(完整版)生长曲线的测定

实验日期：2017.11.1 实验班级：生物技术指导教师：张建丽

姓名：高熹学号：1120152430

测定细菌生长曲线

一．实验目的

1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解细菌生长的特点，综合训练微生物实验的基本实验技能。

2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。

3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。

二．实验原理

将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的数量作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。

延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。

对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。

稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、过氧化物等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。

衰亡期：随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌。

体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。

这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。

测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实

验用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简单。

三．实验设备及材料

准备好的大肠杆菌和枯草杆菌菌液、营养肉汤培养基、紫外可见分光光度计、比色皿、恒温摇床、培养箱、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、酒精灯、电炉、接种环、试管架、锥形瓶、无菌吸管、烧杯、乳胶头、报纸、胶塞、玻璃棒等。

四．实验方法步骤及注意事项

实验步骤: 配制营养肉汤培养基→营养肉汤培养基灭菌→配制大肠杆菌菌液标记→接种→培养→测定→绘制生长曲线

1.配制营养肉汤培养基:以1000ml记，牛肉膏:3.0g、蛋白胨:10.0g、NaCl:5.0g、水:1000ml、pH:7.4-7.6

2.营养肉汤培养基灭菌:将步骤一包好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌15min.

3.接种:用1mL无菌移液管分别移取1mL大肠杆菌菌液和1ml的枯草杆菌菌液至锥形瓶中，并充分震荡均匀.

4.培养:将锥形瓶置于37℃下在恒温摇床上培养（150r/min）。然后分别按对应时间将锥形瓶取出，待培养结束时测定OD值。

5.测定:将培养的大肠菌群菌液用无菌移液管移取到比色皿中，选用600nm分光光度计上调节零点，用蒸馏水作为空白对照，并对不同时间培养液从0起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用自来水适当稀释后测定，使其OD值大约在0.2-0.8之间，经稀释后测得的OD值要乘于稀释倍数，才是培养液实际的OD值。

6.绘制生长曲线:对所得数据进行生长曲线的绘制，分析实验结果。

五．实验结果

六．实验结果分析

绘制大肠杆菌生长曲线

绘制枯草杆菌生长曲线

1.随着培养时间的增加，培养基里的液体变得越来越混浊，所散发出来的味道也越来越浓，大肠杆菌培养瓶味道很难闻，是因为大肠杆菌增长迅速，后来数量达到顶峰，此时培养基内的营养物质已被消耗殆尽，大肠杆菌进行营养和空间的竞争，有些大肠杆菌死亡，最后数量不断减少，直至变为0。

2.通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解了细菌生长的特点，是:刚开始时细菌缓慢增长，后来增长迅速，呈“J”型，最后细菌生长缓慢，数量达到顶峰，在一段时间内保持不变。

3.由实验结果来看，两个菌培养菌在对数期，未到衰亡期，考虑到测量的时间太短，10个小时左右，因此，未到衰亡期。

七．思考题

1.绘制大肠杆菌和枯草杆菌在两种接种方法下的生长曲线。（标出生长曲线中

四个时期的位置和名称）

答：绘制出了生长曲线，只观察到了平缓期和对数期，大肠杆菌观察到即将开始平稳期。

2.为什么用比浊法测定的细菌生长只是表示细菌的相对生长状况？

答：因为比色法只能判断菌的相对密度，而没有办法区分活菌和死菌，因此只能表示细菌的相对生长状况。

3.生长曲线中为什么会出现稳定期和衰退期？在生产实践中怎样缩短延迟期？怎样延长对数期及稳定期？怎样控制衰退期？

答：培养基的营养有限，在菌的数量达到环境允许最大值时，同种菌之间竞争剧烈，故出现稳定期，随着营养的进一步消耗，菌没有足够的营养，出现死亡，所以出现了衰退期。缩短延迟期，可以采用营养成分与原来相近的培养基，或者采用该种菌原来类似的生长条件与营养。延长对数期和稳定期，恒化器可以将微生物保持在对数期进行研究，恒浊器可以使细菌连续生长。控制衰退期可以及时补充营养，分离出死菌。

4.接种时种子在什么条件下为宜，液体种子比斜面种子为什么优越？

答：左手持皿用拇指、食指和中指将皿盖揭开约20-30度左右,角度越小遭空气污染的可能性越小,并靠近酒精灯附近操作。右手持接种环，先在酒精灯灭菌，然后取菌液，将沾菌接种环在培养基的边缘划原始线，而后使接种环在指力作用下作轻快的滑移动作，从培养皿的一个边缘滑向另一个边缘，滑动时用力要均匀，切勿将接种环嵌入培养基内。

主要是活化菌种，调整菌种的生理生化状态。液体培养比固体发酵通气效果好，利于大量菌体生长。

八．实验反思

1.应用一台仪器和一个比色皿测量，消除系统误差。

2.在比色皿中加液时，稀释时应该用枪头吹打均匀。

细胞生长曲线的绘制实验报告

细胞生长曲线的绘制实验报告 篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制 一、实验目的 学习了解微生物生长量测定的方法 学习了解细菌生长曲线的绘制方法 学习掌握血细胞计数板的使用方法 微生物生长量的测定 计数法重量法生理指标法 1、显微镜直接计数法 利用血细胞计数板计数 涂片计数 2、活菌菌落计数法 3、滤膜法 细菌生长曲线 将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线 篇二：细胞生长曲线的测定 细胞生长曲线的测定 一、实验目的

