犬同期发情与超数排卵
犬的同期发情与超数排卵技术
一超数排卵
一头优良母畜的卵巢内有成千上万个生殖细胞，但在一个正常性周期内只有几个卵同时发育，最终只有一个或几个卵泡成熟并排卵，而像牛这样的单胎动物，只有一或两个卵泡成熟排卵，而其他卵泡会逐渐闭锁、死亡。因此，一头良种母牛一生也只繁殖十多个后代，大部分时间用于妊娠和哺乳。如果能让良种母畜卵巢上更多的卵泡成熟排卵，进而利用生产力低下的同种母畜进行“借腹怀胎”，那么优良母畜可以获得后代的数目至少增加几倍到几十倍。应用外源促性腺激素诱导卵巢多个卵泡发育，并排出具有受精能力卵子的方法，称为超数排卵(superovulation)，简称“超排”。超数排卵技术既是重要的发情调控技术，又是胚胎移植的重要组成部分，其目的是为了得到更多的胚胎。诱使单胎家畜产双胎也是超数排卵的目的之一。其实犬是多胎动物没必要超数排卵。（藏獒除外）
(一)超数排卵原理
雌性哺乳动物发育到胚胎后期，卵巢中生殖细胞的数量急剧增加，形成大量的卵原细胞，其中有一部分进一步发育为初级卵母细胞。动物出生后，卵细胞的数量就不再增加，但储存数量相当可观。随着年龄的增长，这些卵细胞不断退化，到性成熟时大部分已消失，但卵巢上仍有相当数量的卵原细胞和初级卵母细胞存在。例如，狗有70万个，年轻母牛有5万～7．5万个，大鼠可达26万个。正常情况下，动物卵泡的生长发育呈现卵泡波的特征：即一组卵泡被征集发育，其中一个或数个确立为优势化卵泡继续生长发育，并明显抑制其余卵泡，使之生长减弱，最终导致闭锁。而卵泡的这种征集是由于获得了对促性腺激素的反应能力。因此，家畜在一个性周期会同时有一组卵泡开始发育，但最后只有一部分卵泡发育成熟。兔、猪可以有几个到十几个，牛一般只有一个卵母细胞成熟而从卵巢中排出，其他卵泡则成为闭锁卵泡，所以，卵巢中有大量的卵细胞并未得到利用。用人工的方法，例如注射某些激素，可以促使更多的卵泡相继生长并成熟、排卵，这就是超数排卵的基础。可以对卵巢产生作用并能引起卵子成熟和排卵的激素主要有：孕酮、雌二醇，促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)、促性腺激素释放激素(GnRH)等。这些激素对卵巢的作用有相同之处，但也有差别。有研究表明，人为地升高FSH的浓度将导致被征集卵泡体积变大、数目增多。因此，在动物发情周期的一定阶段注射外源FSH或PMSG(孕马血清促性腺激素)就可以使更多的卵泡同时发育为优势化卵泡，之后，再在内源及外源促黄体素及雌激素的作用下全部排卵。1927年，首先发现了超数排卵现象，即在小鼠和大鼠上做了垂体前叶组织的肌肉埋植实验，结果从输卵管中回收了60多个卵，大约是正常数的4～5倍。1930年，Cole和Hart发现孕马血清可使未成熟的大鼠超数排卵，以此奠定了超数排卵的基础，至今仍在家畜中广泛应用。此后的大量研究证明，引起家畜超数排卵的物质是与生殖生理有关的激素或促激素，并且较深入地了解了引起卵成熟和排卵的机理，使超数排卵技术广泛应用于家畜繁殖。各类激素和促性腺激素虽然都具有独特的生理功能，但他们都不是单独影响机体，而是相互促进、相互制约。FSH的主要功能是促进卵泡的生长及发育，再加上少量的LH就能进一步刺激卵泡生长、成熟和产生雌激素。性腺分泌的雌激素再刺激垂体，使LH的分泌量增加，在大量的LH和少量的FSH 的作用下引起卵巢排卵。在LH的刺激下，黄体生成、发育并分泌孕酮。孕酮刺激子宫内膜生长，为胚胎的着床和维持妊娠创造条件。在这一过程中，雌激素的参与同样也是不可缺少的。各类激素的协调作用，促使家畜完成繁衍后代的功能。诱导家畜超数排卵都要注射外源激素，其目的也是人工使动物体内的激素水平达到阈值，从而诱发卵的成熟和排放。
(二)超数排卵的方法
(1)FSH超排法在发情周期(发情当天为0d)第5～9d中的任意一天开始肌内注射FSH。可选用国产纯化FSH1～3mg，其他厂家的FSH80～100IU，分8次用减量法或等量法肌内注射。
通常，在注射开始后第3d早晚，各肌内注射一次前列腺素(氯前列烯醇0．1mg／次)，也可仅注射一次前列腺素。约48h后供体母犬发情。观察到供体母犬发情后，按常规输精对超排供体牛输精需2～3次，间隔12h输精，仅1次输精时约在发情静止后18～24h。每次用2份剂量；鲜精用10×106～50×106个活精子。
