草莓脱毒种苗研究进展

草莓组脱毒种苗培育研究进展

马宗新

阜阳市农业科学院

摘要：本文综述了2006年-2013年最近几年来国内草莓脱毒种苗研究进展，提出了草莓脱毒种苗下一步研究的发展对策。

引言：

草莓（Fragaria x ananassa ）是蔷薇科（Rosaceae）草莓属的浆果，为多年生草本植物，世界各地均有栽培。自20世纪30年代以来，世界上很多国家都开展了草莓病毒病的研究，弄清了病毒病的发生和为害状况,实现了草莓无病毒栽培,获得了良好的经济效果。我国是草莓的原产地之一，近年来，我国引进了一大批优良的草莓品种，生产发展很快，但草莓病毒病也随之加重。[2、4、11、13、12]我国也曾对草莓主载区的病毒种类及其危害情况进行了调查研究。[11,12]但由于我国起步较晚，投入力量少，就全国而言，仍处于种类不清，情况不明之中。目前，世界各地已报道的草莓病毒病大约有30多种。[12]其中对生产造成严重损失的病毒病害主要由草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus ,SMV)、草莓皱缩病毒(strawberry crinkle virus , SCV)、草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus，SVBV)、草莓轻型黄边病毒( strawberry mild yellow edge virus ,SMYEV)等4种病毒引起。[9,12]草莓病毒的发生具有特殊的复杂性，大部分草莓病毒都具有潜伏特性，在栽培种草莓上很少产生明显的症状，草莓病毒侵染的另一特点是，一些主要病毒常常是复合侵染，因此，对草莓病毒病的

草莓无毒苗繁育技术

草莓无毒苗繁育技术 1草莓脱毒技术 1.1热处理与茎尖培养脱毒 1.1.1热处理将盆栽小苗2个月后或未经脱毒的试管苗置于恒温箱中,在35～40 ℃条件下变温处理4～5周。白天保持40 ℃处理5h,夜间在35 ℃下处理6h。处理过程中空气湿度不宜过高,一般维持在50%～70%,盆栽苗土壤水分保持在草莓苗生长不萎蔫为宜。 1.1.2茎尖培养(1)材料消毒:将热处理后的匍匐茎剥去外层大叶,用自来水冲洗3~6h后,对材料进行表面消毒。消毒的药品及其使用方法有多种,常用的有两种:①用70%酒精漂洗3~5s,再用0.10%~0.20%次升汞或6%~8%次氯酸钠浸泡2~3min,然后把材料移到超净工作台上;②用70%酒精漂洗3~5s,再用0.10%新洁尔灭浸泡5~10min,然后用1%过氯乙酸浸泡2~5min,然后把材料移到超净工作台上。 (2)接种:材料消毒后,在超净工作台上冲冼3~5次,然后置于双筒解剖镜下,一层层地剥去幼叶和鳞片后,切取0.40~0.50mm,带有2~4个叶原基。将这个生长点用细长的解剖针挑出,转接到培养基中。(3)培养基成分:草莓分化培养基为MS+BA 0.50mg/L+GA 30.10mg/L+IBA 0.50mg/L。(4)培养条件:温度25~30℃,光照强度1500~2000LX,每天光照10h左右。培养20~35d后,即开始分化新芽,新芽不断生长增殖,形成小的芽丛。 1.2花药培养脱毒苗 花药培养的目的,是培育源于花药内部花粉粒的单倍体植株,并使单倍体加培,作为育种材料的来源。但经大量实验表明,草莓花药培养所得的植株有95%以上是能开花结果的多倍体,而且生长发育优于母株。同时,经愈伤组织培养出来的花药植株不带病毒。花药培养不仅可快速获得草莓无毒植株,而且可以省去病毒鉴定工作,对基层生产应用实为一举两得的事情。 1.2.1花药培养方法取花药发育期处在单核靠边期、未开放的小花蕾,用与茎尖消毒同样的方法消毒后,在超净工作台上用镊子取下所有花药(不带花丝),接种到装有培养基的三角瓶中。 1.2.2培养基成分花药培养的第一阶段是诱导愈伤组织,培养中加2.4-D或萘乙酸(NAA);第二阶段是愈伤组织形成后转入茎叶分化培养基中,诱导出再生植株。茎、叶分化培养基通常除去生长素,保留细胞分裂素。(1)诱导愈伤组织培养基:GD培养基+2.4-D 1 mg/L。 (2)诱导再生植株培养基:MS培养基+BA 0.50~1 mg/L。有些品种可以用一种

草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究

1 草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究 项 目 总 结 报

告 主持完成单位：商丘市农林科学研究所 二0一0年十二月 2 目录 一、项目来 源……………………………………………………………………1 二、项 目实施的意义和依据 (1) （一）品种来源 (1) 1、丰香—草 莓 (1) 2、特征特性 (1) 3、脱毒丰香草莓 (2) （二）项目实施的目 的..................................................................3 1、总体目标 (3) 2、研究组织培养脱毒快繁，加速示范推广，促进农村经济发展 (3)

（三）项目实施的意 义 (3) 1、提高果品产量和质量，增强市场竞争能力 (4) 2、生产无公害果品，促农民致富................................................4 3、发挥增产增收效益潜力，促进产业结构调整 (4) （四）项目实施依据 (4) 1、研究与实施的理论依据.........................................................4 2、“丰香草莓”组织培养技术路线................................................5 3、草莓组织培养的优点............................................................5 三、丰香-草莓的组织培养技术研究 (6) （一）草莓-“丰香”脱毒技术研究…………………………………………… 6 1、研究目的…………………………………………………………………6 2、供试材料…………………………………………………………………6 3、 组织培养环境条件……………………………………………………6 4、 材料的选择与处理……………………………………………………6 5、 生长点的剥取……………………………………………………………7 6、 诱导方法…………………………………………………………………7 7、 病毒的检测……………………………………………………………8 8、 无病毒原种的保存和繁殖………………………………………………8 （二）“草莓-丰香”脱毒与快繁培养基筛选研究………………………………8 1、

