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酶学分析方法及酶活性测定复习与练习

一、有关酶的基本理论知识

1、酶浓度与酶促反应速度的关系是？

2、底物浓度与酶促反应速度的定量关系式是？

3、影响酶促反应速度的因素主要有哪些？

4、Km及Vm代表的含义及它们在临床酶活性测定中应用及意义。

二、酶活性测定的基本知识

1、酶活性的概念及酶活性单位如何表示表示

2、目前酶活性单位有-------、----------、-------------三种表示方式。？

3、解释酶活性国际单位、催量（Katal）的概念，并比较两者的关系？

4、酶活性单位的计算：几类计算公式要求理解并熟练应用。

1）通用公式

2）惯用单位的计算公式（测定产物生成类的计算公式；测定底物消耗类的计算公式）3）**连续监测法根据摩尔吸光系数进行酶活性浓度的计算；

**连续监测法因素F值（全自动化生化仪多用K表示）的计算和应用？

三、酶活性的测定方法

1、酶活性测定的基本原则是什么？

2、酶反应时间进程曲线有————、—————、————三个时期

酶活性测定是在————期测定，此时期反应速度不受------------的影响也称------期3、根据反应时间，酶活性测定分为两类方法是---------和--------------两种

从概念、结果计算、优缺点叙述并比较两类方法？其中连续监测法

4、按检测对象的酶活性测定方法分为----------和------------法；其直接法的方法类型有哪些？

5、何谓酶偶联反应？写出酶偶联反应的基本模式？什么是待测酶、辅助酶、指示酶？

6、何谓工具酶？酶作为工具应用于临床生化检验可进行酶活性测定或进行代谢物浓度（底物）的测定时一般有哪两大指示系统？何谓-Trinder反应？Trinder反应的主要缺点或影响因素有哪些？

7、何谓同工酶？同工酶分析的常用原理有哪些？检测同工酶有何临床意义？并举例说明？

8、酶活性测定条件及影响因素有哪些？

9、从几个酶类测定（如AMY、ALT、LD、ALP|等）的实验操作中，讨论酶活性测定应注意的问题？

10、试述影响血清酶的生理变异有哪些？

11、酶活性测定，标本的采集、处理、贮存及样品试剂比有何要求？

四、体液酶测定：

1、常用于临床协助诊断的血浆酶有哪些？用于协助诊断心肌损伤、肝脏疾病、胰腺疾病、骨骼骨骼肌、前列腺疾病等的常用的血清酶有哪些？常用的临床诊断酶谱有哪些？

2、将各血清酶活性测定的方法学原理进行分析归纳，请总结出有哪几大反应基础。

3、书写出AMS、ALP两种（化学比色法、（连续监测法）方法及ALT、AST、GGT、LDH、CK酶测定（连续监测法）反应原理、主要试剂成分和作用？影响结果准确性因素有哪些？评价LD-L反应和

