枯草芽孢杆菌培养条件的优化研究
毕业设计(论文)课题名称枯草芽孢杆菌培养条件的优化研究
2014 年5 月15 日
目录
摘要 (2)
Abstract (3)
1 前言 (4)
2 材料与方法 (7)
2.1 实验试剂与材料 (7)
2.2 主要仪器与设备 (7)
2.3 试验方法 (8)
3 结果与分析 (8)
3.1枯草芽孢杆菌的标准曲 (9)
3.2单因素试验结果 (10)
3.3 正交试验结果分析 ···································错误！未定义书签。
4 结论和讨论 (15)
5参考文献 (16)
6致谢 (17)
枯草芽孢杆菌培养条件的优化研究
摘要
本文通过单因素实验和正交试验研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的发酵条件（PH、温度、时间、接种量）对枯草芽孢杆菌生长量的影响。本实验的枯草芽孢杆菌在BPG液体培养基上培养，通过单因实验及正交试验得到最佳的发酵培养条件为：初始pH 7.0；温度35℃；时间20h；接种量为5%。在此培养条件下的活菌液量为 3.785×107CFU/ml，相比在LB培养基下培养时的活菌液量3.2×106CFU/ml提高了10倍左右。
关键字：枯草芽孢杆菌；正交试验；生长量
Optimization study of bacillus subtilis culture
conditions
Abstract
In this paper, we study Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) fermentation conditions (PH, temperature, time, quantity of) the impact on the growth of Bacillus subtilis. The experiment of bacillus subtilis in combined cultivated in liquid medium, is obtained by single for experiment and the orthogonal experiment the best fermentation culture conditions as follows: the initial PH 7.0. Temperature 35 ℃; Time 20 h; Inoculation quantity was 5%. Under the condition of the cultivation of the best amount of bacterium fluid is 3.785 x 107 cfu/ml, compared to when cultured in LB medium under the microbial quantity: 3.231 x 107 cfu/ml by about 10 times.
Key words: Bacillus subtilis; Culture conditions; increment
1前言
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种好氧性产芽孢杆状细菌(G+)[1]，其基本特征：杆菌：一般0.7-0.8×2.0-3.0 μm，电子显微镜测量为0.5-0.6×1.1-3.5 μm，着色均匀，无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
由于枯草芽孢杆菌是需氧菌在水质净化[2]、工业发酵中发挥着重要的作用，人们开始致力于研究枯草芽孢杆菌应用于这些方面的研究。关于枯草芽孢杆菌的研究与应用已有100多年的历史，早期大部分工作集中在形态观察、分类鉴定、生理机制、功能发掘及防治等方面。近年来，对枯草芽孢杆菌的研究渐进到遗传学与分子生物学领域，研究内容体现在特定功能基因的寻找并克隆到需要的物种中或者通过诱变、基因工程等手段对枯草芽孢杆菌生产菌进行遗传改造等。但目前对该菌种的研究仍然处于实验室的初始阶段的水平。但是枯草研报杆菌有一系列的优良性状吸引这一些的科学家的目光，他们相信随着经济的发展，枯草芽抱杆菌资源对在工、农、医等方面有重大应用价值，开发利用更具有重要意义。枯草芽孢杆菌是一类广泛分布于各种不同生活环境中的革兰氏阳性杆状好养型细菌，可以产生内生芽孢，耐热抗逆性强[3]，在土壤和植物的表面普遍存在，同时还是植物体内常见的一种内生菌，对人畜无毒无害，不污染环境。由于枯草芽孢杆菌生长速度快，营养需求简单，易于存活，定殖与繁殖，无致病性，并可以分泌多种酶和抗生素[4,5]，而且还具有良好的发酵基础，用途十分广泛，国内外有众多研究单位和学者对此菌进行了大量研究，也积累了丰富的研究资料。通过对枯草芽孢杆菌系列的研究，一方积累枯草芽孢杆菌规律信息为以后开发提供依据；另一方面也可了解芽孢杆菌与生态环境间的相互关系，为芽孢杆菌资源的利用奠定基础[6] 。
现在对于枯草芽孢杆菌的主要运用方面：
（1）在水产养殖中的应用
随着水产养殖业的迅猛发展和集约化经营程度的不断提高，养殖水体污染日趋严重，许多养殖池中有害藻类及病菌大量繁殖，水质条件不断恶化，其后果影
响到了水产品安全和产业的可持续发展[7]。利用常规药物防治方法，不但易加重水质恶化程度，成本也较高，而利用微生物制剂改善养殖水体环境受到人们越来越多的关注。枯草芽孢杆菌是一种好氧的革兰氏阳性菌，在自然界广泛存在，生命力极强，代谢旺盛，对人畜无害，不污染环境，具有广谱的抗菌活性和极强的抗逆能力[8]。枯草芽孢杆菌能有效的降解水体中的氨氮、亚硝酸盐和硫化物，达到净化水质的目的。因此，枯草芽孢杆菌在养殖水体的生物修复方面得到了广泛的应用[9,10]。
在水体或饲料中添加枯草芽孢杆菌制剂，可以有效抑制或杀灭水体中或养殖生物体内的某些有害致病菌，并且能增强有益菌的群落，而达到防治水产疾病的目的；芽孢杆菌可以降低水体中硝酸盐、亚硝酸盐的含量，从而起到改善水质的作用[11]；芽孢杆菌还可以通过消灭病原体或减少病原体的影响来改善水质；枯草芽孢杆菌对水产中的弧菌、大肠杆菌和杆状病毒等有害微生物有很强的抑制作用，有效预防水产动物肠炎，烂鳃等疾病。同时枯草芽孢杆菌也可以分泌大量几丁质酶的功能。几丁质酶可分解病原真菌的细胞壁而抑制真菌病害，分解养殖池中的有毒有害物质，净化水质[12-14]；也可以分解池中残饵、粪便、有机物等，具有很强的清理水中垃圾小颗粒的作用。
枯草芽孢杆菌还可以改善有害蓝藻泛溢造成的水质浑浊问题，水质由浑变清，具有很强的净化水质功能。其在水中大量繁殖时分泌的胞外酶可分解、吸收水及底泥中的蛋白质、淀粉、脂肪等有机物，有降低水体富营养化和清除底泥的作用。在作用过程中，能够促进饲料中营养素降解，有机营养一部分转化为细胞物质，大部分转化为细菌活动的能量。在其转化过程中，氨气、氮气就从水中逸散到大气用这种方法，水中氨氮和硝基氮可除去。另一部分有机营养转化为优势的有益菌体，此法广泛应用于河蟹、育苗、虾、甲鱼养殖[15]。
（2）在食品工业上的应用
血栓性疾病严重威胁着人类的生命与健康，其发病率和死亡率居各种疾病之首。大量的研究表明，饮食习惯与动脉硬化和血栓等疾病有密切的关系，纳豆是日本的传统食品，已经有2000多年的历史。纳豆是由纳豆芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌发酵大豆而成。日本学者发现在枯草杆菌发现的传统纳豆(Natto)食品中含有一种具有溶解血栓功能的纳豆激酶(Nattokinase)是一种枯草杆菌蛋白激酶[16]，可
简称为枯激酶(Bacillokinase)。该酶在体内除可溶解血栓外，明显地缩短优球蛋白的溶解时间(ELT)，以及激活体内的血管内皮细胞产生t-PA，由此可见，可探索开发一种新的溶栓药品。纳豆是日本的传统食品，已经有2000多年的历史。由于纳豆中含有能溶解血栓的纳豆激酶[17]，因此很适合作为一种保健食品每天食用。研究表明，每天食用150 g新鲜纳豆可起到预防血栓类疾病的作用。另外，常吃纳豆对癌症、糖尿病、高血压、动脉硬化、肥胖病等均可起到预防和缓解及治疗作用.
