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烟草组培苗实验步骤

烟草叶片的组织培养

一、实验原理与实验步骤

在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。

植物材料：烟草植株

药品：（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、1mol/L NaOH、1mol/L HCL 蒸馏水、70%酒精0.01%升汞

仪器：玻璃杯、玻璃棒、pH试纸(5.5-9.0)、1瓶无菌水、1个无菌烧杯、1包无菌滤纸、1个无菌白瓷板、培养瓶若干移液器、微波炉、灭菌器、超净工作台、酒精灯、解剖刀、镊子

二、实验方法与步骤

1、MS培养基母液的配制

注意：

1、大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2、微量元素母液的配制

按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签

3、铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。

烟草植物组织培养

烟草植物组织培养实验实验目的一学习和掌握植物组织培养技术，理解植物细胞的全能性。实验原理二年代初期发展起来的一项生物技术。由于其拥有占地世纪30植物组织培养是从20少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物、萘乙4-D4-二氯苯氧乙酸2，，质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2）细胞分裂素IBA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸NAA酸、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA））等。分裂期是，KT-30CPPU糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（6-（苄氨基嘌呤6-BA、6-指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。分化期是指在分裂期的末期，细胞内开始出现一系列形态和生理上的变化，从而使愈伤组织内产生不同形态和功能的细胞。这些细胞类型有薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、纤维细胞，等等。外植体的细胞经过起动、分裂和分化等一系列变化，形成了无序结构的愈伤组织。如果在原来的培养基上继续培养愈伤组织，会由于培养基中营养不足或有毒代谢物的积累，导致愈伤组织停止生长，甚至老化变黑、死亡。如果要让愈伤组织继续生长增殖，必须定期地（如2～4周）将它们分成小块，接种到新鲜的培养基上，这样愈伤组织就可以长期保持旺盛的生长。愈伤组织的形态发生方式经过起动、分裂和分化期产生的愈伤组织，其中虽然发生了细胞分化，但是并没有器官发生。只有满足某些条件，愈伤组织的细胞才会发生再分化，产生芽和根，进而发育成完整植株。愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式（器官发生型）和胚状体方式两种。不定芽方式是在某些条件下，愈伤组织中的分生细胞发生分化，形成不同的器官原基，再逐渐形成芽和根。胚状体方式是由愈伤组织细胞诱导分化出具有胚芽、胚根、胚轴的胚状结构，进而长成完整植株。这种由愈伤组织中的薄壁细胞不经过有性生殖过程，直接产生类似于胚的结构，叫做胚状体。在植物组织培养中，不定芽方式和胚状体方式是愈伤组织形态发生的两种最常见和最重要的方式。胚状体方式比不定芽方式有更多的优点，如胚状体产生的数量比不定芽多，胚状体可以制成人工种子，等等。培养基的主要指标为营养的组分，植物生长物质的浓度，特别是后者对外植体的分化1 / 5 矿质营养。矿质营养又叫无机营起着极其重要的作用。培养基的组织成分主要包括： 1. 、养，是指植物在生长发育的过程中所需要的各种化学元素，其中包括大量的元素如N、P 2. Mn、Zn、Cu等，其对植物的生长发育中有着重要的生理作用。FeK和微量元素如、B、维生素。维生素能够以辅酶的形式参与多种酶系的反映，直接影响到蛋白质、糖、脂肪等植物生长物质。其

植物组培实验室配置清单

植物组培实验室建设目录 1、功能简述 (1) 1)准备室 (1) 2)灭菌室 (1) 3)缓冲间 (2) 4)无菌操作室 (2) 5)培养室 (2) 6)驯化室 (3) 7)温室 (3) 8)辅助实验室（非必要） (3) ①细胞学实验室 (3) ②生理生化分析室 (4) 2、设备及耗材清单 (4) 1)试验设备清单 (4) 2)常备试剂清单 (6) ①MS培养基必备试剂 (7) ②常备激素及辅助试剂 (7)

