测定血清中免疫球蛋白的临床意义

测定血清中免疫球蛋白的临床意义

王　丹1,姜　芳2

(11哈尔滨医科大学第一临床医学院,黑龙江哈尔滨150001;21哈尔滨电机厂医院,黑龙江哈尔滨150040)

摘要:机体患某种疾病时,可有1种或几种免疫球蛋白明显升高或减低。因此,检测血清中免疫球蛋白的含量对于某些疾病的诊断和指导治疗有实际临床意义。该文简单介绍引起高免疫球蛋白血症和低免疫球蛋白血症的主要疾病。

关键词:免疫球蛋白;高免疫球蛋白血症;低免疫球蛋白血症中图分类号:R39217 文献标识码:A 文章编号:1004-5775(2002)03-0167-02

Clinical Significance of Determination on Immunoglobulin in Serum

W ANG Dan ,J I ANG Fang

(The First Affiliated Hospital of Harbin Medical University Harbin 150001China )

Abstract :There might be one or several kinds of immunoglobulin increased or decreased when body su ffered s ome diseases.There might be clin 2ical significance in diagnosis and indication to detect the content of immunoglobulin in serum for s ome diseases.This paper had introduced about s ome diseases that could cause hyperimmunoglobulinia or hypoimmunoglobulinia briefly.K ey w ords :Immunoglobulin ;Hyperimmunoglobulinia ;Hypoimmunoglobulinia

免疫球蛋白(Ig )是抗体的表现形式和物质基础,是具有抗体活性和结构相似的血清球蛋白。

免疫球蛋白的基本结构是4条肽链,2轻2重,肽链之间由二硫键相联结。任何一种免疫球蛋白,只有一类别的重链、轻链相同。根据重链的不同,免疫球蛋白分为IgG 、IgA 、IgM 、IgD 和IgE 5种。免疫球蛋白由浆细胞、前浆细胞或淋巴细胞产生,在血浆和血管外体液中的分布大致相等。循环中的免疫球蛋白,每日约更换1/4。健康成人每日合成免疫球蛋白2～5g ,但在发生感染时,合成可增加7倍。正常成人血清中各种免疫球蛋的含量和某些特性见表1。在机体患某种疾病时,可有1种或几种免疫球蛋白明显升高或减低。因此,检测血清中免疫球蛋白的含量对于某些疾病的诊断和指导治疗有实际临床意义。检测IgG 、IgA 、IgM 所用的方法,根据检样不同有所不同。血液中含量测定既可用单向环状免疫扩散法,也可用免疫比浊法。前法简单经济,但工作量大,耗时长;后法精密度较高,可自动化,需时短,但需要昂贵的自动化仪器。

作者简介:王丹(1978-),女,汉族,检验士。

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(编辑:谢忠艳)

(收稿日期:2001-01-24)

其他各种体液中微量免疫球蛋白的测定需用放射免疫法或酶

联免疫法,正常人各种分泌液中免疫球蛋白的含量不尽相同,

IgD和IgE一般不列入常规。

表1　正常成人血清中免疫球蛋白含量和某些特性

特 性IgG IgA IgM IgD IgE 血清中含量(g/L)11120±21302150±01750195±01220130±0115010005±010001分子量150000170000～390000800000150000196000

基本结构单体

单体(血清中)

双体(分泌液中)

五体单体单体

生物学功能

①固定补体+-+--

②通过胎盘+----

③亲细胞性+(异种)---+(同种)

④半衰期(d)235～8311218

213(血清) 9～10(皮肤)

在某些疾病中,血清中免疫球蛋白含量显著高于正常值,如多发性骨髓瘤、慢性活动性肝炎等;或显著低于正常值,如先天性低免疫球蛋白血症、某些肠道病等。要作出确诊,必须结合病人的病史、症状、临床检查和其他实验室检查资料。下面简单介绍引起高免疫球蛋白血症与低免疫球蛋白血症的主要疾病。

1　高免疫球蛋白血症

可分为单细胞株和多细胞株高免疫球蛋白血症2个类型。前者在电泳中有一高而狭窄、质地均一的峰,显示是单个形成抗体细胞株的产物,但抗体活性很低,所以称为异蛋白,临术上称为M-成份。后者在电泳中的峰为弥散性较宽和异质性,是几个形成抗体的细胞株所产生。〔1〕

111　多细胞株高免疫球蛋白血症

在大多数情况下是由抗原长期刺激所引起(肝病例外)。属于这一类的有感染、结缔组织病、肝病等。

感染:主要是慢性细菌性感染,如肺结核、慢性化脓性感染等,其中IgG大多数升高。

结缔组织病:各种结缔组织病常有各种免疫球蛋白升高,尤其是系统性红斑狼疮及类风湿性关节炎。前者IgG上长,可高达正常平均值的4倍左右,IgA可达2倍左右,后者IgM 增高。

肝脏疾病:肝实质病伴有多种免疫球蛋白增多,特别是慢性活动性肝炎。各种肝病中,血清免疫球蛋白增高程度与肝实质破坏的严重性相关。肝腹水时,IgG平均值达24g/L以上,最高的可达正常平均值的4倍左右。急性肝炎患者如IgG 持续增高则往往提示将转为慢性活动性肝炎。IgM大幅度的突然升高,视为预后不良。

此外,某些淋巴瘤、转移性癌等,血清中免疫球蛋白也可增高。

112　单细胞株高免疫球蛋白血症

主要见于浆细胞恶性病变,包括多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症和浆细胞瘤。

11211　多发性骨髓瘤:是单细胞株免疫球蛋白血症中最常见的一种,其异常的免疫球蛋白种类IgG型为最多,IgA型次之。血中异常的免疫球蛋白浓度,一般均>20g/L,部分患者尿中可测出本周氏蛋白,即免疫球蛋白分子轻链。血中其他免疫球蛋白则往往减低。

