果蔬中抗坏血酸含量的测定[1]

果蔬中抗坏血酸含量的测定

摘要：分别采用２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法和紫外分光光度法测定果蔬中抗坏血酸的含量，通过对比研究，优选出测定果蔬中抗坏血酸含量的方法为分光光度法。

关键词：抗坏血酸；果蔬；测定方法

抗坏血酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ aｃｉｄ，ａａ）也称ｖｃ，是维持人体健康的一种重要物质。人体所需的ｖｃ大多数由水果、蔬菜及食品供给［１］。人体长期缺乏抗坏血酸会得坏血病、关节疼痛、牙龈出血、发炎、感染、身体骨骼易损伤且不易愈合等疾病，而过量摄入ｖｃ不仅不能抵御疾病，而且还可能缩短寿命［２－４］。这是因为ｖｃ能够破坏ｄｎａ自由基，这种破坏会导致早衰和癌症。因此，对果蔬中抗坏血酸含量的定量分析具有重要的意义。

ｖｃ含量的测定方法很多。一般有２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法、紫外分光光度法、库仑分析法、原子分光光度法和碘量法等［５－１０］。本研究采用２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法和紫外分光光度法测定果蔬中抗坏血酸的含量，然后通过对比分析，确定测定果蔬中抗坏血酸含量的最优方法。

１材料与方法

１．１仪器与试剂

紫外分光光度计（美国安捷伦）；岛津分析天平（日本岛津）；ｓｈｂ－循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；微量移液器（上海安亨微量进样器厂）。

２．０％（ｗ／ｖ，下同）偏磷酸溶液；标准抗坏血酸；０．０２ｍｏｌ／ｌｅｄｔａ溶液；高锰酸钾；２，６－二氯靛酚钠。以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。

１．２样品的处理

选取新鲜的西红柿和黄瓜洗净、擦干，称取约１００ｇ至研钵中，捣碎，加入１００ｍｌ２．０％偏磷酸浸提剂，迅速捣成匀浆，用纱布过滤至烧杯中，然后抽滤。取滤液转移至１０００ｍｌ容量瓶中，用浸提剂定容，备用。

１．３样品的检测

１．３．１紫分光光度法校准曲线的绘制：配制一系列抗坏血酸标准溶液，浓度分别为１．００、２．００、４．００、６．００、８．００、１０．００μｇ／ｍｌ。以２％偏磷酸为参比，在波长２４３ｎｍ处用石英皿测定标准系列抗坏血酸溶液的吸光度。以吸光度值（ａ）对抗坏血酸浓度（ｃ）绘制校准曲线。线性回归方程ａ＝０．０７０１５ｃ－０．００５３，r２=０．９９９５。结果表明，抗坏血酸浓度在１．００～１０．００μｇ／ｍｌ范围内吸光度值与浓度之间呈良好的线性关系。

样液的测定：用２％偏磷酸为参比，在波长２４３ｎｍ处测定样液的吸光度。将待测样品的吸光度值代入回归方程，则可得样品中抗坏血酸的浓度，进而可按式（１）计算出样品中抗坏血酸的含量ｘ（ｍｇ／１００ｇ）。

ｘ＝ａ×ｃｖ×１００／ｍ（１）

其中：ｍ为样品重量，ｇ；ａ为稀释倍数；ｖ为提取液体积，ｍｌ。

１．３．２高锰酸钾法配制ｋｍｎｏ４标准溶液：称取１．６ｇｋｍｎｏ４溶于１０００ｍｌ水中，煮沸１５ｍｉｎ，冷却，贮存于棕色试剂瓶中，浓度为０．０１ｍｏｌ／ｌ；用ｎａ２ｃ２ｏ４标定后为０．０１０１６ｍｏｌ／ｌ。

样液的测定：移取配制好的试样溶液２５．００ｍｌ于２５０ｍｌ锥形瓶中，加入１ｍｌ０．０２ｍｏｌ／ｌ的ｅｄｔａ溶液，５ｍｌ３ｍｏｌ／ｌ硫酸溶液，摇匀后在棕色滴定管中用高锰酸钾标准溶液滴定至呈微红色，３０ｓ不退色即为终点。

两者的反应方程式：２ｍｎo■■＋５ｃ６ｈ８ｏ６＋６ｈ＋＝２ｍｎ２＋＋５ｃ６ｈ６ｏ６＋８ｈ２ｏ，可按式（２）计算出样品中抗坏血酸的含量ｘ（ｍｇ／１００ｇ）。

ｘ＝ａ×ｃｖ×ｍ×５／２×１００／ｍ（２）

式中：ｃ、ｖ分别为ｋｍｎｏ４标准溶液的浓度和滴定用去的体积；ｍ为抗坏血酸的摩尔质量。

１．３．３２，６－二氯靛酚钠法测定２，６－二氯靛酚钠的滴定度：吸取２５ｍｌ２，６－二氯靛酚溶液于１００ｍｌ锥形瓶中，摇匀，用浓度为１．０ｍｇ／ｍｌ抗坏血酸标准溶液滴定至溶液呈粉红色１５ｓ不退色为止［１１］。按式（３）计算其滴定度：

ｔ＝ｃ×ｖ／ｖ１（３）

式中：ｃ为抗坏血酸的浓度，ｍｇ／ｍｌ；ｖ为吸取抗坏血酸的体积，ｍｌ；ｖ１为滴定抗坏血酸溶液所用２，６－二氯靛酚溶液的体积，ｍｌ。

样品中抗坏血酸含量的测定：移取样品提取液１０．００ｍｌ于锥形瓶中，立即从滴定管中滴入２，６－二氯靛酚钠溶液，直到溶液变色后１５ｓ不变色即为滴定终点，到达滴定终点时，样品溶液变为粉红色。平行测定３次。由２，６－二氯靛酚钠溶液的体积可按式（４）计算出样品中抗坏血酸的含量ｘ（ｍｇ／１００ｇ）。

ｘ＝ａ×ｖ×ｔ×１００／ｍ（４）

式中：ｖ为滴定样液时消耗染料溶液的体积，ｍｌ；ｔ为２，６－二氯靛酚染料滴定度，ｍｇ／ｍｌ。

２结果与分析

２．１实验条件的选择

２．１．１紫外分光光度法测定波长的选择：ｖｃ是烯醇化合物，在可见区无吸收［１２］，在紫外区有吸收。分别对不同浓度的ｖｃ与试剂空白溶液在２００～４００ｎｍ波长范围内进行扫描，最大吸收峰在２４３ｎｍ。因此，选２４３ｎｍ作为测量波长。

溶剂的选择：一般用偏磷酸、草酸作为提取剂。但由于草酸在波长２４３ｎｍ处有非常强的吸收，不能作为ｖｃ的提取液。因此，本实验选择２％偏磷酸作为分光光度法的溶剂。

２．１．２高锰酸钾法溶液的酸度：ｋmｎｏ４在酸性溶液中具有较强的氧化性，所以其测定宜在酸性溶液中进行。由于ｃｌ－具有还原性，也能与高锰酸钾作用；而ｈｎｏ３具有氧化性，可氧化抗坏血酸，所以不使用ｈｃｌ和ｈｎｏ３而用稀ｈ２ｓｏ４。