植物组培实验室建设 1、功能简述植物组织培养实验室一般应包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，这也是组织培养实验所必须具备的基本条件。要培养成大田苗还要有相应的驯化室、温室。 1)准备室用途：又叫化学实验室，进行一切与实验有关的准备工作。完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、晾置、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。设备：准备室应具备实验台、药品柜、水池、落水架、仪器、药品、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平（0.1g、0.0001g分度各一台）、干热消毒柜（可省去）、蒸馏水器（可省去）、酸度计(又称pH计，为节约成本和减少维护可用pH试纸代替)、过滤灭菌器、培养皿、培养瓶、三角瓶、试管、电磁炉、水浴锅、漏斗、量筒、刻度移液管（为操作简便起见可购买移液枪1ml、5ml各一个代替）、玻璃棒、酒精灯、镊子、试管架、琼脂、纱布、棉塞、封口膜、大量元素、微量元素、蔗糖、有机物和植物激素的母液（详细内容见附表）、NaOH、盐酸、滤纸、脱脂棉、橡皮筋、牛皮纸等。图1 准备室图2 灭菌室 2)灭菌室用途：完成各种器具的保存、培养基的灭菌等。 1

烟草遗传转化实验

烟草遗传转化实验文件管理序列号：[K8UY-K9IO69-O6M243-OL889-F88688]

实验八植物细胞悬浮培养实验目的：学习和掌握植物细胞悬浮培养的操作技术与方法。实验器材：超净工作台、恒温培养室、高压灭菌器、冰箱、恒温培养箱、培养瓶、250 mL 、500 mL三角瓶、镊子、酒精灯等。配置MS液体培养基（2，4-D 2 mg/L+1%甘露醇 +3% 蔗糖，pH 5.8）分装于250ml的三角瓶中，每瓶50ml。实验材料：烟草叶片愈伤组织。实验方法： 1.70%乙醇净化工作台并擦洗干净，将所用的材料、工具、培养基等放入工作台。打开紫外灯和风机，15分钟后关闭紫外灯开始方可操作。 2. 在超净台上用无菌镊子夹取出生长旺盛的松软愈伤组织，放入150ml 三角瓶中并轻轻夹碎,每个三角瓶加入培养基20-30ml，每瓶接种1-2g愈伤组织，按愈伤组织与液体培养基1∶10的比例，以保证最初培养物中有足够量的细胞。 3.接种后的三角瓶用天平称取重量并记载，然后置于摇床上，在转速 100-120rpm，25℃下培养以及散射光条件下，进行振荡悬浮培养。4.每周更换新鲜液体培养基两次，每次更换1/3。每次更换新鲜培养基时称取重量。 5. 每个人接种悬浮培养细胞1瓶，观察并记录细胞生长情况。 6. 培养7天后，制作细胞生长曲线：为了解县浮培养细胞的生长动态，可用以下方法绘制生长曲线图：鲜重法：在转代培养的不同时间，取一定体积的悬浮培养物，离心收集后，称量细胞的鲜重，以鲜重为纵座标，培养时间为横座标，绘制鲜重增长曲线。烟草遗传转化实验实验目的

烟草植物组织培养

烟草植物组织培养实验一实验目的学习和掌握植物组织培养技术。深刻理解植物细胞的全能性。二实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D、萘乙酸NAA、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸IBA）细胞分裂素（6-苄氨基嘌呤6-BA、6-糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（KT-30，CPPU））等。分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。分化期是指在分裂期的末期，细胞内开始出现一系列形态和生理上的变化，从而使愈伤组织内产生不同形态和功能的细胞。这些细胞类型有薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、纤维细胞，等等。外植体的细胞经过起动、分裂和分化等一系列变化，形成了无序结构的愈伤组织。如果在原来的培养基上继续培养愈伤组织，会由于培养基中营养不足或有毒代谢物的积累，导致愈伤组织停止生长，甚至老化变黑、死亡。如果要让愈伤组织继续生长增殖，必须定期地（如2～4周）将它们分成小块，接种到新鲜的培养基上，这样愈伤组织就可以长期保持旺盛的生长。愈伤组织的形态发生方式经过起动、分裂和分化期产生的愈伤组织，其中虽然发生了细胞分化，但是并没有器官发生。只有满足某些条件，愈伤组织的细胞才会发生再分化，产生芽和根，进而发育成完整植株。愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式（器官发生型）和胚状体方式两种。不定芽方式是在某些条件下，愈伤组织中的分生细胞发生分化，形成不同的器官原基，再逐渐形成芽和根。胚状体方式是由愈伤组织细胞诱导分化出具有胚芽、胚根、胚轴的胚状结构，进而长成完整植株。这种由愈伤组织中的薄壁细胞不经过有性生殖过程，直接产生类似于胚的结构，叫做胚状体。在植物组织培养中，不定芽方式和胚状体方式是愈伤组织形态发生的两种最常见和最重要的方式。胚状体方式比不定芽方式有更多的优点，如胚状体产生的数量比不定芽多，胚状体可以制成人工种子，等等。培养基的主要指标为营养的组分，植物生长物质的浓度，特别是后者对外植体的分化起着极其重要的作用。培养基的组织成分主要包括：1. 矿质营养。矿质营养又叫无机营养，

