Folin-Wu法定量测定血糖的含量(精)
血糖含量的定量测定(Folin-Wu法
一、目的
1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。
2、学会制备无蛋白血滤液。
3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理
葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。
无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物—钼蓝。
血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。
3、实验仪器
1、25mL血糖管×3支；
2、血糖管橡胶塞×3个；
3、1mL胖肚吸管×1支；
4、100mL锥形瓶×2个；
5、漏斗架×1个；
6、普通漏斗×2个；
7、水浴锅×1个；
8、电炉×1个；
9、移液管 1mL×2支; 2mL×3支;5 mL×2支;
10 mL×1支; 10、滤纸×1盒；
11、吸耳球×2个；
12、7200型分光光度计×1台;
13、表面皿×1个
4、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）
(11%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。
(2葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
2、碱性硫酸铜溶液
A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水，稀释定容至1000ml.
B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
临用时，A液：B液=9：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。
3、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。
4、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。
5、酸性钼酸盐溶液：
称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。
置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
5、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备：
氏吸管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。
再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再加0.33mol/L H2SO41-2滴）。
用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml全血。
2、血糖的定量测定：
1、取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
2、然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。
3、一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度计在420nm波长处比色，以空白管调节零点。
六、实验结果
样品A1（吸光度）标准液A0
（吸光度）
水
（吸光度）
10.1690.1300.000 20.1900.1350.000 30.1940.1280.000平均值0.1840.1310.000
m=A1/A2*C*10*100
m代表100ml全血中含血糖毫克数
C0代表标准液葡萄糖含量（0.1mg/ml）
A1代表样品液光吸收值
A0代表标准液光吸收值
所以可得出m=0.184/0.131*0.1*10*100=140.4580153···约等于140.458mg。
7、实验分析
1、实验过程中哪些操作可能影响实验结果的准确性？
在沉淀不完全时过滤，吸管中放出血液太快使大量血液黏在吸管内壁，或有亚铜离子氧化成铜离子，比色测量时也可能会出现误差。
2、实验中，血糖管有什么作用？
可减少亚铜离子与空气的接触，防止氧化成铜离子。
3、实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱性硫酸铜液反应后的血糖管？
流水冷却比较稳定，可以迅速降温。如不冷却会继续反应造成误差。
实验十-血糖的测定
实验十-血糖的测定
实验十血糖的测定 血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol／L～6．1mmol／L之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。 因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。 一、葡萄糖氧化酶法
【目的】 1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原 理，能进行血糖测定的操作。 2. 掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下： 2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚红色醌类化合物2H 2O 2H 2O 2O 2葡萄糖+葡萄糖酸+ GOD + 【器材】
试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1. 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0） 称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于800ml蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠（或1mol/L盐酸）调节pH至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L。 2. 酶试剂 称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/L NaOH 调pH至7.0，加磷酸缓冲液至100ml。置冰箱保存，4℃可稳定3个月。 3. 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中