干扰离子的影响：试液中如有ｆｅ２＋等还原性离子存在，不仅能加快抗坏血酸被空气中的氧气所氧化而分解的速度，而且也要消耗一定量的标准溶液而造成滴定误差。所以加入ｅｄｔａ溶液予以掩蔽ｆｅ２＋而消除干扰［１３］。

２．２样品测定结果

２．２．１不同方法的对比将紫外分光光度法、高锰酸钾法、２，６－二氯靛酚滴定法进行对比，这３种方法采用相同的前处理溶液，从表１可以看出，用高锰酸钾法测的值明显高于紫外分光光度法和２，６－二氯靛酚钠法的值。这表明３种方法均可用于快速测定果蔬中抗坏血酸的含量，但紫外分光光度法和２，６－二氯靛酚滴定法的准确度要优于高锰酸钾法，而对于深色泽样品的测定，紫外分光光度法由于不受颜色干扰和其他还原性物质的影响而优

于氧化还原滴定法，因此更加准确、可靠，适用范围更广。

２．２．２紫外分光光度法的检出限连续测定空白吸光值１０次，吸光度值见表２，在置信度９０％时，取置信系数ｋ＝３，按上述线性方程，其校准曲线斜率为０．０７１０５，则相对应

的分析物浓度作为方程的检出限ｄ×ｌ＝ｋ×ｓｄ／ｓ＝０．０１１μｇ／ｍｌ。

２．２．３紫外分光光度法的准确度为验证分析结果的可靠性，了解试样中有无干扰物质存在，应用本法对样品进行加标回收试验，结果见表３，可得出，该方法回收率在９７．９％～９８．８％之间，平均回收率为９８．３％，共存物质造成干扰较小。２．２．４紫外分光光度法的精密度取样品平行测定５次，结果见表４，从测定结果可以看出，平行样测定有较好的重现性。３小结与讨论

利用抗坏血酸对紫外产生吸收的特性和较强的还原性，采用３种不同方法测定果蔬中抗坏血酸的含量。实验结果表明，紫外分光光度法简单易行、结果准确、灵敏度高、检出限低，值得推广应用。参考文献：

［１］阎树刚，韩涛．果蔬及其制品中ｖｃ测定方法评价［ｊ］．中国农学通报，２００２，１８（４）：１１０－１１２．［２］羊金梅，覃超凤，余瑞林，等．分光光度法测定梨和苹果中ｖｃ的含量［ｊ］．安徽医药，２００５，９（３）：205-206．［３］李秋菊，王亚红，刘秀萍．维生素ｃ的测定方法［ｊ］．太原师范学院学报，２００５，4（１）：89-91．

［４］李志英，薛志伟，张海容．用荧光光度法测定饮料中的ｖｃ含量［ｊ］．商丘师范学院学报，２００７，２３（９）：６０－６２．

［５］杨芳芳．抗坏血酸的测定方法综述［ｊ］．甘肃科技纵横，２００５，３４（６）：２０８－２０９．

［６］谢志鹏，肖友军，汪敬武．流动注射抑制电化学发光法测定ｖｃ［ｊ］．分析试验室，２００７，２６（１１）：６４－６６．

［７］大连轻工业学院．食品分析［ｍ］．北京：中国轻工业出版社，１９９９．

［８］夏静，刘琼霞．双光束剩余染料差减比色法测定蔬菜中的抗坏血酸含量［ｊ］．安徽农业科学，１９９７（４）：３７１－３７２．

［９］中国卫生部药典委员会．中国药典：第二部［ｍ］．北京：化学工业出版社，２０００．

［１０］库尔班江，赛丽曼．碘量法测定水果蔬菜中ｖｃ的含量［ｊ］．伊犁师范学院学报，２００７（３）：２８－３2．

［１１］苑乃香，宣亚文，谢东坡，等．２，６－二氯靛酚钠测定蔬菜中抗坏血酸的含量［ｊ］．安徽农业科学，２００９，３７（２５）：１１８５３－１１８５４．

［１２］郑京平．水果、蔬菜中维生素ｃ含量的测定－紫外分光光度快速测定方法探讨［ｊ］．光谱实验室，２００６，２３（４）：７３１－７３５．

［１３］王建国，王端斌．高锰酸钾滴定法快速测定蔬菜中抗坏血酸含量［ｊ］．食品科学，２００８，２９（１０）：４７１－

４７３．

抗坏血酸含量的测定

抗坏血酸含量的测定 植物学实验技术 一、原理 还原型抗坏血酸（AsA）可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉（4,7-二苯基-1,10-菲咯啉，BP）反应形成红色螯合物。在534nm波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。脱氧抗坏血酸（DAsA）可由二硫苏糖醇（DTT）还原成AsA。测定AsA总量，从中减去还原型AsA，即为DAsA含量。 二、仪器与用具 离心机；分光光度计；研钵；试管。 三、试剂 5%三氯乙酸（TCA）；20%TCA；无水乙醇溶液；0.4%磷酸－乙醇溶液；0.5%BP－乙醇溶液；0.03%FeCl3－乙醇溶液；0.6g/L DTT；Na2HPO4－NaOH溶液：以0.2mol/L Na2HPO4和1.2mol/L NaOH等量混合；60mmol/L DTT－乙醇。 四、方法 1. 制作标准曲线配制浓度为2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L，12mg/L，14mg/L的AsA系列标准液。取各浓度标准液1.0ml于试管中，加入1.0ml 5%TCA、1.0ml乙醇摇匀，再依次加入0.5ml 0.4%H3PO4－乙醇、1.0ml 0.5%BP－乙醇、0.5ml 0.03%FeCl3－乙醇，总体积5.0ml。将溶液置于30℃下反应90min，然后测定A534。以AsA浓度为横坐标，以A534为纵坐标绘制标准曲线，求出线性方程。 2. 提取取植物叶片1.0g，按1∶5（W/V）加入5%TCA研磨，4000r/min离心10min，上清液供测定。 3. 测定 （1）AsA测定取1.0ml样品提取液于试管中，按上述相同的方法进行测定，并根据标准曲线计算AsA含量。（2）DAsA测定向1.0ml样品液中加入0.5ml 60mmol/L DTT－乙醇溶液，用Na2HPO4－NaOH混合液，将溶液PH调至7~8，置于室温下10min，使DAsA还原。然后加入0.5ml 20%TCA，把PH调至1~2。按AsA相同方法进行测定，计算出总AsA含量，从中减去AsA，即得DAsA含量。

