扬州大学基因工程期末试题 复习要点整理

基因工程期末试题复习要点整理

基因工程是70年代出现的一门科学，是生物学最具生命力和最引人注目的前沿科学之一，是现代生物技术的代表，是生命科学类专业中的一门重要的专业课。本课程主要介绍基因工程概述、重组DNA基本技术及原理、基因克隆、基因的分离及鉴定、基因工程的表达系统、基因工程的应用等。通过本课程的学习，使学生掌握基因工程技术的基本原理和了解该技术在动物、植物和微生物等方面的应用，为今后从事生物学教学、生物技术研究和产品开发，或进一步的研究生学习科研打下坚实的理论及专业基础。扬州大学试题纸

一、名词解释：共10题，每题2分，共20分。

1. 基因: 是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。

2. 定位克隆: 获取基因在染色体上的位置信息，然后采用各种方法对该基因进行定位和克隆

3. 融合基因: 是指应用DNA体外重组技术构建的一类具有来自两个或两个以上的不同基因核苷酸序列的新型基因。

4. 转化子: 导入外源DNA后获得了新遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞，又称重组体。

5. 人工接头：是人工合成的具有一个或数个特定限制性内切酶识别和切割序列的双股平端DNA短序列。

6. RT-PCR: 是指以mRNA在反转录酶作用下合成cDNA第一链为模板进行的PCR。

7. ORF : 起始于AUG、止于UAA、UGA、UAG的连续的密码子区域，是潜在的编码区。

8. MCS: 指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。

9. gene targeting : 基因工程中利用活细胞染色体DNA可与外源DNA的同源性DNA序列发生重组的性质，来进行定点修饰改造染色体上某一目的基因的技术

10. 5’RACE: 是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到5’端之间未知序列的方法。

四、简答题：共4题，共20分。

1．简述获得目的基因常用的几种方法。（5分）

答：

（1）直接从染色体DNA中分离：（1分）

仅适用于原核生物、叶绿体和线粒体基因的分离，较少采用。

（2）人工合成：（1分）

根据已知多肽链的氨基酸顺序，利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。适应于编码小分子多肽的基因。

（3）从mRNA合成cDNA：（1分）

采用一定的方法钓取特定基因的mRNA，再通过逆转录酶催化合成其互补DNA （cDNA），除去RNA链后，再用DNA聚合酶合成其互补DNA链，从而得到双链DNA。这一方法通常可得到可表达的完整基因。

（4）利用PCR合成：（1分）

如已知目的基因两端的序列，则可采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术，在体外合成目的基因。

（5）从基因文库中筛选：（1分）

首先建立基因组或cDNA文库，利用探针从文库中筛选目的克隆。

2. 分子克隆载体应具备哪些特点？（4分）

答：

(1) 在宿主细胞内必须能够自主复制（1分）

(2) 必须具备合适的酶切位点，供外源DNA片段插入，同时不影响其复制（1分）

(3) 有一定的选择标记，用于筛选（1分）

(4) 具有较高的拷贝数，便于载体的制备（1分）

3. cDNA文库和基因组文库的主要差别有哪些？（5分）

答：

（1）基因组文库克隆的是任何基因，包括未知功能的DNA序列；cDNA文库克隆的是具有蛋白质产物的结构基因，包括调节基因。（2分）

（2）基因组文库克隆的是全部遗传信息，不受时空影响；cDNA文库克隆的是不完全的编码DNA序列，因它受发育和调控因子的影响。（1分）

（3）基因组文库中的编码基因是真实基因，含有内含子和外显子，而cDNA文库克隆的是不含内含子的功能基因。（2分）

4. 某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl I的切点。现用Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素? (2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型? (3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体? （6分）

答：

(1)加四环素；(2)TetrKans和TetrKanr；(3)重新点种在含Tet、Kan和只加Tet 的

平板上，选择只在Tet平板上生长的菌落，即为所需的重组体。

五．分析题 10分

科学家将人的生长素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。过程如右图所示，据图回答：

(1)人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是什么？

(2)过程①表示的是采取什么的方法来获取目的基因？

(3)检测大肠杆菌B是否导入了质粒

或重组质粒，可采用的方法和理由？

(4)如果把已经导入了普通质粒A或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养基上培养，发生什么现象？分析原因？

答:（1）人的基因与大肠杆菌DNA的组成成分相同，结构相同 (2分)

(2) 反转录法(逆转录法) (2分)

(3)将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的，说明已导入了质粒A或重组质粒，反之则没有导入。因为普通质粒A和重组质粒上都有抗氨苄青霉素基因 (2分)

(4)有的能生长，有的不能生长导入普通质粒A的细菌能生长，因为普通质粒A 上有四环素抗性基因；导入重组质粒的细菌不能生长，因为目的基因正插在四环素抗性基因中，破坏了其结构和功能。(4分)

六、论述题：共1题，15分。

1．在基因工程操作过程中，使用的克隆载体需要具备哪些条件？选择受体细胞时需要具备哪些基本原则？

答：克隆载体需要具备条件：（7分）

①载体都能携带外源DNA片段(基因)进入受体细胞，或停留在细胞质中自我复制，或整合到染色体DNA上，随着染色体DNA的复制而同步复制。(1分)

②载体都具有合适的筛选遗传标记。(1分)

③载体都具有供外源基因插入的限制性核酸内切酶位点，即多克隆位点。(1分)

④载体都必须是安全的，不应含有对受体细胞有害的基因，并且不会任意转入除受体细胞以外的其他生物细胞，尤其是人的细胞。(1分)

⑤载体本身的分子量都比较小，可容纳较大的外源基因片段。(1分)

⑥载体在细胞内的拷贝数要高，方便外源基因在细胞内大量扩增。(1分)

⑦载体在细胞内稳定性要高，保证重组体稳定传代而不易丢失。(0.5分)

⑧载体的特征都是充分掌握的，包括它的全部核苷酸序列。(0.5分)

受体细胞的选择应具备的基本原则：（8分）

①便于重组DNA分子的导入。(1分)

②便于重组体的筛选。根据所用的表达载体所含的选择性标记与受体细胞基因是否相匹配，从而易于对重组体进行筛选。(1分)

③遗传稳定性高，易于进行扩大培养或易于进行高密度发酵而不影响外源基因的表达效率。对动物细胞而言，所选用的受体细胞具有对培养的适应性强，可以进行贴壁或悬浮培养，可以在无血清培养基中进行培养。(1分)

④受体细胞内内源蛋白水解酶基因缺失或蛋白酶含量低，利于外源蛋白表达产物在细胞内积累，可促进外源基因高效分泌表达。(1分)

⑤安全性高，无致病性，不会对外界环境造成生物污染。一般选用致病缺陷型的细胞或营养缺陷型细胞作为受体细胞。(1分)

⑥能使重组DNA分子稳定存在于细胞中。从受体细胞的角度出发，通常的做法是是对其作适当的修饰改造，如选用某些限制性核酸内切酶缺陷型的受体细胞就可以避免其对重组DNA分子的降解破坏作用。(1分)

⑦受体细胞在遗传密码子的应用上无明显偏倚性。(1分)

⑧具有较好的转译后加工机制等，便于真核目的基因的高效表达。(0.5分)

⑨在理论研究和生产实践上有较高的应用价值。(0.5分)

基因工程原理复习题思考题

基因工程绪论

1、基因工程的定义与特征。

定义：在体外把核酸分子（DNA的分离、合成）插入载体分子，构成遗传物质的新组合（重组DNA），引入原先没有这类分子的受体细胞内，稳定地复制表达繁殖，培育符合人们需要的新品种（品系），生产人类急需的药品、食品、工业品等。

特征：1、具跨越天然物种屏障的能力。

2、强调了确定的DNA片段在新寄主细胞中的扩增。

2、试述基因工程的主要研究内容。

1）、目的基因的分离

2）、DNA的体外重组（载体、受体系统等）

3）、重组DNA分子转移到受体细胞及其筛选

4）、基因在受体细胞内的扩增、表达、检测及其分析。

3、基因工程在食品工业上有何应用发展？

主要是通过基因重组，使各种转基因生物提高生产谷氨酸、调味剂、酒类和油类等有机物的产率；或者改良这些有机物组成成分，提高利用价值。

4、转基因是一把双刃剑，请客观谈谈对转基因及转基因食品安全性的认识。

转基因技术所带来的好处是显而易见的，在人类历史进步和发展中起到了积极作用。

首先，通过该项技术可以提供人们所需要的特性，改良培育新品种；

第二，延长食品保存时间或增加营养成分；

第三，将抗虫防菌基因转入到作物中，使作物本身产生抵抗病虫害侵袭的能力，减少了农药的使用量，有利于环境保护；

第四，转基因技术及基因食物在医学方面得到广泛研究和应用。

人们对转基因技术的主要担忧在于环境方面。外源基因的导入可能会造就某种强势生物，产生新物种或超级杂草、损害非目标生物、破坏原有生物种群的动态平衡和生物多样性，也即转基因生物存在潜在的环境安全问题。