掌握测定细胞生长曲线的方法。 二、实验器具 24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。 三、实验方法 1. 培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。 2. 计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。 3. 绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。 篇三：MTT法绘制生长曲线 实验材料： 1，5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管，1.5ml离心管，0.22μm滤膜，锡箔纸，MTT工作液 实验步骤： 1，分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。接种到96孔板，每孔接种200μl 细胞悬液进行培养。

细菌生长曲线测定方案

细菌生长曲线的测定 1 目的 1.1 了解细菌生长曲线特点及测定原理 1.2 学习用比浊法测定细菌的生长曲线 2 原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 3 材料 3.1菌种 某细菌 3.2培养基 液体培养基 3.3 仪器和器具 721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。 4 流程 种子液→标记→接种→培养→测定 5 方法 5.1种子液制备 取细菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液中（液体培养基接种法），静止培养24h作种子培养液。 5.2标记编号 取盛有50mL无菌肉膏蛋白胨培养液的250mL三角瓶11个，分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。

5.3接种培养 用2mL无菌吸管分别准确吸取2mL种子液加入已编号的11个三角瓶中，于37℃下振荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出，立即放冰箱中贮存，待培养结束时一同测定OD 值。 5.4生长量测定 将未接种的肉膏蛋白胨培养基（空白对照）倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.10.～0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。 6 结果 6.1 将测定的OD值填入下表： 时间(h) 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20光密度值（OD600） 0 6.2 以上述表格中的时间为横坐标，OD600 值为纵坐标，绘制细菌的生长曲线。 Point： 1液体培养基的配制以及接种方法 2无菌操作技术 3直接计数法

实验：计数法测定细胞生长曲线

实验内容：计数法测定细胞生长曲线 作者：王卫东实验日期：2001.10.24-2001.10.31 实验目的：学习细胞计数的方法；熟悉测定生长曲线的基本原理、方法，了解其应用。 实验原理：一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后度过长短不一的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期，在达到饱和密度后，细胞停止 生长，进入平顶期，然后退化衰老。典型的生长曲线即可分为潜伏期、 指数生长期、平顶期及退化衰老四个部分，其中的三个不同生长时相 （潜伏期、指数生长期和平顶期）是每个细胞系所共有的特征。通过 测定生长曲线，不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定 细胞绝对生长数、判断细胞活力，而且也可用于测定药物等外来因素 对细胞生长的影响。本实验采用计数法测定细胞生长曲线，通过连续 对细胞计数（通常为7d，一般应每次计数3瓶细胞取平均值），然后 以存活细胞数对培养时间作图，即得该种细胞的生长曲线。 仪器、材料和试剂： 培养箱、超净工作台、倒置显微镜、血球计数板 1、仪器：CO 2 2、材料：培养瓶、试管、吸管、移液管、废液缸、HeLa细胞、盖玻片、酒精灯 3、试剂：培养基（含小牛血清）、0.25%胰蛋白酶 实验步骤： 1、细胞悬液制备：取生长良好接近汇合的HeLa细胞，胰酶消化，再加新鲜培 养基制成细胞悬液后计数。 2、接种：根据细胞计数结果，按每瓶5×104个接种细胞（加3mL培养基，实际 接种每瓶5.9×104个）作传代培养（理论上应该每人接种21瓶细胞，每天取3瓶计数，但实际每人只接种7瓶）。 3、计数：24h后开始作细胞计数，以后每隔24h计数一次，连续计数7天。 4、绘图：根据计数结果，绘制HeLa细胞生长曲线。 结果与讨论： 1、细胞计数结果如下：

大肠杆菌生长曲线实验报告

一、实验方案设计

实验数据原始记录： 随时间的变化大肠杆菌液吸光度的数据（括号内数字表示稀释倍数）

3.5 曲线图时间/h 0 1 3.75 6 7 8 8.5 9 10 OD600 0.073 0.073 0.079 0.282 0.456 1.105 1.168 1.662 2.284 时间/h 11 12 13 14 18.33 20.5 23 24 OD b。 2.564 2.016 3.020 2.605 3.315 2.860 3.024 3.324 时间/h 0 1 3.75 6 7 8 8.5 9 10 11 13 18.33 20.5 0应0 0.073 0.073 0.079 0.282 0.456 1.105 1.168 1.662 2.284 2.564 3.020 3.315 2.86 时间/h 0 1 3.75 6 7 8 8.5 9 10 11 OD6b0 0.073 0.073 0.079 0.282 0.456 1.105 1.168 1.662 2.284 2.564 前小时的大肠杆菌的吸光度数据 六?参考文献 前12小时的大肠杆菌的生长曲线图 [1] .牛天贵?食品微生物学实验技术?第1版?北京：科学出版社，2010. [2] .杨革.微生物学实验教程.第2版.北京：科学出版社，2010. [3] .何国庆，贾英民，丁立孝等.食品微生物学.第2版.北京：中国农业大学出版社，2009. [4] .周德庆，胡宝龙.微生物学实验教程.第2版.北京：高等教育出版社，2006.