草莓组织培养

草莓的组织培养 一、茎尖 1．概述通过对草莓茎尖离体培养的试验研究表明：取草莓茎尖为外植体，以0．35 mm大小为宜；用MS+0.5 mg/L 6-BA+O.2 mg/L NAA培养基． 不定芽再生率高；以1/2 MS+O.1 mg/L IBA 生根效果最好。 2.结论（1）再生途径：草莓刚抽出的匍匐茎的茎尖 （2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理，最后用无菌水冲洗5～8次，接种于诱导培养基中。诱导培养基为MS+0．5 mg／L6一BA+0．2mg／L NAA+3 蔗糖(w／v)+0．5﹪卡拉胶，pH值为5.6～5.8。每个灭菌处理接种2O枚外植体，l5d后观察记录外植体的污染、死亡、无菌成活生长等情况。 （3）培养基： ①芽诱导试验，于MS培养基附加0．2 mg／L NAA、IAA、IBA不同种类生长素的培养基中，20d后调查记录幼芽分化情况。 ②继代培养与扩大繁殖，MS培养基附加0.5 mg/L6-BA、0.01 mg/L NAA。 ③根诱导试验, 用1/2 MS附加不同浓度(mg/I )IBA 有0．05、0．1、0．2、0．5及不加IBA的5个处理. （3）条件：培养基均在1～ 1.1大气压下热压灭菌20min。培养温度(25± 2)℃。每日光照12h，光强2 000Lux。 （1）再生途径：用其花药、花蕾、叶、叶柄、子叶、下胚轴等作外植体进行离体培养。 （2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理. （3）培养基：①MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L(浓度单位,下同)；②MS+6一BA0.5+KT 0.5；③MS+BA2.0+IAA 1.0；④MS+BA2.0+NAA0.5+2,4-D0.1；⑤MS+BA2.0+IBA0.1。以上培养基各加CH 100 mg/L，蔗糖20g/ L(①为30g/ L)。 ①用于花药诱导培养基； ②用于花药幺伤组织分化培养； ③、④用于其余5种外植体(叶盘、叶柄、下胚轴、子叶、花蕾)诱导培养；⑤仅用于花蕾培养。 （4）条件：培养条件均为12 h光照12 h黑暗。光强度1200-1500lx、温度(25 ±2)℃。 三、叶片以红颊、章姬、丰香草莓叶片为试材，对影响草莓叶片不定芽再生的主要因素进行了试验研究，建立了草莓离体叶片的再生体系。试验结果表明，基因型、不同激素种类和配比直接影响了草莓叶片再生芽的发生。基因型是影响草莓叶片再生能力的决定因素，不同激素配比是不定芽产生的关键因素。 叶片愈伤组织的诱导培养基以MS+TDZ 2~3mg／1较理想， 芽伸长的理想培养基为MS+6一BA 0．3～O．5mg／l， 生根培养基以1／2MS+IBA0．3mg／1较适宜，移栽成活率可达90％以上。 2.结论（1）再生途径：先采取当年生匍匐茎茎尖培养繁殖，建立起三个品种的无性繁殖系；再从继代3周的无菌苗上剪取叶片作为外植体，进行不同的处理，每瓶接10片叶盘，每处理重复5瓶。 （2）灭菌方法：于121℃下高温高压蒸汽灭菌20min。

植物组织培养之草莓的脱毒与快速繁殖

一、草莓简介 草莓是对蔷薇科草莓属植物的通称，属多年生草本植物。草莓的外观呈心形，鲜美红嫩，果肉多汁，含有特殊的浓郁水果芳香。 草莓具有极其丰富的营养价值。 1、（丰富的胡萝卜素）草莓中所含的胡萝卜素是合成维生素A的重要物质，具有明目养肝作用; 2、（滋补调理）草莓对胃肠道和贫血均有一定的滋补调理作用; 3、（治病）草莓除可以预防坏血病外，对防治动脉硬化，冠心病也有较好的疗效; 4、（防癌）草莓是鞣酸含量丰富的植物，在体内可吸附和阻止致癌化学物质的吸收，具有防癌作用; （回主页） 草莓营养价值高，口味好，深受消费者喜爱，特别是近几年种植面积大幅提高。但由于病毒病的传播感染，导致草莓品种种性退化，产量、品质下降，商品率降低，严重影响了草莓的发展。 下面就简单介绍几种草莓易得的病： 二、草莓易得的病 1、叶斑病：又称蛇眼病，主要为害叶片、叶柄、果梗、嫩茎和种子。在叶片上形成暗紫色小斑点，扩大后形成近圆形或椭圆形病斑，边缘紫红褐色，中央灰白色，略有细轮，使整个病斑呈蛇眼状，病斑上不形成小黑粒。 2、白粉病：主要为害叶片，也侵害花、果、果梗和叶柄。叶片上卷呈汤匙状。花蕾、花瓣受害呈紫红色，不能开花或开完全花，果实不膨大，呈瘦长形；幼果失去光泽、硬化。近熟期草莓受到为害会失去商品价值。 3、灰霉病：是开花后的主要病害，在花朵、花瓣、果实、叶上均可发病。在膨大时期的果实上，生成褐色斑点，并逐渐扩大，密生灰霉使果实软化、腐败，严重影响产量。 4、根腐病：从下部叶开始，叶缘变成红褐色，逐渐向上凋萎，以至枯死。支柱在中间开始变成黑褐色而腐败，根的中心柱呈红色。 5、黄萎病：该病是土壤病害，主要症状是幼叶畸形，叶变黄、叶表面粗糙无比。随后叶缘变褐色向内凋萎，直到枯死。 6、除此之外，草莓还容易有一些病虫危害，例如： 线虫危害：寄生在草莓组织中，危害叶柄、芽、根等，使被害器官变成红色，严重时植株枯死。 蛴螬危害：在草莓收获期和八九月份咬食根、茎，使植株枯死。 （回主页） 根据报道，侵染草莓的病毒多达二十多种。长期大田分株繁殖容易使草莓植株中病毒积累，导致草莓品种退化,，严重影响经济收益。所以利用先进的技术使草莓脱毒，以及后期的快速繁殖已成为草莓业发展的必要环节。 下面就来详细介绍草莓的脱毒与快繁。

