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细胞生物学

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题目鸡胚成纤维细胞原代培养及应用

班别生物技术101班学号 10114040132

姓名林海州

成绩

鸡胚成纤维细胞原代培养及应用

摘要:原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原

有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、

性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关

鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方

向。

关键词:鸡胚成纤维细胞;原代培养;分离;纯化

1.前言

原代细胞培养因具有细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大变化,具备二倍体的遗传性、来源方便等优点而广泛应用于病毒学、细胞分化、药物测试等试验中。在禽类原代细胞培养中,鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast , CEF) 得到普遍应用。CEF 的培养是在一定的条件下,在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的成纤维组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。早年的组织培养工作者,如Carrel 等曾用鸡胚做过大量研究工作。与其他细胞相比,CEF 相对容易获得,而且增殖能力强,适应性强,具有良好的耐受性,性状比较稳定,不易发生转化。正是具备以上的特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学的研究的许多方面。

2 鸡胚成纤维细胞的制备

2. 1 取材

CEF 细胞的制备一般选用9 日龄～11 日龄的SPF 鸡胚,鸡胚日龄不宜过大,否则剪碎组织时候较为困难,而且杂细胞也会较多。可参考的方法是,分别用碘酒和酒精棉由鸡

胚中央向四周擦拭消毒,然后放入超净台,将有气室的部位朝上,小心地用无菌镊子磕破蛋壳,沿气室边缘夹掉蛋壳,注意不让蛋壳碎屑落入蛋内,换用新的无菌镊子揭开尿囊绒毛膜,再用弯头镊子深入胚内夹住鸡胚颈部取出,放入平皿中,将取出的鸡胚去头、四肢、内脏,放入一小烧杯中,然后用眼科手术剪刀仔细将组织反复剪碎,直到成1 mm3左右的

小块,再用HBSS 清洗3 遍,至组织块发白为止。

2. 2 分离

在培养液中1 mm3 的鸡胚成纤维细胞组织块,仅有少量处于周边的细胞可能生存

和生长。若要获得大量生长良好的成纤维细胞,须将组织分散开,使细胞解离出来。目前,分离CEF 的方法主要是以胰蛋白酶和胶原酶的酶消化法为主。胰蛋白酶适用于消化细胞间质较少的软组织(如胚胎、上皮、肝、肾等组织) ,其消化效果主要与p H、温度、胰蛋白酶的浓度、组织块的大小和硬度有关,钙、镁离子和血清均对该酶有抑制作用。胶原酶适用于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织等,在钙、镁离子和血清存在的情况下仍具有活性,因此使用该酶消化后需要清洗细胞。相对于胰蛋白酶,胶原酶的价格昂贵,增加了试验成本,所以研究中胰蛋白酶应用最为广泛。可参考的分离方法是,将剪碎的组织块移入广口瓶中,加入适量的2. 5 mg/ mL 胰酶,于37 ℃水浴中消化30 min 左右,每隔5 min 振荡1 次,使细胞消化均匀。当组织块变得蓬松透明时,吸弃消化液,用HB2SS 洗2 遍,终止消化。应严格控制消化时间,及时终止消化作用,以免过量消化对细胞的损伤。研究中应结合具体情况而定,如吕利奇等结合胰酶连续消化法与玻璃珠分散法制备CEF

细胞,并且认为该方法是制备CEF 细胞的最佳方法。

2. 3 纯化

机体内的细胞都混杂生长,因而从体内取得的培养材料所做的原代培养,绝大多数都呈混合生长,主要表现为两大类,即上皮样细胞和成纤维样细胞。纯化方法分为人工纯化和自然纯化,人工纯化包括酶消化法、机械划除法、反复贴壁法、克隆法、流式细胞仪分离法等。应视具体情况,选择合适的纯化成纤维细胞的时机和方法。当成纤维细胞比例较大,上皮样细胞生长缓慢、较少时,就不需要做清除处理,通常传代之后可逐渐自然清除上

皮样细胞。成纤维细胞与上皮样细胞生长都比较旺盛、且比例相当时,应尽量等培养物长成单层后处理。这样成纤维细胞数目较多,去除上皮样细胞的成功率较高。研究中多联合运用酶消化法和反复贴壁法来达到纯化成纤维细胞的目的。由于上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶耐受性不同,在消化培养细胞时,常常是成纤维细胞先脱壁,而且传代后贴壁快,附着快,而上皮细胞在短时间内不能附着或附着不稳定,