七?教师对实验方案设计的意见 签名： 年月日 、实验报告 宴验现象验现象、实验结果的分析及其结论 分随着培养时间的增加，培养基里的液体变得越来越混浊，所散发出来的味道也越来越浓，味道很难闻。实验结果随着培养时间的增加，培养基里的液体变得越来越混浊，所散发出来的味道也越来越浓，味道大肠杆菌难培养基因为大肠杆菌增长迅越来越后来数量达一定数量后此时培养基内的营养物质已被进行营尽，养和空间肠杆菌进行营些大肠杆间的死亡争，最后数量肠杆菌死亡，直最后数量不断减尙，。直至变为0。 ②通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解了细菌生长 的特点，是：刚开始时细菌缓慢增长，后来增 长迅速，呈“ J”型，最后细菌生长缓慢，数量达到顶峰，在一段时间内保持不变。 因实验测量的时间不够合理等各种因素，因此用原始数据绘制出来的大肠杆菌的生长曲线图不够有规律，经修正后生长曲线比较好。 结论: 细菌的生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。体内及自然界细菌的生长繁殖受机体 免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解细菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。

M TT 比色法测定细胞生长曲线 - 资料中心 - 生物在线

M TT比色法测定细胞生长曲线 郝新保　张利朝　殷　缨　韩秀珍　陶秦渝　郝晓柯　张盈华(第四军医大学唐都医院中心实验室　西安710038) 关键词　细胞生长曲线　M T T比色法 中图号　Q28 在有关肿瘤细胞生物学的研究中,我们常常要测定细胞的生长状态,制作细胞生长曲线,以往的方法是取少量细胞在镜下或计数仪中计数,然后标注在坐标纸上,制作出细胞生长曲线.这种方法对同一样品要求计数几次取平均值,不但操作繁琐、费时,更主要的是误差较大,可达到20%～30%[1],包括取样误差、计数误差等.为了能简便、准确地测定细胞数,我们建立了基于M T T比色法的细胞生长曲线制作方法. 1　材料和方法 1.1　试剂　R P M I1640培养基为G I BCO公司产品,小牛血清为杭州四季青产品,M T T为SERV E产品,其它试剂均为国产. 1.2　仪器　HL22029P型酶标自动分析仪为国营二六二厂产品,P rofile ,E lite型流式细胞仪为美国COUL T ER 公司产品. 1.3　细胞培养　选用人乳腺癌细胞系SK2BR23.细胞培养在含10%小牛血清的R P M I1640培养基中,37℃,5% CO 2. 1.4　镜下计数测定细胞数　细胞消化后悬浮在一定量的培养基中,用计数板按常规方法在倒置显微镜下计数,每个样品测三次,取平均值. 1.5　流式细胞仪计数　细胞消化后悬浮在一定量的培养基中,取0.2m l细胞过滤后用流式细胞仪自动计数. 1.6　M T T比色法计数　M T T比色法计数为间接计数,先要做出细胞的标准曲线,然后根据欲测样品的A值计算出相应的细胞数. 1.6.1　制作标准曲线　准备细胞悬液,从1×107细胞 200Λl 孔开始在96孔板中倍比稀释至1×102细胞 孔,每个稀释度三孔细胞,培养板置37℃培养4h后细胞贴壁,每孔中加入20Λg M T T继续培养4h,然后吸出150Λl培养液,加入等量DM SO,37℃20m in,570nm处测定吸光度[2],用二六二厂酶标自动分析仪程序绘出细胞标准浓度曲线. 1.6.2　制作生长曲线　调整细胞的浓度,按2×103 孔接种在96孔板中,置37℃培养,每天用M T T比色法测定3孔细胞的A值,在标准曲线上计算出相应的细胞数,即可绘出细胞的生长曲线. 郝新保,男,32岁,讲师,主治医师2　结果 2.1　细胞数与A值的标准曲线　根据各稀释度的A值制作细胞浓度的标准曲线, 如图1. 图1　SK2BR23细胞浓度的标准曲线 2.2　肿瘤细胞的M T T比色法生长曲线　根据每天测定的三孔细胞的A值在标准曲线上求得其对应的细胞数,7～10d 后即可绘制细胞生长曲线,如图2. 图2　SK2BR23细胞的生长曲线 2×;--0.2×;…20×. 2.3　细胞接种密度对生长曲线的影响　当细胞接种密度较低(2×102 孔)和较高(2×104 孔)时,对细胞生长曲线的形状有一定的影响,如图2. 2.4　M T T比色法与镜下计数法及流式细胞仪计数法的比较　为了比较M T T比色法和镜下计数法制作的细胞生长曲线,用流式细胞仪的计数结果作为参照,结果表明M T T 比色法与流式细胞仪计数结果更接近,明显优于镜下计数法的结果. 3　讨论　从结果可以看出,用M T T比色法制作细胞生长

