超全的细菌药敏总结

超全的细菌药敏总结

一、什么情况下做药敏试验

做药敏试验的原则是只对与感染相关致病菌或可能致病菌做药敏试验，否则将导致不必要的治疗。做药敏需考虑的主要因素如下：

1. 标本来源

（1）无菌部位标本分离的细菌最具临床意义

如脑脊液、血液、体液和骨髓等。血、无菌体液标本中分离的任何细菌均需做药敏试验，除外血培养单次分离的芽孢杆菌属、棒状杆菌属、凝固酶阴性葡萄球菌（不包括路登葡萄球菌）；除外无菌体液中分离的芽孢杆菌属。如果多次培养分离出以上所示同一种细菌，仍需做药敏试验）。

（2）来自正常菌群或污染部位的标本

需做药敏试验的情况如伤口、脓肿和来自其他污染部位标本，培养生长1或2种中量或大量可能病原菌；质量合格痰标本培养生长1或2种中量或大量可能病原菌。对正常菌群或污染菌不做药敏试验。

2. 不能预测治疗用药的敏感性

如伤口分离的化脓链球，因通常对青霉素敏感，不用做药敏试验；如伤口分离的金黄色葡萄球菌，因敏感性不可预测，需做药敏试验。

3. 定量培养

以下情况需做药敏试验：

（1）中段尿标本菌落计数>10^5CFU/ml，且分离到1种或2种可能致病菌；女性有临床症状患者分离到1种致病菌，菌落计数≥10,000CFU/ml；从65岁以上患者留置导尿管取尿标本，菌落计数>10,000CFU/ml纯培养；直接导尿或膀胱镜等采集尿标本，纯培养或分离到2种致病菌，每种菌的菌落计数均>1000CFU/ml。

（2）静脉插管尖端分离的凝固酶阴性葡萄球菌>15个菌落。

4. 其他微生物的存在和定量

正常菌群的存在和定量是重要的考虑因素。通常对纯培养细菌做药敏试验，混合细菌生长是否做药敏试验不确定。需做药敏试验的定量培养支气管镜采集标本: 保护毛刷标本生长≥10^3CFU/mL、支气管肺泡灌洗液生长≥10^4CFU/mL（或半定量为中量/大量并多于正常菌群）分离培养出的下呼吸道致病菌、厌氧菌（只限保护毛刷标本）、定量计数≥10^3～10^4CFU/mL纯培养物、任何数量的铜绿假单胞菌等。

5. 患者年龄

分离自特定年龄组的一些细菌有必要做药敏试验，如痰培养正常菌群中存在中量流感嗜血杆菌，2岁儿童患者需做药敏试验，而成年患者不做药敏试验。

6. 独特的宿主因素

（1）正常免疫患者遵循一般规则；免疫抑制患者对一些条件致病菌也需做药敏试验；（2）对选用药物过敏，如从青霉素过敏患者分离的化脓链球菌，用红霉素治疗无反应，需做药敏试验。

二、哪些情况无需做药敏试验

1. 对天然耐药的细菌/抗菌药物组合

与获得性或突变耐药相反，天然（固有）耐药是几乎所有细菌种的特性。药物的抗菌能力临床表现不足或固有耐药，将导致临床治疗无效。这种情况下无需做药敏试验。

肠杆菌科对三代头孢菌素、头孢吡肟、氨曲南、替卡西林/棒酸、哌拉西林/他唑巴坦和卡巴培南类无天然耐药。枸橼酸杆菌属、产气肠杆菌属、变形杆菌属、普罗菲登菌属、粘质

沙雷菌对其他β-内酰胺类（青霉素类及酶抑制剂复方药物、一代、二代头孢菌素和头霉素等）有不同程度的天然耐药谱。

了解细菌的天然耐药可评价试验方法的准确性；可帮助识别常见表型；可帮助核实累积药敏试验的数据；出现1%～3%的敏感结果可能是方法学差异、突变、或低水平耐药表达造成的。应审核上述报告中“敏感”的结果，并重复试验以确认鉴定和药敏结果是否正确。2. 不能常规报告的菌株/抗菌药物

对从脑脊液分离的菌株不能常规报告的抗菌药物，除了口服抗菌药物、第一、二代头孢菌素（头孢呋辛注射剂除外）、克林霉素、大环内酯类、四环素类和氟喹诺酮类，还包括头霉素类药物（如头孢西丁、头孢美唑和头孢替坦）。

3. 腐生葡萄球菌引起尿路感染无需常规做药敏

腐生葡萄球菌引起尿路感染无需常规做药敏试验

4. 对临床少见菌不必常规做药敏试验

对临床少见菌及苛养菌引起的感染无需做药敏试验，临床通常经验性用药，仅当临床需要或重症感染时，或药敏结果对治疗很重要时才做药敏试验。

因此，准确鉴定病原菌直接影响到临床选药和治疗。多杀巴斯德菌属及侵蚀艾肯菌（常见于动物咬伤感染）常规用药为阿莫西林/棒酸。棒状杆菌属、JK棒状杆菌、解尿棒状杆菌通常对β-内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类耐药。红斑丹毒丝菌和多数乳杆菌属对万古霉素天然耐药；产单核李斯特菌对头孢菌素类天然耐药；明串珠菌属、片球菌属对万古霉素天然耐药但对β-内酰胺类、氯霉素和氨基糖苷类敏感。卡他莫拉菌产β-内酰胺酶，对青霉素和氨苄西林耐药，但很少对大环内脂类耐药。在经验性治疗时应避免使用天然耐药的药物。

三、依据药敏标准，选择正确的药敏方法

1. 只用MIC方法检测的情况

（1）根据标本来源：CSF标本中分离的肺炎链球菌必须用可靠的MIC法常规检测并报告青霉素、头孢噻肟或头孢曲松、美罗培南结果。分离株来自细菌性心内膜炎、脑膜炎、败血症、骨髓炎、免疫抑制患者、人工瓣膜、人工关节感染，当临床治疗无效时，用MIC法检测。分离于正常无菌部位（如脑脊液、血液和骨髓等）的草绿色链球菌对青霉素和氨苄西林，用MIC法检测。

（2）根据菌株/抗菌药物：检测肺炎链球菌的头孢吡肟、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、头孢呋辛、厄他培南、亚胺培南需用MIC法；葡萄球菌属和肠球菌属对达托霉素，肠球菌万古霉素中介、洋葱伯克霍德菌对氯霉素、左氧氟沙星和替卡西林/棒酸，嗜麦芽窄食单胞菌对头孢他啶和替卡西林/棒酸，其他非肠杆菌科细菌（包括假单胞菌和其他非苛养的、非发酵葡萄糖的革兰阴性杆菌）药敏试验。

