血红蛋白的提取和分离知识点填空

专题五 课题3血红蛋白的提取和分离

一、基础知识

（一）血红蛋白提取与分离的依据

1. 2. 3. 4. 5.

（二）原理

1．凝胶色谱法

凝胶色谱法也称做 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由 构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质 进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ；而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。

具体过程：

A ． 的蛋白质由于 作用进入凝胶颗粒内部而被滞留； 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。

B ．（1） 混合物上柱；

（2）洗脱开始， 的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内； 的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；

（3） 的蛋白质被滞留； 的蛋白质被向下移动。

（4） 不同的蛋白质分子完全分开；

（5） 的蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来， 的蛋白质还在行进中。

2．缓冲溶液

缓冲溶液的作用是 。缓冲溶液通常由 溶解于水中配制而成的。生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH 下进行的，例如：血浆的pH 是 ，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH 与体内的基本一致。

思考：说出人体血液中缓冲对？

思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？

3．电泳

（1）概念：电泳是指 。

（2）原理：许多重要的生物大分子，如 等都具有 ， 在 下，这些基团会带上 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子 以及分子本身 、 的不同使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。

两种常用的电泳方法是 和 ，在测定蛋白质分子量时通常使用 。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 以及 等因素。

4．蛋白质的提取和分离

蛋白质的提取和分离一般分为四步： 、 、 和 。

颗

B

A 板

思考：是否所有种类的蛋白质的提取和分离都是这样的？为什么？

5．样品处理

血液由和组成，其中红细胞最多。红细胞具有的特点。红细胞中有一种非常重要的蛋白质，其作用是，血红蛋白有个肽链组成，包括，其中每条肽链环绕一个，磁基团可携带。血红蛋白因含有呈现红色。

红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时采用分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层暗红色的倒入烧杯，再加入，缓慢搅拌，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至，表明红细胞已洗涤干净。

血红蛋白的释放在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。

分离血红蛋白溶液将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。

透析取1mL的血红蛋白溶液装入中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的中，透析12h。透析可以去除样品中的杂质，或用于更换样品的。

6．凝胶色谱操作

第一步要制作，第二步要，因为，所以装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需要的凝胶量。在装填凝胶柱时，不得有存在。因为气泡会，降低分离效果。第三步是。

用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质

A．路程较长，移动速度较慢B．路程较长，移动速度较快

C．路程较短，移动速度较慢D．路程较短，移动速度较快

二、实验操作

1．样品处理

（1）红细胞的洗涤

①目的：去除

②方法：，离心速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果，然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下（的红细胞液体倒入再加入用质量分数为0．9％的氯化钠溶液洗涤。

⑤低速离心（低速短时间）

⑥重复4、5步骤次，直至上清液中已没有，表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。

（2）血红蛋白的释放

加到体积，再加40％体积的，置于上充分搅拌10分钟加速细胞破裂, 细胞破裂释放出血红蛋白．

（3）分离血红蛋白溶液：将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10 min ，试管中的溶液分为4层:

第1层（最上层）：甲苯层

第2层（中上层）：的沉淀层，色薄层固体

第3层（中下层）：的水溶液层，的液体

第4层（最下层）：其它杂质的沉淀层

（4）透析

2．凝胶色谱制作

1）凝胶色谱柱的制作

2）凝胶色谱柱填料的处理

（1）凝胶的选择：。

（2）方法：

配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于中充分溶胀后，配成。

（3）凝胶色谱柱的装填方法

①固定：将色谱柱处置固定在支架上

②装填：将一次性的缓慢倒入内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。

③洗涤平衡

装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在（）高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸缓冲液（pH为7．0）充分12小时。

3）样品加入与洗脱

（1）加样前：打开下端出口，使柱内凝胶面上的缓慢下降到与平齐，关闭出口。

（2）加透析样品

①调整缓冲液面：与凝胶面平齐

②滴加透析样品：用将1ml 的样品加到色谱柱的

③样品渗入凝胶床：

④洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱

⑤收集：待接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每收集一试管连续收集

思考：与其它真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？

血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品的；最后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行。

3．SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳

判断（）的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度的鉴定。

SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白纯度

三实验结果分析与评价

观察血液样品离心后是否分层，如果分层不明显，可能是洗涤次数、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使和一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。

如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。

四、练一练

1、2019年1月10日，施一公教授研究团队在《科学》上报道了人源γ-分泌酶结合淀粉样前体蛋白（APP）的高分辨率冷冻电镜结构，揭示了结合底物后γ-分泌酶发生的构象变化，并对这些构象变化的功能进行了生化研究，从而为研究与癌症以及阿尔兹海默症相关的特异性药物设计提供了重要的结构信息。回答下列问题：

（1）该项研究进行时，需控制温度、酸碱度等条件，因为高温、过酸、过碱会使γ-分泌酶的___________遭到破坏，失去活性。

（2）根据蛋白质的各种特性，如蛋白质分子的____________、所带电荷的___________、以及溶解度、吸附性、对其他分子亲和力等，可用来分离不同种类蛋白质，从而得到γ-分泌酶。

（3）γ-分泌酶由4个跨膜蛋白亚基组成，分别为PS1、Pen-2、Aph-1和Nicastrin。若对γ-分泌酶4个跨膜蛋白亚基进行分离、纯化及分子量测定，需采用_____________及电泳技术。前者是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，相对分子质量较__________（填“大”或“小”）的跨膜蛋白移动速度较慢。

