常用染色液配方
实验室常用染色液配方
1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液
A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升
B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液
A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升
B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升
将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升
B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升
将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升
6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升
9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.0
10、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
11动物组织石蜡切片染色方法
苏木精-伊红(HE)染色：二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min，依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min，蒸馏水洗；入苏木精染液10 min，盐酸酒精分色4 s，自来水洗10 min；依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min，入伊红染液染色
10 min；入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明，中性树脂封片.
一、常用染色液的配制
⒈碘-碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。
配方：碘化钾2g ；蒸馏水300ml ；碘1g
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。
⒉苏丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。
配方：（1）苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2）先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。
（3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。
⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。
配方：洋红1g ；45％醋酸100ml
煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀），放入棕色瓶中备用。
⒋改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine）核染色剂。
配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。
原液A：3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。
原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。
原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）。
（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）
染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1~1.8g，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著（若立即用，则着色能力差）。
适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用，假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。[/sell] ⒌中性红（neutral red）溶液用于染细胞中的液泡，可鉴定细胞死活。
配方：中性红0.1g ；蒸馏水100ml
使用时再稀释10倍左右。
⒍曙红Y（伊红，eosin Y）酒精溶液常与苏木精对染，能使细胞质染成浅红色，起衬染作用。
配方：曙红0.25g ；95％酒清100ml
也常用于95％酒精脱水时，加入少量曙红溶液，其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料。
⒎钌红（ruthenium red）染液钌红是细胞胞间层专性染料，其配后不易保存，应现用现配。配方：钌红5～10mg ；蒸馏水25-50ml
⒏龙胆紫（gentian violet）为酸性染料，适用于细菌涂抹制片。
配方：龙胆紫0.2~1 g ；蒸馏水100ml
⒐苯胺兰（aniline blue）溶液为酸性染料，对纤维素细胞壁、非染色质的结构、鞭毛等，尤其是染丝状藻类效果好。还多用于与真曙红作双重染色，对于高等植物多用于与番红作双重染色。
配方：苯胺兰1 g ；35％或95％酒精100ml
⒑间苯三酚（phloroglucin）溶液用于测定木质素。
配方：间苯三酚5g ；95％酒精100ml
注：此溶液呈黄褐色即失效。
⒒橘红G（orange G）酒精溶液为酸性染料，染细胞质，常作二重或三重染色用。
配方：橘红G 1g ；95％酒精100ml
⒓番红（safranin O）为碱性染料，适用于染木化、角化、栓化的细胞壁，对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等作双重染色，与橘红G、结晶紫作三重染色。
配方：（1）番红水溶液番红0.1或1 g ；蒸馏水100ml
（2）番红酒精溶液番红0.5或1 g ；50％（或95％）酒精100ml
（3）苯胺番红酒精染色液
甲液番红5 g +95％酒精50ml
乙液苯胺油20ml +蒸馏水450ml
将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀，过滤后使用。
⒔固绿（fast green）又称快绿溶液。为酸性染料，能将细胞质，纤维素细胞壁染成鲜艳绿
色，着色很快，故要很好的掌握着色时间。
配方：（1）固绿酒精液固绿0.1 g ；95％酒精100ml
（2）苯胺固绿酒精液固绿 1 g ；无水酒精100ml ；苯胺油4ml
配后充分摇匀，过滤后使用。现配现用效果好。
⒕苏木精（hematoxylin）染液苏木精是植物组织制片中应用最广的染料，是苏木科植物苏木的心材提取出来的。它是很强的细胞核染料，而且可以分化出不同颜色。配方很多，现举海登汉氏（Heidenhain's）苏木精染色液，又称铁矾苏木精染色液。
配方：甲液（媒染剂）：硫酸铁铵（铁明矾）2-4g ；蒸馏水100ml
（必须保持新鲜，最好临用之前配制）
乙液（染色剂）：苏木精0.5-1g ；95％酒精10ml；蒸馏水90ml
配制步骤：（1）将苏木精溶于酒精中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。
切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。
铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂，但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。
⒖亚甲基蓝染液常用于细菌、活体细胞等的染色。
取0.1g亚甲基蓝，溶于100ml蒸馏水中即成。
⒗詹纳斯绿B（Janus green B）染液
将5.18gJanus 绿溶于100ml蒸馏水，配成饱和水溶液。用时需稀释。稀释的倍数应视材料不同而异。
⒘硫堇染液
取0.25克硫堇(也称劳氏青莲或劳氏紫)粉末，溶于100ml蒸馏水中，即可使用。使用此液时，需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片，能成多色反应。
18.黑色素液
水溶性黑素10g，蒸馏水100mL，甲醛(福尔马林)0.5mL。可用作荚膜的背景染色。