转基因作物的大面积种植已有数年，食用转基因食品的人群至少有10亿之多，但至今仍未有转基因食品对生命造成危害的实例；更何况目前每一种基因工程食品在上市前，都要经过国家法律认可，食品卫生部门和环境部门的严格检测。只有测试合格了，才能投放市场。因此公众完全可以安全地消费、大胆地食用转基因食品。

第一章 DNA的分子特性与利用

1、原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别？

1）原核基因表达调控的三个水平：转录水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控

原核基因表达调控主要是在转录水平上的调控。

2）真核生物基因表达的特点：

l 1．基因组DNA存在的形式与原核生物不同；

l 2．真核生物中转录和翻译分开进行；

l 3．基因表达具有细胞特异性或组织特异性；

l 4．真核基因表达的调控在多个水平上进行：DNA水平的调控、转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控；

2、什么是基因？根据基因的产物，基因可分为哪三类？

基因是具有生物学功能的、在染色体上占据一定位置的一段核苷酸序列，是分子遗传的功能单位。

根据基因的产物，基因可分为三类：

l 转录并翻译编码蛋白质的基因:

包括结构蛋白基因、编码酶的基因、调节基因

l 转录但不翻译产物的基因:

包括tRNA、rRNA

l 不转录但有功能的DNA区段:

如启动子、操纵基因

3、引起核酸变性的因素主要有哪些？核酸变性后性质有何变化？

引起核酸变性的因素：--温度、酸、碱、甲醛和尿素等。

DNA变性后，它的一系列性质发生变化，如紫外吸收(260 nm)值升高（增色效应）, 粘度降低等，如DNA增加25－40%. RNA约增加1.1%。。

4、DNA复性及其影响因素。

变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。

DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关，也与它本身的组成和结构有关：分子量越大复性越难。浓度越大，复性越容易。

（附加：注意：将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。但是将变性的DNA缓慢冷却时，可以复性。

复性的应用：核酸的杂交，分子扩增）

第二章基因工程操作的基本技术

1. DNA凝胶电泳中核酸分子分离的机理。

在碱性环境下，核酸分子带负电荷，在外加电场的作用下，分子在凝胶多孔性刚性滤孔中从负极向正极泳动，其中主要由于分子筛效应和电荷效应达到分离不同大小核酸分子的目的。

2. DNA凝胶电泳中影响电泳迁移率的因素主要有哪些？

1）分子本身的影响

?分子的大小：小则快

?带电荷数：多则快

?分子构型：超螺旋>解螺旋

2）电场：直流电场

?电压高则快

?电压太高则结果不准确

常用3~5V/CM

3）支持物介质

?种类：琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶

?凝胶浓度: 浓度大，筛孔小，适合小分子电泳；浓度小，筛孔大，适合大分子电泳

4）电泳缓冲液

ü pH值：偏碱性，带负电荷

ü 离子浓度：离子浓度高_ 电流大_发热快_胶溶解

ü种类：TAE、TBE、TPE、TNE

3. PCR的原理和主要反应过程，并分析影响PCR扩增的影响因素。

PCR原理：变性温度下， DNA双链变性双螺旋解开成单链DNA，在退火温度中人工合成的特异引物根据碱基互补配对原则与单链DNA特异结合，然后在DNA聚合酶的作用下，在延伸温度下不同的脱氧核苷酸按照碱基互补配对原则在引物的引导下合成与模板DNA互补的新链，实现DNA的扩增。

影响PCR扩增的影响因素：

§(1)Taq酶：常用1U/25μL

3浓度低，扩增产物不够；

3浓度高，非特异性扩增增加；

3酶的活性；

§(2)dNTP的浓度：常用100-200μmol/L，不能低于20μmol/L，特异性、保真性；

§(3)模板：主要考虑纯度及使用量，对纯度要求不高，但含有酚、氯仿等杂质则难以成功。使用量从几个ng到100ng.

§(4)引物浓度：0.1-0.5μmol/L之间，过多则非特异扩增增加，形成引物二聚体；

§(5)Mg2 浓度：常用 0.5-2.5mmol/L；

影响：酶的活性、引物-模板退火、特异性

§(6)PCR反应程序设定：变性温度和时间、引物退火温度Tm与时间、引物延伸温度与时间和循环数

4. PCR引物设计的原则，若给一指定DNA序列并需要通过PCR扩增此序列，如何设计扩增引物？（关于如何设计这个问题，靠自己了）

引物设计原则：

1、G C含量45-55%；

2、Tm值高于55；

3、引物特异性；

4、引物扩增跨度；

5、是否形成引物二聚体

5. 定量PCR的原理？Ct值的含义。

原理：通过实时检测PCR每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析。

初始模板量X0的对数值与C(T) 值之间呈线性关系：log X0= - log(1 Ex) *Ct log N

6. 分子杂交的类型主要有哪些？探针的标记方法与标记类型？常用的双链DNA 的标记方法是哪两种？

探针的标记方法：切口平移法、随机引物合成法，末端标记法，PCR标记法，体外转录标记法。

探针按核酸分子分：DNA探针和RNA探针；

按标记物的不同：放射性标记探针和非放射性标记探针。

标记类型：按核酸分子的不同：可分为DNA探针和RNA探针

根据标记物的不同：可分放射性标记探针和非放射性标记探针；

双链DNA探针标记主要方法：切口平移法、随机引物合成法；

7. Southern杂交一般过程及影响杂交因素。

Southern杂交操作步骤:

(1) 用限制性内切酶酶切DNA, 经凝胶电泳分离各酶切片段；

(2) 转膜：将DNA片段转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上；

(3) 预杂交：封阻滤膜上非特异性位点；

(4) 杂交：让探针与同源DNA片段特异性结合；

(5) 洗脱：去除非特异性结合的探针；

(6) 自显影检查目的DNA所在的位置。

Southern杂交影响因子

1）、目的DNA在总DNA中所占的比例

2）、探针的大小和标记效率

3）、转移到滤膜上的DNA量

4）、探针与靶DNA的同源性

8. 基因组文库的构建过程？如何确定文库的大小？

基因组文库的构建过程：

1）从生物体提取大片断的基因组DNA；

2）用适当的限制性内切酶（常为4碱基识别位点）进行部分酶切或超声波打断基因组DNA ；

3）在琼脂凝胶电泳上或蔗糖梯度离心筛选适当长度的DNA片断（根据载体的要求）；

4）载体的酶切、回收；

5）将处理好的基因组DNA片断与载体连接；

6）将重组子导入宿主细胞

7）文库的鉴定、收集、保存；

确定文库大小的方法：

以在构建的基因组文库中任一基因存在的概率来衡量文库的质量或完备性，它与基因文库最低所含克隆数N（即文库大小）之间的关系可用下式表示：

N = ln ( 1 – P ) / ln ( 1 – f )

其中：

N：文库所需的总克隆数；

P：任一基因被克隆（或存在于基因文库中）的概率；

f：克隆片段的平均大小/ 生物基因组的大小。

9. 基因文库的类型包括哪两种？各有什么特点？

10. 一般质粒DNA的构型有哪几种？在琼脂糖凝胶电泳中的有何特点？

超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA

在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：

超螺旋质粒DNA>线状质粒DNA>开环质粒DNA

11. 碱裂解法提取质粒DNA的原理，分析影响试验结果的各种可能因素。

碱裂解法原理：在碱性条件下，双连DNA氢键断裂，结构破坏变性，环状超螺旋质粒不充分变性。在中性条件下变性质粒恢复原来构型，而线性大分子细菌DNA 不能复性呈不溶物而经离心除去。

（各种可能因素是上一届的，具体其实大家可以根据那天师兄说的去写）

提取失败：1）洗去双链时，将质粒DNA洗去；

2）破壁失败，质粒没析出；

3）加剂问题

电泳失败：1）电压太高 2）没加染色剂

3）胶穿孔 4）电泳时间过长

12. 电泳缓冲液使用一定时间后出现DNA在凝胶中跑不动现象的原因，有何解决办法？

原因：电泳缓冲液的离子的富集作用；

解决方法：1.更换成新配置的电泳缓冲液；

2.把电泳槽中的缓冲液倒出混匀后再重新使用

13. 电泳的指示剂和染色剂有何区别，各自的作用是什么？

指示剂一定要在电泳前加入，指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液；（一般为：溴酚兰，二甲苯青）