2. 选择正确的药敏方法

金黄色葡萄球菌的头孢西丁纸片法或MIC法可判断mecA 阴性或阳性。用头孢西丁和苯唑西林同时检测金黄色葡萄球菌或路登葡萄球菌，只要其中一个耐药，既报告“苯唑西林耐药”。

一些苯唑西林MIC在0.5～2μg/mL的凝固酶阴性非表皮葡萄球菌并不携带mecA基因，苯唑西林折点（≥0.5μg/mL）高估了这类菌的耐药性，因此，由这类菌引起的严重感染，应补充检测mecA或PBP2a，或采用头孢西丁纸片法确认。

头孢西丁纸片法是检测mecA介导的苯唑西林耐药表型的凝固酶阴性葡萄球菌的最好方法。大部分路登葡萄球菌不产mecA基因，75%菌株不产β-内酰胺酶，但采用金黄色葡萄球菌药敏折点。

检测葡萄球菌对万古霉素敏感性应采用MIC法，纸片法不能区分金黄色葡萄球菌的敏感与中介（VSSA和VISA）及凝固酶阴性葡萄球菌的敏感性。万古霉素纸片（30μg）可检

测含vanA基因的VRSA，纸片周围完全没有抑菌环，需确认菌株鉴定结果。

四、对罕见耐药表型复核结果

1. 罕见的耐药表型

是指一些细菌对特殊的抗菌药物尚未报道过耐药，或极少见耐药，如：流感嗜血杆菌对卡巴培南类、第三、四代头孢菌素、氟喹诺酮类不敏感，对氨苄西林耐药但不产β-内酰胺酶；淋病奈瑟菌对第三、四代头孢菌素不敏感；脑膜炎奈瑟菌对第三、四代头孢菌素、对美罗培南、米诺霉素不敏感；肺炎链球菌对利奈唑烷、万古霉素不敏感；β-溶血链球菌对氨苄西林或青霉素、第三、四代头孢菌素不敏感；草绿色链球菌对达托霉素、厄他培南或美罗培南、万古霉素不敏感；金黄色葡萄球菌万古霉素中介度等。

2. 对罕见耐药表型应采取措施

对于只有敏感解释标准，而检测为非敏感的菌株，应采取如下措施：

（1）换一种方法复核鉴定和药敏结果或送参考实验室；药敏结果复核应采用CLSI参考方法，如肉汤微量稀释法、琼脂稀释法或纸片扩散法，或一种FDA通过的商品化试验。

（2）金黄色葡萄球菌万古霉素MIC≥8μg/mL结果属罕见，对感染控制和公共卫生部门有重要意义；有些凝固酶阴性葡萄球菌万古霉素中介，但万古霉素耐药菌株少见。

（3）应对C群和G群β-溶血链球菌确认是大菌落，如果氨苄西林或青霉素不敏感则是罕见耐药表型；而小菌落C群和G群β-溶血链球菌归到草绿色链球菌群，药敏解释标准有所不同。

五、连续监测治疗中重复分离株的耐药性发展

开始对某种抗菌药物敏感的菌株在治疗后可发展为中介或耐药，故应对再次分离的相同菌株做药敏试验；如治疗后3～4天可出现耐药的情况：

1. 三代头孢菌素治疗肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷菌属，这类细菌因产生去阻遏AmpC 型β-内酰胺酶而发展为耐药；

2. 所有治疗铜绿假单胞菌的抗菌药物及治疗葡萄球菌的喹诺酮类；

3. 万古霉素敏感金黄色葡萄球菌（MRSA）在延长疗程期间可发展为中介（VISA），MIC为4～8μg/mL,适合的方法用Etest或含6μg/mL万古霉素脑心浸液平板。

实验室应了解患者的特殊情况和病情的严重性（如从早产儿血培养中分离出阴沟肠杆菌），并与临床医师协商后明确对重复分离菌株何时重复检测药敏试验。

六、通过检测耐药机制，正确解读药敏结果

1. β-内酰胺类药物的耐药机制

（1）对葡萄球菌临床分离株检测甲氧西林耐药是强制性的。所有对甲氧西林、苯唑西林和/或头孢西丁耐药或mecA基因、PBP2a试验阳性的葡萄球菌，应认为对现有的β-内酰胺类耐药，包括青霉素类、β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂复合药物，头孢类（除外新的抗苯唑西林耐药金黄色葡萄球菌活性的头孢菌素，如头孢洛林和头孢吡普）和碳青霉烯类体外可能敏感，但临床无效。

（2）肺炎链球菌：对β-内酰胺类耐药较常见，用苯唑西林纸片筛选试验，抑菌圈直径为20mm 以上，则报告青霉素敏感；若直径为19mm以下，则需对无菌部位来源的菌株检测青霉素、头孢噻肟/头孢曲松或美罗培南MIC值并报告敏感性。

（3）草绿色链球菌：为肺炎链球菌开发的苯唑西林纸片筛选试验用于草绿色链球菌不够敏感，青霉素和氨苄西林必须检测MICs。如果青霉素耐药则需检测氨苄西林（阿莫西林）和头孢噻肟（头孢曲松）的MICs，且不能根据青霉素结果判断头孢菌素和卡巴培南的敏感性。（4）肠球菌属：如果氨苄西林耐药则报告对脲基青霉素类和碳氢霉烯类耐药，肠球菌属因产β-内酰胺酶引起的耐药机制非常罕见，屎肠球菌对氨苄西林耐药是因PBP5导致对β-内酰胺类药物的亲合力降低。

（5）肠杆菌科：肠杆菌科细菌的耐药机制复杂，按照检测耐药机制判断头孢菌素和卡巴培南的敏感性报告药敏结果已带来很多问题，2010年后CLSI根据药代动力学/药效学（PK/PD）性能评价和有限的临床资料，修订了部分头孢菌素（头孢唑啉、头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑肟和头孢曲松）和氨曲南、碳青霉烯类药敏判断折点，并注释了新折点对应的用药方案。

