点？ 答：当溶液的PH为一定数值时，其中的蛋白质正负电荷相等，即净电荷为 零，此时的PH值就是该蛋白质等电点。蛋白质在等电点时的溶解度最小。 11.在蛋白质显色实验的黄色反应中，反应原理是什么？实验结果为什么会出现深浅不一的黄色？

大学生生物化学实验技能大赛初赛试题及答案

大学生生物化学实验技能大赛初赛试题及答案 一、选择题 1、下列实验仪器中，常用来取用块状固体药品的仪器是（）。 A. 药匙 B. 试管夹 C. 镊子 D. 坩埚钳 2、托盘天平调零后，在左盘衬纸上置氧化铜粉末，右盘衬纸上置1个5g砝码，游码标尺示数如下，此时天平平衡。则被称量的氧化铜质量为（）。 A. 8.3 g B. 7.7 g C. 3.3 g D. 2.7 g 3、用减量法从称量瓶中准确称取0.4000 g分析纯的NaOH固体，溶解后稀释到100.0 mL，所得NaOH溶液的浓度为（）。 A. 小于0.1000 mol/L B. 等于0.1000 mol/L C. 大于0.1000 mol/L D. 三种情况都有可能 4、已知邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）的摩尔质量为204.2 g/mol，用作为基准物质标定0.1 mol/L NaOH溶液时，如果要消耗NaOH溶液为25 mL左右，每份应称取邻苯二甲酸氢钾（）g左右。 A. 0.1 B. 0.2 C. 0.25 D. 0.5 5、NaHCO3纯度的技术指标为≥99.0%，下列测定结果哪个不符合标准要求？（）。 A. 99.05% B. 99.01% C. 98.94% D. 98.95% 6、精密称取马来酸氯苯那敏对照品12 mg，应选取（）的天平。 A. 千分之一 B. 万分之一 C. 十万分之一 D. 百万分之一 7、实验室标定KMnO4溶液，常用的基准物质是（）。 A. Na2CO3 B. Na2S2O3 C. Na2C2O4 D. K2Cr2O7 8、标定氢氧化钠常用的基准物质是（）。 A. EDTA B. K2Cr2O7 C. 草酸 D. 邻苯二甲酸氢钾 9、下列物质可以作为基准物质的是（）。 A. KMnO4 B. Na2B4O7·7H2O C. NaOH D. Na2S2O3 10、下列物质中，可以用直接法配制标准溶液的是（）。 A. 固体NaOH B. 浓HCl C. 固体K2Cr2O7 D. 固体Na2S2O3

基础生化实验-蛋白质纯化

蛋白质纯化

一、目的: 利用金属亲和性管柱(metal affinity column)来大量纯化带有affinity tag的基因重组蛋白。 二、原理: 由于六个Histidine 所组成的His Tag (metal affinity tag)可与Ni2+ bind，所以利用基因重组技术在表现的蛋白质加上His Tag，再以金属亲和性管柱 (Ni-NTA) (此His- tag序列可与带二价正电的阳离子相螯和)及liquid chromatography来大量纯化蛋白质。 三、试剂与器材: 1.loading(binding) buffer (10mM imidazole,0.3M NaCl,50Mm Tris-HCl Ph7) ?细菌回溶成为蛋白质的载体以保持活性 2.wash buffer (20mM imidazole,0.3M NaCl,50Mm Tris-HCl,Ph7) 3.elution buffer (20mM EDTA,0.3M NaCl,50Mm Tris-HCl,Ph7) 上课补充: ?蛋白质很脆弱，需要在特殊的buffer里。

四、仪器与设备: FPLC(速液相色谱仪) 五、步骤: 1.将管柱架在铁架上，把亲和性胶体悬浮装填于管柱内。 2.以2~3倍CV loading buffer清洗管柱后，注入蛋白质样本。 3.以wash buffer梳洗，2到3倍column体积。 4.用wash buffer和elution buffer进行线性梳洗，并收集流出液体，以 FPLC UV monitor上的OD280数据读取样品流出与否，并观察冲离液之 曲 线图。 上课补充: ?胞内型分泌需要用超音波破菌，因为会放热所以要放在冰中使用。 ?线性梳洗为加入elution buffer会有颜色变化会把镍离子跟imidazole冲 洗掉，剩下胶体溶液。 ?其中imidazole和Histidine类似也会和镍离子结合所以会竞争，可拿来 洗涤蛋白质。(可详见问题一及补充资料2) 六、问题:

生物化学实验技能大赛活动方案

生物化学实验技能大赛活动方案 一、活动目的 通过举办生物化学实验技能大赛，使广大学生树立崇尚科学，勇于创新，开拓进取，敢于实践的精神风貌，增强专业素养。在深化教育改革，推进素质教育的要求下，不断提高学生实验设计及实验操作的能力，从而提高广大学生学习《生物化学》这门课程的兴趣，推动生物化学实践教学的改革；增加同学们的合作交流，促进相互间的学习与沟通，拓展知识的应用范围，培养创新意识及团队精神，提高综合实验设计、分析和生物化学实验操作技能，提高大学生动手能力和实践技能，促进我校良好学风的建设，营造浓厚的学习、学术氛围，特此举行此次生物化学实验技能大赛。矚慫润厲钐瘗睞枥庑赖賃軔。 二、组织机构 主办单位：韶关学院教务处 承办单位：英东生命科学学院团委 三、参赛对象 韶关学院全日制在校学生均可参加，自行组队(可跨专业)，团队人数1至4人。 四、比赛流程： 1.初赛 各参赛队伍需上交报名表（附件1）并按照作品格式要求（附件2）独立完成实验设计，于2016年11月9日-11月20日将实验设计和报名表（放在同一文件夹压缩打包命名为：学院+实验课题+队长姓名+队长短号）发送至邮箱（）参加初赛，纸质版需上交到英东楼B309生科院辅导员办公室处。评委老师对实验设计进行评定后，筛选出约20支参赛队伍进入复赛。 2.复赛 2016年11月26日09:00—17:00为预实验阶段，实验室开放，各参赛队伍可在当天熟悉比赛场地或对所需材料、仪器、试剂等作实验前的预处理。 2016年11月27日09:00—17:00为正式复赛阶段，进入实验室按照实验设计进行操作，并当场完成实验报告，复赛分数根据实验过程及实验报告进行评定。 复赛评选出8支队伍进入决赛，决赛名单当场公布。 复赛地点：英东实验室 决赛 2016年12月3日19:00—22:30为决赛阶段，进行实验报告答辩，决赛分为四个环节：报告陈述、现场答辩、观众提问、专家点评。获奖的实验报告将在英东大厅展示15天。 决赛地点：图书馆学术报告厅 五、参赛要求 1.作品内容 （1）物质提取类 如从柑橘皮中提取果胶；从果蔬中提取类胡萝卜素；从芦荟中提取碳水化合物；从鸡蛋清中提取某蛋白；从三七中提取三七皂等。 （2）物质检验类 如检验市面上某几种品牌牛奶是否掺假；检验市面上某几种食品是否含有防腐剂；检验某品牌的食用植物油是否含胆固醇等。 （3）物质含量测定类 如洗衣粉磷含量分析；测定某品牌奶粉的蛋白质含量是否达标；比较几种饲料中某物质的含量等。