（4）电泳是指_____________在电场的作用下发生迁移的过程。对γ-分泌酶的4个跨膜蛋白亚基进行分子量测定时，通常采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，该方法测定的结果只是____ ____的分子量。该电泳迁移率完全取决于相对分子量的大小，原因是

________________。

2、．血红蛋白的提取与分离：

①将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加入蒸馏水和甲苯，其中加入甲苯的目的是___ ________。

②利用凝胶色谱法分离蛋白质，常选用血红蛋白为材料，其原因是_____________________，该方法的基本原理是根据______________ （蛋

白质特性）而达到蛋白质分离，蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、__________ _____、、。

③下图1是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品的加入示意图，正确的加样顺序是____________。如果红色区带__________________，说明色谱柱制作成功。

④一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如下图所示。由图可知携带者有2种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释是_____________________

3、．请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答下列问题：

（1）将实验流程按先后顺序补充完整：________、_________。

（2）凝胶色谱法的基本原理是根据________________分离蛋白质。

（3）洗涤红细胞的目的是去除_____ ____，洗涤干净的标志

是________________。为防止血液凝固，在采血容器中通常要预先

加入___________。

（4）凝胶色谱操作结束后，需要用电泳来对蛋白质进行纯度鉴定，电泳利用了待分离样品中各种分子的____________的特性，使带电分子产生不同的________，从而实现样品中各种分子的分离。

（5）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，SDS能与各种蛋白质结合形成蛋白质-SDS复合物，由于SDS ，从

而使电泳的迁移率完全取决于分子的大小。

γ-分泌酶底物淀粉样前体蛋白的冷冻电镜结构，为研制阿尔兹海默症（AD）4．2019年1月，施一公教授的研究团队在《科学》上报道了人源

的治疗药物提供了重要的结构信息。临床发现，AD病人的脑组织中出现淀粉样斑块，它是由淀粉样前体蛋白被某些酶切割产生的短肽聚集而成，其中最关键的酶是γ-分泌酶，该酶由4条不同的肽链组成，编码其中某肽链的基因所发生的突变与AD相关。请回答：（1）根据酶的专一性可知，γ-分泌酶是一种___________________（填“蛋白酶”或“淀粉酶”），其基本组成单位是_____________。（2）若要分离γ-分泌酶，需考虑蛋白质的____________________、所带电荷的__________________ 、以及溶解度、吸附性、对其他分子亲和力等。________________法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。在该方法中，相对分子质量较____________（填“大”或“小”）的蛋白质移动速度较慢。

（3）通常使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量，但此方法不能直接测得γ-分泌酶的分子量，原因是

________________________________。

5．血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2或CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题：

（1）将实验流程补充完整：A为________________，B为

____________________。

（2）洗涤红细胞的目的是去除__________，达到该目的的关键是控制离心

的____________________。离心速度过高和时间过长会使

____________________一同沉淀，达不到分离的效果。释放血红蛋白的过

程中起作用的是________________。

（3）将收集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析，透析的原理是：。

（4）凝胶色谱法是根据________________________而达到蛋白质分离的有效方法。

（5）在装填凝胶柱时，不得有气泡存在，是因为气泡会____________________，降低分离效果。

（6）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液（pH为7.0）的目的是。

（7）分离纯化好的血红蛋白，需要进行纯度鉴定，在鉴定方法中，使用最多的是。

人教版高中生物选修1 血红蛋白的提取和分离

专题5 DNA和蛋白质技术 课题3 血红蛋白的提取和分离 1．下列试剂可用于血红蛋白释放的是() ①0.9%的生理盐水②甲苯③磷酸缓冲液④蒸馏水⑤柠檬酸钠 A．②④B．①④ C．④⑤D．①③ [解析]0.9%的生理盐水是洗涤红细胞是应用的试剂，不能用于血红蛋白释放；甲苯的作用是溶解细胞膜的磷脂，加速血红蛋白的释放；磷酸缓冲液用于粗分离蛋白质，不能用于释放血红蛋白；蒸馏水作用是使红细胞吸水胀破，释放其中的血红蛋白；柠檬酸钠的作用是采血时，防止血液凝固，不能用于血红蛋白的释放。 [答案]A 2．在血红蛋白分离过程中如果红色带区歪曲、散乱、变宽，与其有关的是() A．凝胶色谱柱的制作B．色谱柱的装填 C．洗脱过程D．样品的处理 [解析]在血红蛋白分离过程中如果红色带区歪曲、散乱、变宽，说明色谱柱制作不成功，可能是凝胶装填不紧密、不均匀，或者存在

气泡，打乱了洗脱次序所致。 [答案]B 3．下列有关“血红蛋白提取和分离”实验的正确叙述是() A．用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除细胞表面的杂蛋白 B．将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较大的杂质 C．血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂 D．整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构 [解析]对红细胞洗涤时应该用生理盐水，不能用蒸馏水，A错误；将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较小的杂质，B错误；血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是溶解磷脂，加速血红蛋白的释放，C错误；整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持pH相对稳定，防止和血红蛋白的结构发生改变，D正确。 [答案]D 4．凝胶色谱柱取长为40 cm，内径为1.6 cm，有关说法中，不正确的是() A．一般凝胶色谱柱直径的大小不会影响分离的效果 B．凝胶色谱柱过高，超过1 m，不影响分离的效果 C．凝胶色谱柱过矮，则影响混合物的分离度 D．凝胶色谱柱直径过大会耗用过多洗脱液，样品的稀释度过大

高中生物人教版选修1教案-人教版-生物-高二-选修一第五章-第三节-血红蛋白的提取和分离-1课时-课件(001)