作用：①预知电泳的速率及方向；②使样品呈现颜色，便于加样；

③一些高浓度蔗糖或其它物质增加DNA的密度，可以防止DNA的扩散

染色剂即可以在电泳前加入样液，又可以电泳后再对凝胶染色；（溴化已锭[EB]、硝酸银、Goldview染料）

作用：呈现出核酸电泳后的带型。

第三章基因克隆的酶学基础

1、限制性核酸内切酶的类型，基因工程常用的是哪种限制性核酸内切酶？（常用II型）

2、什么是星活性，产生星活性的因素可能有哪些？

在非最适合的条件下酶的识别特异性降低，产生非特异性带，这种活性称星活性。

产生Star活性的因素：（书上P46-P47答案）

高浓度甘油，碱性pH，存在Mn2 ，低离子强度，低盐浓度，低pH

3、结合已做的实验，分析影响酶切的因素。（这个答案是上届的，仅供参考）

1）DNA的纯度：DNA中的杂质如蛋白质、酚、氯仿、乙醇、SDS、EDTA等都会影响酶的活性。

2）DNA的甲基化程度：dam甲基化酶（修饰GATC中的A）； dcm甲基化酶（修饰CCA/TGG的C）。

3）温度：不同的限制性内切酶的最适反应温度不同。大多数是37 o C，少数要求40-65 o C。4）缓冲液(Buffer)：是影响限制酶活性的重要因素。

4、限制性核酸内切酶命名规则及各字母代表的含义。（例子和图帮助大家理解而已）

命名规则：寄主菌属名的第1个字母＋种名的前两个字母＋菌株或菌型代号（大写）＋空白＋发现序列（罗马数字）

例子：EcoRⅠ(E：属名；co：种名；R：株；Ⅰ：发现次序)

5、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。

同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。

同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。分完全同裂酶和不完全同裂酶

（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。

不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。）

6、连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？

类型：DNA连接酶和RNA连接酶

异同点：

相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。

不同点：DNA聚合酶识别脱氧核糖核苷酸，在DNA复制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在转录中起作用。

影响因素：（影响因素就四个，后面分析觉得烦的话大家自己看着办啦）

1）连接所用的目的片段的状态：

1 效率：粘性末端>平端(100倍)；

1 5，突出>3，突出；

1平端：HaeIII>AluI>HinCII>SmaI

2）连接温度

1连接效果最好在37 ℃，但形成的互补不稳定;

1最佳连接温度：12-16 ℃，较好的连接效果，互补又较稳定;

3）反应液中的成分：

1 ATP：反复冻熔，ATP活性降低，ATP溶解度不高，连接缓冲液宜分装；

1单价离子：150-200mM NaCl，提高连接效果；

1 PEG：5%以下可以提高连接效率

4）插入片段与载体的浓度比例

1载体DNA与外源DNA的分子摩尔比通常为1﹕3左右，甚至1﹕10 或更高。

1目的或作用：增加插入片段与载体的接触机会，减少载体自我连接的现象。

7、试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。（传说中的网上答案）

1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。

2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。

3、足够多的载体和插入片段是最重要的。

4、平端的连接对于离子浓度很敏感

5、尽可能缩小连接反应的体积

6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好

8、基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？

1）大肠杆菌DNA聚合酶

2）Klenow fragment

3）T7 DNA聚合酶

4）T4 DNA聚合酶

5）修饰过的T7 DNA聚合酶

6）逆转录酶

7）Taq DNA聚合酶

第四章基因克隆的载体系统

1、作为基因工程载体，其应具备哪些条件？

! 具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；

! 具有合适的筛选标记；

! 具有较高的外源DNA的载装能力；

! 具有多克隆位点（MCS）；

! 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。

2、质粒的不相容性及其分子机理。

● 定义：任何两种含有相似复制子结构的不同质粒，不能同时存在于一个细胞中，这种现象称为质粒的不相容性。

● 分子机理：两种含有相似复制子结构的不同质粒，在复制同时受到同一种拷贝数控制系统的干扰，致使两种质粒的最终拷贝数不同，其中拷贝数多的质粒在以后的细胞分裂周期中更具优势。

3、载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？

基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。

4、质粒转化原理，影响转化率的因素有哪些？

A、化学法（CaCl2法)转化原理：是Ca2 与细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构，后者经热脉冲发生收缩作用，使细胞膜出现空隙，质粒或DNA重组分子便可进入细胞内（感受态细胞）。

B、电穿孔转化转化原理：将待转化的质粒或DNA重组连接液加在电穿孔转化仪的样品池中，两极施加高压电场，在强大电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜产生缝隙，质粒或DNA重组分子便可进入细胞内。

影响转化率的主要影响因素:

1）载体本身的性质及其空间构象：超螺旋构象转化率最高；

2）插入片段的大小：插入片段越大，转化效率越低；

3）受体细胞的类型及预处理；

4）转化方法：电击法高于化学法。

5、重组体分子的选择方法主要有哪些？并简单阐述其原理。

从总体上看，重组体分子的选择与鉴定方法基本上可以分为如下几个类型：

（1）基于载体遗传标记检测法

在构建基因工程载体系统时，载体DNA分子上通常携带了一定的选择性遗传标记基因，转化或转染宿主细胞后可以使后者呈现出特殊的表型或遗传学特性，据此可进行转化子或重组子的初步筛选。

（2）基于克隆DNA序列检测法

Southern印迹杂交：根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过与已标记的单链DNA探针的杂交作用以检测这些被转移的DNA片段。

（3）基于外源基因产物检测法

如果目的基因产物能降解某些药物使菌株呈现出抗性标记，或者基因产物与某些药物作用是显颜色反应，则可根据抗性或颜色直接筛选含目的基因的克隆子。

6、用已学过的重组体分子的选择与鉴定技术，试设计一个试验方案，假如一特异PCR扩出的基因或基因片断重组进T载体并转化大肠杆菌，如何鉴定并获得真实转化子？(自理)

第五章基因的克隆一般方法

1、基因的克隆方法主要有哪些？并阐述其克隆原理（至少3种，都是书上找的，自选哈，建议必选DD RT-PCR和SSH，原因请看下题）？

1）差减杂交（SH）

通过DNA复性动力学原理富集目的基因序列，并以此构建减数文库的方式来进行目的基因分离克隆的。

2）抑制性差减杂交（SSH）

SSH的核心技术是抑制性PCR，它是一种将检测子cDNA单链标准化步骤和消减杂交步骤结合为一体的技术。其中标准化步骤均等了检测子中的cDNA单链丰度，而消减杂交步骤去除了检测子和驱赶子之间的共同序列，使检测子和驱赶子之间不同的序列得到扩增。

3）差异显示PCR（DD RT-PCR）

利用真核生物mRNA结尾处有POLY（A）结构，在其3`端设计象5`-T11GA样引物，该引物可与mRNA总数的十二分之一结合，从而使这部分基因得到逆转录，同时结合5`端的随机引物（20条10-mer），可以使不同长度的基因得到扩增。

4）DNA代表性差异分析（DNA RDA）

代表性差别分析是通过突变型（驱赶DNA，driver DNA）与野生型（检测DNA，tester DNA）基因组之间的差异来分离和鉴定突变基因的方法。

5）扩增限制性片段长度多样性（AFLP）

基因组DNA经过限制性内切酶消化后，产生粘性末端。使用人工合成的短的双链接头，该接头一端具有同样的内切酶识别粘性末端，互补连接后成为DNA模板。接头和与接头相邻的酶切片断的几个碱基序列作为引物的结合位点。

[参考文献：关德军.AFLP技术原理及其在植物研究中的应用.安徽农业科学，2006，34（15）：3625-3628）]

6）cDNA微阵列

建立一套统一且具有高质量、高代表性的cDNA列阵膜，在这一列阵膜上每个cDNA 克隆都有固定的位置和编号，这样大大方便了数据的综合比较分析，并可对每个cDNA克隆子进行定量分析。在列阵杂交的基础上，还可以进行杂交测序，从而测定每个cDNA克隆子的序列。

2、简单阐述差异显示PCR克隆基因的原理及其优缺点，有何应用？

主要原理：利用真核生物mRNA结尾处有POLY（A）结构，在其3`端设计象5`-T11GA 样引物，该引物可与mRNA总数的十二分之一结合，从而使这部分基因得到逆转录，同时结合5`端的随机引物（20条10-mer），可以使不同长度的基因得到扩增。

