多酚的提取,纯化,定性及抗氧化性
香蕉皮多酚的提取、纯化及抗氧化性实验
摘要：香蕉为世界”四大水果”(荔枝、菠萝、椰子,香蕉）之一，富含糖类、果胶、K、Ca、Mg、维生素C、维生素E和β一胡萝卜素等营养成分以及黄酮类化合物、多酚氧化酶、挥发油等多种活性成分，具有较高的营养价值和保健作用。研究显示，香蕉皮中不仅含有多种营养成分，而且含有多种抗氧化活性成分，因而具有较大的开发和利用价值。目前，国内外对香蕉皮的利用形式主要为饲料或食用菌培养基，产品附加值不高，有关香蕉皮中多酚类物质的提取报道极少。因此，本文对香蕉皮中多酚的提取条件和纯化及其抗氧化性能进行了一定的研究。结果得出，香蕉皮中多酚的最佳提取组合为：乙醇浓度为80％，浸提次数为2次，温度为80℃，时间为3h。用乙酸乙酯纯化后，多酚含量达到了32．54％，纯化效果比较理想。通过对猪油抗氧化性的研究，得出了香蕉皮多酚具有很强的抗氧化能力的结论。
关键词：香蕉皮；多酚；提取；定性；纯化；抗氧化
Extract and Purify Polyphenol from Banana Peer
and Oxidation Resistance Test
Abstract:As one of the "four kinds of richest fruit in the world "（litchi, pineapple, coconut Banana).Banana is in rich of sugars, fruit Glue, K, Ca, Mg, vitamin C, vitamin E and p-carotene, etc.,and other nutrients as well as flavonoids, polyphenol oxidase, volatile oil, a variety of active ingredients with high nutritional value and health effects.Studies shows that, banana peer not only contains a variety of nutritions ,but also contains a variety of antioxidant activity ingredients ,which has great development and use value. Currently, the use of banana peel at home and abroad mainly in the form of feed and edible medium, not high value-added products, meanwhile ,the banana peel in the extraction of polyphenols reported rarely. Therefore, this paper will devote to studying the extraction conditions and purification of polyphenol in banana peel.The results show that the best extraction combination of polyphenol in banana peel is that the concentration of ethanol is 80%,times of extraction is 2,temperature is 80℃,time is 3h.After purifying by chloroform and ethyl acetate,the content of polyphenol reaches 32.54%.The effect of purification is ideal.By researching oxidation resistance capability of lard,it is concluded that the banana peer polyphenol have strong antioxidant capacity.
Keywords: banana peel ;polyphenol;features identification;extraction;purification ;antioxidation.
目录
绪论 (1)
一材料、试剂和仪器的介绍 (3)
1．1 材料、试剂和仪器 (3)
1．1．1 材料 (3)
1．1．2 试剂和仪器 (3)
二香蕉皮多酚的提取 (4)
2. 1 工艺流程 (4)
2.2 不同浓度乙醇对香蕉皮中多酚提取操作要点 (4)
2.2.1 筛选 (4)
2.2.2 烫漂 (4)
2.2.3 切细 (4)
2.2.4 烘干 (4)
2.2.5 浸提 (4)
2.2.6 减压抽滤 (4)
2.2.7 离心 (4)
2.2.8回收乙醇 (4)
2.2.9 烘箱干燥 (4)
2.2.10 称量并计算提取率 (4)
2.3 不同时间对香蕉皮中多酚的提取 (5)
2.4 不同温度对香蕉皮中多酚的提取 (6)
2.5 不同提取次数对香蕉皮中多酚的提取 (7)
2.6 正交试验设计 (8)
2.7 香蕉皮多酚物质提取物的定性 (10)
2.7.1 与盐酸-香草醛溶液显色 (10)
2.7.2 分光光度计定性 (10)
2.8 结论 (11)
三香蕉皮中多酚的纯化 (13)
3.1 实验材料 (13)
3.1.1 主要试剂和材料 (13)
3.1.2 主要仪器 (13)
3.2 工艺流程 (13)
3.3 香蕉皮提取物中多酚含量的测定 (13)
3.3.1 测定方法及原理 (13)
3.3.2 没食子酸标准溶液的配制 (13)
3.3.3 标准曲线的绘制 (13)
3.3.4 样品中多酚含量的测定 (13)
3.4 不同溶剂对多酚萃取效果的影响 (15)
3.5 结论 (15)
四香蕉皮多酚纯化物抗氧化性能的研究 (16)
4.1 实验材料 (16)
4.1.1 实验原料 (16)
4.1.2 实验试剂 (16)
4.1.3 仪器与设备 (16)
4.2 香蕉皮多酚纯化物对猪油的抗氧化实验 (16)
4.2.1 实验原理 (16)
4.2.2 实验方法 (16)
4.3 结论 (17)
讨论 (18)
致谢 (19)
参考文献 (20)
绪论
一、植物多酚的概述
多酚是分子中具有多个羟基酚类植物成分的总称，植物中多酚的含量仅次于纤维素、半纤维素和木质素。植物多酚又称植物单宁，是植物体内的复杂酚类次生代谢产物，具有多元酚结构，主要存在于植物体的皮、根、叶、壳和果肉中。1981年，Haslam提出了植物多酚这一术语，它包括单宁及相关化合物(如单宁的前体化合物和聚合化合物)和聚黄烷醇类(含缩合单宁和相关化合物)两大基本类型。而根据植物多酚的应用性质，也可以将其分为两大类。一类为从茶叶、药用植物等中提取的植物多酚，由于发现这类多酚具有抑制致病性细菌和病毒、抗氧化，抗诱变、抗癌等性质，已在食品，药品、化妆品工业中得到了广泛的应用；另一类为林副产业的植物多酚，其价值不足前类的百分之一，但是这类植物多酚的资源非常丰富，尚未得到充分利用。
茶多酚的结构式：
二、香蕉皮褐变的原因及抑制方法
香蕉成熟后质地柔软，在长期保鲜和储运的过程中，会发生褐变的现象。香蕉的表皮会逐渐产生黑色的斑点，直至完全变黑。这主要是由于香蕉皮及果肉中含有多酚氧化酶(PPO)和大量酚类物质，它们呈隔离分和状态，同时作为呼吸传递物质参与呼吸代谢作用，酚与醌之间的氧化与还原处于动态平衡状态。因此完整的香蕉组织不会发生酶促褐变。但当组织细胞受到机械损伤后或处于异常环境变化(过冷或过热)时，正常的呼吸链被打破，其组织内氧化与还原反应失去平衡，再加上氧气大量入侵，结果导致原料中的酚类化合物在酚酶的作用下迅速氧化成邻醌，进而又快速聚合，形成类黑色素导致褐变。去皮、切片的香蕉组织的破坏程度没有打浆过程那样严重。香蕉在打浆中，极易褐变。因此，在提取多酚类物质时首先要抑制顿化酶的活性，防止多酚被氧化。抑制香蕉褐变的方法主要有以下几种：
1．在沸水中热烫需3min以上，根据资料显示：香蕉中的多酚氧化酶在80℃以上处理3min后，几乎全部不可逆而失活；
2．亚硫酸钠溶液浸泡，浓度为O，7％；
3．维生素c直接添加量为O．7％；
4．亚硫酸钠与维生素c配合，需0．5％亚硫酸钠浸泡2min，然后直接加维生素C。
从方便经济的角度考虑，本实验采用沸水热汤3分钟的方法抑制香蕉褐变。
三、香蕉皮多酚浸提条件的选择
香蕉皮多酚的的浸提是香蕉皮多酚提取分离的基础，其浸提效果直接影响香蕉皮多酚的进一步分离纯化。香蕉皮多酚的浸提就是香蕉皮的可溶性物质由固体团块中转移到液体中，从而得到含有溶质的浸提液。因此浸提的实质就是溶质由固相传递到液相的传质过程，它以扩散理论为基础。影响浸提效果的主要因素有溶剂种类、浸提温度、原料的粒度、浸提的时间及被浸提物的浓度差等。
本实验采用溶剂浸提法（溶剂为乙醇）选择出最佳的浸提温度，时间，溶剂浓度及浸提次数。
四、溶剂的提取原则
用溶剂提取活性成分时，选择适宜的溶剂是关键，溶剂选择合适就能顺利地把有效成分提取出来，如果选择不当很难把有效成分提取完全甚至提不出来。适宜的溶剂应符合以下要求：
一、对目标成分溶解性大，对共存杂质溶解性小；
二、不与目标成分起化学反应；
三、价廉、易得、浓缩方便，并且安全无毒。
提取溶剂的选择主要依据溶剂的极性和被提取目标成分所含活性基团种类和数目及其共存杂质的极性大小来判断。天然有机化合物在溶剂中的溶解应遵循“相似相溶”规律，极性化合物倾向溶于极性溶剂，非极性化合物倾向溶于非极性溶剂，分子量太高的化合物往往不溶于任何溶剂。