食醋中总酸量的测定

食醋中总酸量的测定 实验目的 1、学习强碱滴定弱酸的基本原理及指示剂的选择原则。 2、掌握食醋中总酸量的测定原理和方法。 3、熟悉移液管和容量瓶的正确使用方法。 实验原理 食醋中的主要成分是醋酸（CH 3COOH ）常简写为HAc ，此外还含有少量其他有机弱 酸，如乳酸等。当以NaOH 标准溶液滴定时，凡是C 810-?θ a K 的弱酸均可以被滴定，因 此测出的是总酸量，但分析结果通常用含量最多的HAc 表示。CH 3COOH 与NaOH 的反应为：NaOH + CH 3COOH = CH 3COONa + H 2O 由于这是强碱滴定弱酸，计量点时生成CH 3COONa ，溶液的pH 大约为8.7，故可选用酚酞作指示剂，但必须注意CO 2对反应的影响。食醋是液体样品，通常是量其体积而不是称其质量，因而测定结果一般以每升或每100mL 样品所含CH 3COOH 的质量表示，即以醋酸的密度ρ(HAc)表示，其单位为g 〃L -1或g/100mL 。 食用醋往往有颜色，会干扰滴定，应先经稀释或加入活性炭脱色后，再进行测定。食醋中含CH 3COOH 的质量分数一般在3%～5%，应适当稀释后再进行滴定。 仪器与试剂 碱式滴定管（50mL ），移液管（10mL ，25 mL ），容量瓶（250mL ），锥形瓶（250mL ），洗耳球。 0.1 mol 〃L -1 NaOH 标准溶液（要求实验前标定），0.2%酚酞乙醇溶液， 食醋（白醋）样品。 实验步骤 用移液管吸取25.00 mL 食醋样品，放入250 mL 容量瓶中，然后用无CO 2的蒸馏水稀释容至刻度，摇匀备用。 用移液管吸取25.00 mL 已稀释的食醋样品于250mL 锥形瓶中，滴加2～3滴酚酞指示剂。 用NaOH 标准溶液滴定到溶液呈微红色，30s 内不褪色即为终点，记录所消耗NaOH 标准溶液的体积。平行测定3次，要求每次测定结果的相对平均偏差不大于0.3%，计算食醋的总酸量ρ(HAc)，ρ(HAc)按下式计算： ρ(HAc)= )(1) ()()(-????L g f V HAc M NaOH V NaOH c 样

水果中总酸度的测定方法

实训一:水果中总酸度的测定 一、目的要求： 1.学会水果样品的预处理方法 2.掌握用酸碱滴定法测水果样品中总酸度的原理和方法 3、学会合理制定分析项目的顺序，做到合理安排分析时间，合理处理样品。 4、能熟练制备实训过程中所需要的标准溶液。 5、能规范记录数据并进行数据处理。 二、实训原理： 1. NaOH标准溶液的标定 NaOH易吸收水分及空气中的CO2，因此，不能用直接法配制标准溶液。需要先配成近似浓度的溶液，然后用邻苯二甲酸氢钾为基准物进行标定。以酚酞为指示剂，当滴定至终点溶液呈浅红色，且30S不褪色时。反应如下： KHC8H4O4+NaOH=KNaC8H4O4+ H2O 2.水果总酸度的测定 根据酸碱中和原理，用碱标准溶液滴定试样液中的酸时，以酚酞威指示剂。当滴定至终点溶液呈浅红色，且30S不褪色时，根据滴定时消耗的标准NaOH溶液的体积，可算出试样中的总酸度。其反应如下： HAC+NaOH→NaAc+H2O 三、实训所需仪器、试剂：洗仪器：袁驰 仪器：酸碱式滴定管、锥形瓶、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、胶头滴管、洗耳球、水浴锅、铁架台、电子天平、玻璃棒、小纸片、干燥的纱布、试剂： 0.1000mol/LNaOH溶液、邻苯二甲酸氢钾、酚酞指示剂、水果试样、的蒸馏水、 无水CO 2 四、实验步骤： 1. 0.1000mol/LNaOH标准溶液的配制和标定配制：马佳红 称取固体NaOH约2g放置在500ml的烧杯中，先加入100ml少溶解，再加水稀释成500ml溶液，混匀，放入烧杯中，待标定。标定：曹芬芳用减量法准确称取0.41～0.45g邻苯二甲酸氢钾3份，分别放入250ml锥形瓶中，加25mL无CO2蒸馏水溶解。

总酸度的测定

一、总酸度的测定（滴定法） （根据GB/T12456-1990） 1.原理 用标准碱液滴定食品中的酸，中和生成盐，用酚酞做指示剂。当滴定终点 (pH=8.2，指示剂显红色)时，根据耗用的标准碱液的体积，计算出总酸的含量。 反应式：RCOOH+NaOH →RCOONa+H2O 2. 适用范围 本法适用于各类色浅的食品中总酸含量的测定。 3.试剂 ①0.1000mol/L NaOH 标准溶液 称取110g NaOH 于250mL 烧杯中，加入100mL 无CO 2的蒸馏水振摇使其溶解，冷却后倒入聚乙烯塑料瓶中静止数日，澄清后备用。量取上清液5.4mL ，加入无CO 2的蒸馏水稀释至1000毫升，摇匀。 ②1%酚酞乙醇溶液 称取酚酞1g 溶于60mL 95% 乙醇中，用水稀释至100 mL 。 4、仪器： 碱式滴定管 水浴锅 5、分析步骤 （1）样液的制备 液体试样：不含CO2的试样混合均匀后直接取样。含CO2的试样，如饮料、酒等，将试样置于40℃水浴上加热30min ，以除去CO2，冷却后备用。 （2）测定准确吸取50mL 试样制备液，于250mL 的锥形瓶内，加3～4滴酚酞指示液，以0.1mol/L NaOH 标准溶液滴定至浅红色，30S 内不褪色，记录消耗0.1mol/L 氢氧化钠滴定液的体积V1，同一试样必须平行测定两次，以其平均值作为测定结果。同时做空白试验。 两个平行样的测定值相差不得大于平均值的 2％。 式中： c------标准NaOH 溶液的浓度，mol/L V -----滴定消耗标准NaOH 溶液的体积，mL m------样品质量或体积，g 或ml V 0 ----样品稀释液总体积，mL; ) 1.......(%.........10025050K c 21???-=m V V X ）（

水果总酸度的测定

实训一：水果总酸度的测定 一、实验目的 1、学会水果样品的预处理方法 2、掌握用酸碱滴定法测定水果样品中总酸度的原理和方法 3、学会合理指定分析项目的顺序，做到合理安排分析时间，合理处理样品。 4、能熟练纸杯实过程中所需要的标准溶液。 5、能规范记录数据并进行数据处理。 二、实验原理 ? 1. NaOH标准溶液的标定 NaOH易吸收水分及空气中的CO2，因此，不能用直接法配制标准溶液。需需要先配成近似浓度的溶液，然后用邻苯二甲酸氢钾为基准物进行标定。以酚酞为指示剂，当滴定至终点溶液呈浅红色，且30S不褪色时。反应如下：?KHC8H4O4+NaOH=KNaC8H4O4+ H2O ? 2.水果总酸度的测定 根据酸碱中和原理，用碱标准溶液滴定试样液中的酸时，以酚酞为指示剂。当滴定至终点溶液呈浅红色，30s不褪色时，根据滴定时消耗的标准碱溶液的体积，可算出试样中的总酸度。其反应如下： ?HAc+NaOH →NaAc+H2O 三、实验仪器及试剂 ?试剂：0.1000mol/LNaOH标准溶液、邻苯二甲酸氢钾、酚酞指示剂、无CO2的蒸馏水、水果试样（梨） ?仪器：洗耳球、玻璃棒、量筒、移液管、电子天平、 ?水浴锅、锥形瓶、容量瓶、酸碱滴定管、烧杯、小纸片、胶头滴管、干燥的纱布、铁架台 四、实验步骤 ?1、0.1000mol/LNaOH标准溶液的标定：（顾嘉俊王英权） ?0.1000mol/lNaoH标准溶液已经配制好，待标定。 ?用减量法准确称取0.4—0.45g邻苯二甲酸氢钾三份，分别放入250ml锥形瓶中，加25ml无CO2的蒸馏水溶解。 ?然后加1—2d 酚酞指示剂，用NaOH溶液滴定至终点（至粉红色，并保持30s不褪色为终点）。 ?记录每次消耗NaOH溶液的体积。 ?2、试样的处理：（朱方灵、陈鹏）