11212　巨球蛋白血症:是单细胞株IgM增高中最多见者,又称Waldenstrom症,血中IgM>20g/L。由于IgM分子大,因此,血粘度常增高。少数病人的尿中有本周氏蛋白,与多发性骨髓瘤不同,病人的骨髓无任何变化,血清中正常体液和细胞免疫的减低程度也较小,此病临床病理方面比较接近于淋巴瘤。11213　轻链病:特点是病人尿中有大量本周氏蛋白,这是因为轻链的体积小,分子量仅25000,所以容易通过肾脏,肾脏既是排泄器官,又是轻链分解的场所。只有当肾脏受损时,轻链的排出才会受到障碍,而在血中出现。

11214　重链病:此病很少见,血清中的M-成分是Fe片段,而不是整个重链。分子量为52000,容易在尿中排出,可以用电泳和血清学方法加以检测。

除上述外,浆细胞白血病,淋巴系统恶性增生,如淋巴瘤、淋巴性白血病,何杰金氏病患者血中也可出现M-成份,但其含量不高,正常免疫球蛋白不减低或略减。

2　低免疫球蛋白血症

有先天性和获得性2大类。先天性低免疫球蛋白血症主要见于体液免疫缺陷和联合免疫缺陷病,可各分为若干型。体液免疫缺陷可分为。

211　免疫球蛋白全缺,如Bruton型无免疫球蛋白血症。病人血中的IgG往往<1g/L;IgA与IgM含量也仅为正常人的1%。212　3种免疫球蛋白中缺1或2种,如免疫球蛋白异常血症。有人将其分为许多型,最多见的是缺乏IgA,患者往往无特殊症状,但易患呼吸道感染。缺乏其它种类免疫球蛋白时病人易患某种传染病,如缺IgG时易患化脓性感染,缺IgM时易得革兰氏阳性菌败血症等。

213　获得性低免疫球蛋白血症,分原发性和继发性2类,前者可发生在儿童或成年期,患者血中IgG含量常<5g/L,引起原因较多,例如:(1)伴有大量蛋白质丢失的疾病,如剥脱性皮炎,肠道或肾脏疾病;(2)原发性网状内皮系统肿瘤,如何杰金氏病、淋巴肉瘤;(3)其它,如毒性因子、骨髓疾病等。

总之,许多疾病能引起高或低免疫球蛋白血症,要作出确诊,除必须根据病史、临床症状、体症和其他实验检查外,检查血中3种免疫球蛋白含量是不可少的。此外,在判断结果时,除当免疫球蛋白的含量超出正常范围时容易作出结论外,由于人血液中免疫球蛋白正常值的差异很大,有时需参考个人原来免疫球蛋白水平判断有无增高或减少现象。

参考文献

〔1〕马宝骊,肖熊祥1医学免疫学〔M〕1上海同济大学出版社,198711981

(编辑:刘学振)

(收稿日期:2002-01-16)

体液免疫球蛋白测定

体液免疫球蛋白测定 第一节血清IgG、IgA、IgM测定 血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM定量测定方法一般有单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、ELlSA、免疫比浊法、放射免疫分析法等。临床常用单向环状免疫扩散法和免疫比浊法来测定血清免疫球蛋白含量。 一、血清IgG、IgA、lgM测定 （一）单向环状免疫扩散法 该法的原理是将抗血清均匀地分散于琼脂或琼脂糖凝胶内，胶板上打孔，孔内注入抗原或待测血清，抗原在含有抗血清的胶内呈放射状（环状）扩散，在抗原抗体达到一定比例时形成可见的沉淀环。在一定条件下，抗原含量越高，沉淀环越大。 （二）免疫比浊法 该法具有检测范围宽、测定结果准确、精密度高、检测时间短（一般在几分钟内即可完成测试）、敏感度高、稳定性好等优点。 二、血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义 （一）年龄 新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG，故血液中含量较高，接近成人水平。 （二）免疫球蛋白IgG、IgA、IgM均升高 慢性肝脏疾病如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化患者血清中可见3种Ig均升高。慢性细菌感染如慢性支气管炎、肺结核，血IgG可升高。宫内感染时脐血或出生后的新生儿血清中IgM含量可增高。SLE患者以IgG、IgA升高较多见。类风湿关节炎患者以IgM增高为主。 （三）单一免疫球蛋白升高 主要是指患者血清中某一类免疫球蛋白含量显著增多，大多在30g／L以上，这种异常增多的免疫球蛋白其理化性质十分一致，称为单克隆蛋白（MP）即M蛋白。此类异常增多的免疫球蛋白多无免疫活性，故又称副蛋白。由它所致的疾病称为免疫增殖病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等。 （四）免疫球蛋白降低 先天性低Ig血症，主要见于体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。IgA缺乏患者，易发生反复呼吸道感染。IgG缺乏患者，易发生化脓性感染。IgM缺乏患者，易发生革兰阴性细菌败血症。 第二节血清IgD和IgE测定 正常人血清中IgD含量很低，仅占血清免疫球蛋白总量的0.2%。膜结合型IgD（mIgD）构成BCR，是B 细胞分化发育成熟的标志。未成熟的B细胞仅表达mIgM，成熟B细胞可同时表达mIgM和mIgD。活化的B 细胞或记忆B细胞其表面的mIgD逐渐消失。 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌。其重要特征为糖含量高达12%。IgE为亲细胞抗体，可引起Ⅰ型超敏反应。IgE可能与机体抗寄生虫免疫有关。 第1页

