小鼠白血病模型的建立与应用
小鼠白血病模型的建立与应用
孙轶然
【摘要】白血病是一种造血系统恶性增殖性疾病，小鼠白血病模型可以为研究白血病发病机制、相关诱发因素以及评价白血病治疗药物和方法提供帮助。本文综述了小鼠白血病模型的研究意义、分类、模型建立方法和模型的应用。
【关键词】白血病，小鼠，疾病模型，动物，活体动物光学成像
1、研究意义
1.1白血病的发病机制和分类白血病是一种造血组织的恶性增殖性疾病，患者的骨髓以及其他造血组织大量无核细胞出现无限增值，克隆中的白血病细胞失去进一步分化成熟能力而停滞在细胞发育的不同阶段。临床表现为骨髓、脾、肝等造血器官中的白血病细恶性增生肿大，并浸润到全身各组织脏器中，伴有不同程度的贫血、出血、感染发热以及骨骼疼痛。根据统计，白血病约占肿瘤总发病率的3%左右，是儿童和青年中最常见的一种恶性肿瘤[1]。白血病的发病率在世界各国中，欧洲和北美发病率最高，其死亡率为3.2~7.4/10万人口。亚洲和南美洲发病率较低，死亡率为
2.8~4.5/10万人口。白血病根据白血病细胞的成熟程度和自然病程，白血病可分为急性和慢性两大类。急性和慢性白血病又可根据白血病细胞系列归属各自分为急性髓系白血病（AML）、急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性粒细胞性白血病（CML）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）[1]。其中淋巴细胞恶性增值引发的癌症又称为淋巴癌，可以分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤两大类。在过去几十年里，非霍奇金金淋巴瘤（NHL）的发病率和死亡率呈上升趋势，在美国NHL占癌症发病率的4％。
1.2小鼠白血病模型的研究意义近几年来，癌症的实验动物学模型研究取得了长足进展。针对各种不同癌症的动物模型被研究人员不断地建立出来，这些癌症动物模型能够帮助人们研究癌症的生物学性质、生化免疫学特征、病理生理状态变化、发病机制，特别是抗肿瘤药的研究包括肿瘤的放射敏感性研究和抗肿瘤药、
抗化学致癌剂体内试验等。小鼠属哺乳纲-啮齿目-鼠科动物，在遗传学与造血系统等方面和人类十分相似，人类血液系统的髓系、淋巴系等恶性肿瘤均可在小鼠身上获得相应的模型供研究；小鼠易饲养，用近交系小鼠做实验，其遗传背景均一致，实验结果可比性强，实验所需时间短，可进行动态性和前瞻性研究[2]。在众多癌症的动物模型中，小鼠模型的种类最多，应用范围也最广。综上所述，小鼠是白血病研究的理想动物模型，建立各种不同种类的小鼠白血病模型对研究白血病发病机制和白血病治疗药物和方案很有意义。
2、小鼠白血病模型的分类
2.1按建立方法分类按照小鼠白血病模型的建立方法，可以将其分大致为：2.1.1 自发模型指不对小鼠进行任何的人为致白血病因素的接触，而在小鼠自然生长过程中发生白血病，或由于基因突变的异常表达通过定向培育而保留下来的疾病模型。小鼠自发的肿瘤一般比科研人员通过实验方法诱发的肿瘤更有利于将实验结果推及到人体，且在遗传因素对肿瘤发生的影响、以及统计分析环境和其他因素对肿瘤发生的研究方面有很大意义。但是该类方法也存在肿瘤的发生情况参差不齐，不可能在短时间内获得大量肿瘤学材料，观察时间可能较长，实验耗费较大等缺陷[3]。
2.1.2诱发模型指研究者通过使用理化和生物因素作用于小鼠而人为造成白血病的疾病模型，如病毒、化学致癌剂、放射线均可诱发白血病。诱发性动物模型制作方法简便，重复性好，在短时间内可诱导出大量疾病模型，并能严格控制各种条件使的疾病模型适合研究目的需要，因而在白血病研究中最为常用，广泛用于药物筛选、毒理、传染病、肿瘤、病理机制的研究[3]。但该模型又有一定的局限性，因为是通过人为限定方式而产生的，多数情况下与临床所见自然发生的疾病有一定差异，且目前还不能用人工诱发的方法复制所有种类的癌症[4]。
2.1.3同种、异种移植模型这类模型统称为移植性小鼠白血病模型。是指来同种动物或异种动物和人体的白血病细胞，如外周血、脾、骨髓等，移植给同基因或同种动物的皮下、腹腔、静脉或脑组织等而建立起来的白血病细胞动物模型。使用可移植性白血病细胞株在建立白血病动物模型的优点是可供选择使用的细
胞系或细胞株多，许多细胞系在世界范围分布广泛。这些细胞的生物学特性已经比较明确，一般都有明确的背景资料，使一群动物同时接种同样量的瘤细胞，生长速率一致，个体差异较小，成活率接近100%，易于对照观察[5]。缺点是由于一些被广泛使用的可移植性白血病细胞系，长期在不同单位和经不同条件下体内、外培养传代，随着时间的推移，细胞系的特性可能已发生变化，这些变化对于实验的准确性和可比性将产生影响[6]。
2.1.4转基因和基因敲除模型统称为基因修饰小鼠白血病模型。转基因动物模型指将外源基因导人小鼠受精卵，产生携带外源基因能通过生殖细胞将外源基因传递给后代的小鼠品系；基因敲除小鼠模型指利用外源DNA与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组，使之整合到预定位点上，并替代原有基因，从而改变小鼠细胞遗传性获得的白血病小鼠模型。
2.2建立模型所用小鼠品系目前常用于建立白血病小鼠模型的小鼠可分为有近交系和突变系小鼠。
2.2.1 近交系小鼠可用于建立白血病小鼠模型的小鼠品系主要包括BALB/c小鼠、C57BL小鼠、AKR小鼠、C58小鼠、L615小鼠等。其中BALB/c小鼠的白血病发病率较高，对辐射很敏感；C57B小鼠对白血病因子较敏感和放射线很敏感，但对化学致癌物诱导作用敏感度较低，C3H、C57BR和C57BL等近交系小鼠对全身X射线照射非常敏感；AKR小鼠和C58小鼠是良好的自发性白血病模型用小鼠；L615品系小鼠，在其基础上培育出的多种品系小鼠，被广泛用于抗白血病药物的筛选以及白血病免疫与机理的研究中。
2.2.2 突变系小鼠可用于建立白血病小鼠模型的小鼠品系主要包括nude小鼠、SCID小鼠、NOD/SCID小鼠和NOD/SCID IL-2 Rgamma(nul1)小鼠等。nude小鼠即裸鼠，主要表现为无毛以及缺乏正常胸腺，无胸腺裸体鼠是研究胸腺功能最适宜的天然动物模型，它的发现为肿瘤学等的研究提供了难得的模型；SCID小鼠即重度联合免疫缺陷小鼠，小鼠被毛白色，体重正常，但胸腺、脾、淋巴结的重量仅为正常的30％以下，其体内T和B淋巴细胞联合缺陷，是建立急性淋巴细胞白血病（ALL）的有效模型；NOD/SCID小鼠即非肥胖糖尿病型重症联合免疫缺陷小鼠，是SCID小鼠与糖尿病小鼠的杂交产物，不仅有SCID小鼠的重排缺陷还缺乏功能性NK细胞及循环补体，抗原呈递细胞分化及功能不良，并且不发生
自身免疫性糖尿病，因而是一种免疫缺陷更严重、更易于异种移植成功并可稳定应用的动物模型。NOD/SCID IL-2 Rgamma(nul1)是在NOD/SCID小鼠模型的基础上导人IL-2受体γ链缺失突变，建立的小鼠模型，有报道称其在人类淋巴造血系统移植和功能方面的研究与应用明显优于普通的NOD/SCID小鼠[7]。
3、模型建立方法
3.1自发模型的建立自发性白血病小鼠模型的建立比较简单，因为小鼠适龄之后会自动出现白血病，因此只需观察、统计，即可筛选出合适的白血病模型小鼠。如C58小鼠，至6个月龄后白血病的发生率在85％以上，多为淋巴细胞白血病；AK小鼠至6～9个月龄时，白血病的发生率可达70～90 ，多为胸腺来源的淋巴细胞白血病[5]。AKR自发白血病小鼠，生时即带有致癌的RNA病毒，对药物的治疗反应类似儿童ALL[3]。