烟草组培苗实验步骤

烟草叶片的组织培养一、实验原理与实验步骤在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。植物材料：烟草植株药品：（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、1mol/L NaOH、1mol/L HCL 蒸馏水、70%酒精0.01%升汞仪器：玻璃杯、玻璃棒、pH试纸(5.5-9.0) 、1瓶无菌水、1个无菌烧杯、1包无菌滤纸、 1个无菌白瓷板、培养瓶若干移液器、微波炉、灭菌器、超净工作台、酒精灯、解剖刀、镊子二、实验方法与步骤

注意： 1、大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。 2、微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签 3、铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。 4、有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。（1）制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。（2）称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃）保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为0.5mg时，则取1ml母液即可。三、培养基配制和灭菌本次实验使用（1）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（2）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（3）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。注意事项：上述培养基均在MS固体培养基溶化后降低到50左右后，加入相应激素所得， MS固体培养基的配置过程在此不作过多赘述

《作物栽培学》作业试题及答案

单项选择题 1、作物产量中常说的经济系数是指 1.生物产量与经济产量之比 2.经济产量与生物产量之比 3.生物产量与经济产量的百分比 4.经济产量与生物产量的百分比 2、作物品质的评价指标中，下述属于形态指标的是 1.蛋白质 2.氨基酸 3.脂肪 4.颜色 3、作物生长的“营养三要素”是指 1. C、H、O 2. N、P、K 3. S、N、P 4. N、P、S 4、下列哪种根属于产品器官 1.气生根 2.须根 3.块根

4.不定根 5、下列属于喜钾作物的是 1.水稻 2.玉米 3.马铃薯 4.小麦多项选择题 6、影响复种的条件包括 1.热量 2.水分 3.地力与肥料 4.劳畜力与机械化等 7、下列哪些作物需经过一定时期的低温诱导才能正常开花结实。 1.大麦 2.小麦 3.黑麦 4.油菜 8、作物的播种方式包括 1.插播

2.条播 3.点播 4.重播 9、下面哪些材料可用于繁殖下一代 1.颖果 2.块茎 3.块根 4.鳞茎 10、按照土壤质地进行分类，一般可以把土壤区分为下列几大类 1.砂土类 2.黑土类 3.壤土类 4.黏土类 11、根据作物对二氧化碳同化途径的特点，下列哪些作物属于C3作物 1.小麦 2.大豆 3.玉米 4.棉花 12、间作与套作不相同点在于 1.共生期长短不一样 2.熟制不一样 3.复种指数不一样

4.前者是成行种植，后者是成带种植 13、关于土壤质地下列表述正确的是 1.沙质土壤结构良好，保水保肥。 2.壤质土耐旱耐涝，适耕期长。 3.黏质土吸附作用强，保肥性好。 4.沙质土壤保水不保肥。 14、下列属于长日照作物的是 1.小麦 2.烟草 3.大麦 4.油菜 15、种子萌发必不可少的因素包括 1.光照 2.温度 3.水分 4.氧气 16、从引种角度看，短日照作物由北方向南方引种，下列表述正确的是 1.生育期缩短 2.生育期延长 3.生育期不变 4.营养生长期缩短 17、按照作物“S”生长进程，下列说法正确的是