血糖浓度
胰岛素、肾上腺素、葛根素对血糖浓度的影响 实验目的：1.验证胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响，探讨葛根素与血糖浓度的关系。 2.掌握血糖浓度测定的原理和方法。 实验原理：1.激素是调节血糖浓度恒定的重要作用，其中胰岛素起降低血糖的作用，肾上激素起升高血糖的作用。将实验动物——家兔进行空腹采血后。分别注射胰岛素和肾上激素，作用一段时间后再分别采血，同时观察注射激素前后的家兔血糖浓度变化，以验证激素的调节作用。本实验测定血糖的方法采用葡萄糖氧化酶法。 2.本实验用GOD-POD 试剂盒测定血糖，其原理为：葡萄糖氧化酶（GOD ）利用氧和水将血清中葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢。过氧化氢酶将H2O2分解为水和氢，产生的氧使4-氨基安替比林 和酚缩合为红色醌类化合物，红色的深浅与[G]葡萄糖成正比，可用比色法测定样品和标准G 溶液的A 值(光吸收值)，计算出样品的Gmmol\l 葡萄糖+O 2+H 2O 葡萄糖酸+H 2O 2 H2O2+苯酚+4-氨基安替比林 醌类化合物+H2O 实验试剂与材料：胰岛素(胰岛素1ｍｌ+生理盐水52ｍｌ)、肾上腺素(1ｍｌ肾上腺素+1.5ｍｌ生理盐水)、葛根素（葛根素0.2g 与氯化钠0.9g 用生理盐水配制成100ml 溶液） Ｎａ2ＣＯ3、酒石酸、ＣｕＳＯ4·6Ｈ2Ｏ、钼酸、钨酸钠、浓磷酸(85%)、浓硫酸、无水葡萄糖、苯甲酸、生理盐水、10ｍｌ抗凝管(氟化钠、草酸钾)、二甲苯、棉花、凡士林、剪刀、粗针头、5ｍｌ注射器、10ｍｌ试管、100ｍｌ锥形瓶、10ｍｌ移液管 实验仪器:37℃恒温水浴锅，723-型分光光度计，低速离心机、0～200μｌ微量移液器均为国产 实验动物与分组：优等家兔9只,雌雄不限,体重1 500～2 500ｇ。将体重1 500～2 000ｇ的3只家兔作为胰岛素组;将体重 2000～2 500ｇ的3只家兔作为肾上腺素组。将体重1500~2500g 的3只家兔作为葛根素组。实验前1周取回,置实验室环境饲养,自由摄食、饮水,动物在实验前12ｈ禁食。 实验方法：家兔实验前12ｈ禁食禁。分别称取每只家兔的体质量并记录。 1.首先,注射前取血:在家兔耳缘上拔去毛,涂擦少许二甲苯,待血管扩张后,在取血部位四周涂少许凡士林,用粗针头刺破静脉血管,放血加入抗凝管中(收集血液0.5～1.0ｍｌ),边接边摇。取血后用棉花压迫止血。 2.其次,注射激素:分别向家兔注射胰岛素或肾上腺素,胰岛素剂量为每公斤体质量0.75ｍｌ,肾上腺素剂量为每公斤体质量0.4ｍｌ,葛根素剂量为每公斤体质量1.85ml 记录时间。 3.第三,注射后取血:注射肾上腺素组0.5ｈ后取血,注射胰岛素组1.0ｈ后取血(如家兔发生低血糖休克可提前取血),注射葛根素组1.0h 后取血。取血方法同第一步。 4.第四,血样采集后,无蛋白血滤液的制备。取干燥锥形瓶一个,准确加入蒸馏水7.0ｍｌ,用0～200μｌ微量移液器准确吸取全血0.2ｍｌ,慢慢地将血液滴入水中,并用其水洗涤微量移液器吸头,使血液全部移入锥形瓶内,混匀。在加入1/3ｍｏｌ/ＬＨ3ＳＯ40.4ｍｌ,10%钨酸钠溶液0.4ｍｌ,充分混匀。放置5～10ｍｉｎ。待溶液由红色变为咖啡色后,过滤(或3 000ｒ/ｍｉｎ离心7ｍｉｎ)收集滤液备用。滤液必须透明清亮。 GOD POD
血液检查实验报告doc
血液检查实验报告 篇一：血型测定实验报告 血型测定实验报告 一、实验目的： 学习ABO型血的鉴定原理和方法。观察红细胞凝集现象，了解抗原抗体反应。 二、实验原理： 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A 和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A 型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A 或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表4-3-1-1）三消毒采血针；载玻片；消毒棉签；抗A、抗B血型定型试剂；75%乙醇；受检者血液四、实验步骤 （1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml 生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血
时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 （3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。 （4）竹签两头分别混合，搅匀。 （5） 10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。五、实验结果： 我们组本次实验中，载玻片1左边为抗B型定型试剂，呈淡红色，未发生凝聚；右边为抗A型定型试剂，血液在试剂中凝结，试剂较清亮。该受试者1血型为A。 载玻片2左右边的试剂内的血液皆不出现凝结现象，受试者2为O型血。 六、实验讨论： 1.实验中要分清牙签，不要用一牙签一端同时在抗A血清和抗B血清中搅拌，以免造成抗体试剂不纯。 2.实验中我们组发现15分钟后没有出现血凝现象，可用牙签轻轻搅拌一会儿，有些载玻片上就不现了血块，但有些经搅拌后仍不出现血凝现象，表示确实不含相应的抗原。篇二：血糖的测定实验报告
血糖监测登记表
血糖监测登记表