3.2诱发模型的建立
3.2.1 病毒诱发模型的建立最早利用病毒诱发白血病的研究是1951年Gorss应用AK近交系白血病小鼠的无细胞提取液接种C3H近交系新生乳鼠诱发白血病，随后病毒与白血病的关系引起了人们很大的关注。各国在随后的研究中建立了各种病毒诱导白血病的方法。李永念等[8]用L6565小鼠白血病病毒（L6565 MLV）悬液感染乳鼠，观察并动态检测小鼠体内病毒核酸的分布，结果发现小鼠感染病毒后3～5周，其脾脏和淋巴结呈早期白血病的病理改变，至第10～12周小鼠发生淋巴细胞白血病。
3.2.2化学致癌剂诱发模型的建立：用来诱发动物白血病的化学致癌剂包括多环碳氢化合物如9,10-二甲苯并蒽和亚硝基脲类如丁基亚硝尿等。褚建新等[5]应用马利兰诱发615系小鼠产生L7811系小鼠发生腹水型白血病。
3.2.3放射辐射诱发模型的建立目前主要用X线、射线等照射小鼠全身，或用同位素于动物体内积蓄诱发动物白血病发生。C3H、C57BR和C57BL等近交系小鼠对全身X射线照射非常敏感，其照射后白血病的诱发率可高达90%[5]。Hattori 等[4]用3.5 Gy的γ射线照射Swiss小鼠和C57B/6小鼠，发现46％的Swiss小鼠发生B 细胞淋巴瘤，而50％的C57B/6鼠发生胸腺肿瘤。
3.3 同种、异种移植模型的建立常用的可移植性白血病模型有小鼠淋巴细胞白血病U210和P388，EL9611红白血病模型，小鼠网织细胞白血病L615，Friend 病毒白血病，Dunning白血病，白血病L5170Y，P1534淋巴细胞白血病，P315白血病等[5]。
3.3.1 同种移植模型的建立如小鼠白血病模型L615，可先用T638病毒给新生的L615近交系小鼠皮下或腹腔接种，发生白血病后，取白血病小鼠的脾或骨髓制成单细胞悬液给正常成年L615小鼠皮下或腹腔接种，发病后再以同样的方法在L615小鼠中连续传代建模。该种方法的建模周期短，重复性好，移植的肿瘤细胞生物特性较稳定，故成为国内外常用的白血病动物模型复制方法之一[9]。自体式同系动物肿瘤移植不产生排导现象，同种移植时可结合注射肾上腺皮质激素、抗肿瘤药物和适量放射等方法，降低宿主免疫排斥反应，提高建模成功率[4]。
3.3.2 异种移植模型的建立异种移植方法建立白血病模型时会由于免疫系统功能的排斥可能会导致白血病异种移植失败，虽然人实体瘤细胞容易在小鼠体内存活，但人白血病小鼠模型却很难构建。可通过化疗药物和照射的预处理抑制小鼠免疫功能，预处理24小时后经过尾静脉或腹腔注射1×106～2×106 个瘤细胞，一般4～6周左右成模[3]。刘媛等[10]研究了融合基因AML/ETO阳性的人急性粒细胞白血病M2白血病细胞Kasumi-1在BALB/c裸鼠体内建立白血病模型，他们的预处理方法是利用放射线以及环磷酰胺。李丽霞等[11]通过对裸鼠腹腔注射环磷酰胺预处理，24小时后注射Nalm-6细胞，成功建立了B-ALL小鼠模型，用于药物体内靶向杀伤的研究。邵晓枫等[12]采用5周龄左右的雌性BALB/c-nu/裸鼠腹腔注射pristane 0.2ml/只2次，经60Co照射，3天后腹腔内接种人B淋巴瘤细胞株(Raji)1×107/只，结果接种38只均获成功，成瘤率100%。杨文华等[13]通过给NOD/SCID小鼠尾静脉注射白血病人骨髓单个核细胞（BMMNC）或CEM细胞株的方式，建立人白血病-NOD/SCID小鼠髓外浸润模型。
3.4基因修饰小鼠白血病模型的建立
3.4.1 转基因小鼠1976年美国科学家Jaenisch等利用反转录病毒把莫氏白血病病毒基因插入小鼠基因组，建立了世界上第一个白血病转基因小鼠系，随后又有研究将vtAT与强力霉素结合，从而抑制四环素操纵子调控基因的时相表达，由此构建成功了Bcr-Abl阳性的CML模型[14]。另有报道可用HTLV-1基因成功
建立转基因白血病小鼠模型[15]。
3.4.2基因敲除小鼠Kawagoe等[16]成功敲除MN1-TEL融合基因，构建成AML小鼠模型，用于研究MN1-TEL对白血病的作用机制。Carella[17]构建了C BFβ-SMMHC基因敲除小鼠，并用于研究CBFβ-SMMHC致AML发生的机制。
4、小鼠白血病模型的应用
4.1 白血病细胞系的建立
SCID小鼠比体外培养体系为人类白血病细胞的生长提供了更为合适的环境，而作为一种“体内组织培养皿”支持人白血病细胞的繁殖，从而为白血病细胞系的建立提供了新的工具[3]。
4.2在骨髓新生血管方面的应用研究
血管生成在多种癌症发病机制中起着重要作用，其中也包括白血病。郭海霞等[18]通过对NOD/SCID小鼠静脉注射HL60细胞和内皮细胞（EC），小鼠14天时出现全身白血病症状，证明了人EC可被HL60趋化至骨髓，参与局部肿瘤血管生成，并认为模型可用于抗白血病血管生成及实验研究。
4.3微小残留白血病的诊断和治疗
微小残留是导致癌症复发的直接原因。利用SCID鼠建立的白血病模型可用于微小残留白血病的诊断，有研究表明，接种3×106～10×106个ALL复发患者的白血病前B细胞，即可导致SCID鼠发生白血病，从而为诊断微小残留白血病提出了新方法[18]。史剑慧等[19]采用P388白血病细胞系和DBA小鼠建立了P38/DBA小鼠微小残留白血病模型，并研究了微小残留白血病细胞在体内的分布规律，移植生物试验提示，当微小残留白血病细胞数量在10个左右时，其分布可能局限于肝、脾及股骨骨髓以外的器官和组织中。
4.4 白血病的治疗敏感度评价试验
4.4.1白血病的放射性敏感试验谭业辉[20]等使用615小鼠和L615K淋巴细胞白血病细胞株建立T淋巴细胞白血病小鼠模型，给予75 mGy的低剂量辐射后，检测外周血白细胞数、小鼠的生存时间。结果发现接受75 mGy的低剂量辐射后，荷瘤小鼠白血病细胞生长受抑，生存期延长，并得出低剂量辐射具有抗淋巴细胞白
血病的作用。
4.4.2化疗药物敏感度评价化疗药物是目前治疗癌症的主要手段之一，但癌细胞耐药性一直是阻碍癌症治疗研究的一大难题。小鼠白血病模型可帮助研究人员更好地研究新的癌症化疗药物治疗方案和化疗新药。Zuber等[21]通过建立AML小鼠模型后进行了化疗药物反应实验，发现AML模型鼠化疗药物的体内反应良好。
4.4.3新型抗瘤药物和抗癌治疗方法的敏感度评价：Zhang等[22]将proIL-18基因修饰的L1210细胞和ICE基因修饰细胞皮下种植到白血病小鼠体内，观察到联合应用Lpl8和LpICE后自然杀伤细胞的细胞毒作用和细胞毒T细胞活性增强。另外小鼠白血病模型还被广泛应用到白血病的免疫治疗、新型肿瘤凋亡诱导因子、抗肿瘤血管生成的治疗方案中。
4.5 其他应用小鼠白血病模型的应用还包括：评价化合物的致癌性，为新药药理毒理试验提供依据；移植免疫研究，中医药抗癌药物药理研究等。
5、活体动物光学成像系统在小鼠白血病模型中的应用
活体生物发光成像系统是发展起来的一门新技术，已在药理学研究和诊断学研究中得到了广泛的应用。通过灵敏的光学检测技术，研究者能够观测活体动物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。该项技术主要以荧光素酶标记细胞、荧光蛋白标记细胞、病毒、DNA、基因表达和生物大分子以及利用荧光素酶标记的转基因动物模型进行一系列研究。以荧光素酶或荧光蛋白标记细胞, 利用皮下、静脉或原位接种后, 可实时观察这些细胞在体内的生长、转移以及对药物的反应等。利用该系统准确的定量性能和成像特性，根据发光强度和位置判断肿瘤的进程，可以直接快速地测量肿瘤的生长和转移。
