实验一 紫外-可见分光光度计的性能检验

实验一 紫外－可见分光光度计的性能检验 一、实验目的

1.掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法

2.学会UV-1100型紫外－可见分光光度计的使用方法 二、实验原理

分光光度计的性能的好坏，直接影响到测定结果的准确程度。因此，要对仪器进行性能检查，以保证测定结果的准确性。

三、仪器和试剂

UV －1100型紫外－可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 擦镜纸

K 2Cr 2O 7溶液 KMnO 4溶液 蒸馏水

四、实验内容及操作步骤

1. 比色皿的配对性 将蒸馏水注入到比色皿中，以其中一个比色皿作空白，在 440 nm 波长处分别测定其他各比色皿中的透光率。

2.波长精度的检查 用KMnO 4溶液的最大吸收波长525nm 为标准，在待测仪器上测绘KMnO 4溶液的吸收曲线，若测得的最大吸收波长在525±1nm 以内，则仪器的波长精度符合使用要求。

3. 重复性 以0.02mol/L 的H 2SO 4溶液的透光率为100%，用同一K 2Cr 2O 7溶液连续测定7次，求出极差，如小于0.5%，则重复性符合要求。

4.吸收值的准确度考察 取K 2Cr 2O 7溶液，在以下波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，如下表所示，其相对偏差在±1%以内，则吸收值的准确度符合要求。

波长/cm 235

（最小）

257

（最大）

313

（最小） 350

（最大） 吸收系数1%1E cm

123.0～126.0 142.8~146.2

47.0~50.3

105.5~108.5

五、思考题

1. 同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？

2. 检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？

实验二、吸收曲线的测绘及吸收系数的测定 一、实验目的

1. 掌握测绘吸收曲线的方法

2. 学会测定吸收系数 二、实验原理

实验三、分光光度法测定槐花中总黄酮的含量

一、实验目的

1.掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法

2.巩固紫外－可见分光光度计的操作方法

二、实验原理

黄酮类化合物分子结构中多含有羰基和羟基等结构，这些结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物。

铝盐比色法是指用三氯化铝或硝酸铝、亚硝酸钠同黄酮类化合物生成稳定的有色配合物，可用于定量分析。

三、仪器和试剂

UV－1100型紫外－可见分光光度仪

石英比色皿（一对）

5% NaNO2溶液

10% Al(NO3)3溶液

NaOH试液

芦丁对照品

槐花药材

其余试剂均为分析纯

四、实验内容及操作步骤

1. 对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品50mg，置25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。（每1ml中含无水芦丁0.2mg）。

2. 标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3. 样品测定取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色，移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3ml，至25ml 量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量（μg），计算，即得。

槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计，不得少于8.0%。

五、注意事项

1、对照品和样品应同时显色

2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确

六、思考题

1.分光光度法有哪些影响因素？

2.试述标准曲线法的优点。

实验四、薄层板的制备

一、实验目的

掌握薄层板的制板方法

二、仪器和试剂

天平（0.1mg）研钵

玻璃板 10 cm×20cm

CMC-Na水溶液

蒸馏水

95％乙醇（A.R）

薄层层析用硅胶G（青岛海洋化工厂）

三、实验内容及操作步骤

1. 洗板选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在薄层板放置架上阴干备用。（要求：薄板应光滑、平整、不符水珠。）

2．匀浆将吸附剂1份（3.0g）和水3份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。

3．铺制将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板板的一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。

4．活化将阴干的薄层板至于110℃烘箱中活化30分钟，置于有干燥器中备用。

要求：制备好的薄层板应检查其均匀度,即在反射光及透射光的检视下其表面应均匀、光滑、平整、无麻点、无气泡、无破损及无污染。

四、注意事项

1.玻璃板的规格有多种10*20cm、20*20cm等，可根据实验需要选择不同规格的玻璃板。

2. CMC-Na水溶液做为薄层板制备的粘合剂，《中国药典》2005年版规定其浓度在2‰～5 ‰，其浓度大小决定了所制备薄层板的硬度，本次实验粘合剂浓度为3 ‰。

3.除硅胶GF254外，薄层用硅胶还有硅胶G、硅胶H、硅胶GF365、硅胶GH254、硅胶GH365等，不同种类的硅胶所制备出的薄层板性能不同。本次试验所用的硅胶GF254是指一种含有煅石膏的硅胶并在其硅胶中加入了一种在254nm下显强荧光背景的荧光剂，主要用于分离、检视在紫外和可见光下物无吸收的成分。

五、思考题

1．薄层板的铺制过程中应注意哪些问题？

实验五薄层色谱定性分析（五味子的定性鉴别）

一、实验目的

1. 掌握薄层色谱的定性分析方法

2. 熟悉薄层板的点样方法

二、实验原理

中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。

三、仪器与试剂

毛细管

薄层板 10 cm×20cm

所用试剂均为分析纯

五味子粉末

四、实验内容及操作步骤

取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为

供试品液。另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每ml 含1mg的对照品溶液。吸取上述三种溶液各2μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

五、注意要点

1.五味子有南、北之分。《中国药典》2005年版（一部）所收载的五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(TurcZ) Bail的干燥成熟种子。习称“北五味子”。

2.本次实验操作分为点样、展开、检视与记录数据四个过程。具体操作要点如下：

2.1点样：在干燥、清洁的环境中用毛细管分别吸取对照品溶液、对照药材溶液和样品溶液于同一硅胶GF254

薄层板上，点样基线距离底边10~15mm，点样圆点不大于3mm，接触点样时勿损伤薄层板表面。点间距离不少于8mm。

2.2展开：浸入展开剂的深度为距底边5mm为宜。上行展开10cm左右，达到展距后取出薄层板、晾干、待检测。（展开之前应注意预平衡：在双槽展开箱的一侧槽内加入适量的展开剂，密闭，一般保持15～30 min，待容积蒸汽平衡后，应迅速将薄层板放入展开箱中，立即密闭，展开。）

2.3检视与记录数据：将展开、晾干的薄层板置于254mm紫外灯下检视，观察供试品溶液所显示的主斑点的颜色和位置（Rf值）与对照品溶液、对照药材溶液是否一致。当供试品溶液主斑点与对照品、对照药材能对应时，即可认为该药材为药典收载五味子。

