硫酸软骨素含量测定方法研究进展

硫酸软骨素含量测定方法的研究进展

摘要：综述了硫酸软骨素含量测定方法的研究进展。含量测定方法包括比色法、色谱法、电泳法、原子吸收法、比浊法、配位滴定法及免疫法等。硫酸软骨素的测定方法按其测定指标主要分为软骨素二糖、氨基己糖、葡萄糖醛酸、硫酸基和阴性基团5类。对各种含量测定方法的原理和特点进行了介绍。

关键词：硫酸软骨素高效液相色谱醋酸纤维素薄膜电泳法

硫酸软骨素(chondroitin sulfate，CS)系从动物软骨组织中提取、纯化所得的酸性黏多糖，具有降血脂、抗肿瘤、抗衰老、治疗关节炎、促进溃疡愈合、耳呜症及神经痛等多种作用，无明显的毒副作用。在临床具有广阔的应用前景。近年来，CS大量出口美国及欧洲，已成为出口量最大的生化医药产品之一。

CS的含量测定方法有许多种，每种含量测定方法均有其特点，但测定原理均是基于其组成的糖单位(D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖)、硫酸基以及酸性黏多糖的大分子性质。在分子结构上，CS由D-葡萄糖醛酸和N-乙酞-D-氨基己糖以1, 3糖苷键连接形成重复二糖，二糖单位之间以1, 4糖苷键连接形成糖链，氨基己糖糖环的4位C或6位C可硫酸化，硫酸化后分别形成硫酸软骨素A(CS-A)和硫酸软骨素C(CS-C)。本文对CS的含量测定方法进行综述，以便对不同CS测定方法及特点有一较全面的了解。

1.测定硫酸软骨素的指标物质

根据CS的分子结构特点，研究出以CS某一化学成分为测定指标的多种方法，这些指标包括软骨素二糖、氨基己糖、葡萄糖醛酸、硫酸基、阴性基团等5类。

1.1 以葡萄糖醛酸为指标的测定方法

在酸性条件下降解CS，生成与其软骨素二糖单位摩尔数相等的葡萄糖醛酸，再加入咔唑、间苯三酚和4-氨基-3-肼基-5-巯基-1, 2, 4，-三唑(AHMT)等色原物质与葡萄糖醛酸显色，最后测定反应液特定波长处吸收值，以葡萄糖醛酸或CS标准品为对照制作标准曲线，转换为葡萄糖醛酸含量，根据葡萄糖醛酸与软骨素二糖之间的分子量之比换算成CS含量。

1.2 以硫酸基为指标的测定方法

CS 中硫酸基的测定方法主要有离子色谱法和间接原子吸收法等。这两种方法首先以强酸降解CS生成游离硫酸基，前者以离子色谱检测经分离的反应液中的硫酸基与软骨素二糖的分子量之比计算CS含量；后者以已知过量的钡离子与降解CS产生的游离硫酸基反应，再通过原子吸收光谱法测定过量的钡离子，换算出CS样品中硫酸基含量，然后计算CS含量。

1.3 以氨基己糖为指标的测定方法

测定氨基己糖的经典方法是Elson-Morgan法，该方法以盐酸氨基己糖作对照品，利用盐酸水解CS释放出氨基己糖，而氨基己糖在碱性条件下先与乙酞丙酮缩合，其产物与对二甲氨基苯甲醛的醇溶液结合后显红色，于特定波长处测定吸光值，计算样品中氨基己糖含量，再根据氨基己糖与软骨素二糖单位之间的分子量之比换算成CS含量。

1.4 以软骨素二糖为指标的测定方法

在超声波作用下或在软骨素酶作用下使CS降解成软骨素二糖单位，记录软骨素二糖溶液经过色谱柱的洗脱曲线，将样品的出峰时间和峰面积(或峰高)与标准品比较，以此确定其含量(软骨素二糖是CS的基本组成单位，理论上其含量与

CS相等)。

1.5 以阴性基团为指标的测定方法

阳离子染料类方法利用CS分子上携带的羧基和硫酸基与碱性艳蓝BO,吖啶橙、维多利亚蓝B、中性红、天青A和溴化1-乙基-2-3-(1-乙萘酚噻唑-2-甲基丙烯基)萘酚-[1，2]-噻唑等阳离子染料通过静电力和疏水作用结合生成离子复合物，导致染料本身在特征吸收峰处吸光值改变，而吸光值改变程度与CS含量相关，因此将测得的吸光值带人由CS标准品制作的标准曲线，可计算样品CS含量。比浊法则利用乳化剂氯化十六烷基吡啶可与CS分子上阴性基团结合的特点形成乳浊液，该乳浊液在其特征吸收波长处吸光值与CS含量相关，由此测定CS含量。

2.几种测定方法介绍

2.1 色谱法

2.1.1 离子色谱法

茅力根据CS中硫酸根与软骨素之间的关系，将CS水解生成等摩尔的硫酸根，用Anion HC色谱柱将硫酸根与其他干扰物质分离后，以硼酸钠-葡萄糖酸钠淋洗液为流动相，流速1.5ml／min，电导检测器检测。对照物：无水硫酸钠，采用外标法检测其含量。这样使测定对象单一，准确度和回收率都较高。Plaas等将CS 用CS酶ABC或AcⅡ消化水解，产物用2-氨基吡啶和硼酸二甲胺制得糖的衍生物，然后在0～500nmol／L三氟乙酸梯度洗脱下经AS4A离子交换柱分离，荧光法定量。该法衍生物制备重复性和稳定性好，色谱系统灵敏度高。David等将CS用软骨骨素酶ACH酶解后。利用离子对液相色谱进行了CS的含量测定，检测波长240 nm，梯度洗脱，该法精确度高、重现性好、专属性强。