优点：

l 简便、灵敏、高效、省时，能快速显示mRNA的组成。

l 所需的mRNA量少。

l 各样本mRNA的差异可同时进行比较。

l 扩出的cDNA可直接用于测序、文库筛选等。

缺点：

l 假阳性条带多，对低丰度的基因表达不容易检测。

l 工作量大。

l 无法定量研究。

l 扩出的条带往往是3`端比较短的UTR区的一段序列，提供的信息较少。

利用该技术，目前已有越来越多的差别表达基因得以分离和鉴定，在分子生物学和基因工程研究领域发挥了极大的作用。（P221）

3、抑制性差减杂交的原理与应用。

原理：SSH的核心技术是抑制性PCR，它是一种将检测子cDNA单链标准化步骤和消减杂交步骤结合为一体的技术。其中标准化步骤均等了检测子中的cDNA单链丰度，而消减杂交步骤去除了检测子和驱赶子之间的共同序列，使检测子和驱赶子之间不同的序列得到扩增。

应用：

l 基因突变体的研究：如基因的表达与不表达；

l 基因时空表达的研究：如根、茎、叶；

l 不同处理条件下的基因表达差异：如施肥与不施肥、光照与不光照。

4、酵母双杂交技术、噬菌体表面展示技术的原理。

A．酵母双杂交技术原理：大部分真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分隔开的结构域，一个是DNA特异结合域（DNA-binging domain,BD），一个是转录激活域(transcriptional activation domain,AD)。这两个结构域各具功能，互不影响，但一个完整的、具有激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域，否则无法完成其激活功能。不同来源的激活因子的BD区与AD 区结合后则能特异地激活BD结合基因的表达。

B．噬菌体表面展示技术原理：当外源DNA片段插入丝状噬菌体基因组的一个外被蛋白基因中时，如果两者读码框结构保持一致，这个外源DNA片段所编码的产物可与此外被蛋白一起以融合蛋白的形式表达，并显示在噬菌体的表面。利用抗此外源基因编码产物（多肽或蛋白）的抗体，通过亲和纯化，就能从大量的噬菌体中富集、分离出含有所要的基因的融合噬菌体。然后，通过基因扩增，得到大量所要的目的基因。

5、T-DNA标签法克隆基因的一般技术路线。

? 农杆菌侵染植物得到转化苗，筛选出表现某种突变性状的个体。

? 建立突变体基因组文库及野生型基因组文库.

? 用T-DNA片段做probe筛选突变体文库，获得阳性克隆。

? 用获得的阳性克隆筛选野生型基因组文库，获得野生型的阳性克隆。

? 把阳性克隆转化突变体进行功能互补及进行测序分析。

第七章克隆基因的表达

1、通过比较，分析大肠杆菌表达系统和酵母表达系统各有何优缺点。

大肠杆菌表达外源基因的优势：

ò全基因组测序，共有4405个开放型阅读框架；

ò基因克隆表达系统成熟、完善；

ò繁殖迅速、培养简单、操作方便、遗传稳定；

ò被FDA批准为安全的基因工程受体生物。

大肠杆菌表达外源基因的劣势：

ò缺乏对真核生物蛋白质的复性功能；

ò缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统；

ò内源性蛋白酶降解空间构象不正确的异源蛋白；

ò周质内含有种类繁多的内毒素。

甲醇酵母表达系统的优点：

ü 具有强的受严格调控的AOX1启动子

ü表达蛋白的翻译后的加工和修饰

ü 营养要求低，工业化生产成本低

ü 可高密度发酵

ü 表达蛋白可存在于胞内和胞外

酵母表达系统的缺点：酵母表达蛋白有时会出现蛋白切割问题（这个找不到，百度的）

2、如何提高克隆基因的表达水平？

1）、表达载体的优化设计；

2）、提高目标基因mRNA和目标基因产物的稳定性；

3）、密码子偏爱性；

4）、表达环境条件的优化。

3、克隆基因目的蛋白的表达的形式主要有哪些类型？

表达蛋白按溶解特性通常包括：不溶性蛋白和可溶性蛋白两类，具体包括如下几种结构形态：包涵体型蛋白、融合型蛋白、分泌型蛋白

4、启动子从转录模式上可分为哪两种？表达系统常选用哪一种？其机理是什么？

启动子从转录模式上分为：组成型启动子和诱导型启动子

表达系统常选用诱导型启动子

机理：指在某些特定的物理或化学信号的刺激下，该种类型的启动子可以大幅度地提高基因的转录水平。

5、表达载体和基因工程一般克隆载体在元件构成上有何差别？

表达载体：启动子；终止子；核糖体结合位点（SD序列）；筛选标记；复制子（质粒拷贝数）；多克隆位点

克隆载体：筛选标记；复制子（质粒拷贝数）；多克隆位点

6、根据表达蛋白用途的不同，设计选择基因的表达策略。

（1）表达蛋白用于生物化学和分子生物学研究——主要考虑保持蛋白质原有的功能不变；表达策略：融合表达和直接表达

（2）表达蛋白用作抗原——主要考虑表达蛋白的快速提纯；表达策略：以包涵体形式合成目的蛋白和融合表达目标蛋白（不用去除标签蛋白）

（3）表达蛋白用作结构研究——表达蛋白以天然可溶形式产生；表达时考虑因素：表达温度（高温促进包涵体的形成）；表达水平（高表达促成包涵体的形成）；表达载体受体菌。

第八章植物基因工程

扬州大学基因工程期末试题复习要点整理

基因工程期末试题复习要点整理 基因工程是70年代出现的一门科学，是生物学最具生命力和最引人注目的前沿科学之一，是现代生物技术的代表，是生命科学类专业中的一门重要的专业课。本课程主要介绍基因工程概述、重组DNA基本技术及原理、基因克隆、基因的分离及鉴定、基因工程的表达系统、基因工程的应用等。通过本课程的学习，使学生掌握基因工程技术的基本原理和了解该技术在动物、植物和微生物等方面的应用，为今后从事生物学教学、生物技术研究和产品开发，或进一步的研究生学习科研打下坚实的理论及专业基础。扬州大学试题纸 一、名词解释：共10题，每题2分，共20分。 1. 基因: 是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。 2. 定位克隆: 获取基因在染色体上的位置信息，然后采用各种方法对该基因进行定位和克隆 3. 融合基因: 是指应用DNA体外重组技术构建的一类具有来自两个或两个以上的不同基因核苷酸序列的新型基因。 4. 转化子: 导入外源DNA后获得了新遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞，又称重组体。 5. 人工接头：是人工合成的具有一个或数个特定限制性内切酶识别和切割序列的双股平端DNA短序列。 6. RT-PCR: 是指以mRNA在反转录酶作用下合成cDNA第一链为模板进行的PCR。 7. ORF : 起始于AUG、止于UAA、UGA、UAG的连续的密码子区域，是潜在的编码区。 8. MCS: 指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。 9. gene targeting : 基因工程中利用活细胞染色体DNA可与外源DNA的同源性DNA序列发生重组的性质，来进行定点修饰改造染色体上某一目的基因的技术 10. 5’RACE: 是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到5’端之间未知序列的方法。 四、简答题：共4题，共20分。 1．简述获得目的基因常用的几种方法。（5分）

基因工程选择题试题库,很全

2. 第一个作为重组DNA载体的质粒是() (a) pBR322 (b)ColEI (c)pSCI01 (d)pUCI8 3. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当 (a) 由作用于同一DNA序列的两种酶构成 (b) 这一系统中的核酸酶都是U类限制性内切核酸酶 (c) 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d) 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4. H型限制性内切核酸酶：() (a) 有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b) 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c) 限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e) 仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5?下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?() (a) 限制酶是外切酶而不是内切酶 (b) 限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c) 同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的 (d) 一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端 (e) 一些限制酶在识别位点内相同的位臵切割双链DNA，产生平末端

6 .第一个被分离的U类酶是：() (a) EcoK (b)Hind 川(c)Hind U(d)EcoB 7?在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?() (a) 反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度 8. 在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?() (a) EDTA (b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA 9. 在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?() (a) S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶 10 .限制性内切核酸酶可以特异性地识别：() (a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列 (c)特定的三联密码(d)以上都正确 11.下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是()。 (a) Sau3A I (b)E . coRI (c)hind III (d)Sau 3A1 12 .限制性内切核酸酶的星号活性是指：() (a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。(b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快(d)识别序列与原来的完全不同 13 .下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?() (a)甘油含量过高(b)反应体系中含有有机溶剂 (c)含有非Mg2+的二价阳离子(d)酶切反应时酶浓度过低 14. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当

