液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因
气相色谱峰拖尾、响应低甚至不出峰的主要原因
A) 系统污染、惰性下降
系统惰性不好对活性组分峰形及响应的影响尤为明显。建议选用惰性优异的低流失色谱
柱和色谱耗件，如去活的衬管。如果系统已经被污染，应及时对进样口和检测器进行维护。恢复被污染色谱柱的方法主要有：
将进样口端截去0.5~1 米，根据样品来源做进一步的判断，如果是半挥发污染物，还可以进一步考虑对色谱柱进行老化。污染严重时可截去更长或用溶剂彻底清洗色谱柱（必需是交联键合固定相）
B) 色谱柱安装不正确或系统其他部位存在死体积
毛细管柱在进样口和检测器的安装位置不当将影响峰形，请严格按照仪器的使用说明正
确安装色谱柱。其他与毛细管柱相连接的部位也应注意降低死体积。
C) 系统漏气
需定期检查系统气密性、更换进样口备件。使用非纯石墨密封圈时，注意安装后的几次温度升降之后追加一次拧紧。
D) 方法条件不佳
对于低挥发性样品，需注意提高进样口和/或检测器、色谱柱、传输管线等处的温度，防止冷凝现象。
有些样品在某些检测器的响应确实不高（甚至没有响应），如果样品不出峰，又没有参考响应值，应加大进样量确认出峰位置，并利用标样考查样品的响应值。
E) 其他可能导致峰拖尾的原因：
2不分流模式下，分流放空阀开启过晚（通常应在0.5~1.0 分钟之间）
2手动进样速度过慢
2检测器尾吹气流量不足
2 PLOT 色谱柱样品过载
2组分共流出
2
含磷化合物在NPD 白色铷珠上易拖尾，建议使用黑色铷珠。
可以提高传质速率，提高柱效，但柱温过高又会使组分间分离度减小。采用较低的柱温，减少固定相的用量和适当增加载气的流速，可在短时间内获得良好的分离效果；
2汽化温度应以能使试样迅速汽化而不产生分解为准，通常比柱温高20-70℃，柱温应比试样中各组分的平均沸点低20-30℃, 对于沸点范围较宽的试样，宜采用程序升温；增加柱长会提高分离度，但分析时间增长，因此，一般在满足一定分离度的条件下尽可能用短柱子；进样应在1秒以内完成，以减小峰变宽；
3点火
氢焰气相色谱仪,开机时需要点火,有时因各种原因致使熄火后,也需要点火。然而,我们经常会遇到点火不着的情况。下面介绍两种点火技巧
3.1加大氢气流量法
先加大氢气流量,点着火后,再缓慢调回工作状况。此法通用。
3.2减少尾吹气流量法
先减少尾吹气流量,点着火后,再调回工作状况。此法适用于仍用氢气作载气,用空气作助燃气和尾吹气情况。
4气比的调节
氢焰气相色谱仪三气的流量比,有关资料均建议为:氮气∶氢气∶空气= 1∶1∶10 。但由于转子流量计指示流量的不准确性,事实上谁会去苛求这个配比呢? 本人认为,为各气施以良
好匹配、目的是既有高的检测器灵敏度又能有较好的分离效果,还不容易熄火。
4.1氮气流量的调节
在色谱柱条件确定后,样品组分分离效果的好坏,氮气的流量大小是决定因素。调节氮气流量时,要进样观察组分分离情况,直至氮气流量尽可能大且样品组分有较好分离为止。
4.2氢气和空气流量的调节
氢气和空气流量的调节效果,可以用基流的大小来检验。先调节氢气流量,使之约等于氮气的流量,再调节空气流量。在调节空气流量时,要观察基流的改变情况。只要基流在增加,仍应相向调节,直至基流不再增加不止。最后,再将氢气流量上调少许。
5进样技术
在气相色谱分析中,一般是采用注射器或六通阀门进样。在考虑进样技术的时候,主要是以注射器进样为对象。
5.1进样量
进样量与气化温度、柱容量和仪器的线性响应范围等因素有关,也即进样量应控制在能瞬间气化,达到规定分离要求和线性响应的允许范围之内。填充柱冲洗法的瞬间进样量:液体样品或固体样品溶液一般为0.01～10μl ,气体样品一般为011～10ml ,在定量分析中,应注意进样量读数准确。
(1) 排除注射器里所有的空气
用微量注射器抽取液体样品进,只要重复地把液体抽入注射器又迅速把其排回样品瓶,就可做到这一点。
还有一种更好的方法,可以排除注射器里所有的空气。那就是用计划注射量的约2 倍的样品置换注射器3～5 次,每次取到样品后,垂直拿起注射器,针尖朝上。任何依然留在注射器里的空气都应当跑到针管顶部。推进注射器塞子,空气就会被排掉。
(2) 保证进样量的准确
用经置换过的注射器取约计划进样量 2 倍左右的样品,垂直拿起注射器,针尖朝上,让针穿过一层纱布,这样可用纱布吸收从针尖排出的液体。推进注射器塞子,直到读出所需要的数值。用纱布擦干针尖。至此准确的液体体积已经测得,需要再抽若于空气到注射器里。如果不慎推动柱塞,空气可以保护液体使之不被排走。
5.2进样方法
双手拿注射器。用一只手(通常是左手) 反针插入垫片,注射大体积样品(即气体样品) 或输入压力极高时,要防止从气相色谱仪来的压力把柱塞弹出(用右手的大拇指) 。
让针尖穿过垫片尽可能深的进入进样口,压下柱塞停留1～2 秒钟,然后尽可能快而稳地抽出针尖(继续压住柱塞) 。
5.3进样时间
进样时间长短对柱效率影响很大。若进样时间过长,遇使色谱区域加宽而降低柱效率。因此,对于冲洗法色谱而言,进样时间越短越好,一般必须小于1 秒钟。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因
A、峰拖尾
1、筛板阻塞（a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱）
2、色谱柱塌陷（填充色谱柱）
3、干扰峰（a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱）
4、流动相PH选择错误（调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰）
5、样品与填料表面的溶化点发生反应（a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、换柱子）
B、峰前延
1、柱温低（升高柱温）
2、样品溶剂选择不恰当（使用流动相作为样品溶剂）
3、样品过载（降低样品含量）
4、色谱柱损坏（见A1、A2）
C、峰分叉
1、保护柱或分析柱污染图（取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。）
2、样品溶剂不溶于流动相（改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。）
D、峰变形
1、样品过载（减少样品载量）
E、早出的峰变形
1、样品溶剂选择不恰当（a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂）
F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
1、柱外效应（a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）b、使用小体积的流通池）
G、K’增加时，脱尾更严重
1、二级保留效应，反相模式（a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）
c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）
d、更换一支柱子）
2、二级保留效应，正相模式（a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）
c、加入水（或多官能团化合物）
d、试用另一种方法）
3、二级保留效应，离子对(加入三乙胺（或碱性样品）)