LD-P反应试剂盒的优缺点？

4、血清ALT、AST、ALP、GGT、AMS、CK、LD等酶测定的临床意义？

五、选择题：

A 1、K m是指反应速度为最大反应速度一半时的

A 底物浓度

B 酶浓度

C 激活剂浓度

D 温度

E 抑制剂浓度

D 2、根据1976年国际生化学会生化委员会规定，酶的一个国际单位是指

A 最适条件下，每小时催化生成1mmol/l产物的酶量

B 最适条件下，每分钟催化生成1mmol/l产物的酶量

C 最适条件下，每小时催化生成1umol/l产物的酶量

D 特定条件下，每分钟催化1umol底物产生变化所需的酶量

E 25℃及其它最适条件下，每分钟催化1umol底物产生变化所需的酶量

E 3、IFCC推荐法测定AST的辅助酶是

A G6PD

B HK

C PO

D D LDH

E MDH

B 4、以NAD（P）或NAD（P）H为指示系统的酶活性测定主波长应设置为：

A 293nm

B 340nm

C 405nm

D 380nm

E 500nm

D 5、以ＮＡＤ还原为ＮＡＤＨ反应为基础的生化分析，采用波长及吸光度变化为：

Ａ、340nm Ａ下降Ｂ、405nm Ａ上升

Ｃ、500nm Ａ下降Ｄ、340nm Ａ上升

Ｅ、405nm Ａ下降

A 6、淀粉酶测定显著升高主要见于：

Ａ、溃疡病穿孔Ｂ、急性胰腺炎Ｃ、甲亢

Ｄ、糖尿病Ｅ、肾病综合症

C 7、正常成人血清LD同工酶电泳区带的结果应符合：

A LD1>LD2>LD3>LD4>LD5

B LD1

C LD2>LD1>LD3>LD4>LD5

D LD3>LD1>LD2>LD4>LD5

E LD4>LD1>LD2>LD3>LD5

B 8、IFCC推荐法测定ALP选择用哪种缓冲液

A 乙二胺

B AMP

C Tris

D 甘氨酸

E 二乙醇胺

C 9、单底物酶促反应的最适底物浓度的确定原则：

A 1Km

B 2Km

C 10~20Km

D 100Km

E 越大越好

B 10、前列腺疾病最敏感的指标是：

A ALP

B ACP D CHE D AMY E AST

C 11自动化生化分析仪测定酶活性常用计算K值的主要原因是

A 方便

B 准确

C 无标准品和校正品

D 酶校正品不准确

D 12、GPT测定时，底物液中的α酮戊二酸的量比丙氨酸的量小近百倍的原因是

A 防止酶促反应时，丙酮酸生成过量

B 保证酶有足够的底物

C 防止基质中PH小于7.4

D 减少α酮戊二酸与2．4二硝基苯肼的呈色反应

E α酮戊二酸过多可激活酶的活性

D 13、AST测定（速率法）的试剂中，不含有

A 天冬氨酸

B NADH

C α－酮戊二酸

D 丙氨酸

E Tris缓冲液

C 14、酶联反应中最后一个外加酶称为：

A 偶联酶

B 辅酶

C 指示酶

D 工具酶

E 同工酶

D 15、ALP测定（King法）其底物是

A 铁氰化钾

B 酚

C 4－AAP

D 磷酸苯二钠

E 丙氨酸

B 16、血清ＡＬＴ测定中，标准曲线为抛物线的干扰物为

Ａ丙酮酸Ｂ２．４－二硝基苯肼Ｃ谷氨酸

Ｄａ－酮戊二酸Ｅ２．４－二硝基苯腙

B 17、ＡＬＴ测定（Ｒ－Ｆ）终止酶促反应是用

Ａ０．４mol／ＬＮaＯＨＢ２．４二硝基苯肼

Ｃ a－酮戊二酸２．４二硝基苯腙Ｄ磷酸盐缓冲液

Ｅ碳酸盐缓冲液

A 18、血清ＡＬＴ测定（Ｒ－Ｆ法），下列哪些情况会导致结果偏低：

Ａ制作标准曲线所用的丙酮酸钠变质

Ｂ标本严重溶血Ｃ对照管混浊未被发现

Ｄ水浴温度偏高（升至５０℃）

Ｅ血清与基质混合匀后未及时放入３７℃水浴保温

A 19、１００n Kat单位酶量等于

Ａ６ＩＵＤ２７８ＩＵ

Ｂ２７．８ＩＵＥ１６６７ＩＵ

Ｃ１６６．７ＩＵ

E 20、根据米氏方程，不符合[S]与Km的关系的是

A 当[S]＞＞Km时，反应速度与底物浓度无关，成零级反应

B 当[S]＜＜Km时，反应速度与底物浓度成正比，成一级反应

C 当[S]＝Km时，V＝Vm／2

D 度量两者的单位是相同的

E 当[S]＝Km／3时，V＝67％Vm

A 丙氨酸+α酮戊二酸→丙氨酸+谷氨酸

B 天冬氨酸+α酮戊二酸→草酸乙酸+谷氨酸

C 肌酸+ATP →磷酸肌酸 + ADP

D 丙酮酸 +NADH →乳酸 + NAD

E 草酸乙酸 +NADH →苹果酸 + NAD

B 21、AST催化的反应

D 22、LDH催化的反应

C 23、CK催化的反应

Ａ磷酸苯二钠

Ｂ铁氰化钾

Ｃ４－ＡＡＰ

Ｄ酚

Ｅ碱性试剂

B 24、ＡＬＰ（Ｋing）测定氧化剂

C 25、显色剂

D 26、标准物

A 27\ 底物

A ALT

B ALP

C GGT

D AMS

E CK-MB

A 28、肝细胞急性损伤最好的指标

C 29、肝占位性病变

D 30、急性胰腺炎

E 40、心肌梗死

B 41、骨骼疾病

A NAD（P）H指示系统

B POD指示系统

C 两者均有

D 两者均无

C 42、葡萄糖测定

C 43、TG测定

B 44、胆固醇测定

B 45、尿酸测定

D 46、尿TP测定

（ALT AST 胆汁酸胆红素、肌酐等）

A 平衡法

B 速率法

C 两者均有

D 两者均无

A 47、GOD-POD测葡萄糖

B 48、碱性苦味酸法测肌酐

C 49、GLDH测尿素

A 酶试剂法测定

B 离子选择电极法测定

C 两者均有

D 两者均无

C 50、血清钠、钾测定

C 51、血清氯、钙的测定

A 52、血清磷的测定

D 53、血清总蛋白、清蛋白测定

A 54、血清ALT、AST测定

ABCD 55、酶偶联方法测定酶活性的有：

A ALT

B AST

C CK

D AMY

E LDH

ABCD 56、下列哪些因素影响酶活性的测定

A 缓冲液的种类和离子强度

B PH

C 反应温度

D 激活剂浓度

E 比色皿光径

BC 57、酶促反应指示物的检测波长为405nm的有

A NADH

B 4-硝基酚

C 5-氨基-2-硝基苯甲酸

D 磷钼酸

E NADPH ABCD 58、ＡＬＴ测定时，ＵA-ＢA的意义有

Ａ消除２．４－二硝基苯肼溶液的Ａ值

Ｂ消除a－酮戊二酸－２．４－二硝基苯腙的Ａ值

Ｃ消除血清色素的干扰

Ｄ消除血可能存在的酮酸的干扰

BC 59、属于Trinder反应的色原物是:

A H2O2

B 酚

C 4-AAP

D POD

E COD

ACDE 60．以下说法正确的是

A．当[S]＜＜Km时，反应速度与底物浓度成正比，成一级反应

B．当[S]＞＞Km时，反应速度与酶浓度成正比，酶促反应呈一级反应

C．零级反应时V=Vman=K[E]

D．一级反应是用工具酶测定各种代谢物浓度的方法学基础

E．零级反应是用于测定酶活性或浓度的方法学基础

ABCD 61．溶血时对测定结果有影响的血清酶是

A、CK

B、LD

C、ALT

D、AST

E、GGT

ABE 62、ALP活性升高可见于

A、多发性骨肿瘤

B、骨折 C 贫血D、甲低E、阻塞性黄疸

AE 63、G6PD可用于测定

A、葡萄糖

B、淀粉酶

C、乳酸脱氢酶

D、碱性磷酸酶

E、肌酸激酶

ACDE 64、下列代谢物与其酶法测定所用试剂的组合，正确的是

A、尿酸—尿酸酶—过氧化氢酶

B、葡萄糖—葡萄糖氧化酶—葡萄糖-6-磷酸脱氢酶

C、尿素-尿素酶-谷氨酸脱氢酶

D、三酰甘油—脂蛋白脂肪酶—甘油激酶

E、胆固醇—胆固醇氧化酶—过氧化物酶

ABDE 65、下列酶活性测定描述正确的是

A、可测定产物的生成量

B、可测定底物的消耗量

C、与底物浓度无关

D、需最适温度

E、需最适的酸碱度

补充选择题：

A 1当底物浓度大于Km时，此时的反应速度为

A．零级反应B．一级反应C．二级反应D．混合级反应E．无法确定反应级

D 2、为保证酶动力学分析，底物浓度最好是：

A．0.5Km B．2Km C．2~5Km D．10~20Km E．100Km

3、连续监测法测定ALT所用的底物通常是：对硝基苯酚磷酸钠

C 4、测定下列哪种血清酶有助于鉴别ALP的来源

A．ACP B．AMS C．GGT D．LD E．CK

B 5、疾病时血清及尿液淀粉酶升高，应除外：

A．急性胰腺炎B．肝炎C．肠梗阻D．急性腮腺炎E．溃疡病穿孔

其它练习：

1、以NAD+还原为NADH反应为基础的生化分析,采用波长是___________nm, 吸光度变化为________________. 当测定时其S:R=1:20时(酶速率法) 结果计算是IU/L=△A/min ×factor, factor为

_____________（附NADH在340nm毫克分子吸光系数为6．22）

2、ＳＧＰＴ测定中底物成分要求ＤＬ丙氨酸的浓度为２００mmol/L a－酮戊二酸浓度为２mmol/L，现欲配制５００ml底物，各应取多少mg？

（ＤＬ丙氨酸ＭＷ＝８９， a－酮戊二酸ＭＷ＝１４６）

3、ＣＫ测定实验原理中酶联的催化顺序＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

4、ＳＧＰＴ测定（Ｒ－Ｆ）的底物是＿＿＿＿＿，＿＿＿＿＿＿，

显色剂是＿＿＿＿＿＿，酶作用时间＿＿＿＿＿分。

5、ＡＳＴ催化＿＿＿＿＿＿＿＿＋＿＿＿＿＿＿＿生成＿＿＿＿＿＿，＿＿＿＿＿＿＿。在指示酶＿＿＿＿＿＿的催化下，使＿＿＿＿＿＋＿＿＿＿＿＿生成＿＿＿＿＿＿＿＋＿＿＿＿＿＿＿＿，在波长＿＿＿nm下，连续监测吸光度＿＿＿＿＿变化，从而测定ＡＳＴ的活力。

