尼古丁通过Nme2介导的端粒缩短促进小鼠生精细胞凋亡
目录
尼古丁通过NME2介导的端粒缩短促进小鼠生精细胞凋亡 (2)
摘要 (2)
ABSTRACT (4)
第一章绪论 (10)
1.1 哺乳动物精子发生的生物学过程 (10)
1.2 吸烟与男性生殖 (13)
1.3 端粒与生殖 (14)
1.4 NME2蛋白与端粒酶结合影响其活性 (15)
1.5 端粒长度及端粒酶活性检测方法 (15)
第二章尼古丁对小鼠生精细胞凋亡和端粒长度的影响 (18)
2.1 背景介绍 (18)
2.2 实验仪器 (19)
2.3 实验试剂 (19)
2.4 试剂配制 (19)
2.5 实验方法 (20)
2.5.1尼古丁处理小鼠模型的建立 (20)
2.5.2小鼠睾丸样品的收集 (20)
2.5.3小鼠精子样品的收集 (20)
2.5.4饱和酚法提取基因组DNA (21)
2.5.5小鼠睾丸切片制作 (21)
2.5.6 TUNEL法检验小鼠睾丸切片中凋亡细胞 (21)
2.5.7 Realtime-PCR法检测端粒长度 (22)
2.5.8 Realtime-PCR法检测端粒酶活性 (23)
2.5.9数据统计 (23)
2.6 实验结果 (23)
2.6.1尼古丁处理使雄性小鼠小鼠生精细胞凋亡增加 (23)
2.6.2尼古丁对小鼠睾丸与精子端粒长度的影响 (25)
2.6.3尼古丁对小鼠睾丸端粒酶活性的影响 (26)
2.7 结果讨论 (26)
第三章尼古丁促进小鼠端粒凋亡的可能机制研究 (28)
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万方数据
3.1 背景介绍 (28)
3.2 实验仪器 (28)
3.3 实验试剂 (29)
3.4 试剂配制 (30)
3.5 实验方法 (32)
3.5.1 TRIzol法提取RNA、DNA和蛋白质 (32)
3.5.2反转录 (33)
3.5.3从细胞中提取蛋白 (34)
3.5.4免疫蛋白印迹（Western blot）实验 (34)
3.5.5亚硫酸氢盐测序（BSP）实验 (36)
3.5.6甲基化水平影响基因表达验证 (37)
3.5.7 Realtime-PCR法检测端粒长度 (37)
3.5.8 Realtime-PCR法检测端粒酶活性 (39)
3.5.9小鼠Nme2开放阅读框的克隆 (39)
3.5.10小鼠Nme2真核表达质粒的构建 (40)
3.5.11 Nme2在Hela细胞中诱导表达 (41)
3.5.12尼古丁处理Hela细胞模型的构建 (41)
3.5.13 TUNEL法检验爬片细胞凋亡情况 (41)
3.6 实验结果 (42)
3.6.1 (42)
3.6.2实验目标基因筛选 (42)
3.6.3尼古丁对小鼠睾丸中Nme2基因表达情况的影响 (43)
3.6.4尼古丁对Nme2基因启动子甲基化情况的影响 (43)
3.6.5 Nme2基因启动子甲基化情况对表达影响的验证 (44)
3.6.6 Nme2过表达体系鉴定 (45)
3.6.7 NME2蛋白过量表达及尼古丁处理细胞中端粒酶活性降低 (46)
3.6.8 NME2蛋白过量表达及尼古丁处理细胞中端粒长度缩短 (47)
3.6.9 NME2蛋白过量表达及尼古丁处理促进细胞凋亡 (48)
3.7 结果讨论 (50)
3.7.1尼古丁促使小鼠睾丸中Nme2基因表达 (50)
3.7.2 NME2蛋白过表达和尼古丁处理能在细胞内影响端粒酶活性和端粒长度
(50)
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万方数据
3.7.3 NME2蛋白过表达和尼古丁处理能促进Hela细胞凋亡 (51)
第四章总结与展望 (53)
参考文献 (55)
致谢 (60)
攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 (62)
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万方数据