如何规范监测血糖？ 血糖监测频率及时间点均需根据患者实际情况进行个体化决定： ★毛细血管血糖监测频率与时间点 （1）生活方式干预以控制糖尿病的患者：据需要有目的地进行血糖监测来了解饮食运动对血糖影响并予以调整。 （2）服口服降糖药的糖尿病患者：每周 2-4 次空腹或餐后 2 h 血糖，或就诊前一周连续监测 3 天。每天监测早餐前后、午餐前后、晚餐前后、睡前这 7 点血糖。 （3）使用胰岛素强化治疗的糖尿病患者：需每周至少3天，每天监测5～7个时间点血糖，包括早餐前后、午餐前后、晚餐前后、睡前血糖，对于怀疑有黎明现象或苏木杰反应的患者应增加监测0AM和3AM的血糖，依据血糖检测结果调整胰岛素剂量。 ●基础胰岛素使用者：监测空腹血糖并据之调整睡前胰岛素剂量； ●预混胰岛素使用者：监测空腹+晚餐前血糖，据空腹血糖调整晚餐前胰岛素剂量、据晚餐前血糖调整早餐前胰岛素剂量； ●餐时胰岛素使用者：监测餐后或餐前血糖，据餐后血糖和下一餐前血糖调整上一餐前胰岛素剂量。 （4）特殊人群的糖尿病患者：遵循以上基本原则并据情况可实行较宽松血糖控制标准，包括：围手术期患者、低血糖高危人群、危重症患者、老年患者、1 型糖尿病、妊娠期糖尿病等。 ★因血糖控制非常差或病情危重而住院治疗应每天监测4-7次血糖或根据治疗需要监测血糖，直到血糖控制。注意因操作不当、血量不足、局部挤压、更换试纸批号校正码未更换、试纸保存不当等影响检查结果。 ★糖化血红蛋白HbA1c检测频率：与毛细血管血糖反映的时间窗不同，糖化血红蛋白反映过去2～3个月血糖控制的平均水平，它不受偶尔一次血糖升高或降低的影响，因此对糖化血红蛋白进行测定，可以比较全面地了解过去一段时间的血糖控制水平，是临床上评估长期血糖控制状况的金标准，也是临床决定是否需要调整治疗的重要依据。建议在治疗之初至少每3个月检测1次，达到治疗目标可每6个月检测1次。
测量血压实验报告
测量血压实验报告 篇一：血压测量的实验报告 血压测量的实训报告 姓名：性别：班级：学号： 实训内容：血压测量 实训地点：护理实训楼437农村医学实训室 实训日期：年月号 一、实验目的 1.通过学习，使我们掌握血压计使用的正确方法 2.加深自己的体验过程，要熟练血压的测量目的，要为自己在生活中或工作做好准备。 3.了解人体血压的测量方法及相关知识，达到理论与实际相结合的目的。 二、实验要求 1.保持实验室的安静。 2.要爱护实验室的器材，尽量要做到实验室器材不要损坏。 3.认真听和看老师示范的方法，注意老师讲的注意事项。 4.实验结束后注意学会分析总结和会使用血压计。 三、实验对象和器材 实训对象： 实训器材：听诊器、血压计 四、实训过程：
1.先让测血压的人保持情绪稳定。 2.把盒子打开，再把水银柱的最下边银色水银槽的开关打开。 3.被测者脱去一只衣袖，将前臂平放在桌子上，与心脏在同一水平位，掌心向上半握拳。测验着要和被测者在同一水平，将袖带缠住该上臂处，大约距肘横纹2-3cm，松紧以恰能放进一个手指为宜。 4. 将听诊器置于肘窝部、肱二头肌肌腱内侧的肱动脉搏动处, 轻压之。 5. 旋紧与气囊相连的气球充气旋钮，并开始充气。气囊充气过程中应同时听诊肱动脉搏动音，观察汞柱上升高度。待肱动脉搏动音消失后，汞柱再升高20～30mm；然后以恒定的速率缓慢放气。在心率缓慢者，放气速率应更慢些。使水银柱下降，视线与水银柱刻度平行．总结：实训对象的血压是否正常？ 篇二：人体生理学 ABO 血型与动脉血压实验报告 ABO血型鉴定与动脉血压测量综合实验 摘要本实验采用波片法鉴定人体ABO血型和汞式压力表测定人体动脉血压。被测者血液遇抗A血清和抗B血清均不凝集，汞式压力表在压紧被测者上臂后松开第一次听到声音时读数110mmHg，声音消失处读数70mmHg。实验表明，该被测者血型为O型，动脉血压为110/70mmHg。 关键词 ABO血型血压玻片法汞式压力表 前言 人类红细胞上存在两种ABO血型系统的抗原，又称为凝集原，分别
葡萄糖氧化酶法测量血糖浓度的详细介绍
葡萄糖氧化酶法测量血糖浓度的详细介绍 ? 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L 盐酸)调pH至7.0，用蒸馏水定容至1L。 2．酶试剂称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/L NaOH调pH至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。 3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。4．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至l L。
6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2．手工操作法取试管3支，按下表操作。 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 加入物(ml)空白管标准管测定管 血清－－0.02 葡萄糖标准应用液－0.02－ 蒸馏水0.02－－ 酶酚混合试剂 3.03.03.0 混匀，置37℃水浴中，保温15min，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。 【临床意义】 1．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。2．病理性高血糖 (1)糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
实验 血糖测定(葡萄糖氧化酶法)
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法） 【目的】 体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。 【临床意义】 葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。通常在查找这些病症的起因时，还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。葡萄糖含量增高见于：糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。葡萄糖含量减少见于：胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。 【原理】 样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，将还原性4-氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的醌类化合物。 【器材】 紫外分光光度计，恒温水浴箱，移液器（枪），枪头，试管 【药品】 葡萄糖测定试剂盒，试剂盒主要成分与浓度： 【样本】 新鲜无溶血血清。