免疫比浊法检测免疫球蛋白

免疫比浊法检测免疫球蛋白 一、实验目的 利用免疫比浊法绘制标准曲线，并检测样品中免疫球蛋白的浓度。（本小组检测的为IgG样品） 二、实验原理 1.抗原抗体反应(Antigen-antibody reaction)：抗原与其刺激机体产生的相应抗体在体内或体外发生特异性结合的反应。反应特点有：特异性、比例性、可逆性、敏感性。影响因素有：电解质、温度、酸碱度。 2.免疫比浊法：合适比例的抗原抗体形成的免疫复合物，在PEG作用下形成微粒，使样品浊度发生变化。当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱，根据光的强度改变可测得微粒浓度。 分类：①透射比浊法（Transmission tubidimetry）当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时，由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。当抗体浓度固定（过量），样品的浊度与其中所含抗原量成正比。（特点）透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计，几乎所有的实验室均能开展。不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的时间较长。②散射比浊法（Nephelometry）光线通过检测溶液时，被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光，其强度与复合物的数量和散射夹角成正比，与光的波长成反比。（特点）优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。 本实验采用透射法。 3.聚乙二醇PEG的作用：在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，3~4％的聚乙二醇，可破坏抗原抗体的水化层，促进抗原抗体靠近反应，但如浓度不适合，会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。 三、实验材料 免疫球蛋白A,G(IgA,IgG)测定试剂(试剂1[PEG]，试剂2[羊抗人IgA, IgG]）（1管/每组）免疫球蛋白A, G(IgA,IgG)校准品，蒸馏水，血清样本（1管） 微量加样枪、ep管（1.5mL离心管） 酶标仪、水浴箱 四、实验步骤 1.在7个EP管中各加250μL IgG试剂1（PEG）。 2.7管分别加入蒸馏水、校准品原液、1：2校准品、1：4校准品、1：8校准品、1：16校准品、样本各2μL。 3.混匀后37℃水浴5min。 4.7管各加入85μL IgG试剂2（羊抗人IgG）。 5.混匀后37℃水浴10min。 6.分别吸取200μL至96孔酶标板中，用酶标仪在700nm处读取OD值。 五、实验结果与数据处理 2.标准曲线

抗原或抗体的检测

抗原或抗体的检测

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抗原或抗体的检测 一、检测的原理 借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。 1．抗原与抗体的亲和力（afｆiｎitｙ)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应,而是非共价键的可逆的结合。抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型,造成两分子间有较强的亲和力。空间构型互补程度不同,抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。互补程度高，则亲和力强。此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响,抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。 2．抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点,对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。定性和定位检测比较简单,即用已知的抗体和待检样品混合,经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生,就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生,则说明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。 对抗原或抗体进行定量检测时,以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。 （1）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量:在一定的反应条件下,加入的已知抗体(或抗原)的浓度一定,反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原(或抗体)量成正比。也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品中抗原(或抗体）的含量。如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。 (2)抗原或抗体效价滴定的原理:当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。在实际工作中,把浓度低的反应成分（抗原或抗体)的浓度固定，把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。例如用人血清作抗原免疫3只家兔,比较3只家兔产生抗体的多少,即滴定3只兔血清抗体效价,可用双向琼脂扩散法来滴定,例如将抗体浓度固定，将抗原作不同的稀释度,分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度(如甲兔的抗体效价为1/２０00，而丙免的是1/８00０则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高）。也就是表示效价的稀释度越高,样品中所含待检成分越多。因人血清(抗原)和抗体（免疫兔血清）相比，浓度高，故应稀释抗原。 二、抗原或抗体检测的实用意义 １．抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。抗体用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗HLＡ抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体,对有关疾病的诊断有重要意义。 ２．抗原检测的意义可做为抗原进行检测的物质可分为以下四类: （1)各种微生物及其大分子产物:用于传染病诊断、微生物的分类及鉴定以及对菌苗、疫苗的研究。 （２）生物体内各种大分子物质：包括各种血清蛋白(如各类免疫球蛋白、补体的各种成分)、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可做为抗原进行检测。在对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重要意义。 （3）人和动物细胞的表面分子：包括细胞表面各种分化抗原(如CD抗原)、同种异型

实验室血清学常用检测方法

常用血清学检测方法介绍 一、酶联免疫吸附试验诊断技术 目前，该项技术已在兽医学上得到广泛的应用,大多数动物传染病都已经研制成 ELISA检测方法。 1、酶联免疫吸附试验的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的 抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应o用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。 再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相矢，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 2、ELISA的类型根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于动物疫病检测的ELISA主要有以下几种类型： ①?双抗体夹心法测抗原 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质、微生物病原体第二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。例如猪瘟病毒检测ELISA、禽流感病毒抗原捕获ELISA，就是根据这种原理设计的。 ②?双抗原夹心法测抗体 反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。乙肝HBs的检测 常采用本法。本法尖键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。 此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于于间接法。此外，该方法不受被检动物种属差异的限制。 ③?间接法测抗体

自身抗体谱的临床意义

抗U1-rRNP抗体：高滴度的抗U1-rRNP抗体是混合性结绨组织病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率95-100%，抗体滴度与疾病活动性相关。在30-40%的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-rRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体。 抗Sm抗体：系统性红斑狼疮的特异性抗体，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断性指标，但阳性率仅为5-10%。 抗SS-A抗体：与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（40-80%）、也见于系统性红斑狼疮（30-40%）和原发性胆汁性肝硬化（20%）中，偶见于慢性活动性肝炎。此外，在100%的新生儿红斑狼疮中抗SS-A抗体阳性。该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。 抗SS-B抗体：几乎仅见于干燥综合征（40-80%）和系统性红斑狼疮（10-20%）的女性患者中，男女比例为1：29。在干燥综合征中抗SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现。 抗Scl-70抗体：见于25-75%的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异（Scl=硬化症）。在局限型硬化症中不出现。 抗PM-Scl抗体：常见于多肌炎与硬化症的重叠综合征中，50%的该抗体阳性患者为肌炎与硬化症的重叠综合征，抗PM-Scl抗体也可见于单独的多肌炎患者中，阳性率为8%，在弥散型硬化症中的阳性率为2-5%。 抗Jo-1抗体：见于多肌炎，阳性率为25-35%。常与合并肺间质纤维化相关。 抗着丝点抗体：与局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征：钙质沉着、Raynaud，s 病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张）有关，阳性率为70-90%。在原发性胆汁性肝硬化患者中也可检测到该抗体（阳性率10-30%）。还可出现于雷诺氏综合征中。 抗PCNA抗体：PCNA为增殖细胞核抗原，其表达与细胞周期有关。抗PCNA抗体为系统性红斑狼疮的特异性抗体，但阳性率仅为3%。有文献报道，抗PCNA抗体可能与系统性红斑狼疮患者发展为弥散性增殖性肾小球肾炎有关。 抗dsDNA抗体：对系统性红斑狼疮具有很高的特异性。除抗Sm抗体外，抗dsDNA抗体也可作为该病的一个血清学标志，阳性率为40-90%，并且抗dsDNA抗体滴度与疾病的活动度相关，可用于疗效监控。 抗核小体抗体： 在系统性红斑狼疮患者血清中的阳性率为50-95%，特异性几乎为100%。核小体是细胞染色体的功能亚单位，由DNA和组蛋白以特殊的方式组成。抗核小体抗体比抗dsDNA抗体、抗组