草莓品种介绍

十二师农业科学研究所草莓脱毒种苗繁育基地 近年来，十二师及兵团大力发展特色草莓产业，草莓种植规模逐渐扩大，但是在草莓生产中存在所用的草莓种苗多为外地引进，种苗质量不能得到保证。另外，草莓繁殖主要靠葡匐茎分株提供种苗，在长期无性繁殖中，植株往往积累多种病毒，导致种苗退化，产量和品质下降，已成为阻碍草莓生产的主要问题。为了解决上述问题，十二师农业科学研究所于2012年建立了组培中心，开展了草莓脱毒苗快繁技术的研究与示范工作。目前引进国内外草莓优良品种14种，实验室离体保存种质资源12种，品种包括：红颜、章姬、甜查理、阿尔比、蒙特瑞、点雪、隋株、宁玉、小白、御用、圣安得瑞斯、达赛、辽丹、卡尔特1号。 通过对草莓茎尖脱毒技术、培养基配方正交试验技术、病毒检测技术、基质育苗技术及种苗繁育技术的集成，总结制定出草莓脱毒种苗繁育技术规程，建立了草莓脱毒苗组培快繁技术体系和草莓脱毒种苗三级繁育基地。目前基地拥有脱毒苗种苗繁育网室30座，2014年至2015年基地向十二师各团场及兵团各师，如二师、三师、六师、九师、十师、十三师、昌吉地区及石河子大学等提供脱毒草莓种苗45万株，实现销售收入80.5万元。改变了十二师及兵团其它各师草莓种植区域所需草莓脱毒苗主要依靠内地供应的局面。

主要草莓品种介绍 1、四季草莓品种（日中性）蒙特瑞：美国加州品种，日中性，可周年结果，高产；促成栽培条件下果实上市早，植株旺盛；果实品质极佳，回味非常甜；抗病性强，适合于夏（春）季栽培。 2、短日照草莓品种甜查理：美国早熟品种，休眠期浅、丰产、抗逆性强、大果型，植株生长势强，最大果重60g以上，平均果重25-28g，亩总产量高达2800-3000kg，年前产量可达1200-1300kg，果实商品率达90%-95%，鲜果含糖量8.5%-9.5%，栽培管理容易。 3、短日照品种红颜：日系品种，果实个大畸形果少，可溶性固形物含量9%-14%，味浓甜，芳香，果色艳丽美观，柔软多汁，一级序果平均40g，最大果重130g，果实较软，抗病性差。适合于日光温室栽培，主要目标市场是礼品、采摘等高价位水平。 4、御用（日系）：果实呈完美的圆锥形，果粒大，平均果重30g —40g，颜色鲜亮，表面具有透亮的蜡质层，有光泽，果肉细弹性好，自外向里呈酒红色，草莓香味独特、浓郁，入口多汁甜香，唇齿留香,回味无穷，品质极佳。 5、点雪：在北京选育的品种，果实呈圆锥形或纺锤形，果粒较大，平均单果重36.5克，果面色泽好，呈微粉的鲜红色，有绸缎般的质感，无髓心，含糖量高，酸度适宜，草莓香味十分浓郁，多汁且带有葡萄酒的香气，入口即化，维生素C含量高达110mg/100g。

草莓育苗技术详解.doc

草莓育苗技术详解 通常来说，草莓种苗的繁殖方法有匍匐茎繁殖法、分株繁殖法、组织培养法 和种子繁殖法等。 一、种子繁殖法 种子繁殖法是播种草莓的种子，通过一定的栽培管理获得草莓种苗的方法。 主要特点：成苗率低，生长速度慢，形状容易产生变异和分离，因此在生产上一般不采用，若家庭盆栽式生长可尝试。

二、组织培养法 通过培养草莓匍匐茎顶端的分生组织即茎尖，诱导出幼芽，然后通过幼芽的快速繁殖繁殖出幼苗的方法。 主要特点：比常规育苗生长旺盛，成活率高，品质良好。组培育苗繁殖快，一年内，一个分生组织可获得几万至几十万株幼苗，且不占用土地，不受环境的影响，但成本较高，适宜工厂化生产。 三、分株繁殖法 分株繁殖法，又称根茎繁殖法，俗称分墩法。用于某些不易发生匍匐茎的草莓品种，或更新换地的草莓园。

主要特点：不需要设立专门的育苗圃，不需要进行摘除多余的匍匐茎和在匍匐茎节上压土等工作。分株繁殖的系数低，质量较差，多带有分离伤口，容易受土传病菌侵染而感病。目前生产上除了急需用苗时，一般不采用此法繁殖苗木。 四、匍匐茎繁殖法 匍匐茎是草莓的主要繁殖器官，利用匍匐茎繁殖种苗是草莓最重要的繁殖方法。

主要特点：方法简单，能保持品种的遗传特性，伤口较小，繁殖系数高，管理便捷，既可以利用生产田直接采苗，又可以建立专门的育苗圃，是目前草莓主要采用的育苗方式。 值得注意的是，生产田育苗虽然省力省钱，但是技术要求比较高，育出的苗木常生长细 弱，花芽分化不良，定植后产量和果品均会受到影响，所以通常育苗与生产分开。想详 细了解生产田育苗的朋友可查看下面的视频。 草莓育苗技术要点 天气逐渐回暖，进入草莓育苗的适期，需提早确定地块备耕，选择优质种苗，起垄栽植，做好田间管理，为培育出优质的草莓种苗做好准备。 1、母株选择 选择品种纯正、生长健壮、无病虫害、有4片叶以上、根系发达的草莓植株作为生产用 母株。此外，繁殖用母株应取自繁殖圃内当年繁殖的健壮匍匐茎苗或假植苗，最好是脱 毒苗。如果是脱毒苗最好用原种苗，或用1代苗。