扬州大学期末考试军事理论重点

第一章：中国国防 【知识点】 1.国防的概念及其基本要素。现代国防的基本类型。 国防的概念：国家为防备和抵抗侵略，制止武装颠覆，保卫国家主权，统一，领土完整和安全所进行的军事活动，以及与军事有关的政治，经济，科技，外交， 教育等方面的活动。 基本要素：一是国防的主体即国家；二是国防的对象即入侵外敌及武装颠覆；三是国防的目的即保卫国家的主权，统一，领土完整和安全；四是国防的手段即 军事活动，以及与军事有关的政治，经济，外交，科技，教育等方面的活动。 现代国防的基本类型：当今世界各国的国防类型按军事战略和国防建设的目标可以归纳 为四种类型：扩张型（美国）联盟型（日本，韩国，北约中28 个国家）自卫型（中国）中立型（瑞士，瑞典） 2.中国国防历史的启示。 启示：①经济发展是国防强大的基础②政治昌明是国防巩固的根本③国家统一和民族团结是国防强大的关键 3.国防法规的概念及其特性。 国防法规的概念：调整国防和武装力量建设领域各种社会关系的法律法规的总和 特性：（一）调整对象的军事性（二）司法适用的优先性（三）处罚措施的严厉性 4.中国现行的主要国防法规。 国防法、兵役法、国防教育法、人民防空法和国防动员法 5.我国现行的兵役制度。 中华人民共和国实行义务兵与志愿兵相结合，民兵与预备役相结合的兵役制度。 6.应届高校毕业生入伍的三种形式。 ①作为义务兵应征入伍②按军官待遇入伍③作为士官应征入伍 7.全民国防教育日的时间：每年九月的第三个星期六 8.我国公民的国防义务和权利。公民履行兵役义务的三种形式。 ㈠权利：对国防建设提出建议的权利、检举危害国防行为的权利，国防活动中获得经济损失补偿的权利。 ㈡义务：兵役义务（三种形式：服现役，服预备役，参加军事训练）、接受国防教育义务、保护国防设施义务、保护国防密码义务、协助国防活动义务。 9.国防建设的概念。新中国国防建设取得的主要成就。 国防建设的概念：为国家安全利益需要，提高国防能力而进行的各方面的建设，是国 家建设的重要组成部分。 主要成就：（一）中国人民解放军的现代化，正规化和革命化建设取得突破性进展。 （二）形成了门类齐全，综合配套的国防科技工业体系。 （三）国防后备力量建设取得长足发展。 10.国防政策的概念。新时期中国国防目标和任务的主要内容。 国防政策的概念：国家在一定时期所制定的关于国防建设和国防斗争的行动准则。 国防目标任务的主要内容：（一）维护国家主权，安全，发展利益（二）维护社会和谐 稳定(三)推进国防和军队现代化（四）维护世界和平稳定 11.武装力量的概念。中国武装力量的构成。 武装力量的概念：国家或政治集团所拥有的各种武装组织的总称 中国武装力量的构成：中国人民解放军，中国人民武装警察部队，民兵

武生院基因工程期末试题

2013-2014年度第二学期基因工程期末考试 卷型：A 考试时间：90分钟满分：100分 一、名词解释（3×5） 限制性内切酶(或其它工具酶)：能在特异位点上催化双联DNA分子断裂，产生相应的限制性DNA片段 荧光定量PCR:所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 （半定量PCR:是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过mRNA反转录成cDNA，再进行PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量） 星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段 同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端 转基因技术（或转基因动植物等）：就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。 二、填空（1×15） 1.Cosmid 实际上是由cos 位点和质粒构成的杂合载体，也可以说是带有cos 序列的质粒。 2.超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA 在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒>线状质粒>开环质粒。 3.质粒DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。 4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。

5.设计引物是一般要求C+G的比例在40%-60%，长度在17-30bp 。 6.BAC载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。 三、选择题（2×15，实卷应是1×35） 1.基因工程创始人（D） A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen 2.迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C） A. 既可以作用于双链DNA ，又可以作用于单链DNA B.只能作用于单链DNA C. 只能作用于双链DNA D.只能作用于RNA 3.氨苄青霉素的工作原理为（A ） A.可以抑制细胞壁肽聚糖的合成 B.可以抑制核糖体的转位 C.可以与核糖体50S 亚基结合并抑制蛋白质合成 D.可以与核糖体30S 亚基结合并抑制蛋白质合成 4.反转录酶是一种（C ） A. 依赖DNA的DNA聚合酶 B. 依赖DNA的RNA聚合酶 C. 依赖RNA的DNA聚合酶 D. 依赖RNA的RNA聚合酶 5.II 类限制性内切核酸酶( A ) A．仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 B．限制性识别非甲基化的核苷酸序列 C．有外切核酸酶和甲基化酶活性

基因工程测试题经典

xxxXXXXX 学校XXXX 年学年度第二学期第二次月考 XXX 年级xx 班级 姓名：_______________班级：_______________考号：_______________ 一、选择题 （每空？ 分，共？ 分） 1、下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是 A ．蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的 B ．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质 C ．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作 D ．基因工程完全不同于蛋白质工程 2、PCR 是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术，下列有关PCR 过程的叙述，不正确的是 A ．变性过程中破坏的是DNA 分子内碱基对之间的氢键 B ．复性过程中引物与DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C ．延伸过程中需要DNA 聚合酶、ATP 、四种核糖核苷酸 D ．PCR 与细胞内 DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高 3、35．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。下列有关叙述，正确的是（ ） A ．人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目，小于凝血因子氨基酸数目的3倍 B ．可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA 分子导入羊的受精卵 C ．在该转基因羊中，人凝血因子基因只存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D ．人凝血因子基因开始转录后，DNA 连接酶以DNA 分子的一条链为模板合成mRNA

4、ch1L基因是蓝细菌拟核DNA上控制叶绿素合成的基因．为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞．技术路线如图所示，对此描述错误的是（） 5、下图表示基因工程中目的基因的获取示意图，不正确的是： A、同种生物的基因组文库大于cDNA文库 B、③表示PCR技术，用来扩增目的基因 C、从基因文库中要得到所需目的基因，可根据目的基因的有关信息来获取 D、只要基因的核苷酸序列已知，就只能通过人工合成的方法获取 6、图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序 列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正确的是：

扬州大学期末考试气象学名词解释

气象学解释题 昼夜形成的原因：1、地球本身是一个不透明不发光的球体2、太阳光在同一时间内只能照到地球的一半表面积3、地球的自转！ 昼夜交替形成的原因：地球的自转 四季形成的根本原因：公转时地轴与公转轨道面成66°的倾斜角【太阳高度角在变化各地获得的热量也在变化所以形成了四季，角度越大热量越多昼越长】 天空的蔚蓝色：当天空晴朗时，大多数质点比较小时，发生了一种有选择性的散射，其散射强度与波长的四次方成反比，阳光中波长较短的蓝光更容易被散射，使得天空呈现蔚蓝色 阴天的乳白色：阴天或有雾时，大气质点较大时，发生了一种无选择的，同程度的粗粒散射【阳光是复合光，看起来是白色的】 秋冬耕制过的地块易有霜出现：粗糙不平的下垫面比平滑下垫面的地面有效辐射要大，地面温度特别低，近地面的水蒸气遇冷凝华成小冰晶附着在地面或植物上形成了霜 气旋多阴雨天气的原因：在摩擦层，由于摩擦作用，气旋中的气流在逆时针旋转（北半球）的同时向中心辐合，产生上升运动，空气绝热冷却，水汽凝结，成云致雨，多阴雨天气 反气旋多晴好天气的原因：在摩擦层，由于摩擦作用，反气旋中的气流在顺时针旋转（北半球）的同时由中心向四周辐散，产生下沉运动，空气绝热增温，致使反气旋氛围内的广大区域无云或少云，多晴朗天气。 【补充】 碰并增长（吞并现象）：云滴在大气的上升、下降及乱流混合作用下发生相互碰撞并合并成较大云滴的过程。【名词解释同时在出现在降水的形成过程中】 洋流：指大规模的海水的定向流动 暖流：由低纬度流向高纬度称为暖流，影响所到地区冬季偏暖，气温年变幅小，降水略多寒流：由高纬度流向低纬度称为寒流，影响所到地区冬季寒冷，气温年变幅大，干燥，降水少 盆地气候年较差大，趋于严酷 高山气候年较差小，趋于温和 山地的迎风坡降水多于背风坡。【原因：气流被迫抬升，温度降低，水汽压饱和】 中国气候： （1）季风气候明显表现在： 1、风向的转换上：夏季偏南风，冬季偏北风 夏季风渐进3~6月北进，7~8月控制我国（盛行） 冬季风突进9~10月南下，11~12月控制我国（盛行） 2、气温上的反映：我国的气温年较差比世界上同纬度地区大 3、降水上的反映：1、雨季起止日期与夏季风的进退日期保持一致 2、年降水量的季节分配以夏季为多 3、我国降水的时间分布是由东南沿海向西北递减 （2）大陆性强： 1、大陆度（K）：【名词解释和公式不说了……】K>=50为大陆性气候，K越大大陆性越强；K<50为海洋性气候，K越小海洋性越强 2、我国大陆度的分布：我国除东南沿海狭窄地带外，绝大部分地区的K值均>=50，新疆、内蒙、东北是典型的大陆性气候地区 （3）温较差异大 1、气温年较差比世界同纬度地区大