免疫球蛋白的结构

第一节免疫球蛋白的结构（The Structure of Immunoglobulin) B淋巴细胞在抗原刺激下增殖分化为浆细胞，产生能与相应抗原发生特异性结合的免疫蛋白，这类免疫球蛋白被称为抗体（antibody, Ab）。 1937年，Tiselius用电泳方法将血清蛋白分为白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等组分，其后又证明抗体的活性部分是在γ球蛋白部分。因此，相当长一段时间内，抗体又被称为γ球蛋白（丙种球蛋白）。 实际上，抗体的活性除γ球蛋白外，还存在于α和β球蛋白处。1968年和1972年的两次国际会议上，将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统一命名为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。 Ig是化学结构的概念，它包括正常的抗体球蛋白和一些未证实抗体活性的免疫球蛋白，如骨髓瘤病人血清中的M蛋白及尿中的本周氏（Bence Jones, BJ）蛋白等。 免疫球蛋白可分为分泌型（secreted Ig,SIg）和膜型（membrane Ig, mIg）。前者主要存在于血清及其他体液或外分泌液中，具有抗体的各种功能；后者是B细胞表面的抗原识别受体。 ☆☆相关素材☆☆ 图片正常人血清电泳分离图 一免疫球蛋白的基本结构 The basical structure of immunoglobulin 免疫球蛋白分子是由两条相同的重链（heavy chain，H链）和两条相同的轻链（light chain，L链）通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。 X射线晶体结构分析发现，IgG分子由3个相同大小的节段组成，位于上端的两个臂由易弯曲的铰链区（hinge region）连接到主干上形成一个"Y"形分子，称为Ig分子的单体，是构成免疫球蛋白分子的基本单位。

血清免疫球蛋白测定.docx

血清免疫球蛋白测定 B-淋巴细胞受抗原刺激后，引起一系列细胞形态与生化特性变化，转化为淋巴母细胞并增生繁殖，最后演化为浆细胞，合成免疫球蛋白。免疫球蛋白普遍存在于生物体的血液、体液、外分泌液及某些细胞（如淋巴细胞）的细胞膜上。免疫球蛋白是一组具有抗体特性的球蛋白，其分子量很大，含有1000个以上的氨基酸分子，均由其共同抗原的两个相同的轻链（L链）和具有特异性抗原的两个不同的重链（H链）组成。 1分类 根据重链的氨基酸组成不同，免疫球蛋白可分为分五类：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。 1.1IgG IgG是人体的主要免疫球蛋白，也是唯一能通达胎盘的免疫球蛋白。根据IgG的重链氨基酸顺序的差别，可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4各亚类。IgG是主要抗感染抗体，对各种细菌、病DU有抗体活性，并有激活补体的作用。 1.2IgA IgA是分泌液中主要抗体，可分为IgA1和IgA2两个亚类。存在于血清中的称血清型IgA，存在于泪液、乳汁、胃肠道、呼吸道和泌尿生殖道分泌液中的称分泌型IgA，对局部粘膜有抗菌和抗病DU作用。

1.3IgM IgM可分为IgM1和IgM2两个亚类。是抗原刺激最先产生的免疫球蛋白，有较强的固定补体、溶解细菌及细胞的能力。IgM是抗革兰氏阴性菌和异体红细胞的主要抗体，也是存在于B淋巴细胞表面的主要免疫球蛋白。 1.4IgD 其作用与过敏反应有关。据报道，IgD可对某些抗原起反应，如青霉素、胰岛素、核抗原、甲状腺抗原等。它存在于B淋巴细胞表面，构成早期的膜受体，具有识别抗原，制动B淋巴细胞的分化作用。 1.5IgE 与I型变态反应有关，具有亲细胞特性。IgE通过Fc段与肥大细胞、嗜碱粒细胞上的Fc受体结合，故属亲同种细胞性抗体。当机体再次接触同种抗原后，过敏原即与结合在细胞表面的IgE作用，使细胞释放介质，引起平滑肌痉挛，血管通透性增加等过敏反应，还具有抗寄生虫感染作用。 2正常参考值 IgG：8～16g/L，IgA：1～4g/L，IgM：0.5～1.9g/L，IgD：0.01～0.4g/L，IgE：0.001～0.009g/L。 3临床意义 3.1血清免疫球蛋白降低 血清免疫球蛋白水平取决于免疫球蛋白合成和分解代谢的速率以及由体内丢失的程度。血清免疫球蛋白降低可由于合成不足，丢失