专题五第三节血红蛋白质的提取和分离 测试题 知识点：凝胶色谱法 1.使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中,相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程,可表示为图中（） 2.用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是（） A.相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质 B.相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质 C.相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质 D.二者根本无法比较 3.凝胶色谱分离法分离蛋白质时,凝胶的种类较多,但其作用都是（） A.改变蛋白质分子通过凝胶时的路径 B.吸附一部分蛋白质,从而影响蛋白质分子的移动速度 C.将酶或细胞固定在凝胶中 D.与蛋白质分子进行化学反应,从而影响其移动速度 4.用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质（） A.路程较长，移动速度较慢 B.路程较长，移动速度较快 C.路程较短，移动速度较慢 D.路程较短，移动速度较快 知识点：电泳法 5.电泳过程中,什么样的分子迁移速度最快?（） A.纤维状、大分子 B.纤维状、小分子 C.球状、大分子 D.球状、小分子 6.下列关于电泳的说法,不正确的是（） A.电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B.带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 C.蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率完全取决于它所带净电荷的多少 D.用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质电泳迁移率完全取决于分子的大小 7.使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于（） A 电荷的多少 B 分子的大小

C 肽链的多少 D 分子形状的差异 知识点：血红蛋白的提取和分离 8.一分子血红蛋白最多可携带的O2分子数或者CO2分子数分别是（） A.4、2 B.4、4 C.2、1 D.1、1 9.将人红细胞置于盛有下列液体的离心管中,10 min后离心,得到沉淀物和上清液,则上清液中K+含量最高的离心管内盛有（） A.质量分数为10%的氯化钠溶液 B.质量分数为20%的蔗糖溶液 C.质量分数为0.9%的氯化钠溶液 D.蒸馏水 10.下列有关提取和分离血红蛋白的实验叙述错误的是（） A.该实验的材料必须选用鸡血 B.通过透析法可以去除样品中分子质量较小的杂质,此为样品的粗提取 C.凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质 D.电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小和形状不同进行分离 11.在血红蛋白的整个提取过程中,不断用磷酸缓冲液处理的目的是（） A.防止血红蛋白被氧化 B.血红蛋白是一种两性物质,需要酸中和 C.磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 D.让血红蛋白处在稳定的pH范围内,维持其结构和功能 12.在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是（） A.调节pH B.维持红细胞的能量供应 C.防止微生物生长 D.防止血液凝固 13.将经处理破裂后的红细胞混合液以2 000 r/min的速度离心10 min后,离心管中的溶液分为四层,从上到下的顺序依次是（） A.血红蛋白、甲苯层、脂溶性物质层、沉淀层 B.甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂溶性物质层 C.脂溶性物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层 D.甲苯层、脂溶性物质层、血红蛋白、沉淀层 14.下列关于血红蛋白提取和分离实验中样品处理步骤的描述,正确的是（） A.红细胞的洗涤:加入蒸馏水,缓慢搅拌,低速短时间离心 B.血红蛋白的释放:加入生理盐水和甲苯,置于磁力搅拌器上充分搅拌 C.分离血红蛋白:将搅拌好的混合液离心、过滤后,用分液漏斗分离 D.透析:将血红蛋白溶液装入透析袋,置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12 h 15.蛋白质提取和分离分为哪几步（）

血红蛋白的提取和分离知识梳理

血红蛋白的提取和分离知识梳理 一、凝胶色谱法 1．概念：也称做＿＿＿＿＿＿，是根据＿＿＿＿＿＿＿分离蛋白质的有效方法。 2．原理 （1）由＿＿＿＿＿构成的凝胶，内部有许多贯穿的＿＿＿。 （2）当＿＿＿＿＿＿不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量＿＿＿的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程＿＿＿＿＿，移动速度＿＿＿，而相对分子质量＿＿＿的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在＿＿＿＿＿＿移动，路程＿＿＿，移动速度＿＿＿，从而使＿＿＿＿＿＿不同的蛋白质分子得以分离。 二、缓冲溶液 1．作用：在一定范围内，抵制＿＿的＿＿＿＿＿对溶液pH的影响，维持pH＿＿＿。2．配制：由＿＿＿＿＿种缓冲剂溶解于＿＿＿中配制而成，通过调节缓冲剂的＿＿＿＿＿＿就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。 三、电泳 1．概念：指＿＿＿＿＿在电场的作用下发生＿＿＿＿的过程。 2．原理：在一定的＿＿＿下，＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿等生物大分子的可解离基团会带上＿＿＿或＿＿＿，在＿＿＿＿＿的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷＿＿＿＿的电极移动。 3．作用：电泳利用了待分离样品中各种分子＿＿＿＿＿的差异及分子本身的＿＿＿、＿＿＿的不同，使带电分子产生不同的＿＿＿＿＿，从而实现样品中＿＿＿＿＿的分离。 4．方法：常用的电泳方法有＿＿＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，测定蛋白质分子量时通常使用＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 四、实验操作 1．样品处理：通过＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿等操作收集血红蛋白溶液。 （1）红细胞的洗涤：目的是＿＿＿＿＿＿。分离时采取＿＿＿＿＿＿＿＿＿，直至上清液中没有＿＿＿＿＿，表明红细胞已洗涤干净。 （2）血红蛋白的释放：在＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。 （3）分离血红蛋白溶液：把＿＿＿＿＿离心后，将试管中的液体用＿＿＿过滤，除去＿＿＿＿＿＿，于＿＿＿＿＿＿中静置片刻后，分离出下层的＿＿＿＿＿＿。 2．粗分离：即透析 （1）方法：将血红蛋白溶液装入＿＿＿＿＿，将＿＿＿＿＿放入一定量的适宜浓度的＿＿＿＿＿＿中，透析＿＿＿。 （2）目的：将＿＿＿＿＿＿＿＿＿的杂质除去。 （3）原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。 3．纯化：通过凝及色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下： （1）凝胶色谱柱的制作。 （2）凝胶色谱柱的装填 ①材料：本实验使用的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 ②方法：凝胶用＿＿＿＿＿＿充分溶胀后，配成＿＿＿＿＿＿，一次性＿＿＿倒入色谱柱内。不能有＿＿＿存在；不能发生＿＿＿＿流干露出凝胶颗粒的现象。 （2）样品的加入的洗脱