19.墨汁染色液国产绘图墨汁40mL，甘油2mL，液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤，加甘油混匀后，水浴加热，再加石炭酸搅匀，冷却后备用。用作荚膜的背景染色。20.吕氏(Loeffier)美蓝染色液
A液：美蓝(methylene blue,又名甲烯蓝)0.3g，95%乙醇30mL;
B液：0.01%KOH100mL。
混合A液和B液即成，用于细菌单染色，可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液，按1∶10或1∶100稀释均可。
21.革兰氏染色液
(1)结晶紫(cristal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL。将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制。
(2)芦戈(Lugol)氏碘液：碘1g，KI 2g，蒸馏水300mL。先将KI溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至300mL，即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色能使用。
(3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。
(4)稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱液(碱性复红1g，95%乙醇10mL，5%石炭酸90mL)10mL，加蒸馏水90mL。
(5)番红溶液：番红O(safranine O，又称沙黄O)2.5g，95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密
闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。
以上染色液配合使用，可区分出革兰氏染色阳性(G+ )或阴性(G- )细菌，前者蓝紫色，后者淡红色。
22.齐氏(Ziehl)石炭酸复红液：碱性复红0.3g溶于95%乙醇10mL中为A液；0.01%KOH溶液100mL为B液。混合A、B液即成。
23.姬姆萨(Giemsa)染液
(1)贮存液：称取姬姆萨粉0.5g，甘油33mL，甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细，再逐滴加入甘油，继续研磨，最后加入甲醇，在56℃放置1-24h后即可使用。
(2)应用液(临用时配制)：取1mL贮存液加19mLpH7.4磷酸缓冲液即成。也可以贮存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液。
24. 1%瑞氏(Wright's)染色液
称取瑞氏染色粉6g，放研钵内磨细，不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用，保存时间愈久，则染色色泽愈佳。
二、常用试剂的配制
(一)显微镜镜头清洁剂
将乙醚和乙醇按7∶3混合，装入滴瓶备用。用于擦拭显微镜镜头上油迹和污垢等（注意瓶口必须塞紧，以免挥发）。
(二)固定液
1.福尔马林-乙酸-酒精固定液（FAA，又称万能固定剂）
福尔马林（38％甲醛）5ml＋冰乙酸5ml＋70％酒精90 ml，可用于固定植物的一般组织，但不适用于单细胞及丝状藻类。幼嫩材料用50％酒精代替70％酒精，可防止材料收缩；还可加入5ml甘油（丙三醇）以防蒸发和材料变硬。FAA 可兼作保存剂。
2.福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）
福尔马林5ml＋丙酸5ml＋70％酒精90ml，用于固定一般的植物材料，通常固定24h，效果比FAA 好，并可长期保存。
3.福尔马林-丙酸-氯仿固定液（卡诺固定液）
配方一：无水酒精3份＋冰乙酸1份。
配方二：无水酒精6份＋冰乙酸1份＋氯仿3份。
是研究植物细胞分裂和染色的优良固定液，材料固定后，用95％和85％的酒精浸洗，清洗2-3次，也可转入70％酒精中保存备用。
4.甘油-酒精软化剂
甘油1份＋50％或70％酒精1份，适用于木材的软化，将木质化根、茎等材料排除空气后浸入软化液中，时间至少一周或更长一些，也可将材料保存于其中备用。
5. 铬酸-乙酸固定液
根据固定对象的不同，可分强、中、弱3种不同的配方：
弱液配方：10％铬酸2.5 ml＋10％乙酸5.0 ml＋蒸馏水92.5ml。
中液配方：10％铬酸7 ml+10％乙酸10 ml＋蒸馏水83 ml。
强液配方：10％铬酸10 ml+10％乙酸30 ml＋蒸馏水60 m1。
弱液用于固定较柔嫩的材料，例如藻类、真菌类、苔药植物和蕨类的原叶体等，固定时间较短，一般为数小时，最长可固定12-24 h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟到1h。中液用作固定根尖、茎尖、小的子房和胚珠等，固定时间12-24 h或更长。
强液适用于木质的根、茎和坚韧的叶子、成熟的子房等。为了易于渗透，可在中液和强液中另加入2％的麦芽糖或尿素。固定时间12-24 h或更长。
(三)离析液
1. 铬酸-硝酸离析液
铬酸为三氧化铬的水溶液：(1) 10 ml铬酸；(2) 10 ml浓硝酸。
将上述两液等量混合均匀后再使用。适于对导管、管胞、纤维等木质化的组织进行解离时使用。
2. 盐酸-酒精固定离析液
将浓盐酸、95％酒精等量混合备用，一般用于离析根尖细胞。
(四)解离液
常用于根尖等细胞的涂片，它能使细胞壁中层（果胶质）溶解，而使细胞分开。
1．盐酸酒精
配方:95%酒精1份，浓盐酸1份。二者混合即成。
2．盐酸溶液
（1）1 mol／L盐酸
配方：浓盐酸（比重1.19）82.5ml
用蒸馏水定容1 000ml
（2）0.2mol／L盐酸
配方：浓盐酸（比重1.19）16.5ml
用蒸馏水定容1 000m1
盐酸水解时间对染色效果影响很大，水解时间短，易着色但较难压片；水解时间长，染色慢而色淡；超过20min或水解温度过高，往往染色极淡，或染不上色。各种材料最合适的时间有差别，一般来说，大染色体材料水解时间可较长，小染色体材料宜短。
改用0.2mol／L盐酸于60℃恒温下水解10～15min，对各种类型材料都能获得细胞分离和染色合适的较好效果。
(五)预处理液
用于根尖压片的前处理，能使细胞有丝分裂染色体缩短。
1．0.002mol/L 8-羟基奎林水溶液称取0.29g 8-羟基奎林溶于1 000ml蒸馏水中。
2．对二氯代苯饱和水溶液将对二氯代苯加入蒸馏水中搅拌至不再溶解为止，即成饱和水溶液。
(六)各级酒精的配制
由于无水乙醇价格较高，故常用95％的酒精配制。配制方法很简便，用95％的酒精加上一定量的蒸馏水即可。可按下列公式推算：
（原酒精浓度值（95％）－最终酒精浓度值）×100＝所需加水量
最终酒精浓度95％酒精用量蒸馏水量
85％85ml 10ml
70％70ml 25ml
50％50ml 45ml
30％30ml 65ml
(七)其他试剂
1. 0.7%生理盐水取NaCl 0.7g溶于100mL蒸馏水中。用于两栖类动物。
2. 1%硝酸银溶液称取1克硝酸银,溶于100毫升蒸馏水中即可。
3.碘酒
取碘2g和KI 1.5g，先加入少量的75%乙醇搅拌，待溶解后再用75%乙醇稀释至100mL 4. 树胶封固剂
将固体的加拿大树胶块，溶解于二甲苯或正丁醇中，浓度要适当（注意绝对不能混入水或酒精），是玻片标本好的封固剂。也可用人工合成的中性树胶代替。
5. 明胶粘贴剂
明胶1-2 g＋石碳酸（苯酚）2g＋蒸馏水100ml＋甘油15ml。
配法：先将蒸馏水加温至30-40℃，慢慢加入明胶，待全部溶解后，再加入2g苯酚和15ml 甘油，搅拌至全溶为止，然后用纱布过滤，滤液贮于瓶中备用。
6.标本消毒剂
用于腊叶标本消毒，常用0.4％~1%升汞酒精溶液（95％酒精1 000ml+4 g升汞），浸泡标本0.5～2min。升汞有剧毒，不要弄到手上，消毒后注意洗手。
碘标准溶液[c(1/2 I2)=0.1mol/L]的配制
1、配制：
称取13g碘及35g碘化钾，溶于100mL水中，稀释定容至1000mL，摇匀，贮存于棕色瓶中。
2、标定：
方法一：
称取0.18g预先在硫酸干燥器中干燥至恒重的工作基准试剂三氧化二砷，置于碘量瓶中，加6mL氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=1mol/L]溶解，加50mL水，加2滴酚酞指示剂（10g/L），用硫酸标准滴定溶液[c(1/2 H2SO4)=1mol/L)]滴定至溶液无色，加3g碳酸氢钠及2mL淀粉指示剂(10g/L),用配制好的碘标准滴定溶液滴定至溶液呈浅蓝色，同时做空白。
碘标准溶液[c(1/2 I2)=0.1mol/L]的浓度，数值用mol/L表示，按下列公式计算：
m×1000
c(1/2 I2)=-----------------
(V1—V2）M
式中：
m ——三氧化二砷的质量的准确数值，单位为克（g）
V1——碘溶液的体积的数值，单位毫升（mL）