(2)PMSG超排法在发情周期第7～11d中的任意一天肌内注射1次即可，总量为500～850IU。或按每千克体重5IU左右确定PMSG总剂量，在注射PMSG后48h及60h，分别肌内注射PGF2α1次，剂量0．1mg／次。由于PMSG分子量较大，在体内半衰期长，而且易使母畜体内产生抗体，影响卵泡的发育。故不少人在使用PMSG后2～3d再注射抗PMSG抗体(anti—PMSG)，以缩短其起作用时间(母牛出现发情后12h再肌内注射PMSG抗体，剂量以能中和残留的PMSG活性为准)。(3)PVP(polyvinylpyrrolidone，聚乙烯吡咯烷酮)+FSH法FSH的超排效果虽然优于PMSG，但因其半衰期短，必须进行多次注射方能起作用，程序繁琐。由于PVP 是大分子聚合物(分子量为40000～700000)，用PVP作为FSH的载体，和FSH混合后注射，可使FSH缓慢释放，从而延长FSH的作用时间，一次性注射FSH即可达到超排的目的，便于在生产中推广应用。
(4)CIDR结合外源促性腺激素法CIDR(孕酮阴道硅胶栓)是20世纪80年代开发的促动物发情产品，由新西兰InterAg公司生产。使用CIDR可以将母犬的同期发情和超数排卵结合起来，使超排程序不受供胚犬发情周期等因素影响(发情当天除外)，超排效果可靠，同期发情时间一致，便于受体犬同步发情处理和新鲜胚胎移植。如CIDRd-FSH+PG法，在供体阴道内放入第1个CIDR，10d后取出，同时放人第2个CIDR，5d后开始注射FSH，或给供体放入第1个CIDR后4～7d开始注射FSH，连续递减剂量注射3d(8次)，在第7次注射FSH时取出CIDR，同时注射PG(前列腺素)，一般在取出CIDR后24～48h发情。
二同期发情
一、同期发情的定义和意义
(一)同期发情的定义使一群母畜在同一时期内发情并排卵的技术，称为同期发情(synchro —nizationofestrus)，也叫发情同期化(estrussynchronization)。同期发情是表面现象，而同期排卵(synchronizationofovulation)则是同期发情的内在表现和本质。在畜牧生产中，诱导一批母畜在同一周或数天内同时发情，也可称为同期发情；在胚胎移植过程中，使用冷冻精液配种和新鲜胚胎移植时，一般要求发情差异时问不超过1天。因此，必须严格控制同期发情的效果和准确性；如果使用冷冻胚胎移植，就不一定需要进行同期发情。
(二)同期发情的意义同期发情技术在现代畜牧生产中具有以下意义：
1．有利于推广人工授精技术常规的人工授精需要对每头母畜进行发情鉴定，这对于群体较大的规模化养殖场来说费时费力，不利于推广。而利用同期发情技术结合定时输精技术(TimedArtificialInsemination，TAD就可以省去发情鉴定这一中间步骤，减少因暗发情造成的漏配，提高畜牧生产效率。
2．便于畜牧生产管理，提高效率现代畜牧业生产是规模化的养殖，利用同期发情技术，可以实现同期配种、妊娠、分娩、育肥、出栏。集中安排生产活动，提高生产效率，降低生产成本，同时可以批量化出栏，提高商品群的整齐度，便于销售。
3．提高低繁殖率畜群的繁殖率对于低繁殖率的畜群，比如我国南方地区的黄牛和水牛，其繁殖率一般低于50％，这些畜群中的部分个体因饲养水平较低、使役过度等原因往往在分娩后很长一段时间内不能恢复正常的发情周期，因而对其进行诱导同期发情、配种、受孕，可以提高繁殖率。
4．同期发情是胚胎移植技术的基础采用新鲜胚胎移植时，一个供体可以获得十多枚胚胎，这就需要一定数量与供体母畜同期发情的受体母畜。此外，有时候胚胎的生产和移植不在同
一个地点进行，也需要异地受体与供体发情同期化，从而保证胚胎移植的成功进行。
二、同期发情技术原理与所用激素
(一)同期发情技术原理母畜在一个发情周期中，黄体期占整个发情周期的70％左右，如牛的黄体期约为15d。黄体分泌的孕酮对卵泡发育成熟有很强的抑制作用。只有黄体溶解消退后，孕酮水平下降，卵泡才能发育至成熟阶段，母畜才能表现发情并排卵。因此，控制母畜黄体期的消长，是控制母畜同期发情的关键。在自然状态下，单个母畜的发情是随机的，在一个大群体的未孕成年母畜中，每天有1／21左右的母畜表现发情。人为地控制母畜卵巢上黄体的消长就可以改变这种发情的随机性，使一群家畜按照人们的意愿发情和排卵。人工延长黄体期或缩短黄体期是目前进行同期发情所采用的两种技术途径。
1．延长黄体期的同期发情方法对一个群体的母畜同时用孕激素进行处理，处理期间母畜卵巢上的周期性黄体退化。由于外源激素的作用，卵泡发育受到抑制而不能成熟。如果外源孕激素处理的时间过长，则处理期间所有母畜的黄体都会消退并且无卵泡发育至成熟。所有母畜同时解除孕激素的抑制，则可在同一时期发情。目前，多采用孕激素处理9～12d，处理后不能使全部母畜的黄体消退，因此可以在孕激素处理开始时给予一定剂量的雌激素，以加速黄体溶解，缩短黄体期，提高孕激素处理结束后卵泡发育的同期率。