对于已知化合结构的化合物，可根据其分子结构判断其极性，选择合适的提取溶剂，物质的极性与其分子结构有关，一般而言，分子的极性依据活性基团的种类和数目、分子的缔合程度大小进行判断，分子中含羟基或羧基基团越多，极性就越大，亲水性就越强，反之极性就越小，亲脂性越强。
常用有机溶剂对天然有机化合物的溶解规律如下：
（1）水可溶解生物碱盐、苷类、有机酸盐、氨基酸、蛋白质、鞣质、糖类（单糖、黏液质）、无机盐等。酸性水溶液可溶解生物碱，碱性水溶液可溶解酸性成分，如有机酸、多羟基黄酮、蒽醌、香豆素、酚类及内酯类等。
（2）乙醇可溶解生物碱及其盐、苷类及苷元、萜类、木脂素、挥发油、树脂、色素、有机酸等。
（3）乙酸乙酯可溶解游离生物碱、苷元、萜类、挥发油、脂肪油、色素等。
（4）氯仿可溶解生物碱、甾类、萜类、挥发油、油脂类、内酯、香豆素、蒽醌等。
（5）石油醚可溶解油脂、蜡、挥发油、亲脂性色素、萜类、甾类等亲脂性强的成分。
五、有效成分的提取原则
天然有机化合物所含的化学成分比较复杂，提取其中某一个或多个有效成分时，需掌握以下原则：
其一：首先查阅国内外文献资料，掌握被提取原料中所含的化学成分，目标成分的稳定性，共存杂质的类型，了解被提取原材料的基源、产地、提取部位、质量优劣，进行基源和质量鉴定。
其二：根据提取原料的质地选择粉碎条件；依据被提取成分的极性大小，共存杂质的理化特性选择适宜的提取溶媒和确定溶剂的用量。
其三：根据被提取成分的稳定性和溶媒的溶解性设定提取温度、提取时间、提取次数、除杂方法、溶剂回收的要求及注意事项。
其四：制定提取标准操作规程、检测标准及提取物验收标准。
其五：根据目标成分（一个或多个有效群体）的要求，设计分离方案，达到预期目的。
一材料、试剂和仪器的介绍
1.1 材料、试剂和仪器
1.1.1 材料
香蕉皮(市售香蕉，剥离果肉备用；新鲜，无黑斑)
1.1.2 试剂和仪器
1、主要试剂：
95 % 乙醇、乙酸乙酯、正丁醇等均为分析纯，没食子酸。这些试剂均购自成都市科龙化工试剂厂。
2、主要仪器：
电子天平，北京赛多利斯天平有限公司，型号：BS110S.Max.11
CHZ-82恒温水浴锅,常州澳华仪器有限公司
SHZ-ⅢB真空泵：浙江临海市精工真空设备厂
分光光度计：尤尼柯上海仪器有限公司；规格型号：7200,波长范围325。
离心机：上海手术器械厂，800型。
DHG-9141型电热恒温干燥箱，上海精宏实验设备有限公司。
GHP-9050隔水式恒温培养箱，上海山连实验设备有限公司。
飞利浦二合一搅拌机CHB1707/BC型，珠海经济特区飞利浦家电有限责任公司。
旋转蒸发仪：郑州长城科工贸有限公司
二香蕉皮中多酚的提取
2.1 工艺流程
3min 90mL乙醇为浸提液 10min 60℃下干燥30min ↑↑↑↑
选料→烫漂→切碎→烘干→浸提→减压过滤→滤液→离心→上层液→回收乙醇→剩余混合物→烘箱↓↓↓↓
60℃下干燥30min 滤渣下层液乙醇
干燥→称量→计算提取率
2.2 不同浓度乙醇对香蕉皮中多酚提取操作要点
2.2.1 筛选
选择无黑斑的新鲜香蕉皮。
2.2.2烫漂
称取700g无黑斑的香蕉皮放入沸水中烫漂3分钟，以钝化香蕉皮中的多酚氧化酶。
2.2.3 切细
将烫漂后无黑斑的香蕉皮洗净，切成细末。
2.2.4 烘干
将香蕉皮细末放入烘箱中，在60℃条件下干燥30min。
2.2.5 浸提
将上述得到的香蕉皮细末分成七等份，分别在80摄氏度，料液比为1:3条件下以不同浓度分别为30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％的乙醇浸提2小时，并不断搅拌。
其具体步骤如下：
第一步，取烘干后的香蕉皮细末分成七等份后分别置于250ml的三角瓶中；并分别编号为1号，2号，3号，4号，5号，6号，7号。
第二步，用量筒量取90ml的不同浓度的多酚提取液放入上述三角瓶中。
第三步，将装有香蕉皮细末和不同浓度多酚提取液的三角瓶分别放入预先已预热到80℃的恒温水浴锅中；
第四步，装上冷凝装置，回流60min；
第五步，提取完成后，取出三角瓶冷却至室温。
2.2.6减压抽滤
连接好真空泵、抽滤瓶和布氏漏斗，将上述浸提所得的七份溶液分别过滤，取其滤液。
2.2.7离心
将过滤后的溶液离心2min.得上层溶液。
2.2.8回收乙醇
用减压回收装置回收乙醇。
2.2.9 烘箱干燥
将得到的成分在60℃下进行烘箱干燥30min。
2.2.10 称量并计算提取率
将烘箱干燥得到的成品用电子天平称量。
不同浓度乙醇对香蕉皮中多酚提取率的影响见图一：
图一不同乙醇浓度对多酚提取率的影响
由图一可见，在乙醇浓度小于70%时，香蕉皮中多酚的提取率随乙醇浓度的增加而增加。其中，乙醇浓度在40%到70%之间，提取率增加最迅速。当乙醇浓度大于70%后，多酚的提取率增长速度缓慢，在乙醇浓度达到80%就达到最大，提取率为1.40%。香蕉皮中还含有果胶，而高浓度的乙醇可以除去部分果胶，有利于纯化的操作。故选用乙醇浓度选80%较好。
2.3 不同时间对香蕉皮中多酚的提取
同2.2流程，只将2.2.5改为：
将上述香蕉皮细末分成七等份，分别在80摄氏度，料液比为1:3，浓度为80％的乙醇分别浸提60min,90min,120min,150min,180min并不断搅拌。
其具体步骤如下：
第一步，取烘干后的香蕉皮细末分成七等份后分别置于250ml的三角瓶中；并分别编号为1号，2号，3号，4号，5号，6号，7号。
第二步，用量筒量取90ml浓度为80%的多酚提取液放入上述三角瓶中。
第三步，将装有香蕉皮细末和多酚提取液的三角瓶分别放入预先已预热到80℃的恒温水浴锅中；
第四步，装上冷凝装置，分别回流60min,90min,120min,150min,180min。
第五步，提取完成后，取出三角瓶冷却至室温。
浸提时间对香蕉皮中多酚提取率的影响见图二：
图二浸提时间对多酚提取率的影响
由图二可见，香蕉皮多酚的提取率随着时间的增加逐渐增加，但当2h后，提取率增长的速度变缓，到3h时，仅仅增加0.02%。故浸提时间选择2小时为宜。而且，越到后面，其他成分的溶出也会较多，影响纯化，故浸提时间选择2h比较合适。
2.4不同温度对香蕉皮中多酚的提取
同2.2流程，只将2.2.4改为：
将上述香蕉皮细末分成七等份，分别在浓度为80％的乙醇，料液比为1:3，温度分别为30℃，40℃，50℃，60℃，70℃，80℃，90℃下浸提2h，并不断搅拌。
其具体步骤如下：
第一步，取烘干后的香蕉皮细末分成七等份后分别置于250ml的三角瓶中；并编号为1号，2号，3号，4号，5号，6号，7号。
第二步，用量筒量取90ml浓度为80%的多酚提取液放入上述三角瓶中。
第三步，将装有香蕉皮细末和多酚提取液的三角瓶分别放入预先已预热到30℃，40℃，50℃，60℃，70℃，80℃，90℃的恒温水浴锅中；
第四步，装上冷凝装置，回流120min
第五步，提取完成后，取出三角瓶冷却至室温。
不同浸提温度对香蕉皮中多酚提取率的影响见图三：
图三不同浸提温度对多酚提取率的影响
有图三可见：浸提温度在40～80℃之间时，香蕉皮中多酚的提取率随温度增加而增加，原因是温度的增加使得香蕉皮中多酚的溶解速度加快。当80℃以后，提取率增加缓慢甚至有所降低。故浸提温度选择80℃较好。
2.5不同提取次数对香蕉皮中多酚的提取
同2.2流程，将700g香蕉皮改为400g香蕉皮；将2.2.4改为：
将烘干后的香蕉皮细末分成4等份，分别在浓度为80％的乙醇，料液比为1:3，温度为80℃下浸提120min，并不断搅拌。四份香蕉皮碎末分别提取1次，2次，3次，4次。
其具体步骤如下：
第一步，取烘干后的香蕉皮细末分成4等份后分别置于250ml的三角瓶中；并编号为1号，2号，3号，4号。
第二步，用量筒量取90ml浓度为80%的多酚提取液放入上述三角瓶中。
第三步，将装有香蕉皮碎末和多酚提取液的三角瓶分别放入预先已预热到80℃的恒温水浴锅中；
第四步，装上冷凝装置，回流120min
第五步，提取完成后，取出三角瓶冷却至室温。
在减压抽滤后，2号，3号，4号三角瓶再分别浸提一次，再抽滤，3号，4号再浸提，最后抽滤后，4号再浸提抽滤。最后将各号三角瓶所得的浸提液合并，按照2.3后面的流程进行。
不同浸提次数对香蕉皮中多酚提取率的影响见图四：
图四不同浸提次数对多酚提取率的影响
有图四可见，随着浸提次数的增加，多酚的提取率也在增加。当浸提次数在3次后，提取率增加趋于平缓，而且还有其他物质的溶出，使纯化的难度增加。故浸提次数选3次为最好。
2.6 正交试验设计
根据单因素试验确定的范围，乙醇浓度，提取温度，提取时间，固液比作为考察的4因素，每因素3水平，以总多酚含量为指标，用L9(34)正交表安排试验，得出最佳浸提条件。
表2-1 L9(34)正交试验因素水平表
水平乙醇浓度（A）
(%,V/V)
温度（B）（℃）时间（C）（h) 浸提次数（D）
1 2 3 60
70
80
70
80
90
1
2
3
1
2
3
表2-2 L9(34)正交试验结果分析表
实验号 A B C D 多酚得率/%
1 1 1 1 1 1.06
2 1 2 2 2 1.26
3 1 3 3 3 1.25
4 2 1 2 3 1.31
5 2 2 3 1 1.33
6 2 3 1 2 1.37
7 3 1 3 2 1.46
8 3 2 1 3 1.43
9 3 3 2 1 1.36
K1 3.57 3.83 3.86 3.75
K2 4.01 4.02 3.93 4.09
K3 4.25 3.98 4.04 3.99
K1 1.190 1.277 1.287 1.250
K2 1.337 1.340 1.310 1.363