六、思考题

1．如何克服薄层展开过程中的边缘效应？引起边缘效应的因素有哪些？

实验六、高效液相色谱仪的使用

一、实验目的

1. 掌握高效液相色谱仪的使用方法

2.了解高效液相色谱仪的结构

二、仪器和试剂

L-2000液相色谱仪（紫外检测器）；

C18反相键合色谱柱（250 mm×4.6 mm）；

微量进样器（25μl）；

过滤器（0.45μm）及脱气装置；

苯、甲苯、萘；

甲醇（色谱纯）；

重蒸馏水（新制）；

三、实验内容与步骤

（一）．流动相的预处理：

1．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

2．对过滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

（二）．安装色谱柱

（三）．液相色谱仪的使用方法

1.启动液相色谱仪：

(1)检查仪器的电源线是否已连接。

(2)打开仪器的电源开关。

(3)打开输液泵电源。

(4)打开检测器电源。（在平衡和冲洗色谱柱时请将检测器关闭）

2..排除管道内空气：

(1)将吸滤头放入经过处理后的溶剂内。

(2)将输液泵阀打开（逆时针旋转180o）。

(3)按下pump on/off键，开启输液泵。

(4)按下purge键，开始排管道内气泡。

(5)仔细观察管路，至无气泡流出时，再次按下purge键，暂停排液。

(6)按下pump on/off键，关闭输液泵。

(7)顺时针旋紧输液泵阀。

3.泵流速的设定：

(1)按下manual键。

(2)按下1键，按ent键确认。

(3)输入需要的流速，按ent键确认。

4.检测器波长的设定：

按下wl键，输入需要的波长，按ent键确认。

5.打开T2000P色谱工作站：

(1)选择实时进样通道1，进入样品信号采集界面。

(2)鼠标左键点击“方法”，修改或者新建分析方法。

(3)鼠标左键点击“谱图”，设置谱图显示。

(4)在“停止时间”项下输入采集停止时间。

(5)在“路径及文件名规则”项下输入文件保存路径。

(6)鼠标右键点击“使用方法”项下分析方法，选择分析方法。

6.色谱柱预平衡：

按下pump on/off键，开启输液泵。至基线平稳时可开始进样。

7．进样：

(1)进样前按A/Z键将基线调零。

(2)将进样阀逆时针旋至于load位，插入进样针，进样。

(3)进样后立即将进样阀顺时针旋至injecti位。工作站开始采集信息。

8.数据采集完毕后，点击停止进样。

9.点击“再处理”和“报告”图标对图谱进行再处理，出报告图。

10.实验完毕后冲洗色谱柱。

11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、关闭仪器电源。

附: 练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量

色谱条件流动相为甲醇∶水（80∶20）；固定相为C18反相键合色谱柱；检测波长为254nm；流速：1ml/min。

样品溶液含苯、甲苯、萘浓度分别为1μg/ml的甲醇溶液。

进样量：10μl。

四、问题讨论

流动相在使用前为何要过滤和脱气？

实验七高效液相色谱定性及定量分析——中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和含量测定（色谱分析设计实验）

一、实验目的

1.掌握利用高效液相色谱法进行定性及定量分析

2.巩固高效液相色谱仪的使用方法

二、实验内容

中药赤芍中芍药苷的高效液相色谱分析

三、实验提示

赤芍为常用中药，主要含芍药苷，并含氧化芍药苷、芍药内酯苷、牡丹酚、挥发油等，赤芍中的芍药苷是其主要活性成分，为了控制其含量，对赤芍中的芍药苷进行含量测定。

四、实验要求

1. 在老师的指导下查阅文献，系统了解赤芍中的芍药苷的测试方法。

2. 设计赤芍的提取处理方案。

3. 设计液相色谱分离条件（色谱柱，流动相，检测器等）与定量方法。

4. 实验报告按设计实验的要求书写。

五、思考题

1．外标一点法的主要误差来源是什么？

2．紫外检测器的优缺点是什么？

实验八、气相色谱仪的使用

一、实验目的

1.掌握气相色谱仪的使用方法

2.了解气相色谱仪的结构

二、实验原理

气相色谱法是采用气体作流动相（载气）流经色谱柱进行分离分析的方法。所用的仪器为气相色谱仪，主要由气源部分、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。

三、仪器与试剂

岛津GC-2014气相色谱仪（FID检测器）

樟脑对照品溶液

试剂均为A.R纯；

四、实验内容及操作步骤

（一）、启动GC-2014气相色谱仪：

1、检查仪器的电源线及氮气、空气、氢气的接头是否连好；

2、打开氮气、空气、氢气钢瓶及减压阀；

3、打开仪器右侧的电源开关，待自检完成后，开启电脑；

（二）、参数的设定：

1、进样口温度：按下“INJ”键，设定进样口温度；

2、柱温：按下“COL”键，设定柱温；

3、检测器温度：按下“DET”键，设定检测器温度；

4、载气的流量：按下“FLOW”键，设定载气的流量；

5、分流比：按下“FLOW”键后，设定“SPLIT RATIO”项；

（三）、打开N2000色谱工作站：

（四）、运行GC-2014气相色谱仪：

1、点击“SYSTEM”，按下“START GC”键开启系统，再按下“MONITOR”键，在监视栏中观察流量、柱温、进样口温度、检测器温度的变化；

2、待温度达到设定值后，点击“MONITOR”键后，点击flame on，确认点火是否成功。

3、确认点火成功后，观察图谱的基线；

（五）、进样

1、进样前按“ZERO ADJUST”键，将基线调零；

2、将进样针迅速插入进样口，并快速进样，然后立即按下数据采集开关，稍过片刻后拔出进样针；（六）、待数据采集完毕后，点击停止采集；

（七）、待样品分析结束后，在离线处理数据，察看数据报告，打印报告。

（八）、关机：

1、将进样口、柱温箱、检测器的温度设为室温；

2、待各单元温度低于80度后，点击“MONITOR”键后，按下“SYSTEM”键，再点击“STOP GC”键关闭系统；

3、关闭N2000色谱工作站，关闭主机电源；

4、关闭氮气、空气、氢气钢瓶。

附: 练习气相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量

色谱条件：聚乙二醇（PEG）-20M毛细管柱（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25μm）；柱温为160℃。样品溶液樟脑对照品溶液。