亚细胞定位之烟草转化方法

本氏烟草（N. benthamian）瞬时表达及相关实验方法：一、农杆菌介导的烟草瞬时转化： A、实验步骤： 1、根据实验需要，将所要表达的基因克隆到含有不同标签的双元载体中，并转化农杆菌。 2、将新活化的农杆菌单克隆接种到含有相应抗生素的YEP中，28℃，200rpm过夜。 *估算时间，防止农杆菌液浓度超过1OD，否则会影响转化效率。 3、当菌液OD值介于0.6~1.0之间时，1000g，5min离心收集农杆菌。 4、用2ml Induction medium（without AS）轻柔重悬农杆菌，然后再次离心收集菌液。 5、重复步骤4。 6、所得沉淀用1ml Induction medium 重悬。 7、室温放置1~4小时 8、测OD值，根据实验需要，配置侵染液（组合详见下文）。 9、用不加针头的注射器将侵染液注射进6~8周大的本氏烟草叶片中。 *使用注射器时注意安全，防止针头扎到手，使用完的注射器要把针头套套上再扔，或者将针头放到注射器里面，避免伤害他人；注射时应戴乳胶手套并在每次注射完成后清洗手套，防止交叉污染。B、试剂： Induction medium： MES-KOH PH 5.7 10mM MgCl210mM AS 200uM 推荐提前配制母液 1M MES-KOH PH5.7 过滤灭菌，4℃保存，用时稀释100倍。 1M MgCl2 过滤灭菌，4℃保存，用时稀释100倍。 0.2M AS 溶于DMSO 有机溶剂专用滤膜过滤灭菌，分装（避免反复冻融），-20℃。用高压灭菌的超纯水稀释。 C、关于表达时间：烟草瞬时表达系统中蛋白的表达可以维持比较长的时间，一般注射24小时之后到一周之内都会有表达。严格来讲需要摸索每个蛋白的最佳表达时段，但一般注射后48小时至72小时不同蛋白表达量都比较可观，不要错过。 D、关于侵染液浓度：推荐每个菌株的浓度在0.1~0.2之间。过高的农杆菌浓度会引起叶片萎蔫甚至枯萎。

烤烟栽培学(题库)