H、酸性或碱性化合物的峰拖尾
1、缓冲不合适(a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液)
I、额外的峰
1、样品中有其他组份(正常)
2、前一次进样的洗脱峰(a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速)
3、空位或鬼峰(a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂c、减少进样体积) J、保留时间波动
1、温控不当(调好柱温)
2、流动相组分变化(防止变化（蒸发、反应等）)
3、色谱柱没有平衡(在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱)
K、保留时间不断变化
1、流速变化(重新设定流速)
2、泵中有气泡(从泵中除去气泡)
3、流动相选择不恰当(a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相)
L、基线漂移
1、柱温波动,即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。(控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图)
2、流动相不均匀,流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。(使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。)
3、流通池被污染或有气体(用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1M 的硝酸。（不要用盐酸）)
4、检测器出口阻塞,高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线(取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗)
5、流动相配比不当或流速变化(更改配比或流速,定期检查流动相组成及流速)
6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时(用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗)
7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成（检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂）
8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。（使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子）9、使用循环溶剂，但检测器未调整（重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相）
10、检测器没有设定在最大吸收波长处。（将波长调整至最大吸收波长处）
采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH 值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa 值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。
注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。
峰形拖尾的原因及解决方法
技术报告 改善反相HPLC中的峰拖尾 在反相HPLC中峰拖尾是一个普遍的现象。特别是分离碱性化合物和通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾缘由。峰拖尾可以引起分离度降低，灵敏度减弱，精密度和定量变差。图1表明峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关。图2表明准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响。 图1 拖尾对分离度和灵敏度的影响 当峰拖尾（T，拖尾因子）从1.0增加到2.0时，分离度（Rs）从1.5降到1.0。灵敏度（峰高）由于峰的体积增大和样品的浓度降低而降低。 图2 峰拖尾对准确度和精密度的不利影响
拖尾峰使数据系统难以准确确定峰的终点，故而影响准确度和精密度。在这个例子中，在B点测得到峰面积比在A点测得的峰面积少约3%。 峰拖尾的原因，峰拖尾的主要原因有： 1、溶解样品的溶剂比流动像更强， 2、样品量过载， 3、固定相中的硅醇基与胺类物质相结合反应， 4、硅胶吸附酸性化合物， 5、色谱柱柱床中有空隙。 只要确定了拖尾的原因就可以采取措施减少拖尾并消除之。（表1） 表1 峰拖尾：原因及解决方案 原因解决方案 样品溶剂极性强于流动相在流动相中溶解样品，尽可能降低样品 溶剂的强度 样品量过载减少进样量，参考表2中推荐的不同柱 型对应的不同进样体积 硅醇基与胺类物质的结合 1.调节流动相的pH<3.0。 2.增加流动相的离子强度，25mM～ 50mM。 3.流动相中增加竞争性的胺类，10mM
的TEA（三乙胺）。 4.选择低硅醇活性的固定相。参照图6 C18柱按固定相硅醇活性分级。 5. 酸性物质在硅胶上的吸附 1.增加流动相中盐的浓度，25mM～ 50mM。 2.调节流动相的pH< 3.0 3.增加竞争性的有机酸，1%醋酸或者 是0.1%TFA（三氟乙酸） 柱子空隙更换新的色谱柱 尝试填充空隙很少能达到较好的效果。 一、由于溶解样品的溶剂极性强于流动相而引起的拖尾 如果溶解样品的溶剂极性强于流动相，就会引起宽的甚至是拖尾的峰。有几种线索可以帮助确定是由于此种原因引起的拖尾。第一种就是先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重；另一种迹象就是进样量减少或者是样品经流动相稀释后进样峰拖尾减轻了。 如果怀疑拖尾的原因是流动相的强度引起的，解决很简单。将样品溶解在流动相中，或者将样品经流动相稀释至进样后峰拖尾符合要求。 二、由样品量过载引起的峰拖尾 当进样量超过柱子的容量，样品峰会呈现一个直角三角形。当更多的样品量注入时，峰的前端变得很尖而后端就拖尾更严重。另一个现象就是色谱柱过载后保留时间会随样品量的增加而提前。（见图3）由样品过载引起的峰拖尾的解决方案就是减少进样量。表2提供了各色谱柱的直径及参考的最大进样量，表2还提供了进样量的范围，因为实际进样量依赖于柱子的填料（具有高的表面积的填充材料可以具有大的进样量），分析物质（分子量大的进样量要少），和其他的因素比如样品在流动相中的溶解性。 图3 样品量过载引起的拖尾
反相色谱峰形拖尾的原因和改善方法极限色谱柱