2.1.2 化学发光高效液相色谱法

Akiyama等用化学发光高效液相色谱法，先将CS用CS酶ABC或CS酶ACII降解，然后用酰胺-80-二氧化硅色谱柱(250mm×4.0mm)反相色谱进行分离，用l mmol／L草酸盐和3 mmol／L过氧化氢洗脱，电导检测器检测。该方法特别适用于临床生理检测。

2.1.3 酶解-高效液相色谱法

CS钠在硫酸软骨素ABC酶作用下，酶解为三种不饱和的二糖。用强阴离子交换硅胶为填充剂，以水(用稀盐酸调节pH值至3.5)为流动相A，以2 mol／L氯化钠溶液(用稀盐酸调节pH值至3.5)为流动相B，进行线性梯度洗脱。流速为1.0 mL ／min，检测波长为232 nm。用CS钠对照品作为对照，按外标法以3种不饱和二糖的面积之和计算，即得。该法准确度、精确度、专属性都很好。

2.1.4 HPLC-ELSD法

林燕飞引用HPLC-ELSD法，以乙腈-水-三乙胺溶液(10：90：0.1)为流动相，用ODS色谱柱，蒸发光散射检测器，测定复方氨基葡萄糖片中CS的含量。该法能避免盐酸氨基葡糖对CS测定的干扰，有着良好的精密度、重复性和回收率。

2.1.5 其他色谱法

有反相离子对高效液相色谱法、吸附高效液相色谱法等。另外，国内一些生化厂总结多年工作经验，利用凝胶柱，以1.42％、pH6.8的磷酸二氧钠为流动相，波长206nm紫外检测，并以对照品对照制作标准曲线，利用组分峰面积或峰高与对照品进行比较。缺点是分辨率较差，杂质容易产生干扰。

2.2 比色法

2.2.1 氨基己糖的测定

该法又称Elson-Morgan法，是CS部颁药品标准采用的方法。测定原理是基于CS由D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-氯基半乳糖组成，经盐酸水解可释放出氨基葡糖，在碱性条件下与乙酰丙酮缩合，产物与对二甲氨基苯甲醛的酸醇溶液呈红色，于波长525 nm处测定吸收度，以氨基葡糖作对照品，计算氨基葡糖含量，再换算成CS含量。该方法操作繁琐，最棘手的是重现性差。谢继青等对此法进行析因实验设计，对比实验。发现影响最终测定结果的关键步骤有乙酰化和显色两步，测定时按乙酰化同时计时、显色剂随加随计时操作，所得结果精密度高、重现性好。谢继青等对《卫生部药品标准》中的方法进行了优化，发现保温时间的长短及冷却的快慢都会影响含量测定的结果，注意做到冰浴乙酰化同时计时，显色随加随计时，使测定结果的精密度、重现性都得到提高。

2.2.2 己糖醛酸的测定

该法又称咔唑法，测定原理是CS分子中的D-葡糖醛酸在硫酸作用下生成糠醛，后者在咔唑的醇溶液中显红色。于波长530nm测定吸收度，制作标准曲线计算出D-葡糖醛酸含量，再换算成CS含量。该法较测定氨基葡糖法简单一些，但由于在操作过程中有浓硫酸，所以给实际操作带来诸多不便。

2.2.3 染色法

原理是具有大分子聚阴离子性质的黏多糖与荷正电碱性染料天青A在一定pH条件下结合产生与原来染料不同的颜色，并以黏多糖本身作对照，通过测定在波长505nm的吸收度定量。由于天青A对不同的黏多糖选择性不强，测定结果容易受其他黏多糖的影响。

2.3 电泳法

2.3.1 琼脂糖凝胶电泳法

V olpi利用黏多糖中的“快移动”片段和“慢移动”片段性质的不同，以及不同黏多糖中二者比例不同，首先用细菌酶降解，然后用琼脂糖凝胶电泳分离分析，标准曲线分光光度法定量。该方法多用于实验室小量供试品定性及定量。

2.3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳法

Lyon等利用CS的黏多糖性质进行梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳，供试品可降解也可不降解，用天青A-银氨试剂染色进行定量，属半微量分析，检测灵敏度l～2 ng，几乎可用于所有黏多糖的分离分析。Moller等将该方法加以改进，首先采用高碘酸氧化，然后天青A染色，最后用硝酸银滴定进行定量。该方法多用于实验室小量供试品的分析、定量。

2.3.3 醋酸纤维素薄膜电泳法

Gafen等把供试品先用CS酶ABC消化，然后经醋酸纤维素薄膜电泳分离，红斑印迹检测：该方法检测灵敏度可达2ng，还可以消除核酸和玻璃酸的影响。2.4 电位法

本方法中硫酸软骨素在一定浓度范围内呈良好的线性关系，加收率高。无干扰，可作为硫酸软骨素的含量测定方法。

2.5 原子吸收法

茅力等利用间接原子吸收法测定鲨鱼软骨粉中CS的含量。利用CS完全水解释放出等摩尔的硫酸根，钡离子过量定量，用原子吸收法直接测定过量的钡含量，求算总硫酸根与游离硫酸根，得出有机硫酸根，间接换算出CS的含量。