2．缩短黄体期的同期发情方法消除母畜卵巢上黄体最有效的方法是利用前列腺素及其类似物(PGs)。母畜用PGs处理后，黄体消退，卵泡发育成熟，从而发情。各种家畜对PG的敏感程度不一样，羊的黄体必须在上次排卵后第4d才能对PG敏感，牛的黄体必须在上次排卵后第5d才对PG敏感，猪的黄体必须在上次排卵后第10d以上才对PG敏感，故一次PG处理后绵羊、山羊、牛、猪的理论发情率分别为13／17、13／21、16／21、11／21。使用PG两次处理法，可以克服一次处理中有部分母畜不能同期发情的不足，通常在第一次处理后9～12d再做第二次处理，用于牛和羊的同期发情，可以获得较高的同期发情率和配种受胎率。
(二)同期发情所用激素
1．抑制卵泡发育的激素抑制卵泡发育的激素有孕酮、甲孕酮、氟孕酮、氯地孕酮、甲地孕酮及18一甲基炔诺酮等。这类药物的用药期可分为长期(14--21d)和短期(8～12d)两种，一般不超过一个正常发情周期。
2．溶解黄体的激素前列腺素F2α(PGFzα)及其类似物(如氯前列烯醇)均具有显著的溶解黄体作用，在用于同期发情处理时，只限于处在黄体期的母畜有效。
3．促进卵泡发育、排卵的激素在使用同期发情药物的同时，如果配合使用促性腺激素，则可以增强发情同期化和提高发情率，并促使卵泡更好地成熟和排卵。这类药物常用的有PMSG、hCG、FSH、LH、GnRH和氯地酚等。
三、各种家畜的同期发情与定时输精
同期发情的原理在各种家畜都是通用的，但是不同畜种间、不同生理阶段使用不同激素处理所要求的剂量不尽相同，因此应具体加以分析。
1．孕激素阴道栓使用PRID或CIDR放置阴道栓，4～7d后撤栓。大多数母畜在撤栓后第2～4d内发情，可以在撤栓后第56h定时输精。也可以在撤栓后第2～4d内加强发情观察，对发情者进行适时输精，受胎率更高；利用兽医B超，实时检测卵泡发育，当有大卵泡发育时，肌注GnRH，2h后人工授精。
2．PG处理法
(1)PG一次处理法肌内注射6mg的PGFzα，大多数在处理后第2～5d内发情，然后进行发情鉴定，适时输精。
(2)PG二次处理一定时输精法由于一次处理后，仅有70％左右的母犬有反应，因此可以在第一次处理后间隔7d再用同样的剂量处理一次，80～82h后定时输精，可获得54％的
情期受胎率。
3．孕激素一PG法先用孕激素通过阴道栓处理3d，处理结束时注射PG，母犬一般可在处理结束后2～3d内发情并排卵。其理论依据是：经过孕激素处理5d后，处理排卵后3d内的母犬其黄体已经至少发展了3d，这时对PG已经敏感，此时再用PG处理后可以获得较高的发情率和受胎率。高庆华等利用孕激素海绵栓一PMSG-PG法处理受体犬同期发情率达到75％，48h同期率达到62．15％，受胎率达到44．14％。
4．PRID-PGF2．-PMSG法第1d用PRID处理，第4d注射25mgPGFzα，第3d撤除阴道栓，撤栓的同时肌内注射500IU的PMSG，撤栓后56h定时输精。配种后35d妊娠诊断的受胎率53．8％，配种24d和35d之间的胚胎死亡率为13．2％
5．PRID-PGF2．一GnRH法第1d用PRID处理，同时注射100pgGn—RH；第4d撤除阴道栓，撤栓的同时注射500pgPGF2α；第5d注射25μgGnRH，16～24h后定时输精。配种后8d 妊娠诊断的受胎率44．7％。
6．CIDR-F4-PGF2α法为了防止CIDR处理时间缩短而造成受胎率和同期发情率降低，在CIDR-E2处理4d后，用PGFz。处理以确保黄体退化，以提高发情效果，并在撤除CIDR后次日，再注射少量的雌激素(Ez)，以通过下丘脑一垂体的反馈调节，促使垂体释放LH，诱发排卵，从而实现24h后定时输精。
7．GnRH-PG-GnRH定时输精法
该法又叫Ovsynch(OVS)。在第od注射25ugGnRH，第4d注射10μgPGFz。，第5d注射同样剂量的GnRH，然后16～18h后定时输精，受胎率可达50％左右。理论上讲，人工授精的最佳时机应在排卵前8～16h，Ovsynch法可控制排卵发生在GnRH二次处理后的36h内。所以多数学者认为，在GnRH二次处理后12～20h内人工授精最好。
8．Heatsynch法在第od注射25μgGnRH，第4d注射10mgPGFzα，第5d注射0.3mgECP，然后在48h后定时输精。
参考文献
[1]杨利国主编．动物繁育新技术．北京：中国农业出版社，2009
[2]钟孟淮主编．.动物繁殖与改良．北京：中国农业出版社，2009
兔的超数排卵(专业)