生物化学实验技能大赛实验设计书

邻二氮菲法测定蔬菜中铁的含量 摘要 用邻二氮菲分光光度法直接测定蔬菜中的铁含量，方法简便、快速、准确，为指导人们合理食用蔬菜进行补铁及进一步开发蔬菜产品提供了可靠的理论依据[1 2]。 关键词蔬菜铁含量邻二氮菲 1.前言 铁作为必需的微量金属元素，对于人体的健康十分重要。铁是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其它酶系统的主要组分，可协助氧的运输，还能促进脂肪的氧化。蔬菜是人们摄取微量铁的主要途径之一，缺铁可造成贫血并容易疲劳，而过多则会导致急性中毒。所以，蔬菜中铁含量的测定具有重要的营养学意义，可为指导人们合理食用蔬菜进行补铁以防治缺铁性贫血，提供可靠的理论依据。 2.实验目的 综合运用所学知识，用仪器分析法测定金属元素含量；练习灵活运用各种基本操作和查阅资料的能力。 3.实验原理 蔬菜中金属元素常与有机物结合成难溶或难于解离的物质，常采用有机物破坏法是被测的金属元素以氧化物或无机盐的形式残留下来，以便测定。本实验采用有机物破坏法（干法），即在高温下加入氧化剂，使有机物质分解。根据不同浓度的物质具有不同的吸光度，采用分光光度法来测定蔬菜中的铁含量。在pH值4～6的条件下，以盐酸羟胺将三价铁还原为二价铁，二价铁再与邻二氮菲（phen）生成桔红色络合物［3］，用分光光度计在510nm测定蔬菜中铁的含量。 盐酸羟胺还原三价铁的反应如下： 2 Fe3++2NH2OH·HCl→2 Fe2++N2+2H2O+4H++2Cl- 邻二氮菲与二价铁的反应式如下： Fe2+ + 3(phen) =Fe(phen)3 4.实验器材 722型分光光度计（1台），电子天平（1台）蒸发皿（4个），100mL容量瓶(4个)，

食品生物化学实验

食品生物化学实验要求 1.学生做实验前必须写好实验预习报告，做好实验预习，无实验预习报告者不 许进入实验室。每大组实验人数28人，4人一小组。 2.实验试剂的配制，现场由教师指导，学生操作完成。学生在试剂配制过程中， 掌握试剂配置的基本步骤，基本方法和注意事项。 3.实验室所有设备都必须按说明书使用，器皿要小心使用，按规范要求操作， 如有损坏，照价赔偿。 4.卫生要求：每次试验完毕小组成员务必将本试验台及地面收拾整洁，器皿摆 放整齐有序，如哪组成员发现没有搞好自己组的环境卫生，这次试验的所有组员的实验报告都会扣分。 一、10食品科学食品生物化学实验项目表 1. 淀粉的显色、水解和老化（4学时） 2. 蛋白质的功能性质（4学时） 3. 牛奶中酪蛋白等电点测定和氨基酸的分离鉴定（4学时） 4. 或果胶的提取（4学时） 5. 酶的性质实验（4学时） 实验总课时：16学时

二、食品生物化学实验指导书 实验一淀粉的显色、水解和老化 一、实验目的和要求 1、了解淀粉的性质及淀粉水解的原理和方法。 2、掌握淀粉水解的条件和产物的实验方法。 3、淀粉的老化原理和方法 二、实验原理 1、淀粉与碘的反应直链淀粉遇碘呈蓝色，支链淀粉遇碘呈紫红色，糊精遇碘呈蓝紫、紫、橙等颜色。这些显色反应的灵敏度很高，可以用作鉴别淀粉的定量和定性的方法，也可以用它来分析碘的含量。纺织工业上用它来衡量布匹退浆的完全度，它还可以用来测定水果果实（如苹果等）的淀粉含量。 近年来用先进的分析技术（如X射线、红外光谱等）研究碘跟淀粉生成的蓝色物，证明碘和淀粉的显色除吸附原因外，主要是由于生成包合物的缘故。直链淀粉是由α-葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体，每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外。碘分子跟这些羟基作用，使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。碘跟淀粉的这种作用叫做包合作用，生成物叫做包合物。 在淀粉跟碘生成的包合物中，每个碘分子跟6个葡萄糖单元配合，淀粉链以直径0.13 pm绕成螺旋状，碘分子处在螺旋的轴心部位。 淀粉跟碘生成的包合物的颜色，跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。在一定的聚合度或相对分子质量范围内，随聚合度或相对分子质量的增加，包合物的颜色的变化由无色、橙色、淡红、紫色到蓝色。例如，直链淀粉的聚合度是200～980或相对分子质量范围是32 000～160 000时，包合物的颜色是蓝色。分支很多的支链淀粉，在支链上的直链平均聚合度20～28，这样形成的包合物是紫色的。糊精的聚合度更低，显棕红色、红色、淡红色等。下表就是淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色。 表 2-1 淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色 淀粉跟碘生成的包合物在pH=4时最稳定，所以它的显色反应在微酸性溶液里最明显。 2、淀粉的水解淀粉是一种重要的多糖，是一种相对分子量很大的天然高分子化合物。虽属糖类，但本身没有甜味，是一种白色粉末，不溶于冷水。在热水里淀粉颗粒会膨胀，有一部分淀粉溶解在水里，另一部分悬浮在水里，形成胶状淀粉糊。淀粉进入人体后，一部分淀粉收唾液所和淀粉酶的催化作用，发生水解反应，生成麦芽糖；余下的淀粉在小肠里胰脏分泌出的淀粉酶的作用下，继续进行水解，生成麦芽糖。麦芽糖在肠液中麦芽糖酶的催化下，水解为人体可吸收的葡萄糖，供人体组织的营养需要。反应过程为：（C6H12O5）m→(C6H10O5)n→C12H22O11→C6H12O6 淀粉糊精麦芽糖葡萄糖