【步骤】 将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液。 分别混合均匀，37℃水浴10～15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm、比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。 【计算】 【参考值】 血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L (70—110 mg/dl)。 此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。 【参考文献】 1．全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997，P616. 2．Trinder P. Ann Clin Biochem，1969，6: 24-27. 血糖测定实验所需器材： 1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm）， 2.恒温水浴箱（能调温度的，37℃）， 3.移液器（枪）（规格1.0ml 6个，20μl 6个），枪头各100个 4.试管50支，6个试管架 5.烧杯100ml一个，50ml（或25ml）6个 6.记号笔6支 7.蒸馏水1瓶
血糖测定的临床意义及应用完整版.doc
血糖测定的临床意义及应用 血糖是指血液中各种单糖的总称，包括葡萄糖、半乳糖、果糖和甘露糖等，但主要是葡萄糖。正常人清晨空腹时静脉血糖浓度为3．89-6．11 mmol／70-110美国／dL)。维持正常的血糖浓度很重要，全身各组织细胞都需要从血液中获取葡萄糖，特别是脑组织、红细胞等几乎没有糖原贮存，必须随时由血液供给葡萄糖，以取得自身生存、代谢和功能所需要的能量。由于血糖浓度具有一定的生理性波动和正常人群对血糖的耐受力有差异，临床上将空腹血糖浓度低于2．8 mmol／L(50 mg／dL)称为低血糖。低血糖不是一种独立的疾病，而是一种生化异常的表现，是由多种原因引起的临床综合征。血糖浓度过低，影响各组织细胞尤其是脑细胞的能量供给，就会出现一系列的低血糖症状，如饥饿、疲倦、乏力、精神不集中、头晕、心悸、脸色苍白、出冷汗、手颤等．严重时出现幻觉、躁动、惊厥、神志不清、甚至昏迷（低血糖休克)、死亡。其反应程度高低与不同原因、血糖下降程度和速度、个体反应性和耐受性有关。低血糖反复发作，症状严重，持续时间超过6 h，则会造成脑细胞不可逆转的损伤，即使以后血糖恢复正常。也常会遗留痴呆等症状…。对低血糖患者的处理，可给予口服葡萄糖或其他糖类如糖水或糖果等，必要时静脉输注葡萄糖液和升血糖药物，以快速提升血糖浓度．供给基本能量需要。当症状改善后应询问病史，查
明原因和诱因，进行对因治疗。引起低血糖的原因颇多，其发生机制复杂。兹概述如下。 1 饥饿性低血糖长时间饥饿或不能进食时，外源性血糖来源断绝，内源性的肝糖原贮备有限，约为70-100g，10多小时即被耗尽，此时主要靠糖异生来维持血糖浓度。随着饥饿时间的延长，当出现“供不应不求”时即发生低血糖。不吃早餐的人易发生低血糖，影响学习、工作和劳动的效率。 2 运动性低血糖持续的剧烈运动或运动以后，由于能量消耗大，葡萄糖氧化分解迅速而量大，此时若未及时补充糖类食物，则可引起低血糖。 3 酒精性低血糖空腹大量饮酒后，由于酒精在肝内氧化，使NAD+过多地还原为NADH，造成乳酸转变为丙酮酸的反应受到抑制…，糖异生作用减弱。当有限的肝糖原被动用以后，即可发生低血糖。 4 反跳性低血糖是一种突然停输高渗葡萄糖而引起的低血糖。其机制可能是输注高渗葡萄糖液，刺激胰岛素的大量分泌，其浓度可高出正常的4-6倍。若突然停输高渗葡萄糖液，由于胰岛素的持续作用而使血糖浓度迅速下降，出现低血糖。 5 特发性低血糖多见于神经质的中年妇女。主要因自主神经功能失调，迷走神经兴奋过度。胰岛素分泌过多所致，为非器质性疾病，餐后2-3 h发作，系血糖利用过度性餐后低
血糖(BS)测定及临床意义
血糖(BS)测定及临床意义 血糖是指血中的葡萄糖，血糖是临床上的习惯简称。血糖测定对糖尿病的诊断，疗效观察等均具有重要的意义。其测定方法主要有邻甲苯胺法、葡萄糖氧化酶法、已糖激酶法、葡萄糖脱氢酶法等。 —、正常参考值：3.88?5.99mmol/L。 二、临床意义 血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定，当这些调节失去原有的相对平衡时，则出现高血糖或低血糖。 1．生理性血糖升高 饭后1?2 小时，摄入高糖食物、紧张训练、剧烈运动和情绪紧张，肾上腺分泌增 加。 2．血糖升高 (1)糖尿病，一般分两型，一是I 型，即胰岛素依赖型，可能与遗传因素或自身免疫有 关，多发生于青年时期。另一型为n型，即非胰岛素依赖型。胰岛素细胞功能低下， 胰岛素分泌不足或可能与遗传因素亦有一定关系。此型多见于40 岁以上成人，多数见于肥胖患者，胰岛素分泌相对减少，或组织对胰岛素的感应性低下，或胰岛素受体减少。此型临床症状较前者轻。 (2)慢性胰腺炎，由于炎症胰岛组织被破坏，使胰岛素分泌功能缺陷，而致血糖升高。 (3)内分泌腺疾病，例如肢端肥大症或巨人症，由于生长激素分泌亢进，拮抗胰岛素的作用使血 糖升高。肾上腺皮质机能亢进，如柯兴综合征，因皮质醇分泌增多，促进糖原异生，并可对抗胰岛素作用而使血糖升高。又如嗜铬细胞瘤，肾上腺素分泌增多，促使肝糖原转变成葡萄
糖，并抑制胰岛素分泌，使血糖增高。长期应用肾上腺糖皮质激素治疗，亦可使血糖升高，甚至发生
“药物性”糖尿病。 3．血糖降低 (1)内分泌腺病变血糖降低见于胰岛素瘤(胰岛3细胞瘤)，因胰岛素分泌过量，使血糖分解加 强。亦见于拮抗胰岛素类激素分泌不足，如阿迪生病(慢性肾上腺皮质功能衰竭) 、席汉综 (2)肝脏病变，急性肝炎、肝硬化等严重肝功能损害，使肝糖原分解障碍亦可有发生低糖血症的 可能。低血糖亦见于糖原累积症。 (3)某些肿瘤，如巨大纤维瘤或纤维肉瘤，可能分泌量胰岛素样物质，而致血糖降低。 (4)胰岛素分泌功能紊乱，如单纯性肥胖症、植物神经功能紊乱，常可发生胰岛素分泌过多，而 致血糖降低。 (5)血糖降低亦见于胰岛素自身免疫性低血糖、胰岛素受体异常症(B 型)等，这可能由 于胰岛素抗体、受体结合的胰岛素急骤解离，致使血糖分解加强。 (6)暂时性低血糖亦可见于胃次全切除后所发生的颠倒综合征，这是由于进食后糖迅速 吸收，促进胰岛素急速分泌，引起暂时性低血糖。 (7)营养不良、吸收不良综合征或重症肾性糖尿病等都可出现血糖降低趋势。 (8)药物，如应用胰岛素、口服降糖药等由于用量不当可引起低血糖。三、采集标本的注意事项 1．标本置室温中，全血中葡萄糖将会分解代谢，大约每小时降低5%。因此采血后应立即分离血浆或血清，置2?8摄氏度冰箱保存，可至少稳定3天。分离血清或血浆的时间，最好不晚于血液标本采集后的1 小时.