2.6 光度滴定法

徐志洲等建立了光度滴定法——快速测定CS含量的新方法。该方法利用CS 可与CPC结合生成稳定乳浊液的性质．用光电极在420 nm波长处指示终点进而测

定CS的真实含量。该法中，CS在一定浓度范围内呈良好的线性关系，加样回收率高、无干扰，并且样品溶解后不需要水解即可直接测定，操作简便快捷，测定结果重现性好。此法还可以有效控制非法添加氨基己糖来提高CS的含量。

2.7 配位滴定法

通过将CS水解，释放出硫酸根，氯化钡标准溶液配位滴定法测定，剩余钡离子用EDTA滴定，求算硫酸根含量，最后根据硫酸根与软骨素结构单位的关系计算CS的含量。该法简单，但需严格控制温度。

3.前景展望

CS是重要的生化药物，因其特有的生物活性而广泛应用于临床。综上所述，CS的测定方法很多，各有其优点和缺点，适用的供试品也不同，应根据实验目的进行选择应用。目前对CS的含量测定研究日益深入，而随着色谱技术的发展以及广泛应用，尤其是高效液相色谱。目前对CS的工艺研究大多是对现有方法的优化，今后的研究仍会以减少提取剂用量、提高收率与产品纯度为目标，并逐渐将研究成果应用于实际生产中。未来的研究应在加强生产工艺、分析技术和活性研究的基础上开发新的CS资源，重视扩展其在功能食品、保健品等领域的应用。

硫酸软骨素行业分析

硫酸软骨素行业分析 东吴证券李葳 1、行业发展现状 （1）原料药行业 原料药是用于药品制造中的一种物质或物质的混合物，原料药的制作方法多样，包括：化学合成、植物提取或者生物技术，通过这些方法生成的粉末、结晶、浸膏等可以用于制作临床应用的医药。原料药可继续根据来源细分成下图中所示的种类。 从世界范围来看，原料药行业的竞争格局主要集中在五大生产区域：西欧、北美、日本、中国和印度。西欧在上世纪90 年代一度是世界上最大的原料药生产地区，西欧地区制药工业起步较早，技术水平先进，具有一定的规模优势，原料药的出口市场遍及全球广大地区，当时的产量占据全球原料药需求的60-65%。但是在世界的另一边，两大文明古国中国和印度得益于成本上的优势在原料药生产和出口领域迅速崛起，逐步发展成为主要的原料药生产和出口国家，西欧的原料药市场份额被慢慢蚕食。但是西欧失去的市场份额主要集中在“大剂量、低效益”的原料药产品，西欧在“小剂量、高效益”的品种上仍然具有优势地位，拥有工艺优势。北美是全球最大

的原料药需求和进口地区。但生产原料药涉及到环保、成本等方面的因素，许多原料药并不在该地区生产，但是诸多研发机构设立在北美地区，其中美国拥有多家研发机构，所以美国较其他国家具有药品专利优势。 中国目前已经发展成为全球最大的原料药生产国，中国可以生产的原料药及医药中间体达1600 多个品种，产能达到200多万吨，生产地区主要集中在石家庄、沈阳、淄博、哈尔滨、天津等老医药工业基地。近年来，原料药在中国药品出口中所占比重最大，占所有医药保健品出口总额50%以上，是中国具有绝对优势的出口产品，其增长幅度直接影响到中国整体医药出口的增长变化。 （2）保健品行业 随着居民生活水平的逐步提高，人们对身体的健康状况以及如何预防疾病的发生越发关注，除了不断加强身体锻炼外，人们对保健品的需求也在不断增加。美国在1988 年时保健品的种类已经达到2000 余种，销售金额在72 亿美元以上。日本从1980 年起就以每年50 亿日元的速度增长，1989 年已有6500亿日元的市场规模。保健品进入到中国居民的视野当中是在20 世纪80年代，当时是保健食品行业的第一个高速发展时期，其间涌现出了3000多家保健食品生产企业。1995 年到1998 年保健食品行业中的企业数量和销售额大面积萎缩，经历了一个低谷期。从2005 年开始，中国保健食品行业进入新的成长期。2010 年中国保健食品的产值超过近1000 亿元，至此，中国保健食品行业开始进入繁荣发展的成长时期。从人均消费水平来看，美国和澳洲分别为56 美元和41.3 美元，而国内市场仅为11.4 美元，我国保健品行业依旧处于行业发展初期，后续发展可期。 图表1：2014 年美国、澳洲和中国保健品人均消费水平