进样量：1μl。

五、思考题

使用气相色谱仪时，应该注意那些问题？

紫外可见分光光度计检定中的常见问题分析

紫外可见分光光度计检定中的常见问题分析 发表时间：2018-01-17T15:17:40.770Z 来源：《建筑学研究前沿》2017年第23期作者：王悦杨洋 [导读] 紫外可见分光光度计的工作原理是通过对被测物质在不同波长范围内光的吸收度的不同反应。 大连市计量检测研究院辽宁大连 116033 摘要：由于紫外可见分光光度计具备的灵敏度高、操作简单的特性，因此这些被广泛的应用在医学、化学、生物学等学科领域，同时，在医院、冶金、化工、食品安全等行业也被广泛应用。紫外可见分光光度计检测的准确性直接影响着使用的有效性，因此，为了确保实验结果的准确需要对紫外可见光光度计检定中的误差进行控制。 关键词：紫外可见；分光光度计；检定；常见问题 引言 紫外可见分光光度计的工作原理是通过对被测物质在不同波长范围内光的吸收度的不同反应，进而对物质进行分析的一种仪器。紫外可见分光光度计使用简单、灵敏度高，被广泛应用在各个领域。紫外可见分光光度计的组成基本相同，由氘灯和钨灯作为光源系统，经过光棱镜或光栅滤光的反应，然后通过样品吸收池吸收，并最终对物质进行检测。 1紫外可见分光光度计的检定 1.1波长最大允许误差 波长点测量出零度和满度之后，将检测物质放置在样品光路中，然后沿着同一波长方向逐点对检测物质的透射比值进行检测，并求出峰值波长。测得的波长平均值与标准值之间的误差即为波长误差，规定对波长最大误差做出了规定，并对低压石英汞灯、氧化钬滤光片和氧化钬溶液等九种标准物质进行了标准误差的限定，其中氧化钬滤光片、镨钕滤光片、干涉滤光片等由于使用方便，便于保存，是使用最广泛的检测紫外可见分光光度计波长示值误差的标准物质。氧化钬滤光片具有较完整的波长吸收峰值点，而镨钕滤光片却是在波长较小的情况下没有吸收峰，因此，通常情况才，要将这两者结合起来使用。 1.2透射比示值误差检定 在规定标准下，比如出现波长 235nm、波长 257nm、波长313nm、波长 350nm、波长 440nm、波长 546nm、波长 635nm 时，要开始校正检测仪器的满度和检测仪器的零度，以对检测物质进行透射比的对比。同样的，实际检测得出的平均值与标准值之间的差异即为检测误差，规程规定的透射比标准物质有重铬酸钾标准溶液、紫外光区透射比滤光片和光谱中性滤光片，在这些规定的标准数值中，波长235nm、波长 257nm、波长 313nm和波长 350nm 这四种用的是重铬酸钾标准溶液。便于保存以及携带方便，紫外光区透射比滤光片通常用来检测上述提到的四种波长误差，而另外三种则使用光谱中性滤光片来检定。 1.3杂散光检定 杂散光检定通常会选择截止滤光片来进行检测，而且检测仪器调出零度和满度后，如果检测物质处在相同波长的情况下，会通过测量滤光片的透射比，进而通过这种透射比值将对检测物质的杂散光进行检定。 2紫外可见分光光度计检定中的误差分析 2.1检测环境不符合规定所造成的误差 紫外可见分光光度计在对物质进行检测时，其检测结果的准确性可能会受检测环境的影响，如果不对检测环境进行适当的控制，可能会引起误差，从而不利于检测结果的准确性。比如，如果不对紫外可见分光光度计进行密封处理，或者是使用了密封性不是很好的检测仪器，会使得光源系统直接受到强光的照射，这种情况下会减少杂散光，从而不利于检测结果，容易产生误差。如果检测环境中灰尘较大，滤光片沾染灰尘，这些都是误差产生的原因，因此，在进行检测工作时，一定要在标准环境下进行，避免出现不必要的误差，以确保检测结果的准确性。 2.2检定方法不当造成的误差 在对波长示值进行检测时，连续法曾经被使用，这种方法通过连续驱动波长进行传动检测，直接利用仪器透射比示值的变化测试峰值波长，这种检测方法使得波长传动连续驱动，从而测试得到的光谱会受到光谱曲线的影响，容易产生很大的误差，因此，这种方法经过实践检验后最终被否定。根据在JJG178 －2007《紫外、可见、近红外分光光度计》的规定，使用紫外可见分光光度计进行检测时可以使用逐点法，逐点法是通过调整零度和满度，在绘制 T － λ 曲线的基础上，从而测试透射比最大值所对应的波长。使用逐点法可以减少仪器光源、波长传动机构等对检测结果的影响，使得检测结果可以最大限度的反应出仪器的波长。使用逐点法进行检测时，为了确保监测数据的准确性，一定要按照规定的标准和要求进行检测，避免出现不必要的误差，影响数据检测的准确性。 2.3标准滤光片造成的误差 标准滤光片的定值误差和方向性引起的误差都是标准滤光片带来的误差，标准滤光片的标准值是不断变化的，随着时间的不断推进，波长值可能会发生变化，如果不对波长值实时进行更显，就会产生一定的误差，不利于检测结果的准确性。 2.4检测人员操作不当引起的误差 检测过程是由检测人员来操作的，由于检测人员操作不当也可能会引起误差，比如检测人员的检测习惯、专业素养都会对检测结果产生影响。例如使用指针式紫外可见分光光度计进行检测时，由于每个人的习惯是不同的，这样会使得观测位置有差异，不同的检测人员会有不同的数值，可能会造成误差的产生，不利于数据检测的准确性。 2.5检测仪器储存不当引起的误差 检测仪器储存不当会使得仪器受潮、灰尘覆盖，而这些都会影响检测仪器检测时数值的不准确性，也是误差产生的原因。 3紫外可见分光光度计检定中常见问题的解决对策 3.1杂散光问题的解决对策 紫外可见分光光度计的光敏元件十分敏感，同时还需要散热来保持元件温度正常，空气中漂浮的灰尘会通过散热孔进入附着在光敏元

药物分析设计性实验

logo 药物分析设计性实验 研究报告 学院：xx学院 班级： 组号： 成员： 指导教师: 时间：

鉴别试验实验设计 实验目的： 1.掌握药物结构与分析方法间的关系 2.掌握分析方法基本操作与含量计算 3.熟悉专业文献的查阅,信息检索 4.了解药品分析的全过程 5.了解如何根据文献资料进行实验设计 实验原理： 葡萄糖: (1) 单糖分子中都含有羰基或醛基——还原性。 (2).单糖在水溶液中主要呈半缩醛的环状结构。 阿莫西林: (1)具有酚羟基可以与三氯化铁反应 (2) 具有手性碳,比旋度为+290°至+310° SMZ: (1) 具有磺酰氨基,可以金属离子络合 (2)本品具有芳伯胺基团,显芳香第一胺类的鉴别反应 对乙酰氨基酚: (1)具有酚羟基可以与三氯化铁反应 (2)具有隐性芳伯氨基,水解显芳香第一胺类的 实验药品：葡萄糖、阿莫西林、SMZ、对乙酰氨基酚 实验试剂和仪器： 仪器:旋光仪,IR,超声机,水浴锅,一般玻璃仪器 试剂：蒸馏水、碱性酒石酸铜试液、0.4％氢氧化钠溶液、硫酸铜试液、三氯化铁试液、稀盐酸、亚硝酸钠试液、碱性β-萘酚试液。 实验步骤:

葡萄糖： (1)取本品约0.2g，加水5ml 溶解后，缓缓滴入微温 的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。 (2)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。 分别称取一定比例干燥的葡萄糖和溴化钾 (1.0:100)，置玛瑙研钵中，在红外灯下研匀，取适量置于压模中，均匀铺布后，抽真空 2 m i n ，加压至 20~30MPa并保持2min，取出制成的供试片，置于红外光谱仪的样品光路中，录制光谱图。 中国药典葡萄糖红外光谱图 ( 光谱号码 7 0 2 ) 阿莫西林： (1)取阿莫西林适量，研细，加pH=7.0磷酸盐缓冲液溶解（必要时冰浴超声助溶10分钟）制成阿莫西林的溶液，静置，滤过，取滤液作为供试品溶液加三氯化铁试液3滴，即显深橘红色。 (2)取本品精密称定，加水溶解并稀释成每1ml中1mg的溶液，依法测定(除另有规定外，本法系采用钠光谱的D线（589. 3nm)测定旋光度，测定管长度为ldm(如使用其他管长，应进行换算）,测定温度为20°C。使用读数至0. 01°并经过检定的旋光计。测定旋光度时，将测定管用供试液体或溶液（取固体供试品，按各品种项下的方法制成）冲洗数次，缓缓注入供试液体或溶液适量（注意勿使发生气泡），置于旋光计内检测读数，即得供试液的旋光度。读取旋光度3次，取3次的平均数，照下列公式计算，即得供试品的比旋度。 )，比旋度为+290度至+310度。 SMZ: (1) 取本品约0.1g，加水与0.4％氢氧化钠溶液各3ml，振摇使溶解.滤过，取滤液，加硫酸铜试液1滴，即生成草绿色沉淀. (2)取供试品约50mg,加稀盐酸lml,必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0. lmol/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。 对乙酰氨基酚:

紫外-可见分光光度计的检测实验报告

分子光谱实训报告 班级：———— 学号： 姓名： 指导教师： 2015年10月 紫外-可见分光光度计的检测

实训日期______年_____月_____日教师评定：______________ 【仪器概况】 仪器名称：紫外-可见分光光度计 型号：UV1801 厂家：北京瑞利分析仪器公司 编号：090953 二、【仪器结构】 三、【实验项目】 波长准确度检查 仪器零点稳定性检查 光电流稳定度检查 吸光度准确度检查 紫外区透色比检查 杂散光合格性检查 吸收池配套性检查 皿差 四、【仪器及试剂准备单】 1、试剂清单（以1个小组6人为例） H2SO3、K2Cr3O7、HClO4、碘化钠、蒸馏水、亚硝酸钠、无水乙醇、苯、硫酸铜。 2、仪器清单（以1个小组6人为例） UV1801紫外分光光度计、烧杯14个、容量瓶9个、玻璃棒、滤纸、洗瓶、镨钕滤光片、比色皿、胶头滴管、洗耳球、移液管、表面皿、移液管架。

五、【检测步骤】 开机自检（5个ok） （一）、波长准确度 可见分光光度（空气） 1、按1、波长扫描；按F1，参数设置（E、波长范围460--680nm、间隔0.1nm、换灯点800nm）按返回键。 2、按F2，根据显示屏提醒，确定键；出现两个峰，分别记录两个峰值的波长和吸光值。（重复3次；参比和样品都是空气）。 镨钕滤光片 1、按F1，参数设置（A、波长范围500--540nm、间隔1nm、换灯点360nm)按返回键。 2、把镨钕滤光片放在第二格，关盖；按F2，根据显示屏提醒，拉入参比，确定键；再拉入样品，确定键；出现一个峰，记录读数。 紫外分光光度 1、按F1，参数设置（A、波长范围200--270nm、间隔0.1nm、换灯点360nm）按返回键。 2、加3滴苯在石英比色皿中，盖上比色皿盖，放在第二格，关盖；按F2，根据显示屏提醒，拉入参比，确定键；再拉入样品，确定键；出现五指峰，分别记录五个不同峰的波长和吸光值。 （二）、透射比的准确度 将参比溶液0.001mol/L高氯酸加入石英比色皿3/4处（润洗3次）放在第一格；将测定液重铬酸钾加入石英比色皿3/4处（润洗3次）放在第二格；调节测量方式T；返回主页面，按2，光度测量；按F1，参数设置（换灯点360nm、波长数4个，入分别调到235nm、257nm、313nm、350nm）；按F2，根据显示屏提醒，拉入参比，确定键；再拉入样品，确定键；记录读数。 （三）、吸光度准确度

紫外可见分光光度计常见故障的排除

紫外可见分光光度计常见故障的排除 光源部分： （1）故障：钨灯不亮； 原因：钨灯灯丝烧断（此种原因几率最高）； 检查：钨灯两端有工作电压，但灯不亮；取下钨灯用万用表电阻档检测。 处置：更换新钨灯； （2）故障：钨灯不亮； 原因：没有点灯电压； 检查：保险丝被熔断； 处置：更换保险丝，（如更换后再次烧断则要检查供电电路）； （3）故障：氘灯不亮； 原因：氘灯寿命到期（此种原因几率最高）； 检查：灯丝电压、阳极电压均有，灯丝也可能未断（可看到灯丝发红）； 处置：更换氘灯； （4）故障：氘灯不亮； 原因：氘灯起辉电路故障； 检查：氘灯在起辉的过程中，一般是灯丝先要预热数秒钟，然后灯的阳极与阴极间才可起辉放电，如果灯在起辉的开始瞬间灯内闪动一下或连续闪动，并且更换新的氘灯后依然如此，有可能是起辉电路有故障，灯电流调整用的大功率晶体管损坏的几率最大。 处置：需要专业人士修理； 二．信号部分： （1）故障：没有任何检测信号输出； 原因：没有任何光束照射到样品室内；

检查：将波长设定为530nm，狭缝尽量开到最宽档位，在黑暗的环境下用一张白纸放在样品室光窗出口处，观察白纸上有无绿光斑影像； 处置：检查光源镜是否转到位？双光束仪器的切光电机是否转动了（耳朵可以听见电机转动的声音）？ （2）故障：样品室内无任何物品的情况下，全波长范围内基线噪声大； 原因：光源镜位置不正确、石英窗表面被溅射上样品； 检查：观察光源是否照射到入射狭缝的中央？石英窗上有无污染物？ 处置：重新调整光源镜的位置，用乙醇清洗石英窗； （3）故障：样品室内无任何物品的情况下，仅仅是紫外区的基线噪声大； 原因：氘灯老化、光学系统的反光镜表面劣化、滤光片出现结晶物； 检查：可见区的基线较为平坦，断电后打开仪器的单色器及上盖，肉眼可以观察到光栅、反光镜表面有一层白色雾状物覆盖在上面；如果光学系统正常，最大的可能是氘灯老化，可以通过能量检查或更换新灯方法加以判断； 处置：更换氘灯、用火棉胶粘取镜面上的污物或用研磨膏研磨滤光片（注意：此种技巧需要有一定维修经验者来实施）； （4）故障：样品室放入空白后做基线记忆，噪声较大，紫外区尤甚； 原因：比色皿表面或内壁被污染、使用了玻璃比色皿或空白样品对紫外光谱的吸收太强烈，使放大器超出了校正范围； 检查：将波长设定为250nm，先在不放任何物品的状态下调零，然后将空比色皿插入样品道一侧，此时吸光值应小于0.07Abs；如果大于此值，有可能是比色皿不干净或使用了玻璃比色皿；同样方法也可判断空白溶液的吸光值大小； 处置：清洗比色皿，更换空白溶液； （5）故障：吸光值结果出现负值（最常见）； 原因：没做空白记忆、样品的吸光值小于空白参比液； 检查：将参比液与样品液调换位置便知； 处置：做空白记忆、调换参比液或用参比液配置样品溶液； （6）故障：样品信号重现性不良；

紫外可见分光光度计计量标准技术报告.docx

）））））））） 计量标准技术报告 计量标准名称紫外可见分光光度计检定装置 计量标准负责人 建标单位名称（公章）新月市质量技术监督检验测试中心填写日期

目录 一、建立量准的目的?????????????????????( 01 ) 二、量准的工作原理及其成??????????????( 01) 三、量准器及主要配套????????????????( 02 ) 四、量准的主要技指??????????????????( 03 ) 五、境条件?????????????????????????( 03 ) 六、量准的量溯源和框???????????????( 04 ) 七、量准的重复性???????????????????( 05 ) 八、量准的定性考核????????????????????( 06 ) 九、定或校准果的量不确定度定?????????????( 07 ) 十、定或校准果的???????????????????( 11 )十一、??????????????????????????( 12 )十二、附加明?????????????????????????( 12 )