6、0.1ml血清，在３７℃水浴中，使底物水解产生０．２mg酚，该标本的ＡＫＰ活力是多少金氏单位？（列出计算式，算出结果）

。

蛋白质与酶工程复习资料

酶工程复习提纲第一章绪论 1.酶及酶工程的概念。酶：是生物体内一类具有催化活性和特殊空间构象的生物大分子物质。酶工程：利用酶的催化作用，在一定的生物反应器中，将相应的原料转化成所需产品的一门工程技术。(名词解释) 2.了解酶学的发展历史，尤其是一些关键事件。 1833年，Payen和Persoz发现了淀粉酶。1878年，Kuhne首次将酵母中进行乙醇发酵的物质称为酶。给酶一个统一的名词，叫Enzyme，这个词来自希腊文，其意思“在酵母中”。 1902年，Henri提出中间产物学说。1913年，Michaelis and Menton推导出酶催化反应的基本动力学方程，米氏方程：V=VmS/（Km+S）。1926年，Summer分离纯化得到脲酶结晶。人们开始接受“酶是具有生物催化功能的蛋白质”。Cech and Altman于1982和1983年发现具有催化活性的RNA即核酸类酶，1989年获诺贝尔化学奖。现已鉴定出5000多种酶，上千种酶已得到结晶，而且每年都有新酶被发现。 3.了解酶在医药、食品、轻工业方面的应用。医药：（1）用酶进行疾病的诊断：通过酶活力变化进行疾病诊断，谷丙转氨酶/谷草转氨酶用于诊断肝病、心肌梗塞等，酶活力升高；葡萄糖氧化酶用于测定血糖含量，诊断糖尿病。（2）用酶进行疾病的治疗：来源于蛋清、细菌的溶菌酶用于治疗各种细菌性和病毒性疾病；来源于动物、蛇、细菌、酵母等的凝血酶用于治疗各种出血病；来源于蚯蚓、尿液、微生物的纤溶酶用于溶血栓。（3）用酶制造各种药物：来源于微生物的青霉素酰化酶用于制造半合成青霉素和头孢菌素；来源于动物、植物、微生物的蛋白酶用于生产L-氨基酸。食品：生产低聚果糖，原料为蔗糖，所需酶为果糖基转移酶、蔗糖酶α（黑曲霉、担子菌）；生产低聚异麦芽糖，原料为淀粉，所需酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶、真菌α-淀粉酶（米曲霉）、α-葡萄糖苷酶（黑曲霉）、普鲁兰酶、糖化型α-淀粉酶（枯草杆菌）。轻工业：用酶进行原料处理；用酶生产各种轻工、化工产品；用酶增强产品的使用效果。

酶学与酶工程

Lecture1 酶学与酶工程 1、酶的概念，命名、酶的活性中心 1）酶是由活细胞产生的，具有催化活性和高度转移性的特殊蛋白质，是一类生物催化剂。酶工程：将酶学理论与化工技术相结合，研究酶的产生和应用的一门新的技术性学科，包括了酶制剂的制备、酶的固定化、酶的修饰与改造及酶反应器等方面。主要:酶的生产、酶的分离纯化、酶的固定化和酶生物反应器。化学酶工程：用化学手段修饰、改造、模拟天然酶，使其更适合人们的需要，主要包括天然酶、化学修饰酶、固定化酶以及化学人工合成酶的研究与应用。生物酶工程：用生物学的方法，特别是基因工程、蛋白质工程和组合库筛选法改造天然酶，创造性能优异的新酶，主要是抗体酶、杂合酶、进化酶和核酸酶的研究与应用。 2）命名：系统命名法！！催化下列反应酶的命名：ATP+D—葡萄糖→ADP+D—葡萄糖-6-磷酸该酶的正式系统命名是：ATP：葡萄糖磷酸转移酶，表示该酶催化从ATP中转移一个磷酸到葡萄糖分子上的反应。它的分类数字是：E.C.2.7.1.1 E.C代表按国际酶学委员会规定的命名第1个数字(2)代表酶的分类名称(转移酶类) 第2个数字(7)代表亚类(磷酸转移酶类) 第3个数字(1)代表亚亚类(以羟基作为受体的磷酸转移酶类) 第4个数字(1)代表该酶在亚-亚类中的排号(D葡萄糖作为磷酸基的受体） 3）活性中心必需基团：酶分子中氨基酸残基侧链的化学基团中，一些与酶活性密切相关的基因酶的活性中心：必需基团在空间结构上彼此靠近，组成具有特定空间结构的区域，能与底物特异结合并将底物转化为产物。 2、酶的分类、组成、结构特点和作用机制分类：按酶促反应的性质分类（六大类）：氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂解酶类、异构酶类、合成酶类全酶=酶蛋白+辅因子辅因子包括：有机辅因子（辅酶非共价结合/辅基非共价结合或共价结合）和金属辅因子（金属酶/金属激活酶） 3、酶作为催化剂的显著特点强大的催化能力：可以加快至1017倍；没有副反应，酶在较温和的条件下催化反应的进行；高度的专一性，各种酶都有专一性但是专一程度的严格性上有所差别；可调节性，包括了抑制剂和激活剂的调节、反馈抑制调节、共价修饰调节和变构调节等；

常用相关分析方法及其计算

二、常用相关分析方法及其计算在教育与心理研究实践中，常用的相关分析方法有积差相关法、等级相关法、质量相关法，分述如下。（一）积差相关系数 1. 积差相关系数又称积矩相关系数，是英国统计学家皮尔逊（Pearson ）提出的一种计算相关系数的方法，故也称皮尔逊相关。这是一种求直线相关的基本方法。积差相关系数记作XY r ，其计算公式为 ∑∑∑===----= n i i n i i n i i i XY Y y X x Y y X x r 1 2 1 2 1 ) ()() )(( (2-20) 式中i x 、i y 、X 、Y 、n 的意义均同前所述。若记X x x i -=,Y y y i -=，则（2-20）式成为 Y X XY S nS xy r ∑= (2-21) 式中n xy ∑称为协方差，n xy ∑的绝对值大小直观地反映了两列变量的一致性程度。然而，由于X 变量与Y 变量具有不同测量单位，不能直接用它们的协方差 n xy ∑来表示两列变量的一致性，所以将各变量的离均差分别用各自的标准差除，使之成为没有实际单位的标准分数，然后再求其协方差。即： ∑∑?= = )()(1Y X Y X XY S y S x n S nS xy r

Y X Z Z n ∑?= 1 (2-22) 这样，两列具有不同测两单位的变量的一致性就可以测量计算。计算积差相关系数要求变量符合以下条件：（1）两列变量都是等距的或等比的测量数据；（2）两列变量所来自的总体必须是正态的或近似正态的对称单峰分布；（3）两列变量必须具备一一对应关系。 2. 积差相关系数的计算利用公式 (2-20)计算相关系数，应先求两列变量各自的平均数与标准差，再求离中差的乘积之和。在统计实践中，为方便使用数据库的数据格式，并利于计算机计算，一般会将(2-20)式改写为利用原始数据直接计算XY r 的公式。即： ∑∑∑∑∑∑∑---= 2 22 2 ) () (i i i i i i i i XY y y n x x n y x y x n r (2-23) （二）等级相关在教育与心理研究实践中，只要条件许可，人们都乐于使用积差相关系数来度量两列变量之间的相关程度，但有时我们得到的数据不能满足积差相关系数的计算条件，此时就应使用其他相关系数。等级相关也是一种相关分析方法。当测量得到的数据不是等距或等比数据，而是具有等级顺序的测量数据，或者得到的数据是等距或等比的测量数据，但其所来自的总体分布不是正态的，出现上述两种情况中的任何一种，都不能计算积差相关系数。这时要求两列变量或多列变量的相关，就要用等级相关的方法。 1. 斯皮尔曼(Spearman)等级相关斯皮尔曼等级相关系数用R r 表示，它适用于两列具有等级顺序的测量数据，或总体为非正态的等距、等比数据。

《酶工程》期末复习题整理#(精选.)