K3 1.417 1.327 1.347 1.330
R 0.227 0.063 0.060 0.113
由表2分析可知，影响浸提效果的主次因素为A>D>B>C,即乙醇浓度、浸提次数、温度、时间，得到香蕉皮多酚的最佳提取方案为A3B2C2D3。因此，能够确定最佳浸提条件为：乙醇浓度为80％，浸提次数为2次，温度为80℃，时间为3h。因为本最佳方案在正交试验表中没有这一组方案。因此，本试验做
了一组平行试验（详见表2-4）来探讨最佳提取方案的多酚的提取率是否的确比其他任何方案都高。从得到的结果可以看出，本方案所得的多酚的提取率平均值为1.476%，确实高于其他方案。故确定最佳浸提条件为：乙醇浓度为80％，浸提次数为2次，温度为80℃，时间为3h。
表2-3 正交试验方差分析
因素偏差平方和自由度F比F临界值显著性
乙醇浓度 0.079 2 2.847 3.110
温度 0.007 2 0.252 3.110
时间0.005 2 0.180 3.110
浸提次数0.020 2 0.721 3.110
误差0.11 8
由表2-3的方差分析可知，F
A =2.903，F
B
=0.194，F
C
=0．161，F
D
=0.742，在水平0．1下，
因素A对浸提效果的影响呈显著性。而在水平0.05下，A、B、C、D四个因素对浸提效果的影响均不显著。
表2-4 最佳提取方案得率的探讨
最佳方案下三次平行试验的得率/% 1.47 1.48 1.48
得出平均值为：1.476%
2.7 香蕉皮多酚物质提取物的定性
做完香蕉皮中多酚的提取后，为了证明得到的提取物中确实含有多酚物质，本文采用分光光度计及提取物与盐酸-香草醛溶液显色进行定性。
2.7.1 与盐酸-香草醛溶液显色
利用多酚类物质所特有的羟基基团与显色剂作用呈现所特有的颜色，以验证其性质多酚类物质与盐酸-香草醛溶液作用呈现粉红色。
操作步骤：
第一步，配制10%盐酸-香草醛溶液；
第二步，取适量粗品于滴定板上；
第三步，用滴管取盐酸-香草醛溶液滴在粗品上；观察颜色；
第四步，试验结果，颜色呈粉红色。
结果：香蕉皮提取液中的成分含有多酚。
2.7.2 分光光度计的定性
利用多酚类物质与盐酸-香草醛溶液作用显色在可见分光光度计找到它的波长范围，与标品比较。标品选用的是儿茶素。操作步骤如下：
标品：
第一步，配制标品溶液500ug/ml；
第二步，配制10%香草醛-乙醇溶液
第三步，配制空白标样：6ml10%香草醛-乙醇溶液+2.8ml盐酸+1.2ml95%乙醇
第四步，配制标液标样：1ml标液+6ml香草醛+2.8ml盐酸+0.2ml乙醇
第五步，将配制好的标样置于恒温烘箱中，20℃左右，避光反应15小时。
第六步，上可见分光光度计，确定其波长范围。
香蕉皮多酚提取物样品：
第一步，配制空白样品：6ml10%香草醛-乙醇溶液+2.8ml盐酸+1.2ml95%乙醇
第二步，配制样液：1ml样品+2.8ml盐酸+6ml香草醛-乙醇溶液+0.2ml乙醇
第三步，将配制好的样液置于恒温烘箱中，20℃左右，避光反应15小时。
第四步，上可见分光光度计，确定其波长范围。
结论：标品的波长范围与样品的波长范围都在400-600nm.
注意事项：标品与样品在同一环境下反应。
表2-5 香蕉皮中多酚类物质的最大吸收波长确定
波长（nm）440 480 520 560 566 572 574 580 590 610 0.5ml OD 0.051 0.117 0.221 0.286 0.304 0.308 0.304 0.294 0.261 0.183
1ml OD 0.076 0.238 0.424 0.511 0.535 0.542 0.531 0.513 0.431 0.242 1ml样品0D 0.579 0.506 0.495 0.666 0.727 0.815 0.859 0.763 0.745 0.655
图五香蕉皮中多酚类物质的最大吸收波长
最大吸收波长的确定
00.10.20.30.40.50.60.7
0.80.91420
470
520
570620
670
波长（nm）
吸光度O D 值
0.5ml浓度为244μg/ml儿茶素标准品乙醇溶液，于420-700nm扫描所得的波段
1ml浓度为244μg/ml儿茶素标准品乙醇溶液，于420-700nm扫描所得的波长
1ml样品乙醇溶液，于420-700nm 扫描所得的波段
从图五可以看出香蕉皮多酚提取物的最大吸收波长和标品儿茶素的最大吸收波长大致一样，说明粗提物中含有儿茶素，也就是说明了粗提物中含有多酚。
2.8 结论
香蕉皮中的多酚是水溶性物质，在一定范围内，其水溶性随温度的升高而增大。因为香蕉皮中还含有果胶、多糖、蛋白质等物质，而一定浓度的乙醇溶液对多酚与它们之间相互缔合所形成的氢键和疏水键具有一定的阻断作用。因此，乙醇对多酚具有较高的溶解性，对蛋白质、多糖的溶解性较低，而且果胶不溶于其中。而像丙酮、甲醇、乙醚等有机溶剂有一定毒性。所以，采用乙醇—水溶液提取多酚。本文通过单因素实验，分别在不同浓度的乙醇，不同的浸提时间、浸提温度和浸提次数对香蕉皮中的多酚进行了浸提，以此分别来确定最适浸提因素。再通过正交实验研究出最佳浸提条件，及乙醇浓度为80%，浸提温度为80℃，浸提时间为3h ，浸提次数为2次。
三香蕉皮中多酚的纯化
香蕉皮中的多酚类物质是香蕉皮中具有生物活性的物质。由于香蕉皮的化学成分非常复杂，溶剂浸提法所得的浸提物中多酚含量较低，为了获得较高含量的香蕉皮多酚制品。本文采用溶剂萃取法来纯化香蕉皮中的多酚物质，并通过比较乙酸乙酯与正丁醇的纯化效果得出最佳溶剂萃取方法。
溶剂萃取法是用一种溶剂将一种液体混合物中的某一化学组分提取出来的分离技术。萃取所使用的溶剂可以是某一种溶剂，也可以是某些溶剂的混合液。香蕉皮多酚可溶于乙酸乙酯溶液中，而多糖、单糖及小分子蛋白质难溶于乙酸乙酯溶液，利用此性质采用溶剂萃取法可以纯化香蕉皮中的多酚。
3.1 实验材料
3.1.1 主要试剂和材料
乙酸乙酯，正丁醇等均为分析纯。
3.1.2 主要仪器
分光光度计
电热恒温干燥箱
真空泵
电子天平
3.2 工艺流程：
300ml萃取液萃取1h 在60℃下干燥30min
↑↑
配料→萃取→静置分层→有机层→浓缩干燥→测定多酚含量
3.3 香蕉皮提取物中多酚含量的测定
3.3.1 测定方法及原理：Folin一Denis比色法
在碱性溶液中酚类化合物可以将钨铝酸还原(使w6+→w5+),生成蓝色的化合物，其颜色的深浅与酚含量成正比关系，在760nm处有最大吸收，此法为FO1in．Denis法。本文以没食子酸为标样，来检测提取物中多酚的含量。
3.3.2 没食子酸标准溶液的配制
1、没食子酸标准液：准确称取没食子酸标准品0．1000g，溶解后移入500mL容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度，摇匀，得浓度为0．2mg/mL的标准液备用；
2、85％H3PO4：吸取磷酸85mL移入100mL容量瓶中，定容至刻度备用；
3、Folin-Denis试剂：称取100g钨酸钠，20g磷钼酸和50mL85％的磷酸，溶于750mL蒸馏水中，加热煮沸回流2h，冷却并稀释至lL备用；
4、10％Na2CO3：准确称取无水Na2CO3固体20g，溶解并移入200mL容量瓶中，定容至刻度备用。
2.2.3 标准曲线的绘制
分别吸取上述没食子酸标准溶液0．5mL、1．0mL、1．5mL、2．0mL、2．5mL、3．0 mL、3．5 mL、4．O mL、4．5 mL、5．O mL于100 mL容量瓶中，加入3 mLFolin．Denis试剂，摇匀，放置3min后加入3 mL 10％Na2CO3，摇匀，在室温下放置反应1h后。用蒸馏水定容至刻度，各溶液中相应的没食子酸含量为1．Omg/L，2．Omg/L，3．0mg/L， 4．0mg/L，5，0mg/L，6 Omg/L，7．Omg/L，8．0mg/L，9．Omg/L，10．0 mg/L，按上述同样方法配制空白试剂，于紫外分光光度计上760nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，多酚含量为横坐标，绘制标准曲线，用最小二乘法进行线性回归求得标准回归方程。
3.3.4 样品中多酚含量的测定
吸取l mL样品稀释液于100 mL容量瓶中，加入3 mLFolin-Denis试剂，摇匀，放置3min后加入3mLl0％Na2CO3，摇匀，在室温下放置反应lh后，用蒸馏水定容至刻度，，以上述空白做参比液，于760nm 处测定吸光度，重复三次取平均值。从标准曲线上查得相应的酚类物质的含量，再通过计算得到总酚物质的含量。按下式计算总酚的含量：
提取液浓度(mg/1000 mL)：C=(A—O．0537)/0.0465
总酚提取率(以没食子酸的相当值表示)=C×V1×V0×100%/(V2×W)
式中：C——样液浓度，mg/1000mL；
V1——测定时样液稀释体积，mL；
V2——测定吸光度时所用样液体积，mL
V0——定溶后体积，mL；
W——称取样品香蕉皮的重量，mg；(换算为干香蕉皮的重量)。
表2-4 标准溶液的吸光度
没食子酸
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 溶液浓度
（mg/L）
吸光度（A）0.096 0.146 0.191 0.241 0.296 0.331 0.378 0.431 0.473 0.511
图六标准曲线图
以吸光度为纵坐标，没食子酸标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，如图五所示。用最小二乘法进行线性回归分析得标准回归方程为:Y=0.0465X+0.0537.