一、建立计量标准的目的 紫外可见分光光度计属强制检定的计量器具，为了统一这些计量器具的量值，向企业提供全面可靠的计量 服务，确保该计量器具不影响我市的工业安全生产，卫生环境检测，建立了这一社会公用计量标准。 二、计量标准的工作原理及其组成 紫外可见分光光度计检定装置根据 JJG178-2007 《紫外、可见、近红外分光光度计检定规程》提供的方 法 , 紫外、可见分光光度计的主要检定项目是波长准确度和透射比准确度两项。 1、波长准确度检定： 在规定的条件下，用被测紫外可见分光光度计直接测标准滤光片（或溶液），测得的透射比波谷（波峰）所对应波长值，重复测量 3 次，其算术平均值与标准波长之差，即为波长示值误差。 2、透射比准确度检定： 用被测可见分光光度计在规定的波长处，以空气为参比，分别测（透射比标称值为10%、 20%、 30%）标准中性滤光片的透射比（示值），用被测紫外分光光度计在规定的波长处，以空白为参比，测重铬酸钾-高氯酸标准溶液的透射比（示值），重复测量 3 次，其算术平均值与相应下的透射比的标准值之差，即为透 射比的示值误差。 紫外可见分光光 氧化钬滤光片 镨铒滤光片 度计 镨钕滤光片 杂散光滤光片 干涉滤光片 低压汞灯 重铬酸钾 - 高氯酸标准溶液 标准中性滤光片

邻二氮菲分光光度计法测铁含量文献综述和实验设计

可见分光光度法测定铁的条件实验 可见分光光度法测定铁的条件实验文献综述和实验设计 院系：检验学院 班级：12 级生物技术班 指导老师：杨琴 小组成员：沈艳林、田赋、邓纯纯、 郑祥、谭诗航、苏曼、 邱丽莎、殷良俊、易柳

摘要 (1) 引言 (2) 正文 (3) 1 分光光度技术 (3) 2 分光光度法测定元素铁含量的研究概况 (3) 3 分光光度法测定铁的6种方法 (3) 3.1 邻二氮菲分光光度法 (3) 3.1.1 方法原理 (3) 3.1.2 化学反应式 (3) 3.2 BPT-OP分光光度法 (3) 3.3 硫氰酸盐分光光度法测铁含量 (3) 3.3.1 方法提要 (3) 3.3.2 主要反应 (3) 3.4 磺基水杨酸分光光度法测铁含量 (3) 3.4.1 方法原理 (3) 3.5 固相萃取分光光度法测铁含量 (3) 3.5.1 方法原理 (4) 3.6 用火焰原子吸收分光光度法测铁含量 (4) 3.6.1 方法原理 (4) 4 邻二氮菲分光光度法测铁含量 (4) 4.1 邻二氮菲法简介 (4) 4.2 邻二氮菲法的优点 (4) 5 邻二氮菲分光光度法测铁含量最适条件的选择 (4) 5.1 如何确定适宜的条件 (4) 5.2 最适波长的选择 (4) 5.3 显色剂用量的选择 (4) 5.4 显色时间的选择 (4) 5.5 溶液pH的选择 (4) 5.6 显色温度的选择 (5) 6 对邻二氮菲分光光度法测铁含量实验改进 (5) 参考文献 (6) 实验设计部分 (7)

本文主要研究用邻二氮菲分光光度法测定新血宝胶囊中总铁含量的分析方法。采用了邻二氮菲作显色剂、盐酸羟胺作还原剂，以工作曲线法测定总铁含量，对邻二氮菲分光光度法测定铁主要测量条件如测量波长、显色剂用量及显色时间等进行研究确定，提高分析检测的灵敏度，且讨论了测定的最佳条件，找出处理方法的良好条件和良好效果。本法灵敏、可靠，便于推广。 【关键词】邻二氮菲；分光光度法；新血宝胶囊；铁含量

紫外可见分光光度计的校正

实训二紫外可见分光光度计的校正 一、实训目的 1、了解紫外-可见分光光度的基本构造。 2、熟悉紫外可见分光光度计的操作技术。 3、熟悉校正波长和测量吸收值精度的原理和方法。 二、仪器与试剂 1、仪器：紫外-可见分光光度计，石英吸收池（1cm），容量瓶（1000m1），烧杯。 2、试剂：0.0600g→1000ml的K2Cr2O7的硫酸标准溶液（0.005mol/L），NaI溶液（10g/L），NaNO2溶液（50g/L）。 三、实训原理 紫外-可见分光光度计是单光束手工操作仪器，备有钨灯及氢灯两种光源，可用于可见及紫外光区。它是具有色散能力较高的单色器，狭缝可调，可得到较纯的单色光，适用于定性鉴别和定量分析。 新仪器启用前或仪器修理后或长期使用后均需对仪器的性能进行检定。仪器的性能主要是波长准确度与重现性、单色器的分辨能力、吸光度的准确性和重现性及杂散光等。 四、实训操作 1、吸收池配对性试验 每次测定前，应先用蒸馏水做吸收池配对性试验。两个吸收池透光率T相差应＜0.5％。 2、波长准确性与重现性 校验波长是否准确，可用谱线校正法。在吸收池中置一白纸挡住光路，转动波长至486nm附近，遮光观察白纸上蓝色斑。轻微移动波长，至使此蓝色光斑最亮时止。根据调整的波长范围观察所得到的相应颜色，并进行对比核对，判断波长的准确性。 3、吸收度的准确性与透光率重现性 在紫外-分光光度计中用作读取透光率的电位器的精度可达到0.2％，但是，由于其他原因，例如电压变化等，实际测得的透光率误差大于0.2％。一般要求透光率的精度、稳定性和重现性不超过0.5％。透光率的准确性可用已知吸光系数的物质核对，常用的是重铬酸钾。取在120℃干燥至恒重的基准K2Cr2O7约60mg，精密称定，用H2S04溶液(0.005mol／L)溶解并稀释至1000ml，摇匀。按下表规定的吸收峰与谷波长处测定。 将测得的吸光度，计算出其吸光系数，取平均值与表中规定值核对，如相对偏差在土1％以内，则透光率准确性好。K Cr O的H S0溶液（0.005mol／L)的E cm1% 透光率重现性可结合透光率准确性实验同时进行，即在固定波长、溶液浓度以及狭