华东理工大学2004–2005学年第二学期基因工程期末考试

华东理工大学2004–2005学年第二学期 《基因工程》课程期末考试试卷B2005.6 开课学院：生物工程学院，考试形式：开卷，所需时间：120分钟 考生姓名：学号：专业：班级 一、问答题（共15分） 某表达质粒上含有一个能在大肠杆菌中可溶性表达的基因A，若将外源基因B插入到基因A的3' 末端，使之产生可溶性融合蛋白A-B，试设计合理的重组方案。（15分） ___ 起始密码子 A 基因全序列ATGATCGGGATTCGCTGGGATAAAGTGCACCTCAATATAGCACACGCTTGCAACGCAAAGAGC CCCGATTTCTGTAACCGCCAGCACAAAGATGCGGAACACCCAAAAGTGGCGGCAAACGCCTTC AACCGGATCCCGGGATATCAGCTGAGATCTGCTTTCTAG ___ 终止密码子 ___ 起始密码子 B 基因部分序列TCCCGGGATCCATGCTC.........................CGCTAAGAGGATCCTCCCGGGT ___ 终止密码子 BamHI：G\GATCC BglII：A\GATCT EcoRV：GAT\ATC EcoRI： G\AATTC SmaI：CCC\GGG PvuII：CAG\CTG 二、问答题（共15分） 简述基因洗牌术（DNA Shuffling）的工作原理及用途。 三、问答题（共10分） 为什么说多型汉逊酵母表达系统有可能比巴斯德毕赤酵母表达系统更优越？

四、问答题（共20分） 人促红细胞生长素（EPO）系一糖蛋白，其生物活性严格依赖于糖基侧链的序列和大小，临床上主要用于改善癌症患者由于放疗化疗所引起的红细胞降低症侯群。试设计一种高产人EPO的重组表达系统，内容包括： （1）选择合适的受体系统，并说明理由；（6分） （2）选择合适的载体系统，并说明理由；（6分） （3）确定合适的高效表达方案，并简述其机制。（8分） 五、问答题（共20分） 随着植物转基因技术的日趋成熟，世界范围内被批准上市的转基因农作物也不断涌现，然而人们对转基因产品的安全性仍有争论，至少他们要求对餐桌上的食物是否由转基因植物加工而成拥有知情权。为此，建立一种能区分转基因植物和天然植物的检测方法十分重要。目前，世界各国批准上市的转基因植物种类繁多，但绝大多数使用花椰菜花斑病毒（CaMV）的35S启动子。请设计一种能快速灵敏地检测转基因植物的实验程序，并简述其机制。 六、问答题（共20分） 下图是链霉菌的某段DNA序列，试分析其可能的开放阅读框（ORF），并写出： （1）N端10个氨基酸序列；（7分） （2）C端10个氨基酸序列；（7分） （3）潜在的SD序列。（6分） 5’CGCTTGAATTCGTTCCATCTGGAGTCTGTACATGACCAGCCGATACGGCAGCCGGCAGGAACT CGGCCAGAAGTTCCTCGTCGACCCCGACATCATCAAGCTGATACGCCGAGCCGCCGAACGAACGG AAGGTCCCATCGTTGATCTGGGCGCCGGAGACGGCGCCCTGACGCTGCCCTTGAGTCGATTGGGC CGCCCTGTCACCGCGGTTGAGCTCGATCCCCGCCGGGTCAAACGGCTTTCGGCGCGTGCCCCGGA AAACGTCAAGGTCGTCGGCGAGGACATTCTGCGCTTTCGGCTTCCGACCGTTCCGCACACCGTCG TGGGGAACATCCCCTTCCATGTCACGACGGCCACGATGCGCCGGATCCTGGTGGCTCCCGCATGG GTGTCGGCCGTCCTCGTGGTGCAGTGGGAAGTGGCGCGCCGCCGGGCCGGCATCGGCGGCTGCTC GCTGGTCACGGCGGAGTCCTGGCCGTGGTTCGACTTCTCGGTGCTCAAGCGGGTGCCGAGGTTCG CCTTCCGGCCCGCGCCCTCCGTGGACGGCGGGATCCTCGTCATCGAGCGGCGGCCCGAGCCACTG GTGCGGGAGCGCAGGGAGTACCAGGACTTCGTCAGACAGGTCTTCACCGGGCGCGGTCACGGGCT GCGGGAGATCCTCCAACGCATCGGGCGGGTCCAGGACAGCGACCTGTCCGCGTGGTTCAGGGCAC ATGGAGTCTCGCCGCAGGCGCTGCCGAAGGACCTCACCGCCGAGCAGTGGGCGTCGCTCTGGGGC ATGGCGCGTGGCGGCCGGTCCGTGCCGCGGACGCGGATACTCCGGGACCTGCCGCACCGCACGTC CCTCGGGCCGCGGCGCAACAGCGGCTGACGCGGGCGGCAACCGGCGTGGCGGGCCGG 3’

基因工程期末复习总结

一、单选 1、第一个实现DNA重组的实验:1972年，美国斯坦福大学医学中心的P.Berg在世界上第一次成功地实现了DNA的体外重组。 2、第一次实现重组体转化成功的实验：1973年，科恩（Coher）和博耶（Boyer）建立的基因工程基本模式。 3、基因工程研究的主要内容：切接转增检。 4、基因工程研究的基本要素：基因、工具酶、载体、受体细胞。 5、DNA在生物体内的存在状态：染色体DNA、病毒DNA（噬菌体DNA）、质粒DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA，有的以线型存在，有的以环状存在。 6、天然DNA提取的步骤：生物材料的准备、裂解细胞、分离抽提DNA。 7、DNA的分离抽提法：酚-氯仿抽提法（常用、经典）。 8、DNA的保存：温度越低越好，同等条件下，温度越低越不容易降解。 9、为了消除在制备RNA过程中RNA酶的污染，应用0.1% DEPC处理过的水配制试剂。 10、人工合成DNA片段的方法有化学合成法和聚合酶链式反应扩增法。 11、紫外分光光度法检测核酸样品的纯度（常用），纯净的核酸溶液的0D260/OD280值应为 1.7~2.0，0D260/OD230值应大于 2.0，如果0D260/OD280小于1.7，可能有蛋白质污染，如果0D260/OD280大于2.0

或0D260/OD230小于2.0时，核酸溶液中可能存在其他干扰物质。12、工具酶就其用途而言可分为三大类：限制性内切酶、连接酶和修饰酶。 13、 14、通常提到的限制性核酸内切酶主要指Ⅱ类酶而言，限制性核酸内切酶的命名：属名+种名。例如：B acillus am ylolique faciens H、 H aemophilus in fluenzae dⅠ→Bam H、Hind 15、限制性内切核酸酶的本质：细菌细胞的限制—修饰系统。 17、常用的酶切方法：单酶切、双酶切和部分酶切。

基因工程试题及答案

基因工程试题及答案 【篇一：基因工程题库以及答案】 因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是： (1)____________， (2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和 __________。 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。 5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。 8．限制性内切核酸酶bsuri和haeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．dna聚合酶i的klenow大片段是用_____________切割dna聚合酶i得到的分子量为76kda的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。 10．为了防止dna的自身环化，可用_____________去双链 dna__________________。 11．egta是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的t7 dna聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记dna的基本原理在于利用 _________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链dna分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化dna的合成外，还具有____________的作用，可以将dna- rna杂种双链中的___________水解掉。