EUCAST标准认为，降低肠杆菌科对头孢菌素、氨曲南和碳青霉烯类的敏感判断折点，既可检测出有“临床意义”的耐药机制，包括ESBL、质粒介导的产AmpC酶菌株；卡巴培南酶（A、B和D类酶）及联合（去阻遏AmpC酶或产ESBL和通透性降低等）耐药机制，而无需做ESBL或改良Hodge（MHT）确认试验，缩短了报告时间；且动物模型、PK/PD分析及蒙特卡罗公式均支持这种修订，临床效果与MIC值的相关性也好于报告产ESBL。采用修订后折点，可减少因报告产ESBL而更多使用卡巴培南类和氟喹诺酮类药物，可减少对产卡巴培南酶等耐药机制菌株的选择性压力[9]。对于常规使用纸片法，以及能升级至2010年后CLSI药敏标准新折点的商品化药敏系统（药敏测试浓度能覆盖新修订折点及软件升级）的实验室，从个体化治疗、医生选药方面来看，特别是各级医院开始执行政府抗菌药物分级管理的背景下，采用修订折点是有积极意义的。

CLSI还重新评估了头孢菌素及静脉用头孢呋辛、头孢吡肟、头孢替坦和头孢西丁的折点，头孢西丁现有折点仍符合当前临床试验数据和PK/PD；头孢替坦因无足够数据支持而未改变折点；头孢呋辛和头孢吡肟依据标准推荐的剂量治疗不用更改折点。CLSI未评估拉氧头孢、头孢西尼、头孢孟多和头孢哌酮的折点，如果考虑使用这些药物治疗大肠埃希菌、克雷伯菌或变形杆菌引起的感染，仍需进行ESBL试验。

（6）流感嗜血杆菌：产ß-内酰胺酶引起对氨苄西林和阿莫西林耐药（TEM-1型）。而β-内酰胺酶阴性氨苄西林耐药株（BLNAR）的耐药机制是ftsI 基因发生突变，导致PBPs对ß-内酰胺酶的亲和力降低，BLNAR菌株对氨苄西林与ß-内酰胺酶抑制剂的复方药物、一代和二代头孢菌素耐药。

（7）淋球菌：产ß-内酰胺酶阳性造成对青霉素、氨苄西林和阿莫西林耐药。用ß-内酰胺酶试验可快速、准确检测质粒介导的青霉素耐药。染色体介导的耐药通过纸片法或琼脂稀释MIC法检测。

2. 大环内脂类药物的耐药机制

虽然大环内酯类，林可酰胺类和链阳菌素具有不同的化学结构，但却有类似的作用机制，并可受相同的耐药机制影响。如果检测到所有菌对红霉素敏感，中度敏感或耐药，可根据红霉素结果报告同一类药物的敏感性，如红霉素、克拉霉素。如果葡萄球菌属、来自青霉素严重过敏妊娠妇女的B群链球菌时，红霉素耐药但克林霉素敏感，需做克林霉素诱导试验（D 试验）检测MLSb 的耐药情况，若为阴性，则报告克林霉素敏感；若为阳性，由于产生了rib耐药基因使MLSb耐药或产生泵的外排机制，则报告克林霉耐药，并说明“根据诱导克林霉素耐药试验，推测此菌株对克林霉素耐药。在某些病人克林霉素可能仍有效”。氨基糖苷类高水平耐药试验可检测一个特定氨基糖苷类药物与ß-内酰胺类或糖肽类药物是否存在协同作用。喹诺酮类抗菌药物对革兰阴性菌及革兰阳性菌分别以DNA促旋酶及拓扑异构酶IV作为首要作用靶位，所引起的耐药表型与耐药机制的关系在此不再赘述。

综上所述，不论是CLSI药敏标准还是EUCUST药敏标准，由于目前临床折点的含义并不都是最佳折点，因此，根据微生物、PK/PD和临床效果不断修订后的结果，应能显示出MIC值与临床预期效果更符合，药敏标准的发展方向是预测抗感染治疗的预后，而不是为了能检测细菌中出现的所有耐药机制。

细菌分离培养及药敏试验方法及步骤

细菌分离培养方法及操作步骤无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基,37℃恒温培养24 h,观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法与实验动物分离法。 平板划线接种法 这就是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落(有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌),以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作: 1、右手持接种环,在酒精灯上火焰灭菌; 图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后,挑取被检料少许,左手持琼脂平板,以食指为

支点,用拇指与无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时,迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。 3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。(注意:划线时,以腕力使接种环在琼脂平板表面划动,尽量不要划破培养基,划的线条要密,但不能重复旧线,以免培养物形成菌 苔。) 图3 平板划线接种法 4、划线完毕,合上平皿盖,将琼脂平板倒置,放入37℃温箱内培养

18－24小时。 注意:分离培养用的平板培养基应表面干燥,可于临用前置37℃孵育箱内30分钟,这样表面即干燥有利于分离培养,又使培养基预温,对培养某些较娇弱的细菌有利。 细菌药敏试验方法操作步骤药敏试验就是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节,一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药,减少抗菌素使用的盲目性,从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中,用经(酒精灯)火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式; 用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌,以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二点划线至平皿的1/2,依次划线,直至细菌均匀密布于平皿。 图4 接种环划线

微生物抗菌素敏感试验

抗菌素敏感试验 一、实验目的 1、掌握药敏试验（K-B纸片琼脂扩散法）方法、原理及结果判读 2、掌握抗酸染色方法及结果判定 二、实验原理 1、抗菌药物分类： （1）β-内酰胺类：青霉素类和头孢菌素类（硫酶素类、单内酰环类、β-内酰酶抑制剂、甲氧青霉素类) （2）氨基糖甙类：链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素、小诺霉素、阿奇霉素 （3）大环内脂类：红霉素、白霉素、乙酰螺旋霉素、麦迪霉素、交沙霉素 （4）四环素类：四环素、土霉素、金霉素、强力霉素 （5）氯霉素类：氯霉素、甲砜霉素 （6）作用于G+细菌的其它抗生素：林可霉素、氯林可霉素、万古霉素、杆菌肽 （7）作用于G-菌的其它抗生素：多粘菌素、磷霉素、、环丝氨酸、利福平、抗真菌抗生素、灰黄霉素 （8）抗肿瘤抗生素：丝裂霉素、放线菌素D、博莱霉素、阿霉素 （9）具有免疫抑制作用的抗生素：环孢霉素 2、抗菌药物敏感试验(antimicrobial susceptibility testing in vitro ) 1）抑菌试验：体外测定抗菌药物抑制细菌生长能力的试验 （1）纸片扩散法（disc diffusion test） K-B纸片琼脂扩散法原理:将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关。（2）稀释法（dilusion test） a.将被检菌株接种于一组含有不同稀释度抗菌药物的培养基内 b.37℃18-24小时后，抗菌药物能抑制被检菌肉眼可见生长的最低浓度（MIC）即该菌 对该抗菌药物的敏感度 c.MIC50 MIC90 d.根据MIC和常用剂量时该药所能达到的血药浓度来划定细菌对各种药物的敏感度或 耐药的界限（break point,折点) （3）E试验法（E test） 2）杀菌实验 3）联合药敏试验 4）检测细菌所产生的抗生素灭活酶试验 3、药物敏感性分级 1）敏感（S）