式中：Y——吸光度(A)；
x——标准溶液浓度，mg/L。
r为O.9993，在1mg/L～10mg/L浓度范围内具有良好的线性相关性。
代入数据可得提取液多酚提取率=10.43%
3.4 不同溶剂对多酚萃取效果的影响
将从香蕉皮中提取得到的提取液，用移液管移取100ml至分液漏斗中，分别添加300ml乙酸乙酯和正丁醇，进行等体积不同溶剂的萃取。并在室温震荡并静置分层，取其有机层，进行浓缩干燥，得到香蕉皮多酚纯化物。
萃取结果如表3：
表3-1不同溶剂对香蕉皮中多酚纯化的结果
溶剂多酚含量(%)
乙酸乙酯36.86
正丁醇19.63
从表3-1可以看出，用正丁醇萃取物的多酚的含量较低为19.63％，只比粗提物中多酚含量(10．43％)稍有提高，纯化效果不是很好。用乙酸乙酯萃取的多酚的含量较高，达到36.86％，比用正丁醇萃取效果提高了近2倍，纯化效果较明显。
3.5 结论
用乙酸乙酯萃取可使多酚含量从10．43％增加到了32.54％，纯化效果较理想。
四香蕉皮多酚纯化物抗氧化性能的研究
随着人类社会的进步，人们对物质生活的追求越来越高，特别是当年龄逐渐增大，对老年疾病的防止和抗衰老的研究日益关注。现代生物学关于活性氧和体内自由基增多是促进衰老进程的主要原因研究引人注目，衰老的自由基学说被越来越多的实验所证实18”。自由基可与生物体内的许多物质如脂肪酸、蛋白质等作用，夺取它们的氢原子，及产生的中间产物，造成相细胞的结构与功能的破坏，其中一些还是公认的致癌物，现已明确许多疾病，都与自由基有关：而食用油脂和富腊食品的酸败也是自由基所引发的．它不仅使油脂本身受破坏失去营养，更重要的是其氧化产物和中间产物会伤害生物膜、酶，维生素、蛋白质及活细胞功能。鉴于上述原因，有关抗氧化剂清除自由基的研究得到普遍关注。
本实验主要从对猪油的抗氧化作用研究了香蕉皮多酚纯化物的抗氧化性能。
4.1实验材料
4．1．1实验原料
ABTS_法测定葡萄酒抗氧化活性的研究
第37卷 第11期2009年11月 西北农林科技大学学报(自然科学版) Journal of Northwest A&F University(Nat.Sci.Ed.) Vol.37No.11 Nov.2009 ABTS?+法测定葡萄酒抗氧化活性的研究3 李 华,李 勇,吴 莹,王 华 (西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西省葡萄与葡萄酒工程技术研究中心,陕西杨凌712100) [摘 要] 【目的】确定AB TS?+法测定葡萄酒抗氧化活性的最佳反应时间和葡萄酒的最佳稀释倍数。【方法】应用福林肖卡比色法(FC)测定36种葡萄酒样品的总酚含量(Total phenol index,TPI),从中选出9种总酚含量具代表性的葡萄酒样品,并采用AB TS?+法测定反应不同时间和稀释不同倍数葡萄酒样品的抗氧化活性。【结果】AB TS?+法测定葡萄酒抗氧化活性的最佳反应时间为2～5min;红葡萄酒的最佳稀释倍数为0.2∶10～0.4∶10,桃红葡萄酒的最佳稀释倍数为1∶10～4∶10,白葡萄酒的最佳稀释倍数为3∶10～7∶10。【结论】得到了AB TS?+法测定葡萄酒抗氧化活性的最佳反应时间和葡萄酒的最佳稀释倍数,且无需事先测定总酚含量,简化了试验步骤。 [关键词] 葡萄酒;抗氧化活性;AB TS?+法;反应时间;稀释倍数 [中图分类号] TS262.6[文献标识码] A[文章编号] 167129387(2009)1120090208 Research of antioxidant activity of wine s determined by the ABTS?+method L I Hua,L I Y ong,WU Y ing,WAN G Hua (College of Enolog y,Engineering Research Center f or V iti2V i nicult ure,N ort hwest A&F universit y,Yangli ng,S haanx i712100,China) Abstract:【Objective】The p resent st udy aimed to confirm t he best reaction time and wine dilution of t he AB TS?+met hod.【Met hod】The Folin2Ciocalteu colorimetry was used to measure t he total p henol in2 dex of36kinds of wines and t hen9kinds of rep resentative samples were selected f rom t hem,AB TS?+ met hod was used to measure t he antioxidant activities of wines wit h different reaction time and different di2 lutio ns,and was analyzed t he experiment result.【Result】The result s showed t hat t he best reaction time of t he AB TS?+met hod is2to5minutes,t he best dilution range,0.2∶10to0.4∶10for red wines,1∶10to 4∶10for ro se wines,and3∶10to7∶10for white wines.【Conclusion】The st udy has obtained t he best re2 action time and wine dilution to measure antioxident activity of wines by AB TS?+met hod,and t here is no need to measure total p henol content beforehand,so t he test p rocedure is simplified. K ey w ords:wine;antioxidant activity;AB TS?+met hod;reaction time;dilution 经过研究和分析发现,葡萄酒中含有大量的多酚类物质,如白藜芦醇、儿茶酚、表儿茶精、槲皮酮和芸香苷等,这些多酚类物质具有抗氧化活性,除了抑制低密度脂蛋白的氧化、预防心血管疾病以外,还有抗癌、抗炎症和抗血小板凝聚等功能[1],但不同的品种、气候、地理条件和工艺措施,导致葡萄酒中酚类物质在数量和种类上都有明显不同[223]。因此,如何评价葡萄酒中酚类物质的抗氧化活性很有现实意义。 AB TS?+在414,645,734和815nm处均有特征吸收[4]。Miller等[5]在1993年首次介绍了用AB TS?+法来评价一些化合物的抗氧化活性,即根据待测化合物清除AB TS?+引起的吸光度变化来评价其抗氧化活性。此后,AB TS?+法成为一种被广泛采用的抗氧化活性测定方法,用于饮料和食 3[收稿日期] 2009203206 [基金项目] 陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项“陕西省葡萄与葡萄酒产业关键研究”(2007ZD KG209) [作者简介] 李 华(1959―),男,重庆市梁平人,教授,博士生导师,主要从事葡萄与葡萄酒研究。 E2mail:lihuawine@https://www.wendangku.net/doc/bd14676692.html,
抗氧化酶活性等测定方法
叶绿体得提取 一、试剂配置 １、PＢS提取液:每L水依次加入MES(１9５.2×0。05=９、7６g)、山梨糖醇(0。33×182。2＝60。1２6g)、ＮaCｌ(０、０10×58.5=0、５85g)、MgCｌ(０.002×95=0、19g)、EDＴA(292、２5×０.0０２=０、５84５g)、KH2PO４(２00×0.0005=０、１g);使用时加入ASＡ—Nａ(１98。1×0、00２=0、３962g); 2、悬浮液:将ＰBS提取液中得MES换为238。３×0.05＝１１、９15g得HEＰＥS(238、3×０。05=11。915ｇ); ３、8０%Pｅrｃoｌ:8０ml原液+２0ml水;40％Perｃol:４0ｍl原液＋60ml水; 实际配制: PBS提取液2000ｍl(3个处理*2个品种＊３个重复＊20ml＊３次=1０80mｌ), 悬浮液100ml(３个处理＊2个品种＊3个重复*1mｌ＊3次＝5４ml); 8０％Percol ２０0ml;40%Percｏl 200ml。(3个处理*2个品种*3个重复*3mｌ＊3次=162ｍl) 二、提取步骤 1、10g鲜样加20ｍl提取ＰＢS(50mM MES PH６、1,含0、３3M山梨糖醇,10mM NaＣl,2mMＭgCｌ２,２ｍM EＤTA,０.5 mMKH2PＯ４,2mM ASA—Ｎa,ASＡ—Na使用前现配现加) 2、快速研磨,使叶片碎成绿豆粒大小,４层纱布过滤,去除残渣(注意过滤时不可用力挤压,以免叶绿体膜破碎) 3、滤液20００g ３ｍin,小心倒出上清液,将离心管放入离心机后,使离心机得加速很快上升到预定值(水平转头,加速度调到9),约经30s后很快使其下降停止,整个离心持续大约2—3ｍｉｎ左右完成; 4、沉淀用１ml提取液漂洗表面悬浮物; 5、用1ml悬浮液(５０mM HＥPＥS pＨ7。6,含０、３３mM山梨糖醇,１０mM NaＣl,2mM MgＣl2,2mM EDTA,0。5mMKH2PＯ４,2mM ASA－Ｎａ,ASＡ-Na使用前现配现加)将沉淀悬浮,在分散叶绿体时宜用毛笔轻轻刷,或者用手握住离心管在冰块之间搅动,使叶绿体由于震动分散开来,不要用棉球吸滤,以防被膜压破。叶绿体悬浮时要浓点,含叶绿素２ｍg、ml-1以上,这样有利于保持活性。 6、２000g 1min; 7、沉淀再用悬浮液悬浮;(悬浮液同5,可以不做) 8、用Ｐｅrcol试剂进行梯度离心(将3ml含有80％Peｒcｏl(原液按100％算)铺在１0mｌ离心管下层,再把３ｍl 40％Perｃol铺在离心管中层,然后将1mｌ叶绿体悬浮液轻轻铺在离心管上层)１500ｇ2-3mｉn(用