兔的超数排卵、早期胚胎观察及移植 捉兔的方法 在饲养管理兔时，常要捉兔。在捉兔时要讲究方法，如果方法不当，往往会造成兔骨折和孕兔流产等不良后果。 兔的耳部都是软骨，不能承受其全身体重。单拎提兔耳时，兔感到疼痛而挣扎，易造成耳根损坏，导致耳朵下垂。兔的后腿发达，骨质松脆，善于跳跃，单拎后腿时，兔会剧烈挣扎，极易造成骨 折和后肢瘫痪，对孕兔来说极易造成流产。兔不习惯于头部向下，倒拎兔时兔的脑部充血，使头部血液循环发生障碍，严重时会导致兔死亡。单抓背部皮肤将兔拎起，易使皮层和肌肉松开，同时会压迫和损伤内脏，这些捉兔方法都是不适宜的。 正确的方法是：对子兔，因其个体小、体重轻，可以直接抓其背部皮肤或围绕胸部大把松松抓起，切不可抓握太紧。对幼兔，应悄悄接近，切不可突然接近，先用手抚摸，消除兔的恐惧感，静伏后大把连同两耳将颈肩部皮肤一起抓住，兔体平衡，不会挣扎。对成年兔，方法同幼兔，但由于成年兔体重大，操作者需两手配合，一手捕捉，一手置于股后托住兔臀部，以支持体重。这样既不会伤害兔也避免兔抓伤人。 母兔生殖系统母兔生殖系统包括卵巢、输卵管、子宫、阴道和外生殖器等部。 卵巢：是产生卵子和雌性激素的腺体，在腹腔内，位于肾脏后方，以短的卵巢系膜悬于第五腰椎横突附近的体壁上，左右各一，呈卵圆形，色淡红。卵巢的形状大小，依年龄及性发育的情况而定。幼兔的卵巢到面平滑，体较小，成年兔的卵巢表面平滑，体较小，成年兔的卵巢增大，长1.0— 1.7厘米，宽0.3—0.7厘米，重0.3—0.5克，表面有透明的小圆泡突出，形似桑椹，即为成熟的卵泡。怀孕母兔的卵巢表面有时可见暗色的小丘，称为黄体。 输卵管：左、右各一条，是卵子通过及受精的管道。其前端有漏斗的结构叫喇叭口，开口朝向氏放巢。成熟的卵子从卵巢壁破裂出来后掉入喇叭口，由于输卵客壁肌肉的蠕动及管壁上纤毛的运动，使卵子沿输卵管几子宫方向运行。兔子的输卵管全长约9—15厘米，后端接子宫。 子宫：子宫是胚胎生长发育的器官。兔有一对子宫，前接输卵管，后以子宫口开口于单一的阴道。左右子宫沿全长都是分离的。没有任何程度的愈合，因此也就没有子宫体和子宫角的区别属于双子宫类型。 阴道：位于直肠的腹侧，膀胱的背侧，紧接在子宫的后面。兔子的阴道相当长，长达7.5到8.0厘米，可分为固有阴道和阴道前庭两部。阴道前庭以阴门开口于体外。 外生殖器（外阴部）：包括阴门、阴唇及阴蒂等部。阴门开口于肛门腹方，长约1厘米，阴门两侧隆起形成阴唇。在当大，长约2厘米，具有特别丰富的感觉神经末梢。 生殖系统的作用是繁殖后代，使种群得到发展和延续。家兔是繁殖力很强的动物，在生理结构上又具有一系列特点。熟悉这些特点有助于发挥家兔生殖系统的作用。 怎样给兔注射药物？ 注射给药，事先对所使用的注射器、针头必须严格消毒（高压蒸气或煮沸消毒）处理。注射前后，对注射部位要经剪毛和使用70%-75%酒精棉球局部消毒，以防止感染，常采用方法如下：(l)皮下注射法一般选在颈部、肩部、腋下、股内侧或腹下皮肤薄、松弛易移动的部位，局部剪毛，用75%酒精棉球或2%～5%碘酒棉球涂擦消毒后，以左手拇指、食指和中指将皮肤提起，捏成三角形，右手沿三角形基部几乎与兔体保持水平，将针头迅速刺入皮下1 5厘米，然后松开左手，注人药液，拔出针头后，再用酒精棉球压迫片刻。对新生子兔进行皮下注射时，可选用2～7号针头，且注入的药液容积不得超过0 01毫升／克体重。
超数排卵和同期发情使用激素
超数排卵—促性腺激素；同期发情—孕激素 这是一道生物试卷的一个填空,答案给出的是“激素”,在阅卷的过程中,我们生物老师对此有了不同的见解,很多的老师认为这里的“激素”就是促性腺激素,而我对此产生了疑问.回到学校后,我特地上网查阅了有关资料,现将同期发情处理和超数排卵的方法简介如下: 1．同期发情是家畜繁殖的一项新技术，就是利用某些激素制剂，人为地控制并调整母畜的发情周期，使其在预定的时期内集中发情的方法。 同期发情的原理: 母牛的发情周期，从卵巢的机能和形态变化方面可分为卵泡期和黄体期两个阶段。卵巢期是在周期性黄体退化继而血液中孕酮水平显著下降后，卵巢中卵泡迅速生长发育，最后成熟并导致排卵的时期，这一时期一般是从周期第十八天至第二十一天。卵泡期之后，卵泡破裂并发育成黄体，随即进入黄体期，这一时期一般从周期第一天至第十七天。黄体期内，在黄体分泌的孕激素的作用下，卵泡发育成熟受到抑制，母畜不表现发情，在未受精的情况下，黄体维持约15—17天，即行退化，随后进入另一个卵泡期,由此看来，黄体期的结束是卵泡期到来的前提条件，相对高的孕激素水平可以抑制发情，一旦孕激素水平降到低限，卵泡即开始迅速生长发育，并表现发情。因此，同期发情的中心问题是控制黄体期的寿命，并同时终止黄体期。如能使一群母畜的黄体期同时结束，就能引起它们同期发情。任何一群母畜，每个个体都随机地处于发情周期的不同阶段，如卵泡期或黄体期的早、中、晚各期。