各种造成峰形拖尾的原因分析： [柱物理损坏] 色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。唯一的解决方法就是更换新柱。 [柱内填料污染] 流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。 流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。用前先用0.45um溶剂微孔过滤（器）过滤，除去可能存在的微粒。流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或出现沉淀。此外还得保证储存流动相的容器清洁。 复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤（器）或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。若样品不便处理，要使用保护柱。 柱内填料污染时，可将柱头螺丝卸下，用专用工具挖出柱内前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修复。或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向，冲洗色谱柱（约20至30倍柱体积，或视具体情况而定；另外，此时不能接检测器），将污染物冲出色谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。 [柱进口处有异物] 当断定是柱进口处有异物时，可将柱头螺丝卸下，取出滤帽并将其置于20%硝酸溶液中，用超声波清洗约20分钟，再置于超纯水中，并用超声波清洗约10分钟，重新装入色谱柱内即可。 [样品浓度过高致使柱超载] 样品在柱上超载能引起峰展宽，拖尾（或伸舌）。 适当减小进样量或样品浓度（需要时，可提高检测器灵敏度）直至峰形和保留时间不再改变，便可消除这种不良影响。减小进样量还能改善其分离度。正常情况下，样品中每种化合物在150×4.6mm柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。 [样品溶剂不对] 选择合适的样品溶剂，以排除不必要的干扰。最好选用流动相溶解样品。 [柱外效应] 柱外效应（即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积）是影响色谱柱柱效的主要因素之一。所以在可能的条件下，色谱柱的两端连接管路要尽可能短，连接管内径尽可能细小，切口务必平整光滑，尽可能的减小死体积，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。 [缓冲不足或不合适] 在缓冲不好或离子强度过低的分离中，也会出现保留时间重现性差和峰形拖尾。增加缓冲浓度（与样品大小相匹配）能改善此情况。 [硅醇基团作用] 仔细分析色谱柱内填料表面性质可知：反相色谱柱填料的表面大约被键合相覆盖了一半，其余的就是未被键合的硅醇基团。所谓的保留是指样品分子与键合相相互作用的结果。但是，酸性或碱性化合物与硅胶表面残存的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理，因此，发生了峰形拖尾。
液相色谱峰形问题 减少拖尾
液相色谱峰形问题减少拖尾 2010-09-17 06:46:08| 分类：03液相色谱问答 | 标签：液色迷人液相色谱专家四极杆液质联用仪液相色谱品牌排名|字号订阅 液相色谱峰形问题减少拖尾液相色谱峰形拖尾解决方案 液相色谱峰形问题- 夜色砖家的日志- 网易博客 高效液相色谱法专家专注hplc药物分析液相...在流动相中加入三乙胺，能显著的改善...四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四...3）增加流动相中缓冲盐的浓度增加缓 冲https://www.wendangku.net/doc/d512908636.html,/hplc2@126/blog/static/108348 ... 2010-12-26 - 百度快照 三、峰形问题 峰形对称性的优劣对峰面积和分离度有很大的影响，从而影响分析结果的准确性。引起峰形异常的因素很多，柱外死体积引起峰形异常有个特点：对先出的峰影响大，对后出峰影响小；柱头塌陷、柱头和筛板污染会引起所有的峰形都异常，而硅醇基次级保留只引起部分峰拖尾。相塌陷除了引起保留下降外，也会造成峰拖尾。色谱实践中，大部分的峰形问题都不是色谱柱的问题，仪器参数设定、色谱条件和方法正确与否对峰形有很大影响。 1. 峰后拖 常见的3种拖尾情况：
次级保留引起峰拖尾的机理解析： 反相色谱中，通常非极性和弱极性的化合物能获得良好的峰形，而带有－COOH、－NH2、－NHR、－NR2等极性基团的化合物则比较容易产生拖尾，原因是硅胶表面残留硅羟基对极性和碱性样品分子产生次级保留效应。 反相填料表面有残余的硅羟基，具有一定的酸性，其pKa约为4.5～4.7。根据电离规律，流动相的pH－pKa>2即pH>6.7时，99％以上的硅羟基应该是呈离子状态的，即Si－O－，而pKa－pH>2即pH<2.5时，酸性环境抑制了硅羟基的电离，99％以上的硅羟基应该是呈分子状态的，即Si－OH，但其极性仍然
气相色谱常见出峰异常问题的原因及解决办法
理论 ? 实践 190 | 2015年07月 气相色谱(gas chromatography 简称GC)是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成果。经过这些年的发展，色谱分析技术日趋成熟，色谱仪的使用越来越普及，使气相色谱仪在物质的定性及定量的检测方面有着越来越重要的地位，在石油化工中的大部分的原料和产品都可使用气相色谱法来进行分析。色谱的分析过程是比较复杂的，诸多因素都可以对结果产生影响，经常会出现预料不到的现象，出峰异常就是经常遇到的问题之一,一般表现为色谱出鬼峰，色谱峰分不开，色谱峰拖尾，色谱峰出现圆顶峰，进样后不出峰等，这些问题的出现看似没有规律，认真分析大部分有迹可循。以下就比较常见的造成出峰异常的问题原因进行分析，并讨论可行的解决办法。 1 鬼峰出现的原因及解决办法 1.1 进样口硅胶垫的影响 (1)原因分析。与硅胶垫质量和进样针头质量有关，主要有 几个方面：①进样针头质量不好，边缘不够平整，硅胶垫容易损坏。②硅胶垫使用次数过多或时间长老化，硅胶垫质量不好，材料弹性差，硅胶垫碎屑进入汽化室，便会形成鬼峰。③硅胶垫被污染，如进样时针头处附着的样品液滴被硅胶隔垫所吸附，在之后的分析过程中一点点脱附后进入色谱柱中。 (2)解决办法。检查所使用的进样针及硅胶垫，对质量不好的进样针、使用时间过长或质量有问题的硅胶垫进行有针对的更换。 1.2 进样口、检测器或衬管和分流平板污染 (1)原因分析 污染产生的原因较多，可以归结为以下几 个方面：①长时间未进行色谱仪的定期维护。②待测样品的组成复杂，进样口温度设置不够高，使样品汽化不完全，较重的组分滞留在进样口当中。③汽化室和衬管内经常会聚集一些沉积物及高沸点物质，如果碰到某次分析高沸点物质时，进样口温度升高时就会使聚集的物质逸出多余的峰;④在检测器中和分流平板的凹槽中未挥发的物质会慢慢积累，造成鬼峰无规律出现。(2)解决办法 根据实际污染情况对仪器的各部件进行清理。①清洗进样口。首先拆除色谱柱，之后在保证加热和通气的前提下，将无水乙醇或丙酮由进样口注入，重复3～5次，最后加热通气干燥进样口。②更换衬管或清洗衬管。在衬管被污染时可清楚的看到有颗粒物沉积或石英棉颜色变暗，污染严重时需要更换新的衬管。清洗衬管的方法: 取出衬管中的石英棉，将衬管浸泡在铬酸洗液中24小时后取出，再分别用蒸馏水、甲醇、丙酮清洗后干燥。③分流平板的清洗。将分流衬板置于色谱纯的甲醇等有机溶剂中进行超声处理，干燥，注意在拆卸和安装分流平板的过程中不能直接用手触摸，以防污染。④检测器清洗。