草莓脱毒方法

草莓脱毒方法 以药剂处理加茎尖培养可增加脱毒效果,如盐酸四环素对草莓的四种病毒都有一定的抑制作用。 覃兰英等(1988)将草莓在35℃下热处理7 d后,逐步升温至38℃,在湿度40%～68%、光照度4 000～5 000 Lx条件下热处理35 d后,将长出的新茎茎尖再行组培,可获得100%的脱毒苗。 大泽胜次(1982)在进行单倍体育种时发现花培植株的脱毒率达100%。此法不仅可快速繁殖出大量无毒植株,还可省去病毒鉴定工作,在育种与生产应用上可谓一举两得。利用花药培养脱毒苗,其成功与否与花蕾大小的选择有关,应选取处于密封状态的小花蕾,此时的花粉发育期为单核靠边期。花蕾的大小与不同的品种有一定的差异。高庄玉等(1993)用草莓花药组培,其脱毒率达100%，用幼叶和茎尖产生的愈伤组织其再生植株脱毒率只有20%。 艾勇、赵佐敏等(2000)用1/2MS+0.1 mg/L IBA+琼脂4.5～7 g/L+白糖20 g/L诱导丰香草莓试管苗生根,生根率可达100%。移栽时不用任何基质处理,采取试管苗一次性入土移栽(适温20～25℃,1周内保持空气湿度在95%以上),幼苗成活率可达85%, 花药培养 草莓花药培养是获得无毒苗的途径之一，其优点是操作简单，并能大量繁殖。薜光荣等经花药愈伤组织直接分化出花药植株的途径培育出沙尔普斯等5个品种的脱毒苗，脱毒苗在生长、结果、可溶性固形物含量等方面均超过对照株，果实总产和平均果重均大幅度提高。这表明，实现草莓的无病毒栽培，将会给草莓生产带来很大的经济效益。 花药愈伤组织的诱导和再分化培养过程，以添加2 mg/L的6-BA和0.2~1.0 mg/L的NAA 为宜；茎尖分化培养过程中添加6-BA的浓度为0.5~1.0 mg/L；继代分化快繁过程中,6-BA 浓度一定要掌控好，要求6-BA的浓度在0.5~1.0 mg/L范围内不断变换调节，3周左右继代快繁一次,这样苗子在整个继代快繁过程中才能保持生长健壮、分化系数高(达到8~10倍)、无褐化现象发生等。反之，如果6-BA浓度过高(>2 mg/L)时,苗子会出现脆化、黄化、过密、矮化等现象；过低(<0·25 mg/L)时，苗子会出现细弱、弯曲、过高、生根过多等现象，均不利于苗子的分化快繁。生根培养中添加6-BA浓度以0·25 mg/L为最好，苗子生长粗壮、根系发达,发根率为100%。 将花药接种到1号培养基（MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.1 mg/L+3%蔗糖）上，1周后花药陆续形成愈伤组织，达78.6%；1个月左右转接愈伤组织到2号培养基（MS+6BA 1 mg/L+NAA 0.l mg/L+3%蔗糖）上。注意观察，当芽长到lmm左右时转接到3号培养基（MS十6-BA 1mg/L+3%蔗塘）上，逐渐形成芽丛，1个月后，把芽丛分开成单芽再分别转接到新的3号培养荃上，让花继续分化生长;以后根据情况每隔10~30天转接一次.这样，年内每个分化组

草莓穴盘基质育苗技术

For pers onal use only in study and research; not f o r c o m m e r c i a l u s e 草莓穴盘基质育苗技术 作 者: admin时间：2017-08-22 10:14人气：26 C 一、匍匐茎子苗准备 选用优良可靠的、脱毒组培苗作为子苗繁育的母苗。 在春季建立草莓母苗繁殖圃，苗圃起高床，稀植，覆盖黑色塑料薄膜，当气温超过10 c时栽植母苗，苗床宽60cm，单行，株距30cm。 二、子苗采集 子苗标准：带1-2片叶，基部有小根，小根的长度短于1cm。 每隔10-14d从草莓繁殖圃采集一次子苗，选无病健壮匍匐茎上的子苗，留1-2cm的匍匐 茎。子苗采集后及时栽植，若不能及时栽植，需储藏，其方法是把一根长匍匐茎剪下，装在 塑料袋中，储存在温度0-0.5 C和相对湿度90%左右冷库中，存放时间不超过15天。 三、扦插穴盘和育苗基质 扌千插穴盘采用50孔穴盘，孔穴直径5cm，高度8cm。 育苗基质选用无毒无病原，透气性好的基质，基质材料不要用含发酵料的基质，避免扦插伤 口被菌类感染。 四、子苗扦插 草莓苗适宜苗龄为50天，根据栽植时间确定扦插时间。 扦插前清水先湿润基质，将匍匐茎子苗按大小分级扦插，将子苗置于穴盘孔中间，扦插宜浅 不宜深，基质不能盖过心叶，将匍匐茎固定好。

五、扦插后管理 1、水分、湿度管理：扦插后用细雾浇一次透水，然后基质表层保持，空气湿度90%以上；弥雾状态保持7 —10天，使叶片保持湿润，扦插3 —5天后可适当缩短弥雾时间，两周后根系逐渐发育形成，可停止弥雾状态。 2、光照管理：扦插后大棚顶上要覆盖遮阳网，进行避光管理。7 —10天早晚见一次光，10 —15天期间上午10点半至下午4点遮阴，以后逐渐全天见光。 3、营养管理：扦插苗两周后到成苗前，根据子苗生长情况，酌情追施1—2次全营养肥料，补充肥料选取水溶肥，冲施肥，要求磷钾含量高。 4、病虫害防治：苗期易发生蚜虫、红蜘蛛、白粉病、炭疽病等病虫害，及时防治。 草莓穴盘苗 草莓穴盘基质育苗技术 作者：admin 时间：2017-08-22 10:14 人气：26 °C 、匍匐茎子苗准备选用优良可靠的、脱毒组培苗作为子苗繁育的母苗。

红颜草莓茎尖组培脱毒苗技术研究_陈怀勐 (1)