第一章 1.酶工程：是生物工程的重要组成部分，是随着酶学研究迅速发展，特别是酶的推广应用，使酶学和工程学相互渗透、结合、发展而成的一门新的技术科学，是酶学、微生物学的基本原理与化学工程有机结合而产生的边缘科学技术。 2.化学酶工程：指自然酶、化学修饰酶、固定化酶及化学人工酶的研究和应用 3.生物酶工程：是酶学和以基因重组技术为主的现代分子生物学技术结合的产物，亦称高级酶工程。 4.酶工程的组成部分？答：酶工程主要指自然酶和工程酶（经化学修饰、基因工程、蛋白质工程改造的酶）在国民经济各个领域中的应用。内容包括：酶的产生；酶的分离纯化；酶的改造；生物反应器。5.酶的结构特点？答：虽然少数有催化活性的RNA分子已经鉴定，但几乎所有的酶都是蛋白质，因而酶必然具有蛋白质四级结构形式。其中一级结构是指具有一定氨基酸顺序的多肽链的共价骨架；二级结构为在一级结构中相近的氨基酸残基间由氢键的相互作用而形成的带有螺旋、折叠、转角、卷曲等细微结构；三级结构系在二级结构基础上进一步进行分子盘区以形成包括主侧链的专一性三维排列；四级结构是指低聚蛋白中各折叠多肽链在空间的专一性三维排列。具有低聚蛋白结构的酶（寡聚酶）必须具有正确的四级结构才有活性。具有活性的酶都是球蛋白，即被广泛折叠、结构紧密的多肽链，其氨基酸亲水基团在外表，而疏水基团向内。 6.酶活性中心：是酶结合底物和将底物转化为产物的区域，通常是整个酶分子中相当小的一部分，它是由在线性多肽链中可能相隔很远的氨基酸残基形成的三维实体。 7.酶作用机制有哪几种学说？答：锁和钥匙模型、诱导契合模型 8.酶催化活力的影响因素？答：底物浓度、酶浓度、温度、pH等。 9.酶的分离纯化的初步分离纯化的步骤？答：（一）材料的选择和细胞抽提液的制备 1.材料的选择：目的蛋白含量要高，而且容易获得 2.细胞破碎方法及细胞抽提液的制备。为了确保可溶性细胞成分全部抽提出来，应当使用类似于生理条件下的缓冲液。动物组织和器官要尽可能除去结缔组织和脂肪、切碎后放人捣碎机中。完全破碎酵母和细菌细胞。 3.膜蛋白的释放:膜蛋白存在于细胞膜或有关细胞器的膜上。按其所在位置大体可分为外周蛋白和固有蛋白两种类型 4.胞外酶的分离:胞外酶是在微生物发酵时分泌到发酵液中的。发酵后可通过离心或过滤将菌体从发酵液中分离弃去，所得发酵清液通常要适当浓缩，然后再作进一步纯化。目前常用的浓缩方法是超滤法。（二）蛋白质的浓缩和脱盐浓缩方法主要有：沉淀法、吸附法、干胶吸附法、渗透浓缩法、超滤浓缩法

酶工程复习题

酶工程复习题一、选择题： 1.下面关于酶的描述，哪一项不正确( ) （A）（答案）所有的蛋白质都是酶（B）酶是在细胞内合成的，但也可以在细胞外发挥催化功能（C）酶具有专一性（D）酶是生物催化剂 2.下列哪一项不是辅酶的功能( ) （A）转移基团（B）传递氢（C）传递电子（D）（答案）决定酶的专一性 3.下列对酶活力的测定的描述哪项是错误的( ) （A）酶的反应速度可通过测定产物的生成量或测定底物的减少量来完成（B）需在最适pH条件下进行（C）（答案）按国际酶学会统一标准温度都采用25℃ （D）要求[S]远远小于[E] 4.下列关于酶活性部位的描述，哪一项是错误的（A）活性部位是酶分子中直接与底物结合，并发挥催化功能的部位（B）活性部位的基因按功能可分为两大类：一类是结合基团，一类是催化基团（C）酶活性部位的集团可以是同一条肽链但在一级结构上相距很远的集团（D）（答案）不同肽链上的有关基团不能构成该酶的活性部位 5.酶的高效率在于（A）增加活化能（B）降低反应物的能量水平（C）增加反应物的能量水平（D）（答案）降低活化能

6.作为催化剂的酶分子，具有下列哪一种能量效应（A）增高反应活化能（B）（答案）降低反应活化能（C）增高产物能量水平（D）降低产物能量水平二、填空题 1.酶和菌体固定化的方法很多。主要可分为吸附法、结合法、交联法和热处理法 2.系统命名法根据酶所催化的反应类型，将酶分为6大类。即1、氧化还原酶；2、转移酶； 3、水解酶； 4、裂合酶； 5、异构酶； 6、合成酶（或称连接酶）。 3.酶分子修饰中，经过修饰的酶的特性会改变，即可提高酶活力，增加稳定性或降低抗原性。 4.决定酶催化活性的因素有两个方面，一是酶分子结构，二是反应条件。 5.酶的特点酶是生物催化剂；其反应条件温和、催化效率高；酶具有高的作用专一性；其化学本质具有蛋白质性质。 6.常用产酶菌有细菌（大肠杆菌）；霉菌（黑曲酶；青酶；木酶；根酶）；放线菌（链酶菌）；酵母等。 7.通常酶的固定化方法有吸附法共价键结合法交联法包埋法 8.对生产酶的菌种来说，我们必须要考虑的条件有，一是看它是不是致病菌，二是能够利用廉价原料，发酵周期短，产酶量高，三是菌种不易退化，四是最好选用能产生胞外酶的菌种，有利于酶的分离纯化，回收率高。 9. 酶的生产方法有提取法，发酵法和化学合成法。 10. 借助双功能试剂使酶分子之间发生交联作用，制成网状结构的固定化酶的方法称为交联法。 11. 酶的分离纯化方法中，根据目的酶与杂质分子大小差别有凝胶过滤法，超滤法和超离心法三种。 12.酶的特点酶是生物催化剂；其反应条件温和、催化效率高；酶具有高的作用专一性；其化学本质具有蛋白质性质。 13.在酶的发酵生产中，培养基要从营养的角度考虑碳源、氮源、无机盐、生长因素的调

第六章相关与回归分析方法

第六章相关与回归分析方法第一部分习题一、单项选择题 1.单位产品成本与其产量的相关；单位产品成本与单位产品原材料消耗量的相关 ( )。 A.前者是正相关，后者是负相关 B.前者是负相关，后者是正相关 C.两者都是正相关 D.两者都是负相关 2.样本相关系数r 的取值范围( )。 A.-∞＜r ＜+∞ B.-1≤r ≤1 C. -l ＜r ＜1 D. 0≤r ≤1 3.当所有观测值都落在回归直线 01y x ββ=+上，则x 与y 之间的相关系数( )。 A.r ＝0 B.r ＝1 C.r ＝-1 D.|r|＝1 4.相关分析与回归分析，在是否需要确定自变量和因变量的问题上( )。 A.前者无需确定，后者需要确定 B.前者需要确定，后者无需确定 C.两者均需确定 D.两者都无需确定 5.直线相关系数的绝对值接近1时，说明两变量相关关系的密切程度是( )。 A.完全相关 B.微弱相关 C.无线性相关 D.高度相关 6.年劳动生产率x(千元)和工人工资y(元)之间的回归方程为y=10+70x ，这意味着年劳动生产率每提高1千元时，工人工资平均( )。 A.增加70元 B.减少70元 C.增加80元 D.减少80元 7.下面的几个式子中，错误的是( )。 A. y= -40-1.6x r=0.89 B. y= -5-3.8x r ＝-0.94 C. y=36-2.4x r ＝-0.96 D. y= -36+3.8x r ＝0.98 8.下列关系中，属于正相关关系的有( )。 A.合理限度内，施肥量和平均单产量之间的关系 B.产品产量与单位产品成本之间的关系 C.商品的流通费用与销售利润之间的关系 D.流通费用率与商品销售量之间的关系 9.直线相关分析与直线回归分析的联系表现为( )。 A.相关分析是回归分析的基础 B.回归分析是相关分析的基础 C.相关分析是回归分析的深入 D.相关分析与回归分析互为条件 10.进行相关分析，要求相关的两个变量( )。 A.都是随机的 B.都不是随机的 C.一个是随机的，一个不是随机的 D.随机或不随机都可以 11.相关关系的主要特征是( )。 A.某一现象的标志与另外的标志之间存在着确定的依存关系 B.某一现象的标志与另外的标志之间存在着一定的关系，但它们不是确定的关系 C.某一现象的标志与另外的标志之间存在着严重的依存关系 D.某一现象的标志与另外的标志之间存在着函数关系 12.相关分析是研究( )。 A.变量之间的数量关系 B.变量之间的变动关系 C.变量之间相互关系的密切程度 D.变量之间的因果关系 13.现象之间相互依存关系的程度越低，则相关系数( )。 A.越接近于0 B.越接近于-1 C.越接近于1 D.越接近于0.5 14.在回归直线01y x ββ=+中，若10 β<，则x 与y 之间的相关系数( )。 A. r=0 B. r=1 C. 0＜r ＜1 D. —l ＜r ＜0 15.当相关系数r=0时，表明( )。 A.现象之间完全无关 B.相关程度较小 C.现象之间完全相关 D.无直线相关关系 16.已知x 与y 两变量间存在线性相关关系，且2 10,8,7,100x y xy n σσσ===-=，则x 与y 之间存在着( )。