硫酸软骨素文献综述

硫酸软骨素的研究近况 摘要：本文就近几年国内外对硫酸软骨素的研究情况进行概述，主要涉及其生 产工艺、分析方法及临床应用。 关键词：硫酸软骨素生产工艺分析方法临床应用 正文：硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate, CS)是哺乳动物结缔组织的主要成分 之一, 主要分布于软骨、骨、肌腱、韧带、肌膜和血管壁中, 属于糖胺聚糖(Glycosam inoglycans,GAGs) 类物质。根据其分子结构中糖醛酸种类和氨基己糖上硫酸酯位置的差异, 主要分为三种类型: 硫酸软骨素A (CS-A ) , 硫酸软骨素B (CS-B) , 硫酸软骨素C (CS-C) 等。近年来, CS 作为一种新型药用活性成分, 逐渐受到人们的重视。本文就其生产工艺、分析方法及临床应用的新进展予 以综述。 1生产工艺 提取工艺 可用中性盐法、酸法、碱法、酶解法等提取C S 。目前多采用碱提取与酶解提取相结合的方法[1]。高华等[2]在碱-酶解的提取方法中加大了碱的浓度,用 lmol/ L 氢氧化钠溶液提取2h ,时间缩短并可避免杂质析出, CS的收率和纯度分别达到了32.6 % 和95.2%。胥传来等[3]则在鳖鱼软骨的酶解提取CS前先用2%乙酸钠盐解, 产品含氮量可下降0.67% ,而氨基己糖质量分数提高了1.87% ,具有一定工业生产价值。李瑞国[4]对浓碱-酶解(I)、稀碱-酶解(II)、稀碱稀盐-酶解(III)和稀碱浓盐(IV) 4 种提取工艺进行了比较,发现工艺I 提取时间短、产品颜色深而分子量较小; 工艺II、III、IV操作较容易、产品色泽好且分子量较大, 尤以工艺IV制得的产品质量较好。华子义[5]采取碱性复合酶和胰酶双酶解法提取CS, 得率比传统方法提高了1 % -2 % , 生产周期缩短1/3 , 生产成本降低5 %。Nakano等[6]以0.1mol/ L乙酸钠在pH 4.5 、3 7℃条件下先预处理牛鼻软骨, 使软骨组织在内源酶作用下自动分解, 从而无需使用外源酶,生产成本降低,经DEAE离子交换色谱纯化可得含CS 89%的GAGs混合物。 分离纯化

硫酸软骨素

硫酸软骨素

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硫酸软骨素 硫酸软骨素： 糖胺聚糖的一种，由Ｄ－葡糖醛酸和Ｎ-乙酰氨基半乳糖以β－１,4-糖苷键连接而成的重复二糖单位组成的多糖,并在N-乙酰氨基半乳糖的C-4位或C-6位羟基上发生硫酸酯化。大量存在于动物软骨中。 硫酸软骨素钙: 硫酸软骨素对角膜胶原纤维具有保护作用,能促进基质中纤维的增长,增强通透性，改善血液循环，加速新陈代谢，促进渗透液的吸收及炎症的消除；其聚阴离子具有极强的保水性，能改善眼角膜组织的水分代谢,对角膜有较强的亲和力，能在角膜表面形成一层透气保水膜，促进角膜创伤的愈合及改善眼部干燥症状。 基本资料 【产品类属】:粘多糖类物质，主要分为硫酸软骨素钠盐和硫酸软骨素钙盐等，其中以硫酸软骨素钠盐最为常见,应用也最为广泛。 【萃取来源】 :猪、牛、鸡、鲨鱼的软骨 主要的应用途径是作为治疗关节疾病的药品常与氨基葡萄糖配合使用,具有止痛,促进软骨再生的功效,可以从根本改善关节问题。 市场需求 是提取于动物软骨的黏多糖类物质,在心血管疾病、关节病的防治等方面具有重要的作用,是目前市场上较重要的生化产品.硫酸软骨素目前具有供不应求和继续上升的市场.硫酸软骨素除了作为药品外,大量的是作为改善关节病的补充品，作为健康食品应用，在美国已经风行多年.经过多年的应用,已经证明硫酸软骨素对改善老年退行性关节炎、风湿性关节炎有一定的效果，因此市场仍呈快速上升的势头．仅在美国的消量每年就可达600 吨左右.而中国有1３亿人口,患老年退行性关节病和冠心病的人很多,因此有着硫酸软骨素消费的巨大潜在市场． 硫酸软骨素的作用 硫酸软骨素能发挥以下功效以纾解关节疼痛问题: １.提供垫衬作用，缓和行动时的冲击和摩擦 软骨素的作用犹如“液状磁石”，能将水分吸入蛋白多糖分子内，使软骨变厚及有如海绵般，并增加关节内的滑液量。如此一来,它便能提供“垫衬”作用以增强关节的减震能力和缓和行走或跳动时的冲击和摩擦。 2.把重要的氧供和营养素输送至关节，帮助清除关节内的废物