研究者已经以活体动物光学成像系统建立了多种小鼠肿瘤模型，比如乳腺癌的小鼠模型，李艳等[23]通过用脂质体包裹带有neo抗性基因及荧光素酶报告基因的真核表达质粒pGL4. 17[ luc2 /neo]，体外转染人乳腺癌细胞株MCF27，将获得稳定表达荧光素酶的乳腺癌细胞株（MCF272luc）进行皮下接种BALB/c裸鼠及尾静脉接种SCID小鼠，成功建立了BALB/c 裸鼠皮下移植瘤模型和SCID小鼠
尾静脉移植瘤模型。
目前活体动物光学成像系统建立的小鼠白血病模型已在评价微小残留白血病的诊断和治疗方法中得到了应用。许小平[24]等利用绿色荧光（EGFP）基因标记的小鼠多药耐药白血病细胞系P388/VCR-G和DBA小鼠建立了一个检测多药耐药微小残留白血病的小鼠模型，用以证实该白血病模型小鼠对环磷酰胺(cyclophosphamide，CTX)敏感，有较好的药物剂量-生存时问关系，且接种细胞的对数与CTX剂量问有良好回归相关关系，并监测EGFP+细胞是检测小鼠体内微小残留白血病细胞最敏感的方法。
5、总结
综上，小鼠白血病模型建立方法简便、成本较低、周期短；可重复性高，肿瘤生物学特性稳定；可控制性好，可以根据研究目的选择相应模型，根据实验要求在小鼠身上复制，因此已成为国内外研究白血病的重要工具。当然，小鼠模型仍存在一定局限性，比如用于移植的白血病细胞株目前无统一的监控机制，不能保证某些细胞株已发生变异；小鼠体内的某些微环境和因等子与人类存在很多差异，无法完全实现对人造血系统的模拟，且小鼠模型所展示的治疗效果不能完全说明该药物或治疗在人体上的效果和安全性，因此小鼠模型虽然避免了人体试验的危险性，仍需更加详细的药效和安全性试验。但相信随着技术和理论研究的发展，科学工作者能够解决这些问题，建立更加完善的白血病模型，为人类攻克白血病难题提供帮助。
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二十种常见实验动物模型
二十种常见实验动物模型 一、缺铁性贫血动物模型 缺铁性贫血（iron deficiency anemia，IDA）是体内用来合成血红蛋白（HGB）的贮存铁缺乏，HGB合成减少而导致的小细胞低色素性贫血，主要发生于以下情况：（1）铁需求增加而摄入不足，见于饮食中缺铁的婴幼儿、青少年、孕妇和哺乳期妇女。（2）铁吸收不良，见于胃酸缺乏、小肠粘膜病变、肠道功能紊乱、胃空肠吻合术后以及服用抗酸和H2受体及抗剂等药物等情况。（3）铁丢失过多，见于反复多次小量失血，如钩虫病、月经量过多等。 IDA是一种多发性疾病，据报道，在多数发展中国家，约2/3的儿童和育龄妇女缺铁，其中1/3患IDA，因此，研究IDA的预防和治疗具有重要的意义。在这些研究中，缺铁性贫血的动物模型（Animal model of IDA），又是实施研究的基础工具。常见的IDA动物模型的构建技术如下： 实验动物：一般选用SD大鼠，4周龄，雌雄不拘，体重65g左右，HGB≥130g/L。 建模方法：低铁饲料加多次少量放血法。低铁饲料一般参照AOAC 配方配制，采用EDTA浸泡处理以去除饲料中的铁，饲料中的含铁量是诱导SD大鼠形成缺铁性贫血模型的关键，现有研究表明，饲喂含铁量<15.63mg/Kg的饲料35天，SD大鼠出现典型IDA表现，而饲喂
含铁40.30mg/Kg的饲料SD大鼠出现缺铁，但并不表现贫血症状。建模时一般采用去离子水作为动物饮水，以排除饮水中铁离子的影响。少量多次放血主要用于模拟反复多次小量失血导致的铁丢失，还可以加速贫血的形成。放血一般在低铁饲料饲喂2周后进行，常用尾静脉放血法，1～1.5ml/次，2次/周。 模型指标：（1）HGB≤100g/L；（2）血象：红细胞体积较正常红细胞偏小，大小不一，中心淡染区扩大，MCV减小、MCHC降低；（3）血清铁（SI）降低，常小于10μmol/L，血清总铁结合力（TIBC）增高，常大于60μmol/L。 需要指出的是，以上模型不能用于铁吸收不良相关IDA的防治研究。根据具体的研究需要，也可以适当调整建模方法。 二、白血病动物模型 用免疫耐受性强的人类胎儿骨片植入重症联合免疫缺陷病(SCID)小鼠皮下，出于人类造血细胞与造血微环境均植入小鼠，建立具有人类造血功能的SCID小鼠模型称为SCID－hu小鼠。再将髓系白血病患者的骨髓细胞植入SCID－hu小鼠皮下的人类胎儿骨片内，植入的髓系白血病细胞选择性生长在SCID－hu小鼠体内的人类造血微环境中，即为人类髓系白血病的小鼠模型。SCID小鼠是由于其scid所致。T、B淋巴细胞功能联合缺陷，这种小鼠能接受人类器官移植物。 造模方法：
银屑病药效学动物模型及其在中药新药研究中应用的思考
006111 7 栏目中药药物评价>>非临床安全性和有效性评价 标题银屑病药效学动物模型及其在中药新药研究中应用的思考 作者韩玲 部门 正文内容 审评一部韩玲 摘要：本文综述了银屑病药效学动物模型的进展，对治疗银屑病中药新药 药效学研究方面存在的问题进行了分析，提出了应结合银屑病发病机制的 研究进展完善药效学方法学研究的建议。 银屑病是一种慢性复发性皮肤病，其发病机制复杂，至今尚未明了。可能是一种具有基因遗传特性的疾病，也与感染、内分泌机能障碍、免疫功 能紊乱等有关。中医学认为以风湿毒邪内侵为标，血虚、血燥为根源，血 热、血虚、血瘀是本病的基本病机，故清热解毒、凉血、活血化瘀、祛风 除湿成为治疗本病的基本法。 银屑病的组织病理学主要表现为角质形成细胞过度增生、炎症细胞聚集和真皮乳头部血管增生扩张三大特征，从而出现角化过度、角化不全、颗 粒层消失、棘细胞层增厚等。尽管许多不同的动物模型能复制银屑病的某 个方面的病理特征，并能解释部分病因，但长期以来仍缺乏一种能够研究 所有有关的潜在因素的动物模型。即-缺乏理想的动物模型。 一、银屑病药效学动物模型 银屑病动物模型是根据银屑病的特征，人为建立的一种与之相似的模型。 有人总结了银屑病动物模型的建立过程，包括以下4个不断完善的阶段： 1．诱发性动物模型 该模型是通过工方法在动物，如豚鼠、大鼠等皮肤上诱发银屑病样增生。
其方法包括紫外线照射、化学刺激剂外涂或药物外涂、缺乏必须脂肪酸的饲料喂养等。这些方法均为过度增殖模型，可引起表皮增生加快。但这些方法仅是针对表皮损伤的一种迟发反应，持续时间较短。 如缺乏必须脂肪酸饲料喂养的大鼠模型，因缺乏必须脂肪酸，故可使大鼠皮肤逐渐出现角化过度、棘层肥厚、基底细胞有丝分裂加快，DNA合成增加等变化，表皮细胞呈慢性增生状态，与药物诱发的急性表皮增生相比，其与银屑病更为相似。 如心得安诱导银屑病动物模型，是利用心得安特有的药理作用，即心得安可阻断角阮细胞的β-肾上腺能受体而降低了细胞内cAMP水平所致。应用后可出现动物表皮角化过度、角化不全和棘层肥厚等类似银屑病的组织病理改变，其皮损并非是刺激性皮炎。黄畋[1]和Gaylarde[2]等分别用心得安成功地在豚鼠背部和耳部皮肤上制备了银屑病样皮肤模型，并发现药物可抑制其所致的表皮异常角化与增殖、角化不全等。 已有研究[3-4]发现IL-20是与银屑病密切相关的细胞因子，在体外可明显促进角质形成细胞增殖；IL-20的转基因鼠可出现皮损，其组织病理学改变与人类银屑病有相似之处；此外，IL-20受体在银屑病皮损处有高表达。有人在心得安造模的基础上，利用原位杂交等方法检测了动物皮损中IL-20 及角蛋白的K14,K16，K17表达水平的变化情况，发现正常皮肤IL-20的表达仅限于基底层，且为低表达，但模型动物皮损中基底层及棘层均有高表达，且显著高于正常组。应用IL-20反义寡核苷酸外涂皮肤后，可使其明显好转。也观察到皮损中角蛋白K14,K16表达水平明显增高。提示心得安所致的豚鼠银屑病样动物模型不仅在组织病理学，而且在分子水平上与人类银屑病皮损一致。从而在分子水平上证实了此动物模型的可行性。 上述这些方法的优点是可在短时间内复制出某些方面与银屑病相似的动物模型，方法简便、易行、重复性较好，可用于表皮增殖动力学、药物筛选等研究，但这些模型只是模拟了银屑病中的部分组织病理特征，在许多方面与诱发或自然产生的疾病毕竟存在差异。 2．裸鼠-皮损移植模型 该模型是将银屑病人皮损组织移植到裸鼠背部。其具体方法是，选择经组织学证实，2周内未经任何治疗的寻常型银屑病患者的典型皮损，麻醉后取全层皮肤，裸鼠背部麻醉后切除部分圆形皮肤至肌肉筋膜，将皮损间段缝合到移植点。因裸鼠是先天性无胸腺小鼠，其免疫缺陷，在一定情况