细菌生长曲线之测定

實驗六細菌生長曲線之測定 ◎ Exp 11. Turbidity of bacteria 一、目的： 在進行細菌生長曲線之測定前，必須先了解 U-2001 Spectropho- tometer 操作方法，才能將細菌的數量以吸光值的方式表示出來。二、原理： 請詳讀整理 p. 90-92，學會調整 Optical density (O.D.) 【Exp 13.會用到】。 三、器材： 1. culture：(每組) 24 hr Escherichia coli (broth) 2. medium： (每組) Nutrient broth 3. equipment ： 1 ml pipette，pipette aid，cuvette，拭鏡紙，廢菌液杯，裝蒸餾水的洗 瓶，滅菌空試管，U-2001 Spectrophotometer，振盪器。 四、實驗步驟 ※由助教先示範操作方法，再由學生自行操作與測量待測液之吸光值。 1. 了解 U-2001 Spectrophotometer 操作方法： a. 溫機約 15 分鐘。 b. MENU → (主目錄) 選 1. Photometer →輸入波長 600 nm 及 ABS → Forward → c. Nutrient broth 歸零 autozero → (前、後二支 cuvette) ※1 d. 取出後面之 cuvette ，倒入待測液※2，等到右上方數據穩定後，按 下 Start →記錄。 ※1 cuvette 有石英管 (測波長 340 nm 以下)、玻璃管、塑膠管等材質，本實驗使用塑膠材質之比色管。 ※2 每次測定前需先用蒸餾水滴洗cuvette，再以待測液潤濕，倒掉，再裝入待測液，測完倒掉，用蒸餾水滴洗。測定之前

细胞生长曲线

一细胞生长曲线： A、目的：学习细胞生长曲线的测定方法，观察细胞生长基本规律。 B、背景知识 细胞生长曲线是观察细胞生长基本规律的重要方法。只有具备自身稳定生长特性的细胞才适合在观察细胞生长变化的实验中应用。因而在细胞系细胞和非建系细胞生长特性观察中，生长曲线的测定是最为基本的指标。 原理（选填项目）： 细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。 C、材料 （一）仪器 1.净化工作台 2.离心机 3.恒温水浴箱 4.冰箱（4℃、-20℃） 5.倒置相差显微镜 6.培养箱（37℃、5%CO2、饱和湿度） （二）玻璃器皿 1.吸管（弯头） 2.培养瓶 3.玻璃瓶（250ml、100ml） 4.废液缸 （三）塑料器皿 1.吸头 2.枪头 3.24培养板 4.胶塞 （四）其他物品 1.微量加样枪

2.红血球计数 板（五）试剂 1.D-Hanks液 2.小牛血清 3.R PMI1640 4.双抗（青霉素、链霉素） 5.0.08%胰酶 （四）、操作步骤 1.取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液； 2. 计数，精确地将细胞分别接种于21～30个大小一致的培养瓶内或培养孔（以24孔培养板为宜），每瓶或孔细胞总数要求一致，加入培养液的量也要一致。 3. 每天或每隔一天取出3瓶（孔）细胞进行计数，计算均值。培养3～5d常要给未计数的细胞换液。 4.以培养时间为横轴，细胞数为纵轴（对数），描绘在半对数座标纸上，连接成曲 线后即成该细胞的生长曲线。 9 （五）、注意事项 1．细胞生长曲线虽然最为常用，但有时其反映数值不够精确，可有20～30%的误差，需结合其它指标进行分析。 2．现在很多实验室利用培养板采用MTT法进行生长曲线测定，较为简便。 3．标准的细胞生长曲线近似“S”形，一般在传代后第一天细胞数有所减少，再经过几天 的潜伏适应期，然后进入对数生长期，达到平台期后生长稳定，最后到达衰老。 4．在生长曲线上细胞数量增加1倍时间称为细胞倍增时间，可以从曲线上换算出。 二、四唑盐试验（ MTT）比色试验 （一）、目的 学习四唑盐比色试验，检测细胞存活和生长情况。

细菌生长曲线的测定实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除细菌生长曲线的测定实验报告 篇一：细菌生长曲线 实验九测定细菌生长曲线 [实验目的]1．了解细菌生长曲线特征：2．学习液体培养基的配制以及注意事项。3．学习液体种子和固体种子的不同接种方法和注意事项。4．利用细菌悬液浑浊度间接测定细菌生长。 [仪器和材料] 1．实验材料 (1)大肠杆曲，枯草杆曲培养液及大肠杆菌平板。 (2)牛肉膏蛋门胨葡萄糖培养基(150ml／250ml三角瓶x4瓶／大组)，配方：牛肉膏5g，蛋白胨10g，nacl5g，葡萄糖10g，加水至1000ml，ph7．5。 2．实验仪器 取液器(5000μl，1000μl，200tμl各一支)；培养箱．摇床，722s分光光度汁；1000μl无菌吸头100个；5000μl 无菌吸头2(:细菌生长曲线的测定实验报告)个；1ml或4ml