肺泡灌洗液细菌培养及药敏结果分析

肺泡灌洗液细菌培养及药敏结果分析 发表时间：2018-02-02T15:22:23.477Z 来源：《临床医学教育》2017年12月作者：邹单东韦柳华程红革[导读] 下呼吸道感染是临床较为常见的感染，病原菌种类多、耐药性强。 广西医科大学第四附属医院广西柳州545005 [摘要] 目的：了解肺泡灌洗液中细菌种类及耐药情况，为临床合理用药提供依据。方法：美国Microscan Autoscan-4微生物分析仪对细菌作鉴定及药敏试验。结果：灌洗液细菌培养阳性率56.2%；195例细菌中革兰阴性菌占90.8%，革兰阳性菌占9.2%；主要细菌依次是铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌。主要革兰阴性菌对亚胺培南耐药率为0～15.1%，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰 胺酶 (ESBLs)阳性率为62.5%、64.1%，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为60.0%，细菌多药耐药现象严重。结论：不同细菌对抗菌药物的耐药性不同，灌洗液细菌培养及药敏试验可为临床合理用药提供依据。 [关键词] 肺泡灌洗液；细菌分布；耐药性 [Abstract] Objection: in order to understand the type of bacteria and susceptibility test results in irrigating solution, and provide an according to rational use of drug for clinical.Methods: the instrument of identification and susceptibility test is Microscan Autoscan-4, USA.Result: the positive rate of irrigating solution is 56.2%; the Gram-negative bacteria has 90.8% in these 195 bacterias, and Gram-positive bacteria has 9.2%; the main type of these bacteria are Pseudomonas aeruginosa, Pneumonia crayresearch bacteria and baumanii . the tate of the bacterias, which resist to imipenem, is 0~15.1% in these Gram-negative bacterias; the rate of Pneumonia crayresearch bacteria and baumanii, which product ESBLs, is 62.5%、64.1%,respectively; and the rate of MRSA is 60.0%. and the phenomenon of multidrug resistant is Very serious.Conclusion: the drug resistance of bacteria is differrent, the bacterial culture and susceptibility test results of irrigating solution can provide basis of rational drug use for clinical. [Key words] irrigating solution; Bacteria distribution; drug resistanc 下呼吸道感染是临床较为常见的感染，病原菌种类多、耐药性强。目前病原诊断普遍采用痰培养，但因其易污染，痰液质量难以保障，临床价值有限。肺泡灌洗液与痰液相比，对下呼吸道感染诊断具有更高特异性和敏感性，同时细菌药敏结果对临床抗感染治疗更具价值【l】。因此，我们对2010年从肺泡灌洗液中分离到的195例细菌的药敏结果进行回顾性分析，以期为临床抗感染治疗提供依据，现将结果报道如下。 1 材料和方法 1.1 标本来源 251例灌洗液为2010年我院住院患者予以纤支镜支气管肺泡灌洗治疗后采集所得。同一患者多次分离到的细菌不重复计入。 1.2 细菌鉴定和药敏试验采用Microscan Autoscan-4微生物分析仪对细菌作鉴定和药敏试验。药敏试验判断标准、结果解释、MRSA、ESBLs检测参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准【2】。定期用标准菌株做药敏质量控制。 1.3 数据处理数据均由WHONET 5.4软件分析处理所得。 2 结果 2.1 细菌分布 251例灌洗液细菌培养阳性率为56.2%(141/251)。共分离细菌195例，革兰阴性菌占90.8%，革兰阳性菌占9.2%，细菌构成比见表1。 2.2药敏结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ESBLs株为10例、25例，阳性率为62.5%、64.1%，MRSA 6例，检出率为60.0%。主要细菌对抗菌药物的耐药率，见表2。

药敏试验实验报告

药敏试验： 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。 简介： 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参

考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 实验步骤： 实验材料 普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 药敏试纸：购买或自制（详见实验准备） 细菌：待做药敏试验的细菌 仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。

特殊细菌药敏试验规范化操作系列

特殊细菌药敏试验的规范化操作 一、目前我国细菌药敏试验现状 20年以来，我国在卫生部和各地临床检验中心和检验学会的共同努力下引进CLSI药敏系列标准，使全国微生物实验室能在同一标准下进行质量控制活动。当前，微生物实验室对常见临床分离细菌的药物敏感试验的水平已有了显著的提高，但对特殊细菌的药敏试验的各个环节的规范操作还不能得到普及，对目前还无折点的细菌能否做药敏试验，以及如何判断细菌的药物敏感和耐药，仍然概念模糊，有待进一步规范和普及。 目前常见错误做法： （一）铜绿假单孢菌的药敏判断标准用于其他非发酵细菌；嗜血杆菌的标准用于卡他莫拉菌等的错误做法时有发生。 （二）借用同属细菌敏感标准 （三）借用同类抗生素的敏感标准 二、各菌属的药物敏感性报告及试验方法的CLSI药敏标准 （一）“嗜麦芽”菌属药敏报告标准 1.CLSI对“嗜麦芽”纸片药敏判断标准 药物名称纸片含量ug/片耐药 R 中介I 敏感S 米诺环素30 ≤1415-18 ≥19 左氧氟沙星 5 ≤1314-16 ≥17 复方新诺明 1.25/23.75 ≤1011-15 ≥16 2.CLSI对“嗜麦芽”稀释法判断标准 药物名称S I R 替卡西林/棒酸≤16/232/2-64/2 128/2 头孢他定≤816 ≥32 米诺环素≤48 ≥16 左氟沙星 2 4 ≥8 复方新诺明≤2/38- 4/76 氯霉素≤816 ≥32（二）无折点细菌的药物敏感试验报告 1. 其他药物的敏感性报告: CLSI推荐的药物可以报告MIC值和敏感度（S、I、R），临床需要的其他药物的药敏试验报告可以直接报告MIC值但不报告S、I、R。 2. 不要用认为相近细菌的折点代替报告S、I、R，这会误导医生用药。