分子生物学实验复习题附答案(最新整理)

分子生物学复习题实验一DNA的制备（1）为什么分子生物学实施时要担心EB？溴化乙锭（Ethidium bromide）是DNA诱变剂，溴化乙锭可以嵌入碱基分子中，导致错配。具有高致癌性(接触致癌) （2）DNA加样缓冲液的用途是什么？由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。线状DNA大小/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1 （4）琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理是什么 DNA分子在pH值高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场中向阳极移动。DNA分子在电场中通过琼脂糖凝胶而泳动，除了电荷效应以外，还有分子筛效应。由于DNA分子可片段的相对分子质量不同，移动速度也不同，所以可将相对分子质量不同或构象不同的DNA分离。DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。（5）琼脂糖凝胶电泳时胶中DNA是靠什么发出荧光的？为什么？溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,可插入DNA双螺旋结构的两个碱基之间，形成一种荧光络合物。在254nm波长紫外光照射下，呈现橙黄色的荧光。用溴化乙啶检测DNA，可检出10-9g以上的DNA 含量。（6）制备基因组DNA时用到的以下试剂分别起什么作用？ CTAB等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来氯仿有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。无水乙醇上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。75%乙醇,乙醇轻轻洗涤管壁实验二RNA的制备 1.制备RNA时通常要注意些什么？为什么？应该要注意(1)不要徒手操作,必须带手套;(2)加样时不能够大声说话,防止唾液等进入; 由于RNA分子的结构特点，容易受RNA酶的攻击反应而降解，加上RNA酶极为稳定且广泛存在，因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染，并设法抑制其活性，这是本实验成败的关键。 2.制备的RNA通常有哪些用途？制备的DNA通常又有哪些用途？研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。质粒DNA构建克隆载体,分离目的基因 3.RNA制备好后是通过什么方法检测其有没有降解的？从胶上检测什么指标来判断RNA质量好坏？为什么？

酶学与酶工程复习资料

酶学与酶工程复习资料上一届考试试题一、名字解释 1、酶的活性中性：酶分子中直接与底物结合，并和酶催化作用直接有关的区域叫酶的活性中心，参与构成酶的活性中心和维持酶的特定构象所必需的基团为酶的必需基团。 2、米式方程及各字母的意义：米氏方程表示一个酶促反应的起始速度v与底物浓度S关系的速度方程，v＝V max·S/（K m+S）。其中 K m值称为米氏常数，V max是酶被底物饱和时的反应速度，[S]为底物浓度。由此可见K m值的物理意义为反应速度（v）达到1/2V max时的底物浓度（即K m=[S]），单位一般为mol/L，只由酶的性质决定，而与酶的浓度无关。 3、别构效应：一个蛋白质与其配体（或其他蛋白质）结合后，蛋白质的空间结构发生改变，使它适用于功能的需要，这一类变化称为别构效应或变构效应。 4、遗传密码：遗传密码决定蛋白质中氨基酸顺序的核苷酸顺序，由3个连续的核苷酸组成的密码子所构成。 5、盐析：增加中性盐浓度使蛋白质、气体、未带电分子溶解度降低的现象。是蛋白质分离纯化中经常使用的方法，最常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠和氯化钠等。 6、内囊性包埋法：系利用天然的或合成的高分子材料（统称为囊材）作为囊膜壁壳，将固态或液态药物包裹成为的药库型微型胶囊。 7、固定化酶：水溶性酶经物理或化学方法处理后，成为不溶于水的但仍具有酶活性的一种酶的衍生物。在催化反应中以固相状态作用于底物。 8、必需水：维持酶分子完整的空间构象所必需的最低水量。二、问答题 1、温度对酶促反应的影响及原因。答：温度对酶促反应的影响包括两方面：一方面是当温度升高时，反应速度也加快，这与一般化学反应相同。另一方面，随温度升高而使酶逐步变性，即通过减少有活性的酶而降低酶的反应速度。在低于最适温度时，前一种效应为主，在高于最适温度时，则后一种效应为主，因而酶活性丧失，反应速度下降。 2、操纵子的定义及组成。答：操纵子：指启动基因、操纵基因和一系列紧密连锁的结构基因的总称，基因表达的协同单位，转录的功能单位。很多功能上相关的基因前后相连成串，由一个共同的控制区进行转录的控制，包括结构基因以及调节基因的整个DNA 序列。操纵子通常由2个以上的编码序列与启动序列、操纵序列以及其他调节序列在基因组中成簇串联组成。 3、蛋白质合成过程当中的主要物质。答：主要为mRNA、tRNA、氨基酸、核糖核蛋白体以及有关的酶和辅助因子。蛋白质合成是以mRNA为模板，以氨基酸为底物，在核糖体上通过各种tRNA、酶和辅助因子的作用，合成多肽链的过程。 4、酶生物合成模式有哪几种及其特点?简述其接近理想模式的方法？答：1、同步合成型：酶的生物合成与细胞生长同步进行的一种酶生物合成模式。该类型酶的生物合成速度与细胞生长速度紧密联系，又称为生长偶联型。2、延续合成型：酶的生物合成在细胞的生长阶段开始，在细胞生长进入平衡期后，酶还可以延续合成一段较长时间。3、中期合成型：酶在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞生长进入平衡期以后，酶的生物合成也随着停止。4、滞后合成型：酶是在细胞生长一段时间或者进入平衡期以后才开始其生物合成并大量积累，又称为非生长偶联型，许多水解酶的生物合成都属于这一类型。在酶的发酵生产中，为了提高产酶率和缩短发酵周期，最理想的合成模式应是延续合成型。属于延续合成型的酶，在发酵过程中没有生长期和产酶期的明显差别。细胞一开始生长就有酶产生，直至细胞生长进入平衡期以后，酶还可以继续合成一段较长的时间。对于其他合成模式的酶，可以通过基因工程\细胞工程等先进技术,选育得到优良的菌株, 并通过工艺条件的优化控制, 使他们的生物合成模式更加接近于延续合成型。其中对于同步合成型的酶，要尽量提高其对应的mRNA的稳定性，为此适当降低发酵温度是可取的措施；对于滞后合成型的酶，要设法降低培养基中阻遏物的浓度，尽量减少甚至解除产物阻遏或分解代谢物阻遏作用，使酶的生物合成提早开始；而对于中期合成型的酶，则要在提高mRNA的稳定性以及解除阻遏两方面考虑，使其生物合成的开始时间提前，并尽量延迟其生物合成停止的时间。 5、举例说明生物酶制剂生产工艺流程。答：一、植物细胞培养的工艺流程：外植体→细胞的获取→细胞培养→分离纯化→产物。植物细胞培养产酶的工艺过程——大蒜细胞培养生产超氧化物歧化酶（SOD）：1、大蒜愈伤组织的诱导：打破休眠的大蒜蒜瓣，去除外皮消毒在无菌条件下，将蒜瓣切成0.5cm3左右的小块，植入培养基中，25℃、600lux、12h/d光照的条件下培养18d，诱导得到愈