自身抗体检测项目及临床意义

一、抗核抗体 抗核抗体（antinuclearantibodies，ANA）泛指抗各种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。ANA的性质主要是IgG，也有IgM和IgA，甚至IgD和IgE。ANA可以与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性。ANA主要存在于血清中，也可存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。 ANA在SIE患者的滴度较高，但也出现在其他许多自身免疫病中，在许多研究报告中，都将检出ANA作为自身免疫甚至自身免疫病存在的依据。这种现象的机制尚未明了，有待于进一步研究。 （一）ANA的类型及意义 由于细胞核成分的复杂性，不同成分的抗原性也不同；因此就会有多种不同的ANA。 1．抗核蛋白抗体核蛋白抗原（DNP）由DNA和组蛋白组成。由于DNP抗原存在不溶性和可溶性两个部分，可分别产生相应的抗体。不溶性DNP抗体通常不完全被DNA和组蛋白所吸收，它是形成狼疮细胞的因子；可溶性抗原存在于各种关节炎病人的滑膜液中，其相应抗体也出现于RA病人的滑膜液中。 2．抗DNA抗体可以分为两大类：①抗天然DNA（nDNA）抗体，或称抗双链DNA （dsDNA）抗体；②抗变性DNA抗体，或称抗单链DNA（ssDNA）抗体。抗dsDNA抗体对SLE有较高的特异性，70％～90％的活动期SLE病人该抗体阳性，效价较高，并与病情有关。抗ssDNA抗体可见于多种疾病中，特异性较差。 3．抗ENA抗体可提取性核抗原（ENA）多从动物的胸腺中提取。先将胸腺匀浆并破碎细胞，分离出细胞核；再经盐水或磷酸盐缓冲液处理后，很容易从胞核中提取出来。ENA 不含DNA，对核糖核酸酶敏感。近年来的研究表明，ENA可分为十几种，现仅介绍几种主要的ENA及其相应抗体。

免疫球蛋白IgA测定

免疫球蛋白IgA测定 1检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2原理 免疫透射比浊法 抗免疫球蛋白A抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。 3标本要求 3.1使用新鲜血清,不使用血浆. 3.2在采集血液后2h分离血清. 3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次. 3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.

4试剂 4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgA试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014） 4.1.1 试剂组成 R1:TRIS 缓冲液：20 mmol/l，pH 8.0；氯化钠：200 mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。 R2:抗人免疫球蛋白A抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20 mmol/l；氯化钠：150 mmol/L；防腐剂。 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：90天。 4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。 4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgA校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。 5 仪器

AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤 6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。 7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

免疫球蛋白IgE

免疫球蛋白I g E This manuscript was revised on November 28, 2020

免疫球蛋白IgE 免疫球蛋白lgE（人体的一种抗体），存在于血中。是正常人血清中含量最少Ig，可以引起I型超敏反应 球蛋白偏高，与慢性肝病，机体免疫系统有关。人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白（γ-球蛋白）中。可分为五类，即免疫球蛋白G （IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。其中IgG是最主要的免疫球蛋白，约占人血浆丙种球蛋白的70%，分子量约15万，含糖2～3%。IgG分子由4条肽链组成。其中分子量为2.5万的肽链，称轻链，分子量为5万的肽链，称重链。轻链与重链之间通过二硫键（—S—S—）相连接。免疫球蛋白是机体受抗原（如病原体）刺激后产生的，其主要作用是与抗原起免疫反应，生成抗原-抗体复合物，从而阻断病原体对机体的危害，使病原体失去致病作用。另一方面，免疫球蛋白有时也有致病作用。在慢性乙肝患者，长期白、球比例倒置，警惕有肝硬化迹象免疫球蛋白Ig的医学定义是具有免疫功能或结构与抗体相似的球蛋白，其基本结构是：两条相同的重链和两条相同的轻链由链间二硫键连接而成。重链根据恒定区中氨基酸种类和排列顺序不同分为5种：α，γ，δ，ε，μ。分别对应5种含相应重链的免疫球蛋白：IgA,IgG,IgD,IgE,IgM。 血清免疫球蛋白E(IgE)又称为反应素，是血清中含量最少的一类免疫球蛋白，只占血清总量的0.001%。IgE测定用国际单位IU或ng表示， 1IU=2.4ng，相当于WHO标准冻干血清制剂0.00928内所含的IgE量。 IgE是正常人血清中含量最少的Ig，正常浓度是5×10的-5次方 mg/ml。正常人群IgE水平受环境、种族、遗传、年龄、检测方法及取样标准等因素的影响，各家各医院的正常值相差甚远。它是一种亲细胞抗体，与具有吞噬作用的肥大细胞，嗜中性粒细胞(可以吞噬被细菌，病毒等有害病原体感染的细胞)有很高的亲和力。因此可以介导Ⅰ型超敏反应，即我们平时所说的过敏反应。此外，IgE可能与抗寄生虫感染有关。 一般大于100-333IU/ml（ku/L）即大于250-800ng/ml(μg/L)即表现为增高，主要见于过敏性体质及过敏性疾病，如哮喘、过敏性鼻炎、荨麻疹等。

血清免疫球蛋白测定(一)