实验十 血糖的测定
实验十 血糖的测定 血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。 因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。 一、葡萄糖氧化酶法 【目的】 1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。 2. 掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下： 2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚 红色醌类化合物 2H 2O 2H 2O 2 O 2葡萄糖+葡萄糖酸+ GOD + 【器材】
试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1. 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0） 称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于800ml蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L盐酸）调节pH至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L。 2. 酶试剂 称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/L NaOH调pH至7.0，加磷酸缓冲液至100ml。置冰箱保存，4℃可稳定3个月。 3. 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中（酚在空气中易氧化成红色，可先配成500g/L的溶液，贮存于棕色瓶中，用时稀释），用棕色瓶贮存。 4. 酶酚混合试剂 取上述酶试剂与酚溶液等量混合，4℃可以存放一个月。 5. 12mmol/L苯甲酸溶液 溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水至1L。 6．葡萄糖标准贮存液（100mmol/L） 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，并移入100ml容量瓶内，再以12mmol/L苯甲酸溶液加至100ml。 7.葡萄糖标准应用液（5mmol/L） 吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml 于100ml 容量瓶中，加12mmol/L 苯甲酸溶液至刻度。 【操作】 取3 支试管,编号，按下表操作。
葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定--实验报告
设计性实验报告 题目：葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定课程名称： 姓名： 学号： 系别： 专业： 班级： 指导教师（职称）： 实验学期：至学年第学期
葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定 （，，班，学号） 摘要 运用氧化还原滴定的原理设计葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定方案并具体实施。从而进一步掌握 223Na S O 及2 I 标准溶液的配制和标定方法，巩固氧化还原滴定的操作技能。学会间接碘量法测定葡萄糖含量 的方法和原理，进一步掌握返滴定法技能。其中，葡萄糖分子中含有醛基，能被IO-定量地氧化为羧基。故可将一定量过量的2I 在碱性条件下加入葡萄糖溶液中，使醛基完全转化为羧基。再将其酸化，用223Na S O 标准溶液滴定析出的2I 。所用指示剂为淀粉。根据所加2I 标准溶液的量及滴定所耗223Na S O 标准溶液的量结合反应式中各物质之间的计量关系，便可计算葡萄糖的含量。该方法简便易行且准确度高，基本符合实验要求。 关键词 葡萄糖注射液样品（5%）2I (0.05mol/L)标液 223Na S O (0.1mol/L) 标液 间接碘量法 返滴定法 1 引言 目前已知测定葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法有两种： 第一种方案：间接碘量法：移取一份稀释10倍后的葡萄糖溶液25.00mL ，再加入25.00mL 2I 标准溶液。一边摇动，一边缓慢加入1mol/LNaOH 溶液，直至溶液呈浅黄色。将碘量瓶加塞 放置10～15min 后，用少量水冲洗瓶盖及碘量瓶内壁，然后加入2mL 、6mol/LHCl 使溶液成酸性，立即用223Na S O 标准溶液滴定至溶液呈淡黄色时，加入3mL 、5g/L 淀粉指示剂，继续滴定蓝色恰好消失且半分钟内不褪色即为终点[1] 。根据滴定消耗223Na S O 溶液的体积计算试样中葡萄糖的含量。这种方法简便易行，且准确度较高。 第二种方案:旋光法：由于葡萄糖分子结构中的五个碳都是手性碳原子，具有旋光性，可采用旋光法测定含量。操作方法：取出旋光计的测定管，先用蒸馏水为空白对仪器进行校正。用供试液（5％葡萄糖注射液）冲洗数次，缓缓注入供试液适量（注意勿使发生气泡）。置于旋光计内，读取旋光度，连续测定3次，取平均值。在一定温度下，根据[2]计算试样中葡萄
Folin-Wu法定量测定血糖的含量(精)
血糖含量的定量测定(Folin-Wu法 一、目的 1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。 2、学会制备无蛋白血滤液。 3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。 二、实验原理 葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。 无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物—钼蓝。 血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。 3、实验仪器 1、25mL血糖管×3支； 2、血糖管橡胶塞×3个； 3、1mL胖肚吸管×1支； 4、100mL锥形瓶×2个； 5、漏斗架×1个； 6、普通漏斗×2个； 7、水浴锅×1个； 8、电炉×1个； 9、移液管 1mL×2支; 2mL×3支;5 mL×2支; 10 mL×1支; 10、滤纸×1盒； 11、吸耳球×2个；