pearson,kendall和spearman三种相关分析方法

在SPSS软件相关分析中,pearson(皮尔逊), kendall（肯德尔）和spearman（斯伯曼/斯皮尔曼）三种相关分析方法有什么异同两个连续变量间呈线性相关时，使用Pearson积差相关系数，不满足积差相关分析的适用条件时，使用Spearman秩相关系数来描述. Spearman相关系数又称秩相关系数，是利用两变量的秩次大小作线性相关分析，对原始变量的分布不作要求，属于非参数统计方法，适用范围要广些。对于服从Pearson相关系数的数据亦可计算Spearman相关系数，但统计效能要低一些。Pearson相关系数的计算公式可以完全套用Spearman相关系数计算公式，但公式中的x和y用相应的秩次代替即可。 Kendall's tau-b等级相关系数：用于反映分类变量相关性的指标，适用于两个分类变量均为有序分类的情况。对相关的有序变量进行非参数相关检验；取值范围在-1-1之间，此检验适合于正方形表格；计算积距pearson相关系数，连续性变量才可采用;计算Spearman秩相关系数，适合于定序变量或不满足正态分布假设的等间隔数据; 计算Kendall秩相关系数，适合于定序变量或不满足正态分布假设的等间隔数据。计算相关系数：当资料不服从双变量正态分布或总体分布未知，或原始数据用等级表示时，宜用 spearman或kendall相关 Pearson 相关复选项积差相关计算连续变量或是等间距测度的变量间的相关分析 Kendall 复选项等级相关计算分类变量间的秩相关，适用于合并等级资料 Spearman 复选项等级相关计算斯皮尔曼相关，适用于连续等级资料注： 1若非等间距测度的连续变量因为分布不明-可用等级相关/也可用Pearson 相关，对于完全等级离散变量必用等级相关 2当资料不服从双变量正态分布或总体分布型未知或原始数据是用等级表示时,宜用Spearman 或 Kendall相关。 3 若不恰当用了Kendall 等级相关分析则可能得出相关系数偏小的结论。则若不恰当使用，可能得相关系数偏小或偏大结论而考察不到不同变量间存在的密切关系。对一般情况默认数据服从正态分布的，故用Pearson分析方法。在SPSS里进入Correlate－》Bivariate，在变量下面Correlation Coefficients复选框组里有3个选项： Pearson

食品酶学复习题(1)

1.酶的特性有哪些？（1）催化效率高：比一般的酶高106-1013倍；（2）酶作用的专一性：一种酶作用于一种或一类分子结构相似的物质（3）易变性：大多数酶的化学本质是蛋白质，因而会被高温、酸、强碱等破坏(4)酶的催化条件温和；(5)酶在生物体内参与每一次反应后，它本身的性质和数量都不会发生改变。 8. 国际酶学委员会推荐的分类和命名规则的主要依据是什么？酶学委员会提出以酶所催化的化学反应性质作为酶的分类和命名规则的主要依据，每一种酶都给以三个名称：系统名，惯用名和一个数字编号。 2、脂肪酶和脂肪氧化酶的不同？脂肪酶水解脂肪，产生甘油、甘油一酯和脂肪酸脂肪氧化酶催化顺，顺-1,4-戊二烯的不饱和脂肪酸及酯的氢化氧化作用。4、酶活力：指酶催化反应的能力，它表示样品中酶的含量。 3、Km值代表反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。固定化酶：是指在一定的空间范围内起催化作用，并能反复和连续使用的酶。优点：同一批固定化酶能在工艺流程中重复多次的使用；固定化后，和反应物分开，有利于控制生产过程，同时也省去了热处理使酶失活的步骤；稳定性显著提高；可长期使用，并可预测衰败的速度；提供了研究酶动力学的良好模型。26.固定化酶的稳定性增强主要表现在哪些方面？操作稳定性（2）贮藏稳定性（3）热稳定性（4）对蛋白酶的稳定性（5）酸碱稳定性。 27.什么是糖酶？常见的糖酶有哪几种？（四种以上）糖酶：裂解多糖中将单糖连接在一起的化学键，使多糖降解为小分子，催化糖单位结构上的重排形成新的糖类化合物的酶。常见的糖酶：α-淀粉酶、糖化酶、β-淀粉酶，乳糖酶，果胶酶，纤维素酶等最常见的微生物产酶发酵类型是液体深层发酵 2. 琼脂糖凝胶过滤和离子交换法等纯化酶的机理各是什么？琼脂糖凝胶过滤：不同式样通过凝胶时，能进入颗粒状凝胶的微孔的小分子被阻滞，不能进入微孔的大分子未被阻滞，改变颗粒状凝胶的微孔大小可能改变凝胶量分级分离范围。（琼脂糖凝胶过滤根据分子大小而设计的方法）离子交换法：改变PH或提高溶液离子强度，根据酶结合到离子交换剂上的能力将混合物中的蛋白质分离开。（离子交换法按分子所带正负电荷多少分离的方法）5. 一些乳制品中为什么添加乳糖酶？乳糖的溶解度比较低，在冷冻乳制品中容易析出，使得产品带有颗粒状结构，乳糖部分水解可以防止出现这种情况。 .酶的动力学研究包括哪些内容？图示竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制的区别。酶促反应动力学以化学动力学为基础，通过对酶促反应速度的测定来讨论诸如底物浓度、抑制剂、温度、pH和激活剂等因素对酶促反应速度的影响。 4. 酶制剂的保存需要考虑哪些因素？(1) 温度：在低温条件下（0-4℃）使用、处理和保存，有的需要更低的温度，加入甘油或多元醇有保护作用。(2) pH与缓冲液：pH应在酶的pH稳定范围内，采用缓冲液保存。(3) 酶蛋白浓度：一般酶浓度高较稳定，低浓度时易于解离、吸附或发生表面变性失效。(4) 氧：有些酶易于氧化而失活。(5) 为提高酶稳定性，常加入下列稳定剂：如钙离子保护淀粉酶，锰离子保护溶菌酶，二巯基乙醇保护巯基酶。（常加入下列稳定剂：①底物、抑制剂和辅酶，它们的作用可能是通过降低局部的能级水平，使酶蛋白处于不稳定状态的扭曲部分转入稳定状态。②对巯基酶，可加入－SH保护剂。如二巯基乙醇、GSH(谷胱甘肽)、DTT(二硫苏糖醇)等。③其他如Ca2+能保护α－淀粉酶，Mn2+能稳定溶菌酶，Cl－能稳定透明质酸酶。）