热导检测器：根据检测器污染的程度选择合适的清洗溶剂，将丙酮，乙醚，十氢萘等溶剂装满检定器的测量池，浸泡大约20分钟左右后倾出，如此重复多次至所倾出的溶液比较干 气相色谱常见出峰异常问题的原因及解决办法 柴聪(中国神华煤制油化工有限公司鄂尔多斯煤制油分公司, 内蒙古 鄂尔多斯 017209) 摘要：气相色谱作为一种成熟稳定的分离、分析技术，在石油化工领域应用非常广泛，利用气相色谱分析技术进行定性、定量检测时，出峰异常问题的出现往往会给结果判定带来严重干扰。对气相色谱分析时这类问题产生的原因进行分析，找出相应的解决办法， 可以减少处理结果时的干扰，进而提高分析结果判定的准确性。关键词：气相色谱；鬼峰；色谱峰分不开；色谱峰拖尾；解决办法净为止。如果选用一种溶剂不能洗净时，可以根据污染物的性 质先选用高沸点溶剂进行浸泡清洗，然后再用低沸点溶剂反复清洗。洗净后加热驱出溶剂，安装回仪器上，加热检测器至150℃左右，接通载气冲洗4小时左右即可使用。氢火焰检测器：在污染不严重时可以将色谱柱拆下，用管子将进样口与检测器联接起来，然后通载气并将检测器温度升至120℃以上，从进样口先注入20μl 左右蒸馏水，再注入几十微升丙酮溶剂进行清洗。当污染比较严重时，必须卸下检测器进行清洗，顺序拆下收集极、正极、喷嘴， 若喷嘴是不锈钢类的材料做成，可以与电极一起，先用细砂纸细心打磨掉脏污部分，再用超声清洗，最后用甲醇清洗干净，放入烘箱中烘干。 1.3 色谱柱的影响 (1)原因分析。①色谱柱未充分老化，柱温过低老化不充 分，温度过高产生液相遗失。②色谱柱长时间使用。柱自身有吸附特性，柱内余留高浓度样品或柱内留存高沸点物质，柱头被污染。再者毛细管柱低负荷量，需要高灵敏度检测器，这样就特别容易出现鬼峰。 (2)解决办法。截去受污染的柱头部分，升高进样口温度到合适的值，进行柱头老化；在进行组成复杂的样品分析后，采用程序升温对色谱柱进行吹扫，清除色谱柱中的残留物质。在程序升温的过程中，设置的最高柱温必须低于柱子最高使用温度20℃左右，以避免柱流失。 1.4 仪器分析条件设置不合适 (1)原因分析。在分析未知的新样品时，可能会由于仪器条 件设置不当产生一些干扰峰。一般原因是:①样品可能会在分析条件下发生降解产生一些干扰成分，如果这些成分恰好在该条件下有响应，就可能产生鬼峰。②选择的色谱柱不合适，不利于分析高沸点的化合物。 (2)解决办法。通过查阅文献，进行试验，查找方法，尽可能的了解检测样品的各种性质，如极性、分子结构、分子量大小等方面，选择适当的分析条件，包括柱箱、进样口、检测器的使用温度，色谱柱的极性、膜厚、长度、内径等。 1.5 样品污染 样品在进样前的处理过程中受到污染，鬼峰在检测时有规律出现，有良好的重复性，且溶剂空白不包含此峰，这种情况比较容易判断。 解决方法：由于色谱分析是一种痕量分析方法，所以在样品处理的各个过程中用到的所有物品必须保证清洁，以免使干扰物质进入样品。 2 色谱峰分不开的原因及解决办法 2.1 载气流速过高
高效液相色谱分析中异常峰的分析与处理_龚时琼
高效液相色谱分析中异常峰的分析与处理 龚时琼 (华中科技大学化学与化工学院,湖北武汉 430074) 摘 要:高效液相色谱(hig h perf ormance liquid chr omato gr aphy ,H PL C)在高等院校、医药卫生、食品、环保等多个领域的应用越来越广泛。叙述了高效液相色谱仪的工作原理,针对高效液相色谱分析中的异常峰问题进行了分析,并提出了相应的处理方法。关键词:高效液相色谱仪;异常峰;缓冲液 中图分类号:O 657.7 文献标志码:B 文章编号:1002-4956(2010)06-0037-02 Analysis and treatment of unusual peaks in analysis of high performance liquid chromatography Gong Shiqiong (School of Chemistry and Chemica l Eng ineering.H uazhong U niversit y of Science and T echnolog y,Wuhan 430074,China) Abstract:T he hig h perfo rmance liquid chro matog raphy (H PL C)is increasing ly w ide in application,for ex am -ple,colleges and universit ies,medicine health,fo od,env iro nmental pro tect ion,and so o n.T he buffer solution was cho sen and unusual questio ns w ere pro cessed. Key words:hig h per for mance liquid chr omato gr aphy(H PL C);unusual peak;buffer solution 收稿日期:2009-06-17 作者简介:龚时琼(1969)),女,湖北省仙桃市人,工程师,主要从事大 型仪器设备的使用、研发与管理维护. E -mail:370749606@https://www.wendangku.net/doc/d512908636.html,;gongs hiqiong@https://www.wendangku.net/doc/d512908636.html, 高效液相色谱(H PLC)具有分离效率高、分析速度快和应用范围广等特点,特别适合于高沸点、大分 子、强极性和热稳定性差的化合物的分离、分析。自20世纪60年代后期发展以来,是现代分离测定的重要手段[1] 。目前高效液相色谱已成为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等领域中重要的分离技术,是分析化学和生物化学等用于解决各种实际分析和分离课题必不可少的工具之一。但在高效液相色谱分析中因各种原因会经常出现异常峰形,严重影响对结果的分析。 1 高效液相色谱仪工作原理 高效液相色谱仪是由溶剂贮液器、高压泵、进样器、色谱分离柱、检测器和数据处理系统等部分组成。 高压泵从溶液贮液器中抽走流动相,流经整个仪器系统,形成密闭的液体流路。样品通过进样系统注入色谱分离柱,在柱内进行分离。柱流出液进入检测 器,使已被分离的组分逐一被检测器收集,并将响应值转变为电信号后经放大被数据处理系统记录色谱峰,通过数据处理系统对记录的峰值进行存储和计算,从而完成整个分析过程 [2] 。 2 异常峰分析 异常的色谱峰指的是色谱图中的无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。异常峰是色谱实验工作中最棘手的问题。这些峰严重影响色谱分析的结果。色谱图中不可能有纯正的高斯对称峰,轻微的拖尾是正常的,这是由分离系统所决定的。在此仅对其中几种异常峰进行分析。2.1 峰前或峰后有小峰的分析 某个单组分样品的大峰附近带小峰,如图1中的第3个峰右下的小峰以及图2中第2个峰左下的小峰。产生原因大致分为以下几种情形,针对不同情况可采取具体的措施是完全可以解决此种异常峰的。 (1)样品不纯。可改变不同的流动相和色谱柱,对样品进行分离比较,选择合适的分离条件。(2)分析柱或保护柱柱头塌陷。此情况较常见,可更换分析柱或保护柱后对峰形进行比较。柱头塌陷时往往所有的峰都会出现峰分裂[3] 。对色谱柱再生和 ISS N 1002-4956 CN11-2034/T 实 验 技 术 与 管 理 Ex perim ental Technology and M anagem ent 第27卷 第6期 2010年6月Vol.27 No.6 Ju n.2010