12、7200型分光光度计×1台; 13、表面皿×1个 4、实验试剂 1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml） (11%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。 (2葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。 2、碱性硫酸铜溶液 A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水，稀释定容至1000ml. B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。 临用时，A液：B液=9：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。 3、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。 4、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。 5、酸性钼酸盐溶液： 称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。 置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。 5、实验步骤 1、无蛋白血滤液的制备： 氏吸管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。 再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再加0.33mol/L H2SO41-2滴）。
血糖浓度测定
血糖浓度测定（3学时） 1目的 掌握血糖浓度测定的原理和方法。 2原理 动物血液中的糖主要是葡萄糖，其含量较恒定。健康家兔的血糖水平为80～120mg/dL。用硫酸锌和氢氧化钠除去被检血中的蛋白质制成无蛋白血滤液。当将血滤液与标准铁氰化钾溶液共热时，—部分铁氰化钾还原成亚铁氰化钾，并与锌离子生成不溶性化合物。 向混合液中加入碘化物后，用硫代硫酸钠溶液滴定所释放的碘。即可知剩余的铁氰化钾量。血糖越多，剩余的铁氰化钾越少，所消耗的硫代硫酸钠也越少 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．。硫代硫酸钠溶液用量与血糖浓度的关系可以由经验确定下来的数字表查出。此过程可用反应式表示如下：（1）还原反应： K3Fe(CN)6十糖→K4Fe(CN)6+糖的氧化产物。 2K4Fe(CN)6+3ZnSO4→K2Zn3Fe(CN)6]2十3K2SO4 由于产生不溶性化合物，糖的还原反应进行得比较完全。 （2）用碘量法测定剩余的标准K3Fe(CN)6溶液。 2K3Fe(CN)6十2KI十8CH3COOH→2H4Fe(CN)6十I2十8CH3COOK 2Na2S2O3十I2→2NaI十Na2S4O6 3器材 （1）微量滴定管 （2）电炉 （3）50×90毫米大试管 （4）小试管 （5）100ul移液枪 （6）铁架台、漏斗、滤纸、玻璃棒、烧杯 4试剂 （1）％硫酸锌溶液(新鲜配制) （2）摩尔／升氢氧化钠溶液(新鲜配制) （3）摩尔／升铁氰化钾碱性溶液 用分析天平称化学纯铁氰化钾1.65克、溶解后加入预先准备好的锻制无水碳酸钠10.6克，定容到1升。将溶液放在棕色瓶内，于阴暗处保存。 （4）氯—锌—碘溶液 取硫酸锌50克及纯氯化钠250克，定容到1升，作为母液。临用前根据所需用的试剂量加入碘化钾，使它在混合液中的浓度为25克/升。 （5）标准摩尔／升硫代硫酸钠溶液 临用时由标准摩尔／升硫代硫酸钠溶液稀释。 （5）3％醋酸溶液(不应含铁) （5）1％可溶性淀粉溶液 1克可溶性淀粉溶于10毫升沸水中，然后加入到90毫升饱和氯化钠溶液中。此溶液可作为大多数碘量法滴定的指示剂，可长期保存。 （6）新鲜兔血 5操作步骤 （1）取二个试管，各加入％硫酸锌5毫升及摩尔／升氢氧化钠溶液1毫升，此时产生氢氧化锌胶状沉淀。 （2）用微量移液枪地吸取新鲜兔血毫升，加入一个装有氢氧化锌的试管中。另一试管
实验十 血糖的测定
实验十血糖得测定 血液中得葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定,维持在3.9mmol／L～6.1mmol／L之间。血糖浓度得相对恒定就是机体进行正常生理活动得前提条件之一,有着双重实际意义:其一,维持稳定得能源供给,满足机体在各种生理状态下对能量得需求。其二,保证机体不因进食致血糖浓度过高,导致糖得丢失。 因此,血糖得测定就是临床生化检验实验室得常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理得不同,大致分三类:氧化还原法 ,缩合法(主要有邻甲苯胺法),酶法(主要有己糖激酶法与葡萄糖氧化酶法)。下边介绍两种方法供选择。 一、葡萄糖氧化酶法 【目得】 1、了解葡萄糖氧化酶法测定血糖得原理,能进行血糖测定得操作。 2、掌握血糖测定得临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase,GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸与过氧化氢。后者在过氧化物酶 (peroxidase,POD)作用下,分解为水与氧得同时将无色得4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色得醌类化合物,即 Trinder 反应。