V2——空白实验碘溶液的体积的数值，单位毫升（mL）
M ——三氧化二砷的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（g/mol）[M（1/4 As2O3）=49.460] 方法二：
量取35.00mL—40.00mL配制好的碘标准滴定溶液，置于碘量瓶中，加150mL水（15—20℃），用硫代硫酸钠标准滴定溶液[c(Na2S2O3)=0.1mol/L]滴定，近终点时，加2mL淀粉指示剂（10g/L），继续滴定至溶液蓝色消失。
同时做空白试验。取250mL水（15—20℃），加0.05mL——0.20mL配制好的碘标准溶液和2mL淀粉指示剂（10g/L），用硫代硫酸钠标准滴定溶液[c(Na2S2O3)=0.1mol/L]滴定至溶液蓝色消失。
碘标准溶液[c(1/2 I2)=0.1mol/L]的浓度，数值用mol/L表示，按下列公式计算：
(V1×V2)c1
c(1/2 I2)=-----------------
(V3—V4）
式中：
V1——硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积的数值，单位毫升(mL)
V2——空白试验硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积的数值，单位毫升(mL)
c1——硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度的准确数值，单位摩尔每升（mol/L）
V3——碘溶液的体积的准确数值，单位毫升（mL）
V4——空白试验中碘溶液的体积的准确数值，单位毫升（mL）
注意：
1、使用方法二时，每次标定碘溶液前对硫代硫酸标准滴定溶液进行标定。
2、配制碘液的时候，一定要在100mL水中完全溶解后才能转移入容量瓶。
常用染色剂及配制
常用染色剂及配制 供组织学诊断用的优秀常规染色剂，不仅须使细胞核和细胞浆有选择性着染，也要使结缔组织着色。苏木素-伊红染色的切片适当分色，可使这些结构得以区分，胞核表现为蓝色，胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红，因此这是一种最常用的常规染色剂。 一、苏木素-伊红染色的基本原理 苏木素是最早用于生物学上的天然染色剂之一，百余年来，一直是生物学实验室最常用的组织学中细胞核的染料，它是从苏木树的树心中提炼出来的，为浅褐色结晶或淡黄褐色的粉末状物。易溶于乙醇、甘油，也可溶于热水。苏木素本身没有染色能力，它经过氧化后，能产生具有染色能力的苏木红，苏木红又称为氧化苏木素或苏木因。 苏木素变成苏木红的过程叫作“成熟”。成熟的方法一般有两种：一种是把配制好的苏木素液在开口瓶中放置两个月以上，让其在日光和空气中的氧的作用下使之氧化。故一般地盛苏木素的瓶子放在向阳处，时间愈长，染色的效果愈好。常配制一大瓶，备长期使用。另一种方法是在苏木素液中加入氧化剂，如磺酸钠，过锰酸钾，氧化汞，双氧水等。用这种方法成熟与用第一种方法者不同的是，它放置时间愈长，染色的效果愈低。这是因为苏木红被继续氧化可生成无色的化合物，故一次不宜配制过多，还应放置40C冰箱内避光保存以延长使用时间。它的优点是配制后即可使用。 成熟的苏木素对组织并无亲和力，须加入含金属离子的媒染剂，才能达到染色的目的。一般用于明矾苏木素的媒染剂为钾明矾或氨明矾。主要是利用明矾中的铝离子和苏木红结合形成的铝沉淀色素为紫蓝色，对染色质有很大的亲和力，水和酒精都不能使其褪色。用于铁苏木素的媒染剂是三价铁离子，苏木红的铁沉淀色素为黑蓝色，不溶于水，因此，故不能配制大量含媒染剂的混合液，一般用时现配，或在染色过程中，先用铁明矾媒染，然后再染苏木素，如磷钨酸苏木素染色即是。 常规苏木素染色的对比染色是用伊红，也有采用焰红，因为焰红比伊红色泽更鲜明，此外还有采用橘黄G，比布里希猩红，波尔多红等作为对比染色。 苏木素-伊红染色，在组织病理学中，是一种日常使用最为广泛的常规染色方法。一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据。再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色。 二、染液的配制 在实验室内常用的苏木素染液有以下几种，不同的仅是染色时间以及比较每种染色方法彼此的优缺点，不过各有优劣。 （一）苏木素染液的配制方法如下 1.Harris氏苏木素液 甲液：苏木素1g 无水酒精10ml 乙液：硫酸铝钾20g 蒸馏水200ml 丙液：一氧化汞0.5g 经典的配制方法是，先将甲液加热溶解后，密封待用，再将乙液加热溶解至沸，去火，待溶液仍处于小沸腾状态时再将甲液徐徐倾入其中，全部混合后，再使溶液在短时间内加热至沸腾，去火，最后，将氧化汞缓慢倾入溶液中（氧化汞一定要慢慢少量分次加入，切忌急躁。因氧化汞倒入后，溶液会迅速膨胀易沸出容器外而发生危险。）此时液体变为深紫色，待氧化汞全部放入后，再将溶液加温至沸腾片刻，立即将溶液放入流动的冷水中，并缓缓地连续摇晃至溶液完全冷却为止。隔夜后过滤，加入冰醋酸（按5%比例）混匀，再过滤后保存于
常用染色液配方
实验室常用染色液配方 1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液 A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升 B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。 2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液 A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升 B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升 将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。将两者混合即成。 3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升 B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升 将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合即成。 4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。 5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升 6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。 7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。 8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升 9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.0 10、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。 11动物组织石蜡切片染色方法 苏木精-伊红(HE)染色：二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min，依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min，蒸馏水洗；入苏木精染液10 min，盐酸酒精分色4 s，自来水洗10 min；依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min，入伊红染液染色 10 min；入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明，中性树脂封片. 一、常用染色液的配制 ⒈碘-碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。 配方：碘化钾2g ；蒸馏水300ml ；碘1g 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。 ⒉苏丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。 配方：（1）苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2）先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。 （3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。 ⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。