大学生生物化学实验技能大竞赛

生命科学学院 关于举办首届大学生生物化学实验技能竞赛的通知 一、竞赛目的 激励大学生自主学习，培养大学生创新意识和团队精神，增强综合实验设计能力，提高生化实验操作技能，营造浓厚学术创新氛围，促进良好学风的建设，选拔优秀项目和选手参加山东省第五届生物化学实验技能大赛。 二、竞赛组委会 组长：王宝山、魏成武 成员：戴美学、杨桂文、谭效忠、苗明升、张鸿雁、杜希华、王珂、原永洁三、参赛对象 生命科学学院在校本科生，不限年级和专业。参赛队伍2-3人为一队，每队一名指导教师。每个参赛队限提交一份实验设计书，每个指导教师指导的项目数一般不超过6项。 四、参赛作品内容及要求 （一）作品内容 1、物质提取类 如从柑橘皮中提取果胶；从果蔬中提取类胡萝卜素；从芦荟中提取碳水化合物；从鸡蛋清中提取某蛋白；从三七中提取三七皂等。 2、物质检验类 如检验市面上某几种品牌牛奶是否掺假；检验市面上某几种食品是否含有防腐剂；检验某品牌的食用植物油是否含胆固醇等。 3、物质含量测定类

如洗衣粉磷含量的分析；测定某品牌奶粉的蛋白质含量是否达标；比较几种饲料中某物质的含量等。 4、探索物质在某一方面的应用类 如探索蛋白酶对草菇保鲜的影响机理；探索木瓜蛋白酶在食物色氨酸测定上的应用等。 5、比较不同品牌物质的营养价值 如对不同品牌螺旋藻片营养成分测定和营养价值的评价测定；对不同品牌饲料中营养价值比较等。 6、其他参赛者感兴趣的方面 （二）作品要求 1、作品要求在保证安全性的前提下，具有一定的科学性、实用性、创造性，具有较强的实际意义，以创新及紧密联系生产生活实际为佳，同时在实验室内的可操作性强。 2、每组参赛队严格按照实验设计书设计格式要求撰写实验设计书，并提交至大赛邮箱，一经提交不得修改，违者则取消决赛资格。 3、参赛作品原则上不能与山东省大学生生物化学实验技能大赛前四届作品相同（前几届作品请参考大赛相关网站：http://202.194.131.160/G2S/ Template/View.aspx?action=view&courseType=0&courseId=282），亦不可抄袭外省比赛作品，否则取消参赛资格。 4、实验设计书设计的项目最好进行过预实验（可利用寒假在指导教师指导下利用实验室条件进行预实验），并在“生科院首届大学生生物化学实验技能竞赛报名表”中如实注明是否做过预实验。 5、实验设计内容应能在8小时内完成，便于决赛时在限定的时间内进行实验操作。

生物化学实验

本科生实验报告 实验课程 学院名称 专业名称 学生姓名 学生学号 指导教师 实验地点 实验成绩 二〇一五年月二〇一五年月

实验一氨基酸的分离鉴定----纸层析法一、实验目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及实验方法。 二、实验原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。纸层析法是根据不同氨基酸在两相间的分配比不同而进行分离的：在固定相分配的比例大的氨基酸，随流动相移动的速度慢，而在流动相分配的比例大的则随流动相流动的速度快。层析溶剂由有机溶剂和谁组成。 物质被分离后用比移值（Rf值）来衡量各组分的分离情况，如图所示。 根据图得到： Rf=a\b 其中：a为原点到层析点中心的距离（cm），b为原点到溶剂前沿的距离（cm）。 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值最大等于1，即该组分随溶剂一起上升，Rf值最小等于0，即该组分基本上留在原点不动。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。 三、实验药品、实验器材 1.扩展剂：将20mL正丁醇和5mL冰醋酸放入分液漏斗中，与15mL水混合，