UV1000紫外-可见分光光度计操作规程

UV1000紫外-可见分光光度计操作规程 一、开机 开机前将样品室内的干燥剂取出，确认电源是否连接。打开仪器电源开关，等待仪器自检通过，自检过程中禁止打开样品室。 二、使用 自检结束后（7个项目均出现OK字样），仪器进入主界面，屏幕显示如下四个功能项：1.光度测量；2.定量测量；3.动力学；4.系统应用。仪器经20min 热稳定后，就可以进入正常测量。 1.光度测量 在主界面上选中[光度测量]项后，按[ENTER]键进入光度测量主界面→ 按[SET]键进入测量模式选择界面选择相应的模式→ 按[ENTER]键确认→ 按[RETURN]键返回光度测量主界面→按[GOTOλ]键进入波长设置设定界面，用数字键输入你所需的波长值→ 按[ENTER]键确认→ 屏幕提示： 请稍等……，仪器自动将波长移动到你所需测定的波长值→按[RETURN]键返回光度测量主界面→打开样品室盖，将空白溶液和待测样品分布放置比色皿架上，关上样品室盖→按[ZERO]键进行自动效零，屏幕提示： 请稍等…… → 把待测试样拉入光路，按[START]键进入测量界面→再次[START]键，可在当前工作波长下对样品进行测量，并记录相应的数据。 2.定量测定建立浓度曲线，直接测定样品的浓度 主菜单中选中[定量测定]项后，按[ENTER]键进入定量测量主界面。 （1）工作曲线法： 测量已知浓度的一系列标准样品吸光度，建立工作曲线来测定未知浓度 在定量测量主界面选择●“工作曲线法”，按[ENTER]键确认进入工作曲线法界面→按[GOTOλ]键设定所需的波长→按[RETURN]键返回工作曲线主界面→打开样

品室盖，在当前光路的比色皿架位中放入空白样品，关上样品室盖→ 按[ZERO]键调零→ 按[SET]进入设定测量参数界面→ 选择●浓度单位→ 按[ENTER]键进入浓度单位设定界面→ 按数字键输入所需的浓度→按[ENTER]键确认→按[RETURN]键返回设定界面→ 选择●标样数→按[ENTER]键进入标样数设定界面→按数字键输入标样数→ 按[ENTER]键确认→ 将标准样品从低到高放入比色皿架，关上样品室盖→按[RETURN]键返回设定界面→按[ZERO]键调零→选择●标样浓度→ 按[ENTER]键进入标样浓度设定→ 按数字键输入标样浓度值→按[ENTER]键确认，测量标样的吸光度，系统进入下一个标样的设定界面，→ 把待测标样拉入光路，用同样的方法测量所有标样的吸光度→ 按[ENTER]键确认，待所有标样测定以后，按[RETURN]键返回●“工作曲线法”→ 按[ENTER]键进入工作曲线界面可查看（或选定）已经生成的工作曲线→ 将样品按浓度从低到高放入比色皿架中→ 按[START]键进入测量结果显示界面→再次按[START]键，将参比拉入光路→ 按[ZERO]键进行调零→ 将待测样品依次拉入光路。每按一次按[START]键，系统进行一次测量。记录相应的测量结果。（按[PRINT]可对测量结果进行打印。） （2）系数法 在定量测量主界面选择●“系数法”→按[ENTER]键确认进入系数法公式选择界面选择所需公式→按[ENTER]键确认→ 按[SET]键进入设定测量参数界面分别设定测量系数K、测量系数 B、选择浓度单位、设定工作波长→按[ENTER]键确认→ 打开样品室盖，在当前光路的比色皿架位中放入空白样品，关上样品室盖→ 按[ZERO]键调零→ 将样品放入比色皿架中→ 按[START/STOP]键进入数据测量界面→ 拉动比色皿架，使被测样品处于光路中→按[START/STOP]键测量。 （3）动力学（略） 三、关机 将比色皿中的溶液倒尽，然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净，倒立晾干。关电源将干燥剂放入样品室内，盖上防尘罩，做好使用登记，得到管理老师认可方可离开。

分光光度计 原理

72型分光光度计原理 72型分光光度计是可见光分光光度计，波长范围为420nm～700nm，它由三大部分组成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。其光学系统如图5-11所示。 72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。如图所示，白色光源经入射狭缝、反射镜和透光镜后，变成平行光进入棱镜，色散后的单色光经镀铝的反射镜反射后，再经过透镜并聚光于出射狭缝上，狭缝宽度为0.32nm。反射镜和棱镜组装在一可旋转的转盘上并由波长调节器的凸轮所带动，转动波长调节器便可以在出光狭缝后面选择到任一波长的单色光。单色光透过样品吸收池后由一光量调节器调节为适度的光通量，最后被光电电池吸收，转换成电流后由微电计指示，从刻度标尺上直接读出透光率的值。 分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。 分光光度计的简单原理 分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。 核酸的定量 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从

紫外分光光度法测定蛋白质含量实验报告

紫外分光光度法测定蛋白质含量 一、实验目的 1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理； 2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。 二、实验原理 1.测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin―酚试剂法等。本实验采用紫外分光光度法。 2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同蛋白质略有不同）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。 利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。 三、仪器与试剂 TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液3.00mg·mL-1、0.9%NaCl 溶液、试样蛋白质溶液。 10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。 四、实验步骤 1.绘制吸收曲线 用吸量管吸取2mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。 2.绘制标准曲线 用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。 3.样品测定 取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度（1.363），估算浓度为2.0960 mg·mL-1，再将原试液稀释至5倍（即取2mL试液，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀），估算浓度为0.4192 mg·mL-1，测吸光度，重复三次 五、数据处理与结果分析

紫外可见分光光度计 文档

紫外可见分光光度计 一．基本简介 紫外可见分光光度计简介1852年，比尔(Beer)参考了布给尔(Bouguer)1729年和朗伯(Lambert)在1760年所发表的文章，提出了分光光度的基本定律，即液层厚度相等时，颜色的强度与呈色溶液的浓度成比例，从而奠定了分光光度法的理论基础，这就是著名的比尔朗伯定律。1854年，杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人将此理论应用于定量分析化学领域，并且设计了第一台比色计。到1918年，美国国家标准局制成了第一台紫外可见分光光度计。此后，紫外可见分光光度计经不断改进，又出现自动记录、自动打印、数字显示、微机控制等各种类型的仪器，使光度法的灵敏度和准确度也不断提高，其应用范围也不断扩大。 [1]从仪器理论上讲，各种紫外可见分光光度计，都是根据比耳定律设计的；而比耳定律研究的是在平行光、单色光的条件下，物质对光的吸收。但是，紫外可见分光光度计的单色器不可能得到真正的单色光。并且，单色器系统不同，它产生的单色光的纯度（光谱带宽）也不同，并且光通过物质时，也不可能是真正的平行光。因此，严格地说，实际工作中，任何紫外可见分光光度计，都不可能真正满足比耳定律。所以，紫外可见分光光度计都是针对近似平行光、近似单色光的条件设计的。所以，就看谁设计、制造仪器最能满足或接近比耳定律（或产生的比耳定律的偏离最小），谁的仪器到了使用者手里，由于非平行光或非单色光产生的分析误差最小，谁的仪器就最好（当然还有杂散光、噪声、稳定性等要求）。这就是从仪器学理论，去看紫外可见分光光度计的设计、制造误差的最根本、最本质的问题；也是使用者从仪器学理论去看紫外可见分光光度计的分析误差的最根本、最本质的问题。 二．工作原理 吸收光谱 物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。