实验室各种染料的配比
实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制 一、生物标本常用染料性能简介 （一）天然染料 1、苏木精苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。 苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。 2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。 洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。 （二）人工染料 人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。 1、酸性品红酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染，能显示线粒体。 组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。 2、刚果红刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。他能作染料，也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于他能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。 3、甲基蓝甲基蓝是弱酸性染料，能溶于水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。他跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化，因此用他染色后不能长久保存。 4、固绿固绿是酸性染料，能溶于水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广。他和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。 5、苏丹Ⅲ苏丹Ⅲ是弱酸性染料，呈红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15%）。苏丹Ⅲ是脂肪染色剂。 6、伊红这类染料种类很多。常用的伊红Y，是酸性染料，呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状，溶于水（15摄氏度是溶解度达44%）和酒精（溶于无水酒精的溶解度为2%）。伊红在动物制片中广泛应用，是很好的细胞质染料，常用作苏木精的衬染剂。 7、碱性品（复）红碱性品红是碱性染料，呈暗红色粉末或结晶状，能溶于水（溶解度1%）和酒精（溶解度8%）。碱性品红在生物学制片中用途很广，可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁，又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中，长用来鉴别结核杆菌。在尔根氏反应中用作组织化学试剂，已核查脱氧核糖核酸。 8、结晶紫结晶紫是碱性染料，能溶于水（溶解度9%）和酒精（溶解度8.75%）。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。他是细胞核染色常用的，用来显示染色体的中心体，并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时，用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色，染色体染成红色，纺锤丝染成紫色，所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛，效果也很好。用结晶紫染色的切片，缺点是不易长久保存。 9、龙胆紫龙胆紫是混合的碱性染料，主要是结晶紫和甲基紫的混合物。在必要是，龙胆紫能跟结晶紫互相替用。医药上用的紫药水，主要成分是甲基紫，需要时能代替龙胆紫和结晶紫。 10、中性红中性红是弱碱性染料，呈红色粉末状，能溶于水（溶解度4%）和酒精（溶解度1.8%）。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，所以能用作指示剂。中性红无毒，常做活体染色的染料，用来染原生动物
常用染色液配制
常用染色液配制 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020
1．草酸铵结晶紫染色液 A液：结晶紫，95%乙醇25mL。 B液：草酸铵，蒸馏水1000mL。 制备时，将结晶紫研细，加入95%乙醇溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合静止48h后，过滤后使用。 2．鲁格尔氏（路戈氏）碘液 碘，，蒸馏水300mL。先用3~5mL蒸馏水溶解KI，再加入碘片，稍加热溶解，加足水过滤后使用。 3．脱色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液：95％乙醇70mL，丙酮30mL 4．沙黄（番红）染色液 ％沙黄（番红）乙醇溶液：沙黄（番红），95%乙醇100mL。 此母液存放于不透气的棕色瓶中，使用时取20mL母液加80mL蒸馏水使用。 5．％美兰染色液 溶解于100mL蒸馏水中。 6．吕氏碱性美蓝色染色液 A液：美蓝，95%乙醇30mL。 B液：，蒸馏水100mL，分别配制A液和B液，混合即可。 7．瑞氏染色液 瑞氏染料粉未,甘油3mL，甲醇97mL。将染料放乳钵内研磨，先加甘油，后加甲醇，过夜后过滤即可。 8．5％孔雀绿水溶液（芽孢染色用） 孔雀绿,蒸馏水100mL。先将孔雀绿放乳钵内研磨，加少许95％乙醇溶解，再加蒸馏水。 9．黑色素水溶液（荚膜负染色用） 黑色素10g，蒸馏水100mL，40％甲醛（福尔马林）。将黑色素溶于蒸馏水中，煮沸5min，再加福尔马林作防腐剂，用玻璃棉过滤。 10．硝酸银鞭毛染色液 A液：单宁酸，，福尔马林(15%)，1%，蒸馏水100mL。 B液：,蒸馏水100mL。 将AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其它的90mL硝酸银液中加浓氢氧化铵，则形成很厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为之。再将备用的硝酸银慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为之。如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。 11．改良利夫森（Leifson’s）鞭毛染色液 A：20％单宁（鞣酸）；B：饱和钾明矾液(20%)；C：5％石炭酸；D：碱性复红酒精（95％）饱和液。 将以上各液于染色前1~3d，按B加到A中，C加到A、B混合液中，D加到A、B、C混合液中的顺序，混合均匀，马上过滤15~20次，2~3d内使用效果较好。 12．石炭酸复红染色液 A液:碱性复红，95%乙醇10mL；B液：石炭酸（苯酚）5g，蒸馏水95mL。 先将染料溶解于乙醇，将苯酚溶于水，AB两液混合即可。
常用染色液的配制
常用染色液的配制 1.吕氏（Loefflev）美蓝染色液 A液：2%美蓝（Methylene blue）95%酒精溶液 B液：10%KOH溶液 取A液30ml、B液0.1ml与100ml蒸馏水混合。 2.石炭酸复红染色液 A液：4%碱性复红（basic fuchsin）95%酒精溶液 将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解、 配成A液。 B液：5%石炭酸溶液 取A液10ml、B液90ml混合即可。一般可将此溶液稀释5-10倍使用。 但稀释液易变质失效，一次不宜多配。 3.革兰氏（gram）染色液 （1）草酸铵结晶紫染液： A液：1%结晶紫（Crystal violet）95%酒精溶液 B液：1%草酸铵（Ammonium oxalate）溶液 取A液20mlB液80ml，静置48/小时后使用。 （2）路哥氏（Lugol）碘液： 碘片1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300ml 先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液另，待碘全部 溶解后，加够水即成。 （3）95%酒精溶液 （4）蕃红（沙黄）复染液： 2.5%蕃红（Safranlne O）95%酒精溶液。 取此液10ml与90ml蒸馏水混匀即成。 4.芽孢染色液 （1）5%孔雀绿(Malachite green)溶液。 （2）0.5%蕃红溶液。 （3）苯酚品红溶液 称取11g碱性品红溶于100ml无水酒精中。 再取上述溶液10ml与100ml 5%的苯酚溶液混合，过滤备用。 （4）黑色素(nigrosin)溶液 10%黑色素溶液，置沸水浴中30min后，滤纸过滤二次，补加水到100ml，