稍振动即浮起,需要生长基质如胶原或其他细胞外基质成分等的支持,在原代培养早期此差别尤为明显,因此,利用这个差别,经酶消化法和反复贴壁法处理2 代～3 代后,能够完全纯化成纤维细胞。可参考方法如下:将2. 5 mg/ mL 胰蛋白酶注入培养瓶2 次,稍加摇动,让胰蛋白酶流过所有细胞,吸出消化液,将培养瓶放在倒置显微镜下观察,发现纤维样细胞变圆,部分脱壁,立即加入有血清的培养液终止消化,用弯头吸管轻轻吹打纤维样细胞生长区域,将培养瓶中的液体吸出分装于准备好的培养瓶中,放入CO2 培养箱中培养。

3 鸡胚成纤维细胞的培养

CEF 的培养相对较为容易。首先是培养器皿的选择,由于CEF 贴壁性较好,其对培养器皿的选择没有严格的要求,目前大多数研究者选用塑料、玻璃培养皿或培养瓶。为了增加贴壁细胞的表面积,张立等认为胶原型微载体(如GT22 、Cytodex23)是CEF 最适合的微载体。其次是培养基和培养介质的选择,用于CEF 的常用培养液有乳汉液、199 培养液及DMEM 培养液等。多数研究者一般使用含有血清的DMEM 培养基。血清中的生长因子对于成纤维细胞有较强的促有丝分裂作用,并可通过诱导终末分化抑制上皮细胞的增殖。研究中添加的血清达到100 mL/ L 以上,对于有效抑制上皮细胞的增殖具有重要作用。另外,不同来源的血清,在培养时虽然质量分级一样,但细胞生长情况也会有显著差异,因此在研究同一细胞时尽量使用同一批次的相同等级血清。再者是培养条件的选择,动物细胞一般适宜的p H 范围为7. 2～7. 4 ,当p H 偏低或偏高时均会影响细胞的正常生长,而向培养基中加入NaHCO3 或HEPEs 能有效起到平衡的p H 的作用。研究中大多数人用37 ℃,体积分数为5 %的CO2 培养箱中培养CEF 细胞,但也有用38. 5 ℃或39 ℃的培养温度。

4 鸡胚成纤维细胞的应用

CEF 细胞良好的耐受性使之易于进行从基因转染到微注射等较多领域的研究,还被广泛应用于病毒学领域的相关研究,同时也是疫苗生产的一种重要的细胞资源。现在它被用来生产各种鸡的疫苗,如传染性法氏囊病、马立克病、新城疫疫苗等,也被用来表达一些基因工程产物。CEF 的原代培养在分子生物学、细胞学、遗传学、免疫学、肿瘤学及细胞工程学等领域,已发展成为一门重要的生物技术,并取得显著成就。CEF 之所以能够增殖病毒是因为细胞上有病毒受体。然而Brandt M 等研究表明, IBDV 超强毒株无CEF 细胞受体, 在其传代致弱过程中,VP2 基因的几处核苷酸改变导致其细胞嗜性的改变,然而致弱毒株与CEF 如何作用及病毒的CEF受体还未见相关报道。CEF 细胞cDNA 文库的成功构建为筛选和研究CEF 上病毒受体分子奠定了基础,同时也为研究其他适应于CEF 上生长的病毒提供可靠的试验基础,而且文库也可用于CEF 相关功能蛋白的研究。在分子生物学领域,陈学辉等用RNA 干扰(RNAi) 试验成功阻断了CEF 的32磷酸甘油醛脱氢酶基因( GAPDH) 的表达,傅安静等用脂质体转染试剂转染化学合成的GFP2siR2NA ,成功地干涉了腺病毒载体介导的GFP 基因在CEF 的表达,这为利用RNAi 技术,通过阻断基因表达而研究病毒和鸡的基因功能奠定了基础;姜世金等利用CEF 细胞来表达马立克病病毒(MDV) 的pp38 基因; Ravindra P V 等利用CEF 接种新城疫病毒(NDV) 后,通过检测发现NDV 的HN 蛋白引起了CEF 的细胞凋亡。另外,高喜梅等利用CEF 接种MDV 后,用微卫星标记技术对CEF 的部分染色体上微卫星不稳定性进行了研究;Sharma A等的研究结果表明,CEF 也可用于细胞毒性的检测。万学琴等采用低血清法培养CEF 至单层后,以人白蛋白代替小牛血清培养的NDV 的效价和活性符合人用疫苗要求。总之,随着CEF 培养方法和技术的成熟,其也将会被应用于更广更深的研究领域。