生物技术 红颜草莓茎尖组培脱毒苗技术研究 陈怀勐 高 丽 路 河 陈明远 张 雷　 （北京金六环农业园，北京 102200 ） 摘 要为解决草莓的病毒病，进行草莓茎尖脱毒组培技术试验。北京金六环农业园2009年从日本引入试验用红颜草莓在北京金六环农业园组培室进行组培。取2.0～3.0 cm长的健壮草莓苗匍匐茎顶芽，灭菌、消毒后进行热处理、灭菌消毒处理，茎尖初代培养后进行继代培养，达到第5代后再生根培养20～35 d，然后进行草莓苗的驯化及移栽。结果显示：生根培养基中加入生长素IAA、IBA或NAA，可以大大提高诱导生根的速度和生根率，作用效果NAA＞IBA＞IAA。采用本研究方法获得的脱毒草莓苗进行大规模生产种植，草莓产量达3 500 kg/667 m2。关键词草莓；茎尖组培；脱毒苗技术 中图分类号 Ｓ　６６８．４文献标志码 Ａ Studies of Stem Tip Culture of Strawberry Virus-free Tissue Culture Technology Chen Huaimeng Gao Li Lu He Chen Mingyuan Zhang Lei Ａｂｓｔｒａｃｔ For a settlement of several virus diseases of strawberry and a set of stem strawberries virus-free tissue culture technology experiment. The experiment Hongyan strawberry were from japan by us to test in Beijing Jinliuhuan agricultural gardens in 2009. From 2.0～3.0 cm long and healthy seedlings stem strawberries, disinfection and cleaning and disinfection recover after treatment with stem the generation after a training and tsugiyo, to the ?fth generation to take root for 20～35 d, and strawberry the alpha and transplant. The results showed that root in the media to IAA、IBAor NAA that can vastly improve and strengthen the roots, effect was naa ＞iba＞iaa, adopt this method of strawberries in mass production of seedlings virus-free grow strawberries output up to 3 500 kg per 667 m2. Ｋｅｙｗｏｒｄｓ strawberry; stem tip culture; virus-free tissue culture technology 草莓茎尖组培脱毒苗技术属于组培育苗技术领域，涉及红颜草莓茎尖组培专用培养基及其生产脱毒苗的方法。草莓（Fragaria ananassa Ducde）是蔷薇科草莓属宿根性多年生常绿草本植物，属于多倍体，是一种靠匍匐茎进行无性繁殖的作物，传统种苗培育的方法是采用匍匐茎繁殖的无性繁殖方式，效率较低，不利于优良品种的推广，而且极易感染病毒。我国已鉴定明确的草莓病毒有4种，即草莓斑驳病毒（SMOV）、草莓轻型黄边病毒(SMYEV)、草莓皱缩病毒(SCRV)和草莓镶脉病毒(SVBV)。种苗普遍感染病毒是草莓生产中的瓶颈问题，感染病毒的草莓比未感染病毒的草莓长势弱、抗性差、产量明显下降，果品品质与商品性状变劣，严重影响了这一名优种植业的稳步发展。目前，解决草莓的病毒病主要是通过草莓脱毒组培技术，通过花药组织培养、微茎尖组织培养等技术脱去病毒病原获得无毒草莓再生植株，使草莓种苗恢复品种原种优良种性，以达到优质、高产的生产目的。草莓的茎尖培养是获得无病毒植株的重要途径。在茎尖培养过程中，应根据外植体来源和生长状况不同，对培养基中激素浓度的大小及相互之间的配比进行调整，从而得到某种材料及相应外植体的最适组培方法。 １　基因性状来源 红颜草莓（又称红颊草莓，日本99号，红脸颊）为大果型日本引进草莓新品种，是2012年世界草莓大会的主栽品种，北京金六环农业园2009年从日本引入，在北京金六环农业园组培室进行组培。连续结果性强，丰产性好，平均单株产量＞350 g，栽植密度为 6 000～7 000 株/ 667 m2，一般产量约 2 800 kg/667 m2，具有长势旺，产量高，果型大，口味佳，外观漂亮，商品性好等优点，鲜食加工兼用，适于大棚促成栽培，是一个很有发展前途的优良品种。其特征特性为株型高大清秀，茎叶色略淡。株高 28.7 cm，株幅 25.0 cm，花茎粗壮直立，花茎数和花量都较少。休眠程度较浅，略偏迟。花穗大，每个花序4～5 朵，花瓣易落，不污染果实。花轴长而粗壮。果实长圆锥形，果面和内部色泽均呈鲜红色，着色一致，外形美观，富有光泽。果型大，最大果质量110 g，平均单果质量 25 g (一代顶果平均质量 45 g)，可溶性固形物含量平均 14.3%。香味浓，酸甜适口，果实硬度适中。耐低温能力强，在冬季低温条件下连续结果性好，但耐热耐湿能力较弱，抗白粉病、炭疽病。红颜草莓育苗不易，初代培养脱毒效果差，污染及玻璃化问题，初代茎尖萌发率和繁育系数低，移栽成活率不高，继代快繁培养过程中，经常会出现一种生长异常的试管苗即玻璃苗。表现出植株矮小、叶色浅且皱缩，呈水晶样透明或半透明水渍状，茎叶变脆硬，易碎，严重影响繁殖率，给生产造成很大损失。 作者简介：陈怀勐（１９６９-），高级农艺师，从事农业技术推广工作。收稿日期：２０１０－１１－０５ 北京农业　２０１１　年　１　月下旬刊