硫酸软骨素含量测定方法研究进展

硫酸软骨素含量测定方法的研究进展 摘要：综述了硫酸软骨素含量测定方法的研究进展。含量测定方法包括比色法、色谱法、电泳法、原子吸收法、比浊法、配位滴定法及免疫法等。硫酸软骨素的测定方法按其测定指标主要分为软骨素二糖、氨基己糖、葡萄糖醛酸、硫酸基和阴性基团5类。对各种含量测定方法的原理和特点进行了介绍。 关键词：硫酸软骨素高效液相色谱醋酸纤维素薄膜电泳法 硫酸软骨素(chondroitin sulfate，CS)系从动物软骨组织中提取、纯化所得的酸性黏多糖，具有降血脂、抗肿瘤、抗衰老、治疗关节炎、促进溃疡愈合、耳呜症及神经痛等多种作用，无明显的毒副作用。在临床具有广阔的应用前景。近年来，CS大量出口美国及欧洲，已成为出口量最大的生化医药产品之一。 CS的含量测定方法有许多种，每种含量测定方法均有其特点，但测定原理均是基于其组成的糖单位(D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖)、硫酸基以及酸性黏多糖的大分子性质。在分子结构上，CS由D-葡萄糖醛酸和N-乙酞-D-氨基己糖以1, 3糖苷键连接形成重复二糖，二糖单位之间以1, 4糖苷键连接形成糖链，氨基己糖糖环的4位C或6位C可硫酸化，硫酸化后分别形成硫酸软骨素A(CS-A)和硫酸软骨素C(CS-C)。本文对CS的含量测定方法进行综述，以便对不同CS测定方法及特点有一较全面的了解。 1.测定硫酸软骨素的指标物质 根据CS的分子结构特点，研究出以CS某一化学成分为测定指标的多种方法，这些指标包括软骨素二糖、氨基己糖、葡萄糖醛酸、硫酸基、阴性基团等5类。 1.1 以葡萄糖醛酸为指标的测定方法 在酸性条件下降解CS，生成与其软骨素二糖单位摩尔数相等的葡萄糖醛酸，再加入咔唑、间苯三酚和4-氨基-3-肼基-5-巯基-1, 2, 4，-三唑(AHMT)等色原物质与葡萄糖醛酸显色，最后测定反应液特定波长处吸收值，以葡萄糖醛酸或CS标准品为对照制作标准曲线，转换为葡萄糖醛酸含量，根据葡萄糖醛酸与软骨素二糖之间的分子量之比换算成CS含量。 1.2 以硫酸基为指标的测定方法 CS 中硫酸基的测定方法主要有离子色谱法和间接原子吸收法等。这两种方法首先以强酸降解CS生成游离硫酸基，前者以离子色谱检测经分离的反应液中的硫酸基与软骨素二糖的分子量之比计算CS含量；后者以已知过量的钡离子与降解CS产生的游离硫酸基反应，再通过原子吸收光谱法测定过量的钡离子，换算出CS样品中硫酸基含量，然后计算CS含量。 1.3 以氨基己糖为指标的测定方法 测定氨基己糖的经典方法是Elson-Morgan法，该方法以盐酸氨基己糖作对照品，利用盐酸水解CS释放出氨基己糖，而氨基己糖在碱性条件下先与乙酞丙酮缩合，其产物与对二甲氨基苯甲醛的醇溶液结合后显红色，于特定波长处测定吸光值，计算样品中氨基己糖含量，再根据氨基己糖与软骨素二糖单位之间的分子量之比换算成CS含量。 1.4 以软骨素二糖为指标的测定方法 在超声波作用下或在软骨素酶作用下使CS降解成软骨素二糖单位，记录软骨素二糖溶液经过色谱柱的洗脱曲线，将样品的出峰时间和峰面积(或峰高)与标准品比较，以此确定其含量(软骨素二糖是CS的基本组成单位，理论上其含量与

硫酸软骨素总述

硫酸软骨素 一、产品简介: 硫酸软骨素是来自动物软骨组织的一类天然的酸性粘多糖（因其具有粘稠性）——糖胺聚糖（其中糖胺聚糖作为动物蛋白聚糖的代表成分，在软骨组织中以蛋白多糖形式存在），不同动物体内所存在的硫酸软骨素类型不同，主要是CAS、CSC及各种硫酸软骨素的混合物，其中猪牛羊的骨中主要含有硫酸软骨素A，鲨鱼乌贼等海洋动物的软骨中主要含有硫酸软骨素C。 区别：蛋白多糖以蛋白为核心，糖蛋白以多糖为主体；或者说侧重点不同，虽然组成成分是一样的，但是糖蛋白定义为蛋白，蛋白聚糖定义为糖。 糖胺聚糖：1）蛋白聚糖由三部分组成---核心蛋白、糖胺聚糖、连接区寡糖；2）糖胺聚糖除了通过共价键与蛋白聚糖的核心蛋白连接(糖肽键）外，糖胺聚糖还通过静电作用或立体化学效应与其他蛋白质发生专一性程度不同的结合。而蛋白多糖的聚集体则通过次级键（氢键和盐键）形成，可见从软骨组织中提取硫酸软骨素仅依靠破坏次级键的方法是不够的，而必须以降解蛋白质的方法，破坏多糖链与蛋白的共价结合方能达到提取硫酸软骨素的目的；3）因为糖胺聚糖具有粘稠性，所以蛋白聚糖也被称为粘蛋白。软骨中粘蛋白等中的糖胺聚糖多由两种氨基己糖（氨基葡萄糖和氨基半乳糖）之一和两种己糖醛酸（葡萄糖醛酸和艾杜糖醛酸）之一以各种糖苷键连接而成；4）除透明质酸（属于非蛋白多糖提取）外，糖胺聚糖分子中的氨基己糖

上均含有硫酸基，该硫酸基与己糖醛酸上的羧酸都会导致整个蛋白聚糖分子显酸性，所以糖胺聚糖又被称为酸性粘多糖。 二、理化性质: 1、物理性质： 硫酸软骨素，简称CS，分子式：（C14H21NO14S)n，成品外观白色粉末状，无臭无味，易溶于水，不溶于乙醇和丙酮、冰醋酸等有机溶剂，遇水后迅速膨胀，对热不稳定，需避光密封保存。 其分子中含有大量的硫酸基和羧基，故呈酸性反应，可与钠钾钙离子结合成盐，其盐类对热稳定。在高温、碱性、酸性环境溶液中易水解成单糖或小分子量多糖，因而溶液粘度下降。（游离的硫酸软骨素水溶液遇较高温不稳定，主要是乙酰基被水解，从其结构上脱落下来。） 2、化学性质： 硫酸软骨素是来自动物软骨组织的一类天然的酸性粘多糖——糖胺聚糖。硫酸软骨素是氨基己糖和葡萄糖醛酸交替连接而成的直链分子，作为动物糖胺聚糖中的代表物质，硫酸软骨素由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖（结构图如下所示）以1,3糖苷键连接形成双糖，双糖单位之间以1,4糖苷键连接。一般硫酸软骨素约含有50-70个双糖单位，动物组织中的硫酸软骨素平均分子量约为260000。在分子结构上硫酸软骨素氨基己糖环的4位或6位可硫酸化。