建立小鼠肿瘤模型的研究进展
建立小鼠肿瘤模型的研究进展 摘要：建立一种理想的肿瘤动物模型对研究肿瘤的发病、治疗和预防有重大的意义。其中小鼠肿瘤模型具有生长周期快、易获得、易操作等优点被基础实验研究所广泛采用，如何选择和建立一个合适的小鼠肿瘤模型对肿瘤的整个研究有着举足轻重的作用。 关键字：肿瘤，动物模型，小鼠 肿瘤，是一种严重威胁人类健康的多发病和常见病。对肿瘤的研究一般都是在人类疾病动物模型的基础上展开的。建立一个完全反映人类疾病的动物模型比较困难，但可依据不同的实验目的选择相应的动物实验模型。 1.实验动物的选择 可用作肿瘤模型的动物有很多，小鼠肿瘤模型作为其中一种常用模型主要因为有以下几个优点。（1）易获得，常用的肿瘤模型小鼠通常采用SPF级小鼠，SPF级小鼠一般医学院校及研究所都能买到。（2）生长周期短，一般小鼠肿瘤模型两周左右就能长大，能大大缩短实验周期。（3）易操作，小鼠的动物实验操作一般简便，因此可适当增加组内样本数量，使实验数据更具说服力。 2.理想的建立肿瘤模型应具备的条件 （1）肿瘤生长的过程应与人类肿瘤生长过程相似，做到尽可能复制出与人类肿瘤相同的模型。 （2）制作模型的方法简单易行。 （3）动物模型的重复性要好，要能满足实验的多次重复试验结果稳定性好。 （4）采用的建模方法对实验人员和环境无危害或危害较小。 3.肿瘤来源的选择 现在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，P1534淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉瘤180，白血病P388，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白血病，Ｗagner癌肉瘤，白血病L5170Y，P1798淋巴肉瘤，LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway骨肉瘤，Gardner 淋巴肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交鼠移植。它们对抗癌药作用的敏感性大致可分
肿瘤动物模型的构建——白血病篇
肿瘤动物模型的构建——白血病篇 导读白血病( Leukemia )是一种常见的恶性血液疾病，俗称血癌。据统计，白血病是儿童恶性肿瘤的头号原因，在儿童及35 岁以下成人中发病率位居第一[1] 。同时也是十大恶性肿瘤之一。目前，白血病具体的发病原因至今尚未研究透彻，因此建立合适的白血病动物模型，对于白血病发病机制及药物研发具有重要意义。本期为大家综述了白血病的基本情况及小鼠模型的分类、建立方法和应用。 第一章：白血病基本常识白血病是常见液体瘤白血病是常见的液体瘤，与结肠癌、肝癌等实体瘤不同的是，它是造血干细胞的异常分化和过度增殖导致，因此肿瘤细胞会遍布全身，会侵犯身体的每个脏器，造成全身衰竭。造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，具有长期自我更新和分化成各类成熟血细胞的能力。如下图为造血干细胞可分类形成各种血细胞，如红细胞、血小板和白细胞：造血干细胞分化成各类血细胞(图片来自https://www.wendangku.net/doc/e47739978.html, 网站) 白血病致病因素有哪些呢？ 现阶段认为白血病的发病因素：化学因素、电离辐射、药物、毒物、病毒、遗传因素等有关。 白血病主要分为四类 根据白血病细胞的成熟程度和自然病程，白血病可分为急性
和慢性两大类，临床上，白血病共分为四大类：急性髓系白 血病（AML ）、急性淋巴细胞白血病（ALL ）、慢性髓系白血病（CML ）和慢性淋巴细胞白血病（CLL ）。儿童白血病90% 以上是急性的，其中急性白血病中70% ～80%是ALL。第二章：实验研究所用白血病模型首先，来了解一下常用 的细胞株白血病中常用的小鼠品系用于建立白血病小鼠模型的小鼠可分为近交系和突变系。根据不同类型和目的选择不同的小鼠品系，具体如下图所示：最后说说常用的动物模型，主要分为三类： 一、异种移植模型异种移植模型是最常用的淋巴瘤动物模型。根据实验目的选择相应的小鼠品系和细胞株后，通常细胞的接种方式为皮下注射、腹腔注射和尾静脉注射。 皮下注射和腹腔注射操作简单，很快在接种部位形成肿瘤或 腹腔内形成多发性肿瘤，适合筛选针对白血病的药物。但该 类模型与白血病临床病人实际情况差距较大。异种移植型白 血病模型异种移植示意图[2] 尾静脉注射接种模型，可形成全身性扩散的白血病模型。符 合白血病临床过程规律，此模型以动物生存期作为评价药效 的主要指标，并对采血样本进行血细胞的形态学检测。下面以尾静脉注射模型实验步骤为例： 根据实验目的选择实验小鼠和细胞（如NOD-SCID 小鼠和人急性早幼粒细胞白血病细胞株）；荷瘤细胞量一般1-2 ×
2型糖尿病大鼠模型研究概况
2型糖尿病大鼠模型研究概况 【摘要】目的：综述近年来2型糖尿病(T2DM)大鼠模型的研究进展及对其优缺点进行评价和未来同类模型的展望。方法：主要对T2DM大鼠模型的建立技术和方法进行综合性评价。结果：T2DM大鼠模型目前可以分为自发性T2DM 和实验性T2DM模型,且仍有较大发展空间。结论：经过综合评价研究，认为各种建模方法均有优缺点，目前较认可的是实验性T2DM大鼠模型，因价格低廉，造模方便而广受欢迎，但仍缺乏一定的造模标准。 【关键词】2型糖尿病；动物模型；研究概况 随着经济社会的发展，人们的饮食结构、生活方式等发生了很大改变，糖尿病发病率显著上升，尤其T2DM占了较高比例，大概占了糖尿病发病率的90%。T2DM是因人体胰岛素分泌相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低继而引发糖、蛋白质、脂肪和水电解质等代谢紊乱所导致的疾病。患者典型表现为三多一少，即多饮、多食、多尿表现，同时还伴有身体消瘦、疲乏、烦躁、口渴等临床症状。 选择一些合适的动物模型进行动物试验成了我们研究糖尿病的良好途径，我们可以从中比较一些糖尿病药物的作用效果以及其药动学的特点，在临床用药上对评价某套治疗方案的可行性及预后等具有十分重要的参考意义。 目前研究的临床T2DM动物模型主要集中在大鼠上，这可能是由于大鼠作为T2DM动物模型相对较稳定且与人T2DM表现相似的优点。因此我们在下面综述近几年来国内外有关临床T2DM大鼠模型研究的情况。 总体上来说，目前临床T2DM研究的大鼠模型主要分为两类，一类是自发性T2DM大鼠模型，另一类则是实验性T2DM大鼠模型，考虑到成本及方便程度，目前以后者居多。 1 实验性T2DM大鼠模型 1.1 单纯高脂高糖引发的T2DM 在试验中，通过较长时间给予大鼠过量的高糖高脂饮食，发现能够诱导出较满意的T2DM大鼠模型，从而能为进一步研究奠定良好的基础。目前认为其机理可能是高糖高脂饲料会导致胰岛B细胞超负荷，进而使胰岛细胞发生损伤、萎缩甚至死亡，胰岛的功能因此下降，继而建立起伴胰岛素抵抗的T2DM模型。鲁瑾[1]等采用61%的高脂饮食，饲养大鼠7周后，大鼠就出现了高胰岛素血症，且形成了明显的胰岛素抵抗，是一个十分可靠的胰岛素抵抗模型。张丽锋[2]等给予W istar大鼠脂肪热比为59%的饲料, 喂养4周，均出现胰岛素抵抗，多项研究试验表明高脂饮食可以诱发产生可靠的糖尿病大鼠模型。 1.2 应用STZ药物诱导产生的大鼠模型由于高糖高脂饲料相对用时较长，且饲料成本相应较高，因此合理使用链脲菌素(STZ)是目前许多研究者所推崇的