猴头菌提取物抗氧化活性研究
猴头菌提取物抗氧化活性研究 分别采用还原力测定法、Fenton法、2,2-二苯基-1-苦肼基（DPPH）分析法和改良邻苯三酚自氧化法，对猴头菌子实体水提物和醇提物的总还原力，清 除?OH、DPPH?和O - 2?自由基的能力进行测定。结果表明：醇提物还原力 较强，且还原力大小与浓度成正比；猴头菌水提物和醇提物均有清除?OH、DPPH? 和O - 2?自由基的能力，且水提物的效果比醇提物好；水提物和醇提物对?OH、DPPH?和O - 2?的清除能力依次为DPPH?、?OH和O - 2?，并且在一定浓 度范围内，清除率与浓度成正比。 猴头菌；清除自由基；抗氧化活性 人体持续暴露在活性氧与促氧化剂中时，很容易引起机体组织产生氧化应激，导致代谢性功能紊乱以及一系列的慢性疾病［1］。食用一些富含具有抗氧化活性物质的功能性食品可以减轻机体组织氧化应激或预防损伤。一些合成抗氧化剂与天然抗氧化剂相比，尽管具有很强的清除自由基活性，但同时也具有强的毒副作用，因此人们倾向于从自然界中寻求更安全的抗氧化剂。LEE等［2］从桦褐孔菌（Inonotus obliquus）中分离到一些具有较强活性的抗氧化成分（多酚类化合物）。MAU等［3］研究表明灵芝(Ganoderma lucidum)是很好的天然抗氧化剂。同为食用菌的猴头菌(Hericium erinaceus)是著名的药膳两用真菌，具有抗溃疡、抗炎症、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、提高机体耐缺氧能力、增加心肌血液输出量、加速机体血液循环、降血糖、保肝护肝和降血脂、降血压等作用［4］。笔者通过对猴头菌子实体的水提物和醇提物总还原力、清除?OH、2,2-二苯基-1-苦 肼基自由基（DPPH?）及O - 2?自由基的研究，旨在为其在医药保健方面的 利用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1材料 猴头菌（H. erinaceus)子实体由上海市农业科学院食用菌研究所提供。 1.2主要试剂与仪器 柠檬酸、Na 2HPO 4、NaH 2PO 4、六氰合铁酸钾（铁氰化钾）、醋酸、三氯化铁、维生素C、FeSO 4?7H 2O、30％H 2O 2溶液、水杨酸、无水乙醇、95％乙醇等（国药集团化学试剂有限公司），DPPH（美国Sigma公司），实验用水（娃哈哈纯净水）；infinite M200 PRO酶标仪（瑞士TECAN公司）；UVmini-1240分光光度计（日本SHIMADZU 公司)。 1.3提取物的制备 1.3.1水提物 干燥猴头菌子实体，用粉碎机粉碎，称取50 g粉末，加1 L蒸馏水超声20 min，过滤，滤液减压浓缩，反复3次，合并浓缩液，转至蒸发皿中，60 ℃水浴蒸干，备用。 1.3.2醇提物 同样称取50 g猴头菌子实体粉末，加1 L 95％乙醇超声20 min，过滤，其
植物提取物抗氧化成分及研究进展
植物提取物抗氧化原理及成分研究 抗氧化是抗氧化自由基的简称。因为人体常与外界接触，平时的呼吸、外界污染、放射线照射等因素会导致人体内产生自由基，过量的自由基会导致人体癌症、衰老和其它疾病，而抗氧化自由基（以下简称“抗氧化”）可以有效克服这些危害。因此，抗氧化已成为保健品和化妆品市场的主要研究课题之一。 本文从多种类植物提取物抗氧化成分及其原理出发，阐述了各界近年来利用植物对抗自由基的研究进展。 一、植物提取物抗氧化原理 不同的植物提取的有效成分不尽相同，同样，抗氧化作用的植物提取物也有很多不同成分，其作用机理也有所区别，西安源森生物从以下几方面进行了总结阐述： （一）作用于与自由基有关的酶 与自由基有关的酶类分为氧化酶与抗氧化酶两类，植物提取物的抗氧化作用体现在抑制相关氧化酶的活性和增强抗氧化酶活性两方面。 1. 抑制氧化酶的活性 生物体内许多氧化酶，如P-450 酶、黄嘌呤氧化酶(XOD)、脂氧化酶、髓过氧化酶(MPO)和环氧酶等，与自由基的生成有关，能诱发大量的自由基。 另外，诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在缺血再灌注时活性增加，产生大量NO而导致氧化损伤。 研究表明，许多植物提取物对上述各种氧化酶有抑制作用，从源头抑制自由基生成。黄酮类化合物中的槲皮素、姜黄素在缺血再灌注损伤时可抑制iNOS 的活性，从而起到抗氧化作用；绞股蓝皂苷可以降低异常增高的XOD 和MPO 的活性，改善糖尿病大鼠肾脏的氧化应激，延缓肾脏损害的进展。 2. 增强抗氧化酶活性 机体存在具有防护、清除和修复过量自由基伤害的抗氧化酶类，如过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶等。SOD 是体内超氧阴离子的主要清除者，将其催化分解为H2O2，但H2O2也具有氧化损伤作用，CAT 将其转化为O2和H2O。同时H2O2也可通过GSH-Px 的催化和还原型谷胱甘肽(GSH)反应生成H2O，同时生成氧化型谷胱甘肽。 许多研究表明，植物提取抗氧化成分不仅能防护体内抗氧化酶，还能增强机体内抗氧化酶活性，如黄酮类中的槲皮素能减少胰岛β细胞的氧化损伤，同时还能恢复Fe2+致肾细胞损伤动物的SOD、GSH-Px 和CAT 的活力；皂苷类物质对氧自由基本身影响较少，但大多能提高体内SOD、CAT 等抗氧化酶的活性，从而增强机体抗氧化系统功能。 此外，一些天然物质可在基因与转录水平上诱导体内抗氧化酶如SOD 的表达，发挥其抗氧化作用。 （二）抗氧化成分之间互补和协同作用 植物提取物抗氧化成分之间存在相互补充、相互协调的关系，在体内通过电子和/ 或质子转移、作用于氧化酶和抗氧化酶、螯合钝化过渡金属离子、影响基因表达等途径联合发挥抗氧化作用。 研究发现不同浓度的茶多酚和西洋参之间均存在明显的协同增效作用，并且随着浓度上升，协同增效作用也相应增强。VE 和VC对鹰嘴豆抗氧化多肽的还原能力有显著的增效作用，且VC与鹰嘴豆抗氧化多肽的协同作用较VE更强，所有的协同作用随添加量和作用时间的增加而增强。 （三）直接清除或抑制自由基 植物提取物能够作为氢质子或电子的供给体，直接猝灭或抑制自由基，终止自由基的连
生物活性肽的研究及其进展汇总
生物活性肽的研究及其进展 摘要：生物活性肽作为一种来源广泛、种类繁多、功能性良好的生命因子，目前已成为全球范围内的研究热点。研究表明这些肽除具有常规的生物活性,如增加矿物质吸收、调节血压、抗菌、抗氧化、降胆固醇、免疫调节之外还对人类营养有调节作用,因而受到广泛关注。本文综述了生物活性肽的种类、生理功能、吸收、制备研究进展,以期为生物活性肽的进一步研究和应用提供参考。 关键词：生物活性肽，生理活性，吸收 Research and progress of biological active peptide Abstract:Bioactive peptides as one rich sources, wide variety, good functional life factors have been a global research hot spot. Studies have shown that these peptides have some conventional biological activities, such as increase mineral absorption, adjust blood pressure, antibacterial, antioxidant, decrease cholesterol, regulate immune. What’s more, they also have a regulating effect on human nutrition, so they have attracted widely attention. The kinds of bioactive peptides was reviewed in this paper, preparation research progress of physiological function, absorption and biological active peptide in order to provide reference for further research and application. Key words:Biological active peptide, Physiological activity, Absorb 1.功能肽的简介 肽(peptides)是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,是蛋白质的结构与功能片段,并使蛋白质具有数以千万计的生理功能。肽本身也具有很强的生物活性。是由蛋白质中20种天然氨基酸以不同的组合和排列的方式构成的，从二肽到复杂的线性或者环状的多肽的总成。一般说来,肽链上氨基酸数目在10个以内的叫寡肽,10～50个的叫多肽,50个以上的叫蛋白质。人们习惯上也把寡肽中的二、三肽称为小肽。由于构成肽的氨基酸种类、数目与排列顺序的不同,决定了肽纷繁复杂的结构与功能。 生物活性肽( biologically active peptide/ bioactive peptide/ biopeptide) 是指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物,又称功能肽(functional peptide)[1]。肽由氨基酸组成,人体存在20 种氨基酸,由不同的氨基酸的种类排列,加上数量排列形成,再加上还可能有的二级、三级结构,其种类是十分庞大的[2,3]。每一种活性肽都具有独特的组成结构,不同活性肽的组成结构决定了其功能。此外活性肽在生物体内的含量是很微量的,但却具有显著的生理活性。据研究,有些多肽在10 - 7mol/ L 的浓度时仍具有生理活性,就是说1 mL 的多肽用60 倍水稀释后,仍然具有生理功能。功能肽是源于蛋白质的多功能化合物，是多样化且来源充足的食品原料，具有多种人体代谢和生理调节功能，如易消化吸收、促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等[4] 现代营养学研究发现，人体摄入蛋白质经消化道中的酶作用后，大部分是以寡肽的形式