其颜色得深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比,在505nm波长处测定吸光度,与标准管比较可计算出血糖得浓度。反应式如下: 【器材】 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1、 0、1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7、0) 称取无水磷酸氢二钠8、67g及无水磷酸二氢钾5、3g溶于800ml蒸馏水中,用1mol/L 氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调节pH至7、0,然后用蒸馏水稀释至1L。 2、酶试剂 称取过氧化物酶1200U,葡萄糖氧化酶1200U,4氨基安替比林10mg,叠氮钠100mg,溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中,用1mol/L NaOH调pH至7、0,加磷酸缓冲液至100ml。置冰箱保存,4℃可稳定3个月。 3、酚溶液 称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中(酚在空气中易氧化成红色,可先配成500g/L
血糖浓度测定
血糖浓度测定 【实验目的】学会用分光光度计测定血清中GLU（葡萄糖）的含量。 【检验原理】肉眼可见彩色光称为可见光，波长范围在400～750nm。当可见光通过有色溶液介质，一部分光能被吸收，一部分被透过。这种光能的吸收和透过，可用于某些物质的定性、定量分析。用葡萄糖试剂同样处理已知浓度的葡萄糖标准液和待测血清样品，标准管和样品管内的葡萄糖与试剂发生显色反应（形成红色醌型化合物），在510nm波长测定其吸光度值，计算样品的血糖浓度。 【检验用品】葡萄糖测定试剂、葡萄糖标准液，大、小微量移液计、配套吸管，722-P可见分光光度计，试管、试管架、玻璃笔，手控电热水浴槽。 【检验方法】 1．准备试管试液：取三支试管，用玻璃笔在试管上划记1、2、3编号，1试剂空白管、2标准管、3样品管。用大移液计（配大吸管）分别吸取试剂1ml（1000μl）入三支试管内，换用小移液计（配小吸管）吸取葡萄糖标准液10μl入标准管内，换小吸管后吸取待测血清样品10μl入样品管内。 2．水浴：各管混合均匀，置于试管架上并放入水浴槽内，37℃水浴15分钟后取出。 3.上机测定
（1）接通光度计电源、开机，打开光度计比色皿，按编号依次将三支试管液倒入比色皿中，使其磨砂面相邻隔光，透光面对准光路。 （2）把可见光波长调至510nm。当试剂空白管透光时，按MODE （功能）键设置T(透光度)为100%。再按功能键设置为A（吸光度），滑动比色皿拉杆，依次让标准管、样品管透光并测出其吸光度值。 1试剂空白管2标准管3样品管试剂（ml） 1.0 1.0 1.0 标准液（μl）—10 — 样品（μl）——10 【检验结果】 C样：样品浓度？C标：标准液浓度（5.55mmol/L）A样：样品吸光度值（）A标：标准液吸光度值（） C样=A样/ A标×C标
18生物化学实验吴宪Folin法测定血糖含量
吴宪 -Folin 法测定血糖含量 【目的】 1 ．掌握吴宪 -Folin 法测定血糖含量的实验方法。 2 ．熟悉吴宪 -Folin 法测定血糖含量的实验原理。 【原理】 钨酸钠（ Na 2 WO 4 ）和硫酸作用，生成钨酸，可沉淀血液样品中的蛋白质滤除蛋白质沉淀即可制得无蛋白血滤液，此血滤液中的葡萄糖具有还原性与硷性铜试剂共热可使兰色的二价铜离子（ Cu 2+ ）还原成红色的氧化亚铜（ Cu 2 O ）沉淀。氧化亚铜再使无色的磷钼酸还原成兰色的钼兰。颜色深浅与葡萄糖含量成正比。因此，将血滤液和经同样处理的标准葡葡萄溶液分别进行比色，即可求出血糖含量。其反应如下： 1 ．硷性铜试剂内的反应 2 ．定糖显色反应 【器材】 1 ． Folin- 吴氏定糖管 2 ．中号试管 3 ．电炉及加热器 4 ．刻度吸管 5 ．微量移液器 6 ．漏斗
7 ．分光光度计 【试剂】 1 ． 1/3mol/L 硫酸溶液 2 ． 10% 钨酸钠 3 ．碱性铜试剂 取无水碳酸钠 40g 溶解于 400ml 蒸馏水中，再加入酒石酸 7.5g ，溶解后定量地移入 1000ml 量瓶中，再加入结晶硫酸铜 4.5g （可先用热水浴稍微加热），待其完全溶解后加蒸馏水至刻度，混匀贮于棕色瓶中保存。 4 ．磷钼酸试剂 取钼酸（ H 2 MoO 4 ） 35g 和钨酸钠 5g 加入 1000ml 平底烧杯中，加入 10% 的氢氧化钠 200ml ，蒸馏水 100ml 煮沸 20-40 分钟以除以钼酸试剂中可能存在的氨。冷却后加蒸馏水使全量为 350ml 。再加入浓磷酸（ 85% ） 120ml ，最后加水蒸馏水至 500ml 。 5 ．葡萄糖标准液 （ 1 ）储存液（ 1mg/ml ）：精确称取葡萄糖 1.00g 置于 1 000ml 量瓶中，加入防腐剂 0.25% 苯甲酸溶液至刻度。 （ 2 ）应用液（ 2.5mg/dl ）：临用时，取上述储存液 25ml ，注入 1000ml 量瓶中，加蒸馏水至刻度处。 【操作】 1 ．无蛋白血滤液的制备 取小锥形瓶 1 个，准确加入蒸馏水 7ml ，用 0.2ml 干燥移液管准确吸取全血0.2ml 。用小块滤纸擦干吸管外面附着血液，然后徐徐地将血液放入水中（将吸管尖端放在锥形瓶液面以下），待血液放完以后再吸取锥形瓶内液将试管洗涤二次。吸管内最后一滴液体吹出，混匀，透明呈宝石红色。加 1/3mol/L ，硫酸液0.4ml 混匀再加 10% 钨酸钠溶液 0.4ml 、充分混匀。放置 5 分钟，待溶液由棕色透明变为咖啡色混浊后，用多层干燥滤纸过滤于一干燥的试管中，即得 40 倍稀释的钨酸血滤液。滤液必须无色透明，如发现混浊，即证明尚有蛋白质存在，不合要求，应重新制备。 2 ．血糖测定 取干燥洁净的 Folin- 吴氏定糖管 3 支，标号，按下表操作：
血糖测定操作步骤及评分标准