小鼠肿瘤模型
小鼠肿瘤模型 肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。其中用得最多的是皮下模型，另外还有腹水（或者尾静脉注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他们了。 小鼠模型分三大类：第一类是以S180、EAC、H22等为代表的，他们的宿主小鼠多选用KM，可产生腹水，也可在皮下成瘤。多以腹水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接踵后第二天开始给药，给药7到10天，接种10天后结束试验，剥取肿瘤称瘤重。 1. 关于构建瘤种 可以用体外细胞株培养后，用PBS悬浮至1~3×106/0.1ml/mouse，i.p接种即可，最好用6号左右的针头，就是常用的2ml一次性注射的针头。 2. 关于腹水传代 观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约8~9天左右），可以传代，传代时取1ml 注射器，用2ml注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个0.5ml就可以了，不用离心，直接用PBS3~6倍稀释后，接种到新的老鼠腹腔，腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的，但是血性腹水说明不好，需要注意调整，第二代以后，尽量6~7天的时候传代，不要等的时间太久，否则腹水容易血性。三代后可用于试验。 3. 关于接种进行试验 这个时候抽取的腹水需要量比较多，一般需要处死种鼠后，小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤，注意不要弄破肌肉，然后，用镊子（最好是哪种前面有倒勾的镊子，学名好像是唇型镊）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪开一个小口，然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。然后进过一定的稀释后，接种到小鼠的腋下。关于稀释量，各个实验室的情况都不一样，最好摸索一下，开始的时候可以适当的计数，但是要用台盼兰染色后计活细胞数。接种部位在小鼠腋下，但是不要深入到腋窝里面，会给以后的操作带来麻烦。接种时的进针处离接种处远一点，让针头在皮下多走一段，不容易污染。有的人接种的时候喜欢针头向上用力，紧贴着表皮往里走，然后注射的时候感觉阻力较大，打出来的皮丘又紧又圆，这样的接种，会使肿瘤与皮肤严重粘连，不利于最后肿瘤的剥取。也不要紧靠肌肉，肿瘤会与肌肉严重粘连。应该在两者之间，进针的感觉轻松自如，针头很自由，虽然打出来的肿瘤不会很圆很漂亮，但是相对好剥取一些。 4. 关于观测指标 主要是按时称体重，试验结束后剥取肿瘤称瘤重。因为出瘤已经是接种后的第6天左右了，第10天就结束时间，瘤体积的数据意义就不大。小鼠肿瘤很难剥，这是没有办法的，只能耐心，没有太好的办法，剥多了以后，手上会掌握一些巧力，有一些帮助，但是我们还是很头痛小鼠肿瘤试验结束。肿瘤组织周围经常会有一些血窦的形成，弄破后会有血和黄色的液体流出，正常的，但是剥瘤子的时候不要把它弄破，会严重影响瘤重。按照SFDA的规定，平均瘤重小于1g，或
氧化苦参碱对银屑病样小鼠模型氧化应激的拮抗作用
氧化苦参碱对银屑病样小鼠模型氧化应 激的拮抗作用 (作者：___________ 单位： __________ 邮编：____________) 【摘要】目的研究氧化苦参碱对银屑病样小鼠模型氧化应激的拮抗作用，探讨其防治银屑病的机制。方法采用注射雌激素刺 激小鼠阴道上皮组织增生的方法复制银屑病小鼠动物模型，同时给予 不同剂量的氧化苦参碱干预，实验10d后，取小鼠血清测定超氧化物歧化酶(SOD)总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)谷光甘肽(GSH) 及一氧化氮(NO)水平的含量，并观察氧化苦参碱对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响。结果氧化苦参碱80、40和20mg? kg-1均可抑制小鼠阴道上皮的有丝分裂(P0.01);氧化苦参碱80mg - kg-1可升高雌激素周期小鼠血清SOD和T-AOC的含量(P0.05，P0.01)，降低MDA GSH和NC含量(P0.01);氧化苦参碱40mg?kg-1可降低雌激素周期小鼠血清MDA和NC 含量(P0.05，P0.01)。结论氧化苦参碱对实验性银屑病具有保护作用，该作用可能与其抑制表皮细胞增殖并降低血清 MDA GSH及NO含量，升高SOD和T-AOC的含量有关。 【关键词】氧化苦参碱；银屑病;有丝分裂指数；超氧化物歧化酶；丙
二醛;谷光甘肽 氧化苦参碱（Oxymatrine , OMT是苦豆子生物碱的一种，具有抗炎、抗增殖、改善机体免疫功能等作用［1］。银屑病（psoriasis）是一种以皮肤组织为主要病理改变的慢性炎症性皮肤病。近年来研究表明，银 屑病患者体内释放大量的超氧阴离子自由基，对生物膜的结构造成广 泛损伤，引起皮肤炎症的发生［2-3］。作者通过给小鼠注射己烯雌酚的方法复制银屑病样小鼠模型［4］，观察氧化苦参碱对银屑病小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）谷光甘肽（GSH）及一氧化氮（NO）水平及阴道上皮组织细胞有丝分裂的影响，探讨了其防治银屑病的机制。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1实验动物昆明种雌性小鼠，体重18?22g，宁夏医科大 学实验动物中心提供，合格证SYXK （宁2005- 0001）。 1.1.2药品氧化苦参碱（宁夏制药厂，批号64041201）;甲氨蝶呤（Methotrexate ，MTX浙江海正药业股份有限公司，批号080903A）; 己烯雌酚（Diethylstilbestrol ，DES上海通用药业股份有限公司，批号090203）;秋水仙碱（Colchicin ，CLC昆明制药厂，批号841201）。 1.1.3 试剂和主要仪器SOD MDA GSH T-AOC和NO测试盒（南 京建成生物工程研究所，批号20091115）;752N紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）。
常用疾病动物模型
常用疾病动物模型 上海丰核可以为广大客户提供各种疾病动物模型定制服务，同时提供相关疾病模型的药物敏感性实验分析服务。 客户只需要提供疾病模型的用途及建模方法的选择，我们会根据客户的具体要求量身定做各种动物模型服务。