气相色谱种异常峰型分析
气相色谱15种常见峰形异变来源解析 在日常色谱定量分析中，出现色谱峰形异变或鬼峰，不但严重影响定量精度，甚至使 分析工作无法进行，为此我们把峰形异变常见类型(15种)加以分析，并给出可能原 因，供工作经验不足的色谱工作者参考。我们在此讨论的峰形异变是指在色谱分析方法确定后，与曾经记录的已知色谱图比较时，出现某些色谱峰形的偏离畸变或多余峰。或者说，对于一已经设立好的色谱分析方法，由于不要求或出于无奈时有些峰分离不开、拖尾或峰形不对称等并不影响方法的实施情况，不属于上述因仪器故障、经验不足或操作失误造成的峰形异变。否则需要重新审定或修改原来的分析方法。另外，还应指出：由于无乱安装使用没有评价过的色谱柱可能出现的峰形拖尾，分离不好或峰形畸变，也不属于讨论内容。显然叫一个普通色谱分析工作者，在常规工作条件下去判断色谱柱的优劣，要求似乎高了一些。在怀疑峰形异变寻找可能原因、排除方法之前最好先做以下工作： 仔细核查操作条件，与分析方法要求是否一致; 和当初分析所存的标准色谱图对照，判断是否真出了问题; 逐项仔细观察仪器或设备工作状态，看有无操作失误而引起的出峰失常。 然后在依据以下15种异常峰形分析可能原因与排除方法。 1.台阶峰： (1)TCD热丝被样品中所含卤素、氧、硫等元素腐蚀; (2)气体流量突变如：注射垫突然漏气，气路受阻等; (3)记录色谱峰装置故障如：拉线松; 2.负峰： (1)TCD用氮做载气，由于待测组分在N2中浓度不同，热传导值呈现非线性而可能出现负峰,有时可以通过改变载气流量或进样量克服; (2)操作ECD时进样量过大而出负峰，这是由于工作原理由电子捕获转变为电离检测，此时灵敏度还会大大降低;
高效液相色谱中异常峰分析范文
异常峰分析 异常的色谱峰指的是色谱图中的无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。异常峰是色谱实验工作中最棘手的问题。这些峰严重影响色谱分析的结果。色谱图中不可能有纯正的高斯对称峰 , 轻微的拖尾是正常的 , 这是由分离系统所决定的。在此仅对几种异常峰进行分析。 1.峰前或峰后有小峰的分析 产生原因大致分为以下几种情形 (1) 样品不纯。可改变不同的流动相和色谱柱 ,对样品进行分离比较 , 选择合适的分离条件。 (2) 分析柱或保护柱柱头塌陷。此情况较常见 ,可更换分析柱或保护柱后对峰形进行比较。柱头塌陷时往往所有的峰都会出现峰分裂。对色谱柱再生和清洗可以改善分离效果。
(3) 色谱柱柱容量下降。当长时间使用后 , 有一些强保留组分吸附在柱子中 , 不大的进样量往往就会出现峰分裂。用强洗脱能力的溶剂清洗色谱柱 , 或更换色谱柱可使问题得到改善。 (4) 样品溶剂与流动相不匹配或进样体积过大。当样品溶剂比流动相极性大时 , 有时即使进样体积很小 , 也容易出现峰变形和裂分现象。建议用流动相溶解样品。 (5) 流动相不恰当。此情况较罕见 , 有些样品在特定的色谱条件下可能存在结构的动态平衡 , 而出双峰 , 这种双峰是无法分离完全的 , 改变色谱条件尤其是p H 值会使峰形正常。 (6) 样品分解。不稳定的样品在色谱分离过程中变成其他物质而出现双峰。这时需改变样品处理方法或色谱分离条件。 2.负峰分析 在色谱分析中有时会出现负峰或倒峰 , 如图 3 中的大峰的左下就有一负峰。出现这种现象可能是由以下几种原因引起的 , 可针对不同情况进行排除 , 进而使问题得到解决。 (1) 流动相吸收本底值过高。此时可适当改变检测波长。 (2) 进样过程中进入空气。进行排气处理 , 直到基线平稳再进样。 (3) 样品组分的吸收低于流动相。可改变流动相或改变检测波长。 (4) 配制样品的溶液与流动相不一样。重新配制样品 , 用与流动相一样的溶剂配制或稀释样品。 3.前沿、拖尾峰分析 拖尾：1 干扰峰，优化条件分离；2 色谱柱塌陷，更换色谱柱； 3 流动相pH 不合适，调节pH值；4 管路没有接好，存在较大的死体积，可以重新接一下。 前沿：1 溶剂选择不合适，选择合适的溶剂；2 样品过载，降低进样量； 3 柱温太低，升高柱温；4 色谱柱损坏，更换色谱柱； 图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较好的改善。一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。 前辈们总是会告诉我们，拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做。有时候托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开，此时，可以优化分析方法，或更换柱子试一试；也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原
色谱峰拖尾的原因
色谱峰拖尾的原因 色谱峰拖尾的原因有很多，例如： 1．色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷；柱坏； 2．柱头有污染； 3．样品超载； 4．样品溶剂不合适； 5．柱外效应； 6．化学或二次保留（硅羟基）效应； 7．缓冲容量不足或不合适； 8．重金属污染。 解决方法如下： 一、与化学有关的拖尾问题 1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用于碱性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物），未知化合物加醋酸三乙胺； 2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）； 3.降低进样量至<1μg。 二、与色谱柱有关的拖尾问题 1.如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗；正向柱可用甲醇冲洗； 2.使用保护柱。 三、与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽 1.进样体积过大，（通常≤25μL）； 2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（最佳连接管应<20cm，内径为0.007"）；
3.检测器流通池的体积过大。 多数色谱分析工作者在日常工作中想必都遇到过这样的问题：当用反相柱进行酸性或碱性化合物分析时，常常出现峰形拖尾现象，严重降低分离质量和精度，尤其是使用自动数据系统时。在此，笔者就各种造成峰形拖尾的原因作一次简浅的分析： [柱物理损坏] 色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。唯一的解决方法就是更换新柱。 [柱内填料污染] 流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。 流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。用前先用0.45um溶剂微孔过滤（器）过滤，除去可能存在的微粒。流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长臵会产生细菌或出现沉淀。此外还得保证储存流动相的容器清洁。 复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤（器）或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。