玻璃或塑料比色皿4个，共用参比杯一个。 [实验原理] 将一定量的细菌接种在液体培养基内．在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线(图91)。 单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的．测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(测oD550或oD620或oD600或oD420，可任选一波长)与对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以g表示。其计算公式为；

实验项目二住骨髓间充质干细胞的倍增时间与生长曲线的测定资料

PMSCs生长曲线和倍增时间的测定 【1】来自猪脂肪间充质干细胞的分离培养及其成脂分化： 取生长状况良好的P1、P3、P5、P9代细胞，用0.25%胰酶消化液，在37℃消化1-3min，制成单细胞悬液，然后以5x104个/ml密度接种到30个直径为35mm培养皿中，随机分成10组，每组3皿，每天检测一组中每皿的细胞总数，取3个皿的均值，如此至第10组结束，细胞技术如下(2004,司徒镇强)即一天消化3个组，共消化10天。 P1，P3,P5，P9均如此，每代30个皿，共计120个皿。 细胞群体倍增时间（PDT）=(t-t0)lg2/(lgN t-lgN0) t0培养起始时间，t,培养终止时间； N0培养初始细胞数，N t培养终止细胞数。 【2】增强型绿色荧光蛋白转染猪骨髓间充质干细胞特性观察 用0.25%胰酶将转染后的细胞克隆消化为单个细胞，用PBS洗2遍，1x105个细胞加入75μl破膜剂，振荡10s,加入PI染料700μl,室温避光30min,上机检测；选同期培养的为转染细胞为对照组，比较EGFP转染对细胞增殖的影响，分别计算出静止期G0/G1,增殖期S%,和G2/M 【3】两种方法分离小型猪骨髓间充质干细胞的比较 分别取两组0,1,3代细胞，制成1x103的细胞悬液，接种到96孔板，每孔细胞悬液200微升，置37℃、5%CO2饱和湿度孵箱内孵育，各组每24小时分别取出4孔，每孔加入MTT （2mg/ml）20微升37℃孵育，4h后吸弃孔内培养液，每孔加入150微升分析纯的二甲基亚砜，移至酶联免疫检测仪上振荡10min,用分光光度计在492nm波长处测定每孔的吸光度值（OD492），以OD(492)值为纵坐标，时间为横坐标绘制生长曲线。 【4】人骨髓间充质干细胞体外培养及其生物学特性研究 取不同代数细胞，调整细胞浓度为2x104/ml后，接种于96孔培养板，置37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱培养后，用胰酶-EDTA进行消化，用台盼蓝拒染法计数活细胞，每天取12复孔，共7天；根据计数结果绘制细胞生长曲线。记录测得的结果，即培养潜伏期持续多长时间（12-24h）,多长时间进入对数生长期（3天后），对数增殖期持续时间（3-5天）,铺满皿底所需时间（5-7天），细胞进入平台期多长时间及持续多长时间，停止生长时间。

细胞生长曲线的绘制实验报告范文

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细胞生长曲线的绘制实验报告范文 前言语料：温馨提醒，报告一般是指适用于下级向上级机关汇报工作，反映情况，答复上级机关的询问。按性质的不同，报告可划分为：综合报告和专题报告；按行文的直接目的不同，可将报告划分为：呈报性报告和呈转性报告。体会指的是接触一件事、一篇文章、或者其他什么东西之后，对你接触的事物产生的一些内心的想法和自己的理解 本文内容如下：【下载该文档后使用Word打开】 篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制 一、实验目的 学习了解微生物生长量测定的方法 学习了解细菌生长曲线的绘制方法 学习掌握血细胞计数板的使用方法 （一）微生物生长量的测定 计数法重量法生理指标法 1、显微镜直接计数法 （1）利用血细胞计数板计数 （2）涂片计数 2、活菌菌落计数法 3、滤膜法

（二）细菌生长曲线 将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线（growthcurve） 篇二：细胞生长曲线的测定 细胞生长曲线的测定 一、实验目的 掌握测定细胞生长曲线的方法。 二、实验器具 24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。 三、实验方法 1.培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。 2.计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。 3.绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。 篇三：MTT法绘制生长曲线 实验材料：

实验三微生物生长曲线的测定

实验三微生物生长曲线 的测定 Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】

实验三微生物生长曲线的测定 一、实验目的目的 1、了解细菌生长曲线特点及测定原理 2、学习用比浊法测定细菌的生长曲线? 二、实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 三、实验材料

1、菌种 2、培养基：肉膏蛋白胨培养基 3、仪器和器具 721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。 4、流程 种子液→标记→接种→培养→测定 四、实验步骤 1、种子液制备 取细菌菌种1支，以无菌操作挑取1环菌液，接入肉膏蛋白胨培养液中，培养18h作种子培养液。 2、标记编号 取盛有30mL无菌肉膏蛋白胨培养液的三角瓶6个，分别编号为0、4、8、12、16、20。 3、接种培养