抗酸染色液
抗酸染色液 【产品名称】 抗酸染色液 【包装规格】 货号：DM0035 单瓶包装规格分别为：20ml、100ml、250ml、500ml、5000ml； 每套/盒包装规格分别为： 3×20ml/盒、3×100ml/盒、3×250ml/盒、3×500ml/盒。【预期用途】 用于分枝杆菌、诺卡菌等抗酸性菌的涂片染色。 【检验原理】 本染色方法系在参照世界卫生组织(WHO)所推荐的标准Ziehl-Neelsen法进行改良的，主要用于对结核杆菌等抗酸性菌的化学染色，抗酸染色有两种常用方法：①碱性复红法又称萋-尼氏(Ziehl-Neelsen)法；②荧光染料金胺O法(也称金胺罗丹明法)。本染色液采用的是改良碱性复红法，可以不用加温，属于Kinyoun冷染色法，无需加热，相对较抗酸热染液安全，其染色原理是在室温条件下分枝菌酸与复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。结核菌、麻疯杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜而不易着色，但一经着色后经酸性乙醇的作用亦是不容易把它脱色，利用此特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸性乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色(红色),也就易于鉴别。【主要组成成分】 试剂组成主要成分 1、石碳酸复红染色液苯酚、品红 2、酸性乙醇脱色液盐酸、乙醇 3、亚甲蓝染色液亚甲蓝 【储存条件及有效期】 5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部份，于玻片正面均匀涂抹卵圆形痰膜，自然干燥，染色前加热固定。 【检验方法】 1、挑取待检样本，涂布于载玻片上，自然干燥或火焰固定； 2、滴加石碳酸复红染色液盖满玻片，染色； 3、无需加热，流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水； 4、自玻片边缘滴加酸性乙醇脱色液盖满玻片，脱色，如有必要，需流水洗去酸性乙醇脱色液，再次脱色至无红色为止；
几种常用的染色方法精编版
几种常用的染色方法公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]
几种常用的染色方法 1．美蓝染色法在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。 2．革兰氏染色法 （1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。 （2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。 （3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。 （4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。3．抗酸性染色法 （1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。 （2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。 （3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。 （4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。 以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。 对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 4．瑞氏染色法
（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。 （2）另一方法抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法 （1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。 （2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法 （1）染色液配制 ①美蓝溶液美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ②碱性复红溶液碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 （2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ③水洗后、吸干、镜检。
GUS染色液配制
G U S染色液配制 Prepared on 24 November 2020
一染色液配制 1）X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100μL，保存于-20℃。 2）X－Gluc基液（50mM PBS，）。配制方法： 50mM NaH2PO4·100ml； 50mM Na2HPO4 100ml共同溶解； Na2EDTA （10mM，372mg）， Triton-100（％，100μl）, K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）（，） K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）（，） 染色液：50μl X-Gluc母液＋450μl基液 需要试剂：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）； N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ； NaH2PO4； Na2HPO4 ； Na2EDTA ；Triton-100； K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）； K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾） 二染色方法： 1.将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃保温1小时至过夜。 2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。 3.肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。
三实验原理 适宜的反应条件下，β- 葡萄糖苷酸酶（GUS）可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。 gus基因是目前常用的一种报告基因，是β－D－葡萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶 (GUS)能催化裂解一系列的β－葡萄糖苷酸，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β-D-葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。 gus基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体细胞和组织部位，这是其它报告基因所不能及的。 四注意事项 用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1- 3mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。
常用染色液的配制
附录二：常用固定液和染色液的配制 常用染色液的配制 1. 番红水液 番红0.1g溶入蒸馏水,定溶至100ml。 2. 番红酒液 番红0.5g或1g溶入50%酒精,定溶至100ml。 3. 固绿染液 固绿0.1g溶入95%酒精，定溶至100ml。 4. 碘-碘化钾染液 碘化钾溶入100ml蒸馏水，再加入1g碘，溶解后即可使用。 5. 苏丹Ⅲ（或Ⅳ）染液 将0.1g苏丹Ⅲ或Ⅳ溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。6.改良苯酚品红染液 原液A：将3g碱性品红溶入100ml 70%酒精，此液可长期保存。原液B：将10mlA液加入到90ml 5%苯酚水溶液中。 原液C：将55mlB液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。染色液：取C液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混匀，再加入1g 山梨醇，放置14天后使用，可保存3年。 7. 间苯三酚染液 将5g间苯三酚溶入100ml 95%酒精（若溶液呈黄色，即为失效）。 8. 中性红染液