细菌分离培养及药敏试验方法及步骤

细菌分离培养方法及操作步骤 无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。 平板划线接种法 这是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作： 1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌； 图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时，迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。

3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。） 图3 平板划线接种法 4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。 注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱的细菌有利。

细菌药敏试验方法操作步骤 药敏试验是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节，一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药，减少抗菌素使用的盲目性，从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。 图4 接种环划线 2、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。

细菌药物敏感试验实验报告

细菌药物敏感试验实验报告 药物敏感性试验的基本原则 1药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2药敏试验测试的前提条件： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。 错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3测试结果应准确： 实验室应遵照CLSI文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理

体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 具体的专业要求 1标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。在规范临床送检的前提下，实验室进行药敏试验和报告药敏结果时，应首先考虑标本的特殊性。实际工作中需重点考虑的标本如下。 1．脑脊髓液： 正常和疾病状态不能穿透血脑屏障的药物，常规不应报告。报告审核时，对于分离自脑脊髓液的菌，下列药物不能报告：仅有口服剂型的抗菌药物、一、二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、头霉素类、克林霉素、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类。

细菌鉴定及药敏分析系统产品技术要求珠海迪尔生物

2. 性能指标 2.1 外观与结构 a）外观应端正、清洁，表面涂、镀层应无明显剥落、擦伤、露底及污垢； b）铭牌及标志应清晰、准确、牢固，所有紧固件不得松动；控制器件操作应灵活、可靠。 2.2 功能要求 2.2.1 系统功能要求 a) 细菌鉴定及药敏分析系统（以下称：“系统”）可以自动读取试剂板细菌生化鉴定和抗菌药物MIC半定量测定的阴、阳性结果； b) 应用程序经分析应可得出被鉴定菌株的名称和抗菌药物MIC结果； c) 应能生成检验报告单； d) 应能打印检验报告单。 2.2.2 软件临床功能纲要 2.2.2.1 检测功能 2.2.2.1.1标本资料录入 提供输入或选择的方式录入标本的姓名、类型及来源等资料。 2.2.2.1.2 出具细菌检测报告 在软件的指引下，用户可选择出具无菌报告或者有菌报告，出具有菌报告时，软件支持自动对试剂板进行检测并生成相应的判读结果，也支持手工录入细菌检测结果，用户可根据实际情况选择。 2.2.2.2 查询功能 根据不同的查询条件，用户可对历史报告单及其相关信息进行查询。 2.2.2.3 设置功能 软件提供各种类型的参数设置，用户可根据实际情况进行预设。 2.2.2.4 统计功能 根据不同的统计条件，用户可对历史数据进行统计分析。 2.2.2.5 WHONET功能 根据不同的WHONET数据要求，用户可将历史数据按要求导出。 2.3细菌鉴定及药敏分析系统性能要求

2.3.1准确性 2.3.1.1 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株鉴定准确性的符合率应≥95%；2.3.1.2 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株抗菌药物MIC半定量测定准确性 的符合性应≥95%。 2.3.2重复性 2.3.2.1 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株鉴定重复性的符合率应≥95%；2.3.2.2 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株抗菌药物MIC半定量测定重复性 的符合率应≥95%。 2.4 温育系统性能要求（适用96A，不适用于D2Mini/D2Plus） 温度准确度及波动 a) 细菌鉴定及药敏分析系统温度稳定后，准确度偏差应不超过±1.5℃； b) 细菌鉴定及药敏分析系统温度波动应不超过3.0℃。 2.5 环境试验要求 细菌鉴定及药敏分析系统应符合GB/T14710-2009中气候环境试验I组，机械环境试验I组及表2的要求。系统的运输试验、电源电压适应能力试验应分别符合GB/T14710-2009中第4章、第5章的要求。 2.6 安全要求 应符合GB4793.1-2007、GB4793.9-2013和YY 0648-2008的要求。 2.7电磁兼容性要求 应符合GB/T 18268.1-2010和GB/T 18268.26-2010的要求 2.8网络安全要求 2.8.1数据接口：应有通用的标准有线网络接口，使用标准TCP/IP协议； 2.8.2用户访问控制：用户应输入与用户名相匹配的密码才能登录使用系统； 用户类型：分为管理员，普通用户两种； 用户身份鉴别方法及权限：系统根据登录的用户名匹配权限； 管理员有检验操作、数据查询、系统管理权限； 普通用户有检验操作、数据查询权限。

常见细菌药物敏感性试验报告规范

常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识 微生物学检验为感染性疾病的诊断、治疗和控制提供了必不可少的证据。因此微生物学检验报告是临床和实验室等多方共同关注的焦点。国内临床微生物学检验发展较为薄弱，报告存在着种种不足。同时，临床与实验室的沟通存在一定不足，密切协作非常必要。基于实际存在的问题，为规范国内临床微生物学检验药物敏感性试验报告，加强临床与实验室合作，发挥检验医师作用，特制订本共识，以期指导相关报告的规范化，减少错误，增加专业信息，提高服务质量，为临床医学诊、治、控提供坚实的科学依据。本共识限于常见细菌的药物敏感性报告。 一、药物敏感性试验的意义和基本原则 (一)意义 药物敏感性试验可以检测细菌对于抗细菌药物的敏感性，为临床用药、新药研究、监测耐药变迁、发现耐药机制等提供客观证据[1]。对于经验治疗，依据一方面来自医生自身的经验，一方面是实验室长期不断提供的数据积累。临床需要考虑不同感染的病原谱和常见病原对不同药物的敏感性；对于靶向治疗，特定分离株的具体药敏试验结果可以用于判断经验治疗选药合理性、经验治疗效果分析、调整治疗选药依据等。 (二)基本原则 1．药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药[2]。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献[3,4]。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2．药敏试验测试的前提条件[5]： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3．测试结果应准确： 实验室应遵照C L S I文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 二、具体的专业要求 (一)标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。

南方医科大学微生物实验报告

2016年南方医科大学医学微生物学实验报告 日期 2016年5月22号 一、实验目的 1、掌握培养基制备的原则和一般方法。 2、掌握病原菌的分离与培养方法。 3、掌握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法，熟悉细菌基本形态。 4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。 5、掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。 6、熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法。 7、掌握玻片凝集试验的原理、方法、结果观察与判断。 二、实验器材 1、天平、称量纸、干粉培养基、锥形瓶、量筒、15支试管、试管架、试管筐、5ml 刻 度吸管、平皿、洗耳球、酒精灯 2、脓汁标本1支，粪便标本1支；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个，伊红美蓝 平板2个，接种环，酒精灯 3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板） 题目 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 成绩 实验者 作者：马浩楠 3140020007 参与者名字：马浩楠 丁超 王尧鑫 桂文茁 年级专业 2014级医学影像专业 指导老师 罗军