硫酸软骨素质量标准 及含量测定

硫酸软骨素质量标准及含量测定 青岛大学药学系 高华 gaohuaqy@https://www.wendangku.net/doc/46616144.html,

一、硫酸软骨素结构 是种 硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate，CS)，是一种重要的天然酸性粘多糖 。 硫酸软骨素是由D-葡糖醛酸和N-乙酰基-D-氨基半乳糖以β-1,3糖苷键结合而成的双糖，而双糖之间以β-1,4苷键连接而成生物大分子。 -14 CS相对分子质量一般为5000～50000Da。 根据硫酸基在半乳糖上位置不同主要分为硫酸软骨素A(CSA)硫酸软骨素C(CSC)

硫酸软骨素结构 根据硫酸基在半乳糖上位置不同主要分为硫酸软骨素A(CSA)和硫酸软骨素C(CSC) 硫酸软骨素A（CSA）硫酸软骨素C（CSC）硫酸基团在半乳糖的第4位C上硫酸基团在半乳糖的第6位C上

二硫酸软骨素存在形式 二、硫酸软骨素存在形式 ChS的来源有陆产动物和海洋动物两大类。陆产动物主要是牛、猪、羊和禽等软骨组织中，如喉骨、鼻中骨、气管、血管壁等，主要成分4-硫酸软骨 素(CSA) 。海洋动物包括软骨鱼的软骨、海参和贝类等，主要成分6-硫酸软骨素(CSC)。 贝类等主要成分6 软骨中的硫酸软骨素与蛋白质相结合以蛋白多糖的形式存在组织中。

三、硫酸软骨素质量标准 z USP32--美国药典29版 硫酸软骨素（牛、猪、鸡、鲨鱼） z JPC1997 --《日本药局方外标准》(1997) 硫酸软骨素（牛、猪、鲨鱼） 硫酸软骨素（牛猪鲨鱼） z WS-10001-(HD-0894)-2002硫酸软骨素A 钠 z WS-10001-(HD-0892)-2002 硫酸软骨素（供注射用）z WS-10001-(HD-0895)-2002 硫酸软骨素A钠胶囊 WS-10001-(HD-0896)-2002 硫酸软骨素滴眼液 WS-10001-(HD-0854)-2002 复方硫酸软骨素片

硫酸软骨素的提取

蛋壳膜硫酸软骨素的提取工艺及其优化 摘要：以蛋壳膜为原料，采用稀碱与酶解相结合的方法提取硫酸软骨素。以胰蛋白酶、胃蛋白酶分解去除杂蛋白，经酒精沉淀并干燥后得到产品。实验得到的最佳提取工艺为：料液比１：１．５，碱浓度５％，碱提温度４０℃， 胰蛋白酶、胃蛋白酶的用量分别为１．５％、０．８％，ｐＨ值分别为８．２和５．５，酶的各自最适条件作用时间均为２．０ｈ。 关键词：硫酸软骨素；蛋壳膜；胰蛋白酶；胃蛋白酶 Optimization of Extraction Technology of Chondroitin Sulfate from Eggshell Membrane LIU Guo-qing，LING Qing-zhi，SUN Jun-fei (School of Biotechnology and Food Engineering, Hefei University of Technology, Heifei 230009, China) Abstract ：Chondroitin sulfate was extracted from the eggshell membrane with a method of dilute alkali-enzyme hydrolysis. The product of chondroitin sulfate was gotten after ethanol disposition and desiccation by eliminating the protein with trypsin and pepsin. The results showed the optimum conditions of weight proportion 1:1.5 (material:liquid), alkali concentration 5%, temperature 40 ℃. Dosage of trypsin and pepsin 1.5% and 0.8% respectively, pH value 8.2 and 5.5 respectively and reaction time 2.0 h respectively. Key words：chondroitin sulfate；eggshell membrane；trypsin；pepsin 硫酸软骨索(chondroitin sulfate，简称CS)是来自于动物软骨和鸟类卵的壳膜等组织的一类重要的酸性粘多糖即糖胺聚糖[1]。硫酸软骨素呈白色或微黄色粉末，无臭，无味，吸水性较强易溶于水而成黏度大的溶液，不溶于乙醇、丙酮和乙醚等有机溶剂，其盐类对热源较稳定，受热80℃亦不分解。一般硫酸软骨素约含有50～70个双糖的基本结构，按其化学组成和结构，可分为CSA、CSC、CSD三种同分异构体，它们均由D-氨基葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖组成，只是因硫酸基团位置不同[1-2]。研究发现，该物质具有良好的抗衰老功能，可以制成各种美容产品和保健食品。如果将其提纯为药品，可治疗某些神经性头痛、关节痛、动脉硬化等病症，还可用于链霉素副作用引起的听觉障碍以及肝功能受损的辅助治疗[1]。硫酸软骨素作为一种新型药用活性成分，近年来日益受到各国人们的重视。蛋壳膜是一种以角膜为主体，与黏多糖类相结合的复合蛋白质，溶化后可以获得乙酰氨基葡萄糖半乳糖、葡萄糖醛酸、透明质酸、硫酸软骨素、氨基酸等可溶性高分子化合物的混合物[3]。我国的蛋壳资源数量巨大，开展蛋制品加工副产业将在很大程度上改变蛋壳来 源分散、不易收集、污染严重的现状，同时也为生产硫酸软骨素提供广泛的原料来源。 硫酸软骨素的提取方法有很多种，如高温高压法、中性盐法、碱提法、酶解法等，以上工艺中，浓碱提取工艺产品颜色较深，且废碱液对环境的危害较大；稀碱提取工艺蛋白质含量和氮含量较高，生产周期较长；稀碱稀盐和稀碱浓盐提取工艺，产率和纯度都不高。综 合考虑产率和纯度，稀碱-酶解提取工艺是一种较实用的方法[2,4-6]。本实验以蛋壳膜为原料，