名词解释 1、烟叶品质 2、外观质量 3、成熟度 4、种植制度： 5、轮作制度 6、壮苗： 7．烟草漂浮育苗8．早花9、烤烟产量10、外观质量： 11、身份12、油分13、弹性：14、物理特性： 15、评吸： 16、劲头： 1 7、刺激性： 1 8、苦味和辣味： 1 9、香气： 20、杂气21、吃味： 22、燃烧性： 23、阴燃性： 24、连作： 25、轮作： 26、间作： 27、套种： 28、格盘育苗： 29、托盘育苗30、需水量： 31、耗水量： 32、水分利用效率： 33、团棵： 34、旺长： 35、圆顶： 36、底烘：37．烟叶的吸湿性38．烟草的弹性39．烟草湿润育苗40．烟叶的外观质量41．晒烟42．包衣种子43．烟草优质适产44．烟草的内在质量45．烟草漂浮育苗46．早花简答题 1.简述烟草根的初生构造和次生构造。 2.简述烟草根的生理机能。 3.简述烟草叶的构造及其生理机能。 4.简述烟草种子的萌发过程及其需要的条件。 5.简述环境条件对烟草生长发育的影响。 6.如何进行烟叶质量评价? 7.如何统一烟叶产量与质量的矛盾? 8.简述烟草产量与质量的关系。 9.烟草轮作、倒茬的意义。 10.烟草连作的危害有哪些？轮作有哪些优点？ 11.简述确定烟草移栽期的依据？ 12.简述育苗的要求及壮苗的标准。 13.如何正确决定大田期施肥量和氮、磷、钾搭配比例？ 14.简述烤烟测土配方施肥方法？ 15.简述烤烟大田需水规律和需肥规律？ 16.试述烟草大田期生长特点与管理要点。 17.烟草为什么要中耕培土，中耕培土的主要技术有哪些？ 18.试述烟田深耕的作用和技术。 19.烤烟生产时中如何划分生育期？ 20.如何确定烟草的移栽期。 21.试述打顶抹杈作用？ 22.如何决定烤烟打顶高度和留叶数？ 23.早花发生的原因及弥补措施，生产上如何避免早花的发生？ 24.如何预防烟叶底烘。 25.简述烟草地膜覆盖栽培技术。 26.分析烟田地膜覆盖栽培的优点和缺点。 27、请你根据田间烟株长势和土壤肥力情况，说明如何进行封顶打杈？（7分） 28、试论影响烟叶烟碱含量的主要因素。（5分） 29、试述烤烟进行中耕有什么作用？中耕的技术及要求有哪些？（6分） 30、请你说出硝态氮和氨态氮对烤烟生长发育的影响。（5分） 31.简述烟草的类型及其特点。 32简述烟草的生产特点。 33.简述烤烟烟区划分的依据。 34.全国烤烟种植最适宜和不适宜类型的条件？ 35.我国主栽的烤烟品种有哪些？ 36.简述烟草花的构造及其开花习性。 37.简述根、茎、叶生长的相关性。 38.简述烟草群体与个体的关系。 39.在轮作周期中确定烟草前作的原则。 40.烟稻轮作制和烟草三年五熟轮作制的优点。 41.简述烟草必需营养元素的营养作用。 42.为什么说氮素是烟草最重要的营养元素？ 43.根据烟草的需肥规律如何进行烟田施肥？ 44.如何确定烟草的施肥量？ 45.影响烟草养分吸收的因素有那些？ 46.比较烟草硝态氮和铵态氮营养的异同。 47.根据有机肥的特点，烟田应如何施用？ 48.简述烟田施用饼肥的优点及其使用方法。 49.简述优质烤烟生产的土壤条件有哪些？ 50.试述烟草对干旱胁迫的反应。 51.根据烟草的需水规律如何进行合理灌溉？ 52.简述烟田整地的方法和作用。 53.简述影响烤烟种植密度的因素。 54、试论影响烟叶烟碱含量的主要因素。（5分） 55、请你根据烤烟品种红花大金元的的品种特性谈谈其栽培和烘烤技术要点。 56、简述优质烤烟生产的土壤条件有哪些? （5分） 57、.简述烤烟大田需水规律和需肥规律。（5分） 58、优质烤烟生产所需的光照条件及云南烟区在这方面的自然优势有哪些? 59、试述优质香料烟生产的生态环境条件以及主要栽培措施（7分）。 60、概述烟叶品质评定的内容。（5分） 61、试述烟草漂浮育苗技术体系构成。（7分） 1、烟叶品质：是消费者对烟叶燃吸过程中所产生的香气、劲头、吃味、刺激性等几个主要因素的综合感受和吸烟安全性的综合评价。通常包括外观质量和内在质量两个方面， 2、外观质量：指烟叶的商品等级质量，如烟叶的成熟度、身份、结构、部位、颜色等表现出的优劣程度。 3、成熟度：是烟叶在田间发育过程中形成质量水平的反映，成熟度好的烟叶颜色均匀一致，叶片正反面颜色差异小，油份足，色度浓，香气质好量足，吃味醇和，杂气和刺激性小。 4、种植制度：是指一个地区或生产单位的作物组成、配臵、熟制与种植方式的总称，包括因地种植、轮作倒茬、间作套种、混作和复种等内容。 