4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1 本，载玻片4张，染色瓶，染色架 5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4 个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把 6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 三、方法与步骤 1、培养基的制备： 培养基称量干粉培 养基(g) 水量(ml) 煮沸(次）分装(ml) 备注 营养琼脂11.4 300 3瓶，500ml 瓶，平板 营养琼脂 2.7 70 3 5 14支×3，中试管，斜面 营养肉汤 1.3 60 1 3 20支×2，小试管，肉汤 半固体琼脂 1.7 60 3 4 14支×3，小试管，高层 （1）营养琼脂培养基的制备：称量11.4g琼脂，置于三角烧瓶中，加入300ml蒸馏水，分2瓶装，用于倒平板。 （2）营养琼脂培养基的制备（用于制作斜面）：称量2.9g琼脂，置于三角烧瓶中，加入75ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管5ml。 （3）肉汤培养基的制备（用于制作液体培养基）：称量1.1g琼脂，置于三角烧瓶中，加入50ml蒸馏水，放在电炉上，煮沸1次，分15支小试管装，每支试管5ml。 （4）半固体琼脂培养基的制备：称量1.7g琼脂，置于三角烧瓶中，加入60ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管4ml。 2、细菌的分离培养 平板划线分离法

细菌药敏试验

实训细菌的药物敏感性试验 教学目标 使学生掌握细菌药物敏感性试验的操作方法，能够利用本试验方法选择敏感药物治疗兽医临床常见的细菌性传染病。 材料准备 1．器材：温箱、天平、打孔机、滤纸、无菌试管及吸管、镊子、接种环、酒精灯等。 2．试剂：蒸馏水。 3．培养基：普通琼脂平板。 4．菌种：金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的固体培养物。 5．药品：链霉素、金霉素、新霉素、红霉素等抗菌药物。 6．硫酸钡标准管：取1%~1.5%氯化钡0.5ml加1%硫酸溶液99.5ml，充分混匀即成，用前充分振荡。 方法步骤 将抗菌药物置于接种待检菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，由此可根据抑菌环的大小，判定细菌对药物的敏感度。 （一）含药纸片的制备 1．滤纸片最好选用新华1号定性滤纸，用打孔机打成直径6mm的滤纸片，放在小瓶中或平皿中，在121.3℃灭菌15min，再置100℃干燥箱内烘干备用。 2．药液的配制用无菌蒸馏水将各药稀释成以下浓度：磺胺100mg/ml、青霉素100IU/ml、链霉素、金霉素、新霉素、红霉素、多粘菌素1000μg/ml。 3．含药纸片的制备将灭菌的滤纸片用无菌的镊子摊布于灭菌平皿中，按每张滤纸片饱和吸水量为0.01ml计算，50张滤纸片加入药液0.5ml。要不时翻动，使纸片充分吸收药液，浸泡1~2h后于37℃温箱中烘干备用。对青霉素、金霉素纸片的干燥宜采用低温真空干燥法，干燥后立即放入瓶中加塞，放干燥器内或置-20℃冰箱中保存。纸片的有效期一般为4~6个月。 （二）测验方法 1．钩取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌落各4~5个，分别接种于肉汤培养基中，37℃培养4~6h。 2．用灭菌生理盐水稀释培养菌液，使其浊度相当于硫酸钡标准管。装有以上两种成分的试管须相同，硫酸钡应用前需充分振动。

实验11-抗生素的抑菌试验

实验十一抗生素的抑菌试验 一目的要求 1、掌握纸片法测定抗生素抗菌作用的基本方法 2、了解抗生素的抗菌谱 二实验原理 抗生素是某些植物与微生物生长到对数期前后所产生的次生代谢产物，其在低浓度下可其它微生物生长具抑制作用或杀死作用的物质。抗生素对敏感微生物的作用机理分为抑制细胞壁的形成、破坏细胞膜的功能、干扰蛋白质合成及阻碍核酸的合成。 由于不同微生物对不同抗生素的敏感性不一样，抗生素的作用对象就有一定的范围，这种作用范围成为抗生素的抗菌谱，作用对象广的抗生素称为广谱抗生素，作用对象少的抗生素称为窄谱抗生素。而且当某种抗生素长时间用于敏感微生物生长后，即使同一种菌的不同菌株对不同药物的敏感性也常发生改变，甚至出现耐药菌株，亦即产生抗性菌株，则抗生素将失去对抗性菌株生长的抵制，只以采用新的抗生素才可能控制抗性菌株的生长与繁殖，因而不断开发新的抗生素是保健人类身体健康的重要工作。新抗生素产生菌的分离筛选应通过拮抗菌发酵，然后以发酵产物进行抗菌活性实验，根据实验结果而获得产新抗生素的菌株。微生物代谢产物的抗菌活性常以管碟法与纸法进行检测，根据透明抑菌圈的有无与大小作为依据。 三实验器材 1、菌种枯草杆菌、大肠杆菌。 2、培养基MH（Mueller-Hintion）琼脂。 3、试剂青霉素、链霉素。 四方法步骤 1、无菌滤纸片以孔径6mm打孔器将滤纸打为圆形纸片，放入培养皿内，121℃蒸汽湿热灭菌，100℃烘干2h。 2、抗生素溶液制备将取适量青霉素、链霉素，以无菌水溶解。 3、指示菌悬浮液的制备枯草杆菌、大肠杆菌斜面菌种分别以无菌水洗下菌苔细胞，到入无菌三角瓶内，制备适宜浓度的细胞悬浮液。 4、混菌平板制备取批示菌细胞悬浮液1mL加入无菌培养皿内，再加入温度为43~45℃的PDA培养基或牛肉膏蛋白胨琼脂培养基20mL，立即振荡使细胞与培养基混合均匀，静置冷凝。 5、平板加抗生素溶液将滤纸片在抗生素溶液中充分浸泡2min以上，然后将纸片放于混菌平板上，每皿呈三角形放3点，每点贴放纸片2张。 6、培养与观察将平板放于33℃左右的温度培养，每24h测量一次透明抑菌圈直径，共测量3次。