小鼠或裸 鼠 加贴近实际（八）心血管疾病模型 1. 动脉粥样硬化（高脂高胆固醇+维生素D喂养）兔高脂、高胆固醇饲喂兔造模，成 膜后血脂变化显著，为伴高血脂 症的动脉粥样硬化 4月血管组织病 理切片染色 2. 主动脉粥样硬化（高脂高胆固醇+主动脉球囊损伤）兔此模型用大球囊损伤加高脂饲 养方法成功建立兔主动脉粥样 硬化狭窄的动物模型，为相关基 础研究提供可靠模型。 2月动物实验模型病理切片展示 一、CCl4诱导的肝脏纤维化 简介：肝纤维化是肝细胞坏死或损伤后常见的反应，是诸多慢性肝脏疾病发展至肝硬化过程中的一个中间环节。肝纤维化的形成与坏死或炎症细胞释放的多种细胞因子或脂质过氧化产物密切相关。CCl4为一种选择性肝毒性药物，其进入机体后在肝内活化成自由基，如三氯甲基自由基，后者可直接损伤质膜，启动脂质过氧化作用，破坏肝细胞的模型结构等，造成肝细胞变性坏死和肝纤维化的形成。通过CCl4复制肝纤维化动物模型通常以小鼠或大鼠为对象，染毒途径主要为灌胃、腹腔注射或皮下注射。 动物模型图. 经过3个月的CCl4注射造模，小鼠的肝脏在中央静脉区形成了比较明显的肝纤维化，中央静脉之间形成了纤维桥接。（Masson染色） 二、CXCL14诱导的急性肝损伤动物模型
简述：CCl4是最经典的药物性肝损伤造模毒素之一，其在肝内主要被微粒体细胞色素P450氧化酶代谢，产生三氯甲烷自由基和三氯甲基过氧自由基，从而破坏细胞膜结构和功能的完整性，引起肝细胞膜的通透性增加，可溶性酶的大量渗出，最终导致肝细胞死亡，并引发肝脏衰竭。根据CCl4代谢和肝毒性机制可复制不同的肝损伤模型，其中给药剂量和给药方法是其技术关键。对于复制急性肝衰竭动物模型，往往采用大剂量一次性灌胃或腹腔注射给药。 图. (A) CCl4注射后0.5 d的HE染色表明CXCL14过表达增加了肝脏组织的嗜酸性变性面积(在照片中用虚线标记)(p < 0.05)。 (B) 1.5天组织样本的HE染色表明CXCL14过表达造成了比对照组更大面积的细胞坏死(p < 0.05)。 (C)同时还造成了中央静脉周围肝细胞中明显的脂肪滴积累。图中P和C分别表示动物模型的门静脉和中央静脉。KU指凯氏活性单位。 细胞凋亡检测结果 TUNEL标记没有显示CXCL14免疫中和小鼠和对照小鼠在凋亡细胞数量上的差异。C0, C1和C2分别是对照组0 d，1 d,和2 d样本，T1
大鼠二型糖尿病造模方法
大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020
大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两
肿瘤动物模型的构建——白血病篇知识讲解
肿瘤动物模型的构建——白血病篇
肿瘤动物模型的构建——白血病篇 导读白血病（Leukemia）是一种常见的恶性血液疾病，俗称血癌。据统计，白血病是儿童恶性肿瘤的头号原因，在儿童及35岁以下成人中发病率位居第一[1]。同时也是十大恶性肿瘤之一。目前，白血病具体的发病原因至今尚未研究透彻，因此建立合适的白血病动物模型，对于白血病发病机制及药物研发具有重要意义。 本期为大家综述了白血病的基本情况及小鼠模型的分类、建立方法和应用。 第一章：白血病基本常识白血病是常见液体瘤 白血病是常见的液体瘤，与结肠癌、肝癌等实体瘤不同的是，它是造血干细胞的异常分化和过度增殖导致，因此肿瘤细胞会遍布全身，会侵犯身体的每个脏器，造成全身衰竭。 造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，具有长期自我更新和分化成各类成熟血细胞的能力。如下图为造血干细胞可分类形成各种血细胞，如红细胞、血小板和白细胞： 造血干细胞分化成各类血细胞（图片来自https://www.wendangku.net/doc/e47739978.html,网站）白血病致病因素有哪些呢？ 现阶段认为白血病的发病因素：化学因素、电离辐射、药物、毒物、病毒、遗传因素等有关。
白血病主要分为四类 根据白血病细胞的成熟程度和自然病程，白血病可分为急性和慢性两大类，临床上，白血病共分为四大类：急性髓系白血病（AML）、急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性髓系白血病（CML）和慢性淋巴细胞白血病（CLL）。儿童白血病90%以上是急性的，其中急性白血病中70%～80%是ALL。 第二章：实验研究所用白血病模型首先，来了解一下常用的细胞株白血病中常用的小鼠品系 用于建立白血病小鼠模型的小鼠可分为近交系和突变系。根据不同类型和目的选择不同的小鼠品系，具体如下图所示： 最后说说常用的动物模型，主要分为三类： 一、异种移植模型 异种移植模型是最常用的淋巴瘤动物模型。根据实验目的选择相应的小鼠品系和细胞株后，通常细胞的接种方式为皮下注射、腹腔注射和尾静脉注射。 皮下注射和腹腔注射操作简单，很快在接种部位形成肿瘤或腹腔内形成多发性肿瘤，适合筛选针对白血病的药物。但该类模型与白血病临床病人实际情况差距较大。异种移植型白血病模型异种移植示意图[2]
银屑病药效学模型及结果评价-姚治 孙涛
发布日期20061110 栏目化药药物评价>>非临床安全性和有效性评价 标题银屑病药效学模型及结果评价-姚治孙涛 作者姚治孙涛 部门 正文内容审评三部姚治、孙涛 摘要：近来国内创新性的抗银屑病药物的申报呈上升趋势，但由于银屑病发病机制不完全清楚，现有药效学模型与 临床的相关性尚存在一定问题，给研究和评价带来一定困难。本文整理总结了现有的一些抗银屑病体内外药效学模 型和试验方法，并对其结果的评价价值做了一定探讨。希望对相关研究和评价提供参考。 关键词：银屑病、药效学、评价 银屑病是以表皮角质形成细胞过度增殖和分化不全、真皮浅层微血管扩张并伴有炎症反应为病理特征的表皮角化性皮肤病，其发病机制迄今尚未完全清楚。综合近年来的研究报道，关于银屑病发病的新概念认为：银屑病是多基 因遗传背景下T细胞失常的免疫性疾病，表皮过度增殖与分化异常和炎症等疾病现象涉及到细胞和分子水平的异常 调控，后者是指在银屑病中异常表达的免疫分子、细胞因子、炎症介质和调节分子。国外文献报导ET-1(内皮素1)、 sE-selectin（可溶性选择素E）、sIL-2R（可溶性白介素2受体）、IL-6（白介素6）、IL-8（白介素8）、CD4+/CD8+ 等与银屑病有关。 下面简要介绍一下几种与银屑病有关的体内外药效学试验模型及结果评价： 一、体内试验 表皮细胞增殖过快和角化不全是银屑病的基本病理特点，小鼠尾部鳞片的表皮缺乏颗粒层的形成，雌激素周期的小鼠阴道上皮细胞增殖活跃，上皮细胞转换加快，均与人银屑病表皮病理特征相似。药物如能抑制小鼠阴道上皮有 丝分裂和促进鼠尾颗粒层形成，就可能具有抗银屑病作用。下面两种方法是被广泛使用的较为经典的银屑病药效学 模型： 1、对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响试验 雌性小鼠预先注射雌激素（如乙烯雌酚）数日，使其处于雌激素生理周期。阴道给予药物数日，末次给药后腹腔注射秋水仙碱以终止细胞分裂。取小鼠阴道组织，固定，染色，观察阴道上皮细胞的有丝分裂指数。常以甲氨蝶呤 为阳性对照。 若试验结果表明药物有抑制阴道上皮细胞的有丝分裂的作用，则可提示对银屑病的疗效。 2、对小鼠尾鳞片表皮细胞生成的影响试验 取小鼠，将试验药物直接在尾部外涂给药一定时段(一般为2周)，取尾根部皮肤，固定，染色，测量鼠尾表皮厚度和颗粒形成情况。 若试验结果表明药物有促进鼠尾颗粒层形成作用，则可提示对银屑病的疗效。 3、对盐酸普奈洛尔所致豚鼠耳部皮肤银屑样皮损的影响 采用盐酸普奈洛尔乳剂型搽剂（5％）连续涂抹豚鼠两侧耳廓皮肤，每日2次，连续2周后取少量豚鼠的两侧耳廓皮肤，固定，染色，光镜观察评价造模质量。于耳廓皮肤涂抹给药，每日2次，连续2周。同法观察耳部皮肤的角 化层、颗粒层、棘细胞层、基底细胞层及固有层的变化情况，并测定表皮厚度。