若样品不便处理，要使用保护柱。 柱内填料污染时，可将柱头螺丝卸下，用专用工具挖出柱内前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修复。或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向，冲洗色谱柱（约20至30倍柱体积，或视具体情况而定；另外，此时不能接检测器），将污染物冲出色谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。 [柱进口处有异物] 当断定是柱进口处有异物时，可将柱头螺丝卸下，取出滤帽并将其臵于20%硝酸溶液中，用超声波清洗约20分钟，再臵于超纯水中，并用超声波清洗约10分钟，重新装入色谱柱内即可。 [样品浓度过高致使柱超载] 样品在柱上超载能引起峰展宽，拖尾（或伸舌）。 适当减小进样量或样品浓度（需要时，可提高检测器灵敏度）直至峰形和保留时间不再改变，便可消除这种不良影响。减小进样量还能改善其分离度。正常情况下，样品中每种化合物在150×4.6mm柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。 [样品溶剂不对] 选择合适的样品溶剂，以排除不必要的干扰。最好选用流动相溶解样品。 [柱外效应] 柱外效应（即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积）是影响色谱柱柱效的主要因素之一。所以在可能的条件下，色谱柱的两端连接管路要尽可能短，连接管内径尽可能细小，切口务必平整光滑，尽可能的减小死体积，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。 [缓冲不足或不合适] 在缓冲不好或离子强度过低的分离中，也会出现保留时间重现性差和峰形拖尾。增加缓冲浓度（与样品大小相匹配）能改善此情况。 [硅醇基团作用] 仔细分析色谱柱内填料表面性质可知：反相色谱柱填料的表面大约被键合相覆盖了一半，其余的就是未被键合的硅醇基团。所谓的保留是指样品分子与键合相相互作用的结果。但是，酸性或碱性化合物与硅胶表面残存的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理，因此，发生了峰形拖尾。
改善反向液相色谱峰拖尾的方法修订稿
改善反向液相色谱峰拖 尾的方法 内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
分离碱性化合物、通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾 峰拖尾可以引起分离度降低、灵敏度减弱、精密度和定量变差。（峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关；准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响） 峰拖尾原因及解决方案
图3 样品量过载引起的拖尾 表3 反相HPLC常用缓冲液 三、固定相中的硅醇基与胺类相互作用引起的拖尾 原因：带正电荷的溶液（胺类）与固定相颗粒表面上的酸性硅醇发生了离子交换，引起二次保留(图 4)，常见于固定相具有显着的硅醇活性的的色谱柱，中性pH（6～8）条件下比酸性pH（<3）更易发生。酸性和中性的化合物一般不受影响，一些碱性化合物更易受到此效应的影响。 解决： 1、确认流动相中有合适的缓冲盐，可能的话尽量在pH<3的条件下操作（使硅胶固定相上的硅醇基质子化，减少溶质与硅醇反应的几率）。使用足够的缓冲液控制pH并减少离子交换效应。 在pH<3的条件下操作，可减少由 图4相互作用引起的峰拖尾，原 理： 固定相表面的酸性硅醇基可以形成与碱性化合物反应的离子交换位点，经反相HPLC分离胺类化合物时，这种离子交换反应常常引起峰的保留（二次保留）和峰拖尾。 2、在流动相中加入竞争性的胺类，如：在流动相中加入三乙胺（TEA）（多数情况下，约10mM即
可）。TEA可以与硅醇发生强的反应，并抑制样品中的胺类与硅醇反应。 如图5：向流动相中加入TEA用来提高峰形 1.苯丙醇胺 2.麻黄碱 3.苯丙胺 4.甲基 苯丙胺5. 苯三胺 色谱柱：Eclipse XDB-C8， 4.6*150mm 流动相：85%25mMNa2HPO4， pH7.0，15%ACN 流速：1.0ml/min 温度：35℃ 样品：苯丙胺类 缺点：此法增加了分析方法复杂性并且改变色谱柱性质不易逆转。强度胺类（如三乙胺），不易从色谱柱上洗脱下来。既用过含有TEA的色谱柱就不再适合应用于流动相中不含TEA 的分析。 原理：三乙胺与硅醇强烈作用，减少了样品混合物中胺类与硅醇的作用，因此，使用三乙胺可以不用选择低硅醇活性的固定相。 反相HPLC色谱柱检测固定相硅醇活性的方法：根据阿米替林的对称性（峰拖尾），柱子对称性低则硅醇活性低。阿米替林在固定相中拖尾较低（对称值低），则固定相硅醇活性较低，并且检测碱性化合物时就会有较低的拖尾。图6根据测定阿米替林的对称性（即硅醇活性）排列了常用的C18反相色谱柱 色谱柱：4.6×150mm，5um 流动相：80%甲醇；20%0.05M磷酸盐缓冲液pH7 流速：2.0ml/min 温度：24℃ 样品：阿米替林 四、酸性化合物在硅胶上吸附引起的拖尾 原因：硅胶固定相的吸附。 解决：提高流动相中盐的浓度来抑制二次反应，降低流动相的pH使硅醇
色谱峰拖尾的原因
液相色谱峰有拖尾现象是什么原因 A、峰拖尾 1、筛板阻塞（a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱） 2、色谱柱塌陷（填充色谱柱） 3、干扰峰（a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱） 4、流动相PH选择错误（调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰） 5、样品与填料表面的溶化点发生反应（a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、换柱子） B、峰前延 1、柱温低（升高柱温） 2、样品溶剂选择不恰当（使用流动相作为样品溶剂） 3、样品过载（降低样品含量） 4、色谱柱损坏（见A1、A2） C、峰分叉 1、保护柱或分析柱污染图（取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。） 2、样品溶剂不溶于流动相（改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。） D、峰变形 1、样品过载（减少样品载量）