选手班级： 选手姓名： 选手学号： 标本号： 血糖测定（葡萄糖氧化酶法） 竞赛时间：15分钟 一、说明 1．本题满分100分，完成时间15分钟。 2．要求独立完成，不得相互询问或讨论。 3．考核成绩为操作过程评分、操作结果评分和考核时间评分之和。 4．全部操作过程时间和操作后处理时间计入时间限额。 二、实验原理 葡萄糖氧化酶（GOD ）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸（D-葡萄糖酸δ内酯），并产生过氧化氢： 葡萄糖+2H 2O+O 2 葡萄糖酸+2H 2O 2 在色原性氧受体（如联大茴香胺、4-氨基安替比林偶氮酚）的存在下，过氧化物酶催化过氧化氢，氧化色原物质，生成有色化合物。其颜色深浅与血清葡萄糖含量成正比。 三、实验器材 721分光光度计、小号试管≤7支、试管架1个、手动可调式移液器5～50μl 、1ml 和10ml 刻度吸管各两支、记号笔1支、水浴箱、擦镜纸，废物容器等。 四、实验试剂 葡萄糖标准液、生理盐水、0.1mol/L 磷酸盐缓冲液、酶试剂、酚试剂等组成的试剂盒。 五、实验标本 新鲜血清。 六、操作步骤 取3支小试管，按表进行操作。先配制10ml 酶酚混合试剂（试剂比例R1：R2=9:1）。 加入物（ml ） 测定管 标准管 空白管 血清 0.03 葡萄糖标准应用液 0.03 生理盐水 0.03 酶酚混合试剂 3.0 3.0 3.0 混匀，置37℃水浴中，保温10min ，分光光度计波长500nm ，比色杯光径1.0cm ，以空白管调零，分别读取标准管和测定管的吸光度。
七、数据记录与计算 1．数据记录 标准管吸光度 测定管吸光度 裁判签名确认2．计算血清葡萄糖浓度（写出计算公式及过程） 裁判签名确认八、报告 （如：血清葡萄糖：△.△△ mmol/L）。 裁判签名确认
血糖含量的测定
血糖含量的测定--邻甲苯胺法 目的要求 掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法， 实验原理 血液中所含的葡萄糖，称为血糖。它是糖在体内的运输形式。目前国内医院多采用葡萄糖氧化酶法和邻甲苯胺法测定血糖。前者特异性强、价廉、方法简单,其正常值：空腹全血为3.6～5.3毫摩尔/升（65～95毫克/分升），血浆为3.9～6.1毫摩尔/升。后者由于血中绝大部分非糖物质及抗凝剂中的氧化物同时被沉淀下来，因而不易出现假性过高或过低, 结果较可靠, 其正常值：空腹全血为3.3～5.6毫摩尔/升（60～100毫克/分升），血浆为3.9～6.4毫摩尔/升（70～115毫克/分升）。本实验采用邻甲苯胺法测定血糖。其原理是葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应生成5－羟甲基－2－呋喃甲醛，分子中的醛基与邻甲苯胺缩合成青色的薛夫氏碱，通过比色可以定量。 试剂和器材 一、试剂 邻甲苯胺试剂：:称取硫脲1.5ｇ溶于750ｍL冰醋酸中, 加邻甲苯胺150ｍL及饱和硼酸40ｍL, 混匀后加冰醋酸至1000ｍL, 置棕色瓶中，冰箱保存。 葡萄糖标准溶液：5.0mg/mL，临用时稀释成1.0 mg/mL。 二、材料 人血清。 三、器材 具塞试管1.5×15cm（×8）；分光光度计。 操作方法 一、制作标准曲线 取6支试管编号后，按下表顺序加入试剂： 管号标准葡萄糖液(mL) 蒸馏水(mL) 邻甲苯胺试剂(mL) 0 0.00 0.10 5.0 1 0.0 2 0.08 5.0 2 0.04 0.06 5.0 3 0.06 0.0 4 5.0 4 0.08 0.02 5.0 5 0.10 0.00 5.0 A630 加毕，温和混匀，于沸水浴中煮沸4min取下，冷却，放置30min，用1cm比色杯，试剂空白为参比，测定630nm 处吸光值，绘制标准曲线。 二、样品测定 取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定：
17 生物化学实验--葡萄糖氧化酶法测定血糖含量
葡萄糖氧化酶法测定血糖含量 【目的】 1 ．掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验方法。 2 ．熟悉葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验原理。 【原理】 葡萄糖氧化酶（ GA ）对β-D- 葡萄糖的特异性的很强。溶液中的葡萄糖有α-D- 葡萄糖和β-D- 葡萄糖两型，二者处于动态平衡。当β-D- 葡萄糖不断受酶催化而减少时，α-D- 葡萄糖便依靠平衡移动，全部转变为β-D- 葡萄糖参与反应。 GA 催化β-D- 葡萄糖分子中的醛基氧化生成葡萄糖酸和 H 2 O 2 ，后者在过氧化物酶（ PA ）作用下放出氧，其可将色原性氧受体“4- 氨基安替吡啉偶联酚” 的酚氧化，并与 4- 氨基安替吡啉缩合生成红色化合物，其反应如下。于505nm 与同样处理的标准葡萄溶液比色，可测得葡萄糖含量。 【器材】 1 ．分光光度计 2 ．恒温水浴
3 ．微量加样器 4 ．刻度吸量管 5 ．中号试管 【试剂】 1 ． 0.01mol/L pH7.0 磷酸盐缓冲液 无水 Na 2 HPO 4 18.5g 和 KH 2 PO 4 5.3g 溶于 800ml 蒸馏水中，用少量 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调 pH 至 7.0 ，再加蒸馏水稀释至 1L 。 2 ．酶试剂 取 GA1200 单位、 PA1200 单位， 4- 氨基安替吡啉 10mg 、叠氮钠 100mg ，加上述磷酸盐缓冲液至 80ml 左右，调 pH 至 7.0 ，再加同上缓冲液至 100ml ，混匀。冰箱内保存可稳定 3 个月。 3 ．酚试剂 酚 100mg 溶于 100ml 蒸馏水中。因酚易在空气中氧化成红色，可先配制成 50g /dl ，贮棕色瓶中，用前稀释。 4 ．酶 - 酚混合试剂 将试剂 2 、 3 等量混合。冰箱内保存可稳定 1 个月。 5 ．葡萄糖标准贮存液（ 20mg/ml ） 无水 D- 葡萄糖于80 ℃ 烤箱内干燥恒重，冷却后，称取 2.0g 以 0.25% 苯甲酸溶解、稀释定容至 100ml 。 6 ．葡萄糖应用标准液（ 100mg/dl ） 取葡萄糖标准液 5ml ，加 0.25% 苯甲酸溶液稀释定容至 100ml 。 7 ．蛋白沉淀剂 溶解 Na 2 HPO 4 10g 、 Na 2 WO 4 10g 、 NaCl 19g 于 800ml 蒸馏水中，加入 1mol/LHCl 125ml ，加蒸馏水至 1 000ml 混匀。 【操作】 1 ．血浆直接测定