维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较

维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较 目前研究维生素C测定方法的报道较多,有关维生素C的测定方法如荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等,各种方法对实际样品的测定均有满意的效果. 为了解国内VC含量测定方法及其应用方面的现状及发展态势.方法以"维生素C 或抗坏血酸和测定"为检索词对1994～2002年中国期刊网全文数据库(CNKI)中的理工A、B和医药卫生专辑进行篇名检索,对所得有关维生素C含量测定的文献数据分别以年代、作者区域、载刊等级、样品类型、测定方法等进行计量分析.结果核心期刊载刊文献占文献总量的45.06％,其中光度法占65.69％,电化法占18.63％,色谱法占12.75％;复杂被测样品文献占文献总量的45.06％,其中光度法占60.92％,色谱法占19.54％,电化法占10.34％.结论目前国内维生素C含量测定仍以光度法为主流,但近年来色谱法,特别是HPLC法上升趋势尤为明显. 一．荧光法 1．原理 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022 g/ml。 2．适用范围 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 3. 注意事项 3.1 大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸-醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生C。 3.2 某些果胶含量高的样品不易过滤，可采用抽滤的方法，也可先离心，再取上清液过滤。 3.3活性炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，但它也有吸附抗坏血酸的作用，故活性炭用量应适当与准确，所以，应用天平称量。我们的实验结果证明，用2g活性炭能使测定样品中还原型抗坏血酸完全氧化为脱氢型，其吸附影响不明显。 二、2，6-二氯靛酚滴定法（还原型VC）

循环伏安法测定维生素C片中抗坏血酸的含量

循环伏安法测定维生素C片中抗坏血酸的含量 温仕君 （暨南大学化学工程与工艺2012051590）摘要：本文通过用循环伏安法测定维生素C片中抗坏血酸的含量达到以下目的要求：①学习循环伏安法测定电极反应参数的基本原理及方法；②熟悉循环伏安法的实验技术；③了解可逆波、不可逆波的循环伏安图的特点。 利用抗坏血酸具有强还原性的特点，电解抗坏血酸的溶液，在铂工作电极上发生氧化还原反应，利用电流的极值点与浓度的关系就可对抗坏血酸进行定量分析，测得维生素C片中抗坏血酸的含量为该法具有快速简便的特点而得到广泛的应用。 关键词：循环伏安法抗坏血酸维生素C片 1引言 利用被分析物氧化还原反应而对物质进行定量分析的方法很多，最常见的是滴定法，如碘量法测维生素C的含量，但是滴定法只能进行常量分析，而且碘很昂贵，如长期使用该法成本非常高。随着实验技术手段的不断发展，循环伏安法已经越来越成熟，该法不仅能够进行微量分析，还能测定电极反应的性质[1,2]。目前，循环伏安法已经广泛应用于各个领域，如药物成分分析，食品分析等。在以后的科研工作中，伏安分析法将发挥更大的作用。 2实验部分 2.1实验原理 循环伏安法将对称的三角波扫描电压（如图1）施加于电解池的电极上，记录工作电极上的电流随电压变化的曲线，及循环伏安图。在三角波的前半部分，电极上若发生还原反应（阴极过程），得到一个峰形的阴极波；而在三角波的后半部分，则得到一个峰形的阳极波。一次三角波电压扫描，电极上完成一个氧化还原循环。当工作电极被施加的扫描电压激发时，其上将产生响应电流。以该电流（纵坐标）对电位（横坐标）做图，就得到了循环伏安图（如图2所示）。 图一图二

总酸度游离酸度的测定

酸度测定操作方法 一. 总酸度的测定 本法采用酸碱滴定法。取试样10ml，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定， 所消耗的毫升数用点数表示。 A.1 试剂 氢氧化钠：0.1mol/L标准溶液按GB/T 601规定； 酚酞指示剂：1.0/L 按GB/T 603规定。 A.2 试验方法 吸取10ml试液于250ml锥形烧瓶中，加50ml蒸馏水，加3~4滴酚酞指 示剂。用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴至溶液由无色变为粉红色为终点。 记下消耗氢氧化钠标准溶液毫升数V1。 A.3 计算方法 总酸度点数按下列公式计算： 总酸度（点）= 10V1 c/ 0.1V 式中： V1 —滴定时耗去氢氧化钠标准溶液毫升数，mL； c—氢氧化钠标准溶液实际浓度，mol/L； V—取样毫升数，mL。 二. 游离酸度的测定 本法采用酸碱滴定法。取试样10ml，用0.1mol/L氢氧化钠标 准溶液滴定，所消耗的毫升数用点数表示。 A.1试剂 氢氧化钠：0.1mol/L标准溶液按GB/T 601规定； 溴酚蓝指示剂：0.4mol/L 按GB/T 603规定。 A.2试验方法 吸取10ml试液于250ml锥形烧瓶中，加50ml蒸馏水，加2～3滴溴酚 蓝指示剂。用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴至溶液由黄色变至蓝紫色 为终点。记下消耗氢氧化钠标准溶液毫升数A。 A.3计算方法 游离酸度点数按下列公式计算： 游离酸度（点）= 10Ac/ 0.1V 式中： A —滴定时耗去氢氧化钠标准溶液毫升数，mL； c—氢氧化钠标准溶液实际浓度，mol/L； V—取样毫升数，mL。 编制苏辉审核韩娟批准 山东金泰机械制造有限公司

抗坏血酸药品中维生素C含量的测定(碘量法)