5 展望

综上所述,鸡CEF 是一类较易获得的细胞,随着培养原理与方法的日臻完善,其大规模培养技术趋于成熟,以及相应细胞系的建立,将极大降低在诸多领域的研究困难,将会

为研究一些动物和人类疾病发挥着重要作用。研究表明,CEF 的细胞受体和细胞嗜性决定病毒是否可以增殖。因此,病毒与CEF 如何作用及病毒的CEF 受体也成为未来的研究方向。

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无限增殖的小鼠胚胎成纤维细胞系胰高血糖素样免疫反应的 建立及特性描述 XXX 湖北师范学院生命科学学院生物科学专业 1101班 201111XXXXXXX 摘要 1.背景: Hh信号是一种保守的形态形成通路,它在胚胎发育中扮演至关重要的角色,新兴的证据也支持这一角色在治疗和修复过程以及肿瘤发生中的作用。胰高血糖素样免疫反应性家族的转录因子(Gli1,2和3)通过调节下游靶基因的表达来调解刺猬形态形成的信号。我们以前用来自小鼠胰高血糖素样免疫反应性的一系列胚胎成纤维细胞来描述Gli蛋白在Hh目标基因调节中的个体与合作的角色。 2.结果: 本文中,我们描述了缺乏单个和多个Gli基因自发地无限增值的老鼠胚胎成纤维(iMEF)细胞系的建立。这些非无性繁殖系的细胞系概括了独特的配体介导的转录响应早期的MEFs。然而许多Gli1对目标基因的诱导不起作用,已发现的Gli2空细胞会减弱目标基因的感应而Gli3空细胞表现出提高基底部并促进配体诱导的表达。在Gli1 - / 2 - / - iMEFs中的目标基因反应严重地降低而Gli2 - / 3 / - iMEFs 不能引发转录反应。然而,我们发现Gli1 / 2 - / -和Gli2 / 3 - / - iMEFs对Hh配体都表现出强劲的白三烯依赖性的综合迁移,这证明了这种反应不是依赖性的转录。

3.结论: 本研究提供了一系列Gli-null iMEFs转录和非转录的Hh反应的基本特征。向前推移,在Hh 反应程控中，这些细胞系被证明是一套有价值的工具，用来研究独特功能的调控。 背景 对于多种多样的生物过程，包括发育模式和器官形成，Hh信号通路是一个至关重要的调控子。这条路径从上游的Hh配体结合起始，到跨膜转运受体的碎片蛋白(Ptc1)。这减轻了碎片蛋白介导对Smoothened(Smo)的抑制,引发了复杂的下游信号级联(综述[1]]。Gli1和Ptc1是保守的Hh目标基因并且其表达水平被认为是路径活动的可靠指标。大多数Hh信号介导的生物学效应似乎都是通过Hh目标基因的转录调控被调节的,就连最近的一个非转录反应也被确定[2、3]。 在确定Hh在生长和组织与器官的形态发生中发放信号的角色时，空小鼠模型是至关重要的。在探索在通路调节中个体Hh信号介质的功能时，这些模型也被证明是很有价值的。在细胞分析中,Gli1的过度表达已经被发现可以诱导Hh目标基因的表达。小鼠的Gli1 发育正常的这一发现,推断Gli1的功能对于正常发育是可有可无的[4]。小鼠的Gli2 表现出神经管缺陷并且证明减退的Hh目标基因表达在几个组织中[5 - 7]。它支持来自基于细胞分析的研究结果[8]，即把Gli2的功能作为一个关键的目标基因的激活剂。对于Gli3空小鼠，在来自于野生型的器官中，增加的目标基因的表达暗示，Gli3的功能是抑制转录。