充分震荡，静置数分层后，放出下层水相。取分液漏斗内的扩展剂约5mL 置于小烧杯中作为平衡溶剂，其余的倒入杯中备用。 2.氨基酸溶液：赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们 的混合液（各组分浓度均为0.5%），各5mL。 3.显色剂：0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。 4.层析缸：毛细管，喷雾剂，培养皿，层析滤纸，分液漏斗，针，线。 四、实验方法 1.将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中，使展开剂达到饱和。 2.取层析滤纸（长22cm，宽14cm）一张。在纸的一端距边缘2cm处用铅 笔画一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号。 3.点样：用毛细管将氨基酸样品分别点在这6个位置上，吹干后再点一次。 注意没点再纸上扩散的直径最大不超过3mm。 4.扩展：用线将滤纸沿长边缝成筒状，纸的两边不能接触。将盛有约20mL 扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中。 点样的一端在下，滤纸下端侵入扩展剂0.5cm为宜，并且注意扩展剂的 页面需低于点样线1cm。待溶剂上升15~20cm时即取出滤纸，用铅笔描 出溶剂前沿界限，自然干燥或用热风吹干。 5.显色：层析滤纸用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液；然后置烘箱 中烘烤5min（100）或用热风吹干即可先出各层析斑点。 6.计算各种氨基酸的Rf值。 7.注意事项：实验过程应带带胶手套，不可用手直接接触滤纸，以防止皮 肤分泌物的污染。 五、实验记录与数据处理

生化实验五大技术

生化实验五大技术 一.分光光度技术 1.定义:根据物质对不同孩长的光线具有选择性吸收,每种物质都具有其特异的吸收光语。而建立起来的一种定t 、定性分析的技术。 2.基本原理:（图1-1光吸收示意） 透光度T=It/lo 吸光度A=lg(lo/ I1) 朗伯-比尔(lambert-Beeri)定律:A=KLc K 为吸光率，L 为溶液厚度(em), c 为溶液浓度 (mol/L)] 摩尔吸光系数日ε:1摩尔浓度的溶液在厚度为 I.cm 的吸光度。 c=A/ε 3. 定量分析: (1)标准曲线(工作曲线)法 (2) 对比法元-KCLCx (3)计算法: e=A/ε (4)差示分析法(适用于浓度过浓成过稀) (5) 多组分湖合物测定 4.技术分类 分子吸收法&原子吸收法:

可见光(400-760 nm) &紫外光(200~ 40m) &红外光(大于760 nm)分光光度法； 5.应用方向 有机物成分分析&结构分析红外分光光度法测定人体内的微量元囊原子吸收分光光度法 二电脉技术 1.定义:带电荷的供试品在情性支持介质中，在电场的作用下，向其对应的电 极方向按各自的速度进行脉动。使组分分离成族窄的区带，用透宜的检洲方法记录其电泳区带图请或计算其百分含量的方法。 2.基本原理: 球形质点的迁移率与所带电成正比，与其半径及介质粘度成反比。v=Q/6xrη 3.影响电泳迁移率的因素: 电场强度电场强度大，带电质点的迁移率加速 溶液的PH值: 溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移幸越大 溶液的离子强度:电泳液中的高子浓度增加时会引起质点迁移率的降低 电渗:在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗 4:技术分类: 自由电泳(无支持体) 区带电泳(有支持体):法纸电泳(常压及高压)，博层电泳(薄膜及薄板).凝波电泳(琼脂，琼脂糖、淀粉胶、柔丙烁配胶凝胶)等 5. 电泳分析常用方法及其特点: 小分子物质滤纸、纤维素、硅胶薄膜电泳复杂大分子物质凝胶电泳 ⑴醋酸纤维素薄膜电泳 ①这种薄顺对蛋白质样品吸阴性小，消除纸电沫中出现的“拖尾”现象 ②分离理应快，电泳时间短 ③样品用最少: ④经过冰最酸乙醉溶液或其它看明液处理后可使膜透明化有利丁对电泳图潜的光吸收措测店和爱的长期保 ------别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测(胰岛素、游菌酶、胎儿甲种球