抗坏血酸药品中维生素C 含量的测定 一、实验目的 1.掌握碘标准溶液的配制注意事项； 2.通过维生素C 的测定了解直接碘量法和间接碘量法的过程； 3.掌握碘量法测定抗坏血酸药品中维生素C 含量的原理和方法。 二、实验用品 1.仪器 全自动分析天平；台秤；碘量瓶；玻璃棒；洗瓶；试剂瓶；烧杯；酸式滴定管；量筒；胶头滴管；容量瓶；移液管；洗耳球。 2.试剂 分析纯O H O S 23225Na ?，分析纯2I ； 7221-r mol 017.0O C K L ?标准溶液；)s (KI 、KI 溶液100-1 L g ?，使用前配制；淀粉指示剂1 -g 5L ?；） （s a 32CO N ；l HC 溶液1 -mol 6L ?；败坏血酸片。 三、实验原理 抗坏血酸又名维生素C ，分子式686O H C 。由于分子中的烯二醇基具有还原性，能被2 I 定量地氧化成二酮基，其反应式为： 碱性条件下可使反应向右进行完全，但因维生素C 还原性很强，在碱性溶液中尤其易被空气氧化，在酸性介质中较为稳定，故反应应在稀酸（如稀乙酸、稀硫酸或偏磷酸）溶液中进行，并在样品溶于稀酸后，立即用碘标准溶液进行滴定。根据滴定消耗的2I 标准溶液的体积，便可计算出抗坏血酸药品中维生素C 的含量。 计算公式：%100m %100m m 68622?=?= 药品 药品维生素O H C I I C M V C W 2I 标准溶液的配制和标定：由于通常使用的市售2I 试剂纯度不高，故需先配成近似浓度，然后在进行标定。2I 微溶于水而易溶于KI 溶液中，但在稀的KI 溶液中溶解得很慢，故配制2I 溶液时应先在较浓的KI 溶液中进行，待溶解完全后再稀释到所需浓度。2I 溶液可以用32s O A 为基准物对I 2溶液进行标定,但32s O A （俗称砒霜）有剧毒，故用322a O S N 标准溶

食品中总酸的测定(滴定法)

学号姓名 实验三食品中总酸的测定（滴定法） 一、实验原理 果汁具有酸性反应，这些反应取决于游离态的酸以及酸式盐存在的数量。总酸度包括未解离酸的浓度和已解离酸的浓度。酸的浓度以摩尔浓度表示时，称为总酸度。含量用滴定法测定。果蔬中含有各种有机酸，主要有苹果酸、柠檬酸、酒石酸、草酸……。果蔬种类不同，含有机酸的种类和数量也不同，食品中酸的测定是根据酸碱中和的原理，即用标定的氢氧化钠溶液进行滴定。 二、材料、仪器与试剂 （一）材料：西红柿、苹果、果汁等 （二）仪器：碱式滴定管（20mL）、容量瓶（100mL）、移液管（10mL）、烧杯（100mL）、研钵或组织捣碎机、100ml量筒(量酒精)、1%酚酞指示剂、胶头滴管/滴瓶、容量瓶（1000mL）、布氏漏斗+滤纸、天平、三角烧瓶、洗瓶、活性炭（脱色）、和板、蒸馏水。 （三）试剂 1）．0.1mol/L氢氧化钠：称4.0g氢氧化钠定容至1000mL，然后用0.1mol/L邻苯二甲酸氢钾标定，若浓度太高可酌情稀释。 2）．1%酚酞指示剂：称1.0g酚酞，加入100mL50%的乙醇溶解。 三、操作步骤 1）0.1mol/L NaOH标准溶液的标定：将基准邻苯二甲酸氢钾加入干燥的称量瓶内，于105-110℃烘至恒重，用减量法准确称取邻苯二甲酸氢钾约0.6000克，置于250 mL锥形瓶中，加50 mL无CO2蒸馏水，温热使之溶解，冷却，加酚酞指示剂2-3滴，用欲标定的0.1mol/L NaOH溶液滴定，直到溶液呈粉红色，半分钟不褪色。同时做空白试验。 2）样品的处理与测定：准确称取混合均匀磨碎的样品10.0g（或吸10.0mL样品液），转移到100mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度、摇匀。用滤纸过滤，准确吸取滤液20mL放入100mL 三角瓶中，加入1%酚酞2滴，用标定的氢氧化钠滴定至初显粉色在0.5min内不褪色为终点，记下氢氧化钠用量，重复三次，取平均值。 四、实验结果 式中：V——样品稀释总体积（mL）V1——滴定时取样液体积V2——消耗氢氧化

抗坏血酸检测的实验步骤

动物血清中抗坏血酸（Vc）的测定 一、实验目的 抗坏血酸（Ascorbic Acid）又叫维生素C（Vitamin C），是一种水溶性维生素.正常成人体内的抗坏血酸代谢活性池中约有1500mg抗坏血酸，最高储存峰值为3000mg抗坏血酸.抗坏血酸在氧化还原代谢反应中起调节作用，缺乏它可引起坏血病.抗坏血酸是一种强力的抗氧化剂、抗病毒和抗炎剂.广泛存在于食品和生物样本中，是一种免疫刺激剂.因此检测抗坏血酸在上述样本内的分布和含量就显得非常重要。 二、实验原理 三、实验仪器 试管、移液枪、漩涡混匀器、水浴锅、离心机、可见分光光度计。 四、试剂的配制 1.试剂一应用液的配制（5ml）：试剂一储备液：双蒸水=1：14稀释，混匀制 备。 2.试剂二应用液的配制：用时取一支粉剂加0.36 ml的冰醋酸再加水至40 ml, 溶解，4℃保存。 3. 试剂三应用液的配制：因溶解困难，使用前2-4h加无水乙醇60 ml充分 溶解，制备，4 ℃保存。 4. 试剂四应用液的配制：用时取0.15 ml 试剂四储备液加水至25 ml制备， 避光保存。（现用现配） 5.试剂五：液体6 ml，4 ℃保存。 6.600 ug/ml标准品应用液的配制：取一支标准品粉末溶于10 ml试剂一应用 液中，充分混匀，4℃保存。 6ug/ml标准品应用液的配制：取600 ug/ml Vc标准应用液再用试剂一应用液100倍稀释备用，现用现配。 注意：维生素C标准品易氧化，因此，最好在样本上清液制备好后再配标准，并在10 min内进行检测。 五、实验步骤 1.取实验小鼠，断颈处死，摘除眼球，眼眶取血至1.5 ml EP管，取完血液， 然后静置半小时，然后3000 rpm, 离心15 min,然后取上清至新1.5 ml EP 管，3000 rpm, 离心15 min,取上清备用 2.上清液的制备：取步骤一中上清0.15 ml加试剂一应用液0.45 ml,漩涡混 匀，放置15 min分钟后离心，3500-4000转/分，离心10分钟，上层清亮 液体为上清液。 3.上清液中Vc的测定：

抗坏血酸含量测定(分光光度计法)

植物生理学模块实验指导 李玲主编 科学出版社 一、维生素C含量的测定方法（分光光度计法） 【实验目的】 学习利用分光光度计法测定维生素C（抗坏血酸）含量的原理和方法。 【实验原理】 维生素C（抗坏血酸）具有较强的还原力，可以把铁离子（Fe3+）还原成亚铁离子（Fe2+），亚铁离子与红菲啰啉（4,7-二苯基-1,10-菲啰啉，BP）反应形成红色螯合物。此化合物在波长534nm处具有强的吸收峰，且吸光度与反应液中抗坏血酸含量呈正相关。因此，可用比色法来测定抗坏血酸含量。 【器材与试剂】 1.实验仪器与用具 离心机、分光光度计、研钵、电子天平、容量瓶（50ml和100ml）、漏斗、滤纸、离 心管、试管。 2.实验试剂 50g/L三氯乙酸（TCA）溶液：称取5g三氯乙酸（分析纯），用蒸馏水溶解，稀释至100ml。 0.4%磷酸-乙醇溶液：量取0.47ml 85%磷酸溶液加入到无水乙醇中，并用无水乙醇稀释至100ml。 5g/L BP-乙醇溶液：称取0.25g BP（纯度>97%）加入到无水乙醇中溶解，并用无水乙醇稀释至50ml。 0.3g/L FeCl3-乙醇溶液：称取0.03g FeCl3加入到100ml无水乙醇中，摇匀。