E、早出的峰变形 1、样品溶剂选择不恰当（a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂） F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 1、柱外效应（a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）b、使用小体积的流通池） G、K’增加时，脱尾更严重 1、二级保留效应，反相模式（a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子） 2、二级保留效应，正相模式（a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法） 3、二级保留效应，离子对(加入三乙胺（或碱性样品）) H、酸性或碱性化合物的峰拖尾 1、缓冲不合适(a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液) I、额外的峰 1、样品中有其他组份(正常) 2、前一次进样的洗脱峰(a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速) 3、空位或鬼峰(a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积) J、保留时间波动
改善反向液相色谱峰拖尾的方法
改善反相HPLC中的峰拖尾 分离碱性化合物、通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾 峰拖尾可以引起分离度降低、灵敏度减弱、精密度和定量变差。（峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关；准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响） 峰拖尾原因及解决方案 引起的拖尾 现象： 1、先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重； 2、进样量减少或样品经流动相稀释后进样峰拖尾情况减轻。 二、由样品量（进样量超过柱子容量）过载引起的峰拖尾 现象： 1、样品峰呈现直角三角形，当更多的样品量注入时，峰前端变尖、后端拖尾更严重。 2、色谱柱过载后，保留时间随样品量的增加而提前。（见图3） 表 进样量、进样量的范围
因为实际进样量依赖于柱子的填料（具有高的表面积的填充材料可以具有大的进样量），分析物质（分子量大的进样量要少），和其他的因素比如样品在流动相中的溶解性。 图3 样品量过载引起的拖尾 表3 反相HPLC常用缓冲液 三、固定相中的硅醇基与胺类相互作用引起的拖尾 原因：带正电荷的溶液（胺类）与固定相颗粒表面上的酸性硅醇发生了离子交换，引起二次保留(图 4)，常见于固定相具有显著的硅醇活性的的色谱柱，中性pH（6～8）条件下比酸性pH（<3）更易发生。酸性和中性的化合物一般不受影响，一些碱性化合物更易受到此效应的影响。 解决： 1、确认流动相中有合适的缓冲盐，可能的话尽量在pH<3的条件下操作（使硅胶固定相上的硅醇基质子化，减少溶质与硅醇反应的几率）。使用足够的缓冲液控制pH并减少离子交换效应。 在pH<3的条件下操作，可减少由图4 相互作用引起的峰拖尾，原理： 固定相表面的酸性硅醇基可以形成与碱性化合物反应的离子交换位点，经反相HPLC分离胺类化合物时，这种离子交换反应常常引起峰的保留（二次保留）和峰拖尾。 2、在流动相中加入竞争性的胺类，如：在流动相中加入三乙胺（TEA）（多数情况下，约10mM即可）。TEA可以与硅醇发生强的反应，并抑制样品中的胺类与硅醇反应。 如图5：向流动相中加入TEA用来提高峰形 1.苯丙醇胺 2.麻黄碱 3.苯丙胺 4.甲基苯丙 胺5. 苯三胺 色谱柱：Eclipse XDB-C8，4.6*150mm 流动相：85%25mMNa2HPO4，pH7.0，
液相色谱峰拖尾分析审批稿
液相色谱峰拖尾分析 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】
w液相色谱峰拖尾分析 从色谱柱分离机理角度 造成拖尾的原因多数是因为要分离的化合物是碱性的。硅胶表面的硅羟基pKa值是2-3，也就是当流动相的pH值大于这个值，硅羟基就会解离，这时这个氧带的外层电子对碱的 吸附是特别强的，很多人知道硅羟基对碱性物质吸附，解决办法：应选择封尾的柱子，但是即使封尾，不管工艺怎么好，都不会是100%能封住。那么就争取从pH值角度考虑，减小流动相pH，或者说加三乙胺，三乙胺容易被这个解离的硅羟基吸附，其实作用相当于对色谱柱封尾。 从流动相的角度 用甲醇做碱性物质要相对比乙腈好，因为甲醇含有-OH，多少能抑制硅羟基解离，加缓冲 盐的目的也是抑制硅羟基解离。所以说种种方法都是抑制硅羟基解离或竞争吸附，尽量减少解离的硅羟基对碱性物质的吸附。 前沿峰图 非常有可能是色谱柱的硅胶溶解造成的。前沿峰还有可能是由溶解性效应引起，就是溶解样品的溶液对样品的溶解性远大于流动相。现在市场上有种色谱柱经过表面处理之后残留的硅羟基pKa值能达到我不说哪家生产的，用这种柱子做你的流动相pH控制在以下拖尾的效果非常好，另外建议做碱性化合物时选择色谱柱尽量选择比表面积小，含碳量低些的色谱柱，效果会好。 A、峰拖尾 1、筛板阻塞(a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱) 2、色谱柱塌陷(填充色谱柱) 3、干扰峰(a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱) 4、流动相PH选择错误 (调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰) 5、样品与填料表面的溶化点发生反应(a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、换柱子) B、峰前延 1、柱温低(升高柱温) 2、样品溶剂选择不恰当 (使用流动相作为样品溶剂) 3、样品过载 (降低样品含量) 4、色谱柱损坏 (见A1、A2) C、峰分叉 1、保护柱或分析柱污染图 (取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。) 2、样品溶剂不溶于流动相 (改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。) D、峰变形 1、样品过载 (减少样品载量) E、早出的峰变形 1、样品溶剂选择不恰当 (a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂) F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 1、柱外效应(a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路) b、使用小体积的流通池) G、 K’增加时，脱尾更严重 1、二级保留效应，反相模式(a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)d、更换一支柱子)
气相色谱分析常见峰形异变可能原因