血清免疫球蛋白测定(一) B-淋巴细胞受抗原刺激后，引起一系列细胞形态与生化特性变化，转化为淋巴母细胞并增生繁殖，最后演化为浆细胞，合成免疫球蛋白。免疫球蛋白普遍存在于生物体的血液、体液、外分泌液及某些细胞（如淋巴细胞）的细胞膜上。免疫球蛋白是一组具有抗体特性的球蛋白，其分子量很大，含有1000个以上的氨基酸分子，均由其共同抗原的两个相同的轻链（L链）和具有特异性抗原的两个不同的重链（H链）组成。 1分类 根据重链的氨基酸组成不同，免疫球蛋白可分为分五类：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。 1.1IgG IgG是人体的主要免疫球蛋白，也是唯一能通达胎盘的免疫球蛋白。根据IgG的重链氨基酸顺序的差别，可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4各亚类。IgG是主要抗感染抗体，对各种细菌、病毒有抗体活性，并有激活补体的作用。 1.2IgA IgA是分泌液中主要抗体，可分为IgA1和IgA2两个亚类。存在于血清中的称血清型IgA，存在于泪液、乳汁、胃肠道、呼吸道和泌尿生殖道分泌液中的称分泌型IgA，对局部粘膜有抗菌和抗病毒作用。 1.3IgM IgM可分为IgM1和IgM2两个亚类。是抗原刺激最先产生的免疫球蛋白，有较强的固定补体、溶解细菌及细胞的能力。IgM是抗革兰氏阴性菌和异体红细胞的主要抗体，也是存在于B淋巴细胞表面的主要免疫球蛋白。 1.4IgD 其作用与过敏反应有关。据报道，IgD可对某些抗原起反应，如青霉素、胰岛素、核抗原、甲状腺抗原等。它存在于B淋巴细胞表面，构成早期的膜受体，具有识别抗原，制动B淋巴细胞的分化作用。 1.5IgE 与I型变态反应有关，具有亲细胞特性。IgE通过Fc段与肥大细胞、嗜碱粒细胞上的Fc受体结合，故属亲同种细胞性抗体。当机体再次接触同种抗原后，过敏原即与结合在细胞表面的IgE作用，使细胞释放介质，引起平滑肌痉挛，血管通透性增加等过敏反应，还具有抗寄生虫感染作用。 2正常参考值 IgG：8～16g/L，IgA：1～4g/L，IgM：0.5～1.9g/L，IgD：0.01～0.4g/L，IgE：0.001～0.009g/L。3临床意义 3.1血清免疫球蛋白降低 血清免疫球蛋白水平取决于免疫球蛋白合成和分解代谢的速率以及由体内丢失的程度。血清免疫球蛋白降低可由于合成不足，丢失增多和分解加快引起。合成不足：血清免疫球蛋白降低可由于原发性或继发性合成缺陷所致。原发性免疫缺陷病有性联先天性丙种球蛋白缺乏症、婴儿暂时性丙种球蛋白低下症、伴IgM升高的性联低丙种球蛋白血症、选择性IgA缺乏症、选择性IgM缺乏症、选择性IgG亚类缺乏症等。继发性免疫缺陷病有慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症和恶性肿瘤等。丢失增多：从胃肠道丢失的见于溃疡性结肠炎、消化道癌肿、吸收不良综合征、淋巴瘤、肠淋巴管扩张症。从皮肤丢失的有急性灼伤、特异反应性皮炎。从浆膜腔丢失的有胸膜炎、腹膜炎、反复抽胸腹水。从肾脏丢失的有肾小球肾炎（微小病变型、膜性、增殖性）、肾静脉血栓形成、SLE和淋巴瘤。主要是由于蛋白从尿中丢失或毒素抑制免疫球蛋白合成，后者首先影响IgM，其次影响IgA，然后再影响IgG。分

血清免疫球蛋白G的分离纯化及鉴定

实验八血清免疫球蛋白G的分离纯化及鉴定 为了初步掌握蛋白质的分离纯化技术，选择了从家畜血清中分离纯化免疫球蛋白G （Immunoglobulin G，简称IgG）的实验。血清中的蛋白质有数十种之多，IgG是球蛋白的一种。 分离纯化蛋白质的方法是利用不同蛋白质的某些物理、化学性质（如在一定条件下带电的情况、分子量、溶解度等）的不同而建立起来的，其中有盐析、离子交换、凝胶过滤、亲和层析、制备电泳和超速离心等。在分离纯化时，要根据情况选用几种方法互相配合才能达到分离纯化一种蛋白质的目的。 本实验采用硫酸铵盐析、DEAE-纤维素离子交换及凝胶过滤等方法，提取家畜血清中IgG。其原理及操作如下： ㈠硫酸铵盐析 1.试剂 饱和硫酸铵溶液pH7.0：称取（NH4）2SO4760g,加蒸馏水至1000ml，加热至5℃，使绝大部分硫酸铵溶解，置室温过夜，取上清液，用氢氧化铵调pH至7.0。 （内含0.15mol/L NaCl，简称PBS）：取0.2mol/L Na2HPO4磷酸缓冲溶液（0.01mol/L，pH7.0） 溶液30.5ml，0.2mol/L NaH2PO4溶液19.4ml，加NaCl8.5g，加蒸馏水至1000ml。 磷酸缓冲溶液（0.0175mol/L，pH6.7）（不含NaCl，简称PB）：取0.2mol/L Na2HPO4溶液43.5ml，0.2mol/L NaH2PO4溶液56.6ml混合，用蒸馏水稀释至1000ml。 2.操作①取家畜血清5ml，加磷酸缓冲溶液（0.1mol/L，pH7.0）5ml，混匀，滴加（边摇边搅拌）饱和硫酸铵4ml（此时溶液硫酸铵饱和度约为20%）。静置20min，以3000r/min 离心15min，沉淀为纤维蛋白（弃去），上清液中含清蛋白、球蛋白。②取上清液，再加饱和硫酸铵溶液6ml（方法同前），此时溶液硫酸铵饱和度为50%，静置20min，以3000r/min 离心15min，上清液中含清蛋白，沉淀为球蛋白。③倾去上清液，将沉淀溶于5ml磷酸缓冲液（0.01mol/L pH7.0），再加饱和硫酸铵 3.2ml，此时溶液硫酸铵的饱和度约为33%，静置20min，以3000r/min离心15min，除去上清液，沉淀即为γ-球蛋白。 ㈡凝胶过滤脱盐 1.试剂①Sephadex G-25：用前以蒸馏水浸泡5h或在沸水浴中溶胀2h；②磷酸盐缓冲液（pH6.7，0.0175mol/L）：见前；③磷酸盐缓冲液（pH7.0，0.01mil/L）见前；④奈氏试剂； ⑤20%磺酰水杨酸。 2.操作①取层析柱一根（1.5cm×20cm），垂直于固定架上，夹住流出口。加10ml磷酸缓冲液（0.0175mol/L, pH6.7）于柱中。将已溶胀好的Sephadex G-25倾倒去水，加入磷酸盐缓冲液并搅拌成悬浮液，慢慢装入柱中，打开流出口，继续加入Sephadex G-25使自然沉降至15cm高，关闭出口。②打开出口，使柱中多余的磷酸缓冲液流出凝胶柱床面（切勿低于柱床面）。用吸管吸取盐析所得的蛋白质溶液2ml，沿管壁加入凝胶面上，打开流出口，让样品进入凝胶柱，再用滴管小心加入磷酸盐缓冲液至离凝胶面2～3cm高，编号，按顺序放在试管架上。③在收集的同时，检查蛋白质是否流出。于每管中取出1滴放在黑色比色板孔中（按编号顺序），再分别加入1滴20%磺酰水杨酸，如出现白色沉淀即表示蛋白质已流出凝胶柱，如此直检查到蛋白质全流出为止。与此同时，再从含蛋白质的管中取出1滴于白色比色板中，加入奈氏试剂1滴，如蛋白管中不出现棕色，即表示蛋白质中的硫酸铵已除去，合并无硫酸铵的蛋白质管，待用。 ㈢DEAE-纤维素纯化免疫球蛋白G 1.试剂①DEAE-纤维素：DE-11、DE-22、DE-32、DE-52均可；②0.5mol/L HCl溶液；③0.5mol/L NaOH溶液；④pH6.7，0.0175mol/L磷酸盐缓冲液。 2.操作