纳豆枯草芽孢杆菌能在肠道内生长，分泌各种酶和维生素，促进小肠黏膜细胞的增殖[18-19]，促进胃肠道各种消化酶活性，并具有抑制肠道内有害菌的作用，能够将人类及其他动物难以消化吸收的大豆蛋白发酵形成大豆多肽和小分子物质的混合物；同时此菌在不利环境中形成芽胞，能耐高温高压，经受饲料加工工艺要求，易贮存。目前很多研究均显示，枯草芽胞杆菌可以产生多种抗菌物质[20]抑制病原菌的繁殖并且对生物体本身无害，可提高养殖动物的产品质量，是一种应用非常广泛的益生菌。因此，近年来枯草芽胞杆菌在饲料开发和生物防治等领域的应用成为研究热点。
（3）在医药方面的应用
枯草芽孢杆菌的活菌制剂可以作为口服液用于治疗肠炎、支气管炎和腹泻等多种疾病，也用来预防和治疗烧伤面的感染。科学家发现从枯草芽孢杆菌提取到的淀粉酶、纤维素酶能够补充体内消化酶的不足，恢复正常消化机能；蛋白酶能够分解发炎部位纤维蛋白的凝结物，消除伤口周围的坏疽腐肉和碎屑。
枯草芽孢杆菌能够分泌多种酶，其中能够应用到医药领域的酶主要有丝氨酸纤溶性蛋白酶( 纳豆激酶) 和脂肪酶两种[21]。日本人日常生活中食用的纳豆就是利用枯草芽孢杆菌生产的，纳豆中含有的纳豆激酶对心血管疾病有很好的预防和治疗作用。近年来，我国也掀起对纳豆激酶的研究和开发热潮，纳豆激酶的药用价值日益突出，在我国传统大豆发酵食品豆豉中发现了类似纳豆激酶的高活力的纤溶酶，将其产生菌株鉴定为枯草芽孢杆菌，并将豆豉纤溶酶基因克隆到了毕赤酵母中。同样由枯草芽孢杆菌合成的聚谷氨酸也可用作药物缓释材料和医用高分子纤维材料等。
随着人们对枯草芽孢杆菌性质的深入，发现芽孢杆菌具有稳定性好、抗性强、
耐高温、耐酸碱[1]、抑制病原菌繁殖、产生多种酶类、提高动物消化酶活性、分解有机污染物、净化水质等优点，而被广泛应用于水产动物养殖中；于此同时枯草芽孢杆菌又可以产生微生物源性抗菌蛋白[2]；从而国内外研究者掀起对拮抗菌株的筛选、鉴定以及其抗菌物质理化特点等方面进行了大量研究工作的热潮，虽然在实际的应用中，大多停留在实验室等机构试验阶段，但它所展现的应用前景却十分广阔。
枯草芽孢杆菌在培养过程中，由于培养条件掌握不好，常出现活菌数量低、芽孢形成率低等问题，所以本课题尝试通过改变BPG培养基的培养条件来提高枯草芽孢杆菌的产量，期望解决在现阶段的工业化生产中存在着的菌数量低、成本高的问题。
本课题是针对菌株适宜培养基的发酵条件进行研究。针对发酵液培养基中不同温度、pH、菌种接种量、时间分别进行单因素水平的试验，确定三个较好的水平，在进行四因素三水平正交试验以确定枯草芽孢杆菌的最佳条件。对此我们对发酵培养基进行优化试验，以提高枯草芽孢杆菌的产量并降低生产成本。研究的目的是通过优化发酵培养基的培养条件，提高芽孢杆菌菌株发酵液的含菌量，为大规模工业化生产奠定基础，有助于降低生产成本。
2 材料与方法
2.1 实验试剂与材料
2.2.1材料
枯草芽孢杆菌（湖南师范大学微生物实验室提供）
2.2.2实验试剂
牛肉膏；蛋白胨；葡萄糖；可溶性淀粉；氯化钠；磷酸氢二钾；硫酸锰；琼脂；去离子水
2.2 主要仪器与设备
超净工作台；灭菌锅；培养皿若干；电子天平；250ml锥形瓶若干；玻璃棒；酒精灯；试管；移液管；移液枪；分光光度计
2.3 试验方法
2.3 实验过程
曲线制备→单因素测定→正交试验
2.3.1培养基及基础条件确定
培养基BPG培养基[22]：牛肉膏3.3ｇ、蛋白胨3.3ｇ、葡萄糖3.3ｇ、淀粉3.3ｇ、Nacl 3.3ｇ、KH2PO4 3.3ｇ、MnSO4·7H2O 0.2ｇ，加纯化水定容至1 000ml，调PH值为7.0初始培养条件：接种量：5-10%；pH：7.0-7.2；温度：30℃-35℃；时间：16-20 h。
2.3.2 比浊法测定细菌浓度
比浊法原理是在一定范围内，菌悬液中细胞的浓度与混浊度成正比，即与光密成正比，菌越多，光密度越大。因此用分光光度计在一定波长（420nm）下，测定菌悬液的以光密度（即OD值）表示菌量。
枯草芽孢杆菌标准生长曲线的确定在BPG液体培养基上接种枯草芽孢杆菌原菌液，按优化条件培养，并每隔3h取样测定OD值和平板菌落计菌数。
3 结果与分析
3.1 枯草芽孢杆菌的标准生长曲线
在确定的培养基的基础上，每隔3小时取样测定OD值，并且通过平板菌落计菌数如下表一。
时间（h）0 3 6 9 12 15 18 21 24 OD 0.008 0.034 0.085 0.112 0.153 0.211 0.278 0.246 0.245
活菌数
0.10 0.50 1.30 1.80 2.60 3.10 3.60 3.30 3.10 (×107CF
U/ml)
OD值与活菌数的关系如下图1。
从图1可以看出OD值与活菌数呈现的关系，得到的关系式Y=1.3×108X+1.6×106 R2=0.9706。在OD值在小于0.278时OD值和活菌数呈现线性的关系。
3.2单因素试验结果
在确定BPG液体培养基的基本组成成分（0.34g牛肉膏、0.34g蛋白胨、0.34g 葡萄糖、0.33g磷酸二氢钾、0.33g氯化钠、0.33g淀粉、0.02g硫酸锰、pH7.0、100ml 水）的前提下，通过四个单因素实验确定葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、磷酸二氢钾的最适含量。实验结果如下。
3.2.1温度对枯草芽孢杆菌生长量的影响
本实验选取25、30、35、40、45℃ 5个温度为培养温度的变化来研究温度对枯草芽孢杆菌的生长量的影响。培养基的接种量为5%、初始pH 7.0，培养18 h，的其他因素的变量不变的条件下，测定OD420值，根据最大生长量，选出最适温度。实验结果如表二及图2。
表二不同温度对枯草芽孢杆菌的OD420值影响
温度
25℃30℃35℃40℃45℃
OD420值
A10.201 0.240 0.270 0.219 0.199
A20.203 0.241 0.271 0.221 0.199
A30.205 0.242 0.272 0.223 0.199
平均值0.203 0.241 0.271 0.221 0.199
图2温度对枯草芽孢杆菌生长量的影响
图2显示，当温度的变化分别为25℃、30℃、35 ℃、40 ℃以及45℃时，到的活菌数（×107CFU/ml）分别为2.799、3.293 、3.683、3.033以及2.747。所以有图2分析可知，起初随着温度的升高，活菌数目会增加，当温度为35℃时，枯草芽孢杆菌的数量达到最多；随后继续升高温度，反而枯草芽孢杆菌的数量呈现下降趋势。由于温度对微生物生长的影响是影响在生物体内所进行的许多生化反应，达到影响微生物的生长。在一定温度范围内，生化反应速率随温度上升而加快；超过一定限度，则细胞功能下降以至死亡。故此温度的选择为35 ℃适宜。
3.2.2 pH值对枯草芽孢杆菌生长量的影响
本实验选取5.0、6.0、7.0、8.0、9.0 5个PH为培养时PH的变化来研究PH 对枯草芽孢杆菌的生长量的影响。培养基的接种量为5%、初始温度35℃，培养18 h，的其他因素的变量不变的条件下，测定OD420值，根据最大生长量，选出最适PH。实验结果见表三及图3。
表三不同pH对枯草芽孢杆菌的OD420值影响
pH值
5.0
6.0
7.0
8.0
9.0
OD420值
A10.179 0.213 0.255 0.201 0.178
A20.178 0.213 0.256 0.202 0.176
A30.177 0.213 0.257 0.200 0.177
平均值0.178 0.213 0.256 0.201 0.177
图3PH对枯草芽孢杆菌生长量的影响
从图3显示，当PH变化分别为5、6、7、8以及9时，得到的活菌数为：（×107CFU/ml）分别为2.474、2.929、3.488、2.773以及2.461。所以从图3直观分析可知：开始随着PH的增加，活菌数量呈现增加，当PH为7.0时枯草芽孢杆菌的数量达到最多；随后继续PH增加，反而枯草芽孢杆菌的数量呈现下降趋势。由于不同微生物对pH条件的要求各不相同它们只能在一定的pH范围内生长，对pH条件的不同要求在一定程度上反映出微生物对环境的适应能力。本实验的枯草芽孢杆菌在PH6到PH8之间的生长时的活菌数相对变化差距不大，从而可知在中性环境下相对适合枯草芽孢杆菌的生长；在PH<5和PH>9下的活菌数相比较少，可知在过酸和过碱的环境相对不适应枯草芽孢杆菌的生长，故此最适PH为7.0。
3.2.3 接种量对枯草芽孢杆菌生长量的影响
本实验选取1%、3%、5%、7%、9% 5个接种量为培养时接种量的变化来研
35℃，培养18 h，的其他因素的变量不变的条件下，测定OD420值，根据最大生长量，选出最适PH。实验结果如表四及图4。
表四不同接种量对枯草芽孢杆菌的OD420值影响
接种量
1% 3% 5% 7% 9% OD420值
A10.144 0.177 0.234 0.210 0.188