2018-2019学年高二生物人教版选修一课下能力提升：(十四) 血红蛋白的提取和分离含答案解析

课下能力提升（十四）血红蛋白的提取和分离 【基础题组】 1．下列有关凝胶色谱法的叙述，错误的是() A．凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法 B．目前经常使用的凝胶有交联葡聚糖、聚丙烯酰胺和琼脂糖等 C．大分子物质后被洗脱出来，小分子物质先被洗脱出来 D．凝胶色谱法的原理是不同大小的分子所经的路径不同而得以分离 解析：选C相对分子质量较小的蛋白质由于扩散作用进入凝胶颗粒内部而使其所经过的路程较长；相对分子质量较大的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在颗粒之间迅速通过。因此，大分子物质先被洗脱出来，小分子物质后被洗脱出来。 2．下列有关缓冲溶液的说法，错误的是() A．缓冲溶液能够抵制外界任何酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变 B．缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成 C．调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲溶液 D．生物体内的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的 解析：选A缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成；调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲溶液；在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变，超过一定范围，缓冲溶液就起不到这样的作用了。 3．(2018·福建名校月考)下列有关提取和分离血红蛋白的叙述，错误的是() A．样品的处理就是通过一系列操作收集血红蛋白溶液的过程 B．通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗分离 C．可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D．可通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 解析：选B透析是通过半透膜使样品中较小的分子透过到膜外，因此通过透析可以去除样品中分子质量较小的杂质，此为样品的粗分离。 4．下列有关凝胶色谱操作的叙述，错误的是() A．干的凝胶要用蒸馏水充分溶胀后，才能装填 B．在装填凝胶色谱柱时，不得有气泡产生 C．在装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管先打开后关闭 D．在样品洗脱过程中，不能让洗脱液流干 解析：选C在装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管应始终打开。 5．下列关于血红蛋白提取和分离的过程及原理的叙述，正确的是() A．为了防止血液凝固，应在采血器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠 B．红细胞洗涤使用5倍体积的蒸馏水，直到离心后上清液不呈现黄色

高中生物选修一血红蛋白的提取和分离

课题3血红蛋白的提取和分离 蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化和物。对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。怎样提取蛋白质呢？ (二)进行新课 1.基础知识 蛋白质的物化理性质：____________________________________________________________________ , 由此提取和分离各种蛋白质。 1.1凝胶色谱法(分配色谱法)： (1)原理：(图5- 13a)分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。 (2)凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 (3 )分离过程：(图5 —13b) 混合物上柱T T—分子流动快、—分子流动慢T收集—分子T收集__分子 *洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 1 . 2缓冲溶液 (1 )原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成(如H2CO3 —NaHCO 3, HC —NaC , NaH2PO4/Na2HPO4 等)， __________________________________________________ 。 (2)缓冲液作用：__________________________________________________________ 。 1 . 3凝胶电泳法： (1)原理：不同蛋白质的__________________________________ 不同，在电场中受到的作用力大小、 方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。

血红蛋白的提取和分离

血红蛋白的提取和分离 1．蛋白质的分离方法 (1)原理：蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶 解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 (2)分离方法： ①凝胶色谱法也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方 法。 ②电泳法：电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。常用的电泳方法有 琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。 2．实例——血红蛋白的提取和分离 (1)样品处理与粗分离 (2)纯化与纯度鉴定 血红蛋白提取与分离中历次“除杂质”或“分离”的原理 (1)凝胶色谱法：相对分子质量较大的分子先流出，分子质量较小的后流出，依此可对 血红蛋白进行分离和纯化。 (2)透析法：利用透析袋只允许小分子透出的原理，去除小分子杂质，透析可实现对血 红蛋白的“粗分离”。 (3)电泳法：利用分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状不同， 使带电分子产生 不同的迁移速率，从而实现样品中各种分子的分离。即

不清楚血红蛋白释放时蒸馏水和甲苯的作用 红细胞中依次加入蒸馏水和甲苯的作用：加入蒸馏水的目的是使红细胞吸水涨破；甲苯溶解细胞膜，从而使血红蛋白释放出来。 【练一练】 血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和部分CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离过程回答以下问题： (1)将上述实验流程补充完整：A为____________，B为_____________。 (2)洗涤红细胞的目的是去除____________；红细胞洗涤干净的标志是 __________________。释放血红蛋白的过程中起作用的试剂是__________________。(3)在B过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是 _____________________________________________。在蛋白质分离过程中，如果红色区带___________________________，说明色谱柱制作成功。 【解析】A为血红蛋白的释放，B为样品的加入和洗脱。在B过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是模拟生物体内的生理环境(保持体外pH 和体内一致、保持蛋白质的正常结构等)。 【答案】 (1)血红蛋白的释放样品的加入和洗脱 (2)杂蛋白(血浆蛋白) 离心后上清液中没有黄色蒸馏水和甲苯 (3)模拟生物体内的生理环境(保持体外pH和体内一致、保持蛋白质的正常结构等合理答案均可) 均匀一致地移动