生长曲线的测定

实验日期：2017.11.1 实验班级：生物技术指导教师：张建丽 姓名：高熹学号：1120152430 测定细菌生长曲线 一．实验目的 1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解细菌生长的特点，综合训练微生物实验的基本实验技能。 2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。 3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。 二．实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的数量作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。 延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。 对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。 稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、过氧化物等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。 衰亡期：随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌。 体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实

实验三 微生物生长曲线的测定

实验三微生物生长曲线的测定 一、实验目的目的 1、了解细菌生长曲线特点及测定原理 2、学习用比浊法测定细菌的生长曲线 二、实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 三、实验材料 1、菌种 2、培养基：肉膏蛋白胨培养基 3、仪器和器具 721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。 4、流程 种子液→标记→接种→培养→测定 四、实验步骤 1、种子液制备 取细菌菌种1支，以无菌操作挑取1环菌液，接入肉膏蛋白胨培养液中，培养18h作种子培养液。 2、标记编号 取盛有30mL无菌肉膏蛋白胨培养液的三角瓶6个，分别编号为0、4、8、12、16、2 0。 3、接种培养 用2mL无菌吸管分别准确吸取1mL种子液加入已编号的6个三角瓶中，于37℃下振

荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出测定OD值。 4、生长量测定 将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.10.～0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。 五、实验结果与分析 以上述表格中的时间为横坐标，OD600 值为纵坐标，绘制细菌的生长曲线。

细胞生长曲线的绘制实验报告通用范本

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细胞生长曲线的绘制实验报告通用范本 使用指引：本报告文件可用于为规范管理，让所有人员增强自身的执行力，避免自身发展与集体的工作规划相违背，按固定模式形成日常报告进行上交最终实现及时更新进度，快速掌握所需了解情况的效果。资料下载后可以进行自定义修改，可按照所需进行删减和使用。 篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制 一、实验目的 学习了解微生物生长量测定的方法 学习了解细菌生长曲线的绘制方法 学习掌握血细胞计数板的使用方法 （一）微生物生长量的测定 计数法重量法生理指标法 1、显微镜直接计数法 （1）利用血细胞计数板计数 （2）涂片计数 2、活菌菌落计数法

实验八 细菌生长曲线的测定及

实验八细菌生长曲线的测定及 血球计数板测定微生物生长 一、细菌生长曲线的测定及 ★细菌的生长曲线就是把一定量的菌体细胞接种到恒容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，在此过程中，其细胞数目将随培养时间的延续而发生规律性的变化，如以细胞数目的对数值(或O.D.值)为纵坐标，以培养时间为横坐标作一条曲线，即为细菌的生长曲线，它反映了细菌的群体生长规律。 ★大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。 ★依据其生长速率的不同，可把细菌的生长曲线划分为延滞期，对数期，稳定期和衰亡期等四个时期。 ★微生物OD值是反映菌体生长状态的一个指标，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。通常400～700nm 都是微生物测定的范围，505nm测菌丝菌体、560nm测酵母、600nm测细菌。 ★本实验测定细菌生长曲线的方法是，将待测菌种接入一只大试管的培养液中，在适宜的培养温度和良好的通气状态下，定时取出此试管，在600纳米波长处测定菌液浓度(O．D．值)，在一定的范围内，菌液浓度与光密度值成线性关系。因此，根据菌液的O．D．值可以推知细菌生长繁殖的进程。将所测得的一组O．D．值与其相应的培养时间作图，即可绘制出该菌的生长曲线。 ☆实验操作 1、菌种培养：取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液（LB）中，静止培养12--14h，备用。 2、制备LB培养基100ml置于200ml三角瓶内，备用。 3、标记：取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、 4、6、8、10、12、14、16和20h。 4、接种：分别用5ml无菌吸管吸取5ml大肠杆菌培养液(培养12~14h)转入盛有100ml LB液的三角瓶内，混合均匀后分别取5ml混合液放入上述标记的11支无菌大试管中。

生长曲线和细胞生长周期的测定

生长曲线和细胞生长周期的测定 MTT比色法绘制生长曲线 生长曲线测定一般可用细胞计数法进行，但数值不够精确，可有20%-30%的误差，需结合其他指标进行分析。 原理：MTT，商品名噻唑蓝，是一种能接受氢原子的染料的四唑盐。活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的蓝紫色复合物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。 步骤;1.接种：用含%10胎小牛血清的培养液配成细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul. 2细胞培养：同一培养条件，培养3-5天 3呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，ph=7.4）20ul.继续孵育4h。终止培养，小心吸弃孔内培养基上清液，对于悬浮细胞需要分离后再吸弃孔内上清液。 每孔加150ul DMSO，脱色摇床震荡10min，使结晶充分溶解。 4.比色；选择490nm(570nm)波长，在没脸免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录时间，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。 流式细胞仪测细胞生长周期： 流式测细胞周期，只需在实验结束后收集细胞（细胞数量须达到2-5x105）,离心，用PBS洗三次，再转移到1.5ml的EP管内，用预冷的70百分之的酒精固定1小时，就可以送到流式细胞仪检测。 流式细胞仪细胞周期检测流程 1，做前提前换液，调整细胞状态，小皿或大皿（保证细胞达到10--100万个）。 2，遇冷PBS 清洗两次 3，加入胰酶（Tripsin），静止2-3分钟（消化时间不要过长，以免损伤细胞），加入2-3mlDMEM 慢慢吹打细胞成单细胞悬液。 4，1000rpm 离心3min 5，去上清，加入遇冷PBS 1000rpm 离心3min 6，去上清，加入0.5ml PBS（预冷）悬浮细胞 7，加入1.5ml无水乙醇在漩涡器上涡旋（逐滴加入） 8，-20℃固定过夜（overnight） 9，拿出已固定细胞，1000rpm 离心3min 去上清 10，加入预冷PBS 100rpm 离心3mim 11，去上清加入500ul---1000ul 预冷PBS 悬浮细胞 12，加入5-10ul RNA酶37℃水浴消化30min 13，过400目细胞筛注入EP管,封口膜封口。 14，将细胞加入流式管，加PI 1滴上样流式细胞仪 16，分析结果