5、轮作制度：是指在一个轮作周期中，各种作物合理的安排顺序和田块布局。 6、壮苗：是指生长发育良好，新陈代谢正常，有机物质合成、积累较多，内含物丰富，碳氮比协调，抗逆性强，栽后成活率高的烟苗。 7．烟草漂浮育苗——所谓漂浮育苗，即采用质地很轻的泡沫塑料制成育苗盘，育苗盘的空穴中装上基质(人造土壤)，种子播种在基质内，然后将育苗盘移到育苗池中漂浮在营养液表面完成整个育苗过程。 8．早花——烟株未达到正常栽培条件下应有的叶数和高度，就提前现蕾开花，称为早花。它是营养生长受阻，生殖生长加速的结果。早花烟株矮小，叶数锐减，叶窄而薄，对产质影响很大。 2、烟制品的主要类型有卷烟，斗烟，水烟，雪茄，嚼烟，鼻烟。 3、确定烤烟移栽期的依据有气候条件、种植制度、品种特性、育苗技术、成苗因素。 4、烟草幼苗生长的最适温度是25-28℃，育苗期间低于2℃的低温和高于35℃的高温会引起冻害和灼伤幼苗。 5、优质烤烟生产所需的光照条件是和熙的光照。日照时数是500-700小时，日照百分率是40%；其中成熟期日照时数是280-300小时，日照百分率是30 %。 6、随着烟草种植密度的增加，烟田小气候中风速变小、地温降低、相对湿度增大。 7、全国烤烟适宜生态类型划分中，最适宜区的条件是1、无霜期≥120天；2、≥10°C积温＞2600°C；3、日均温≥20°C持续日数≥70天；4、0-60厘米土壤含CL量＜30mg/kg; 5、土壤PH5.5-6.5；6、地貌类型：中低山、低山、丘陵、高原；7、烟叶内在质量：香气质好，香气量足，吃味纯净。 10、影响烟草种子出苗的外界环境因素主要温度、水分和氧气（空气）。 11、烟草生产有产量与品质并重、生产工序复杂、对环境条件敏感、技术性强、烟叶的经济价值高的特点。 13、烟叶的产量是由单位面积上的株数，单株留叶数，单片叶的重量三部分所构成的。 14、烤烟的优质适产是指产量最高点与品质最高点既经济又合理地统一在一个水平上。 15、烟草适宜的前作有水稻，小麦，油菜等。 17、按调制方法分类，白肋烟属于晾烟，香料烟属于晒烟，黄花烟属于晒烟。 18、按调制方法和主要用途，烟草类型有烤烟、晾烟、晒烟、熏烟。 21、烟叶腺毛分泌物的主要成分是芳香油，树脂，蜡质。 25、烟田管理的“三一致”是指烟苗大小一致，烟株高矮一致，同部位烟叶成熟一致。 29、烟草种子萌发的三个过程是物理吸水阶段，营养物质转化的生化阶段，生理活动的生长阶段。 30、烟草根系生长的最低温度是7oC，最适温度是31oC，最高温度是43oC。 44、理想型烟株的特征为下部叶阳光充足，上部叶叶片开展，整株叶厚薄适中。 47、红花烟草属于植物界维管植物门被子植物纲双子叶亚纲茄科，烟草属。人工栽培的是红花烟草和黄花烟草。 48、烟草的根由主根、侧根、不定根三部分组成。 52、烟草的苗床期指从出苗到成苗。可分为小十字期、大十字期、猫耳期、成苗期四个生育时期。 53、烟草育苗中锻苗的方式主要有断水炼苗、揭膜锻苗和剪叶锻苗。 54、烟叶育苗的要求是苗壮、适时、量足、整齐和大小适宜。 55、生产中主要采用的育苗方式有漂浮育苗、水旱两段育苗和常规育苗等。 56、烟草漂浮育苗的壮苗的标准是根系发达、茎粗壮而柔韧、有一定的叶片数，叶色正常、抗逆性强。 57、烟草大田施氮量的确定是根据理论产量、土壤速效养分和土壤养分利用率和所用肥料利用率来确定的。 58、应变施肥主要是指看天施肥、看地施肥和看烟施肥。 59、按照烤烟大田施肥的时期分为基肥、前期追肥和叶面追肥等。施肥方法分为撒施、条施、穴施、肥料溶液灌根和肥料溶液喷施等。 61、移栽期的确定要依据气候条件、种植制度、品种特性和播种期综合考虑。 62、烟草对水分的消耗包括地表蒸发和叶面蒸腾两个方面，前者指土壤水分通过地表面蒸发散失，称为生态耗水；后者指水分通过烟株表面（主要是叶片）而散失，称为生理耗水。 64、烟田灌溉方法有穴灌、沟灌、滴灌和喷灌等。 65、烟草的早花是指烟株未达到正常栽培条件下本品种应有的高度和叶数就提前现蕾、开花的异常现象。 66、早花产生的原因是生理特性、品种特性、气候条件、栽培条件等四方面的原因。 67、烟草的底烘的指烟株下部叶为达到正常成熟时期就提前发黄或枯萎的现象。 68、底烘发生的原因有光照不足、土壤水分不足和水分过多等。 69、打顶技术包括打顶的时期、打顶的高度和留叶多少等。 73、香料烟具有特殊的浓香的特点，植株上部部位烟叶品质最好。 1、评定烟叶品质包括外观质量、内在质量、烟叶的化学成分、烟叶的物理特性、烟叶的安全性五个方面内容。 2、“两烟”是指烤烟和卷烟。