100μg/ml 标准抗坏血酸溶液：称取10mg 抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用），用50g/L TCA 溶液溶解，定容至100ml，即1ml溶液含100μg抗坏血酸。现用现配，保存于棕色瓶中，低温冷藏。 3.实验材料 苹果、梨、香蕉、柑橘等果实。 【实验步骤】 1.制作标准曲线 取7支试管，编号，按表1加入各种溶液，将混合液置于30℃反应60min，然后以0号试管混合液为参照，于波长534nm处测定吸光度值。以抗坏血酸质量为横坐标，吸光度为纵坐标汇至标准曲线，求的回归方程。 表1 制作抗坏血酸标准曲线试剂含量 项目试管号 0 1 2 3 4 5 6 抗坏血酸标准液/ml 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 50g/L TCA/ml 2.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 无水乙醇/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 混匀、摇匀 0.4%磷酸-乙醇溶液/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 5g/L BP-乙醇溶液/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.3g/L FeCl3-乙醇溶液/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 相当于抗坏血酸量/μg0 10 20 30 40 50 60 2.提取 洗净新鲜果实，吸干，剪碎后混匀，分别称取5g 样品置于研钵中，加入20ml 50g/L TCA溶液，在冰浴条件下研磨成浆状，转入到100ml容量瓶中，并用50g/L TCA 溶液定容至刻度，混合、提取10min后，过滤收集滤液备用。 3.测定

食用醋中总酸度的测定

食用醋中总酸度的测定 一、【实验目的与要求】 1. 熟练掌握酸碱滴定的操作技术； 2. 掌握碱标准溶液的配制和标定方法，对基准物质的性质和应用有所了解； 3. 掌握食用醋总酸度的测定原理及方法； 4. 掌握指示剂的选择原则； 5. 了解强碱滴定弱酸滴定过程中pH值变化、滴定突跃及指示剂的选择。 二、【实验原理】 化学分析中的酸碱滴定是将已知准确浓度的溶液（称作标准溶液）滴加到待测定物质的溶液中，到标准溶液与待测溶液按一定的化学计量关系完全反应为止，然后根据标准溶液的消耗量和化学计量关系来计算待测组分的量，这种方法快速迅速，而且操作简单，因此非常适用于一般酸碱浓度的测定。 食用醋的主要成分是醋酸（HAc，含量大约为3%～5%）和少量的其它有机弱酸等。用NaOH作标准溶液滴定食用醋时，滴定反应为： NaOH + HAc == NaAc + H2O n NaOH + H n A (有机弱酸) == Na n A + n H2O 本滴定反应类型为强碱滴定弱酸，产物是弱酸强碱盐，测定结果为食用醋中醋酸的总酸度，用ρHAc (g·L-1)表示。由于滴定突跃范围在碱性范围，故指示剂可选用酚酞、百里酚酞等，本实验选择酚酞作为滴定反应指示剂。 三、【仪器、试剂与材料】 1. 仪器： 电子天平，碱式滴定管，试剂瓶，移液管，锥形瓶，烧杯，量筒，台秤。 2. 试剂和材料： NaOH标准溶液（0.1 mol·L-1），邻苯二甲酸氢钾（基准物质），酚酞指示剂（0.2%的乙醇溶液），食用醋。 四、【实验步骤】 1. NaOH标准溶液（0.1 mol·L-1）的配制和标定 用烧杯在台秤上称取固体NaOH 4.3 g左右，加入煮沸除去CO2的蒸馏水少许，快速冲

食品中总酸的测定

食品中总酸的测定 1.实验原理 食品中的酒石酸、苹果酸、柠檬酸、草酸、醋酸等有机酸，其电离常数Ka均大于10^(-8),可以用强碱标准溶液直接滴定试样中的酸，以酚酞为指示剂确定滴定终点。按碱液的消耗量计算食品中的总酸含量。测定结果包括了未离解的酸的浓度和已离解的酸的浓度。 2.仪器与试剂 （1）仪器酸碱滴定装置；分析天平，感量分别为0.0001g及0.001g；组织捣碎机；研钵。 （2）实验用水实验用水应符合GB/T6682规定的二级水规格或蒸馏水，使用前应经煮沸，冷却。 （3）试剂 ①NaOH标准滴定溶液（0.1mol/L） ②1%酚酞溶液称取1g酚酞，溶于60ml95%乙醇中，用水稀释 至100ml。 3.实验步骤 （1）样品预处理 ①固体样品。取有代表性的固体样品至少200g，用捣碎机捣碎 至均匀，置于密闭玻璃容器内。 ②固、液样品。取按比例组成的固、液样品至少200g，用研 钵或组织捣碎机捣碎混匀后置于密闭的玻璃容器内。

③含二氧化碳的液体样品。至少取200g样品至500ml烧杯中置于电炉上，边搅拌边加热至微沸腾，保持2min，冷却，称量，用煮沸过的水补至煮沸前的质量，置于密闭玻璃容器中。 ④不含二氧化碳的液体样品。充分混匀均匀，置于密闭玻璃容器内。 （2）测定试液的制备 ①液体样品。若总酸含量小于或等于4g/kg，将试液用快速滤纸过滤。收集滤液，用于测定。若总酸含量大于4g/kg，称取10~50g 样品，用煮沸过的水定容至250ml，过滤。收集滤液，用于测定。 ②固体、半固体样品。称取均匀样品10~50g，精确至0.001g，置于烧杯中。用约80 煮沸过的水150ml将烧杯中的内容物转移到250ml容量瓶中，置于沸水浴中煮沸30min（摇动2~3次，使试样中的有机酸全部溶解于溶液中），取出，冷却至室温，用煮沸过的水定容至250ml。用快速滤纸过滤。收集滤液，用于测定。 （3）样品测定 ①准确吸取试样滤液25~50ml，使之含0.035~0.07g酸，置于250ml 锥形瓶中，加水40~60ml及0.2 1%的酚酞指示剂，用0.1mol/L NaOH 标准溶液滴定至微红色且30s不褪色。记录消耗0.1mol/L NaOH标准滴定溶液的体积（V1）。同一被测样品须滴定两次。 ②用水代替样品做空白试验，操作相同。记录消耗0.1mol/L NaOH 标准滴定溶液的体积（V2）。 （4）实验数据记录见表