基因工程期末考试重点知识整理教学文案

基因工程期末考试重点知识整理

基因工程 第一章基因工程概述 1、基因工程的概念(基因工程基本技术路线PPT) 基因工程（Gene Engineering）,是指在基因水平上的遗传工程,它是用人为方法将大分子(DNA)提取出来,在离体条件下用适当的工具酶进行切割后,把它与作为载体的DNA分子连接起来,然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中,以让外源遗传物质在其中“安家落户”,进行正常的复制和表达,从而获得新物种的一种崭新的育种技术. 2、基因工程的历史 基因工程准备阶段：1972，第一个重组DNA分子的构建，构建人：Paul Berg 及其同事PPT 基因工程诞生：1973，Cohen & Boyer首次完成重组质粒DNA对大肠杆菌的转化 基因工程发展阶段的几个重要事件： 一系列新的基因工程操作技术的出现； 各种表达克隆载体的成功构建； 一系列转基因菌株、转基因植物、转基因动物等的出现 3、基因工程的内容（P9） 4、基因克隆的通用策略（P12）(基因组文库(鸟枪法)+分子杂交筛选)

第二章分子克隆工具酶 5、限制性核酸内切酶的概念、特点、命名、分类(问答) 概念：一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶，主要存在于细菌体内 特点（参加PPT） 命名：依次取宿主属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后加上序号。如：从Haemophilus influenze Rd中提取到的第三种限制型核酸内切酶被命名为Hind Ⅲ，Hin指来源于流感嗜血杆菌，d表示来菌株Rd，Ⅲ表示序号。 分类：依据酶的亚单位组成、识别序列的种类以及是否需要辅助因子可分为：Ⅰ型酶、Ⅱ型（Ⅱs型）酶和Ⅲ型酶。 真核细胞中有4中DNA聚合酶：α，β，γ，线粒体DNA聚合酶 原核生物中3中DNA聚合酶：Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ

基因工程期末复习总结.docx

一、单选 1、第一个实现DNA重组的实验：1972年，美国斯坦福大学医学中心的P.Berg在世界上第一次成功地实现了DNA的体外重组。 2、第一次实现重组体转化成功的实验：1973年，科恩（Coher）和博耶（Boyer）建立的基因工程基本模式。 3、基因工程研究的主要内容：切接转增检。 4、基因工程研究的基本要素：基因、工具酶、载体、受体细胞。 5、DNA在生物体内的存在状态：染色体DNA、病毒DNA （噬菌体DNA）、质粒DNA、线粒体DNA利叶绿体DNA,有的以线型存在，有的以环状存在。 6、天然DNA提取的步骤：生物材料的准备、裂解细胞、分离抽提 DNAo 7、DNA的分离抽提法：酚■氯仿抽提法（常用、经典）。 8、DNA的保存：温度越低越好，同等条件下，温度越低越不容易降解。 9、为了消除在制备RNA过程中RNA酶的污染，应用0.1% DEPC处理过的水配制试剂。 10、人工合成DNA片段的方法有化学合成法和聚合酶链式反应扩增法。 口、紫外分光光度法检测核酸样品的纯度（常用），纯净的核酸溶液的 OD260/OD280值应为1.7-2.0, OD260/OD230值应大于2.0,如果OD260/OD280小于1.7,可能有蛋白质污染，如果OD260/OD280大于2.0

或OD260/OD23O小于2.0时，核酸溶液中可能存在其他干扰物质。 12、工具酶就其用途而言可分为三大类：限制性内切酶、连接酶和修饰酶。 基因工程屮最常用的工具酶 14、通常提到的限制性核酸内切酶主要指II类酶而言，限制性核酸内切酶的命名： 属名+种名。例如：Bacillus amylolique faciens H、Haemophilus influenzae d Bam H> Hind I o“属种株序” 15、限制性内切核酸酶的本质：细菌细胞的限制一修饰系统。 16、限制性内切核酸酶的作用机制识别双链DNA中特定的核昔酸 17、常用的酶切方法：单酶切、双酶切和部分酶切。

基因工程作业题及答案

第二章 1. 名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶 答： 核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。 核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。 同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。 同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。 核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。 末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA 3’-OH端随机 添加dNTPs的酶 2. 限制性内切核酸酶的命名原则是什么？ 答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号； 首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写； 第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写； 第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写； (2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。 第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。 顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。 3．部分酶切可采取的措施有哪些？ 答：1）缩短保温时间 2）降低反应温度 3）减少酶的用量 4. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp 的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么? 答：回文序列是：5'-CATA TG-3， 5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响? 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松 动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因 条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星 活性。 概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性 内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如 Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 第三章 1．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体? 答：①删除λ噬菌体的非必需区，留出插入空间；并在余下的非必须区内制造限制酶切点 ②引进某些突变表型，作为选择标记 ③突变某些基因，使它成为安全载体 ④删除λDNA必须区段上常用的限制酶切点

基因工程期末考试重点知识整理

基因工程 第一章基因工程概述 1、基因工程的概念(基因工程基本技术路线PPT) 基因工程（Gene Engineering）,是指在基因水平上的遗传工程,它是用人为方法将大分子(DNA)提取出来,在离体条件下用适当的工具酶进行切割后,把它与作为载体的DNA分子连接起来,然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中,以让外源遗传物质在其中“安家落户”,进行正常的复制和表达,从而获得新物种的一种崭新的育种技术. 2、基因工程的历史 基因工程准备阶段：1972，第一个重组DNA分子的构建，构建人：Paul Berg及其同事PPT 基因工程诞生：1973，Cohen & Boyer首次完成重组质粒DNA对大肠杆菌的转化 基因工程发展阶段的几个重要事件： 一系列新的基因工程操作技术的出现； 各种表达克隆载体的成功构建； 一系列转基因菌株、转基因植物、转基因动物等的出现 3、基因工程的内容（P9） 4、基因克隆的通用策略（P12）(基因组文库(鸟枪法)+分子杂交筛选) 第二章分子克隆工具酶 5、限制性核酸内切酶的概念、特点、命名、分类(问答) 概念：一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶，主要存在于细菌体内 特点（参加PPT） 命名：依次取宿主属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后加上序号。

如：从Haemophilus influenze Rd中提取到的第三种限制型核酸内切酶被命名为Hind Ⅲ，Hin指来源于流感嗜血杆菌，d表示来菌株Rd，Ⅲ表示序号。 分类：依据酶的亚单位组成、识别序列的种类以及是否需要辅助因子可分为：Ⅰ型酶、Ⅱ型（Ⅱs型）酶和Ⅲ型酶。 真核细胞中有4中DNA聚合酶：α，β，γ，线粒体DNA聚合酶 原核生物中3中DNA聚合酶：Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ 6、几个基本概念 粘性末端：两条多聚核苷酸链上磷酸二酯键断开的位置是交错的，对称地分布在识别序列中心位置两侧，这样形成的DNA片段末端称为~。 平末端：两条多聚核苷酸链上磷酸二酯键断开的位置处在识别序列的对称结构中心，这样切割的结果产生的DNA片段末端是平齐的，称之为~。 同裂酶：一些来源不同的限制性核酸内切酶具有相同的识别序列。如：BamHI和BstI均可识别GGATCC。 同尾酶：有些限制性内切酶虽然识别序列不同，但是切割DNA分子产生相同的DNA末端。如：TaqI：TCGA；ClaI：A TCGA T；AccI：GTCGAC 星星活性：某些限制性核酸内切酶在特定条件下，可以在不是原来的识别序列处切割DNA，这种现象称为Star活性。 DNA物理图谱：（多为质粒图谱）

基因工程知识点总结归纳(更新版)