草莓脱毒苗

1、意义与范围 丹东市是全国最大的草莓生产基地，草莓生产技术总体水平在国内处于领先地位，但总体单位生产效益还远不如发达国家高，最突出的瓶颈问题是种苗普遍感染病毒，与全国一样属带毒生产。感染病毒的草莓比未感染病毒的草莓长势弱、抗性差、产量明显下降，果品品质与商品性状变劣，严重影响了这一名特优种植业的稳步发展。 草莓脱毒组培技术是目前国际上仍普遍应用的高新实用技术，即通过花药组织培养、微茎尖组织培养等技术脱去病毒病原，使草莓种苗恢复品种原种优良种性，以达到优质、高产之目的。本技术报告以项目单位正在实施应用的微茎尖组织培养技术规定了草莓茎尖脱毒组培种苗繁育技术规范的选择优良品种、生产脱毒组培瓶苗、培育原原种苗、培育原种苗、繁育良种苗规程。应用范围适用于丹东地区。 2、草莓茎尖脱毒组培种苗繁育技术工艺过程 品种定向→选取田间健壮株匍匐茎尖或单株→清洗杀菌消毒→超净工作台解剖镜下剥离茎尖→接入接种培养基培养→继代增殖培养→瓶内生根→营养钵培育原原种苗→田间扩繁原种苗→田间扩繁良种苗→生产利用。 3、选择优良品种生产脱毒组培瓶苗 3.1选择优良品种 3.1.1日光温室：目前适宜品种为杜克拉、图德拉、章姬、枥乙女、丰香、幸香、鬼怒甘、宝交早生、安娜等。 3.1.2早春大棚：目前适宜品种为卡尔特一号、艾尔桑塔等。 3.1.3露地生产（加工型）：目前适宜品种为哈尼、森嘎那、达善卡等。 3.2生产脱毒组培瓶苗 3.2.1试验室要求 3.2.1.1无菌室 无菌室应设有隔离室，面积不小于10m2，墙壁光滑平整，地面平坦无缝，室内安装紫外线灯和超净工作台。 3.2.1.2试验室 试验室面积应不小于30m2，并应具备各种生产用化学药品、玻璃器皿、冰箱、恒温箱、普通天平、分析天平及实验平台等设施。 3.2.1.3培养室 培养室面积应不小于20m2，放置多层钢制培养架，采用日光灯补充光照，室内常年保持20-27℃，相对湿度保持在50-60%，每天光照12-14h。 3.2.1.4洗涤灭菌室 洗涤灭菌室面积应不小于10m2，有充足自来水，并配有高压灭菌锅、制作培养基平台及放置培养瓶的瓶架。 3.2.2设备要求 应具备高压灭菌锅、冰箱、培养皿、镊子、剪刀、普通天平、分析天平、双目解剖镜、显微镜、超净工作台、接种刀、恒温培养箱等设备。 3.2.3培养基制作 基本培养基为MS培养基。其中附加吲哚乙酸（IAA）4PPM，6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）2PPM，激动素（KT）2PPM。蔗糖30g/L，琼脂6g/L，PH值6.5。在1个大气压下，高压灭菌20分钟。 3.2.4外植体接入瓶内增殖培养完成的瓶内苗 采草莓匍匐茎尖或单株心茎，用自来水（符合饮用水标准）冲洗后在超净工作台上用消毒剂进行杀菌消毒，然后放在双目解剖镜下切0.2-0.6mm的生长点放入盛有培养基的瓶

草莓脱毒试管苗炼苗及移栽技术研究

草莓脱毒试管苗炼苗及移栽技术研究 曹善东 (临沂师范学院生命科学学院,山东临沂276005) 摘要 对草莓脱毒试管苗炼苗移栽技术及其影响因素进行了探讨研究,结果表明:培养瓶的开口方法、组培苗的根部冲洗、组培苗定植移栽的密度和方法,以及栽培棚室的温度、湿度等,均能影响草莓脱毒试管苗的成活及生长状况。通过试验,总结出一套适宜于草莓脱毒试管苗炼苗移栽的技术和方法。 关键词 草莓;脱毒苗;炼苗;移栽 中图分类号 S318 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2006)01-0017-02 Study o n Do mestica tion a nd T ranspla ntatio n of Straw berry V irus-free Plantlets C AO Sha n-do ng (Dep artment of Biology,Li nyi Teachers University,Lin yi,S han dong276005) Abstract Domestication and tran splantation tec hnol ogy and other factors th at affected survival rate and growth of stra wberry virus-free pl an tlets were stud-ied in this e xperi ment.The result s howed that all these factors cou ld affect survival rate and growth of strawb erry viru s-free plan tlets.These factors includ e opening m eth od of cultivation bottles,s will of plantlets roots,trans plan tation density and m eth od of plantlets,te mperature and hu midity of shed and other factors.Op ti mal en viron mental condi tions and a full set of good techn ology for su rvive an d growth of s trawberry viru s-free plantlets were fou nd i n this exp er-i ment. Key w ords Strawberry;Vi rus-free plantlets;Domestication;Tran splantation 利用组培快繁技术对草莓脱毒苗进行快速繁殖,可实现 草莓脱毒苗的工厂化育苗和草莓新品种的迅速推广。但在 植物组培过程中,试管苗移栽成活率太低,造成生产成本的 大幅度上升和整个生产的失败。为此,笔者对草莓脱毒试管 苗进行了炼苗移栽技术研究,找到了影响脱毒试管苗的炼苗 移栽成活率的影响因素,总结出一套适宜于草莓脱毒试管苗 炼苗移栽的技术和方法。 1 材料及方法 1.1 材料 草莓脱毒苗是从山东农科院引进的丰香品种组培试管苗。 1.2 方法 脱毒苗经过初代培养、继代组织培养,形成丛芽,选择继代培养中形成的大芽苗,分切后移入生根培养基中,用纸和聚丙烯膜封口。 生根培养基的基本培养基为MS培养基,在生根培养基中恒温培养20d。所得到的生根组培苗,根的长势良好,数量较多,不出现老化现象,这样的生根苗作为炼苗移栽试验研究用苗。 2 结果与分析 2.1 草莓脱毒组培苗炼苗技术 2.1.1 初步锻炼。首先将培养瓶上的扎口绳或皮筋松开,只去掉外层的聚丙烯膜,保留内层的白纸,不要将瓶口包扎物全部去掉,因为此时的草莓组培苗茎叶等组织器官表面还没有长出角质层,若暴露于空气中,极易因失水导致死亡。角质层的生长是一个循序渐进的过程,让组培苗初步接触空气,可诱导植株长出角质层。 2~3d后移去瓶口包扎物,让组培苗充分接触空气,再过2~3d后,组培苗对外界环境已逐渐适应,且培养基已开始长出菌类,此时进行组培苗出瓶炼苗移栽。 2.1.2 出瓶冲洗。小心地用镊子(最好用竹木镊子,或在镊子尖部套上橡胶管)夹持组培苗,将苗从瓶中移出,用流水慢慢冲净植株根部的培养基,注意切勿伤及根部的根毛,更不 作者简介 曹善东(1964-),男,山东日照人,副教授,从事生物学的教学和研究工作。 收稿日期 2005-09-08能用手搓动根部。培养基一定要用流水冲洗干净,否则,易引起根部生菌感染,影响脱毒苗的成活率。 2.1.3 移栽。小心地将洗净的脱毒苗移栽到事先准备好的苗床上,苗床最好用蛭石和珍珠岩混合体系作为基质进行无土栽培,如果一定要用土壤,应事先将土壤充分彻底消毒,以保证脱毒苗的脱毒优势,不至于再度感染病毒。移栽时做到 浅不露根,深不埋心 。对于栽植过深、没有露出心部的草莓苗,要及时进行补救(图1、2)。 图1 草莓的定植深度(左:太浅;中:适中;右:太深) 图2 刚出瓶炼苗的丰香组织脱毒苗 将组培苗栽植于网室内,网室用防虫网进行遮盖,预防蚜虫叮咬幼苗传播病毒。栽好的草莓组培苗,要及时浇足水,并用塑料膜进行覆盖,使棚内的相对湿度保持在80%左右。如果天气干旱,可以用喷雾器进行喷雾加湿,以保证草莓组培苗栽植前期棚内维持较高的相对湿度。 在整个炼苗过程中,应加强炼苗期的管理: 保证棚室内相对湿度在炼苗前期保持80%以上,温度高或棚室内相对 安徽农业科学,Journal of An hui Agri.S ci.2006,34(1):17-18 责任编辑 罗芸 责任校对 罗芸