硫酸软骨素

硫酸软骨素 硫酸软骨素： 糖胺聚糖的一种，由D-葡糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖以β-1,4-糖苷键连接而成的重 复二糖单位组成的多糖，并在N-乙酰氨基半乳糖的C-4位或C-6位羟基上发生硫酸酯化。 大量存在于动物软骨中。 硫酸软骨素钙： 硫酸软骨素对角膜胶原纤维具有保护作用，能促进基质中纤维的增长，增强通透性，改善血液循环，加速新陈代谢，促进渗透液的吸收及炎症的消除；其聚阴离子具有极强的保水性，能改善眼角膜组织的水分代谢，对角膜有较强的亲和力，能在角膜表面形成一层透气保水膜，促进角膜创伤的愈合及改善眼部干燥症状。 基本资料 【产品类属】：粘多糖类物质，主要分为硫酸软骨素钠盐和硫酸软骨 素钙盐等，其中以硫酸软骨素钠盐最为常见，应用也最为广泛。 【萃取来源】：猪、牛、鸡、鲨鱼的软骨 主要的应用途径是作为治疗关节疾病的药品常与氨基葡萄糖配合使用，具有止痛，促进软骨再生的功效，可以从根本改善关节问题。 市场需求 是提取于动物软骨的黏多糖类物质,在心血管疾病、关节病的防治等方面具有重要的作用,是目前市场上较重要的生化产品.硫酸软骨素目前具有 供不应求和继续上升的市场.硫酸软骨素除了作为药品外,大量的是作为改 善关节病的补充品,作为健康食品应用,在美国已经风行多年.经过多年的 应用,已经证明硫酸软骨素对改善老年退行性关节炎、风湿性关节炎有一定的效果,因此市场仍呈快速上升的势头.仅在美国的消量每年就可达600吨 左右.而中国有13亿人口,患老年退行性关节病和冠心病的人很多,因此有 着硫酸软骨素消费的巨大潜在市场. 硫酸软骨素的作用 硫酸软骨素能发挥以下功效以纾解关节疼痛问题: 1.提供垫衬作用，缓和行动时的冲击和摩擦 软骨素的作用犹如“液状磁石”，能将水分吸入蛋白多糖分子内，使 软骨变厚及有如海绵般，并增加关节内的滑液量。如此一来，它便能提供“垫衬”作用以增强关节的减震能力和缓和行走或跳动时的冲击和摩擦。 2.把重要的氧供和营养素输送至关节，帮助清除关节内的废物

2017年硫酸软骨素行业分析报告

2017年硫酸软骨素行业分析报告 2017年1月

目录 一、行业监管体制和行业政策 (3) 1、行业监管体制 (3) 2、行业法律法规 (3) 3、行业政策 (4) 二、行业发展概况 (4) 1、保健品、膳食补充剂市场发展概况 (5) 2、奶粉市场发展概况 (9) 三、行业壁垒 (12) 1、保健品行业壁垒 (12) （1）政策壁垒 (12) （2）资金壁垒 (12) （3）技术、资质壁垒 (13) 2、奶粉行业壁垒 (13) （1）政策壁垒 (13) （2）技术壁垒 (14) 四、行业风险特征 (14) 1、保健品行业风险特征 (14) （1）原材料价格的波动的风险 (14) （2）行业高度竞争的风险 (14) （3）政策变动风险 (15) （4）产品质量和食品安全风险 (15) 2、奶粉行业风险特征 (15) （1）技术更新换代的风险 (15) （2）行业竞争加剧的风险 (16) （3）产品质量和安全性的风险 (16)

一、行业监管体制和行业政策 1、行业监管体制 根据《中华人民共和国食品安全法》第五条的规定，保健品行业主管部门包括国务院食品安全委员会、国家食品药品监督管理部门、卫生行政部门、质量监督部门。国务院食品安全委员会的主要负责统筹规划、指导发展方针。国家食品药品监督管理部门的主要负责保健食品注册、对食品生产经营活动实施综合监督管理。卫生行政部门的主要负责食品安全监测，制定食品安全标准。质量监督部门主要职责为监督食品生产许可、食品进出口许可，对不符合食品安全标准的相关产品给予处罚。行业的自律性组织包括中国保健协会和中国医药保健品进出口商会。 2、行业法律法规