抗氧化活性测定方法的比较
抗氧化活性测定方法的比较 人体衰老和多种疾病均与自由基有关，寻找天然抗氧化剂具有重要意义。黄酮、多糖、多肽、酚类等生物活性成分均具有抗氧化活性，抗氧化活性的筛选方法可分为体外和体内2种测试体系。 体外：抗氧化活性可以用在特定条件下，样品对检测体系中自由基的清除能力、抗油脂过氧化能力及样品的还原能力、总抗氧化能力等来衡量和表征。常用的方法有羟基自由基（·OH）清除能力法、1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH法）、2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐（ABTS 法）、超氧阴离子自由基法（O2-·）、邻苯三酚自氧化法、β-胡萝卜素漂白法、硫代巴比妥酸法、铁离子还原能力测定（FRAP法）、总酚测定法、ORAC法等方法。体内：主要有DNA氧化损伤法、蛋白质氧化损伤法、线粒体氧化损伤法。 其中DPPH法和ABTS法操作较简单便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外分光光度测量值后计算其自由基清除率，缺点是不同物质具有组成和结构的差异，与DPPH·、ABTS+·的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断，且DPPH自由基会和其他自由基发生反应。邻苯三酚自氧化法缺点是检测波长、缓冲液的组成及ｐＨ值、邻苯三酚浓度等关键测定条件存在
着较大差异。β-胡萝卜素漂白法的缺点是β-胡萝卜素本身有抗氧化活性，对样品活性的测定结果有影响。FRAP法主要用于食品业，优点是简单易操作、可以重复，缺点是无法测定硫醇化合物的还原能力。ORAC法是国际上通用的评价食品氧化的标准方法，缺点是仪器成分较复杂，检测成本较高。 目前普遍使用的体外抗氧化活性指标一般都采用分光光度法，使用分光光度计测量各种颜色成分含量的变化。分光光度法操作较简单、便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外-可见分光光度测量值后计算其活性大小，具有成本低、效率高、样品量少等优点。分光光度法缺点是会受到样本自身颜色和浑浊度的影响和限制，颜色深的样品测得的数据误差大，甚至得到错误的结果；不同物质组成和结构存在差异，与各种自由基的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断。外界环境因素对实验结果也存在一定程度的影响，有些抗氧化活性实验在冬天低温时不易成功，测得的数据往往没有规律。 我觉得在测定样品的抗氧化活性时，各种方法都有自己的优缺点，要根据需测物质来决定用什么方法，比如DPPH 法的自由基选择性强，不和只有一个羟基的芳香酸、无羟基的类黄酮反应，这类物质需用其他方法测定。若对检测结果
菊花提取物的抗氧化活性研究
！：：：：：：＝＝：＝：２：：！垒曼型兰！蚤茎熊匹塞 菊花提取物的抗氧化活性研究 张尔贤方黎张捷俞丽君肖湘汕头大学理学院生物学系汕头５１５０６３摘要通过菊花提取物对Ｆｅ２＋诱发卵黄脂蛋白ＰｕＦＡ过氧化体系、ＴＢＡｓ生成体系和邻苯三酚一Ｌ吼ｉｎ。ｌ发光体 系的抑制作用，研究了菊花的不同提取物的抗氧化活性。结果表明．菊花黄酮类化合物有清除?ｏＨ、０?：的能力， 且有着较强的抗氧化活性，并且发现菊花抗氧化活性与黄酮类化合物含量相关。 关键词菊花黄酮类化合物抗氧化活性脂质过氧化硫代巴比妥酸反应物 ＡｂｓｔｒａｃｔＡｓｔＩｌｄ”ｖａｓｃａｒｒｉｅｄｏｎａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｔｉｖｏａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＦｌｏｓｃｈｒｙｓａｎｔｌｌｅｍｕｍｅｘｔｒａｃｔＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｅｘｔｒａｃｔｗａｓ允】Ｉ ｏｔ、ｎａＶｏｎｅｓＳ０ｍｅｐｒｅｃｃｓｓｃｓｔｏｅｘｔｒａｃＩａａｖＯｎｅｓ打Ｏｍｃｈｌ）％ａｎｔｈｅｍｕｍｆｏｒｓｃａｖｅｎｇｉｎｇａｃｔｉｖｃｏｘｙｇｅｎｒａｄｉｃａｌｗｅｒｅｒｅｐｏｒｃｅｄ１兀 【ｈｌｓｐ印ｃｒＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｎａｖｏｎｅｓｃｏｕｌｄｓｃａｖｅｎｇｅ?ＯＨ、Ｏ＝２ａｎｄａｆ诧ｃｔｔｈｃａｎｔｉ．ｏｘｊｄａｔｉｖｅ ａｃｔｎ７Ｉｔｙ ＫｅｙｗｏｒｄｓＦｌｏｓＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍＡｎ“Ｏ一０ｘｉｄａｔｉｖｅＦＪａｖｏｎｅｓＯｘｙ鼬ｎｒａｄｉｃａｌ 菊花是菊科植物菊（ｃｈｒｙ８ａｎｃｈｅｍｕｍｍｏｒｉｆ０１ｉｕｍＲａｍａｔ）的头状花序．为多年生草本，在我国大部分地区有栽培。传统医学认为菊花的功效包括清热、明目、解毒，治疗头疼、眩晕、心胸烦热、疗疮等作用，民间更以饮用菊花水来解暑热。菊花含黄酮类化合物，本研究通过对菊花的抗氧化作用的初步研究．为进一步开发菊花的保健效用提供理论依据。 １材料与方法 二．二材料、试剂与仪器 千杭自菊：购于市场．绞碎备用。 卵黄悬液：新鲜鸡蛋去卵清，卵黄用等体积的ｐＨ７．４５，ｏ二＿。一，Ｌ磷酸钠缓冲液（ＰＢｓ）配成１：ｉ的悬液，磁力搅拌１０ｍ址再用ｐＢｓ稀释成１：２５的悬液（置于冰箱中备用）。 次黄嘌呤【Ｆｌｕｋａ公司）、黄嘌呤氧化酶（酶活力５ｕ，ｍｌ，广卅１军事医学研究所）、２一脱氧一Ｄ核糖（ｆｅｉｎｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ二ｅ二。÷一。ｅｒｇ，ｎｅｗｙｏｒｋ）、硫代巴比妥酸（生化试剂，上海试剂二厂。 ７５ｉ—Ｇｗ型分光光度计（上海分析仪器厂）、ＧＨＧ—ｃ型生物化学发光测量仪（上海市检测技术所检测仪器厂）、ＤＧＪｏ．５一Ｉ｜冷冻干燥机（军事医学科学院实验仪器厂）、旋转蒸发器（Ｒｏ＝ｊｒｙＥｖａｐｏｒａｔｏｒＲＥ一４７，ＹＡＭＡＴ０ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣｃ。，二二ｄＴｏｋｙ。，Ｊａｐａｎ）、ＢｅｃｋｍａｎＪ２—２１Ｍ高速冷冻离心机３ｅ：息ａｎ，ＵＳＡ）。 ：：方法 二．：二提取工艺。１。’ 干菊花绞碎，加入１５倍体积７ｏ％乙醇热浸提１２ｈ．抽滤，滤渣用热水冲洗，滤液减压浓缩．蒸去乙醇，３ｏｏｏｒ／ｍｉｎ离心：ｏ－二ｊ上清液保存待用（样品Ｉ）。取一定量样品Ｉ，用２倍 体积１００％的正丁醇萃取２次，萃取液蒸干溶剂，再用水定容，得样品ＩＩ。取一定量样品Ｉ，用２倍体积１００％的乙酸乙酯。萃取２次．萃取液蒸干溶剂，再用水定容，得样品ＩＩＩ。取一定量样品Ｉ，用２倍体积１００≈的氯仿，萃取２次．萃取液薰干溶剂，再用水定容，得样品Ⅳ。 干菊花绞碎，１５倍体积水直接浸提１２ｈ，低温浓缩获得样品Ｖ（作为对照）。 １．２．２Ｆｅｎ诱发卵黄脂蛋白ＰＵＦＡ过氧化体系…。 选用１：２５的卵黄悬液吸取ｏ．２ｍｌ，加入一定量的样品．加入ｏ，２ｍｌＦｅｓｏ．２５衄ｏｌ／Ｌ，用ｐＨ７．４，ｏ１ｍｏｌ／Ｌ的ＰＢｓ补充至２ｍ！，３７℃振荡１５ｍｉｎ，取出后加人ｏ．５ｍｌ三氧乙酸（简写ＴｃＡ），３５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，吸取２ｍｌ上清液加入ｌｍｌ硫代巴比妥酸（简写ＴＢＡ）．加塞，放人沸水浴中１５ｍｉｎ，冷却后，于５３２ｎｍ处比色测出吸光度（Ａ）值：以不加样品管的吸光度为（Ａ．）。样品抗氧化活性（ＡｏＡ）用对卵黄脂蛋白ＬＰｏ的抑制率表示： ＡＯＡ（％）＝（Ａ０一Ａ）／Ａ。×１００％ １．２．３Ｆｅ“次黄嘌呤一黄嘌呤氧化酶一ＴＢＡｓ生成体系ｎ４加样顺序为：Ｆｅｓｏ．（２ｍｍ。１，Ｌ）ｏ．０４ｍｌ、黄嘌呤氧化酶（简写：ｘｏ）（５ｕ／ｍ１）３．５ｕｌ、脱氧核糖（３０ｍｍ０１，Ｌ）ｏ２ｍｌ、ＥＤＴＡ（５吼ｏｌ，Ｌ）Ｏ．０４ｍ１、Ｈ２０２（１７．６黝ｏｌ，Ｌ）ｏ０１ｍｌ、加入ｏ．１ｍｌ样品、ｐＨ７．４ＰＢｓ（Ｏ．１５ｍｏｌ／Ｌ）１．４８ｍｌ、次黄嘌呤（简写：ｘ）（２ｍｏｌ／Ｌ）ｏ．２ｍｌ总体积为２ｍｌ（除ＰＢｓ、Ｆｅ∞．用重蒸水配制外．其它试剂均用ｐＨ７．４ＰＢｓｏ．１５ｍｏｌ／Ｌ配制）。然后，３５℃温浴１５ｍｉｍ．取ｌｍｌ反应液加１％ｗ／ｖＴＢＡ（ＮａｏＨｏ０５ｍｏｌ／Ｌ配制）及冰醋酸ｌｍｌ，混匀后放人沸水浴３０ｍｉｎ，冷却。在５３２ｎｍ处测其吸光度Ａ，以不加样品管的吸光度为ｋ：清除活性以抑制ＴＢＡｓ生成量Ａｓ３２ｎ。值的抑制百分率表示即（Ａ。一Ａ）／Ａ。×ｌｏｏ％。１．２．４超氧阴离子的邻苯三酚“ｕＩｎｉｎ。ｌ发光体系 万方数据
活性肽的神奇功效