A20.145 0.178 0.234 0.212 0.189
A30.146 0.179 0.234 0.211 0.190
平均值0.145 0.178 0.234 0.211 0.189
图4接种量对枯草芽孢杆菌生长量的影响
从图4显示，当接种量变化分别为1%、3%、5%、7%以及9%时，得到的活菌数为（×107CFU/ml）：2.045、2.474、3.202、2.903以及2.617。所以从图4直观分析可知：接种量从1%到5%之间增加接种量，活菌数随着接种量的增加而增多，当接种量5%活菌数达到最多；大于5%时随着接种量的增加反而活菌数减少，反到不利于培养枯草芽孢杆菌。故选择最佳的接种量为5%。
3.2.4时间对枯草芽孢杆菌生长量的影响
本实验选取14h、16h、18h、20h、22h 5个时间为培养时时间的变化来研究
接种量为5%，的其他因素的变量不变的条件下，测定OD420值，根据最大生长量，选出最适PH。实验结果如表五及图5。
表五不同培养时间对枯草芽孢杆菌的OD420值影响
时间
14h 16h 18h 20h 22h OD420值
A10.161 0.220 0.276 0.275 0.245
A20.161 0.221 0.277 0.275 0.246
A30.161 0.222 0.278 0.275 0.247
平均值0.161 0.221 0.277 0.275 0.246
图5时间对枯草芽孢杆菌生长量的影响图5显示，当时间的变化分别为14h、16h 、18h、20h以及22h时，到的活菌数（×107CFU/ml）分别为2.253、3.033 、3.761、3.735以及3.258。所以有图5分析可知，起初随着时间的推移，活菌数目会增加，当时间为18h时，枯草芽孢杆菌的数量达到最多；随后继续增加培养时间，反而枯草芽孢杆菌的数量呈现下降趋势。由于时间主要影响枯草芽孢杆菌的生长周期，培养的时间过长反而使得其处于衰退期不利于枯草芽孢杆菌的生长，影响它的数量。故时间的选择为18h适宜。
3.3正交试验结果分析
参照单因素实验结果，确定了BPG培养基（牛肉膏3.3ｇ、蛋白胨3.3ｇ、葡萄糖3.3ｇ、淀粉3.3ｇ、Nacl3.3ｇ、KH2PO4 3.3ｇ、MnSO4·7H2O 0.2ｇ、水1000ml）以影响枯草芽孢杆菌的生长条件PH、温度、时间、接种量为四个影响因素，取各自的三个不同水平进行正交试验，因素水平表见表
表3.3正交试验设计直观分析表
序列号
因素
活菌数（×
107CFU/ml）A
温度
B
pH
C
接种量浓度
D
时间(h)
1 1（30℃）1（6）1（3%）1(16) 2.643
2 1 2（7）2（5%）2(18) 3.566
3 1 3（8）3（7%）3(20) 2.266
4 2（35℃） 1 2 3 3.163
5 2 2 3 1 2.916
6 2 3 1 2 2.591
7 3（40℃） 1 3 2 2.162
8 3 2 1 3 3.162
9 3 3 2 1 2.747
K18.475 7.968 8.396 8.306
K28.670 9.644 9.476 8.319
K38.071 7.604 7.344 8.591
R 0.199 0.680 0.711 0.095
最优组合A2B2C2D3
由表数据可知，因素主次关系为C(接种量浓度) > B(PH) > A(温度) > D（时间）。
通过实验结果的直观分析，2号组合A1B2C2D2的菌体含量最高；但是经过计算分析的最优水平为A2B2C2D3。所以为了确定最优水平组合，分别按照这两个水平组合的培养基配方，配制BPG液体培养基下培养，测定其OD420值，根据生长量，确定最优水平。实验结果如表六。
表六
组合活菌数
（×107CFU/ml）直观最优组合
A1B2C2D2
分析的最优组合
A2B2C2D3
A1 3.560 3.768
A2 3.562 3.766
A3 3.561 3.777
平均值 3.561 3.777
从表六看出直观的最优组合A1B2C2D2与分析得到最优组合A2B2C2D3比较，在直观的最优组合A1B2C2D2下活菌数量为3.561×107CFU/ml，但是分析得到最优组合A2B2C2D3下得到的活菌数量为3.777×107CFU/ml。再由表3.3分析可知，因素主次关系为C(接种量浓度) > B(PH) > A(温度) > D（时间），所以分析的得到的最优组合A2B2C2D3较好。即在温度为35℃，接种量为5%，PH为7.0培养时间为20h。在这条件下培养的枯草芽孢杆菌数量最多。
4结论和讨论
本文针对的是枯草芽孢杆菌培养条件的优化研究，在培养基BPG的基础上优化培养条件（PH，时间，温度，接种量浓度）四个因素，再进行L9（34）正交试验确定枯草芽孢杆菌的最佳培养条件。最终确定在保证其他因素不变的情况下枯草孢杆菌在BPG培养基在接种量为5%，PH为7.0，温度为35摄氏度，时间为20h的时候适合枯草芽孢杆菌的生长，在此培养条件下得到的活菌液量为
3.785×107CFU/ml，相比在LB培养基下培养时的菌液量3.2×106CFU/ml提高了10倍左右，进一步提高的枯草芽孢杆菌的产量。
在本次实验过程中，有以下几点心得体会
1 本文在优化培养条件时，得到接种量浓度为最主要的因素，相对而言时间为次要的因素。接种量浓度对于枯草芽孢杆菌的生长影响较大，从而工业化大规模培养时候需要注意接种量的浓度。培养的时间从图4可以看出18h到20h之间活菌数相对稳定，如果需要得到是枯草芽孢杆菌的菌体或者产物时，需要控制发酵时间在18h到20h之间有利于菌体和产物的积累。
2本文是枯草芽孢杆菌的培养条件的优化，在培养基BPG的基础上优化培养条件（PH，时间，温度，接种量浓度）四个因素，再进行L9（34）正交试验确定枯草芽孢杆菌的最佳培养条件得到的活菌量为3.785×107CFU/ml，但是唐家毅[23]等在一株水产芽孢杆菌的鉴定及其培养基优化的研究得到的最佳细胞浓度为8.42×109CFU/ml，相比对于培养条件对于枯草芽孢杆菌的影响，没有培养基对枯草芽孢杆菌的影响明显。
3相对与普通培养基得到的活菌量3.2×106CFU/ml，本实验优化得到的活菌量3.785×107CFU/ml还有有明显的提高10倍，所以本文枯草芽孢杆菌的培养条件的优化对于工业化大规模的培养枯草芽孢杆菌还是能够提供一些依据。
4由于条件的因素本实验操作相对简单，各因素水平的跨度相对较大，如温度的变化梯度为5℃，时间的变化梯度2h，接种量变化跨度为2%，PH的变化梯度为1。对于以后的实验可以继续缩小这变化的跨度，来进一步研究枯草芽孢杆菌培养条件的优化。
5参考文献
1惠明,窦丽娜,田青等.枯草芽孢杆菌的应用研究进展[J].安徽农业科2008,36(27)11623-11624. 2陈尚智,胡勇有.枯草芽孢杆菌对微污染水体的净化作用[J].环境科学报,2011(8):1594-1601. 3李晶,杨谦.生防枯草芽孢杆菌的研究进展［J].安徽农业科学.2008,36(1):106-111.
4穆昭艳,汪立平,张大兵,等异甘露聚糖酶生产菌的诱变育种及固态发酵条件的优化［J].食品科学,2012,33(5):220-225.
5李佳.枯草杆菌特征和应用现状[J]. 肉类研究,2009,77(29):18-21.
6WichitraLeelasuphakul,PranomSivanunsakul,SouwalakPhongpaichit.Purification,characterizatio n and synergistic activity of β-1,3-glucanase and antibiotic extract from an antagonistic Bacillus subtilis NSRS 89-24 against rice blast and sheath blight[J]. Enzyme and Microbial Technology . 2005 (7)
7汪文俊.枯草芽孢杆菌对不同富营养化水体的净水作用[J]. 湖北农业科学. 2011(10)
8 赵朋超,王建华,权春善,范圣第.枯草芽孢杆菌抗菌肽生物合成的研究进展[J].中国生物工程杂志. 2010(10)
9于明超, 李卓佳, 文国樑. 芽孢杆菌在水产养殖应用中的研究进展[J]. 广东农业科学, 2007(11): 78-81.
10丁丽, 周维仁, 章世元, 等. 益生菌在水产上的应用及其对鱼类肠道菌群的影响[J]. 饲料工业, 2009, 30(20): 27-30.
11孙冬岩,孙鸣,潘宝海. 枯草芽孢杆菌对水质净化作用的研究[J], 饲料研究,2009(3):58-59. 12曾地刚,雷爱莹,彭敏,等.枯草芽孢杆菌的分离及其净化水质的研究[J]. 水利渔业.2007,27
（6）:55-56.
13汤保贵,徐中文,张金燕,等.枯草芽孢杆菌的培养条件及对水质的净化作用[J].淡水渔业,2007,37（3）:45-48.