硫酸软骨素-美国药典32版

Chondroitin Sulfate Sodium Chondroitin, hydrogen sulfate, sodium salt [9082-07-9]. ?Chondroitin Sulfate Sodium is the sodium salt of the sulfated linear glycosaminoglycan obtained from bovine, porcine, or avian cartilages of healthy and domestic animals used for food by humans. Chondroitin Sulfate Sodium consists mostly of the sodium salt of the sulfate ester of N-acetylchondrosamine (2-acetamido-2-deoxy-β-d-galactopyranose) and d-glucuronic acid copolymer. These hexoses are alternately linked β-1,4 and β-1,3 in the polymer. Chondrosamine moieties in the prevalent glycosaminoglycan are monosulfated primarily on position 4 and less so on position 6. It contains not less than 90.0 percent and not more than 105.0 percent of chondroitin sulfate sodium, calculated on the dried basis. NOTE—Chondroitin Sulfate Sodium is extremely hygroscopic once dried. Avoid exposure to the atmosphere, and weigh promptly. Packaging and storage— Preserve in tight containers. Labeling— Label it to state the source(s) from which the article was derived, whether bovine, porcine, avian, or a mixture of any of them. USP Reference standards <11>— USP Chondroitin Sulfate Sodium RS. Clarity and color of solution— Transfer 2.5 g of Chondroitin Sulfate Sodium to a 50-mL volumetric flask. Dissolve in and dilute with carbon dioxide-free water to volume, mix, and examine immediately. Measure the absorbance of this solution at 420 nm in a 1-cm cell, using carbon dioxide-free water as the blank: its absorbance is not greater than 0.35. Identification— A: Infrared Absorption <197K>. B: A solution containing 0.5 g in 10 mL of water meets the requirements of the test for Sodium <191>. Specific rotation <781S>: between 20.0and 30.0. Test solution: 30 mg per mL. Microbial enumeration <2021>— The total bacterial count does not exceed 1000 cfu per g, and the total combined molds and yeasts count does not exceed cfu 100 cfu

硫酸软骨素USP质量标准翻译

硫酸软骨素钠 质量标准（USP） 硫酸软骨素钠是从牛、猪、鸟类等家畜软骨组织中提取制得的硫酸化链状黏多糖钠盐。主要为N-乙酰半乳糖胺（2-乙酰胺-2脱氧-β-D-吡喃半乳糖）和D-葡萄糖全算的共聚物的硫酸酯的钠盐，共聚物内己糖通过β-1,4及β-1,3糖苷键交替连接。在普通使用的黏多糖中，硫酸基主要位于分子中半乳糖的4位上，少量的硫酸基在6位上。在普遍使用的黏多糖中软骨糖胺部分主要为4-位单硫酸盐，少量为6-位。按干燥品计算，含硫酸软骨素钠90.0%~105.0%。 注意：硫酸软骨素钠具有很强的引湿性，应避免暴露于空气中，称量应迅速。 包装、贮存：保存于密封容器。 【溶液澄清度和颜色】取本品2.5g至50ml容量瓶中。溶于不含二氧化碳的纯水中，并稀释至刻度，摇匀后立即检查。置于1cm吸收池内，在420nm波长处检测吸光度，以不含二氧化碳的水作为对照：吸光度不得大于0.35。 【鉴别】A. 本品的红外光吸收图谱应与硫酸软骨素钠对照品的图谱一致。 B. 取本品0.5g溶于10ml纯水中，显钠盐的鉴别反应。 【比旋度】取本品，精密称定，用水溶解并定量稀释制成每1ml中约含30mg的溶液。测定，比旋度应为-20°至-30°。 【微生物限度】细菌总数不能超过1000 CFU/g，霉菌和酵母菌总数不能超过1000 CFU/g，在相同条件下不得检出沙门氏菌和大肠杆菌。 【pH】取本品0.1g溶于10ml纯水中溶解，pH值为5.5~7.5。 【干燥失重】取本品，在105℃干燥4小时，减失重量不得过10.0%。（注意：硫酸软骨素钠有很强的吸湿性，应避免暴露于空气中，称量应迅速。） 【炽灼残渣】以干燥品计算，遗留残渣应为20.0%~30.0%。 【氯化物】取本品0.10g，与0.7ml 盐酸（浓度0.020 mol/L）对照液比较，不得更深（0.5%）。【硫酸盐】取本品200mg溶于40ml水中，加入10ml（30mg/ml）西吡氯胺溶液，混匀，过滤。取25ml滤液检测，与0.25ml 硫酸（浓度0.010mol/L）对照液比较，不得更深（0.24%）。【重金属】照USP<231>II法测定，重金属含量不得过0.002%。 【纯度】电泳法 0.1mol/L醋酸钡缓冲液（pH 5.0）的制备：取醋酸钡约25.24g，加水溶解并稀释至900ml，用醋酸调节pH至5.0，再加水至1L，混合均匀。 染色液：0.1%甲苯胺蓝醋酸溶液：取1g甲苯胺蓝，加0.1mol/L的醋酸1000ml使溶解。 标准溶液1：制备浓度为30mg/ml的硫酸软骨素钠对照品水溶液。 标准溶液2：取1ml标准溶液1，加水稀释至50ml，混合均匀。 供试品溶液：取本品150mg，精密称定，置于5ml容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，混合均匀。 检测步骤：取一适用于醋酸纤维薄膜电泳的电泳仪，将电泳槽内加满0.1mol/L的醋酸钡盐缓冲液（pH5.0）。取一张醋酸纤维薄膜，约5~6cm×12~14cm大小，浸入0.1mol/L的醋酸钡盐缓冲液（pH5.0）中10分钟，或待完全浸透，取出夹于滤纸中吸去多余的缓冲液。将薄膜置于电泳槽架上，用适宜的点样装置，相薄膜的光泽面上滴加相同体积（约0.5μl）的供试品溶液、标准溶液1和标准溶液2。确保薄膜的两端至少各有0.5~1.0cm浸泡如缓冲液中。使用60V恒压（起始电流约6mA）电泳2小时。（注意：应在5分钟内完成点样并启动定压，因为进一步干燥会使薄膜的灵敏度降低。）将点样面向下放置，轻轻摆动或浸入染色