生物选修1专题5+课题3+血红蛋白的提取和分离_基础知识：电泳_练习(2)+Word版含答案

基础知识：电泳课后练习(2) 1． SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是（） A．蛋白质分子所带的电荷 B．蛋白质分子的形状 C．蛋白质分子的相对分子质量 D．缓冲溶液的pH 2．材料：饲料原料中的磷元素有相当一部分存在于植酸中，猪禽等动物由于缺乏有关酶，无法有效利用植酸，造成磷源浪费，而且植酸随粪便排出后易造成环境有机磷污染。植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸，因此成为目前重要的饲料添加剂之一。 (1)商品化植酸酶主要来自微生物。在产酶菌株筛选过程中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生____________，可根据其大小选择目的菌株，所得菌株需要进一步测定植酸酶活性。活性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时间内____________表示。 (2)利用上述所得菌株制备植酸酶的流程(如下图)。 发酵液→→含酶的发酵液→→→→纯酶 ↓↓ 菌体去除透析液(Ⅰ)去除 Ⅰ中的主要成分为________；Ⅱ中包含植酸酶等多种蛋白质。请写出一种纯化得到植酸酶的方法及其依据。 (3)为制备基因工程菌，可用PCR等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反应包含多次循环，每次循环包括三步：______________________。反应过程中打开模板DNA双链的方法是____________________。 (4)除植酸酶外，微生物还应用在__________________的生产中。 3．下列关于电泳技术分离蛋白质原理的叙述，正确的是（） A．蛋白质中含有游离的氨基，是碱性电解质 B．蛋白质中含有游离的羧基，是酸性电解质 C．蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相同的电极方向移动 D．蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动 4．有关电泳的叙述，不正确的是（） A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B．带电分子会向着与其电荷相同的电极移动 C．在一定的pH下，可解离的基团会带上正电或负电

血红蛋白的提取和分离知识点填空

专题五 课题3血红蛋白的提取和分离 一、基础知识 （一）血红蛋白提取与分离的依据 1. 2. 3. 4. 5. （二）原理 1．凝胶色谱法 凝胶色谱法也称做 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由 构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质 进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ；而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 具体过程： A ． 的蛋白质由于 作用进入凝胶颗粒内部而被滞留； 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。 B ．（1） 混合物上柱； （2）洗脱开始， 的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内； 的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外； （3） 的蛋白质被滞留； 的蛋白质被向下移动。 （4） 不同的蛋白质分子完全分开； （5） 的蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来， 的蛋白质还在行进中。 2．缓冲溶液 缓冲溶液的作用是 。缓冲溶液通常由 溶解于水中配制而成的。生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH 下进行的，例如：血浆的pH 是 ，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH 与体内的基本一致。 思考：说出人体血液中缓冲对？ 思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 3．电泳 （1）概念：电泳是指 。 （2）原理：许多重要的生物大分子，如 等都具有 ， 在 下，这些基团会带上 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子 以及分子本身 、 的不同使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。 两种常用的电泳方法是 和 ，在测定蛋白质分子量时通常使用 。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 以及 等因素。 4．蛋白质的提取和分离 蛋白质的提取和分离一般分为四步： 、 、 和 。 颗 B A 板

高一生物血红蛋白的提取和分离介绍

高一生物血红蛋白的提取和分离介绍 高一主要学习的内容是细胞，学生需要知道和掌握这些的知识，下面是店铺给大家带来的有关于血红蛋白的提取和分离知识点的介绍，希望能够帮助到大家。 高一生物血红蛋白的提取和分离知识点 该知识点包括凝胶色谱法、缓冲溶液、电泳、实验操作及操作提示等几个要点知识。 1. 凝胶色谱法：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由多糖类化合物构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质比较容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢;而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 2. 缓冲溶液：缓冲溶液的作用是能够抵制外界的酸和碱对溶液pH 的影响，维持pH基本不变。缓冲溶液通常由1-2种缓冲溶剂溶解于水中配制而成的。生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，例如：血浆的pH是7.35～7.45，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH与体内的基本一致。 3.电泳：电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物大分子，如蛋白质、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 两种常用的电泳方法是琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳，在测定蛋白质分子量时通常使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速率取决于蛋白质所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。

血红蛋白的分离和提纯

专题五DNA和蛋白质技术 课题三血红蛋白的提取和分离 一、学习目标 1、会说出凝胶色谱法和电泳法分离生物大分子的原理。(学习重点、难点) 2、能写出血红蛋白提取和分离的步骤。(学习重点) 二、学法指导 通过图片模型理解凝胶色谱法分离蛋白质的原理；通过观看视频来理解血红蛋白提取和分离的过程 三、课前热身 一、基础知识 1.凝胶色谱法 (1)概念：凝胶色谱法也称做分配色谱法，是根据的大小分离蛋白 质的有效方法。 (2)原理：大多数凝胶是一些微小的球体，内部有许多贯穿的通道，当 不同的蛋白质通过凝胶时，的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度较慢；而的蛋白质无法 进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程，移动速度较快。 不同的蛋白质因此得以分离。 2 .缓冲溶液 (1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制外界的对溶液pH的影响，维 持pH基本不变。 (2)配制：通常由1〜2种溶解于水中配制而成。调节的使用比 例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。 3、电泳 ⑴概念：是指粒子在电场的作用下发生的过程。 (2)原理：许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一 定的下，这些基团会带上。在电场的作用下，这些 分子会向着与其所带电荷的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分 子的差异以及的大小、不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。 (3)常用的电泳方法：琼脂糖凝胶电泳和电泳。 二、实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步：、粗分离、纯化和纯度鉴定。 1.样品处理和粗分离 (1)红细胞的洗涤：采集血样，离心，吸取血浆后加洗涤， 再低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色。目的是除去，