紫外-可见分光光度计操作规程

紫外-可见分光光度计操作规程 (TU1810) 1．目的：制订本标准的目的是为规范检验人员在质量检验过程中的操作，保证检验结果的正确性。 2．适用范围：本标准适用于二厂检验员对产品质量的检验。 3．职责：QC检验员对本标准的实施负责。 4．程序： 4.1 简述 紫外-可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。 朗伯—比耳定律（Lambert—Beer）是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度是吸光物质的浓度及吸收介质厚度（吸收光程）的函数。其常用表达式为，式中为系数： A=ε·ι·C 式中A为吸光度； ε为吸收系数； C为溶液浓度； ι为光路长度。 如溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸光度即为吸收系数以E cm%11表示。如溶液的浓度（C）的摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，

则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。 4.2 仪器 紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法的原理工作的常规分析仪器。根据光路设计的不同，紫外可见分光光度计可以分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。 4.2.1 仪器测量条件选择 1.测量波长的选择 通常都是选择最强吸收带的最大吸收波长λmax作为测量波长，称为最大吸收原则，以获得最高的分析灵敏度。而且在λmax附近，吸光度随波长的变化一般较小，波长的稍许偏移引起吸光度的测量偏差较小，可得到较好的测定精密度。但在测量高浓度组分时，宁可选用灵敏度低一些的吸收峰波长（ε较小）作为测量波长，以保证校正曲线有足够的线性范围。如果λmax所处吸收峰太尖锐，则在满足分析灵敏度前提下，可选用灵敏度低一些的波长进行测量，以减少比耳定律的偏差。 2.适宜吸光度范围的选择 任何光度计都有一定的测量误差，这是由于测量过程中光源的不稳定、读数的不准确或实验条件的偶然变动等因素造成的。由于吸收定律中透射比T与浓度C是负对数的关系，从负对数的关系曲线可以看出，相同的透射比读数误差在不同的浓度范围中，所引起的浓度相对误差不同，当浓度较大或浓度较小时，相对误差都比较大。因此，要选择适宜的吸光度范围进行测量，以降低测定结果的相对误差。 在实际工作中，可通过调节待测溶液的浓度或选用适当厚度的吸收池的方法，使测得的吸光度落在所要求的范围内。 3.仪器狭缝宽度的选择 狭缝的宽度会直接影响到测定的灵敏度和校准曲线的线性范围。狭缝宽度过大时，入射光的单色光降低，校准曲线偏离比耳定律，灵敏度降低；狭缝宽度过窄时，光强变弱，势必要提高仪器的增益，随之而来的是仪器噪声增大，于测量不利。选择狭缝宽度的方法是：测量吸光度随狭缝宽度的变化。狭缝的宽度在一个范围内，吸光度是不变的，当狭缝宽度大到某一程度时，吸光度开始减小。因此，在不减小吸光度时的最大狭缝宽度，即是所欲选取的合适的狭缝宽度。

设计实验

燕麦中Cd（隔）元素的测定 一、前言 地球上的各种生命体都是由多种化学元素组成的。就生命的化学及分子生物学的本质而言，人的生长发育、繁殖、遗传、生化反应、能量转换、新陈代谢等重要生理功能的物质基础，都是人体与外环境进行多种元素交换，以及不同元素在机体内进行复杂的合成和分解代谢的生物学过程。 一次大量吸入镉可引起急性肺炎和肺水肿；慢性中毒可致肺纤维化和肾脏病变。痛痛病也是一种慢性锖中毒。由长期摄食被硫酸镉污染的水源中生物或饮食污染的水造成。镉冶炼、喷镀，焊接、切割和浇铸轴承表面、核反应堆的镉棒或覆盖镉的石墨棒作为中子吸收剂，镉蓄电池和其池镉化合物制造的作业工人接触镉。有急性、慢性中毒之分。吸入含镉气体可致呼吸道症状，经口摄入镉可致肝、肾症状。 镉不是人体的必需元素。人体内的镉主要通过食物、水和空气而进入体内蓄积下来。肝脏和肾脏是体内贮存镉的俩大器官，进入体内的镉主要通过肾脏经排出，镉的排出速度很慢，因此会在体内慢性累积而危害到肝脏和肾脏。镉已经成为食品安全监控的重要卫生指标之一。 由于金属、类金属元素在粮油食品中与有机物结合成稳定而牢固的难溶、难解离的化合物，从而失去原有的特性，一般不能直接测定。如需测定这些无机成分的含量，需要在测定前破坏有机结合体，释放出待测组分[1]。本实验运用低温灰化法进行燕麦样品前处理、石墨炉原子吸收法测定燕麦中镉元素的含量。 二、实验原理和方法 a)低温灰化法[2] 低温灰化是相对于高温灰化法而言的，是在相对低的温度下进行灰化。低温灰化的速度与等离子体的流速、时间、功率和样品的体积等因素有关。等离子体消化装置是有消化室、供应系统、真空系统和高频电源组成。此法是将样品放在低温灰化炉中，先将炉内抽至近真空（10Pa左右），然后再不断通入氧气，氧气的流速为0.3～0.8L/min，再用微波或高频激发光源照射，使氧气活化而产生活化氧，这样在低于150℃的温度下便可使样品缓慢地完全灰化（以mg/h计），从而克服哦了高温灰化的缺点，氧化分解是在特殊设计的反应室进行的，内部压力为67～133Pa，试样量一般控制在0.2～10mg范围。 低温灰化必须在专用的低温灰化器中进行（图1.1.1）。O2在低温灰化器中，受高频或超频电场激发产生氧等离子体。氧等离子体由O+、O2+、O-、O2-、O组成，其中O+和O-具有很强的氧化能力，使样品在100～150℃，有时也在60～70℃下缓慢氧化，出去有机物，金属元素留在灰分中。但是，低压的氧气使灰化速度较慢，这也与灰化室活性气体的组成、氧等离子体流速、电场功率、样品表面积和厚度、容器底面积和深度、搅拌因素有关。当O2中含O3或CF2时灰化较快。样品厚2～3mm易灰化完全，样品太轻会因带电使灰分飞扬损失，增加高频功率

分光光度法测量溶液色素含量实验方案设计报告

实验方案报告 实验课程：电子科技专业实验 实验项目：分光光度法测量溶液色素含量 班级：学号：姓名： 实验方案报告成绩：教师签名： 实验类型设计性 综合设计性 综合性 验证性 一、实验内容 使用分光光度计测出溶液中柠檬黄、日落黄、和胭脂红的浓度。 二、实验条件 仪器： 紫外可见分光光度计，电子天平；容量瓶、移液管、烧杯等玻璃仪器。 试剂： 柠檬黄、日落黄、胭脂红（试剂说明见附录2）；乙酸铵；光学纯水； 三、实验方案（方法、步骤） 一、先各称取100mg的柠檬黄、日落黄、胭脂红，用三个100ml容量瓶配置成1mg/ml的母液，在分别将每种母液用量筒量取4ml、6ml、8ml、12ml、16ml 到100ml容量瓶稀释成40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml、120ug/ml、160ug/ml的子溶液，则有15瓶标准溶液。 二、分别测量80ug/ml（中间浓度）的柠檬黄、日落黄、胭脂红标准溶液的吸光度曲线，记录三者吸光度最大时的波长λ1、λ2、λ3。 λ1λ2λ3 426 nm 482 nm 508 nm