基因工程 绪论 1、克隆（clone）：作名词：含有目的基因的重组DNA分子或含有重组分子的无性繁殖。作动词：基因的分离和重组的过程。 2、基因工程（gene engineering）：体外将目的基因插入病毒、质粒、或其他载体分子中，构成遗传物质的新组合，并使之掺入到原先没有这些基因的宿主细胞内，且能稳定的遗传。供体、受体和载体是基因工程的三大要素。 3、基因工程诞生的基础 三大理论基础：40年代发现了生物的遗传物质是DNA；50年代弄清楚DNA 的双螺旋结构和半保留复制机理；60年代确定遗传信息的遗传方式。以密码方式每三个核苷酸组成一个密码子代表一个氨基酸。 三大技术基础：限制性内切酶的发现；DNA连接酶的发现；载体的发现 3、基因工程的技术路线：切：DNA片段的获得；接：DNA片段与载体的连接；转：外源DNA片段进出受体细胞；选：选择基因；表达：目的基因的表达；基因工程的工具酶 1、限制性内切酶（restriction enzymes）：主要是从原核生物中分离纯化出来的，是一类能识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核酸内切酶。 2、限制酶的命名：属名（斜体）+种名+株系+序数 3、II型限制性内切酶识别特定序列并在特定位点切割 4、同裂酶：来源不同，其识别位点与切割位点均相同的限制酶。 5、同尾酶：来源不同，识别的靶序列不同，但产生相同的黏性末端的酶形成的新位点不能被原来的酶识别。 6、限制性内切酶的活性：在适当反应条件下，1小时内完全酶解1ug特定的DNA 底物，所需要的限制性内切酶的量为1个酶活力单位。 7、星号活性：改变反应条件，导致限制酶的专一性和酶活力的改变。 8、DNA连接酶的特点：具有双链特异性，不能连接两条单链DNA分子或闭合单链DNA，连接反应是吸能反应，最适反应温度是4至15度，最常用的是T4连接酶。 9、S1核酸酶：特异性降解单链DNA或RNA。

基因工程试题及答案全集

作业一： 一、名词解释： 1、基因：是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。 2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子 3、操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起，转录生成一个mRNA，然后分别翻译成几种不同的蛋白质。这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶，或共同完成某种功能。这些结构基因与其上游的启动子，操纵基因共同构成转录单位，称操纵子。 4、启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，包括至少一个转录起始点。在真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。有时，将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。 5、增强子:是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在SV40病毒中发现的长约200bp 的一段DNA，可使旁侧的基因转录提高100倍，其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现了增强子。增强子通常占100～200bp长度，也和启动子一样由若干组件构成，基本核心组件常为8～12bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。 6、基因表达：是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子。 二、简答题 1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。 答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号. 基本原则: 3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号; 首字母: 取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母: 取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母: (1)取种名的第二个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.第四字母: 若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体. 顺序号: 若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,…等,用正体. 2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性受哪些因素影向 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星号活性。 概括起来，诱发星活性的因素有如下几种： (1)高甘油含量(>5％, v／v)； (2)限制性内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)； ；L)／mmol(<25 低离子强度(3)． (4)高pH以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等； (6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 3、影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些 答：（1）DNA的纯度（2）DNA甲基化的程度（3）酶切消化反应的温度（4）DNA的分子结构（5）核酸内切限制酶的缓冲液 4、什么是Klenow酶有哪些活性在基因工程中有什么作用 答：Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，它具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸酶的活性，小片段具有5'-3'外切核酸酶活性。由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5'引物的5'-3'外切核酸酶的活性，所以在

2009-2010学年生命科学学院《基因工程》期末试卷(B)答

2009-2010 学年生命科学学院《基因工程》期末试卷（B）答案要点 一、名词解释题（每题3分，共30分） 1、多克隆位点：一段短的 DNA 序列，含有多种限制性核酸内切酶的酶切位点，是外源基因插入的位点。 2、穿梭载体：能够在两种以上的受体细胞中繁殖和扩增的载体。 3. DNA连接酶： DNA连接酶负责双链DNA中相邻3`-OH 与5`-磷酸基团之间的磷酸二酯键的形成。 4. 核酸分子杂交：主要是根据两条单链DNA（或DNA与RNA）中互补碱基序列能专一配对的原理进行的。在一定条件下，单链DNA 或RNA 能与另一条单链DNA 上互补的碱基形成氢键，从而使两条单链杂交形成双链DNA 分子。通常利用已标记的某一DNA 或RNA 片段或合成一段寡核苷酸作为探针，探测重组DNA 分子中是否有DNA片段与探针发生同源性杂交，然后利用放射自显影方法进行检测。 5. 融合蛋白：融合表达一般是将克隆化的基因引入某表达载体编码的高表达蛋白一起融合表达。 6. 基因敲除：利用同源重组的原理，通过载体将外源的失活的基因替换掉内源的正常的基因，从而使基因沉默而不表现突变性状的方法。 7. 反义核酸技术：利用反义DNA或反义RNA能够与内源mRNA互补杂交，从而抑制内源基因表达的技术。 8. 荧光定量PCR 通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR 产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析。 9. 基因治疗就是指向有功能缺陷的细胞补充相应功能基因，以纠正或补偿其基因缺陷，从而达到治疗的目的。 10. 显微注射技术将在体外构建的外源目的基因，在显微操作仪下用极细的微吸管注射到处于原核时期的受精卵原核中，外源基因在受精卵繁殖过程中通过DNA 的复制而整合到动物基因组中，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体的子宫内继续发育，进而得到转基因动物。 二、单选题（每题2分，共20分）。 1. ① 2. ② 3. ③ 4. ③ 5. ② 6. ① 7. ④ 8. ④ 9. ② 10. ④ 三、填空题（每空1 分，共10分） 1. 外源基因/载体，载体/外源基因 2. 近, 远 3. 目的基因，表达 4. 质粒/噬菌体，噬菌体/质粒 5. 10kb，20kb 四、简答题（每题6分,共24分） 1. 构建cDNA文库时需要用到哪些工具酶？逆转录酶，DNA 聚合酶I 或Klenow 片断，单链核酸酶S1，末端转移酶，限制性核酸内切酶，DNA连接酶

基因工程试题与答案

基因工程试题与答案 1 、转基因动物的安全性问题 正面观点： （1）转基因工程是不可阻挡的. 基因工程将影响当代重大的环境问题:人口过剩/污染/ 生物多样性急剧减退等等. 保护土壤/ 水/ 能源成为发展可持续农业的目标。 （2）转基因食品的功效: 改良植物的食用品质；增加果蔬贮藏、保鲜性能；生产特殊食品——食品疫苗。 （3）迄今为止并没有发现转基因食品危害人体健康和环境的确切证据。如果转基因生物技术得不到社会支持，这一研究将被扼杀。 反面观点： 转基因的潜在危害：转基因动植物安全性评价主要集中在环境安全性，食品安全性以及对人动物健康的影响三方面。 环境安全性分析包括： （1）生存竞争性：转基因植物在生存竞争方面具有的优势可能导致生物多样性的减少，影响了生物多样性； （2）生殖隔离距离: 基因不可控制的水平转移的可能性；与近缘野生种的可交配性：外源基因是否会漂流扩散至亲缘野生种中，从而破坏自然生态平衡； （3）对非靶生物的影响：转基因植物花粉通过风，雨，鸟，昆虫，真菌，细菌以至 个生物链传播使外源基因逃逸，从而造成基因污染

（4）病毒发生异缘重组或异缘包装的可能性：自然界中存在着植物病毒之间的异缘重 组。 （5）对农业和生态环境的影响，生态平衡. 如产生超级杂草的可能性；种植抗虫转基 因作物后可能使害虫产生免疫并遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”； 食品安全性： （1）转基因毒性. 如英国发现转基因马铃薯会减弱老鼠免疫系统功能，美国发现转基因 玉米会危害蝴蝶幼虫及其相关生态环境； （2）人的毒理反应或过敏反应. 大肠杆菌细胞膜间隙中含有大量的内毒素，痕量的内 毒素即可导致人体热原反应。 （3）实质等同性的原则，即某一种生物技术产品或其成分能够与市场上现有的对应产 品进行比较。如果一种转基因产品能够与现存的一种产品进行比较，并且发现具有实质同等性，便能用现产品安全性同种方法对待它。转基因植物所引入的蛋白对人体可能是异性蛋白质，在部分人中可能发生食物过敏，特别是幼儿和某些过敏体质的人。 对人动物健康的影响：转入传统食品或作物中的基因可能来自各种物种，有些是人们不 能或者极少食用的，是否会对人体造成危害；转基因植物食品中的新基因会不会传递给人畜的肠道微生物，插入表达，然后危害健康。 动物：1. 外源基因在动物基因组中的随机整合，可能会引起宿主细胞基因的插入突变、 缺失突变及宿主基因的扩增重排和移位，也可能激活正常状态下处于关闭状态的基因，从而导致动物表型的改变甚至造成动物不育或死亡； 2. 插入的外源基因是否会影响宿主动物自身的基因表达及表达水平； 3. 转基因动物是否可能会把外源基因传递给生活在其周围的其它种群及环境，造成基因 污染； 4. 在病毒等致病基因的转基因研究中，不可避免地会产生一些有害的转基因动物，是否 可能因为使用转基因动物制品而将一些动物性疾病传递给人类。 5. 未知的. 总的来说：就目前而言，还没有发现转基因食品对人类有害，但同时也缺乏证据证明它的无