微生物实验报告

脓汁和粪便标本中病原菌的检测 专业：学号：姓名： 一、实验目的 探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技巧。从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。 二、实验材料 器材 打火机、油性笔、酒精灯、接种环、接种针、污物盘、普通冰柜、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯CX21型生物显微镜、电炉、试管（带棉塞）、称量纸、药勺、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、尺子、锥形瓶、高压蒸汽灭菌器、镊子、玻片、吸水纸、拭镜纸 试剂药品 普通营养琼脂培养基、蒸馏水、脓汁标本、粪便标本、石蜡油、生理盐水、结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、稀释复红、葡萄糖微量发酵管（2支）、乳糖微量发酵管（2支）、青霉素抗菌素纸片、链霉素抗菌素纸片、庆大霉素抗菌素纸片、血浆、福氏志贺菌诊断血清 三、方法与步骤 1、培养基制备 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌→（1）平板培养基：倾注平板10ml→琼脂完全凝固后，平板倒放→4℃冰箱保存备用。（2）斜面培养基：培养基趁热斜放→琼脂凝固以后，4℃冰箱保存备用。

→贴上标签后灭菌使用。 2、空气与人体体表细菌学检查 ①空气的细菌学检查 每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、卫生间或任选地点）→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15min→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24h→观察结果。 ②人体体表的细菌学检查 甲乙常规洗手，丙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁共用1个平板 按规定在普通平板上接种手指上的细菌。第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。 3、细菌的分离培养 接种环烧灼灭菌→分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做两份，→烧掉接种环上多余的标本→冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）→接种环烧灼灭菌→将平板倒置37℃培养18～24h→观察结果。 4、细菌的群体生长特性观察和纯化培养 接种环烧灼灭菌→挑选平板上典型的四种单菌落（白色、黄色、紫黑色、粉红色）进行斜面接种纯培养→做好标记→接种环烧灼灭菌→斜面培养基置于37℃培养过夜→保存备用 5、细菌的个体形态特征的观察 ①革兰氏染色： 取洁净载玻片→用灭菌操作后的接种环取生理盐水1-2环于玻片上→挑取细菌培养物少许与盐水轻轻抹匀→待涂片干燥后在酒精灯火焰外侧快速来回2-3回合→结晶紫初染1min→水洗→卢戈碘液媒染1min→水洗→95％乙醇脱色约20s→水洗→稀释品红→复染1min→水洗→吸干,镜检。 ②肉汤接种法: 接种环烧灼灭菌→分别在斜面培养物中挑取菌苔少许→立即移入肉汤培养基管中→在接近液面的管壁上轻轻研磨→沾取少量肉汤调和→混匀→试管口通过火焰2-3次灭菌→塞好棉塞→35℃培养4~6h 6、药敏试验 接种环烧灼灭菌→分别取之前实验中得到的四种菌液在普通平板密集涂布→接种环烧灼灭菌→标记:青、链、庆→镊子火焰消毒→贴青霉素、链霉素、庆大霉素纸片→按压→镊子消毒→倒置37℃培养18～24h→观察结果

药敏试验实验报告

药敏试验实验报告 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 分类 纸片扩散法

该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。 稀释法 稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC. 2.1 琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。再接种待测菌株，然后是结果判读

兽医学综合性实验报告范例

综合性实验报告 实验项目名称：《集约化猪场疫病防治》综合性实验——猪病的综合诊断 所属课程名称：集约化猪场疫病防治 学生姓名：学号：专业年级：动医00级1班成绩： 1 实验目的 (一级标题用四号黑体) 通过对猪病的综合诊断实验，学习观察猪主要疾病的临床症状，病理变化以及实验室检查的基本方法和技能，加深对课堂理论知识的理解和认识，掌握实验操作的基本技能，做到理论结合实践，从而提高我们解决实际生产问题的能力。(正文用五号宋体) 2实验材料与方法 2.1 实验材料 (二级标题用小四号黑体) 消毒并包装好的注射器、培养平皿若干、试管培养基几支、接种环一把、酒精灯、火柴、手术刀三把、镊子三把,手术剪三把、登记本一本、橡胶手套。 2.2 实验动物 四头约为40天龄左右断奶仔猪，没有接种过疫苗。 2.3 实验方法 2.3.1 发病猪场流行病学的了解和调查(三级标题用小四号楷体) ①发病的基本情况：仔猪品种、性别、发病天龄、发病率、死亡率等。 ②病仔猪父母的病史、猪群免疫史和猪场防疫史的了解和调查。 ③仔猪生活史检查：包括猪场地理、地形、土质、水源和水质，局部小气候，交通、道路情况，猪舍的温度、湿度、通风设备、光照、卫生条件、消毒措施等。 ④仔猪的饲养管理情况：饲养密度，补料情况；饲料来源、配方、营养价值的评定；粗料与精料供应情况，维生素、矿物质、微量元素、药物等的添加情况；饲料的贮存、加工方法和过程；饲喂方法、制度和改变情况；疫苗的接种情况；发病后的用药情况等。 2.3.2 猪的临床症状

①仔猪体质外貌检查 消瘦，两边肋骨凸出，营养不良，皮肤失去弹性，被毛粗乱，没有光泽，眼睑有少许水肿，精神沉郁，目光无神，头低耳耷，反映迟钝，站立时鼻镜触地，走路时身体平衡失调，可视黏膜颜色苍白，四肢关节肿大。 ②体表淋巴结检查 正常情况下体表淋巴结不易摸到，可触摸到腹股沟淋巴结肿大2~3倍。 ③体温、呼吸、脉搏的检查 用手背触摸仔猪耳根，体温偏高；呼吸困难，采取腹式呼吸；用手紧贴左侧肘后胸壁触摸脉搏，脉搏数增多。 2.3.3 前腔静脉采血与血液检查和血清学检查 用于检测一些血液性疾病和测定待检动物血清中的特异性抗体水平或测定被检动物的抗原。 拆开消毒好的注射器包装，在仔猪前腔静脉采血，经过处理后，进行血液的常规检查，包括红细胞、白细胞数量等；血液离心处理后，采取血清，应用聚合酶链式反应（PCR）、免疫荧光试验（IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等血清学方法做血清学检查。 2.3.4 病猪的剖检及病变观察记录 ①仔猪前腔静脉放血； ②沿腹白线切开皮肤，皮下没有发生血肿、气肿、脓肿等，皮下组织和肌肉没有黄疸等的 异常，脐部有黄色的液体积聚； ③剖开胸、腹腔，观察：胸腔和腹腔内有严重的细菌感染，内脏发生广泛粘连，有淡黄色 积液、渗出物，心包内无积液； ④取出内脏，按照一定的顺序逐项剖开，并观察内部病变： A 内部器官的病变 心肌：大小正常、颜色较淡，柔软。 肺：肿大，水肿，红白相间，有紫红色肺炎病灶，心叶、尖叶、隔叶前缘对称性灰红色胰样实变，取深色部分可沉入清水中，联想支原体感染；肺门淋巴结肿大、灰白。 肝：没有发生肿胀、坏死灶等，颜色偏淡。