三、分别测量15瓶标准溶液和待测溶液在波长λ1、λ2、λ3时的吸光度。 λ1λ2λ3 柠檬黄40ug/ml0.119 0.036 0.003 60ug/ml0.199 0.061 0.006 80ug/ml0.285 0.087 0.008 120ug/ml0.482 0.146 0.012 160ug/ml0.675 0.204 0.015 日落黄40ug/ml0.050 0.114 0.098 60ug/ml0.080 0.185 0.160 80ug/ml0.121 0.282 0.243 120ug/ml0.222 0.512 0.441 160ug/ml0.320 0.739 0.634 胭脂红40ug/ml0.035 0.094 0.116 60ug/ml0.056 0.153 0.188 80ug/ml0.091 0.231 0.281 120ug/ml0.139 0.366 0.447 160ug/ml0.195 0.526 0.645 待测溶液0.593 0.713 0.624

实验报告-紫外-可见分光光度法测铁的含量-

一、实验目的： 了解朗伯-比尔定律的应用，掌握邻二氮菲法测定铁的原理；了解分光光度计的构造；掌握分光光度计的正确使用方法；学会吸收曲线的绘制和样品的测定原理。 二、实验原理 邻菲啰啉是测定微量铁的较好试剂。在pH＝2～9 的条件下，邻菲啰啉与Fe2+生成稳定的橙红色配合物，其反应式如下： Fe3+能与领二氮菲生成淡蓝色配合物（不稳定），故显色前加入还原剂：盐酸羟胺使其还原为Fe2+。。 三、仪器及试剂 紫外可见分光光度计、铁标准溶液：含铁0.01mg/mL、0.1%邻菲罗啉水溶液、10%盐酸羟胺水溶液、1mol/lNaAc缓冲溶液（pH4.6）。 四、实验步骤 1．吸收曲线的绘制和测量波长的选择 吸取0.0mL和6.0mL 铁标准溶液分别注入两个50 mL容量瓶中，依次加入5mlNaAc溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。用1cm比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm之间，每隔0.5nm测吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。 2、标准曲线的绘制

分别吸取铁的标准溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml于6只50ml容量瓶中，依次分别加入5ml醋酸－醋酸钠缓冲溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，在其最大吸收波长下，用1cm比色皿，以试剂溶液为空白，测定各溶液的吸光度，以铁含量(mg/50ml)为横坐标，溶液相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 五、实验记录及数据处理 波长/nm 吸光度 标准溶液（0.01g/L）未知液容量瓶编号 1 2 3 4 5 6 7 吸取的体积0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 吸光度A （1）绘制曲线图。

紫外-可见分光光度计的检测实验报告

紫外-可见分光光度计的检测实验报告 分子光谱实训报告 班级：————学号： 姓名： 指导教师： 2021年10月 紫外-可见分光光度计的检测 实训日期______年_____月_____日教师评定： ______________ 【仪器概况】 仪器名称：紫外-可见分光光度计 型号：UV1801 厂家：北京瑞利分析仪器公司 编号：090953 二、【仪器结构】 三、【实验项目】波长准确度检查 仪器零点稳定性检查光电流稳定度检查吸光度准确度检查紫外区透色比检查杂散光合格性检查吸收池配套性检查皿差 四、【仪器及试剂准备单】 1、试剂清单（以1个小组6人为例） H2SO3、K2Cr3O7、HClO4、碘化钠、蒸馏水、亚硝

酸钠、无水乙醇、苯、硫酸铜。 2、仪器清单（以1个小组6人为例） UV1801紫外分光光度计、烧杯14个、容量瓶9个、 玻璃棒、滤纸、洗瓶、镨钕滤光片、比色皿、胶头滴管、洗耳球、移液管、表面皿、移液管架。 五、【检测步骤】 开机自检（5个ok） （一）、波长准确度可见分光光度（空气） 1、按1、波长扫描；按F1，参数设置（E、波长范围460--680nm、间隔0.1nm、换灯点800nm）按返回键。 2、按F2，根据显示屏提醒，确定键；出现两个峰，分别记录两个峰值的波长和吸光值。 （重复3次；参比和样品都是空气）。 镨钕滤光片 1、按F1，参数设置（A、波长范围500--540nm、间隔1nm、换灯点360nm)按返回键。 2、把镨钕滤光片放在第二格，关盖；按F2，根据显示屏提醒，拉入参比，确定键；再拉入样品，确定键；出现一个峰，记录读数。 紫外分光光度 1、按F1，参数设置（A、波长范围200--270nm、间隔 0.1nm、换灯点360nm）按返回键。

微区紫外-可见分光光度计的设计与应用

实验7微区紫外-可见分光光度计的设计与应用 利用物质分子或者离子对某一波长范围的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析、以及结构分析，所依据的光谱是分子或者离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。按照所吸收的波长区域不同可以分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外－可见分光光度法。物质对光的吸收是选择性的，利用被测物质对某波长的光的吸收来了解物质的特性，这就是光谱法的基础。通过实验掌握紫外－可见吸收光谱分析所依据的物理原理，初步掌握微区紫外-可见分光光度计的设计方法，并利用实验室设备搭建测量光路。初步掌握利用吸收谱分析染料的能级结构和光学参数的方法。 一、实验目的 1.掌握紫外－可见吸收光谱分析所依据的物理原理 2.初步掌握微区紫外-可见分光光度法测量物质吸收谱的光路设计 方法，并利用实验室设备搭建测量光路。 3.初步掌握利用吸收谱分析染料的能级结构和光学参数的方法。 二、实验原理 光谱分析可以分为发射光谱分析和吸收光谱分析两大类。当构成物质的分子或原子受到激发而发光，产生的光谱称为发射光谱，发射光谱的谱线与组成物质的元素及其外围电子的结构有关。吸收光谱是指光通过物质被吸收后的光谱，吸收光谱则决定于物质的化学结构，

与分子中的双键有关。物质对光的吸收，与其分子结构有密切关系，因而不同物质因结构的差异，产生不同的吸收光谱，亦即吸收曲线。 （一）分子吸收谱的产生 分子吸收谱的形成机理是由于能级之间的跃迁所引起的，在分子中除了电子相对于原子核的运动外，还有原子核的相对振动和分子作为整体绕其质心的转动。分子的这三种运动状态都对应一定能级，它们之间的关系为：elec vib rot E E E ?>?>? 处在同一电子能级的分子，可能由于振动能量的不同，处在不同的振动能级上。分子处在同一电子能级和振动能级时，可能由于转动能级的不同而处在不同的转动能级上。所以分子的总能量是三种能量的总和 mol elec vib rot E E E E =++ （1） 当用频率为v 的光照射分子，而该分子的较高能级与较低能级之差E ?恰好等于hv 时，此时在微观上出现分子由较低能级跃迁到较高能级，在宏观上体现为光的强度变弱。若用一连续频率的光照射分子，将照射前后光强度的变化变为电信号记录下来，就可以得到一张光强度变化对波长的关系曲线。即分子吸收光谱图。 图1是双原子分子的能级示意图。从图中可看出，在同一电子能级中有几个振动能级，而在同一振动能级中又有几个转动能级。电子能级间的能量差一般为l ～20电子伏特(eV)。因此，由电子能级