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系统生物学：整合各种组学的信息和方法 姓名：王玉锋 学号：061023050 20世纪生物学经历了由宏观到微观的发展过程，由形态、表型的描述逐步分解、细化到生物体的各种分子及其功能的研究。70年代出现的基因工程技术极大地加速和扩展了分子生物学的发展；90年代启动的人类基因组计划是生命科学史上第一个大科学工程，开始了对生物全面、系统研究的探索；2003年已完成了人和各种模式生物体基因组的测序，第一次揭示了人类的生命密码。人类基因组计划和随后发展的各种组学技术把生物学带入了系统科学的时代。 系统生物学是在细胞、组织、器官和生物体整体水平研究结构和功能各异的各种分子及其相互作用，并通过计算生物学来定量描述和预测生物功能、表型和行为。也就是说，系统生物学是以整体性研究为特征的一种大科学。系统生物学将在基因组序列的基础上完成由生命密码到生命过程的研究，这是一个逐步整合的过程，由生物体内各种分子的鉴别及其相互作用的研究到途径、网络、模块，最终完成整个生命活动的路线图。 借助于基因组和转录组的序列、功能基因组和蛋白质组的方法，可以绘制特定有机体的转录组图、蛋白质组图、相互作用图谱、表型组图及所有转录物和蛋白的定位图。这种整合的组学信息可以帮助我们消除单种组学研究方法中带来的假阳性和假阴性，给出基因产物及其相互作用和关系的更好的功能性注释，有利于相关的生物性假设的生成。基于这些整合数据的计算学的方法可以模拟生物过程的进程。系统生物学可以被看作是个种组学方法的整合、数据的整合、生物的系统化和模型化。 系统生物学的特点： 和以往系统科学研究复杂系统相比，系统生物学的研究将更为复杂和困难。非生物的复杂系统一般由相对简单的元件组合产生复杂的功能和行为，而生物体是由大量结构和功能不同的元件组成的复杂系统，并由这些元件选择性和非线性的相互作用产生复杂的功能和行为。因此，我们要建立多层次的组学技术平台，研究和鉴别生物体内所有分子，研究其功能和相互作用，在各种技术平台产生的大量数据的基础上，通过计算生物学用数学语言定量描述和预测生物学功能和生物体表型和行为。 系统生物学也将使生物学研究发生结构性的变化。长期以来，生物学研究是在规模较小的实验室进行的，系统生物学研究将由各种组学组成的大科学工程和小型生物学实验室有机结合实施的。系统生物学研究也将在更大范围和更高层次进行学科交叉和国际合作，如人类基因组计划、人类单体型图谱计划、人类表观基因组学计划等。 系统生物学的技术平台： 系统生物学的主要技术平台为基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学、相互作用组学和表型组学等。基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学分别在DNA、mRNA、蛋白质和代谢产物水平检测和鉴别各种分子并研究其功能。相互作用组学系统研究各种分子间的相互作用，发现和鉴别分子机器、途径和网络，构建类似集成电路的生物学模块，并在研究模块的相互作用基础上绘制生物体的相互作用图谱。表型组学是生物体基因型和表型的桥梁，目前还仅在细胞水平开展表型组学研究。 计算生物学可分为知识发现和模拟分析两部分。知识发现也称为数据开采，是从系统生物学各个组学实验平台产生的大量数据和信息中发现隐含在里面的规律并形成假设。模拟分析是用计算机验证所形成的假设，并对体内、外的生物学实验进行预测，最终形成可用于各种生物学研究和预测的虚拟系统。 系统生物学的工作流程： 系统生物学的基本工作流程有这样四个阶段。首先是对选定的某一生物系统的所有组分进行了解和确定，描绘出该系统的结构，包括基因相互作用网络和代谢途径，以及细胞内和细胞间的作用机理，以此构造出一个初步的系统模型。第二步是系统地改变被研究对象的内部组成成分（如基因突变）或外部生长条件，然后观测在这些情况下系统组分或结构