同期发情技术就是以卵巢和垂体分泌的某些激素在母畜发情周期中的作用作为理论依据，应用合成的激素制剂和类似物，有意识地干预某些母畜的发情过程，暂时打乱它们的自然发情周期的规律，继而将发情周期的进程调整到统一的步调之内，人为地造成发情同期化。这种人为的干预，就是使被处理的家畜的卵巢按照预定的要求变化，使它们的机能处于一个共同的基础上. 同期发情的处理方法: 现行的同期发情技术主要通过两种途径：一种是向待处理母牛群同时施用孕激素，抑制卵泡的发育和发情，经过一定时期同时停药，随之引起同期发情。另一种是利用前列腺素或其类似物. 使黄体溶解，中断黄体期，降低了孕激素水平，从而提前进入卵泡期，使发情提前到来. 这两种方法所用的激素性质不同，但都是使孕激素水平迅速下降，达到发情同期化的目的. 目前同期发情的方法主要是使用前列腺烯醇（PG）间隔11天两次肌肉注射的方法，效果较好。因为前列腺素处理法只有当母牛在周期第5—18天(有功能黄体时期)才能产生发情反应。对于周期第5天以前的黄体，前列腺素并无溶解作用。因此，用前列腺素处理后，总有少数牛无反应，为使一群母牛有最大程度的同期发情率，第一次处理后，经10—12天后，再对全群牛进行第二次处理，这时所有的母牛均处于周期第五至第十八天之内。因此，连续二次处理母牛同期发情率显著提高. 2．超数排卵就是在动物发情周期的一定阶段，通过外源激素处理，提高血液中促性腺激素浓度，降低发育卵泡的闭锁，增加早期卵泡发育到高级阶段(成
超数排卵简称超排
超数排卵简称超排，就是在母畜发情周期的适当时间注射促性腺激素，使卵巢比自然状况下有更多的卵泡发育并排卵。 (一)超排的意义 1．诱发产双胎牛一个情期一般只有一个卵泡发育成熟并排卵，授精后只产一犊。进行超排处理，可诱发多个卵泡发育，增加受胎比例，提高繁殖率。 2．胚胎移植的重要环节只有能够得到足量的胚胎才能充分发挥胚胎移植的实际作用，提高应用效果。所以，对供体母畜进行超排处理已成为胚胎移植技术程序中不可或缺的一个环节。 (二)超排方法 1．用于超排的药物用于超排的药物大体可分为两类：一类促进卵泡生长发育；另一类促进排卵。前者主要有孕马血清促性腺激素和促卵泡素；后者主要有人绒毛膜促性腺激素和促黄体素。 2．处理方法超排处理一般方法为在预计发情到来之前4天即发情周期的第16天注射促卵泡素或孕马血清促性腺激素，在出现发情的当天注射人绒毛膜促性腺激素。目前各国对供体母牛作超排处理的方法是供母牛发情周期的中期肌注孕马血清促性腺激素，以诱导母牛有多数卵泡发育，两天后肌注前列腺素(PGF2a)或其类似物以消除黄体，2~3天发情。 为了使排出的卵子有较多的受精机会，一般在发情后授精2~3次，每次间隔8~12小时。 我国有些地方制定了超排方法地方标准为促卵泡素5天注射法：以母牛发情之日作为周期的0天，在母牛发情周期的第9天，每天早(7：00~8：00)和晚(19：00~20：OO)各注射一次促卵泡素，连续5天，递减注射。 影响超排效果的因素很多，有许多仍不十分清楚。一般不同品种不同个体用同样的方法处理，其效果差别很大。青年母牛超排效果优于经产母牛；产后早期和泌乳高峰期超排效果较差。此外，使用促性腺激素的剂量，前次超排至本次发情的间隔时间、采卵时间等均可影响超排效果。如反复对母牛进行超排处理，需间隔一定时期。一般第二次超排应在首次超排后60~80天进行，第三次超排应在第二次超排后100天进行。增加用药剂量或更换激素制剂，药量过大、过于频繁地对母畜进行超排处理，则不仅超排效果差，还可能导致卵巢囊肿等病变。
小鼠超数排卵的实验方法
新教参中宜介绍“假减数分裂” 什么叫“假减数分裂”呢?以下就以雄蜂产生精子 的过程为例给大家介绍一下。蜜蜂群体由蜂王、雄蜂和工蜂组成,其中蜂王和工蜂是由受精卵发育而来的,雄蜂是由未受精卵发育而来的。蜂王和工蜂是二倍体(2n =32),雄蜂是单倍体(n =16) 。 雄蜂的假减数分裂过程 雄蜂在产生精子的过程中,它的精母细胞进行的 是1种特殊形式的减数分裂。在减数第1次分裂中,染色体数目并没有变化,只是细胞质分成大小不等的两部分。大的那部分含有完整的细胞核,小的那部分只是一团细胞质,一段时间后将退化消失。减数第2次分裂,则是1次普通的有丝分裂,在含有细胞核的那团细 胞质中,成对的染色单体相互分开,而细胞质则进行不均等的分裂,含细胞质多的那部分(内含16个染色体)进一步发育成精子,含细胞质少的那部分(也含16个染色体)则逐步退化。雄蜂的1个精母细胞,通过这种减数分裂,只产生1个精子,精母细胞和精子都是单倍体 细胞。这种特殊的减数分裂称为“假减数分裂”。 陈 维(连云港市东方中学江苏连云港222042) (BH ) 小鼠超数排卵的实验方法 随着基因工程、发育生物学的发展,超数排卵技术应用于生物学的研究和生产养殖中,如何让这些应用性的实验充实教学内容、培养学生的实验动手能力,是值得探讨的问题。