白血病小鼠H_2全不相合微移植模型的建立及鉴定
文章编号（Article ID ）：1009－2137（2014）03－0779－06 ·论著· 白血病小鼠H-2全不相合微移植模型的建立及鉴定吴惠惠，刘铁强，孙雪冬，黄晓梅，张锐，刘志强，满秋红，黄雅静， 孙琪云，左红莉，乔建辉，余长林，胡锴勋，艾辉胜，郭梅 * 军事医学科学院附属医院血液科，北京100071 摘要本研究旨在建立白血病小鼠H-2全不相合微移植模型并进行鉴定。受、供鼠分别为雌性BALB /c 和雄性 C57BL /6J ，H-2为全不相合。受鼠微移植前5d 静脉接种WEHI-3细胞约1?106 个，微移植前3d 开始给予MA 化疗（米托蒽醌+阿糖胞苷），0d 末次化疗后8h 之内回输经G-CSF 动员的供体脾单个核细胞，回输细胞数分别为 （3、6、12）?107 个。化疗对照组用等量生理盐水。所有受鼠不予GVHD 预防。比较各组早期死亡率、白细胞恢复及白血病负荷情况。ＲT-PCＲ法检测微移植后供体嵌合率。从临床表现和病理情况综合评价微移植组小鼠GVHD 情况。结果表明，化疗对照组早期死亡率为25%， （3、6、12）?107组分别为16．67%、8．33%、8．33%。（3、6）?107组白细胞恢复明显优于化疗对照和12?107 组（P ＜0．05）。白血病负荷（3、 6、12）?107组明显低于化疗对照组（P ＜0．01），而（6、 12）?107组明显低于3?107组（P ＜0．05）。微移植后供体成分在2周之内以微嵌合形式存在。微移植组小鼠均未发生明显GVHD 证据。结论：成功建立了白血病小鼠H-2全不相合微移植模型，为后续研究及临床微移植相关研究提供了基础。 关键词 白血病小鼠；H-2全不相合；微移植；微移植模型；微嵌合中图分类号Ｒ733．7；Ｒ332文献标识码A doi ：10．7534/j．issn．1009-2137．2014．03．038Establishment and Identification of a H-2Completely Mismatched Microtransplantation Model of Leukemia Mouse WU Hui-Hui ，LIU Tie-Qiang ，SUN Xue-Dong ，HUANG Xiao-Mei ，ZHANG Ｒui ，LIU Zhi-Qiang ， MAN Qiu-Hong ，HUANG Ya-Jing ，SUN Qi-Yun ，ZUO Hong-Li ，QIAO Jian-Hui ，YU Chang-Lin ， HU Kai-Xun ，AI Hui-Sheng ，GUO Mei * Department of Hematology ，Affiliated Hospital ，Academy of Military Medical Sciences ，Beijing 100071，China * Corresponding Author ：GUO Mei ，Associate Senior Physician．E-mail ：guom 196801@aliyun．com Abstract This study was purposed to establish and identify a H-2completely mismatched microtransplantation model of leukemia mouse．The recipients were female BALB /c mice ，while donors were male C57BL /6J mice．Ｒecipients were inoculated intravenously with 1?106of WEHI-3cells ，a cell line of myelomonocytic leukemia．Donors received 100μg /kg G-CSF mobilization through hypodermic injection ，every 12hours ，and it last 5days．Chemotherapy regi-mens was MA （mitoxantrone +cytarabine ），and it last 4days．Ｒecipients were given chemotherapy conditioning without GVHD prophylaxis after inoculation of leukemic cells for 2days ，and within 8hours after last chemotherapy received do-nor mobilized spleen mononuclear cells （sMNC ）．The number of sMNC was （3、6、12）?107，respectively．The early death rate ，recovery level of WBC in peripheral blood and leukemia load were compared between chemotherapy and mi-crotransplantation groups．The donor chimerism was detected by ＲT-PCＲ．From the clinical manifestation and pathologi-cal features ，the GVHD in recipients was evaluated．The results showed that the early mortality in chemothearpy group was 25%，meanwhile those in the （3、6、12）?107groups were 16．67%、8．33%、8．33%，respectively．The （3、6）?107groups has a stronger hematopoietic recovery capability than that in chemotherapy and 12?107groups （P ＜0．05）．There were more leukemic cells in chemothearpy mice than that in microtransplantation mice （P ＜0．01），and （12、6）?107groups had lower leukemia load than that in 3?107group （P ＜0．05）．No signs of GVHD were observed in microtrans-plantation mice．The donor microchimerism could be discovered at eraly 2weeks after donor cell transfusion．