小分子活性肽的神奇功效 经研究表明，小分子活性肽辅以多种维生素和复合微量元素可诱导和促进T淋巴细胞分化、成熟；调节T淋巴细胞群比例，使CD4/CD8趋于正常。同时，增强巨噬细胞的吞噬能力和红细胞免疫功能。可显着增加淋巴细胞功能，并能有效地防止辐射和放化疗及其他污染中毒后白细胞数量的减少，有效地抑制肿瘤细胞生长，起到改善免疫功能的作用。从间接作用而言，小分子活性肽可促使粪便排泄，降低血清胆固醇浓度，使甾醇排泄增加和肝脏高胆固醇浓度下降，对治疗原发性高血压有一定的功效。能抑制脂肪的积蓄，抑制有害菌，排除毒素，促进其对食物营养的消化吸收，以提高人体对药物有效成分的吸收，具有很高的生理活性，人们经常食用小分子活性肽，在强身保健方面有如下功效： 1、主动吸收，迅速恢复体能 肽是蛋白质与氨基酸的中间物质，由数个氨基酸结合而成。分子大小介于蛋白质与氨基酸之间。但是，比氨基酸分子大的肽在人体内被吸收的速度反而比氨基酸更快，原因就在于：小分子活性肽是数个氨基酸分子集中起来被整体吸收，而氨基酸需要一个一个地
被吸收，小分子活性肽能比氨基酸更迅速地被人体吸收。 在恢复体力方面，小分子活性肽也发挥着优异的功效。人体在进行激烈运动时，为了补给能量就需要消耗肌肉中的氨基酸。就是说，身体需要能量的时候就会从肌肉中获取。肌肉中的氨基酸被消耗掉后，肌肉组织就会受到损伤、肌肉产生疲劳感、难以发挥原有的力量。服用小分子活性肽3分钟进入血液，5分 钟转换为体能，在运动前、运动中补给活性肽可以给身体提供充足的能量，能够抑制肌肉力量的下降、长时间维持充沛的体力。 2、消除疲劳 疲劳是由大脑感知的。当人体感到疲劳的时候，疲劳的机体部位向大脑发出疲劳信息，于是人就感到疲劳。从这个意义上说，感知疲劳的中心就在大脑里。如果没有疲劳这种生理反应，我们就会无休止的劳动下去，直至死亡。 大脑疲劳是由氧化血红蛋白浓度的上升引起的，服用小分子活性肽可以抑制氧化血红蛋白浓度的上升，因而能够缓和大脑的精神压力，使人在学习时保持沉着冷静、清醒的记忆，能够减轻工作造成的大脑疲劳。
抗氧化性方法
取0.2mL 甲醇，加入0.3 mL样品溶液（浓度50-800ug/mL ,甲醇配制），混匀，加入2.5mL 75uM DPPH（甲醇溶解）溶液，室温放置30min ,于517nm处测吸光值。 清除率=[A0-（A-A b）/A0]×100% A0：不加入样品，DPPH吸光值（对照） A：样品和DPPH吸光值 A b：样品，不加DPPH吸光值 2 O2-· PMS吩嗪硫酸甲酯 NADH 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 NBT氯化硝基四氮唑蓝 0.1mL 样品溶液，加入1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)---78uM NADH, 1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)- --10uM PMS ，1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)- --50uM NBT, 25min保温5 min后于560 nm 处吸 光值。清除率=（1-A 样品/A 对照 ）×100%。 3 邻苯三酚自氧化 0.1mL 样品溶液，加入2.8mL 0.05M Tris-HCl (pH 8.0)---1mM EDTA,加入0.2mL 6mM 邻苯三酚。室温迅速振摇，于325nm处每30s 测吸光值至4min。 清除率=（1-样品斜率/对照斜率）×100% 4 FRAP reagent： 10体积300 mmol/L pH3.6醋酸缓冲液,1体积10 mmol/L TPTZ---40 mmol/L HCl 溶液，1体积20mmol/L FeCl3. 1.5mL 新配制FRAP reagent加热至37℃,于593 nm处测空白吸光值。然后加入50uL 样品溶液和150uL去离子水。8min后测吸光值。 FRAP值=A样品-A空白 2.1 清除羟基自由基（HPLC法） 2.1.1色谱条件 色谱柱：Angilent HC-C18柱（(4.6×250mm，5um); 流动相：甲醇：0.1% H3PO4=30:70;流速： 1ml/min;柱温：35℃；紫外检测波长：254nm;进样量：20ul。
植物源活性肽研究进展
植物源生物活性肽的研究进展 多肽是由天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，其中可调节生物体生理功能的多肽称为生物活性肽。与蛋白质相比，活性肽不仅有比蛋白质更好的消化吸收性能，还具有促进免疫、调节激素、抗菌、抗病毒、降血压和降血脂等生理机能。此外活性肽还有较好的酸、热稳定性，水溶性及粘度随浓度变化迟钝等优点，易于作为功能因子添加到各种食品中。我国农作物种类品种繁多，利用这些廉价的植物蛋白开发具有高附加值的生物活性肽产品，越来越受到重视。本文重点综述了降血压肽、抗氧化钛、降胆固醇肽这3类生物活性肽的研究进展，将其结构特征与生理功能的关系进行了归纳，同时归纳了活性肽的生理功能，并指出其发展应用前景。 1. 生物活性肽的生理功能 1.1 抗菌活性 抗菌活性肽通常由细菌、真菌产生，或从动植物体中分离。它们尽管在结构上千差万别，但几乎所有的抗菌肽都是阳离子型的，两亲结构是它们的共同特征[1]。国内外研究成果表明，抗菌肽对部分细菌、真菌、原虫、病毒及癌细胞等均具有强大的杀伤作用。临床试验也表明，抗菌肽能够增强机体抵抗病原微生物的能力，而且在体内还不容易产生耐药性。 1.2 免疫活性[2] 免疫活性肽能够刺激机体淋巴细胞的增殖，增强巨噬细胞的吞噬功能，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率。从人乳和牛乳的酪蛋白中已检测到具有免疫刺激活性的肽片段，这些肽具有刺激巨噬细胞吞噬能力的作用。另外，乳蛋白、大豆蛋白和大米蛋白等通过适当酶解处理也可产生具有免疫 活性的肽类物质。 1.3 抗高血压活性 血压是在血管紧张素转换酶（angiotensin-convertion enzyme，ACE）的作用下进行调节的，血管紧张素Ⅰ在A C E的作用下可转化为有活性的血管紧张素Ⅱ，使血管平滑肌收缩，引起血压升高。降血压肽是具有抑制ACE活性的肽类， 来源广泛，ACE 抑制肽的主要来源是乳制品和鱼蛋白（沙丁鱼、金枪鱼、
多酚抗氧化性的研究进展(张云丽)
植物多酚抗氧化性的研究进展及其运用 摘要：植物多酚( 植物单宁) 是一类广泛存在于植物体内的重要的天然产物，叙述了多酚的抗氧化性及多酚在国内外食品工业、医药保健、日用化学品等方面的应用现状, 展望了多酚在国际市场上的广阔前景。 关键词: 植物多酚；抗氧化性； 植物多酚（Plant polyphenol）又名植物单宁（Vegetable tannin），为植物体内的复杂酚类次生代谢物，具有多元酚结构，主要存在于植物的皮、根、叶、果中，在植物中的含量仅次于纤维素、半纤维素和木质素。植物多酚(polyphenol)是多羟基苯，如苯二酚、苯三酚等。植物多酚是在植物性食物中发现的、具有潜在促进健康作用的化合物。由于其羟基取代的高反应性和吞噬自由基的能力而具有很好的抗氧化活性【1】酚类化合物是众所周知的抗氧化剂。主要有黄酮类、多 酚类、多糖类和维生素类等。近年来研究发现，一些农业、食品工业副产品（如茶叶、花生壳、柑橘类果皮、果汁残渣等）的提取物中也含有丰富的多酚类物质，其中有些提取物中多酚含量很高。因此来自农业和食品工业副产品的植物多酚将成为保健食品、医药、化妆品等行业的重点开发研究对象【2-3】。 一、植物多酚研究利用的化学基础 人类最初对植物中所含多酚类化合物的利用, 是将其用于鞣制皮革, 并将这类化合物称为植物单宁( vegetable tannins)。按照White和Bate-Smith 的定义, 植物单宁是指分子量在500—3000 范围内的具有鞣性的多元酚。1981年,Haslam 提出了植物多酚这一术语,它包括单宁及相关化合物( 如单宁的前体化合物和单宁的聚合物)。这一名称能更全面地概括这类天然产物的特点, 也符合各学科领域的实际研究情况,因而被人们广泛采用。植物多酚的化学研究始于18世纪末。其结构复杂, 化学性质活泼,并且常以大量性质相似的同系物的混合物形式存在, 因此本世纪30 年代以前,多酚化学的进展一直非常缓慢。植物多酚的科学分类方法直到1920 年才由Freudenberg 提出,即根据化学结构不同,植物多酚分为水解单宁( 酸酯类多酚) 和缩合单宁( 黄烷醇类多酚或原花色素)。前者主要是酸及其衍生物与多元醇以酯键或甙键形成,可细分为单宁和鞣花单宁两类。后者主要是羟基黄烷醇类单体的缩合物, 单体间以C—C 键相连如图1所示。[4]
抗氧化剂抗氧化活性的测定方法
1.抗氧化剂是指在低浓度下能有效延缓或阻止底物氧化的物质。被氧化的底物包括蛋白质、脂质、糖和DNA。 2.初始型抗氧化剂(AH)可通过与脂质自由基L.、过氧自由基LOO.或烷氧自由基LO.反应抑制脂质氧化链反应。 L.+ AH--- LH + A. LOO.+ AH--- LOOH + A. LO.+ AH--- LOH + A. 抗氧化剂自由基A.也能与过氧自由基、烷氧自由基反应从而终止脂质氧化反应。 LOO.+ A.---LOOA LO.+ A.---LOA 次级型抗氧化剂可通过各种机理延缓脂质氧化,如螯合过渡金属、给初始型抗氧化剂补充氢、清除氧以及使活性物质失活等。 抗氧化剂的活性分为在生物体外(如食品中)的活性和在生物体内的活性。本文综述了体外测定抗氧化剂抗氧化活性的方法,不包括在生物体中测定生物活性的方法。 3.评价或表征抗氧化活性的方法为了说明在特定条件下被测物抑制底物氧化的效力或清除自由基的能力 实际测定时至少要说明在测试条件下被测物是抗氧化剂还是促氧化剂;在指定浓度下比较不同测试材料(如被测物与标准抗氧化剂或添加有被测物的测试体系与空白体系)对底物的作用。 评价或表征抗氧化活性的方法有: (1)在指定的时间测量氧化产物或官能团的浓度或吸光度值;( 2)测量反应的速率;