小鼠繁殖快、不受季节影响,是现代生物学中最好的实验材料,现将实验方法简述如下:1 实验材料 材料:5～6周龄的♀鼠。器具:解剖镜、解剖针、培养皿、剪刀、镊子和注射器。药品:孕马激素、 HCG (人用绒毛膜促性腺激素)、 生理盐水。2 实验方法 选取5～6周龄的健康♀鼠,在下午4～5点时,每只小鼠注射1mL 孕马激素(5单位 mL ),48h 后每只小鼠再注射HCG 1mL (5单位 mL ),然后放入 鼠与之交配,雌雄比例♀2∶ 1。在15～18h 后取卵,断颈处死小鼠,剪开腹腔,掀开内脏,暴露出子宫,剪取宫颈和卵巢之间的输卵管后,放在盛有生理盐水的培养皿中,在解剖镜下剥去脂肪,用生理盐水清洗3次,找到盘曲状的输卵管上面的透明膨大部分,用解剖针挑破透明膨大部分,游离出多个受精卵细胞。3 结果 在解剖观察中,小鼠的子宫、卵巢充血红润,稍膨大,这些现象是注射孕马激素和HCG 的作用,大约在12h 后发生排卵,4h 左右后排出的卵子被卵细胞包围着处于输卵管上的透明膨大部分。在解剖镜下看到了卵巢、盘曲状的输卵管、输卵管上的透明膨大部分,用解剖针挑破输卵管上的透明膨大部分,可释放出一团团受精卵细胞。图示 : 杨 慧 邓凤娇 (武汉大学生命科学学院湖北武汉430072) (BF ) 让学生懂得实验的原理,引导学生思考为什么要这样作,特别是要启发学生自己去设计实验,除老师讲的方法外,还能用哪些方法去作?怎样作的效果最好?使学生手脑并用真正提高学生的创造能力、设计能力、分析能力和操作能力。今年的高考理科综合的生物试卷 21题就是一道实验分析判断和设计题,而这道题学生做得最差,反映出实验还是一个比较薄弱部分,特别是今年高考实验的分值为15分,占生物学试题总分的四分之一,今后教学对实验要引起足够的重视。 3.4 重应用 生物学是与生产实践活动紧密联系的自然科学,学用结合是生物学课的一个重要教学目的,在今年高考生物学试题中应用方面的题也不少。如,试卷 的22题的第1个问,种植抗虫棉有利于生态环境的保护和28题第2题用人工合成的性外激素来防止害虫,实际上这两道题都是利用生物学原理和生物方 法来防治消灭害虫,不用或少用农药减少环境污染,来保护和维持生态平衡的应用题。当今生物学发展的宏观方向就是生态学的方向,特别是我国是一个发展中国家,目前经济飞速发展造成的环境污染非常严重,防止环境污染,保护生态平衡,国家已经提到非常重要的地位,教学时要引起充分重视。 3.5 重热点 如今生物学科学突飞猛进发展很快,新的科学成就很多,上课时要结合教学讲解当今生物学的最新科学动态,培养学生的爱科学、学科学、用科学的科学素质非常重要。这里所说的热点,主要是指哪些影响大,各种媒体都宣传的大部分人都知道的内容,例如人类基因组计划、生物克隆技术等,在今年的高考生物学试卷 的第4题就是涉及生物学热点的生物克隆技术和遗传的一道综合题。生物学中的热点在教学中 要引起重视。 (BF ) — 94—2002年第37卷第12期 生 物 学 通 报
同期发情与超数排卵的区别及联系
同期发情与超数排卵的区别及联系 [日期：2012-06-13] 来源：中学生物学2012年4期作者：胡文斌[字体：大中小] 1 发情和排卵的调节及控制原理 发情和排卵主要受神经内分泌和生殖激素的共同作用调节。当母畜生长发育到初情期时，下丘脑的某些神经细胞所分泌的促性腺激素释放激素可促使脑垂体前叶分泌促性腺激素,包括促卵泡素和促黄体素。其中促卵泡素可促使卵巢中的卵泡发育并分泌雌激素，引起母畜一系列的发情表现和生殖器官的相应变化。同时，雌激素的分泌导致垂体分泌促黄体素的高峰，进而引起排卵，并在排卵的卵泡内形成黄体。此时，黄体分泌孕酮；孕酮的反馈作用抑制垂体分泌促性腺激素，同时也抑制了卵泡发育和发情。如母畜未妊娠，则经过一段时间后由子宫产生的前列腺素，可促使黄体迅速退化，从而使体内孕酮量下降。此时垂体因失去了孕酮的抑制作用而又开始分泌促性腺激素,再次促使卵泡发育,引起发情和排卵。当母畜在发情期间经配种而受胎时，则前列腺素促使黄体退化的作用受到抑制，因此卵巢中的黄体不消失，而转变为妊娠黄体，一般继续存在到妊娠后期。 2 同期发情的理论依据 在群体中，母畜个体所处的发情周期阶段是随机的。由于黄体期的时间占了整个发情周期的大部分时间（70%左右），即一群母畜中处于黄体期的个体数占了大多数。因此，控制个体母畜黄体的消长是控制群体母畜同期发情的关键。同期发情的实质就是利用某些激素人为地控制并调整一群母畜发情周期的进程，使之在预定的时间内集中发情和排卵。