It is con-cluded that a H-2completely mismatched microtransplantation model of leukemia mouse has been successfully estab-lished ，and it will provide a experimental base for studing microtransplantation in clinic．Key words leukemia mouse ；H-2completely mismatched ；microtransplantation ；microtransplantation model ；mi-crochimerism J Exp Hematol 2014；22（3）：779－784 基金项目：国家自然科学基金面上项目（861739）；国家自然科学基金重点项目（81130054）；首都临床特色应用研究（Z1211070001012082）* 通讯作者：郭梅，副主任医师， E-mail ：guom196801@aliyun．com 2014－03－11收稿；2014－03－25接受 · 977·中国实验血液学杂志Journal of Experimental Hematology 2014；22（3）：779－784
小鼠肿瘤模型
肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。其中用得最多的是皮下模型，另外还有腹水（或者尾静脉注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他们了。 小鼠模型分三大类：第一类是以S180、EAC、H22 等为代表的，他们的宿主小鼠多选用KM可产生腹水，也可在皮下成瘤。多以腹 水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接踵后第二天开始给药，给药7到10天，接种10天后结束试验，剥取肿 瘤称瘤重。 1.关于构建瘤种 可以用体外细胞株培养后，用PBS悬浮至1~3X 106/mouse,接种 即可，最好用6号左右的针头，就是常用的2ml 一次性注射的针头。 2.关于腹水传代 观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约8~9 天左右），可以传代，传代时取1ml注射器，用2ml注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个就可以了，不用离心，直接用P BS3~6倍稀释后，接种到新的老 鼠腹腔，腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的，但是血性腹水说明不好，需要注意调整，第二代以后，尽量6~7 天的时候传代，不要等的时间太久，否则腹水容易血性。三代后可用于试验。 3.关于接种进行试验 这个时候抽取的腹水需要量比较多，一般需要处死种鼠后，小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤，注意不要弄破肌肉，然后，用镊子（最好是哪种前面有倒勾的镊子，学名好像是唇型镊）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪开一个小口，然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。然后进过一定的稀释后，接种到小鼠的腋下。关于稀释量，各个实验室的情况都不一样，最好摸索一下，开始的
白血病小鼠模型的建立与应用现状_周晓燕
白血病是造血组织的恶性增殖性疾病，其特点是骨髓及其它造血组织中大量无核细胞无限制增生，进入外周血液，临床表现以骨髓、脾、肝等造血器官中的白血病细胞恶性增生与肿大，并浸润到全身各组织脏器中，伴有不同程度的贫血、出血、感染发热以及骨骼疼痛。白血病的发病率和死亡率逐年增加，居35岁以下青少年恶性肿瘤的首位。 小鼠（mouse，musculus）属哺乳纲（Mammalia）啮齿目（Rodentia）鼠科（Muridae）动物，在遗传学与造血系统等方面和人类十分相似，因此建立小鼠白血病模型以研究人类白血病的细胞分子生物学特性、生化免疫特征、病理生理改变、发病机制以及药物治疗和预后具有重要意义，本文就白血病小鼠模型的建立与应用现状进行综述。 1 建立白血病模型的小鼠种类 目前最常用于建立白血病模型的有近交系（inbred strain）和突变系（mutant strain）小鼠。 1.1 近交系（inbred strain）小鼠 主要包括：BALB/c小鼠、C57BL小鼠、AKR 小鼠、L615小鼠等。 1.1.1 BALB/c小鼠：基因型为Aabbcc，毛白色，其特征是肝、脾等富于网状内皮细胞的器官所占与体重比值较大。BALB/c小鼠的白血病发病率雌性为12%，雄性为10%，对放射线极度敏感，常用于单克隆抗体和免疫学研究，在白血病研究中较常使用。 1.1.2 C57BL小鼠：基因型为aaBBCC，毛黑色，对Graf?白血病因子较敏感，而对化学致癌物诱导作用敏感性低，但全身经放射线照射后，淋巴瘤发生率可达90%~100%。Noren nystrm等[1]用C57BL/6小鼠建立了T淋巴细胞白血病动物模型来评价血管形成抑制因子TN P2470的抗肿瘤效应。 1.1.3 AKR和 C58自发白血病小鼠：其它近交系小鼠还有AKR和 C58自发白血病小鼠。AKR小鼠最早由洛克菲勒大学随机交配而得，后获得“淋巴瘤病”原种，继而选择培育成白血病高发品系，基因型为aaBBcc，带Thy-la基因，缺乏补体C5，容易诱发免疫耐受性，对白血病因子敏感。当AKR小鼠发育 白血病小鼠模型的建立与应用现状 周晓燕 邹琳★ [摘 要] 小鼠是白血病研究中最重要的动物模型，本文主要综述了白血病小鼠模型的建模方法和研 究进展，以及白血病小鼠模型在医学领域中的应用。 [关键词] 白血病；小鼠；动物模型 Establishment and application of leukemia mouse model ZHOU Xiaoyan，ZOU Lin★ (Center for Clinical Molecular Medicine at Children's Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400014, China) [ABSTRACT] The mouse is one of the most important animal models in the leukemia study. Here, we mainly reviewed the establishment methods, research progress, and the application of leukemia mice model in the medical ?led. [KEY WORDS] Leukemia; Mouse; Animal model 基金项目：国家自然科学基金（90919013，30871103）；重庆市自然科学基金（CSTC2008BB5072，CSTC2010BA5008）；教育部“新世纪优秀人才支持计划”（2008-CET） 作者单位：重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心，重庆 400014 ★通讯作者：邹琳，E-mail: zoulin_74@https://www.wendangku.net/doc/e47739978.html, ?综述?