免疫球蛋白IgG测定

免疫球蛋白IgG测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 原理 免疫透射比浊法 抗免疫球蛋白G抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。 3 标本要求 3.1使用新鲜血清,不使用血浆. 3.2在采集血液后2h分离血清. 3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次. 3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.

4 试剂 4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgG试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014） 4.1.1 试剂组成 R1:TRIS 缓冲液：20 mmol/l，pH 8.0；氯化钠：200 mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。 R2:抗人免疫球蛋白G抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20 mmol/l；氯化钠：150 mmol/L；防腐剂。 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：4周。 4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。 4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgG校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。 5 仪器

AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤 6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。 7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

免疫球蛋白IgM测定

免疫球蛋白IgM测定 1检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2原理 免疫透射比浊法 抗免疫球蛋白M抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。 3标本要求 3.1使用新鲜血清,不使用血浆. 3.2在采集血液后2h分离血清. 3.3 8h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置―150C――200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次. 3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.

4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgM试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014） 4.1.1 试剂组成 R1:TRIS 缓冲液：20 mmol/l，pH 8.0；氯化钠：200 mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。 R2:抗人免疫球蛋白M抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20 mmol/l；氯化钠：150 mmol/L；防腐剂 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：90天。 4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。 4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgM校准品对自动分析仪进行校准 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。

AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤 6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。 7 质量控制

免疫荧光法(IFA)检测人血清IgG抗体

附件3 免疫荧光法（IFA）检测人血清IgG抗体 试验材料： （1）抗原片：家鼠型和姬鼠型汉坦病毒标准毒株感染Vero E6或Vero细胞制备，低温干燥保存； （2）阳、阴性对照：单克隆抗体或确诊阳性患者恢复期血清（阳性对照）、阴性血清； （3）羊抗人（或兔抗人）IgG荧光抗体； （4）常用稀释液：pH7.2～7.4PBS、伊文思兰等； （5）荧光显微镜。 检测步骤： （1）用pH7.4，0.02mol/L PBS稀释待检血清，从1:20开始做2倍或4倍连续稀释至需要的稀释度。 （2）取出抗原片，用蒸馏水漂洗后，冷风吹干。 （3）用加样器依次从高稀释度到低稀释度逐个加入已稀释的待检血清，加入量以覆盖细胞抗原面为准（若为双份血清，最好上排为急性期血清，下排为恢复期血清），在37℃水浴箱湿盒孵育30～40分钟（每次试验同时设阳、阴性对照）。 （4）用PBS震荡洗涤3次，每次5分钟，再用蒸馏水洗涤1次脱盐，冷风吹干。 （5）用含1：3万的伊文思兰PBS按工作浓度稀释荧光结合物，滴加各孔（以覆盖细胞抗原面为准），在37 ℃水浴箱湿盒孵育30分钟，然后同（4）洗涤、漂洗、吹干。 （6）荧光显微镜观察结果。 结果判断： 细胞内病毒特异性荧光为黄绿色颗粒，分布在感染细胞的胞浆内。根据特异性荧光颗粒多少、荧光亮度、阳性细胞在细胞总数中所占比例，可将免疫荧光反应大致区分为1～4个“+”。 可参考阳性细胞数：<25%为“+”，25%～50%为“++”，51%～75%为“+++”，>75%为“++++”；无特异性荧光者为“—”（阴性）。 检测抗体滴度时，以能观察到明显特异性荧光反应（>“+”）最高血清稀释

抗核抗体谱检测的临床意义

抗核抗体谱检测的临床意义（1） 自身抗体：是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白。 抗细胞内抗原的抗体包括： 1、抗细胞核成分的抗体（抗核抗体）。 2、抗细胞浆内成分的抗体（抗中性粒细胞及其他细胞胞浆抗体、抗线粒体抗体、抗核糖体抗体等）。 3、抗细胞表面抗原的抗体。 抗细胞外抗原的抗体包括：类风湿因子、抗甲状腺球蛋白抗体等。 抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）:又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。抗核抗体是一组对细胞核内的DNA，RNA，蛋白或这些物质的分子复合物的自身抗体。按其核内各个分子的性能不同可将各ANA区分开来，如(一)抗DNA抗体，（二）抗组蛋白抗体，（三）抗非组蛋白抗体，（四）抗核仁抗体等。每一大类又因不同抗原特性而再分为许多种类。因此ANA在广义上是一组各有不同临床意义的自身抗体，更确切的名称应为抗核抗体谱。ANA 主要存在于IgG，也见于IgM、IgA，甚至LgD及LgE中。 常见的核免疫荧光杭核抗体试验有以下几种图形：（1）均质型：核质染色均匀一致，这种染色型常与抗组蛋白和抗DNA抗体有关；（2）斑点型：核质染色呈斑点状，抗可提取性核抗原（ENA）抗体常呈这种染色型；（3）周边型：荧光染色围绕在核膜周围，它与抗DNA抗体有关；（4）核仁型：仅有核仁染色，具有抗4-6sRNA抗体呈现这种染色型；（5）着丝点型：在体外培养的细胞株（喉癌细胞）在核分裂相期时，可见到荧光染色的着丝点排列成特殊图型，而在鼠肝做底物中看不到此类图型，而被遗漏。 抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率，如系统性红斑狼疮（SLE，95%~100%）、类风湿性关节炎（RA，10%~20%）、混合性结缔组织病（MCTD，80%~100%）、干燥综合症（SjS,10%~40%）、全身性硬皮病（85%~90%）、狼疮性肝炎（95%~100%）、原发性胆汁性肝硬化（95%~100%）等，但经皮质激素治疗后，阳性率可降低。抗核抗体在类风湿病人中约有20％～50％IgG型ANA呈阳性，小儿类风湿ANA的阳性率约19％～35％，伴发虹膜睫状体炎者阳性率高（505~90%），故ANA阳性预示类风湿有发生慢性睫状体炎的可能。已发现75％类风湿病人有多形核白细胞的特异性ANA或抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）可使白细胞核受到破坏。 ★抗核抗体谱（ANAs）