烟草的组织培养技术

烟草的组织培养技术一、目的与要求 1.验证“植物细胞全能性”理论。 2.学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法。二、实验原理植物组织培养是指在无菌条件下，分离、并在培养基中培养离体植物组织（器官或细胞）的技术。植物组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个活细胞都有相同的遗传组成，在适当条件下具有繁殖出完整植株的能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，组织、器官一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出细胞的全能性，从已经分化的细胞通过脱分化，成为重新具有分裂能力的胚性细胞，并能再分化重新生长发育成完整的植株。愈伤组织：是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的细胞团。脱分化：已经分化的细胞，发生生理、生化的改变，退回到胚性细胞的过程。再分化：经过脱分化的细胞或组织再次获得分化成不同功能的细胞、组织、器官或完整植物体。三、材料和用具 1.材料：无菌烟草叶盘（已经诱导成芽），拟南芥。 2.用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术解剖刀、大、小镊子、30ml烧杯、500ml烧杯、药勺、玻璃棒、培养瓶、平皿、试纸（PH5.4-7），报纸等。 3.试剂：MS培养基、0.5mol/LNaOH、1mol/L HCl。四、操作步骤（一）诱导培养基配制（见表1）

1.加MS储液（储液配置见附表）大量元素和微量元素的母液都是高浓度的，为防止混合后发生沉淀，建议加完大量元素后先加水（约总体积3/4），再加各微量元素和有机成分。铁盐也是微量元素，因为易发生沉淀，所以与其它微量元素分开配。储液中的铁盐存于棕色瓶中。配好的储液应当4℃保存。表1是4瓶培养基（1组）的配置方案。表1 诱导培养基配制表成分实际称取量蒸馏水120 ml MS母液15 mL 蔗糖 4.5 g 用蒸馏水粗略定容至100ml pH值 5.8 琼脂 1.2 g 2.加蔗糖（3%）（m/v）。蔗糖是碳源，同时起到维持渗透压的作用。 3.调pH=5.8。pH过低，高温处里时间过长，都可能会使培养基不凝。 4.加琼脂（0.7-0.8%）（m/v）琼脂粉是固化剂、支持物。（二）灭菌 1.培养基、解剖刀、镊子、平皿需在高压灭菌锅120℃，灭菌15min。 2.接种前打开无菌间和超净台紫外灯照射30min。 3.用肥皂洗手和手腕。进入无菌间，先用70%酒精或新洁尔灭喷手。关掉无菌间棚顶紫外灯，打开超净台风机，关掉超净工作台上的紫外灯。（三）接种 1.坐在超净工作台前，用70%酒精棉球擦拭双手、培养瓶和超净台面。 2.待手上的酒精干了，点燃酒精灯。 3.将培养瓶的盖子旋松，但不要打开，放到无菌风道侧面备用。将镊子、解剖刀在酒精灯外焰上灼烧，待其冷却后，放到培养皿上备用。 4.用镊子和解剖刀取出一块叶盘，放到平皿上，切取烟草叶芽1-2块，插入培养基。

2,4- D和6-BA对烟草组织培养的影响

2,4- D和6-BA对烟草组织培养的影响刘璐华南师范大学生命科学学院 08生物科学一班 20082501055 摘要：以烟草为实验材料，在不同配方的培养基（①MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L ②MS + 2,4-D0.5mg/L ③MS + 6-BA2.0mg/L + 2,4-D0.5mg/L）中进行组织培养，观察其愈伤组织的形成及分化。通过实验，我们得出，6-BA与2,4- D配合使用，可以更有效地诱导愈伤组织的形成。单独使用2,4- D可促进愈伤组织根的分化，而 6-BA则可以有效地诱导愈伤组织芽的分化，且6-BA浓度为2.0mg/L时的效果比浓度为0.5 mg/L时要好。关键词：烟草组织培养2,4- D 6-BA 烟草(Nicotiana tabacum L.) ，属茄科烟草属，是植物组织培养的模式植物。生长调节物质是植物组织培养中不可缺少的一类物质，虽然用量极少，但它们对外植体愈伤组织诱导起着重要的调节作用，其中以生长素类和细胞分裂素最为常用。常用的生长素类有2,4- D、NAA、IAA、IBA，而细胞分裂素类主要有KT、6-BA、ZT、2-iP、4-PU和TDZ。本研究以烟草叶片为材料，结合本小组和其他两组的实验结果，探讨2,4-D对愈伤组织形成与分化的作用，以及它和不同浓度6-BA共同使用的效果。 1 材料与方法 1.1材料烟草（Nicotiana tabacum L.） 1.2方法 1.2.1配制MS培养基母液和植物生长调节物质母液。[1] 1.2.2配制培养基和灭菌。[1]培养基的配方为①MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L（我们第2实验小组所做）②MS + 2,4-D0.5mg/L（由第1实验小组所做）③MS + 6-BA2.0mg/L + 2,4-D0.5mg/L（由第7实验小组所做） 1.2.3外植体（烟草叶片）的消毒与接种。[1]观察记录各组的愈伤组织生长情况以及污染情况。 1.2.4愈伤组织的继代培养。将愈伤组织转入配方为MS + 6-BA1.0mg/L + NAA0.5mg/L的培养基上进行继代培养，观察记录生长情况。 2 结果分析 2.1愈伤组织的形成培养开始的3天内，外植体在形态上并无明显变化，只是其体积比接种时稍微大了一些。5天后，外植体从切口处开始膨大并出现黄色小颗粒，形成愈伤组织，外植体隆起且边缘有卷曲现象。而污染方面，我们第2组一共接种16瓶培养基，有5瓶出现了霉菌污染，污染率为31.25% 。对比三个实验组的愈伤组织，可以发现，我们第2实验小组的愈伤组织生长情况与第7