14陈尚智,胡勇有.枯草芽孢杆菌对微污染水体的净化作用[J].环境科学报,2011(8):1594-1601.
15 Rengpipat S, Rukpratanpom S, Piyatirativorakul S, et al.Immunity enhancement in black tiger shrimp by a probiontbacterium[J]. Aquaculture, 2000，191: 271-288.
16付利,杨志兴.纳豆激酶的研究与应用[J].生物工程进展, 2011,15(5):46-49.
17 罗楚平,王晓宇,陈志谊,等. 枯草芽孢杆菌Bs916 中脂肽抗生素Ba-cillomycin L 的操纵
子结构及生物活性[J].中国农业科学,2010,43(22):4624-4634.
18贾力敏,陈晓蔚,江晓,等.纳豆菌对致病菌生长抑制作用的初步研究[J].中国生
公,2002,18(5):577-578
19纪宁,孔繁东,祖国仁.纳豆菌抗菌作用的研究现状与展望[J].食品研究与开发, 2006, (1):138-141.
20赵朋超王建华,权春善,范圣第. 枯草芽孢杆菌抗菌肽生物合成的研究进展[J]. 中国生物工程杂志. 2010(10).
21陈晔,陈跃,张文光.枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ZY-1)溶栓酶的分离纯化及其酶学性质[J]. 福建医科大学学报. 2008(02).
22王健华.枯草芽孢杆菌ＤＰＧ-01发酵条件的优化[Ｊ].安徽农业科学,2007.
23唐家毅,刘婕,于铁妹,杨博,王永华,张毅一株水产芽孢杆菌的鉴定及其培养基优化的研究[J]2008，06期.
致谢
四年的读书生活在这个季节即将划上一个句号，而于我的人生却只是一个逗号，我将面对又一次征程的开始。四年的求学生涯在师长、亲友的大力支持下，
走得辛苦却也收获满囊，在论文即将付梓之际，思绪万千，心情久久不能平静。伟人、名人为我所崇拜，可是我更急切地要把我的敬意和赞美献给一位平凡的人，我的导师。我不是您最出色的学生，而您却是我最尊敬的老师。您治学严谨，学识渊博，思想深邃，视野雄阔，为我营造了一种良好的精神氛围。授人以鱼不如授人以渔，置身其间，耳濡目染，潜移默化，使我不仅接受了全新的思想观念，树立了宏伟的学术目标，领会了基本的思考方式，从论文题目的选定到论文写作的指导,经由您悉心的点拨,再经思考后的领悟,常常让我有“山重水复疑无路,柳暗花明又一村”。在论文即将完成之际，我的心情无法平静，从开始进入课题到论文的顺利完成，有多少可敬的师长、同学、朋友给了我无言的帮助，在这里请接受我诚挚谢意！
同时也感谢学院为我提供良好的做毕业设计的环境。最后再一次感谢所有在毕业设计中曾经帮助过我的良师益友和同学，以及在设计中被我引用或参考的论著的作者。
枯草芽孢杆菌的发酵
枯草芽孢杆菌的发酵学院：化工学院 专业：生物工程 班级：生物10-2 姓名：姜霞
摘要 枯草芽孢杆菌是我国农业部允许作为饲料添加剂的15种菌种之一,其已被越来越多地制成饲用微生态制剂。因其制剂是无毒、无残留、无污染的“绿色”添加剂，故具有广阔的发展前景，并已在畜牧业、饲料业广泛应用，显示巨大的社会效益和生态效益。通过摇床培养筛选出较适宜于枯草芽孢杆菌发酵的培养基配方，发酵培养基配方确定后，在摇床条件下，通过对温度、初始ｐＨ值、初始接种量、装液量、摇床转速等发酵条件的摸索，确定最佳发酵条件。在摇瓶条件下优化发酵培养基和发酵工艺后，采用发酵罐进行发酵培养，对枯草芽孢杆菌在液体发酵过程中的菌体数量、ｐＨ值、总糖含量和总氮含量四个因素随时间的变化进行了观察。 枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色。枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道pH值，间接抑制其它致病菌生长。枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用，能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动物体内干扰素和巨噬细胞的活性，在饲料中应用广泛。它还可以用来改善水质，应用在污水处理和环境保护中。和其它微生物混合使用，还可以用于生物肥料和土地改良等 关键词：枯草芽孢杆菌生长发酵活菌数
枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化
枯草芽孢杆菌发酵培养基优化 作者姓名 专业 指导教师姓名 专业技术职务
目录 摘要 (1) ABSTRACT (2) 第一章绪论 (3) 1.1枯草芽孢杆菌简介 (3) 1.2枯草芽孢杆菌的应用 (3) 1.2.1枯草芽孢杆菌在工业酶生产中的应用 (3) 1.2.2枯草芽孢杆菌在生物防治领域中的应用 (3) 1.2.3枯草芽孢杆菌在微生物添加剂领域中的应用 (4) 1.2.4 枯草芽孢杆菌在医药方面的应用 (4) 1.2.5 枯草芽孢杆菌在水产中的应用 (4) 1.2.6枯草芽孢杆菌是微生物学与分子生物学研究的良好试验材 料 (5) 1.2.7枯草芽孢杆菌在环境保护方面的应用 (5) 1.3 国内外的研究现状与发展趋势 (6) 1.4研究的思路、目的及意义 (7) 第二章材料与方法 (7) 2.1实验材料 (7) 2.1.1 菌株鉴定 (7) 2.1.2 培养基 (7)
2.1.3 主要设备 (8) 2.2 培养基的优化 (9) 2.2.1 培养方法 (9) 2.2.2实验流程 (9) 2.2.3实验方法 (10) 2.2.4正交试验 (11) 第三章结果和分析 (11) 3.1 鉴定结果如下 (11) 3.2 枯草芽孢杆菌最优化培养基正交实验结果 (16) 3.3 pH变化曲线（以G18为例） (19) 3.4 实验总结 (25) 致谢 (27)
摘要 枯草芽孢杆菌是主要的饲用益生菌菌株，本论文以两株枯草芽孢杆菌G18和G21培养的延滞期和倍增时间为评价指标，通过三角瓶摇床培养，进行了两因素三水平的正交试验，对发酵培养基主要组分进行了优化，豆粕处理的蛋白酶加量2u/g 豆粕、5u/g豆粕、10u/g豆粕和玉米浆添加量0.5%、1.0% 、1.5% 做两个因素三水平的正交实验，研究表明：G18最佳培养基是：葡萄糖0.5%，淀粉3%，豆粕3%，玉米浆1.0%，破壁酵母0.5%，磷酸氢二钠0.2%，硫酸镁0.1%，硫酸锰0.01%，普通a淀粉酶2u/g淀粉，蛋白酶添加量10u/g豆粕。G21的最佳培养基是：葡萄糖0.5%，淀粉3%，豆粕3%，玉米浆1.5%，破壁酵母0.5%，磷酸氢二钠0.2%，硫酸镁0.1%，硫酸锰0.01%，普通a淀粉酶2u/g淀粉，蛋白酶添加量5u/g豆粕。[关键词] 枯草芽孢杆菌培养基优化正交试验
枯草芽孢杆菌表达手册 个人翻译中文版
枯草芽孢杆菌表达载体 产品信息和说明 2005年11月
目录 1.简介 (3) 2. pHT 载体 (3) 2.1. pHT01载体图谱 (4) 2.2. pHT43载体图谱 (5) 2.3. pHT01衍生物中标签的定位 (5) 3. 实验方案 (6) 4. 参考文献 (6) 5. 订单信息，运输和存储 (6) 本载体系统由德国拜罗伊特大学遗传研究所的沃尔夫冈·舒曼实验室 开发。 仅用于科研！ 本手册由wy135033405翻译百度文库首发任何意见请PM
枯草芽孢杆菌表达载体 通过质粒在枯草芽孢杆菌中高效表达胞内/胞外重组蛋白 1.简介 革兰氏阳性菌因其在农业，医疗和食品生物技术和重组蛋白生产等方面的贡献而广为人知。在所有革兰氏阳性菌中，枯草芽孢杆菌载体因下列原因尤为引人瞩目。（一）无致病性，且一般认为安全的有机体；（二）无明显的密码子偏好性；（三）可直接将功能性胞外蛋白分泌到培养基中（目前，大约60％的市售酶由芽孢杆菌生产）；（四）具备包含转录，翻译，蛋白质折叠、分泌机制，遗传操作和大规模发酵的大信息量机体。 但是下述两个障碍减少了枯草芽孢杆菌的使用：（一）产生一定数目的识别并降解外源蛋白的胞外蛋白酶；（二）载体质粒稳定性。第一个障碍已因蛋白酶缺失株的构建而基本解决。第二个因引入使用θ-复制模式质粒被完全克服，如由天然质粒pAMβ1和pBS72衍生的一些质粒（Jannière等，1990；Titok等，2003）。 最近，基于大肠杆菌 - 枯草杆菌穿梭质粒pMTLBS72的四种不同表达载体的构建和使用展示出全面的结构稳定性，业已出版（Nguyen等，2005）。 两个新的载体pHT01和pHT43允许在细胞质中高水平表达重组蛋白，其中pHT43载体引导重组蛋白到培养基。这两个载体基于强σA-依赖性启动子的枯草杆菌gro E操纵子通过添加lac操纵子改造成为一种高效可控的（IPTG诱导的）启动子。pHT01衍生载体可与8×His 标签（pHT08），链球菌标签（pHT9）或C - Myc的标签（pHT10）相结合。 2. pHT 载体 所有在枯草芽孢杆菌的gro ESL操纵子之前使强启动子与lac操纵子融合的载体都可通过加入IPTG进行诱导。尽管当未添加诱导物时表达组件的背景表达水平很低，还是成功从约1300种诱导因子中筛选出一种来使用bga B报道基因（Phan等，2005）。当分别将htp G 和pbp E基因融合到gro E启动子时，加入IPTG后，表达的重组蛋白可能分别占细胞总蛋白的10%和13%（Phan等，2005）。热纤梭菌的amyQα-淀粉酶和纤维素酶A、B的高水平表达实验证实。该载体还插入了一个高效SD序列以及一个多克隆位点（BamH I, Xba I, Aat II, Sma I）。编码α-淀粉酶的amyQ基因的信号肽编码区域与pHT01的SD序列融合，构成了pHT43，以此获得分泌的重组蛋白。
草菇液体菌种培养条件优化研究
龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/2a15683648.html, 草菇液体菌种培养条件优化研究 作者：任海霞等 来源：《山东农业科学》2014年第01期 摘要：为了完善草菇液体菌种的生产和应用，尽快使草菇实现工厂化栽培，本试验以天达V901为试材，通过摇瓶发酵，进行了草菇液体菌种培养条件优化研究。结果表明，液体培养条件下，适宜草菇菌丝生长的最佳碳源是淀粉，最佳氮源是蛋白胨，最佳碳氮比是10∶1，最佳淀粉浓度是3.0%。草菇菌丝生长的最适温度为30℃，最适初始pH为7.0。 关键词：草菇；液体培养；营养物质；培养条件；优化试验 中图分类号：S646.1+3文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）01-0058-03 草菇（Volvariellavolvacea）味道鲜美，营养丰富，素有“放一片，香一锅”之美誉，同时它还有抗肿瘤、增强机体抗病力的作用，是一种优良的食药兼用型营养保健食品[1]。由于我国 草菇的出口量较大，素有“中国蘑菇”之称[2]。草菇是典型的高温型食用菌，在热带和亚热带地区被广泛栽培[3]。我国南方各省均有栽培，是我国南方的一种著名食用菌。近几年我国北方 省区也逐步在夏季进行广泛栽培。 由于生产工艺、技术条件及资金的限制，目前我国多数食用菌生产企业仍然以固体制种为主，液体制种的应用只局限于杏鲍菇、金针菇和蟹味菇等品种[4]。而草菇一般都是传统方法 栽培，多采用固体接种，生物学效率明显低于其他主要品种的食用菌[5]，故其制种技术和栽 培技术急需改进。为了完善草菇液体菌种的生产和应用，尽快使草菇实现工厂化栽培，本试验通过摇瓶发酵，对草菇液体菌种培养条件进行了优化研究。1材料与方法 1.1供试菌株 天达V901，山东省农业科学院农业资源与环境研究所保藏。 1.2培养基 1.2.1种子培养基马铃薯200g，麸皮80g，葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000ml，pH自然。121℃灭菌20min。 1.2.2基础培养基葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000ml，pH 自然。121℃灭菌20min。 1.3试验设计 液体培养条件对草菇菌丝生长的影响。
枯草芽孢杆菌培养条件的优化研究
毕业设计(论文)课题名称枯草芽孢杆菌培养条件的优化研究 2014 年5 月15 日
目录 摘要 (2) Abstract (3) 1 前言 (4) 2 材料与方法 (7) 2.1 实验试剂与材料 (7) 2.2 主要仪器与设备 (7) 2.3 试验方法 (8) 3 结果与分析 (8) 3.1枯草芽孢杆菌的标准曲 (9) 3.2单因素试验结果 (10) 3.3 正交试验结果分析 ···································错误！未定义书签。 4 结论和讨论 (15) 5参考文献 (16) 6致谢 (17)
枯草芽孢杆菌培养条件的优化研究 摘要 本文通过单因素实验和正交试验研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的发酵条件（PH、温度、时间、接种量）对枯草芽孢杆菌生长量的影响。本实验的枯草芽孢杆菌在BPG液体培养基上培养，通过单因实验及正交试验得到最佳的发酵培养条件为：初始pH 7.0；温度35℃；时间20h；接种量为5%。在此培养条件下的活菌液量为 3.785×107CFU/ml，相比在LB培养基下培养时的活菌液量3.2×106CFU/ml提高了10倍左右。 关键字：枯草芽孢杆菌；正交试验；生长量
Optimization study of bacillus subtilis culture conditions Abstract In this paper, we study Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) fermentation conditions (PH, temperature, time, quantity of) the impact on the growth of Bacillus subtilis. The experiment of bacillus subtilis in combined cultivated in liquid medium, is obtained by single for experiment and the orthogonal experiment the best fermentation culture conditions as follows: the initial PH 7.0. Temperature 35 ℃; Time 20 h; Inoculation quantity was 5%. Under the condition of the cultivation of the best amount of bacterium fluid is 3.785 x 107 cfu/ml, compared to when cultured in LB medium under the microbial quantity: 3.231 x 107 cfu/ml by about 10 times. Key words: Bacillus subtilis; Culture conditions; increment
枯草芽孢杆菌常用培养基配方
枯草芽孢杆菌常用培养基配方： 1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂 枯草芽孢杆菌原生质体的制备 1 培养枯草芽孢杆菌 取亲本菌株T4412、TT2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中，36℃振荡培养14 h，各取1 mL 菌液转接入装有20 mL 液体完全培养基的250 mL 锥形瓶中，36℃振荡培养 3 h，使细胞生长进入对数前期，各加入25 u/mL 青霉素，使其终浓度为0.3 u/mL，继续振荡培养2 h。 2. 收集细胞 各取菌液10 mL，4000 r/min 离心10 min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。如此洗涤两次，将菌体悬浮10 mL SMM 中，每mL 约含108～109 活菌为宜。 3. 总菌数测定 各取菌液0.5 mL，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7 各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36℃培养24 h 后计数。此为未经酶处理的总菌数。 4. 脱壁 二株亲本菌株各取5 mL 菌悬液，加入5 mL 溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100 ug/mL，混匀后于36℃水浴保温处理30 min，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000 r/min 离心10 min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5 mL 高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。 5. 剩余菌数测定 取0.5 mL 上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取10-2、10-3、10-4 稀释液各0.1 mL，涂布于完全培养基平板上，36℃培养24～48 h，生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。 计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率＝未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。
枯草芽孢杆菌的介绍
目录 第一章芽孢杆菌的简要介绍 (1) 第一节芽孢杆菌种类 (1) 第二节芽孢杆菌表达系统发展简史 (2) 第二章枯草芽孢杆菌的转化系统 (3) 第一种方法：电转化 (3) 第二种方法：Spizizen转化 (3) 第三种方法：原生质体法(Takashi) (4) 第四种方法：原生质体转化之二 (4) 第五种转化方法：质粒混合法（BGSC推荐） (5) 第三章芽孢杆菌表达系统发展简史 (6) 第一节芽孢杆菌表达系统的优点（相对于大肠杆菌） (7) 第二节芽孢杆菌的缺点 (7) 第三节助表达系统 (7) 第四节芽孢杆菌基因表达的主要特点 (7) 第四章枯草芽孢杆菌转录翻译系统 (8) 第一节：转录系统 (9) 第二节：翻译系统 (9) 第五章芽孢杆菌常用的宿主和载体 (10) 第六章芽孢杆菌表达系统应用实例 (11) 1 中国 (11) 2 日本 (12) 3 加拿大 (12) 第七章芽孢杆菌其他产品 (13) 第一节核苷类产品 (13) 第二节核黄素 (13) 第三节微生物制剂/益生菌 (13) 第八章结语 (14) 附录一. 芽孢杆菌的相关经典文章 (14) 附录二. 枯草芽孢杆菌相关数据库 (15) 致谢及参考文献 (15)
第一章芽孢杆菌的简要介绍 芽孢杆菌作为一个属，于1872年被首次提出，至今已有一百多年。目前人们对芽孢杆菌的研究几乎涉及到了革兰氏阳性可生孢细菌的各个领域。尤其是在感受态、芽孢形成及其调控、遗传操作、菌种改良、生物技术等领域进行了大量的工作。芽孢杆菌是一个泛泛的概念，而科学研究中应用最多的当属枯草芽孢杆菌，例如168菌株及其大量的衍生菌株。枯草杆菌的研究之所以领先于其他芽孢杆菌的种，主要是由于他的转化、转导方法较完善，以及大量的衍生菌株。 目前应用最多的芽孢杆菌属菌种有枯草芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和耐碱的芽孢杆菌以及病原菌炭疽芽孢杆菌等12种。 第一节芽孢杆菌种类 目前，芽孢杆菌属很多菌株的全基因组序列已经报道，截至2011年10月，在KEGG 上公布全基因组序列的芽孢杆菌属菌种有： 简称菌种名称测序时间测序链接 bsu Bacillus subtilis1997RefSeq bss Bacillus subtilis subsp. spizizenii W232010RefSeq bst Bacillus subtilis subsp. spizizenii TU-B-102011 RefSeq bsn Bacillus subtilis BSn52011RefSeq bha Bacillus halodurans2000RefSeq ban Bacillus anthracis Ames2003RefSeq bar Bacillus anthracis Ames 05812004RefSeq bat Bacillus anthracis Sterne2004 RefSeq bah Bacillus anthracis CDC 6842009 RefSeq bai Bacillus anthracis A02482009 RefSeq bal Bacillus cereus biovar anthracis CI2010RefSeq bce Bacillus cereus ATCC 145792003RefSeq bca Bacillus cereus ATCC 109872004RefSeq bcz Bacillus cereus ZK2004RefSeq bcr Bacillus cereus AH1872008 RefSeq bcb Bacillus cereus B42642008 RefSeq bcu Bacillus cereus AH8202009 RefSeq bcg Bacillus cereus G9******* RefSeq bcq Bacillus cereus Q12009RefSeq