将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水，用时稀释10倍。 9. 钌红染液 将5~10mg钌红溶入25~50ml蒸馏水，现用现配。 10.龙胆紫染液 将0.2g龙胆紫溶入100ml蒸馏水。现常用结晶紫代替。必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。 11.铁醋酸洋红染液 先将100ml 45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g洋红粉末（切记不可一次倒入）。待全部倒入后，再煮沸1~2min，并悬入一生锈的小铁钉于染液中，过1min 后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。 12.苏木精染液 苏木精的配方很多，常用的有如下3种： 配方Ⅰ：苏木精水溶液 0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。 配方Ⅱ：代氏苏木精（Delarfield’s haematoxylin） 甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml 乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml 丙液：甘油25ml + 甲醇25ml 分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加
常用染色剂的配方
常用染色剂的配方 常用染色剂的配方 （一）天然染料 1、苏木精（Hematoxylin）苏木精是从南美的苏木（Haematoxylon campechianum）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。 2、洋红（Carmine）洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出胭脂红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。 3、靛蓝洋红（Indigo carmine）是由木蓝（Indigofera）提出的靛蓝（Indigo）加上亚硫酸钠而成。为蓝色酸性染料，作为细胞质的染色剂。常与苦味酸合成苦味酸靛蓝洋红（picro-indigo-carmine），呈绿色，可与碱性品红作对比染色。 4、地衣红（Orcein）是由地衣（Lecanora parella）中取得的染料，可在酸性或碱性溶液中染色。植物细胞学中应用较多，尤其对于某些植物的染色体染色，效果比醋酸洋红更好。配制方法与洋红相似，通常也多溶入醋酸中（2.2％）染色。现在已多用其人工合成染料。 （二）人工染料 人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。 1、酸性品红（Acid fuchsin）酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。它跟甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色
丽春红(Ponceau S)染色液的配制及使用
丽春红（Ponceau S）染色液的配制及使用 丽春红（Ponceau S）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulose membrane）和醋酸纤维素膜（cellulose acetate membrane）上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。 丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。因此，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。 注意：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。 使用说明 将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动5-10分钟或更长时间；取出印迹膜，用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，可出现清晰条带，记录结果；用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的WB 检测。 补充：丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶，不过，在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶，起到固定蛋白的作用。 丽春红染色液的配制 常用的丽春红染色液有两种：一种用乙酸配制，另外一种用三氯乙酸（TVA）和5-磺基水杨酸（5-Sulfosalicylic acid）配制。配制方法如下： 一、用乙酸配制成分：0.1%（w/v）丽春红，5%（v/v）乙酸，ddH2O。 4 ℃保存，不要冻上。也可以配成“0.2%（w/v）丽春红，3%（v/v）乙酸，ddH2O”。
二、用三氯乙酸和5-磺基水杨酸成分：2% （w/v）丽春红，30%的三氯乙酸，30%的5-磺基水杨酸。
常用染色剂
常用染色剂 实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制 生物标本常用染料性能简介 （一）天然染料(Natural Dyestuff) 1、苏木精苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。 苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。 2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。 洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。 （二）人工染料(Synthetic dyestuff) 人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。 1、酸性品红酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染，能显示线粒体。 组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。 2、刚果红刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水和酒精，遇酸呈蓝色。他能作染料，也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可
实验室做细胞常用染色
实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法 一、爬片前盖玻片处理方法 对于悬浮培养的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。为了保证细胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必须使其牢固贴附于载玻片上。在载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一。能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法。 1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂(如Decon)浸泡5min，间或振荡。 2、用自来水冲洗5min。 3、以1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡5min。 4、烤箱干燥(至此即可用于普通染色)。 5、多聚L-赖氨酸(1:10溶于去离子水)浸泡5min，振荡。 6、入60℃烤箱1 h，或室温过夜干燥(用于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学)。 二、细胞固定常用方法 固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。 ..