水果酸度测定

水果中总酸度的测定 一、目的要求： 1.学会水果样品的预处理方法 2.掌握用酸碱滴定法测水果样品中总酸度的原理和方法 3、学会合理制定分析项目的顺序，做到合理安排分析时间，合理处理样品。 4、能熟练制备实训过程中所需要的标准溶液。 5、能规范记录数据并进行数据处理。 二、原理： ，因此，不能用直接法配制标准1. NaOH标准溶液的标定 NaOH 易吸收水分及空气中的 CO 2 溶液。需要先配成近似浓度的溶液，然后用邻苯二甲酸氢钾为基准物进行标定。以酚酞为指示剂，当滴定至终点溶液呈浅红色，且 30S不褪色时。反应如下： KHC8H4O4+NaOH=KNaC8H4O4+ H2O 2.水果总酸度的测定根据酸碱中和原理，用碱标准溶液滴定试样液中的酸时，以酚酞威指示剂。当滴定至终点溶液呈浅红色，且 30S不褪色时，根据滴定时消耗的标准 NaOH 溶液的体积，可算出试样中的总酸度。其反应如下： HAC+NaOH→NaAc+H2O 三、所需仪器、试剂： 仪器：酸碱式滴定管、锥形瓶、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、胶头滴管、洗耳球、水浴锅、铁架台、电子天平、玻璃棒、小纸片、干燥的纱布 的蒸试剂： 0.1000mol/L NaOH 溶液、邻苯二甲酸氢钾、酚酞指示剂、水果试样、无CO 2 馏水 四、实验步骤： 1. 0.1000mol/LNaOH 标准溶液的配制和标定 称取固体NaOH约2g放置在500mL的烧杯中，先加入100ml溶解，再加水稀释成 500mL 溶液，混匀，放入烧杯中，待标定。 用减量法准确称取0.41～0.45g邻苯二甲酸氢钾3份，分别放入250mL锥形瓶中，加25mL 无CO2蒸馏水溶解。然后加1~2滴酚酞指示剂，用 NaOH 标准溶液滴定至终点（至粉红色，并保持30s不褪色为终点）。记录每次消耗 NaOH 溶液的体积。 2.试样处理： 取水果试样，需去皮、去柄、去核，切成块状，置于搅拌机中捣碎并混匀。准确移取 25mL 水果试样，加100mL无CO 的蒸馏水，稀释定容为250mL溶液。然后倒入烧杯中在 75～80℃ 2 水浴上加热30分钟。冷却后过滤，滤液倒入容量瓶中备用。 3.滴定： 准确吸取20mL滤液三份于250mL锥形瓶中，各加25mL水稀释。加1-2滴酚酞指示剂，用NaOH标准溶液滴定至终点，至粉红色30S不褪色。记录NaOH消耗量的体积，平行三次。 五、计算公式 C NaOH=m KHC8H4O4/（V NaOH×M KHC8H4O4）X1000 ρHAc=（C NaOH×V NaOH×M Hac×10-3)/(20.00/250.0×25.00)

抗坏血酸(维生素C)的测定方法

抗坏血酸（维生素C）的测定方法（1） 在测定维生素C的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法，2、4－二硝基苯肼法作为第二法。 一、荧光法 1．原理 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022 g/ml。 2．适用范围 GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 3．仪器 3．1．实验室常用设备。 3．2．荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。 3．3．打碎机。 4．试剂 本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。 （1）偏磷酸－乙酸液：称取15g偏磷酸，加入40ml冰乙酸及250ml水，搅拌，放置过夜使之逐渐溶解，加水至500ml。4℃冰箱可保存7～10天。 （2）0.15 mol/L硫酸：取10ml硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200ml。 （3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液，其余同4.1.配制。 （4）50％乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），加水至1000ml。 （5）硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100ml乙酸钠溶液（4.4）中。临用前配制。（6）邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml。 （7） 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为10.75ml，磨溶后用水稀释至250ml。 变色范围：pH=1.2 红色 pH=2.8 黄色 pH＞4.0 兰色 （8）活性炭的活化：加200g炭粉于1L 1+9盐酸中，加热回流1~2h，过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于110~120℃烘箱中干燥，备用。 （9）标准 抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：准确称取50mg抗坏血酸，用溶液（4.1）溶于50ml容量瓶中，并稀释至刻度。 抗坏血酸标准使用液（100μg/ml）: 取10ml抗坏血酸标准液，用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml。定容前试pH值，如其pH＞2.2时，则应用溶液（4.3）稀释。 标准曲线的制备：取下述"标准"溶液（抗坏血酸含量10μg/ml）0.5、1.0、1.5和2.0ml 标准系列，取双份分别置于10ml带盖试管中，再用水补充至2.0ml。 5.操作步骤 5.1 样品制备 全部实验过程应避光。 称取100g鲜样，加100g偏磷酸-乙酸溶液，倒入打碎机内打成匀浆，用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度。如呈红色，即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释，若呈黄色或兰色，则用偏磷

实验十五 抗坏血酸含量测定

实验十五抗坏血酸含量测定（2,6-二氯酚靛酚法） 一、目的 学习维生素C的生理功能和性质，掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C 的原理和方法。 二、原理 维生素C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体缺乏维生素C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸。此外维生素C还具有预防和治疗感冒以及抑制致癌物质产生的作用。 维生素C的分布很广，尤其在水果（如弥猴桃、橘子、柠檬、山植、袖子、草莓等）和蔬菜（觅菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等）中的含量更为丰富。 不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。 维生素C在金属铜和抗坏血酸氧化酶存在下极易氧化，因此，在用铜制品做食品时，维生素C易丢失。此外在碱性溶液中，维生素C也易被破坏，而在酸性溶液中比较稳定。利用它具有的还原性质可测定其含量。还原型抗坏血酸能被染料2，6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型，该染料在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后变为无色。因此用2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶

液时，维生素C尚未全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。 三、仪器、试剂和材料 1．仪器 （1）天平 （2）组织捣碎机 （3）微量滴定管（5ml） （4）容量瓶（50ml） （5）刻度吸管（5ml，10ml） （6）锥形瓶（100ml） 2．试剂 （1）l％草酸溶液：草酸1g溶于100ml蒸馏水中 （2）2％草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中 （3）抗坏血酸标准溶液（0.1 mg／ml）：精确称取10mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）用1％草酸溶液溶解并定容至100ml。此溶液应贮存于棕色瓶中，最好临用前配制。 （4）0．05％2, 6-二氯酚靛酚溶液：称取500mg 2, 6-二氯酚靛酚溶于300ml 含104mg碳酸氢钠（A.R）的热水中，冷却后用蒸馏水稀释至1000ml，滤去不溶物，贮存于棕色瓶中，4℃冷藏可稳定一周，临用前以标准抗坏血酸标定。 3．材料 新鲜水果或蔬菜 四、操作步骤 1．提取抗坏血酸 取新鲜水果或蔬菜50g，加入50ml 2％草酸溶液，用组织捣碎机打成匀浆。过滤取得滤液，滤饼可用少量2％的草酸洗几次，合并滤液，记录滤液体积。2．2, 6-二氯酚靛酚溶液的标定 准确吸取4.0 ml抗坏血酸标准液（含0.4g抗坏血酸）于100ml锥形瓶中，加16ml 1％草酸溶液，用2, 6-二氯酚靛酚滴定至淡红色（15秒内不褪色即为终点）。记录所用染料溶液的体积，计算出lml染料溶液所能氧化抗坏血酸的量。 3．样品滴定 准确吸取样品提取液两份，各20ml，分别放入两个100ml锥形瓶中，滴定方法同2中的操作，另取20ml 1％草酸作空白对照滴定。 五、结果处理 取两份样品滴定所耗用染料体积的平均值，代入下式计算100g样品中还原型抗坏血酸的含量： 杭坏血酸含量（mg／100g样品）＝（V1－V2）·V·M·100/V3·W 式中，V1为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数；