气相色谱分析常见峰形异变可能原因 在日常色谱定量分析中，出现色谱峰形异变或鬼峰，不但严重影响定量精度，甚至使分析工作无法进行，为此我们把峰形异变常见类型（15种）加以分析，并给出可能原因，供工作经验不足的色谱工作者参考。我们在此讨论的峰形异变是指在色谱分析方法确定后，与曾经记录的已知色谱图比较时，出现某些色谱峰形的偏离畸变或多余峰。或者说，对于一已经设立好的色谱分析方法，由于不要求或出于无奈时有些峰分离不开、拖尾或峰形不对称等并不影响方法的实施情况，不属于上述因仪器故障、经验不足或操作失误造成的峰形异变。否则需要重新审定或修改原来的分析方法。另外，还应指出：由于无乱安装使用没有评价过的色谱柱可能出现的峰形拖尾，分离不好或峰形畸变，也不属于讨论内容。显然叫一个普通色谱分析工作者，在常规工作条件下去判断色谱柱的优劣，要求似乎高了一些。在怀疑峰形异变寻找可能原因、排除方法之前最好先做以下工作： l 仔细核查操作条件，与分析方法要求是否一致； l 和当初分析所存的标准色谱图对照，判断是否真出了问题； l 逐项仔细观察仪器或设备工作状态，看有无操作失误而引起的出峰失常。 l 然后在依据以下15种异常峰形分析可能原因与排除方法。 1．台阶峰： （1）TCD热丝被样品中所含卤素、氧、硫等元素腐蚀； （2）气体流量突变如：注射垫突然漏气，气路受阻等； （3）记录色谱峰装置故障如：拉线松； 2．负峰： （1）TCD用氮做载气，由于待测组分在N2中浓度不同，热传导值呈现非线性而可能出现负峰,有时可以通过改变载气流量或进样量克服； （2）操作ECD时进样量过大而出负峰，这是由于工作原理由电子捕获转变为电离检测，此时灵敏度还会大大降低； （3）操作FID，低电离效率的溶剂（如CS2）或杂质出现，使原基流较高的输出基线减小而显示为负峰； （4）操作FID，在无极化电压，样品量较大可能出现负峰；
改善反向液相色谱峰拖尾的方法
改善反向液相色谱峰拖尾的方法 改善反相HPLC中的峰拖尾一、溶解样品的溶剂极性强于流动相引起的拖尾现象: 1、先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重; 分离碱性化合物、通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾 2、进样量减少或样品经流动相稀释后进样峰拖尾情况减轻。峰拖尾可以引起分离度降低、灵敏度减弱、精密度和定量变差。(峰 之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关;准确度和精密度因数据系 二、由样品量(进样量超过柱子容量)过载引起的峰拖尾统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响) 现象: 峰拖尾原因及解决方案 1、样品峰呈现直角三角形，当更多的样品量注入时，峰前端变尖、 编号原因解决方案后端拖尾更严重。 2、色谱柱过载后，保留时间随样品量的增加而提前。(见图3) 样品溶剂在流动相中溶解样品，或者将样品经解决方案:减少进样量一极性强于流流动相稀释至进样后峰拖尾符合要求，动相总之尽可能降低样品溶剂的强度柱直径(mm)参考最大样品样品量过减少进样量，参考表2中推荐的不同ID 量(mg) 二载柱型对应的不同进样体积 10 35-65 1.调节流动相的pH<3.0。 4.6 4.5-9.0 2.增加流动相的离子强度，25mM,3.0 2.0-4.0 50mM。表2 HPLC色谱柱的直径、参考的最大进样量、进样量的范围硅醇基与 因为实际进样量依赖于柱子的填料(具有高的表面积的填充材料三胺类物质的3.流动相中增加竞争性的胺类，10mM
可以具有大的进样量)，分析物质(分子量大的进样量要少)，和其他结合的TEA(三乙胺)。 的因素比如样品在流动相中的溶解性。 4.选择低硅醇活性的固定相。参照图6 C18柱按固定相硅醇活性分级。 1.增加流动相中盐的浓度，25mM, 50mM。酸性物质四在硅胶上的2.调节流动相的pH<3.0 吸附 3.增加竞争性 的有机酸，1%醋酸或者是0.1%TFA(三氟乙酸) 更换新的色谱柱五柱子空隙尝 试填充空隙很少能达到较好的效果。 图3 样品量过载引起的拖尾三、固定相中的硅醇基与胺类相互作用引起的拖尾 原因:带正电荷的溶液(胺类)与固定相颗粒表面上的酸性硅醇 发生了离子交换，引起二次保留(图 4)，常见于固定相具有显著的硅醇 活性的的色谱柱，中性pH(6,8)条件下比酸性pH(<3)更易发生。 酸性和中性的化合物一般不受影响，一些碱性化合物更易受到此效应 的影响。 解决:
反相色谱峰形拖尾的原因和改善方法(英文)
Correcting Peak Tailing Problems in Reversed Phase HPLC Peak tailing in reversed phase HPLC continues to be a common complaint. It is particularly prevalent when separating basic compounds and, therefore, a source of constant problems to those analyzing pharmaceutical compounds by HPLC. Peak tailing causes a number of problems, including lower resolution, reduced sensitivity, and poorer precision and quantitation. Figure 1 illustrates how resolution between peaks and sample sensitivity is negatively affected by peak tailing. Figure 2 illustrates how accuracy and precision of an analysis can suffer because of the inability of data systems to identify exactly where a tailing peak begins and ends.
气相峰拖尾的因素
最近看到好多色友发帖，都提到峰拖尾的现象，因为拖尾的原因很多，只有正确的找到原因才能处理得当，恢复正常。 原因好多，总结如下！: 色谱拖尾原因及解决办法 1、当经历维修色谱问题（色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等）时， 切去色谱柱前端的1/2 到1 米。必要时，更换进样口内衬管、隔垫， 并清洗进样口。保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。（气相） 2、衬管脱活 进样口衬管上的活性点可以吸附样品组分并导致出现拖尾峰，并可能损失灵敏度和重现性。用脱活制剂用来覆盖衬管玻璃表面的活性点或与之发生反应。脱活程序进行脱活，该程序可以使衬管重现性高、惰性好，且使用寿命长。对于不分流的应用，或者在必须分析极性很弱的化合物时，应当使用脱活的衬管。 即使使用脱活的衬管开始也会表现出活性，当这种情况发生时，应当更换衬管。可以清洁衬管以除去颗粒物或用溶剂冲洗衬管以除去挥发性较低的组分。但是，选择合适的衬管清洗程序可能较为困难。某些溶剂可能会除去脱活层，并且工具可能会划伤衬管的玻璃表面，从而导致出现多余的活性点。新的衬管几乎总比已清洁过并且重新脱活的衬管表现优异- 尤其对于痕量分析。 3、色谱柱、进样口衬管或被污染的金属进样口密封垫所吸收的样品组分使用新的脱活的衬管或清洗旧衬管并更换玻璃毛。进样针针头撞击，进样口衬管内的填充物破碎。从衬管中取出部分填充物，或使用无填充的衬管。色谱柱末端切口不整齐（样品吸附于此）卸下色谱柱。使用安全的毛细管熔融石英切割工具（例如陶瓷片或色谱柱切割器）将色谱柱切成垂直的齐口，然后重新装入色谱柱。断裂或破碎的进样口衬管确保进样口中的总流速为40 ml/min以上。 4、色谱柱在进样口中的位置不正确，可能载气流路存在密封垫的颗粒。 5、一支色谱柱上不能装入超过2-3 个接头。多个接头会造成死体积（拖尾峰）问题。 6、超出色谱柱的温度上限会造成固定相和管表面的加速损坏。这样会造成色谱柱的过分流失，活性组分形成拖尾，以及/或降低柱效（分离度）。幸好热损坏