实践中常用前列腺素来提前消除黄体或用孕激素类药物来制造一个人为延长的黄体期以实现群体母畜发情的同期化。 3 超数排卵的理论依据 在自然状态下，动物卵巢上约有99%的有腔卵泡发生闭锁而退化，只有1%的卵泡能发育成熟而排卵。在每次发情期之前优势卵泡加速生长，其余小的有腔卵泡发生闭锁退化。超排的过程就是应用超过体内正常水平的外源性促性腺激素，使将要转化为闭锁卵泡的有腔卵泡发育成熟，从而使卵巢比自然发情时有更多的卵泡发育并排卵。 4 同期发情与超数排卵的区别及联系 4.1 同期发情与超数排卵的区别 所用的激素不同：应用于同期发情的药物根据其性质主要可分作两类：①抑制卵泡发育的制剂，如孕酮、甲孕酮等。它们能够抑制垂体促性腺激素的分泌，延长黄体期。②溶解黄体的制剂，如PGF2α、氯前列烯醇等，它们具有明显的溶解黄体作用，从而缩短黄体期。超排处理的试剂通常是刺激卵泡发育或促进排卵的促性腺激素类药物，如FSH、PMSG、LH、HCG等。 处理时期不同：同期发情处理的时期理论上可以在发情周期的任何阶段。但其中前列腺素法有一定缺点，就是有些母畜不能同期发情，原因是前列腺素只对功能性黄体而不是发情后4～5 d的新生黄体起溶解作用，所以处理后必须间隔一定时间后再用药一次，才能使群体发情达到高度同期化。超排处理时期应选择在发情周期的后期，即黄体消退时期。此时卵巢正处于由黄体期向卵泡开始发育过渡的时期。 目的不同：通过同期发情处理可以节省发情鉴定的劳力，使人工授精和胚胎移植时间相同，使母畜集中妊娠和产仔，利于集约经营。对母畜超排处理，利于获得更多早期胚胎进行胚胎移植；自然繁殖情况下，经控制排卵来提高母畜的产仔数，使其达到产多胎的目的。 4.2 同期发情与超数排卵的联系 同期发情和超排都是胚胎移植技术中的关键环节。在使用同期发情药物的同时，如果配合使用促性腺激素，可以增强发情同期化和提高发情率，并促使卵泡更好地成熟和排卵。 在自然情况下，母畜的发情周期长度并非恒定不变，不但个体之间有差异，而且同一个体各次发情周期的时期也不一致，所以在发情周期的后期用药物作超排处理，不一定能和卵巢机能的转变阶段相吻合。用药物处理的时间如果是在黄体尚未临近消退的阶段，或者是在黄体已经消退、卵泡已明显发育并开始出现发情时，由于注射促性腺激素作超排处理的时间与卵巢机能发育的步调不相一致，效果往往不佳。在动
犬同期发情与超数排卵
犬的同期发情与超数排卵技术 一超数排卵 一头优良母畜的卵巢内有成千上万个生殖细胞，但在一个正常性周期内只有几个卵同时发育，最终只有一个或几个卵泡成熟并排卵，而像牛这样的单胎动物，只有一或两个卵泡成熟排卵，而其他卵泡会逐渐闭锁、死亡。因此，一头良种母牛一生也只繁殖十多个后代，大部分时间用于妊娠和哺乳。如果能让良种母畜卵巢上更多的卵泡成熟排卵，进而利用生产力低下的同种母畜进行“借腹怀胎”，那么优良母畜可以获得后代的数目至少增加几倍到几十倍。应用外源促性腺激素诱导卵巢多个卵泡发育，并排出具有受精能力卵子的方法，称为超数排卵(superovulation)，简称“超排”。超数排卵技术既是重要的发情调控技术，又是胚胎移植的重要组成部分，其目的是为了得到更多的胚胎。诱使单胎家畜产双胎也是超数排卵的目的之一。其实犬是多胎动物没必要超数排卵。（藏獒除外） (一)超数排卵原理 雌性哺乳动物发育到胚胎后期，卵巢中生殖细胞的数量急剧增加，形成大量的卵原细胞，其中有一部分进一步发育为初级卵母细胞。动物出生后，卵细胞的数量就不再增加，但储存数量相当可观。随着年龄的增长，这些卵细胞不断退化，到性成熟时大部分已消失，但卵巢上仍有相当数量的卵原细胞和初级卵母细胞存在。例如，狗有70万个，年轻母牛有5万～7．5万个，大鼠可达26万个。正常情况下，动物卵泡的生长发育呈现卵泡波的特征：即一组卵泡被征集发育，其中一个或数个确立为优势化卵泡继续生长发育，并明显抑制其余卵泡，使之生长减弱，最终导致闭锁。而卵泡的这种征集是由于获得了对促性腺激素的反应能力。因此，家畜在一个性周期会同时有一组卵泡开始发育，但最后只有一部分卵泡发育成熟。兔、猪可以有几个到十几个，牛一般只有一个卵母细胞成熟而从卵巢中排出，其他卵泡则成为闭锁卵泡，所以，卵巢中有大量的卵细胞并未得到利用。用人工的方法，例如注射某些激素，可以促使更多的卵泡相继生长并成熟、排卵，这就是超数排卵的基础。可以对卵巢产生作用并能引起卵子成熟和排卵的激素主要有：孕酮、雌二醇，促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)、促性腺激素释放激素(GnRH)等。这些激素对卵巢的作用有相同之处，但也有差别。有研究表明，人为地升高FSH的浓度将导致被征集卵泡体积变大、数目增多。