1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。 2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制片；对盖片单层培养物来说，将盖片从培养器皿中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。 3.常用固定液：常用的固定液分两类，一类是以单一化学物质配成的固定液，称简单固定液。主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。另一类是用两种或两种以上化学物质配合成的固定液，称混合固定液。如Mueller固定液、Flemming固液、FAA固定液、 Carnoy固定液、Rossman固定液、Altmann固定液、Bouing固定液等。不同的固定液对细胞的化学成分、酶类及细胞结构固定效果不同。因此，选择合适的固定液是达到固定目的的基础。 (1)4％甲醛-PBS:甲醛是一种气体，其饱和水溶液无色，约含40％甲醛。在很多情况下，甲醛常常产生多聚甲醛的白色沉淀。4％甲醛-PBS使组织变硬速度比乙醇快，并能较好地保存组织的外部形式，固定效果不受制片影响，固定材料可用木精和其他合成染料染色。甲醛的穿透力较强，对组织固定均匀，能增强组织的弹性，大标本的固定和保存多用甲醛。甲醛是染色体、线粒体和高尔基体的固定液，在冷冻切片中，甲醛作固定剂具有显著的优点。用40％甲醛水溶液:PBS=1:9配方制备甲醛固定液。 ..
常用染色液的配制.
1. 番红水液 番红0.1g溶入蒸馏水,定溶至100ml。 2. 番红酒液 番红0.5g或1g溶入50%酒精，定溶至100ml 3. 固绿染液 固绿0.1g溶入95%酒精，定溶至100ml。 4. 碘腆化钾染液 碘化钾溶入100ml蒸馏水，再加入1g碘，溶解后即可使用。 5. 苏丹川（或W）染液 将0.1g苏丹川或W溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。 6?改良苯酚品红染液 原液A：将3g碱性品红溶入100ml 70%酒精，此液可长期保存。 原液B：将10mlA液加入到90ml 5%苯酚水溶液中。 原液C:将55mlB液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。 染色液：取C液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混匀，再加入1g山梨醇，放置14天后使用，可保存3年。 7?间苯三酚染液 将5g间苯三酚溶入100ml 95%酒精（若溶液呈黄色，即为失效）。 8. 中性红染液 将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水，用时稀释10倍。 9. 钉红染液 将5~10mg钉红溶入25~50ml蒸馏水，现用现配。 10龙胆紫染液 将0.2g龙胆紫溶入100mI蒸馏水。现常用结晶紫代替。必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。 11铁醋酸洋红染液 先将100ml 45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g 洋红粉末（切记不可一次倒入）。待全部倒入后，再煮沸1~2min,并悬入一生锈的小铁钉于染液中，过1min后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。 12苏木精染液 苏木精的配方很多，常用的有如下3种： 配方I:苏木精水溶液 0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。 配方H：代氏苏木精（Delarfield ' s haematoxylin 甲液：苏木精1g +无水酒精6ml 乙液：硫酸铝铵（铵矶）10g +蒸馏水100ml
SDS-PAGE所有详细试剂配方
S D S-P A G E 30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide 【组分浓度】 各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g) 30%Acr-Bis(29:1) 1000ml 100ml 29%Acrylamide(丙烯酰胺) 290g 29g 1%BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 10g 1g 【配制方法】 将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45μm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。 【保存条件】 4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存 【注意事项】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer) 【组分浓度】1MTris-HCL 名称用量备注 Tris 12.1g 去离子水80ml 浓盐酸9ml (36%的浓盐酸)预实验已确定 去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存 【配制方法】 称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH 值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 【保存条件】 室温保存。 【注意事项】 对人体有刺激性，请注意适当防护。 1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer) 【组分浓度】1.5MTris-HCL 名称用量备注 Tris 18.17g 去离子水80ml 浓盐酸3ml (36%的浓盐酸)预实验已确定 去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存 【配制方法】1L