2016年生物化学试验技能大赛初赛题库

枣庄学院2016年大学生生物化学实验技能大赛 初赛试题及答案 一、选择题 1、下列实验仪器中，常用来取用块状固体药品的仪器是（）。 A. 药匙 B. 试管夹 C. 镊子 D. 坩埚钳 2、托盘天平调零后，在左盘衬纸上置氧化铜粉末，右盘衬纸上置1个5g砝码，游码标尺示数如下，此时天平平衡。则被称量的氧化铜质量为（）。 A. 8.3 g B. 7.7 g C. 3.3 g D. 2.7 g 3、用减量法从称量瓶中准确称取0.4000 g分析纯的NaOH固体，溶解后稀释到100.0 mL，所得NaOH溶液的浓度为（）。 A. 小于0.1000 mol/L B. 等于0.1000 mol/L C. 大于0.1000 mol/L D. 三种情况都有可能 4、已知邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）的摩尔质量为204.2 g/mol，用作为基准物质标定0.1 mol/L NaOH溶液时，如果要消耗NaOH溶液为25 mL左右，每份应称取邻苯二甲酸氢钾（）g左右。 A. 0.1 B. 0.2 C. 0.25 D. 0.5 5、NaHCO3纯度的技术指标为≥99.0%，下列测定结果哪个不符合标准要求？（）。 A. 99.05% B. 99.01% C. 98.94% D. 98.95% 6、精密称取马来酸氯苯那敏对照品12 mg，应选取（）的天平。 A. 千分之一 B. 万分之一 C. 十万分之一 D. 百万分之一 7、实验室标定KMnO4溶液，常用的基准物质是（）。 A. Na2CO3 B. Na2S2O3 C. Na2C2O4 D. K2Cr2O7 8、标定氢氧化钠常用的基准物质是（）。 A. EDTA B. K2Cr2O7 C. 草酸 D. 邻苯二甲酸氢钾 9、下列物质可以作为基准物质的是（）。 A. KMnO4 B. Na2B4O7·7H2O C. NaOH D. Na2S2O3

生物化学实验内容

《生物化学》实验教学大纲 课程类别：专业基础 适用专业：本科临床学专业 课程总学时：实验学时：32 实验指导书：生物化学与分子生物学实验教程 开课实验室名称：生化实验室 一、目的和任务 生物化学是一门在分子水平上研究生命现象的学科，也是一门重要的实验性较强的基础医学课程．随着医学的发展，该学科已渗透到医学的各个领域。生物化学实验技术已被广泛地应用于生命科学各个领域和医学实验的研究工作。生物化学实验是生物化学教学的重要组成部分，它与理论教学既有联系，又是相对独立的组成部分，有其自身的规律和系统。我们根据国家教委对医学生物化学课程基本技能的要求，开设了大分子物质的常用定量分析法、酶活性分析、电泳法、层析技术、离心技术及临床生化，使学生对生物化学实验有一个比较系统和完整的概念，培养学生的基本技能和科学思维的形成，提高学生的动手能力。 二、基本要求 1.通过实验过程中的操作和观察来验证和巩固理论知识，加深学生对理论课内容的理解。 2.通过对实验现象的观察，逐步培养学生学会观察，比较，分析和综合各种现象的科学方法，培养学生独立思考和独立操作的能力。 3.通过对各类实验的操作和总结，培养学生严谨的科学态度。 4.进行本学科的基本技能的训练，使学生能够熟练各种基本实验方法和实验技术的操作。 三、考试方法及成绩评定方法 四、说明 实验教材及参考书： 1.揭克敏主编：生物化学与分子生物学实验教程（第2版）。科学出版社，2010 参考资料： 1..袁道强主编：生物化学实验（第1版）。化学工业出版社，2011 五、实验项目数据表