血浆免疫球蛋白检测的临床价值

血浆免疫球蛋白检测的临床价值 燕备战 河南省人民医院输血科 郑州市 450003 关键词 免疫球蛋白轻链 血浆 检测 中图分类号:R446 1 文献标识码:B 文章编号:1672-3422(2006)07-0044-01 免疫球蛋白的基本结构是4条肽链,2轻2重,肽链之间由二硫键相联结。任何一种免疫球蛋白,只有一类别的重链,轻链相同。根据重链的不同分五种,即I gA、Ig G I g M、Ig D和Ig E,血浆中I gG含量最高,IgE含量最低,而尿液中只有微量I gG[1]。在机体患某种疾病时,可有1种或几种免疫球蛋白明显升高或减低。因此,血液中免疫球蛋白定量是一个极有价值的检查,结合尿液中免疫球蛋白分析对许多疾病具有直接诊断意义。 1 资料与方法 1.1 资料 正常对照组:健康体检者40例,男22例,女18例,年龄19~60岁,平均35.4岁。 实验组:从2003年1月~2006年1月入院,血清 I g异常患者共141例,男81例,女60例,平均年龄 56.2岁。其中确诊多发性骨髓瘤(MM)62例,肝硬化(LC)49例,系统性红斑狼疮(SLE)30例。试剂:血清I g定量检测试剂及标准品均为B ec l u nan 公司产品。I FE使用法国Seb ia公司试剂盒。 1 2 试剂 血清I g定量检测试剂及标准品均为Beclunan产品。I FE使用法国Sebia公司试剂盒。 1.3 方法 血清蛋白电泳:加样10 l血清,扩散、点样、电泳、烘干,染色、脱色、烘干,扫描。 免疫固定电泳:加样10 ,l扩散10m in,血清蛋白分离,加相应抗血清于GAM, 泳道各25 ,l对照泳道加40 l蛋白固定剂,孵育5m in,吸去抗血清,烘干、洗涤、染色、脱色、烘干。 2 结果 各组血清中免疫球蛋白及轻链含量的测定结果见表1、2、3。 表1 不同类型MM的血清 、 检测结果比较 (x s,g/L) 分型n / I gG 2981.14 13.45*0.78 0.56*102.15 25.63* I gG 162.07 0.11*49.23 12.15*0.04 0.01* I gA 852.13 19.521.90 0.98*26.15 4.21* I gA 31.79 0.87*25.17 9.61*0.07 0.02* I g M 21.97 1.09*30.76 15.23*0.06 0.02* LC 320.61 4.59*3.01 1.43*7.12 1.56* LC 13.82*14.82*0.26* 正常对照组2510.56 2.734.70 1.432.31 0.54 *与正常对照组比较P<0.05. 表2 不同类型MM的血清IgG、IgA、Ig M检测比较 分型n I gG I gA I g M IgG型4576.51 21.12*0.48 0.320.38 0.28 Ig A型115.12 2.4356.28 18.32*0.42 0.22 Ig M型25.93 1.930.63 0.1740.23 13.87* LC型410.43 5.731.38 1.270.59 0.31 正常对照组2513.21 2.712.01 0.311.42 0.25 *与正常对照组比较P<0.05. 表3 LC及SLE患者血清IgG、IgA、Ig M检测比较 病例n IgG Ig A Ig M LC4932.67 3.12* 3.46 1.352.29 0.67 SLE3026.03 2.79* 2.23 1.164.31 0.88* 3 讨论 单克隆Ig升高,是指一个细胞在某一分裂阶段发生突变,然后急剧分化、增殖,并大量表达某种单一的Ig,多克隆Ig升高,系指各种Ig产生细胞全面增殖。多克隆Ig升高可见于慢性肝炎、肝硬化、慢性感染性疾病及结缔组织病等,病因去除后多克隆免疫球蛋白可下降[2]。MM是恶性单克隆增殖病[3],本研究中, 型的MM患者血清中的K 浓度均显著增高, 浓度均降低, / 明显高于正常范围, 型的MM患者血清中的 浓度均显著增高, 浓度均显著降低, / 明显低于正常范围。各类型(LC型除外)对应的单克隆免疫球蛋白的浓度显著增高,非对应的Ig的血清浓度则显著下降。LC型由于完整的免疫球蛋白合成受到抑制各类型I g含量降低。LC及SLE患者,各类型I g及轻链虽然增高,甚至超过正常人上限数倍以上,但I FE结果均表明为多克隆增高,单纯从含量的增加难以判断是否为单克隆增殖,所有Lc及SLE患者 / 均正常,因此我们可以根据 / 值来初步鉴别多克隆与单克隆免疫球蛋白升高。 参考文献 1 孔宪涛.免疫球蛋白异常的基础和临床.上海:上海科 学技术文献出版社,2003:149-203 2 刘洗永,杨福荫.抗生素与免疫球蛋白.中国抗生素杂 志,2000,25(1):28 3 陈末,沈悌.多发性骨髓瘤的误诊.临床误诊误治,2000, 13(4):2882006-01-13收稿 44 医药论坛杂志 2006年4月 第27卷 第7期