蛋白质与酶工程复习资料

第一章 1、蛋白质工程的产生： 1，最早的蛋白工程是福什特（Forsht）等在1982-1985年间对酪氨酰-t-RNA合成酶的分子改造工作。2，佩里（Perry）1984年通过将溶菌酶中Ile(3)改成Cys(3)，并进一步氧化生成Cys(3)-Cys（97）二硫键，使酶热稳定性提高，显著改进了这种食品工业用酶的应用价值。3，1987年福什特通过将枯草杆菌蛋白酶分子表面的Asp（99）和Glu（156）改成Lys，而导致了活性中心His（64）质子pKa从7下降到6，使酶在pH＝6时的活力提高10倍。二，蛋白质工程的内容 1、定义：广义上来说，蛋白质工程是通过物理、化学、生物和基因重组等技术改造蛋白质或设计合成具有特定功能的新蛋白质。 2、内容：确定蛋白质的化学组成、空间结构与生物功能之间的关系。根据需要合成具有特定氨基酸序列和空间结构的蛋白质三，蛋白质工程的程序蛋白质分子设计基因改造方案基因成或突变分离纯化蛋白质结构蛋白质分子基因克隆与表达目的基因和功能测定改造的蛋白质分子四，酶工程的应用范围（1）对生物宝库中存在天然酶的开发和生产；（2）自然酶的分离纯化及鉴定技术；（3）酶的固定化技术（酶和细胞固定化）；（4）酶反应器的研制和应用；（5）与其他生物技术领域的交叉和渗透。其中固定化酶技术是酶工程的核心。实际上有了酶的固定化技术，酶在工业生产中的利用价值才真正得以体现。五，医用药物酶应用的问题：1）异体蛋白引起免疫反应；2）酶不纯，引起各种副作 3）酶在体内降解，时间短； 4）药物无法定向分布。解决办法： 1) 制成微胶囊； 2) 制成衍生物；3) 制成脂质体包埋与免疫系统隔开(酶蛋白)；4) 酶上引入一定基团，起导向作用。五，分子酶学与酶工程 1、酶——由活细胞产生的具有催化功能的蛋白质（或其它类型的生物大分子），是生物体进行代谢、维持生命活动的必需物质，没有酶就没有生命，因此研究酶的结构与功能、性质与作用机理，对于阐明生命现象的本质具有重要意义。

(整理)酶学部分的练习题

第一部分填空 1、全酶由和组成，在催化反应时，二者所起的作用不同，其中决定酶的专一性和高效率，起传递电子、原子或化学基团的作用。 2、酶是生物体活细胞产生的，具有催化活性的。 3、竞争性抑制剂使酶对底物的表观 Km _______________ ，而 Vmax_ ____________ 。 4、酶是产生的，具有催化活性的。 5、如果一个酶对A、B、C三种底物的米氏常数分别为K m a、K m b和K m c，且K m a﹥ K m b﹥K m c，则此酶的最适底物是_________，与酶亲和力最小的底物是_________。 6、___________抑制剂不改变酶促反应V max ， ___________抑制剂不改变酶促反应K m 。 7、全酶由__________和__________组成。 8、如果一个酶对A、B、C三种底物的米氏常数分别为K m a、K m b和K m c，且K m a﹥ K m b﹥K m c，则此酶的最适底物是_________，与酶亲和力最小的底物是_________。 9、辅酶和辅基的区别在于前者与酶蛋白结合，后者与酶蛋白结合。 10、当酶促反应速度为最大反应速度的80%时，底物浓度是Km值的倍。 11、酶活力是指，一般用表示。 12、酶反应的温度系数Q10一般为。 13、在适当浓度的β-巯基乙醇和8M脲溶液中，RNase（牛）丧失原有活性。这主要是因为RNA酶的被破坏造成的。其中β-巯基乙醇可使RNA 酶分子中的键破坏。而8M脲可使键破坏。当用透析方法去除β-巯基乙醇和脲的情况下，RNA酶又恢复原有催化功能，这种现象称为。 14、T.Cech从自我剪切的RNA中发现了具有催化活性的，称之为这是对酶概念的重要发展。 15、酶的活性中心包括_________和_________两个功能部位。 16、1981年以前发现的酶化学本质是_________，均由活_________产生。

(完整版)酶学与酶工程总结

?Lecture 1 酶学与酶工程 ?酶的概念:酶（enzyme）是一类由活细胞产生的，具有催化活性和高度专一性的特殊蛋白质，是一类生物催化剂。 ? ?酶的分类(6类)、组成、结构特点？和作用机制？组成：单体酶、寡聚酶、多酶复合体 Note:一个酶蛋白可有多种催化活性，相当于多个酶(关注原核和真核生物的差别) 除水解酶和连接酶外，其他酶在反应时都需要特定的辅酶。金属在酶催化中的作用：稳定酶构象、参与酶的催化作用（如激活底物）、电子传递体 ?酶作为催化剂的显著特点: 强大的催化能力：加快反应速度可高达1017倍; 没有副反应; 高度的专一性：各种酶都有专一性，但专一程度的严格性上有所差别; 可调节性; ?同工酶的概念:同一种属中由不同基因或（复）等位基因编码的多肽链所组成的单体、纯聚体或杂交体，其理化及生物学性质不同而能催化相同反应的酶称同工酶。同一基因生成的不同mRNA所翻译出来的酶蛋白也列入同工酶的范畴。酶蛋白合成后经不同类型的共价修饰（如糖基化等）而造成的多种酶分子形式，严格来说不属于同工酶而称为synzyme，但也有人称其为次生性同工酶（secondary isozyme）。不同种属中催化相同反应的酶称为xenozyme，也不属于同工酶。

?酶的活性中心指必需基团在空间结构上彼此靠近，组成具有特定空间结构的区域，能与底物特异结合并将底物转化为产物必需基团(essential group):酶分子中氨基酸残基侧链的化学基团中，一些与酶活性密切相关的基团。活性中心内的必需基团:结合基团（与底物相结合）和催化基团（催化底物转变成产物）活性中心外的必需基团：维持酶活性中心应有的空间构象所必需；构成酶活性中心的常见基团：His的咪唑基、Ser的－OH、Cys的－SH、Glu的γ-COOH。 ?酶的作用机制 ?酶活力的调节 ?酶的应用食品加工方面：生物技术在食品工业中应用的代表就是酶的应用，目前已经有几十种酶成功用于食品工业。如葡萄糖、饴糖、果葡糖浆的生产、蛋白质制品加工、果蔬加工、食品保鲜以及改善食品品质与风味等。常用的酶制剂主要有：淀粉酶、糖化酶、蛋白酶、葡萄糖异构酶、果胶酶、脂肪酶、纤维素酶葡萄糖氧化酶等。酶在轻工业方面的应用：用酶进行原料处理（发酵原料、淀粉原料、纤维素原料、含戊聚糖的植物原料的处理、纺织原料、造纸原料的制浆、生丝的脱胶处理、羊毛的除垢），用酶生产各种产品（L-氨基酸、核苷酸、酱油或豆酱、制革），用酶增强产品的使用效果（加酶洗涤剂；加酶牙膏、牙粉和嗽口水）酶在医学中的应用：主要的医药用酶、用酶进行疾病的诊断、用酶治疗各种疾病、用酶制造各种药物 ?酶与食品质量安全酶制剂作为食品添加剂进入食品的潜在危害酶催化有毒物质的产生酶作用导致食品中营养组分的损失潜在的产毒素性潜在的致病性对策：安全菌株，体外基因毒理学测试，酶制剂的安全评价，酶制剂来源安全性的评估标准 ?Lecture 2 基因工程的酶学基础 ?核酶（Ribozyme)：概念：具有生物催化功能的RNA。看课件 ?基因工程的酶学基础 ?基因克隆表达的过程基因克隆常用的酶，有什么应用，注意事项（补充后两者）