烟草瞬时转化相关文献

Systemic Agrobacterium tumefaciens–mediated transfection of viral replicons for ef?cient transient expression in plants Sylvestre Marillonnet 1,2,Carola Thoeringer 1,2,Romy Kandzia 1,Victor Klimyuk 1&Yuri Gleba 1 Plant biotechnology relies on two approaches for delivery and expression of heterologous genes in plants:stable genetic transformation and transient expression using viral vectors.Although much faster,the transient route is limited by low infectivity of viral vectors carrying average-sized or large genes.We have developed constructs for the ef?cient delivery of RNA viral vectors as DNA precursors and show here that Agrobacterium–mediated delivery of these constructs results in gene ampli?cation in all mature leaves of a plant simultaneously (systemic transfection).This process,called ‘magnifection’,can be performed on a large scale and with different plant species.This technology combines advantages of three biological systems (the transfection ef?ciency of A.tumefaciens ,the high expression yield obtained with viral vectors,and the post-translational capabilities of a plant),does not require genetic modi?cation of plants and is faster than other existing methods. Viral vectors designed for expression of recombinant proteins in plants hold great promise because of high absolute and relative yields,and because of the speed provided by transient expression.Most of the results of practical interest achieved so far have been obtained with vectors built on the backbones of plus-sense RNA viruses such as tobacco mosaic virus (TMV)or potato virus X 1–4. We have recently shown that TMV-based vectors can be delivered to plant tissues using A.tumefaciens 5(agroinfection).However,one step of this process,namely the formation of active replicons from the primary nuclear transcript,is inef?cient.In a standard leaf transfec- tion experiment,this inef?ciency is masked by the subsequent ability of the replicons to move to neighboring cells by cell-to-cell movement.Here we show that this bottleneck can be fully remedied by incorpora-tion of silent nucleotide substitutions into the vector and by addition of multiple introns.We demonstrate that such modi?cations provide for ef?cient processing of the DNA information into active replicons in almost all cells (as high as 94%)of Nicotiana benthamiana ,an up to 1,000-fold improvement over nonoptimized TMV-based vectors,and an even higher improvement (4106-fold)in Nicotiana tabacum (tobacco).Finally,we show that the resulting vectors allow the development of a fully scalable and versatile whole-plant transfection protocol,that we term magnifection,for production of heterologous proteins in plants. RESULTS Viral replication following agroin?ltration of TMV-based vectors Agroin?ltration of a TMV-based viral vector containing the gene encoding green ?uorescent protein (GFP)(pICH16707,Fig.1a )into N.benthamiana leaves leads to the formation of foci of GFP ?uorescence 3d post-in?ltration (d.p.i.)(shown in ref.5and in Supplementary Fig.1online).T o quantify the proportion of cells initiating viral replication,a 489-bp deletion was made within the movement protein (MP)coding sequence,resulting in construct pICH14833(Fig.1a ).Replicons derived from this construct cannot move from cell-to-cell but are able to replicate autonomously within each infected cell.Three days after agroin?ltration of pICH14833in N.benthamiana leaf (OD 600of the A.tumefaciens in in?ltration solution was 0.7),a small number of cells expressing GFP appeared (see Supplementary Fig.1online),and the same pattern was still visible 2weeks after in?ltration.By counting protoplasts prepared from the in?ltrated area (Figs.1and 2),we found that 0.6–1.6%of cells initiated viral replication. There are several reasons why RNA viral vectors might have dif?culties starting the replication cycle.First,RNA viruses,such as TMV ,replicate in the cytoplasm and never enter the nucleus,and have therefore evolved in an environment where they are not exposed to the nuclear pre-mRNA processing machinery.As a result,pre-mRNA transcripts made in the nucleus from viral constructs may not be re-cognized and processed properly.Second,viral vector constructs encode very large transcripts (B 7.6kb for the primary transcript of a viral vector containing a GFP gene),a size much larger than the average size (1–2kb)of plant genes.Moreover,in nature,large eukaryotic genes often contain numerous introns that facilitate processing and export of the pre-mRNAs from the nucleus 6.We therefore hypothesized that modi?cations of the constructs that would increase the ef?ciency of processing and export of primary transcripts from the nucleus to the cytoplasm could lead to an increase in the number of cells that would initiate viral replication.Two types of modi?cations were made: Published online 8May 2005;doi:10.1038/nbt1094 1Icon Genetics,Biozentrum Halle,Weinbergweg 22,D-06120Halle (Saale),Germany.2These authors contributed equally to this work.Correspondence and requests for materials should be addressed to Y.G.(gleba@icongenetics.de).A R T I C L E S ?2005 N a t u r e P u b l i s h i n g G r o u p h t t p ://w w w .n a t u r e .c o m /n a t u r e b i o t e c h n o l o g y

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