一株自养硝化细菌培养条件的优化
一株自养硝化细菌培养条件的优化 摘要：针对前期筛选的自养硝化杆菌（Nitrobacter）菌株y3-2，以实时荧光定量核酸扩增检测系统（qPCR）测定的菌液终浓度为指标，设计单因素试验和正交试验对其培养基和培养条件进行优化。结果表明，优化的硝化杆菌y3-2的培养基中CaCO3、Na2CO3、NaNO2浓度分别为0.5、1.0、0.5 g/L。最佳培养条件为培养温度28 ℃、pH 8.0、摇床转速200 r/min。优化后硝化杆菌y3-2的发酵周期由优化前的7 d缩短至4 d，菌液终浓度达到4.31×109 CFU/mL。 关键词：硝化杆菌（Nitrobacter）；培养基；培养条件；优化 氮素是水体污染源的主要成分之一，水体的脱氮技术已经成为人们关注与研究的热点[1]。与传统的物理化学脱氮工艺相比，生物脱氮具有成本低、效率高、无二次污染等优势。现今采用最多的生物脱氮工艺为硝化—反硝化工艺，其中的硝化工艺由硝化细菌（Nitrifying bacteria）完成[2]。硝化细菌分为自养型硝化细菌和异养型硝化细菌2类，异养型硝化细菌仅占很少一部分，自养型硝化细菌是生物脱氮过程中起硝化作用的主要菌群，其硝化速率直接影响污水处理系统的硝化效果和生物脱氮效率[3]。硝化过程通常由氨氧化细菌（Ammonia-oxidizing Bacteria，AOB）先将氨氮转化为亚硝酸盐，然后由亚硝酸氧化细菌（Nitrite-oxidizing Bacteria，NOB）将亚硝酸盐转化为硝酸盐[4]。与自养型AOB 一样，自养型NOB具有生长速度慢、自然条件下数量低等特点，这一方面使NOB 的研究较为困难，另一方面也制约了其工业化生产和应用。因此，研究加快NOB 生长速度的培养方法显得尤为重要[5，6]。本研究以一株亚硝酸氧化细菌y3-2[7]为出发菌株，对其培养基和培养条件进行了优化，并采用实时荧光定量核酸扩增检测系统（Real-time quantitative PCR detecting system，qPCR）计数的方法对其菌液浓度进行计数，以期获得能快速培养硝化杆菌y3-2的方法。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌种试验用菌种硝化杆菌y3-2由农业微生物学国家重点实验室发酵工程分室分离纯化保藏，经16 S rDNA鉴定为硝化杆菌属（Nitrobacter）细菌。 1.1.2 优化前培养基及培养条件优化前初始培养基：MgSO4·7H2O 0.12 g/L、NaH2PO4·2H2O 1.16 g/L、K2HPO4·3H2O 0.33 g/L、MnSO4·H2O 0.007 6 g/L、（NH4）6Mo7O24·4H2O 50 μg/L、无水NaCO3 0.5 g/L、NaNO2 1.0 g/L、pH 7.5，121 ℃、30 min灭菌。优化前的培养条件为250 mL三角瓶加入50 mL培养基，200 r/min、30 ℃恒温培养。 1.1.3 试剂亚硝酸盐和硝酸盐定性检测试剂[8]：Griess试剂、盐酸溶液、氨基磺酸铵溶液、二苯胺—硫酸试剂，细菌基因组DNA提取试剂盒和Real Master
枯草芽孢杆菌在肥料中的应用
枯草芽孢杆菌在肥料中的应用 一、枯草杆菌概述： 枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多 种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机 制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。 二、枯草芽孢杆菌的作用机理： 枯草芽孢杆菌大量应用于生物肥料。当作用于作物或土壤时．能够在作物根际或体内定殖，并起到特定肥料 效应。目前，微生物肥料在培肥地力，提高化肥利用率，抑制农作物对硝态氮、重金属、农药的吸收，净化 和修复土壤，降低农作物病害发生，促进农作物秸秆和城市垃圾的腐熟利用。保护环境。以及提高农作物产 品品质和食品安全等方面表现出了不可替代的作用。 三、枯草芽孢杆菌的使用说明： 特点：1.肠道定殖能力强。 2.耐氧化、耐高温、耐酸碱、耐挤压和耐温度变化，满足不同的饲料生产需求。 3.绿色、安全、高效、较少抗生素药物的使用。 贮藏：阴凉、干燥处密封保存。 三、枯草芽孢杆菌的应用范围： 枯草芽孢杆菌不仅在肥料中应用比较广泛，在污水处理及生物肥发酵或发酵床制作中应用也相当广泛，是一 种多功能的微生物。 1、市政和工业污水处理，工业循环水处理，腐化槽、化粪池等处理，畜牧养殖动物废料、臭味处理，粪便处理系统，垃圾、粪坑、粪池等处理； 2、畜牧、家禽、特种动物及宠物养殖，水产养殖； 3、可以与多种菌种混配，在农业生产中具有重要作用。
枯草芽孢杆菌实验报告
微生物技术综合实验 年级：13级生物工程（专升本）班级：2013011201 学号：1301014026 姓名：徐红贞 指导老师：刘凤霞教授 日期：二零一三十月五号
目录 1实验目的及原理 (1) 1.1实验目的 (1) 1.2实验原理 (1) 2实验材料 (1) 2.1实验仪器 (1) 2.2实验试剂 (1) 2.3培养基 (2) 2.3.1 生长培养基 (2) 2.3.2鉴定培养基 (2) 2.3.3摇瓶培养基 (2) 3试验方法 (2) 3.1仪器的准备 (2) 3.2培养基的配置 (2) 3.3初步筛选及鉴定 (2) 3.3.1采集土样 (3) 3.3.2富集培养 (3) 3.3.3稀释分离、纯化 (3) 3.3.4初筛 (3)
3.4复筛及鉴定 (4) 3.4.1革兰染色 (4) 3.5酶活力的测定 (4) 3.5.1摇瓶培养 (4) 3.5.2酶液稀释 (4) 3.5.3酶液测定 (4) 4结果分析 (5) 4.1平板涂布分离 (5) 4.2平板划线分离 (5) 4.3初筛 (5) 4.4复筛 (5) 4.5摇瓶培养 (6) 4.6酶活力测定 (6) 5参考资料 (7) 6附录 (8)
枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定 1.实验目的及原理 1.1实验目的 （1）学习从土壤中分离、纯化枯草芽孢杆菌的原理和方法。 （2）学习掌握枯草芽孢杆菌的鉴定方法。 （3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力的测定的原理和方法。 （4）培养学生综合应用微生物实验方法的能力。 （5）培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。 1.2实验原理 选择合适与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 将土壤稀释液倒在不同类型的培养基平板上，在适宜的环境中培养几天，细菌或是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。故在淀粉部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断培养物中是否有产淀粉酶微生物及产淀粉酶的能力。 2. 实验材料 2.1实验仪器 无菌玻璃涂棒无菌移液管接种环无菌培养皿土样电子天平三角瓶烧杯试管酒精灯擦镜纸载玻片吸水纸恒温摇床恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅
白腐菌液体菌种培养条件的试验研究_吴薇
Ｎｏ．１．２００８ 收稿日期：２００７－０７－２０＊通讯作者 基金项目：中国农业科学院作物科学研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项。 作者简介：吴薇（１９７０—），女，浙江人，博士研究生，副教授，研究方向为农产品加工与贮藏工程和生物质材料工程。 吴 薇１，顿宝庆２，姜训鹏１，吕程序１，高振江１＊，路明２＊ （１．中国农业大学工学院，北京１０００８３；２．中国农科院生物质能源研究中心，北京１０００８１） 摘要：对３种白腐菌的液体菌种培养条件进行了优化研究。结果表明，黄孢原毛平革菌液体菌种培养的较优条件为培养时间４ｄ、初始ｐＨ６．０、装量５０ｍＬ、琼脂添加量０．２％，Ｗ３液体菌种培养的较优条件为培养时间５ｄ、初始ｐＨ６．５、装量５０ｍＬ、琼脂添加量０．３％，变色栓菌液体菌种培养的较优条件为培养时间５ｄ、初始ｐＨ６．５、装量７５ｍＬ、琼脂添加量０．１％。关键词：白腐菌；液体菌种；培养条件中图分类号：ＴＳ２０１．３ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００５－９９８９（２００８）０１－００１６－０３ 白腐菌液体菌种培养条件的 试验研究 Ｓｔｕｄｙｏｎｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｎｌｉｑｕｉｄｓｔｒａｉｎｏｆｔｈｅｗｈｉｔｅ－ｒｏｔｆｕｎｇｉ ＷＵＷｅｉ１，ＤＵＮＢａｏ－ｑｉｎｇ２，ＪＩＡＮＧＸｕｎ－ｐｅｎｇ１，ＬＶＣｈｅｎｇ－ｘｕ１，ＧＡＯＺｈｅｎ－ｊｉａｎｇ１＊，ＬＵＭｉｎｇ２＊ （１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８３；２．ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆ ＥｎｅｒｇｙＳｏｕｒｃｅｓ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ， ｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｎｌｉｑｕｉｄｓｔｒａｉｎｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅｗｈｉｔｅ－ｒｏｔｆｕｎｇｉｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｆｏｒｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｓｔｕｄｙａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｗｈｉｔｅ－ｒｏｔｆｕｎｇｉｉｎｔｈｅｒｅｌｅｖａｎｔｆｉｅｌｄｓｃａｎｂｅｉｍｐｒｏｖｅｄｉｎａｌａｒｇｅｅｘｔａｎｔ． ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｎｌｉｑｕｉｄｓｔｒａｉｎｏｆＰｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍｗａｓ４ｄａｙｓｃｕｌｔｕｒｅｐｅｒｉｏｄ，ｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｐＨ６．０，ｌｉｑｕｉｄｃａｐａｃｉｔｙ５０ｍＬ，ａｇａｒｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ０．２％．Ｔｈｅ 提高海藻糖的百分含量。 将海藻糖和三氯乙酸混合液用３倍体积的９５％乙醇在４℃冰箱中醇析１２ｈ后，在５０００ｒ／ｍｉｎ下离心２０ｍｉｎ得到沉淀物。将此沉淀物冷冻干燥１２ｈ后，可得海藻糖晶体。 参考文献： ［１］ＥｌｂｅｉｎＡＤ．Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆα，α－ｔｒｅｈａｌｏｓｅ［Ｊ］．ＡｄｖＣａｒｂｏ－ｈｙｄＣｈｅｍＢｉｏｃｈｅｍ，１９７４，３０：２２７－２５６ ［２］戴秀玉，程苹．海藻糖的生理功能、分子生物学研究及应用前景［Ｊ］．微生物学通报，１９９５，２２（２）：１０２ ［３］程池．天然生物保存物质———海藻糖的特性和应用［Ｊ］．食品与发酵工业，１９９６，２２（１）：５９－６４ ［４］ 刘洋，张红缨，张今．酵母菌中海藻糖的提取方法与糖代谢研究［Ｊ］．吉林大学自然科学学报，１９９８，（４）：８５－８８ ［５］章银良，毛多斌，张勋．产海藻糖酿酒酵母培养基优化及生理学研究．生物技术，２００１，１１（６）：２７－２９ ［６］ 章银良，熊卫东，张露，等．胁迫条件下酿酒酵母积累海藻糖的发酵研究［Ｊ］．郑州轻工学院学报（自然科学版），２００３， １８（２）：５０－５２［７］ＪｏｈａｎＭＴ．ＭｉｃｒｏｂｉｏｌＲｅｖｉｅｗ［Ｊ］．１９８４，４８（１）：４２－５９［８］ ＪｏａｏＡＪ，ＭａｒｉａＤＬ，ＰｏｌｉｚｅｌｉＴＭｅｔａｌ．ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏ－ｇｙＬｅｔｔｅｒ，１９９７，１５４：１６５－１７１ ［９］ＣａｒｍｅｎＬＡＰ，ＡｎｉｔａＤＰ．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗ， １９９６，（２）：２９３－３１４ ［１０］ＫｏｋｉＳ，ＴｏｓｈｉｙａＫ，ＥｉｉｃｈｉＴｅｔａｌ．ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎ－ ｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９８，６４（１１）：４３４０－４３４５ ［１１］ＳＪＳｔａｓｉｎｏｐｏｕｌｏｓ，ＲＪＳｅｖｉｏｕｒ．Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｅｘｐｏｌｙｓａｃ－ ｃｈａｒｉｄｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅＦｕｎｇｕｓＡｃｒｅｍｏｎｉｕｎｐｅｒｓｉｃｉｕｍｗｉｔｈｆａｔｔｙａｃｉｄｓ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈａｎｄＢｉｏｅｎｇｉ，１９９０，３６：７７８－７８２ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 食品开发与机械 １６
土壤中枯草芽孢杆菌的分离和筛选
土壤中枯草芽孢杆菌的分离和筛选 2013023123刘倩倩 一、实验目的 1. 掌握枯草芽孢杆菌的分离筛选的基本原理，熟练掌握无菌接种技术、微生物分离筛选技术和微生物形态观察技术。 2. 了解枯草芽孢杆菌的分布、营养、生长等特点，以及它所具有的产淀粉酶的功能。根据这些特点进行分离和筛选，从而得到纯菌株。 二、实验原理 枯草芽抱杆菌属革兰氏阳性菌，芽抱0.6?0.9 X 1.0?1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。有的菌株是a -淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系。广泛分布在土壤及腐败的有机物中。选择含淀粉丰富的土壤为最佳，80 度的水浴处理样品1 小时，目的是杀死微生物营养体，残留芽胞。 利用稀释涂布法，在淀粉的培养基培养，培养1-3 天后，观察。然后，进行初筛与纯化，利用显微镜进行革兰氏染色，确认是否为枯草芽抱杆菌。再复筛，测定其淀粉酶活，最后确定菌株。 三、实验材料 （1）选择培养基 本次实验进行产淀粉酶的枯草芽抱杆菌的筛选，所以应选淀粉培养基。 配方：牛肉膏5.0g 蛋白胨10.0g 氯化钠5.0g 可溶性淀粉10.0g 琼脂20g 蒸馏水1000ml 调整pH 至7.2 配置时应先把淀粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中。 2）溶液或试剂
牛肉膏1.25g 蛋白胨2.5g 氯化钠1.25g 可溶性淀粉2.5g 琼脂5g 碘11 克，碘原液2 毫升，碘化钾42克，可溶性淀粉2 克，磷酸氢二钠45.23 克，柠檬酸8.068 克，氯化钴25 克，重铬酸钾3.34 克，100 毫升0.01NHCL。（3）仪器或其他用品 平板培养皿10 个、试管15 支、三角瓶2 个、烧杯3 个、称量纸、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、恒温培养箱、超净工作台、无菌涂布器、电热恒温水浴、500ml 量筒、显微镜、无菌吸管、无菌培养皿、无菌刻度吸管、酒精灯、记号笔、火柴、试管架、接种钩、滴管等。 四、实验步骤 倒平板f制备梯度稀释液f涂布f培养f初筛f复筛f纯化f保存 （1）实验前准备 制备淀粉培养基，无菌水，在121摄氏度下灭菌20min。倒平板。把接种工具，培养基，和其他用品全部在超净工作台上摆好，进行紫外线灭菌30min。 （2）制备土壤稀释液 取土样时最好选取如花坛等地方的土样，选好采样地点，产去表层5cm去 5-15cm处。用无菌器具规范采样几十克，装入无菌的塑料袋或纸袋中扎好，记录采样时间、地点、采样环境等以备考证。采样后应尽快分离。振摇约二十分钟，使土样与水充分混合，将细胞分散。放入盛有99ml 无菌水三角瓶中，常压80 度的水浴处理样品1 小时后，取出。 用一支1ml 无菌吸管从中吸取1ml 土壤悬液加入盛有9ml 无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml 加入另一盛有9ml 无菌水的试管中，混合均匀，以此类推，制成10-2 、10-3、10-4、10-5 不同稀释度的土壤溶液。 （3）涂布 将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-3、10-4、10-5 三种稀释度，然后用无菌吸管分别由10-3 、10-4、10-5 三管土壤稀释液中各吸取0.2ml ，小
枯草芽孢杆菌实验报告
微生物技术综合实验 年级： 13级生物工程（专升本）班级： 2013011201 学号： 1301014026 姓名：徐红贞 指导老师：凤霞教授 日期：二零一三十月五号
目录 1实验目的及原理 (1) 1.1实验目的 (1) 1.2实验原理 (1) 2实验材料 (1) 2.1实验仪器 (1) 2.2实验试剂 (1) 2.3培养基 (2) 2.3.1 生长培养基 (2) 2.3.2鉴定培养基 (2) 2.3.3摇瓶培养基 (2) 3试验方法 (2) 3.1仪器的准备 (2) 3.2培养基的配置 (2) 3.3初步筛选及鉴定 (2) 3.3.1采集土样 (3) 3.3.2富集培养 (3) 3.3.3稀释分离、纯化 (3) 3.3.4初筛 (3) 3.4复筛及鉴定 (4) 3.4.1革兰染色 (4) 3.5酶活力的测定 (4) 3.5.1摇瓶培养 (4) 3.5.2酶液稀释 (4) 3.5.3酶液测定 (4) 4结果分析 (5) 4.1平板涂布分离 (5) 4.2平板划线分离 (5) 4.3初筛 (5) 4.4复筛 (5) 4.5摇瓶培养 (6) 4.6酶活力测定 (6) 5参考资料 (7)
6附录 (8)