细胞生长曲线的绘制实验报告简易版

The Short-Term Results Report By Individuals Or Institutions At Regular Or Irregular Times, Including Analysis, Synthesis, Innovation, Etc., Will Eventually Achieve Good Planning For The Future. 编订：XXXXXXXX 20XX年XX月XX日 细胞生长曲线的绘制实验 报告简易版

细胞生长曲线的绘制实验报告简易 版 温馨提示：本报告文件应用在个人或机构组织在定时或不定时情况下进行的近期成果汇报，表达方式以叙述、说明为主，内容包含分析，综合，新意，重点等，最终实现对未来的良好规划。文档下载完成后可以直接编辑，请根据自己的需求进行套用。 篇一：实验五微生物生长量的测定及生长 曲线的绘制 一、实验目的 学习了解微生物生长量测定的方法 学习了解细菌生长曲线的绘制方法 学习掌握血细胞计数板的使用方法 （一）微生物生长量的测定 计数法重量法生理指标法 1、显微镜直接计数法 （1）利用血细胞计数板计数 （2）涂片计数

2、活菌菌落计数法 3、滤膜法 （二）细菌生长曲线 将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线（growth curve） 篇二：细胞生长曲线的测定 细胞生长曲线的测定 一、实验目的 掌握测定细胞生长曲线的方法。 二、实验器具 24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf

结晶紫实验检测细胞生长曲线具体步骤

结晶紫实验检测细胞生长曲线具体步骤? 如题: 有以下几个问题: 1.结晶紫染料染上的是所有细胞, 或者是死细胞,或者是活细胞? 2.检测细胞生长曲线的方法很多,结晶紫这种方法有什么优势吗?我们实验室现行的方法就只有这种. 3.我实验的目的是检测稳定转染了目的基因的细胞株的生长趋势,以转染了空载体的细胞作为对照. 要求两种细胞株在启始点的细胞数一致. 我是通过血球计数板计数稀释过的细胞,得出每毫升稀释液中的细胞数. 在24孔板中测生长曲线每孔需要接种多少细胞? 细胞的多少会影响细胞的生长吗? 还是会影响细胞的生长趋势?有没有必要做两个浓度或更多浓度的平行实验? 4.生长曲线最适的是测几个时间点?我需要在同一块24孔板上种下所有时间点的细胞,然后分别与不同的时间点收吗?好象拿出细胞台就会污染.我必须种在几个24孔板吗? 5.在制作生长曲线的时候,由于我是在不同的时间点收的细胞,分别测OD值,直到最后一个时间点做完,那就要求我每次处理的细节一致或者是先收的细胞保存着等待最后一个时间点再一起处理细胞,测OD值.能这样处理吗?在实验中如何注意这个问题? 希望大家一起来讨论.谢谢了. 1:只有活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的Formazan结晶并沉积在细胞中 2：检测细胞生长曲线也可以利用细胞计数法进行的 3：细胞接种数不能过多也不能太少，太少细胞滞留期太长；数量太多，细胞将很快进入平台期，要求在短期内进行传代，曲线不能确切反映细胞生长情况。一般接种数量以7~10天能长满而不发生生长抑制为度。同种细胞的生长曲线先后测定要采用同一接种密度，这样才能做纵向比较；不同的细胞也要接种细胞数相同，才能进行比较。 4：最好种在几个培养板上。通常计数7 d的。每隔24 h测量一个点，每个点为3个平行样品的平均值。 5：OD值最好一个时间点测一次，最好不要最后以下测，这样对你的结果有偏差的。