2）要求：0：必修1选修 3）类型：0：演示1：验证2：综合3：设计 4）每组人数：指教学实验项目中一次实验在每套仪器设备上完成实验项目的人数。 六、各实验项目教学大纲 实验一蛋白质的沉淀反应 【预习要求】 预习四个小实验的具体实验原理和操作内容。 【实验目的】 1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识； 2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 【实验内容】 （一）蛋白质的盐折 1. 原理 大量中性盐类如硫酸铵((NH4)2SO4)、硫酸钠(Na2SO4)和氯化钠(NaCl)等加入到蛋白质溶液后，可引起蛋白质颗粒因失去水化膜和电荷而沉淀。各种蛋白质分子的颗粒大小和电荷数量不同，用不同浓度中性盐可使各种蛋白质分段沉淀。例如血清中的球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中沉淀。当硫酸铵浓度达到饱和时血清中的白蛋白使沉淀下来。盐析沉淀蛋白质时能保持蛋白质不变性，加水稀释降低盐浓度，能使沉淀的蛋白质重新溶解，并保持其生物活性。因此，利用盐析法可达到分离提纯蛋白质的目的。 2. 操作步骤 ①取小试管1支、加入5％鸡蛋清溶液20滴，饱和硫酸铵溶液20滴，充分摇匀后静置5min，记录结果。

生物化学实验内容

《生物化学实验》容 课程类型：制药工程专业必修 实验总学时：32课时 开设实验项目数：8个 适用对象：2017制药工程1、2班 实验教师：段志芳 一、实验目标及基本要求 生物化学实验是一门独立的实验课程，培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事的科学态度。 二、实验容

包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成情况和完成质量（占50%），每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。 四、要求 （1）实验过程中同组人可以配合进行； （2）实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据； （3）实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做； （4）对实验结果进行简单的分析. 实验一植物组织中可溶性总糖的提取 一、实验目的 1. 掌握可溶性总糖的概念和性质。 2. 掌握可溶性总糖提取的基本原理。 3．掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。 二、实验原理 可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性

糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，可以求出总糖含量。 三、实验用品 1.仪器设备：电子天平（精确到0.0g，配称量纸若干）；可控温电加热板或电 炉或电热套或水浴锅均可。可共用。 2.玻璃器皿：研钵1套；100mL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻璃棒1根； 100mL烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套（铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个）；不锈钢刮勺1个；剪刀1把。此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。 3.药品试剂：新鲜植物叶片；蒸馏水。 4.其他：9cm滤纸若干（与玻璃漏斗配套）；纸巾若干；标签纸若干。每个洗 手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。 四、实验操作 取新鲜植物叶片，洗净表面污物，用滤纸吸去表面水分。称取0.5g，剪碎，加入5～10ml蒸馏水，在研钵中磨成均浆，转入锥形瓶中，用蒸馏水少量多次冲洗研钵，洗出液也转入锥形瓶中，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，提取液冷却后过滤到100ml容量瓶中，同法残渣再提取2~3次，将提取液合并至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。贴好标签，保存至冰箱中，用于实验二。 五、实验结果与讨论 1、观察产品颜色是否与理论相符，若不符合，分析原因。 2、结合实验二结果计算含量 六、实验注意事项 （1）若有干扰，可滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质，若色素较多可脱脂。 （2）加热时应小心，避免灼伤皮肤。 七、思考题 1、可溶性糖在植物物质代中的作用。