细菌药敏试验实验报告解读

细菌药敏试验实验报告解读 “医院有的药物不做药敏实验，医院没有的药物做什么药敏实验？”在临床上经常能听到临床医生们抱怨。“药敏报告显示敏感的药物，而临床治疗无效？”有时也让大夫们感到不解。这些问题使得临床医师不知道如何选择抗菌药物，那么如何正确解读药敏报告，合理选择抗菌药物报告呢。 我们先来了解几个概念： 最低抑菌浓度（MIC）：测量抗菌药物的抗菌活性大小的一个指标，指在体外培养细菌18至24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度。 最小杀菌浓度（MBC）：抗菌药物能能使受试菌最初的活菌总数减少99.9%以上所需要的最低抗菌药物浓度。 折点：是最低抑菌浓度或者抑菌圈直径，用于区分离株为敏感、剂量依赖性敏感、中介、非敏感还是耐药 敏感（S）：通过折点来定义，指当对感染部位采用推荐剂量时，具有MIC值等于或低于敏感折点（或抑菌圈等于或高于敏感折点）的菌株通常可被抗菌药物所达到的浓度水平所抑制，产生可能的临床疗效。 中介（I）：通过折点来定义，包括这些MlC或者抑菌圈直径在中介范围内的菌株，其抗菌药物MIC接近于血液和组织中通常可达到的水平，而抗菌药物治疗的疗效可能低于敏感株。耐药（R）：通过折点来定义，指按常规用药方案，在药物通常可达到的浓度水平时，菌株不能被抑制，表明MIC值或抑菌圈直径可能在一个产生了某种特殊的耐药机制(如β-内酰胺酶）的范围内，而且治疗研究显示该药的临床疗效不可靠。 多重耐药（MDR）：是指有多重耐药性的病原菌。其定义为一种微生物对三类（比如氨基糖苷类、大环内酯类、β－内酰胺类、喹诺酮类等）或三类以上抗菌药物同时耐药，而不是同一类的三种。 泛耐药(XDR)：广泛耐药细菌指细菌对常用抗菌药物几乎全部耐药，革兰氏阴性杆菌仅对黏菌素和替加环素敏感，革兰氏阳性球菌仅对糖肽类和利奈唑胺敏感。 全耐药（PDR）：泛耐药细菌指对所有分类的抗菌药物全部耐药，革兰氏阴性杆菌对包括黏菌素和替加环素在内的全部抗菌药物耐药，革兰氏阳性球菌对包括糖肽类和利奈唑胺在内的全部抗菌药物耐药。 药敏试验目的 使用体外试验的方法检测细菌的耐药性，预测抗菌药物临床治疗效果并为临床医生针对某一特定感染问题选用药物提供依据。 判断标准

教你看懂药敏和菌培报告单 !

教你看懂药敏和菌培报告单！ 药敏试验是如何测定的根据美国临床标准委员会 推荐的纸片扩散法测定。将含有一定量抗菌药的纸片贴在涂有细菌的琼脂平板表面，35℃培养过夜，测量纸片周围抑菌圈的大小确定细菌对药物的敏感性，抑菌圈越大敏感性越高。不同细菌对不同抗菌药敏感性的判定标准不同，例如头孢噻肟对肠杆菌科细菌的抑菌圈≤14 mm为R, 15 mm-22 mm为I,≥23 mm为S；苯唑西林对金黄色葡萄球菌抑菌圈≤10 mm 为R, 11 mm-12 mm为I, ≥13 mm为S。药敏试验报告中S、I、R 指的是什么S（susceptible），是指细菌对抗菌药敏感，使用常规剂量时的平均血浓度超过MIC 5倍以上，用常规剂量通常有效； I（intermediate）是指细菌对抗菌药中度敏感，常规剂量时平均血浓度等于或略高于MIC，需用高剂量或对体内药物浓缩部位的感染可能有效； R（resistance）是指细菌对某种抗菌药耐药，药物对细菌的MIC 高于应用常规剂量时的血浓度，应用常规剂量治疗通常无效。测试抗菌药物的品种是如何选定的抗菌药有近200种，药敏试验中没必要也不可能包括每种抗菌药。所测试的抗菌药纸片的种类是根据各类细菌对抗菌药的敏感性 及临床可能选用的药物而确定的，同类药物通常只选择1-2

个代表品种。NCCLS对各种细菌的药敏试验中宜测试的药物品种进行了推荐，如测定葡萄球菌属的药敏试验应包括苯唑西林、青霉素、红霉素、克林霉素、复方磺胺甲噁唑（SMZ-TMP）和万古霉素；此外可根据情况增加其他品种如氯霉素、环丙沙星、庆大霉素、利福平和呋喃妥因等。为什么肠球菌属细菌药敏报告的测定药物这么少对头孢菌素类和多种抗菌药天然耐药，故药敏试验中所包括的抗菌药品种较少，NCCLS 推荐的测试品种为氨苄西林或青霉素、万古霉素（去甲万古霉素），此外亦可增加庆大霉素、氯霉素、红霉素、利福平、环丙沙星和呋喃妥因等，后两者适用于尿标本。 细菌对多种抗菌药物敏感时，如何选择最有效药物应根据感染部位、病情严重程度、药物的抗菌作用及药动学特点选择抗菌药。是否所有阳性培养均有临床意义 并非所有阳性培养都是真正的病原菌，原因可能有： ①所报告细菌为污染菌，细菌培养结果的临床意义大小与所取标本有关，如为关节液、胸腔积液、等无菌标本则临床意义较大，但即使血培养阳性也可能为污染菌，据报道单次血培养凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、肠球菌阳性，污染可能性分别为85%、52%、22%。某些标本易受污染如痰标本易于受咽喉部携带菌的污染，尿培养易受下尿道、尿道口寄居菌污染。②可能为应用抗菌药后的菌群交替，