细胞生长曲线的绘制及注意事项

细胞生长曲线的绘制及注意事项 1.取对数生长期细胞，用胰酶消化收集，调整单细胞悬液密度为104~105个/mL视细胞贴壁后的大小，倍增时间等因素确定接种密度。按200μl/孔（1×104个细胞）接种于96孔培养板内，每组细胞接种5个孔，取平均值，切记各孔的接种密度一致。 2.置37℃、5％CO2气相和饱和湿度的CO2培养箱中培养， 3.用PBS配制5mg/ml的MTT溶液，0.22微膜过滤除菌，4度保存。(MTT溶剂需避光4度保存，配好的溶剂有效期两周，过期的不能再用于实验，须重配) 4.从第24 h开始，每隔24 h随机取1块96孔板，96孔板每孔加入20μl 5mg/mL MTT液，继续培养4 h后，吸出孔内培养液；向每孔加入150μl DMSO。将培养板置于微孔板振荡器上振荡10 min，使结晶物溶解。 5.酶联免疫检测仪检测各孔OD值，检测波长570 nm, 以时间为横坐标，平均OD值为纵坐标，记录并绘制细胞生长曲线。 备注： A.选择适当的细胞接种浓度。因此，在进行MTT试验前，对每一种细胞都应测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，然后确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止时不致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成的量与细胞数呈良好的线性关系。 B.细胞生长曲线方法96孔板太小,接种细胞多时,用不了几天就长满,因一般要做5-7天);接种细胞少时,不易养活. C.避免血清干扰。用含15%胎牛血清培养液培养细胞时，高浓度的血清物质会影响试验孔的吸光值。由于试验本底增加，会降低试验敏感性。因此，一般选小于10%胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。 D.操作过程中按常规换液.一般2-3天换液,如果不换液,则酸性产物等代谢产物积聚,一方面培养环境改变影响细胞生长,另一方面细胞营养消耗过多,生长变慢.做细胞生长曲线的目的是反映其生长特性,增殖能力,不换液则与我们平时细胞生长环境不一致.结果不科学. E.实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。

细说细胞培养中的的支原体污染以及生长曲线测定

细说细胞培养中的的支原体污染以及生长曲线测定 -麒盟生物 1、问：测定细胞生长曲线的意义是什么？ 答：细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。因为细胞太小，无法测单个细胞的生长状态，所以测细胞群体的生长曲线。 2、问：如何选择细胞接种数？ 答：可根据细胞传代培养过程中接种数及细胞生长周期进行计算，细胞接种数因细胞的不同而不同。 3、细胞计数时为什么要用台盼蓝染色？ 答：加入台盼蓝后，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深蓝色，是不健康或已死亡的细胞，不能计数。 4、细胞生长曲线测定时为什么要做重复孔？ 答：测定细胞生长曲线细胞计数时选择3个复孔，每孔分别计三次，取其平均值，目的是减小操作误差。 5、细胞生长曲线测定周期是几天? 答：一般是一个星期。 6、为什么绘制的细胞生长曲线没有达到平台期？ 答：可能有以下原因：一是细胞接种密度过低；二是细胞培养时间过短；三是细胞生长状态不好，使其不能正常增殖。更多专业知识，登陆麒盟生物网站查询。 7、为什么细胞计数第一天，细胞数没有增加反而减少? 答：一般细胞传代后，会有一个生长缓慢的潜伏期，细胞不增殖，而细胞会有正常的死亡，故细胞数不增加反而减少。 8、细胞生长曲线还有其他方法绘制吗？

答：当然有。我们提到最多的是直接计数的方法，除此以外还有相对计数的方法，该类方法首先要绘制标准曲线，标定细胞数和某个变量的函数关系，然后我们只需要测定每天这个变量的值便可以计算出细胞数。常用的是MTT、CCK8等比色的方法。

细胞培养中的的支原体污染 支原体是一种大小仅为0.2~0.3μm，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22~0.45μm）的原核生物。 支原体是让每个细胞培养者崩溃的家伙。因为它极小，可以很轻松的通过滤膜，混入培养系统中，而且没有细胞壁，可以轻而易举的躲过抗生素，就这样悄无声息的杀死细胞，与细菌和真菌相比，支原体造成的污染不论在检测、预防还是去除上都更为困难。细胞培养过程中一旦有支原体污染，轻则实验失败，重则整个实验系统被污染，严重影响实验的进程，劳心劳力。 为避免不必要的损失，细胞培养过程中要预防支原体的污染，以下是一些预防支原体污染的实践经验： 1、从源头上遏制支原体，当有新细胞进入培养系统时，必须进行支原体检测，确定无污染后才能进行正常的培养，实验。 2、所有进入细胞库的细胞都必须确保无支原体污染。 3、人体是最大的支原体携带者，因此进入细胞培养室时，必须穿细胞室专用实验服，戴口罩、手套、帽子，女生的长发一律不可露在外边。 4、培养每株细胞所用的培养试剂都需分开使用，避免交叉污染。 5、细胞培养室必须进行定期的消毒，并定期对培养系统进行支原体检测。 6、支原体污染后，不会使细胞死亡，可以与细胞长期共存，培养基一般不发生混浊，细胞无明显变化，外观上给人以正常感，实则细胞已受到多方面的潜在影响，如引起细胞变形，影响DNA合成，抑制细胞生长等，在培养过程中，若发现细胞状态不对，破碎细胞甚多，必须立马进行支原体检测，切不可延误，有报道称25%的细胞都存在支原体污染。