生物化学实验思考题

生物化学实验思考题

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生物化学实验考试试题

细胞破碎 1 常用的细胞破碎的方法有哪些？ 机械法：研磨，高速捣碎机;物理法:反复冻溶,超声波破碎，压榨法；化学与生物化学法:自溶，溶胀法，酶解法，有机溶剂处理。 2 有机溶剂法破碎细胞原理，常用的有机溶剂有哪些? 有机溶剂溶解细胞壁并使之失稳。比如笨、甲苯、氯仿、二甲苯及高级醇等 ３酶法破碎细胞原理:酶分解作用 4反复冻融法破碎细胞原理：通过反复将细胞放在低温下突然冷却和室温下融化达到破壁作用 层析技术 1.什么叫层析技术？ 层析技术是利用混合物中各组分理化性质的差别（分子亲和力、吸附力、分子的形状和大小、分配系数等),使各组分以不同程度分布在两个相，其中一个是固定相，另一个是流动相,从而使各组分以不同速度移动而使其分离的方法。 2、按层析过程的机理，层析法分哪几类？按操作形式不同又分哪三类? 根据分离的原理不同分类,层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。 按操作形式不同又分层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。 3.指出常用层析技术的应用范围。 凝胶层析法:⑴脱盐;⑵用于分离提纯；⑶测定高分子物质的分子量;⑷高分子溶液的浓缩离子交换层析法：主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子 高效液相层析法:⑴液-固吸附层析；⑵液-液分配层析；⑶离子交换层析 ４.ＳeｐhadｅxG-１0０凝胶柱层析分离蛋白质原理是什么? 大小不同的分子经过的路线长短不同而达到分离作用。 ５．用SeｐhａdeｘG2５脱盐时蛋白质和盐哪个先出峰?蛋白质 6．相对分子量为8万和1０万的蛋白质能否在SephadｅxＧ－７5柱中分开？为什么？不能,分子量差距太小。 7．将分子量分别为a(9０000）、b(45０0０）、c（１10 000)的三种蛋白质混合溶液进行凝胶过滤层析,正常情况下,将它们按被洗脱下来的先后排序。ｃ、ａ、ｂ 8.离子交换层析与凝胶过滤哪种分辨率高?离子交换层析较高。 9.如果样品中只有Ala和His(Ala pI=6．0，Ｈis pＩ＝7.6)，在ｐH4条件下，这两种氨基酸那一种与CM(阳离子交换剂)结合的紧密?如果用pH4-7的洗脱液梯度洗脱，那种氨基酸先洗脱出来？Aｌa 10. 柱层析时湿装柱的注意事项有哪些？ 用水灌注、不能有气泡。 11.说说离子交换层析中洗脱液的选择原则

第五届 生物化学实验技能大赛实验报告

第五届生物化学实验技能大赛 实验报告 制备蝇蛹壳聚糖工艺改良 及其理化性质研究 Improved Technology of Extract Chitosan from the Pupa and Study the Physical Chemistry Character

制备蝇蛹壳聚糖工艺改良及其理化性质研究 郭诗静，金昂丹，梁剑云 华南农业大学 生命科学学院 （注：按姓名字母排序，不分先后） 摘要：利用蝇蛹作为实验原料,通过改良后的酸法脱灰分,碱法脱蛋白质和脂肪制成甲壳 素后,通过热浓碱法脱乙酰基处理提取壳聚糖。改良的工艺缩短了加工的时间，但是也保证了质量。提取过程中分别使用室温、加热、超声波三种不同的方法脱蛋白,脱色方法也一改以往用有机溶剂的方法，改用双氧水；干燥恒重法测定其水分,旋转黏度计测定其黏度,通过对成品进行这些理化性质的检测。实验得沸水的处理效果最好,超声细胞粉碎机对提取有一定点作用,双氧水的脱色效果不错,可以进行进一步研究和推广。 关键词：蝇蛹 甲壳素 壳聚糖 水分 黏度 脱乙酰度

目录 1 前言 (04) 1.1 甲壳素与壳聚糖及其研究状况 (04) 1.2 家蝇与提取工艺 (05) 1.3 超声波 (05) 2 可行性分析 (06) 3 实验目的 (06) 4 实验原理 (06) 5 实验设备 (07) 5.1 仪器 (07) 5.2 玻璃器具 (07) 6 实验材料及试剂 (07) 6.1 原材料 (07) 6.2 试剂 (08) 6.3 试剂的配制 (08) 6.4 材料的处理 (08) 7 本实验的制作流程 (11) 8 制作工艺比较 (15) 9 各种理化性质方法比较 (15) 9.1 用干燥恒重法测定其水分 (15) 9.2 用旋转黏度计测定其黏度 (16) 9.3 用酸碱滴定法测定游离氨基和脱乙酰度 (17) 10 结论 (18) 11 注意事项 (18) 12 优点 (18) 参考文献 (19) 英文摘要 (20) 附录 (21) 感想 (22)