脱毒苗与草莓脱毒技术

脱毒苗 在农业生产中，一些农作物经过几代种植，品质一般都同现不同程度的退化，在马铃薯、蔬菜、果树、花卉等农作物上表现得尤为突出。 根据科学家的长期研究，农作物品质衰退的原因主要是植物病毒的感染。为获得高产，生产中就必须培养出无病毒苗木，即脱毒苗木，这就是脱毒苗的概念。我国的农业科技工作者，利用生物技术措施，从感染病毒的植株中获得了无病毒种植的苗木材料。如马铃薯植株的顶端分生组织很少或没有病毒，常采用顶端分生组织培养技术得到无病植株，即脱毒马铃薯。用这种植株结出的薯块来作原种，繁殖更多的无病毒种薯，供生产中大面积推广使用。 脱毒苗技术现在也运用到了花卉、果树、魔芋等农业生产中，从而生产出优质无毒花卉球种、无病毒果树苗木等 什么是草莓脱毒苗？与草莓组织培养苗有什么区别？ 对于病毒病，目前还没有药剂可以治理。因此，培育无病毒母本苗，栽培无病毒苗木，是防治草莓病毒病的根本对策。目前，世界上培育草莓无毒苗有3种方法:热治疗法花药培养法和茎尖培养法草莓脱毒苗和草莓组织培养苗不同，在处理技术难度上差异很大。草莓脱毒苗草莓脱毒苗是以脱毒为目的，采用热处理分生组织培养的高技术手段，在无菌条件下切取0.2毫米大小的生长点，在特定的启动培养基上培养。由于切取的生长点很小，培养的难度大，在最佳启动培养基上经过2个月的培育，才仅有少量生长点能长出无病毒的愈伤组织。然后将愈伤组织接种在繁殖培养基上，1个月后才能长出丛生芽。丛生芽再经转代和生根培养基培育后才能获得试管苗，试管苗还需要经过多次反复病毒鉴定，确认已经把草莓体内的病毒彻底去除后，才能加速繁殖出大量试管苗，并进一步繁殖出原种大苗，供生产上推广应用。用茎尖培养法进行无病毒苗的培育，是目前世界上获得草莓无毒苗最普通且最有效的方法。草莓组培苗草莓组培苗仅仅是应用组织培养技术进行草莓的加速繁殖。在操作处理上，只要用草莓的顶芽、叶片、叶柄接种在合适的培养基上都可以培养出试管苗。由于切取的材料大，一般均在1毫米以上，因此培养容易成功。接种在一般的培养基上1个月就能长出丛生芽和试管苗。培养成功率很高。由于技术难度小，只要具有组织培养基本设备的单位都能进行草莓的组织培养工作，获得组织培养苗。由于目的是繁殖大量种苗供出售，因此草莓组培苗基本上没有脱毒效果。有些单位和个人宣传组培苗也是脱毒苗，这不仅混淆了两种难度差别很大的技术，还误导了果农，将基本上没有脱毒效果的组培苗，当作增产的有效手段，不仅生产上没有明显的增产效果，同时损害和降低了脱毒苗的声誉。广大技术人员和果农务必要认识清楚两种苗的区别，一定要引进经过国家正规脱病毒成果鉴定的脱毒苗。 草莓脱毒苗有哪些增产效果 脱病毒苗在生产上有以下八个优点： 脱病毒苗生长快，长势旺，茎叶粗壮，繁殖系数高达50--100倍，在生产上示范推广速度快。

草莓的植物组织培养

草莓的形态特征和生物学特性 草莓（Fragaria spp．）为重要的浆果植物，?栽培分布很广，其总产量在浆果类中仅次于葡萄，居世界第二位。草莓果实柔软多汁，含丰富的糖、酸、矿物质，维生素等。?草莓可鲜食，也可加工成果酱，果酒等。其颜色鲜艳，是良好的配餐食品。 草莓繁殖容易，结果早，收效快。尤其是近年的促成栽培，利用塑料大棚、日光温室，使草莓的成熟期大大缩短，从每年的11月份到次年的6月份，都有新鲜草莓上市，填补了水果的淡季市场。 （1）形态特征草莓属多年生草本植物，?植株矮小，呈半平卧丛状生长，根系为须根系，在土壤中分布较浅。草莓的茎呈短缩状，分地上和地下部分，地上短缩茎节间极短，节密集，其上密集轮生叶片，叶腋部位着生腋芽。地下短缩茎为多年生，?是贮存营养物质的器官，也可发育成不定根。匍匐茎是草莓的特殊地上茎，?是其营养繁殖器官，茎细，节间长，一般座果后期发生。?叶属于基生三出复叶，呈螺旋状排列，在当年生新茎上总叶柄部与新茎连接部分，有两片托叶顶端膨大，圆锥形且肉质化。离生雄蕊20～35枚。雌蕊离生，呈螺旋状排列在花托上，数目从60～600不等。?花序为二歧聚伞花序至多歧聚伞花序。果实为假果，主要是花托膨大肉质化形成，瘦果以聚合果形式生于花托上。果实成熟时果肉红色，粉红色或白色。 （2）生物学特性草莓根系在土壤温度达到2℃时开始活动，在10℃时开始形成新根，根系生长的最适温度为15～20℃，秋季温度降低到7～8℃时生长减弱。春季气温达5℃时植株开始萌芽，茎叶开始生长。草莓是喜光植物，但又比较耐荫。光照充足，植物生长旺盛，叶片颜色深，花芽发育好，能获得较高的产量。相反光照不良，植株生长势弱，叶柄及花序柄细。叶片色浅，花朵小，果实小，着色不良。草莓的根系分布较浅，加上植株矮小，而叶片则较大，因此蒸发量大。在整个生长季节，叶片几乎都在不断地进行老叶死亡、新叶发生的过程，叶片更新频繁。这些特点，决定了草莓对水分要求较高。但在不同的生长发育时期，对水分的要求不同。开花期土壤的含水量应不低于最大田间持水量的70%。果实膨