总酸的测定(滴定法)

-总酸的测定（滴定法）- 一、原理 果汁具有酸性反应，这些反应取决于游离态的酸以及酸式盐存在的数量。总酸度包括未解离酸的浓度和已解离酸的浓度。酸的浓度以摩尔浓度表示时，称为总酸度。含量用滴定法测定。果蔬中含有各种有机酸，主要有苹果酸、柠檬酸、酒石酸、草酸……。果蔬种类不同，含有机酸的种类和数量也不同，食品中酸的测定是根据酸碱中和的原理，即用标定的氢氧化钠溶液进行滴定。 二、材料、仪器与试剂 （一）材料：桃、杏、苹果、蔬菜等 （二）仪器：碱式滴定管（20ml）、容量瓶（100ml）、移液管（10ml）、烧杯（100ml）、研钵或组织捣碎机、天平、漏斗、滤纸等。 （三）试剂 1．0.1mol/L氢氧化钠：称4.0g氢氧化钠定容至1000ml，然后用0.1mol/L 邻苯二甲酸氢钾标定，若浓度太高可酌情稀释。 2．1%酚酞指示剂：称1.0g酚酞，加入100ml 50%的乙醇溶解。 三、操作步骤 准确称取混合均匀磨碎的样品10.0g（或吸10.0ml样品液），转移到100ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度、摇匀。用滤纸过滤，准确吸取滤液20ml放入100ml 三角瓶中，加入1%酚酞2滴，用标定的氢氧化钠滴定至初显粉色在0.5min内不褪色为终点，记下氢氧化钠用量，重复三次，取平均值。 四、计算 V C×N×折算系数 总酸度（%）=——×————————×100 W V1 式中：V——样品稀释总体积（ml） V1——滴定时取样液体积 C——消耗氢氧化钠标准液毫升数 N——氢氧化钠标准液摩尔浓度 W——样品重量（g） 折算系数：即不同有机酸的毫摩尔质量（g/mmol），食品中的总酸度往往根据所含酸的不同，而取其中一种主要有机酸计量。食品中常见的有机酸以及其毫摩尔质量折算系数加下： 苹果酸——0.067（苹果、梨、桃、杏、李子、番茄、莴苣） 醋酸——0.060（蔬菜罐头） 酒石酸——0.075（葡萄） 柠檬酸——0.070（柑橘类） 乳酸——0.090（鱼、肉罐头、牛奶）

抗坏血酸含量测定

抗坏血酸含量测定 试剂配制： 6%和10% (wt/vol) TCA（三氯乙酸），室温放置（~20℃） 43% (vol/vol) H3PO4 (1:1稀释85% H3PO4)，室温放置 3% (wt/vol) FeCl3，室温放置 75 mM phosphate buffer (pH 7.0)，用磷酸氢二钾和磷酸氢二钾配制 10 mM DTT，冰浴 0.5% (wt/vol) NEM，冰浴 4% (wt/vol) α-α-bipyridyl，用70%乙醇溶解，冰浴 ASA标品根据样品浓度配制（标曲） 试验步骤： 1.植物材料（约40mg）分装到离心管中，并立即在液氮中冷冻； 2.加入1mL 6% TCA 到2 mL离心管中，离心（13000 g, 4℃5min），并将上清 液转移到一个新的2mL离心管中。（所有提取物保持在冰上并立即开始测定）； 3.抗坏血酸试验测定空白、标准和样品，同时测定还原型AA和总AA（每个 样品四次测定）； 4.加入10μl 75mM磷酸盐缓冲液和20μl 6% TCA（空白），AA标准品(0.15 -10mM)或20μl 上清至96 孔板； 5.加10μl 10mM DTT到离心管中，室温孵育10分钟； 6.加10 0.5% NEM到提取总AA管中除去多余的DTT并孵育至少30 s； 7.加20μl水至还原型AA测定管中，将DTT和NEM的体积加到总AA测定试 管中； 8.加入50μl 10% TCA, 40 μl 43% H3PO4, 40 μl 4% α-α-bipyridyl 和20 μl 3% FeCl3至所有测定管中； 9.37℃孵育1 h； 10.测定525nm下吸光值。 计算：

实验六 水果中总酸及pH的测定

实验六水果中总酸及pH的测定 一、目的要求? 1.?进一步熟悉及规范滴定操作。? 2.?学习及了解碱滴定法测定总酸及有效酸度的原理及操作要点。? 3.?掌握水果中总酸度及有效酸度的测定方法和操作技能。? 4.?掌握pH计的维护和使用方法。 二、实验原理? 1.?总酸测定原理 水果中的有机酸在用标准碱液滴定时，被中和成盐类。以酚酞为指示剂，滴定至溶液呈现微红色，? 30s不褪色为终点。根据消耗标准碱液的浓度和体积，计算水果中总酸的含量。? 2.?有效酸测定原理 利用pH计测定水果中的有效酸度?(pH)，是将玻璃电极、饱和甘汞电极插入榨取的果汁中组成原电池，该电池电动势的大小与果汁pH有关。即在25℃时，每相差一个pH单位就产生的电池电动势，利用酸度计测量电池电动势并直接以pH表示，故可从酸度计上直接读出果汁的pH。 三、仪器与试剂? 1.?仪器 水浴锅，酸度计，玻璃电极，饱和甘汞电极，现在多用复合电极。? 2.?试剂? ?/?L?NaOH标准溶液，酚酞乙醇溶液，pH=?标准缓冲溶液。 四、实验步骤? 1.?总酸度的测定? (1)?样液制备将样品用组织捣碎机捣碎并混合均匀。称取适量样品，用15mL无CO2?蒸馏水将其移入250mL容量瓶中，在75~80℃水浴上加热，冷却后定容，用干滤纸过滤，弃去初始滤液25mL，收集滤液备用。? (2)?滴定准确吸取上述制备滤液50mL加入酚酞指示剂3~4滴，用/LNaOH标准溶液滴定至微红色30s不褪为终点。记录消耗NaOH标准溶液的体积。? 2.?水果中有效酸度?(pH)?的测定? (1)?样品处理将水果样品榨汁后，取汁液直接进行pH测定。? (2)?酸度计的校正 ①开启酸度计电源，预热30min，连接玻璃及甘汞电极，在读数开关放开的情况下调零。 ②测量标准缓冲溶液的温度，调节酸度计温度补偿旋钮。