因此，在动物发情周期的一定阶段注射外源FSH或PMSG(孕马血清促性腺激素)就可以使更多的卵泡同时发育为优势化卵泡，之后，再在内源及外源促黄体素及雌激素的作用下全部排卵。1927年，首先发现了超数排卵现象，即在小鼠和大鼠上做了垂体前叶组织的肌肉埋植实验，结果从输卵管中回收了60多个卵，大约是正常数的4～5倍。1930年，Cole和Hart发现孕马血清可使未成熟的大鼠超数排卵，以此奠定了超数排卵的基础，至今仍在家畜中广泛应用。此后的大量研究证明，引起家畜超数排卵的物质是与生殖生理有关的激素或促激素，并且较深入地了解了引起卵成熟和排卵的机理，使超数排卵技术广泛应用于家畜繁殖。各类激素和促性腺激素虽然都具有独特的生理功能，但他们都不是单独影响机体，而是相互促进、相互制约。FSH的主要功能是促进卵泡的生长及发育，再加上少量的LH就能进一步刺激卵泡生长、成熟和产生雌激素。性腺分泌的雌激素再刺激垂体，使LH的分泌量增加，在大量的LH和少量的FSH 的作用下引起卵巢排卵。在LH的刺激下，黄体生成、发育并分泌孕酮。孕酮刺激子宫内膜生长，为胚胎的着床和维持妊娠创造条件。在这一过程中，雌激素的参与同样也是不可缺少的。各类激素的协调作用，促使家畜完成繁衍后代的功能。诱导家畜超数排卵都要注射外源激素，其目的也是人工使动物体内的激素水平达到阈值，从而诱发卵的成熟和排放。 (二)超数排卵的方法 (1)FSH超排法在发情周期(发情当天为0d)第5～9d中的任意一天开始肌内注射FSH。可选用国产纯化FSH1～3mg，其他厂家的FSH80～100IU，分8次用减量法或等量法肌内注射。
超数排卵的作用机理综述1
羔羊超数排卵研究进展 1 超数排卵的作用机理 超数排卵，即指在雌性动物发情周期的适当时间，注射外源激素，从而使血液中促性腺激素浓度升高，使卵巢上更多的卵泡发育并排卵。 自然条件下，雌性动物卵巢中含有大约300，000 个左右的卵泡，但自然情况下仅有1%能发育成熟而排卵，约有99%的卵泡会发生闭锁退化。卵泡是位于卵巢生殖上皮、包裹卵母细胞或卵子的特殊结构。卵泡细胞分为初级卵泡，次级卵泡和成熟卵泡。卵泡细胞从初级卵泡开始到发育为成熟卵泡时要经历三个不同的发育阶段，即征集、选择及优势化阶段。征集阶段是指生长卵泡池中一群小卵泡开始迅速生长，引起此现象发生的主要因素是因为卵泡发育受到激素FSH 的调控。选择阶段是指只有部分被征集的卵泡继续发育，以至最终确立优势卵泡的过程。优势化阶段是指优势卵泡迅速发育而其它同时被征集的卵泡生长和发育受到移植。这主要是因为发育起来的较大的卵泡能够分泌大量的雌二醇和抑制素，然后又可通过负反馈抑制垂体分泌FSH，从而使FSH 浓度降低，使其只够维持较小卵泡发育。而当这些较大的卵泡中有一个或几个发育为优势卵泡时，这个优势卵泡就开始分泌一些抑制因子，来抑制其它小卵泡的发育。在此阶段，卵泡的发育主要受到LH 的调控，且由于这些卵泡内的E2 浓度较高，在与FSH 共同作用下可使得颗粒细胞上的FSH 受体和LH受体增加，从而来维持这些优势卵泡的发育。但LH 的脉冲模式决定了这些优势卵泡最后能否成熟排卵，当LH 的脉冲模式较强时，就使颗粒细胞产生大量的E2 来促使这些大的优势卵泡成熟排卵。若LH 脉冲模式较弱时，颗粒细胞就不能产生足量的E2，也不能使排卵前LH 出现高峰。在下一个发情周期到来之前优势卵泡加速生长，利用了几乎所有的促性腺激素，致使那些小卵泡发生闭锁退化。 家畜在发情期间促黄体素排放频率加快，可使优势卵泡逐渐增加雌二醇的分泌。当优势卵泡成熟时，它所分泌的雌二醇产生正反馈作用导致垂体大量释放促黄体素。促黄体素可使卵母细胞恢复减数分裂，成熟卵泡分泌前列腺素类似物，进而促进卵泡膜细胞释放胶原酶而溶解局部组织出现排卵过程。因此认为，超排的过程就是应用超过体内正常水平的外源性促卵泡激素，使将要转化为闭锁卵泡的有腔卵泡发育成熟而排卵由于在动物的发情周期中常出现2 个或3 个卵泡波，选择恰当的时机通过激素处理对动物进行超排处理，可促使卵巢上更多的卵泡发育。垂体分泌和释放的FSH 和LH 对卵泡的发育和排卵具有重要的调控作用。FSH 不仅可以刺激卵泡的生长，还可刺激颗粒细胞增加FSH 受体数和受体结合力，而且还可刺激颗粒细胞分泌雌激素，并在启动卵泡腔的形成过程中起着重要的作用。而LH正常分泌时也可促进卵泡的发育。因此，卵泡在选择阶段、优势化阶段受到FSH和LH的调控。在发情期，LH释放加快，当LH释放达到高峰时发生排卵。试验证明，动物有腔卵泡闭锁之前，注射FSH 或PMSG，能使大量的卵泡不发生闭锁而正常发育成熟，在排卵之前注射LH来补充内源性LH的不足，可以使多数发育成熟的卵泡同时排卵。 2.羔羊超数排卵的常用方法