草莓脱毒技术的研究及应用进展_赵佐敏

[收稿日期]　2001-06-18;2001-08-17修回 　[作者简介]　赵佐敏(1967-),女,研究实习员,从事园艺及生物技术研究。　*本文承蒙徐宗俦副研究员指导。 [文章编号]1001-3601(2001)06-0146-0050-03 草莓脱毒技术的研究及应用进展 * 赵佐敏,艾勇 (贵州省安顺市农业科学研究所,普定562109) Progress of R esearch and Application for Virus -free Strawberry ZHAO Zuo -min ,AI Yo ng (An -shun Institute of Agricultural Sciences ,Puding ,Guizhou 562109,China )[关键词]草莓;病毒;脱毒机理;脱毒方法;快繁;病毒检测;生物技术[中图分类号]S 668.4[文献标识码]A 草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物,因其在种苗繁育上长期采用营养繁殖致使病毒不断累积而导致草莓产量降低、品质变劣等退化现象,且一旦感染病毒便会代代相传。因此,培育和应用脱毒苗是改善草莓品质、提高产量的有效途径。最早进行草莓离体培育研究的是日本的下村等(1960),他们的研究表明,热处理茎尖分生组织和组培相结合的方法,排除草莓病毒效果好。70年代国外对此项技术的研究更加趋于完善。我国此项研究始于80年代,北京市林业果树研究所1985年建立国内第一个草莓脱毒试管苗生产基地。其间草莓的各种器官、组织和细胞的培养研究迅速发展起来。同时,北京农林科学院、中国农业科学院等开展利用草莓茎尖分生组织培养、花药培养、热处理等法进行草莓脱毒研究,直到90年代我国才开始先后有几家单位建立起产业化草莓脱毒研究及生产技术体系。本文从以下几方面综述草莓脱毒技术的研究及应用进展。 1　草莓病毒种类、危害症状及对生产的影响 草莓病毒属于潜隐性病毒,只是单一病毒感染,一般不表现出症状,几种病毒感染时,植株表现明显的矮小弱化,叶片常表现花叶、皱叶、黄边、褪绿、干枯等多种症状,造成草莓长势削弱,产量大幅降低,品质变劣,果实变小等退化现象,产量可降低20%～80%。目前已发现草莓有12种病毒,其中草莓斑驳病毒(SM DV )、草莓皱缩病毒(L SGV )、草莓镶嵌病毒(SV BV )和草莓轻型黄边病毒(SM Y EV )对草莓生产影响较大。据王国平(1988)报道,我国大量的草莓品种都带有以上4种病毒,老品种带毒率高达100%。草莓主栽区,4种病毒总侵染率为80.2%,其中单独病毒侵染率为41.6%,2种或2种以上病毒复合侵染率为38.6%。据戴子林等(1995)调查,我国长江流域草莓大面积植株病毒感染率在50%以上。陕西省调查,草莓栽培地区病株率一般为5%～ 8%,个别地块达30%,严重地块可高达58%。现在草莓病毒正在向新辟种植区扩展,形势严峻。这些病毒多由蚜虫传播。 2　草莓病毒的脱毒机理、方法与检测 2.1　脱毒机理2.1.1　热处理脱毒机理　由于病毒不耐高温,通过热处理,可使植物组织中的病毒钝化,从而起到脱除病毒的作用。热处理法往往与茎尖组培相结合,以提高植物的脱毒机率和脱毒程度。植物生长的顶端是一段脱毒区,热处理过程中,可使原植物生长点的顶端免疫区得以扩大,使所取茎尖生长点大于未经热处理植株的生长点,以提高外植体培养成活率。热处理最适温度为38℃,但由于病毒的抗热性因其种类而异,一般使用温度范围在35～40℃。2.1.2　分生组织和花药培养脱毒机理　草莓组培脱毒技术主要依据病毒在其体内分布不均匀,某些营养器官或组织如茎尖、花药等不带或少带病毒的特点。其次,草莓植株有突出的发育可塑性,用植株的任何部分作外植体都可能再生完整植株。一方面,分生组织内部不存在维管系统,而通过维管系统在体内移动的病毒不能达到茎尖分生组织;另一方面,分生组织内源生长素含量较高,对病毒有钝化作用;再一方面,分生组织细胞分裂速度超过病毒的繁殖速度。因此,通过茎尖分生组织组培可以获得脱毒苗。利用花药组培再生植株,主要基于植株在形成性器官、性细胞时,部分或全部病毒被脱离。2.2　脱毒方法 2.2.1　小茎尖分生组织培养　法国学者Geo rg ls M o rel 最早应用茎尖培养作为无性系繁殖手段,同时首先证明已感染病毒的植株可以通过茎尖分生组织培养恢复成无病毒植株。下村等(1960)研究指出,如切取0.3mm 以下生长点,则可能达100%的无毒苗。庄子孝一(1978)认为以获得无病毒苗为目的的 贵州农业科学　2001,29(6):50～52Guizho u Ag ricultura l Sciences