血红蛋白的提取和分离习题带答案

课题3 血红蛋白的提取和分离 【学习目标】 1、简述蛋白质提取和分离的基本原理 2、理解蛋白质提取与分离的实验操作过程 【重点与难点】 重点：蛋白质提取和分离的基本原理 难点：蛋白质提取与分离的实验操作（凝胶色谱操作）过程 【知识链接】 1.血红蛋白存在于何种细胞？其特性和作用分别是什么？ 2.为何不选用鸡血做实验材料？ 3.分离不同种类蛋白质的依据是什么？ 【自主学习内容一】基础知识（记忆） 1．凝胶色谱法：凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时的速度不同，相对分子质量较小的蛋白质由于能够路程较，移动速度；而相对分子质量较大的的蛋白质，只能在移动，路程，移动速度。 2．缓冲液缓冲液通常是由1～2种缓冲剂（如NaHCO3、（NH4）2SO4）溶解于水中配制而成；其作用是。 3．电泳：电泳是指电泳利用了待分离样品中各分子以及，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。两种常用的电泳方法是和。在测定蛋白质分子量时通常使用，其中SDS的作用是，。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率取决于它以及等因素。 【自主学习内容二】实验操作（凝胶色谱法） 1.蛋白质的提取和分离一般分四步：、、和。 2.样品处理 （1）红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是采集的血样要及时通过采用的方法使红液分层，用胶头吸管吸出上层透明的黄色

，将下层红细胞倒入烧杯，再加入，缓慢搅拌低速离心，如此重复三次，直到，表明红细胞忆洗涤干净。注意：离心转速及离心时间不能过长，否则，达不到分离效果。 （2）血红蛋白的释放：原理是当外界溶液浓度低于细胞内液浓度时，细胞，红细胞由于没有的保护，而，释放出血红蛋白；使用的试剂是。 （3）分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明的液体，这是，第4层是红细胞破碎物沉淀物（其他杂质，呈色）。将试管中的液体用滤纸过滤，除去，于分液漏斗中静置片刻后，分出层的红色透明液体。 （4）透析：取2mL的血红蛋白溶液装入中，将透析袋放入盛有300mL的物质量浓度为中（pH为），透析12h。透析可以去除样品中的杂质，或用于。 3．凝胶色谱操作 首先要；第二步是，因为，因此装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需的凝胶量。在装填凝胶柱时，不得有，避免影响分离效果；第三步是。【合作探究】 1．凝胶色谱分离蛋白质的原理是怎样的？ 2.根据凝胶色谱分离的原理分析，在装填凝胶时要紧密、均匀的原因。

人教版高中生物选修1同步训练+5.3血红蛋白的提取和分离(含答案)

10 血红蛋白的提取和分离 1、下列有关凝胶色谱法的叙述，不正确的是 A．凝胶色谱法是利用凝胶将相对分子质量不同的蛋白质分开的一种方法 B．在洗脱过程中，相对分子质量大的蛋白质不能进入凝胶内部，所以最先洗脱出来 C．凝胶内部有很多微细的多孔网状结构，其孔隙大小与被分离的蛋白质的大小无相应关系D．凝胶对要分离的物质没有吸附作用，所有 要分离的物质最终都能被洗脱出来 2、下列关于电泳的说法不正确的是( ） A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少 D．用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小 3、下列关于凝胶色谱柱的装填的说法不正确的是（） A.装填时，不能有气泡产生。因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，影响分离效果 B.在操作过程中，不能让洗脱液流干 C.样品洗脱结束后，及时倒掉色谱柱中的凝胶 D.干的凝胶要用蒸馏水充分溶胀后，才能装填 4、下列关于透析的叙述，正确的是（） A.可采集猪血作为实验材料 B.用蒸馏水重复洗涤红细胞 C.血红蛋白释放后应低速短时间离心 D.洗脱液接近色谱柱低端时开始收集流出液 5、下列关于物质提取、纯化原理的叙述中，不正确的是（） A．采用凝胶色谱法分离果胶酶的原理是蛋白质分子的相对分子质量不同，在色谱柱中的移动速度不同 B．使用透析法可以去除样品中相对分子质量较大的杂质 C．电泳法是利用样品中各种分子带电性质和数量以及样品分子大小不同，产生的迁移速度不同而实现样品中各种分子的分离 D．离心法分离蛋白质的依据是不同大小的分子离心时沉降速度不同 6、在血红蛋白的提取和分离过程中，下列有关在凝胶色谱柱上加入样品和洗脱的操作的叙述，不正确的是（） A.加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐 B．让吸管管口沿管壁环绕移动，贴壁加样至色谱柱顶端，不要破坏凝胶面 C．打开下端出口，待样品完全进入凝胶层后，直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱 D．待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，每5 mL收集一管，连续收集流出液 7、将经处理破裂后的红细胞混合液以2000r/min的速度离心10min后，离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是（） ①脂溶性物质②沉淀层③甲苯层④血红蛋白溶液 A．①②③④ B．③②④① C．③①②④ D．③①④② 8、下列关于血红蛋白提取和分离实验中样品处理步骤的描述，正确的是（） A．红细胞的洗涤：加入蒸馏水，缓慢搅拌，低速短时间离心 B．血红蛋白的释放：加入生理盐水和甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌 C．分离血红蛋白：将搅拌好的混合液离心、过滤后，用分液漏斗分离 D．透析：将血红蛋白溶液装入透析袋，置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12h 9、下列关于血红蛋白提取和分离的过程及原理叙述，正确的是 A.为了防止血液凝固，应在采血器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠

第十六节血红蛋白的提取与分离

血红蛋白的提取和分离（一） 主讲：黄冈中学优秀生物教师王小敏 ★课题目标 1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白； 2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。 ★课题重点 凝胶色谱法的原理和方法。 ★课题难点 样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 一、基础知识 （一）蛋白质提取和分离的原理 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 （二）凝胶色谱法（分配色谱法） 1、概念：根据蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶，来进行分离的方法。 2、原理： 大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快； 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。 3、凝胶材料：微小的多孔性球体，如葡聚糖或琼脂糖。内部有许多贯穿的通道。

4、分离过程： 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 （三）缓冲溶液 1、作用：能够抵制外界的酸和碱对溶液pH值的影响，维持pH基本不变。 2、缓冲溶液的配制： 由弱酸和相应的强碱弱酸盐溶解于水中。如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等。调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。 在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是pH=7.0的磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察红色和材料的科学研究活性。 （四）电泳 1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 2、原理： 不同蛋白质的带电性质（正电荷或负电荷）、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。

高考生物必备知识点：血红蛋白的提取和分离

2019年高考生物必备知识点：血红蛋白的提取和别离查字典生物网的小编给各位考生整理了2019年高考生物必备知识点：血红蛋白的提取和别离 ,希望对大家有所帮助。更多的资讯请持续关注查字典生物网。 小编推荐：高考成绩不理想 ,专科成绩也能上本科 血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质(缩写为Hb或HGB)。是使血液呈红色的蛋白。血红蛋白由四条链组成 ,两条α链和两条β链 ,每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素。氧气结合在铁原子上 ,被血液运输。血红蛋白的特性是：在氧含量高的地方 ,容易与氧结合;在氧含量低的地方 ,又容易与氧别离。血红蛋白的这一特性 ,使红细胞具有运输氧的功能。 一、蛋白质的提取和别离一般分为四步： 1、样品处理：包括洗涤红细胞;血红蛋白稀释;离心等操作收集到的血红蛋白溶液。 2、粗别离：透析除去分子较小的杂质。 3、纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。 4、纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。 二、样品处理 1、红细胞的洗涤： 目的是去除杂蛋白。要参加柠檬酸钠防止血液凝固;离心将血液分层 ,用胶头吸管吸出黄色血浆;用生理盐水洗涤。 2、血红蛋白的释放： 在蒸馏水和甲苯作用下 ,红细胞破裂释放

3、别离血红蛋白溶液： 离心分层;滤纸过滤去除脂溶性沉淀层;分液漏斗分出红色透明液体。4、透析： 装入透析袋并置于磷酸缓冲液中(PH为7.0)透析。 以上内容就是小编为大家整理的?2019年高考生物必备知识点：血红蛋白的提取和别离 ? ,对于高考政治知识点了解是否更加加深了一点呢？更多学习相关材料 ,敬请关注查字典生物网 ,小编随时为大家更新更多有效的复读材料及方法！

课题6----血红蛋白的提取和分离知识点总结

课题6 血红蛋白的提取和分离知识点总结 一、实验原理 蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。 1．凝胶色谱法（分配色谱法）： （1）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。 （2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 （3）分离过程： 混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子 ＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 （4）作用：分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。 2．缓冲溶液 （1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。 （2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。 3．凝胶电泳法： （1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。 （2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。 （3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。 二、实验步骤 1．样品处理 ①红细胞的洗涤 洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，采集的血样要及时采用低速短时间离心分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。 ②血红蛋白的释放 在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。 注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。 2．粗分离 ①分离血红蛋白溶液 将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的甲苯层，第

人教版高中生物选修1专题5课题3血红蛋白的提取和分离

选择题 为了提取血红蛋白，从学校附近的屠宰场取新鲜的猪血，对猪血处理的正确操作是 A. 要在采血容器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠 B. 取血回来后，马上进行高速长时间离心 C. 将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌 D. 重复洗涤直到上清液呈红色为止 【答案】A 【解析】为了防止血液凝固，要在采血容器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠，A正确；取血后，应进行低速短时间离心，B错误；离心后的血细胞加入蒸馏水和40%体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌，使红细胞破裂，C错误；红细胞重复洗涤直到上清液不再呈现黄色为止，D错误。 选择题 下列有关提取和分离血红蛋白实验的叙述，错误的是

A. 该实验的材料必须选用鸡血 B. 通过透析法可以去除样品中相对分子质量较小的杂质，此为样品的粗提取 C. 凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质 D. 电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小差异分离蛋白质 【答案】A 【解析】本题考查血红蛋白的提取与分离实验的相关知识。因为鸡血细胞中含有细胞核以及各种复杂的细胞器，会给提取和分离血红蛋白带来一定的难度，故提取血红蛋白一般选用哺乳动物成熟的红细胞，A错误；通过透析法可以去除样品中相对分子质量较小的杂质，而将大分子保留在袋内，此为样品的粗提取，B正确；凝胶色谱法是根据需要被分离的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离，C正确；电泳法是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异及分子本身大小、形状的不同产生不同的迁移速度，由此将各种分子分离，D正确。 选择题 以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是 A. 洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂

高一生物必修蛋白质技术知识点

高一生物必修蛋白质技术知识点 蛋白质是生命的物质基础，那关于高一生物蛋白质技术的知识点有哪些呢?下面是店铺给大家带来的高一生物必修蛋白质技术知识点，希望对你有帮助。 高一生物蛋白质技术知识点 1.血红蛋白的提取和分离 倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。 ②血红蛋白的释放在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。 注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。 2.粗分离 ①分离血红蛋白溶液 将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第3层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。 ②透析 取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL 的物质的量的浓度为20mmol/L12h换样品的缓冲液。 3.纯化调节缓冲液面：打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝↓ 胶面平齐，关闭出口。 加入蛋白质样品：用吸管将透析后的样品沿管壁环绕移动加到色谱柱的顶端。加样后，∣ 打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全渗入凝胶层后， ↓ 关闭出口。 调节缓冲液面：加入20mmol/L的磷酸缓冲液到适当高度

↓ 洗脱：连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱。 ↓ 收集分装蛋白质：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集。 4.纯度鉴定------SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(选做) 三、注意事项 电泳技术 电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。 2. 红细胞的洗涤 如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。 3.如何检测凝胶色谱柱的装填是否成功 由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。 此外，还可以加入大分子的有色物质，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 4.为什么凝胶的装填要紧密、均匀? 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成;5.沸水浴处理加入洗脱液的湿凝胶的目的;不但节约时间，还能除去凝胶中可能带有的微生物和排;6.G-75;“G”代表凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围，7;7.装填完后，立即用洗脱液洗脱的目的：使凝胶装填;8.加入柠檬酸钠有何目的?为什么要低速、短时离心;9.与其他真核细胞相比，红细胞的特点及这一特点对;哺乳动 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液

2019-2020学年高二生物人教版选修一教学案：专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离 Word版含答案

一、蛋白质提取、分离（阅读教材P64～66） 1．蛋白质分离的理论依据 2．凝胶色谱法(分配色谱法) (1)概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 (2)分离原理 相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。 3．缓冲溶液 (1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制外界酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。 (2)配制：通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内的缓冲液。 4．电泳 (1)概念：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。 (2)原理 ①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 ③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 二、血红蛋白的提取和分离（阅读教材P66～70） 1．样品处理

(1)红细胞的洗涤 ①目的：去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。 ②过程：分离(低速短时间离心)→用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆→下层暗红色的红细胞用生理盐水洗涤(如此重复三次)。 (2)血红蛋白的释放 ①目的：使红细胞破裂释放血红蛋白。 ②过程 (3)分离血红蛋白溶液：离心(以2 000 r/min速度，离心10 min)→观察到离心管中的溶液分为4层，从上往下依次为： 第1层：无色透明的甲苯层。 第2层：脂溶性物质的沉淀层——白色薄层固体。 第3层：血红蛋白的水溶液——红色透明液体。 第4层：其他杂质的暗红色沉淀物。 将液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。 2．透析——粗分离 过程：取1 mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol·L－1的磷酸缓冲液中(pH＝7.0)，透析12 h。 3．纯化——凝胶色谱操作 制作凝胶色谱柱―→装填凝胶色谱柱―→样品的加入和洗脱。 4．纯度鉴定 鉴定方法中使用最多的是SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳。 [共研探究]

血红蛋白的提取和分离 基础知识

第15课时血红蛋白的提取和分离 1.归纳蛋白质多样性的原因 (1)图甲说明：氨基酸的种类不同，构成的肽链不同。 (2)图乙说明：氨基酸的数目不同，构成的肽链不同。 (3)图丙说明：氨基酸的排列次序不同，构成的肽链不同。 (4)图丁说明：肽链的数目和空间结构不同，构成的蛋白质不同。 2.血液包括血细胞和血浆，血细胞又分为红细胞、白细胞和血小板，其中红细胞含有血红蛋白，使红细胞呈现红色。 3.红细胞放到低渗溶液中，会吸收水分，体积膨胀直至涨破。 课堂导入 蛋白质是生命活动不可缺少的物质，随着基因组测序工作的完成，人们对蛋白质的研究和应用工作进入了新的时代，这就需要获得纯度较高的蛋白质。因此对蛋白质的分离就是生物学研究中经常要做的工作，下面我们就以血红蛋白的提取和分离来学习有关蛋白质的一些基本技术。 探究点一蛋白质分离技术 生物体内的蛋白质多种多样，按照科学的需要有时要把它们分开，分离蛋白质常使用的方法是凝胶色谱法和电泳法，都是根据不同蛋白质分子的之间的差异来分离的。 1.蛋白质特性的差异 (1)分子的形状和大小； (2)所带电荷的性质和多少； (3)溶解度； (4)吸附性质；

(5)对其他分子的亲和力。 2.分离的方法 (1)凝胶色谱法 Ⅰ.概念：凝胶色谱法，也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 Ⅱ.凝胶：是一些微小的多孔球体，大多数是由多糖类化合物构成的，内含许多贯穿通道，具有多孔的凝胶又称为分子筛。 Ⅲ.凝胶色谱法分离蛋白质的原理(如图A) ①蛋白质混合物上柱； ②洗脱开始，相对分子质量较小的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内；相对分子质量较大的蛋白质则被排阻于凝胶颗粒之外；