( 3)测量诱导期(延滞期)或氧化达到一定程度所需的时间;( 4)测量速度的积分(即动力学曲线下的面积) ; ( 5)测量被测物产生与标准抗氧化剂相当作用的浓度。4.参数 4.1诱导期( induction period) 诱导期tIND(也叫延滞期, lag period)常定义为化学反应的速度。诱导期是一个相当不确定的值,受检测方法、使用仪器的灵敏性以及一些其他因素的影响。对于脂质氧化,诱导期通常是指链增长阶段动力学曲线的切线和时间轴的交点。 4.2抑制率( percentag e of inhibition)和IC50 抑制率和IC50 (抗氧化剂提供50%抑制作用时的浓度,也可用EC50表示的)常用来表征抗氧化能力。它们不仅与被测抗氧化剂的反应性能和氧化的底物有关,而且受其他因素的影响,如脂质氧化链反应的长度和抑制速率等。此外,用IC50表征抗氧化剂 的活性与比较活性的时间点有关。只有在其他参数相同的情况下,在某一研究中测得的抑制率和IC50才可以与另一研究中测得的值进行直接比较。TEC50是指抗氧化剂提供50%抑制作用所需的时间,也常用来表征抗氧化活性 5.对测定方法的要求 测定抗氧化剂抗氧化活性的方法应满足如下要 求: ( 1)能说明测试体系中发生的反应,并能用明确的动力学图解描述;( 2)测试要有再现性; ( 3)测试效率要足够高; ( 4)方法要相对简单; ( 5)能连续检测; ( 6)应使用与体内或食品有关的活性自由基;
我们常见的有抗氧化成分植物的比较有哪几种
我们常见的有抗氧化成分植物的比较有哪几种？ 生活中大家都喜欢养生，保持年轻，通过食物（如植物提取物）来达到这个抗氧化的目的，那抗氧化到底是怎么来的呢？下面我们来比较一下。 一种比较是几种植物提取物不同的检验，在检测试验中抗氧化活性差异,采用ABTS法、FRAP法、β-胡萝卜素漂白法、鱼油氧化体系中的TBARS法以及对总酚含量的测定,评估了松树皮、葡萄籽、绿茶、蓝莓、苹果和丹参提取物的抗氧化活性.结果发现,无论是总酚含量,还是单一因素清除测得的抗氧化性活性(ABTS法,FRAP法),与在复杂的脂肪酸或真实食品体系中生成的氧化产物(β-胡萝卜素漂白法,TBARS法)的抑制能力的相关性较差.因此,植物提取物的抗氧化活性需要结合不同的检测方法进行综合评价，才能达到更好的结果。 另一种比较分析3种金花茶植物提取液的抗氧化活性。方法：通过测定过氧化值（POV）、羟自由基（.OH）清除率、超氧阴离子自由基（O2.-）清除率、DPPH.清除能力和还原能力来综合考察3种金花茶植物提取液的抗氧化活性。结果：3种金花茶提取液的抗氧化活性实验效果理想,且呈量效关系,毛瓣金花茶提取液的抗氧化活性较其他2种为好。结论：3种金花茶提取液具有良好的抗氧化活性,具有较高的开发利用价值。 而生姜根、番石榴叶、番石榴籽、橙皮、芝麻种皮、米糠和小麦胚芽等植物提取物的抗氧化活性和热稳定性.方法比较了乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、正己烷和石油醚等不同溶剂提取物的抗氧化活性,分别采用Fo-lin-Ciocalteu法和三氯化铝比色法测定不同植物提取物的总多酚和总黄酮量,并进一步通过加热处理和Rancimat法研究了巴科医药植物提取物的热稳定性和对葵花籽油的诱导时间.结果生姜根的石油醚提取物具有最高的抗氧化活性,生姜根、橙皮、番石榴叶的提取物具有超过α-生育酚的抗氧化活性.不同植物提取物的抗氧化活性与它的总多酚和总黄酮量呈显著正相关.生姜根、番石榴叶和芝麻种皮显示比α-生育酚更好的热稳定性,而抗氧化性与α-生育酚类似.结论生姜根、番石榴叶和芝麻种皮可作为潜在的天然抗氧化剂来源,应用于食品和医药工业中。
生物活性肽的应用综述
生物活性肽的功能和应用研究 摘要：生物活性肽(bioactive peptides)是指具有生物活性的多肽, 是指对生物体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物。本文主要介绍目前主要的一些生物活性肽的生理功能及应用研究，介绍生物活性肽在食品中一些简单的应用。简单展望一下生物活性肽以后的研究进展。 关键词：生物活性肽；功能；应用； 生物活性肽(bioactive peptides)是指具有生物活性的多肽, 是指对生物体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物。它是一类由20种天然氨基酸以不同的组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同的肽类的总称。生物肽与蛋白质没有本质的区别，但又不同于蛋白质，比蛋白质校、生理活性强。根据肽链上氨基酸的数目，通常把具有2~10个氨基酸、分子量<2000Dalton的肽成为寡肽(oligpeptide)，讲氨基酸数目10~50个、分子量2000~10000Dalton的称为多肽（polypeptide）。 这些活性肽小到只有2个氨基酸的双肽,也可以大到复杂的长链或环状多肽,而且常经过糖苷化、磷酸化或酰化衍生,在细胞生理及代谢功能的调节上具有重要的作用,这些调节作用几乎涉及到人体所有的生理活动,如神经系统、消化系统、循环系统、内分泌系统等。不仅如此,其中许多活性肽还具有原蛋白质或其组成氨基酸所没有的新功能。特别是以数个氨基酸结合生成的低聚肽不仅有比蛋白质更好的消化吸收性能,还具有促进免疫、调节激素、抗菌、抗病毒、降血压和降血脂等生理机能,食用安全性极高。目前人们认同的活性肽的定义是对肌体构成一套高度自动化的物质,是沟通细胞间、血管间联系的信使,为外分泌、内分泌、神经系统行使传递功能,从而使肌体组成了高度严密的系统,促使生物体生长、发育、繁殖正常进行。 生物活性肽的生理功能 1.1抗高血压活性 血管紧张素转化酶(ACE)在血压调节过程中起着非常重要的作用。人体的肾脏可以分泌肾素,作用于血管紧张素释放出无活性的血管紧张素Ⅰ。ACE可以从无活性的血管紧张素Ⅰ的C-末端水解掉2个氨基酸,形成有活性的血管紧张素Ⅱ。血管紧张素Ⅱ是已知最强的缩血管物之一,可以导致血管收缩,引发高血压。同时ACE可水解血管舒缓激肽使其失活,而血管舒缓激肽可以舒张血管、使血压降低。因此ACE在肾素-血管紧张素目前主要的活性肽及其应用体系、血管舒缓素-激肽体系中起着重要的作用。已知抗高血压肽大致上有4种来源:来自乳蛋白的肽类;来自酸奶的肽类;来自鱼贝类(沙丁鱼、金枪鱼)的肽类;来自植物的肽类(玉米醇溶蛋白、无花果)等。 1.2抗菌活性 1972年,瑞典科学家在果蝇中首次发现抗菌肽,随后得到第1个真正意义上的抗菌肽天蚕素(cecropins)。后来科学家们在昆虫、被囊动物、两栖动物、鸟类、鱼类、哺乳动物、植物乃至人等多种生物体内发现了至少800多种抗菌肽,并且某些抗菌肽在临床应用中已取得良好的疗效,如Oren等从豹鳎中分离得到一种33肽的抗菌肽,具有比蜂毒素更强的抗菌活性,其抑菌机理是溶解细菌的细
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法（倾向于考虑DPPH法和ORAC法） 1.FRAP法:铁离子还原抗氧化能力测定法[1] FRAP(ferric ion reducing antioxidant power)方法，在低pH值的溶液中， Fe3+-TPTz(Fe3+-三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成有色的Fe2+-TPTZ。反应的结果常以Fe2+当量或标准物质的抗氧化能力表示。 该法快速简便、易于操作、重复性好，但FRAP反应属于电子转移(SET)反应，因此FRAP方法不能够测定氢转移反应(HAT)起作用的物质。而且该法实际测定的是待测生物活性物质将Fe3+还原为Fe2+的能力，因此没有抗氧化能力的生物学相关性。 2.TEAC法(trolox equivalent antioxidant capacity) ABTS(2,2'-amino-di(2-ethyl-benzothiazoline sulphonic acid-6)ammonium salt,2,2'氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6)铵盐)与过氧化物酶和氢过氧化物在一起形成ABTS+阳离子自由基。在抗氧化剂存在时，这种自由基混合物的光吸收值下降，下降程度取决于抗氧化剂的抗氧化能力，测得的结果以TEAC表示，即被测抗氧化剂清除ABTS·+的能力(吸光度大小的变化)与标准抗氧化剂trolox(VE的水溶性类似物)清除ABTS·+的能力的比值。 TEAC法十分简单，适用于大量样品的分析检测。但是，ABTS·+并非生理自由基，缺乏生理相关性，而且与FRAP方法相似，ABTS·+与不同抗氧化剂问的氧化反应时间不同，因此，只能定性不能定量评价样品的抗氧化能力。 3.DPPH法[2，3](2，2-diphenyt-l-picrylhydrazyl radical scavenging capacity) DPPH·(二苯代苦味肼基自由基)法是较常用的方法之一。DPPH·是一种稳定的以氮为中心的自由基，其醇溶液呈深紫色,在517nm 处有一吸收峰。当反应系统中存在自由基清除剂时，它可以和DPPH·的单电子配对而使517nm 处的吸收峰渐渐消退。而且，这种颜色变浅的程度与配对电子数成化学计量关系。因此，根据吸光度的变化可测得抗氧化剂的活性。通过计算DPPH自由基剩余一半时所需抗氧化剂的浓度(EC50)以及时间(TEC50)反应抗氧化物的活性。 DPPH法快速、简单，仅需要一台紫外分光光度计就可以测定，但DPPH方法存在的不足是，当被测物与DPPH紫外吸收有重叠时，将会影响测定结果，比如类胡萝卜素。此外，由于空间位阻决定反应的倾向，小分子化合物由于更易接近自由基而拥有相对较高的抗氧化能力。此外该方法线性范围也相对较窄，而且所有还原剂都能够对DPPH起作用，因此结果并不能完全代表抗氧化能力。