生物化学酶试题及答案.docx

【测试题】 ■一■ '、名词解释 1.酶 13 .最适PH 2 . .固定化酶 14 .不可逆性抑制 3 . .同工酶 15 .可逆性抑制 4 . .酶的特异性 16 .激活剂 5 . .酶的活性中心 17 .抑制剂 6 . .酶原及酶原激活 18 .核酶 7 . .抗体酶 19 .变构酶 8 . .活化能 20 .酶的共价修饰 9 . .诱导契合假说 21 .酶的VmaX 10 .初速度 22 .结合酶 11. Km 值 23 .酶活力 12 .最适温度 24 .比活力一、、填空题 25.酶是由产生的对特异底物起高效催化作用的 26.酶加速反应的机制是通过降低反应的，而不改变反应的。 27 .结合酶，其蛋白质部分称，非蛋白质部分称，二者结合其复合物称。 28. _______________________________________ 酶活性中心与底物相结合那些基团称 ,而起催化作用的那些基团称 _________________________________________ 。 29. ________________________________________________________________ 当Km 值近似 ES 的解离常数K S 时，Km 值可用来表示酶对底物的 _________________________________________ 。 30. _________________________________ 酶的特异性包括_特异性，特异性和特异性。 31 .米曼二氏根据中间产物学说推导出 V 与［S ］的数学方程式简称为，式中的 .. 为米氏常数，它的值等于酶促反应速度达到 _____ 一半时的 ____ 。 32 ?在其它因素不变的情况下，［S ］对酶促反应V 作图呈线，双倒数作图呈线，而变构酶的动力学曲线呈型。 33 ?可逆性抑制是指抑制剂与酶进行 ______ 结合影响酶的反应速度， ______ 抑制剂与酶的活性中心结合， ____ 抑制剂与酶的活性中心外的必需基团结合。 34. 反竞争性抑制剂使酶对底物表观 Km_，VmaX 。 35. 无活性状态的酶的前身物称为，在一定条件下转变成有活性酶的过程称。其实质是的形成和暴露过程。 36?丙二酸是酶的抑制剂，增加底物浓度可抑制。 37、同工酶是指催化化学反应 ______ ,而酶蛋白分子结构、理化性质及免疫学性质 _______ 的一组酶。 38. 辅酶与辅基的区别在于前者与酶蛋白，后者与酶蛋白。 39. ____________________ 肌酸激酶的亚基分型和型。 40. _____________ 最适温度酶的特征性常数，它与反应时间有关，当反应时间延长时，最适温度可以 ____ 。 41?某些酶以 ____ 形式分泌，不仅可保护 ____ 本身不受酶的水解破坏，而且可输送到特定的部位与环境转变成—■发挥其催化作用。 42. 不可逆抑制剂常与酶以键相结合使酶失活。 43. 当非竞争性抑制剂存在时，酶促反应动力学参数如下 Km _，Vma _______ 。 44. 当酶促反应速度为最大反应速度的 80%寸，底物浓度是 Km 的_ 倍。三、选择题 A 型题 45. 关于酶概念的叙述下列哪项是正确的？

生物技术专业复习资料(西南民大版)-酶工程

酶工程复习 1.生物酶工程：在化学酶工程基础上发展起来的，以酶学理论和以DNA重组技术为主的现代分子生物学技术相结合的产物，又称为高级酶工程 2、化学酶工程、研究的主要内容：又为初级酶工程，是酶学理论与化学工程技术相结合的产物。主要研究内容：酶的工艺制备、酶和细胞的固定化技术、酶分子化学修饰、人工酶的合成、酶反应器和酶传感器、酶的应用等。 3．如何控制发酵产酶工艺条件：a. pH调节办法：改变培养基组成或其比例；使用缓冲剂；添加适宜的酸碱溶液以调节pH值。b.温度调控的方法：一般采用热水升温、冷水降温；在发酵罐中，均设计有足够热传面积的热交换装置，如排管、蛇管。c.溶氧量调控的方法：调节通气量、调节氧的分压、调节气液接触时间、调节气液接触面积、培养液的特性对溶氧速率有明显影响，若培养物粘度大，则不利于溶氧。 4．酶生物合成模式包括哪些类型？各类型有何特点？如何提高各种模式下酶产量？各产酶模式的一般产酶动力学方程是怎样的？ a.同步和成型：又称生长偶联型，酶的合成与细胞生长同步进行，当细胞进入对数生长期，酶大量产生，细胞生长进入平衡期后，酶合成随即停止。其方程为：dE/dt=αμX 特点：此类型生产的酶，其生物合成可以诱导，但不受分解代谢物阻遏和反应产物阻遏。这类酶相应的mRNA是很不稳定的。提高酶产量：增加细胞生长速率，提高mRNA稳定性，降低发酵温度。 b.延续合成型：部分生长偶联型，酶的合成伴随细胞生长开始，但在细胞生长进入平衡期后，酶还可以延续合成较长的一段时间。其方程：dE/dt=αμX+βX 特点：延续合成型的酶可受诱导但不受分解代谢物阻遏和产物阻遏，其对应的mRNA很稳定。提高酶产量：最理想模式，添加诱导物。 c.中期合成型：酶的合成在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞生长进入平衡期后，酶的合成也随即停止。其方程：dE/dt=αμX 特点：此类型合成的酶，受反应产物反馈阻遏，其对应的mRNA是不稳定的。提高酶产量：增加细胞生长速率，提高mRNA稳定性，解除阻遏。 d.滞后合成型：当细胞生长进入平衡期后，酶才开始大量合成。其方程：dE/dt=βX 特点：此类型合成的酶，受分解代谢物阻遏，故在对数生长期不合成，但其mRNA稳定性强，当细胞停止生长，分解代谢物阻遏解除，才开始利用积累的mRNA进行翻译合成。提高酶产量：减少阻遏物浓度，尽量降解产生的阻遏物。 5.提高酶产量的方法有哪些？A.要选育或选择使用优良的产酶细胞。B.打破调控机制。C添加表面活性剂、酶促进剂、诱导物。 6．在发酵产酶中，溶氧速率受哪些因素的影响？a.通气量：当通气量增大时可提高溶氧速率，反之使溶氧速率降低。b.氧的分压：增加空气压力，或提高空气中氧的含量都能提高氧的分压，从而提高溶氧速率。反之则使溶氧速率降低c.气液接触时间：气液两相接触时间延长，可使更多的氧溶解，从而提高溶氧速率；反之则使溶氧速率降低。d.气液接触时间：增加气流接触界面的面积，有利于提高溶氧率。e.培养物的特性：培养液的粘度大，产生气泡多，则不利于氧的溶解。通过改变培养液的组分或浓度，可有效地降低培养液粘度 7．影响酶提取的主要因素有哪些？a.温度：通常抽提温度应控制在0-10℃，对某些耐温的酶，如胃蛋白酶等，可以适当提高抽提温度。b.pH值：抽提液的pH值应远离酶的等电点，不宜过高或过低。c.提取液体积：增加提取液用量，可提高提取率。d.添加保护剂：为了提高酶稳定性，防止酶变性、失活等常加入一些保护剂。 8．常用的细胞破碎的方法主要有哪些？a.机械破碎法：通过机械运动所产生的剪切力作用，使细胞破碎的方法，称为机械破碎法。包括：机械捣碎法、研磨法、匀浆法。b.物理破碎法：

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