染色剂配制
常用染色液的配制 1．草酸铵结晶紫染色液 A液：结晶紫2.5g，95%乙醇25mL。 B液：草酸铵1.0g，蒸馏水1000mL。 制备时，将结晶紫研细，加入95%乙醇溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合静止48h后，过滤后使用。 2．鲁格尔氏（路戈氏）碘液 碘1.0g，KI 2.0g，蒸馏水300mL。先用3~5 mL蒸馏水溶解KI，再加入碘片，稍加热溶解，加足水过滤后使用。 3．脱色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液：95％乙醇70mL，丙酮30mL 4．沙黄（番红）染色液 2.5％沙黄（番红）乙醇溶液：沙黄（番红）2.5g，95%乙醇100mL。 此母液存放于不透气的棕色瓶中，使用时取20mL母液加80mL蒸馏水使用。 5．0.1％美兰染色液 0.1g溶解于100mL蒸馏水中。 6．吕氏碱性美蓝色染色液 A液：美蓝0.3g，95%乙醇30mL。 B液：KOH 0.01g，蒸馏水100mL，分别配制A液和B液，混合即可。 7．瑞氏染色液 瑞氏染料粉未0.3g,甘油3mL，甲醇97mL。将染料放乳钵内研磨，先加甘油，后加甲醇，过夜后过滤即可。 8．5％孔雀绿水溶液（芽孢染色用） 孔雀绿5.0g,蒸馏水100mL。先将孔雀绿放乳钵内研磨，加少许95％乙醇溶解，再加蒸馏水。 9．黑色素水溶液（荚膜负染色用）
黑色素10g，蒸馏水100mL，40％甲醛（福尔马林）0.5mL。将黑色素溶于蒸馏水中，煮沸5min，再加福尔马林作防腐剂，用玻璃棉过滤。 10．硝酸银鞭毛染色液 A液：单宁酸5.0g，FeCL3 1.5g，福尔马林(15%) 2.0mL，1%NaOH 1.0mL，蒸馏水100mL。 B液：AgNO3 2.0g,蒸馏水100mL。 将AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其它的90mL硝酸银液中加浓氢氧化铵，则形成很厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为之。再将备用的硝酸银慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为之。如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。 11．改良利夫森（Leifson’s）鞭毛染色液 A：20％单宁（鞣酸）2.0mL；B：饱和钾明矾液(20%) 2.0mL；C：5％石炭酸2.0mL；D：碱性复红酒精（95％）饱和液1.5mL。 将以上各液于染色前1~3d，按B加到A中，C加到A、B混合液中，D加到A、B、C混合液中的顺序，混合均匀，马上过滤15~20次，2~3d内使用效果较好。 12．石炭酸复红染色液 A液:碱性复红0.3g，95%乙醇10mL；B液：石炭酸（苯酚）5g，蒸馏水95mL。 先将染料溶解于乙醇，将苯酚溶于水，AB两液混合即可。 13．乳酸石炭酸棉蓝染色液 石炭酸（苯酚）10g，乳酸（比重1.21）10mL，甘油20mL，棉蓝（苯胺蓝）0.21g，蒸馏水10mL。 将石炭酸加入蒸馏水中，加热溶解，再加入乳酸和甘油，最后加棉蓝。 附录Ⅴ：常用缓冲液的配制 1．pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）（20℃pH值7.0~7.1） 甲液：KH2PO4 34.0g，蒸馏水1000mL；乙液：K2HPO4 43.6g，蒸馏水1000mL。 甲液二份和乙液三份混合即可。
染色常用助剂
染色常用助剂 一：酸类 1：硫酸分子式H2SO4无色或棕色得油状液体，强氧化剂，腐蚀性机吸水性极强，遇水大量放热，稀释时必须将酸加到水中去，而不可以相反地进行，用作酸性染料，酸性媒介染料，酸性铬合染料得助染剂，羊毛炭化用剂等。 2：醋酸（乙酸）分子式CH3COOH,简写HAC，无色透明有刺激臭液体，冰点14度，有腐蚀性，能灼伤皮肤，用作弱酸浴酸性染料，酸性媒介染料，中性络合染料得助染剂 3：蚁酸（甲酸）分子式HCOOH,无色透明有刺激臭液体，有还原作用，腐蚀性很强，在寒冷天气容易结冰，蚁酸蒸汽可燃烧，有毒性，用作酸性染料，酸性媒介染料得助染剂等。 4：草酸（乙二酸）分子式H2C2O4、2H2O，白色结晶，在干燥空气中能分化成白色粉末，酸性强，有毒性，易分解被氧化，稍溶于冷水，易溶于热水、乙醇与醚，用作洗除铁锈斑渍。
二：碱类 1：氢氧化钠（烧碱）分子式NaOH，氢氧化钠含量固体95—99、5%，液体30--45%，固体氢氧化钠为白色，容易潮解，溶于水放出高热，腐蚀性极强，能使动物纤维破环，对皮肤能起剧烈得灼伤，容易自动从空气中吸收二氧化碳成碳酸钠，容器应当蜜蜂，用作还原染料溶剂以及体论染色后取出净色用得净洗剂。 2：碳酸钠（纯碱）分子式Na2CO3，无水碳酸钠为黛色粉末或细粒状，在空气中吸收水分与二氧化碳，结块并生成碳酸氢钠，溶于水，含水碳酸钠有一份水，七份水，十份水三种。用作羊毛助洗剂，直接染料、硫化染料染棉以及粘纤得助染剂，活性染料固色剂，羊毛炭化中与剂。 3：氢氧化铵（氨水）分子式NH4OH,无色透明或微黄色液体，有刺激臭味，能使人流泪，应盛于密封得容器内，受热易分解生成氨气，体积膨胀容易爆破容器，千万要注意不要使装氨水得容器受热或者阳光直晒。用作助洗剂，酸性络合染料染色后中与剂。 4：三乙醇胺分子式N(OH2CH2OH)3,无色粘稠液体，微具氨得臭味，暴露在空气中容易变黄，有吸湿性，可溶于水，对铜铝有腐蚀性，用于脲醛，氰醛树脂初缩体得中与剂 三：氧化剂