微生物上游技术综合实验 枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定 1.实验目的及原理 1.1实验目的 （1）学习从土壤中分离、纯化枯草芽孢杆菌的原理和方法。 （2）学习掌握枯草芽孢杆菌的鉴定方法。 （3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力的测定的原理和方法。 （4）培养学生综合应用微生物实验方法的能力。 （5）培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。 1.2实验原理 选择合适与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 将土壤稀释液倒在不同类型的培养基平板上，在适宜的环境中培养几天，细菌或是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。故在淀粉部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断培养物中是否有产淀粉酶微生物及产淀粉酶的能力。 2. 实验材料 2.1实验仪器 无菌玻璃涂棒无菌移液管接种环无菌培养皿土样电子天平三角瓶烧杯试管酒精灯擦镜纸载玻片吸水纸恒温摇床恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅玻璃珠显微镜无菌铲胶头滴管记号笔试管架棉塞牛皮纸报纸细绳无菌纸袋电炉搪瓷缸分光光度计恒温水浴锅白瓷皿等。 2.2 实验试剂 ○1碘液储备液：称取22.0g碘化钾溶于约300mL水中，加入11.0g碘，搅拌溶液，移入500mL容量瓶，用水定容，贮于棕色瓶中备用（每月配制一次）。 ○2碘液使用液：称取20.0g碘化钾，溶于约300mL水中，移入500mL容量瓶中，准
光合细菌海水培养的条件优化研究
光合细菌海水培养的条件优化研究 摘要 [目的]为光合细菌的海水培养提供科学的理论依据。[方法]对海水培养光合细菌进行培养基选择和培养条件优化研究。[结果]结果表明:矢木修身培养基是海水培养光合细菌的最佳培养基;最适宜光合细菌生长的条件是温度在30~35e,光照强度在2 000~3 000 lx,接种量在20% ~25%,空气体积分数为5%,初始pH值在7.0~7.5。[结论]光合细菌在最适宜的条件下5~6d 即可培养成熟。 关键词光合细菌;海水培养;培养基;培养条件 Study on theOptim ization ofCulture Conditions ofPhotosynthetic Bacteria with Seawater Abstract [Objective] The research ami ed toprovide scientific theorybasis for the culture ofphotosynthetic bacteriawith seawater. [Method] The optmi al culture conditions andmedium ofphotosynthetic bacteriawith seawaterwere studied. [Result] The results showed thatthe optmi al medium was Shmi uxiushenmedium.The optmi algrowth conditions ofphotosynthetic bacteria was temperature 30-35e, the light2 000- 3 000 lx, the inoculum 20% -25%, the air cubagemark 5% and the originalpH value 7.0-7.5. [Conclusion] Underoptmi algrowth con- ditions, photosynthetic bacteria could be cultured tomature in 5-6 days. Key words Photosynthetic bacteria; Culturewith seawater; Medium; Culture condition 光合细菌(Photosynthetic Bacteria,简称PSB)是一群能在 厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源,进 行不放氧光合作用的细菌,广泛分布于水田、湖沼、江河、海 洋、活性污泥和土壤中,其中在生产上有意义的红螺菌科包 括红螺菌属、红假单胞菌属和红微菌属[1]。很多资料表明, PSB具有许多独特的生理功能,在养殖业、种植业、环境治 理、新能源开发利用等应用领域具有十分广阔的前景[2],尤 其在水产养殖中,其能够降解水体中的亚硝酸盐、硫化物等 有毒物质,实现充当饵料、净化水质、预防疾病、作为饲料添 加剂等功能,它的诸多特性,使其在无公害水产养殖中具有 巨大的应用价值。所以,有关PSB的研究已受到广泛重视。 但是,目前对PSB最适培养条件的研究,特别是海水培养 PSB,国内外的相关报道众说不一,因此该试验采用海水培 养,针对不同培养基、不同培养条件(温度、光照、接种量、氧 需求程度、pH值)等进行系统研究,为PSB的海水培养提供 科学的理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌种。菌种由对虾养殖池底泥选择培养得到,主要
枯草芽孢杆菌使用说明
枯草芽孢杆菌(活菌数200亿/400亿) 一、枯草杆菌概述：枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种。单个细胞 0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。 二、枯草芽孢杆菌的作用机理：枯草芽孢杆菌大量应用于生物肥料。当作用于作物或土壤时．能够在作物根际或体内定殖，并起到特定肥料效应。目前，微生物肥料在培肥地力，提高化肥利用率，抑制农作物对硝态氮、重金属、农药的吸收，净化和修复土壤，降低农作物病害发生，促进农作物秸秆和城市垃圾的腐熟利用．保护环境。以及提高农作物产品品质和食品安全等方面表现出了不可替代的作用。三、枯草芽孢杆菌的使用说明： 特点：1.肠道定殖能力强。 2.耐氧化、耐高温、耐酸碱、耐挤压和耐温度变化，满足不同的肥料生产需求。 3.绿色、安全、高效、较少抗生素药物的使用。
成分含量：枯草芽胞杆菌有效活菌数大于200亿/克 用法用量： 贮藏：阴凉、干燥处密封保存。 保质期：密封保存不少于18个月。 四、枯草芽孢杆菌的应用范围：枯草芽孢杆菌不仅在肥料中应用比较广泛，在污水处理及生物肥发酵或发酵床制作中应用也相当广泛，是一种多功能的微生物。 1、市政和工业污水处理，工业循环水处理，腐化槽、化粪池等处理，畜牧养殖动物废料、臭味处理，粪便处理系统，垃圾、粪坑、粪池等处理； 2、畜牧、家禽、特种动物及宠物养殖，水产养殖； 3、可以与多种菌种混配，在农业生产中具有重要作用。 如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！
枯草芽孢杆菌培养基的优化研究
目录 枯草芽孢杆菌培养基的优化研究........................................ - 1 - 1 枯草芽孢杆菌简介及应用............................................ - 2 - 1.1 枯草芽孢杆菌简介............................................ - 2 - 1.2 枯草芽孢杆菌应用............................................ - 2 - 2材料和方法........................................................ - 4 - 2.1 实验材料................................................... - 4 - 2.1.1 菌株................................................... - 4 - 2.1.2 培养基................................................. - 4 - 2.1.3 仪器与设备............................................. - 4 - 2.2 培养基的优化............................................... - 4 - 2.2.1 培养方法............................................... - 4 - 2.2.2 检测方法............................................... - 5 - 2.2.3含水量对枯草芽孢杆菌生长的影响......................... - 5 - 2.2.4稻草粗细程度对枯草芽孢杆菌生长的影响................... - 5 - 2.2.5氮源对枯草芽孢杆菌生长的影响........................... - 5 - 2.2.6碳源对枯草芽孢杆菌生长的影响........................... - 5 - 2.2.7碳氮比对枯草芽孢杆菌生长的影响......................... - 6 - 2.2.8 pH对枯草芽孢杆菌生长的影响............................ - 6 - 3 结果和分析........................................................ - 6 - 3.1含量水对枯草芽孢杆菌生长的影响............................... - 6 - 3.2稻草粗细程度对枯草芽孢杆菌生长的影响......................... - 6 - 3.3氮源对枯草芽孢杆菌生长的影响................................. - 7 - 3.4碳源对枯草芽孢杆菌生长的影响................................. - 7 - 3.5碳氮比对枯草芽孢杆菌生长的影响............................... - 8 - 3.6 pH对枯草芽孢杆菌生长的影响.................................. - 8 - 参考文献............................................................ - 9 -