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细胞生物学概述 摘要：细胞生物学是以细胞为研究对象，从细胞的整体水平、亚显微水平、分子水平等三个层次，（斯。诺。美。A11-走在生物医学的最前沿）以动态的观点，研究细胞和细胞器的结构和功能、细胞的生活史和各种生命活动规律的学科。细胞生物学是现代生命科学的前沿分支学科之一，主要是从细胞的不同结构层次来研究细胞的生命活动的基本规律。从生命结构层次看，细胞生物学位于分子生物学与发育生物学之间，同它们相互衔接，互相渗透。 英文摘要：Cell biology is to cell as the research object, from the three levels of the overall level of the sub microscopic level, cells, molecular level (,. Connaught. Beauty. A11- in the forefront of biomedical) from the dynamic point of view, the structure and function of cells, cell and organelle of the life history and various life activities of the discipline. Cell biology is one of the frontier branch of modern life science, mainly is the basic rule to study cell from different hierarchy of life activities of cells. From the life structure and arrangement, and developmental biology is located between cell biology molecular biology, their mutual connection, mutual penetration. 关键字：细胞学说显微技术遗传物质 前言：细胞是生命的基本单位，细胞的特殊性决定了个体的特殊性，因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。在我国基础学科发展规划中，细胞生物学与分子生物学，神经生物学和生态学并列为生命科学的四大基础学科。 主体：细胞生物学(cell biology)是研究细胞结构、功能及生活史的一门科学。现代细胞生物学从显微水平，超微水平和分子水平等不同层次研究细胞的结构、功能及生命活动。细胞生物学是现代生命科学的前沿分支学科之一，主要是从细胞的不同结构层次来研究细胞的生命活动的基本规律。从生命结构层次看，细胞生物学位于分子生物学与发育生物学之间，同它们相互衔接，互相渗透。一、细胞生物学简史 从研究内容来看细胞生物学的发展可分为三个层次，即显微水平、超微水平和分子水平。i从时间纵轴来看细胞生物学的历史大致可以划分为四个主要的阶段：

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细胞生物学 课程论文 题目鸡胚成纤维细胞原代培养及应用 班别生物技术101班学号 10114040132 姓名林海州 成绩

鸡胚成纤维细胞原代培养及应用 摘要:原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原 有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、 性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关 鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方 向。 关键词:鸡胚成纤维细胞;原代培养;分离;纯化 1.前言 原代细胞培养因具有细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大变化,具备二倍体的遗传性、来源方便等优点而广泛应用于病毒学、细胞分化、药物测试等试验中。在禽类原代细胞培养中,鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast , CEF) 得到普遍应用。CEF 的培养是在一定的条件下,在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的成纤维组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。早年的组织培养工作者,如Carrel 等曾用鸡胚做过大量研究工作。与其他细胞相比,CEF 相对容易获得,而且增殖能力强,适应性强,具有良好的耐受性,性状比较稳定,不易发生转化。正是具备以上的特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学的研究的许多方面。 2 鸡胚成纤维细胞的制备 2. 1 取材 CEF 细胞的制备一般选用9 日龄～11 日龄的SPF 鸡胚,鸡胚日龄不宜过大,否则剪碎组织时候较为困难,而且杂细胞也会较多。可参考的方法是,分别用碘酒和酒精棉由鸡

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细胞自噬 2016年10月3日诺贝尔生理学奖授予日本科学家大隅良典，以表彰他发现并阐释了细胞自噬的机理，在细胞自噬研究方面做出了杰出贡献。日本东京工业大学分子细胞学教授大隅良典所带领的研究小组成功的探明了细胞自噬的启动 机制，他的研究为理解许多机体生理过程中自体吞噬的重要性奠定了坚实的基础，为揭示生命进程的发展做出了巨大的推动作用。 一、自噬的发现 20世纪50年代中期，科学家观察到细胞里的一个新的专门“小隔间”（这 种隔间的学名是细胞器），包含消化蛋白质，碳水化合物和脂质的酶。这个专门隔间被称作“溶酶体”，相当于降解细胞成分的工作站。比利时科学家克里斯汀·德·迪夫（Christian de Duve）在1974年因为溶酶体和过氧化物酶体的发现，被授予诺贝尔生理学或医学奖。 克里斯汀·德·迪夫，1974年获得诺贝尔生理学或医学奖，“自噬”这个词的命名人。 60年代的新观察表明，在溶酶体内部有时可以找到大量的细胞内部物质，乃至整个的细胞器。因此，细胞似乎有将大量的物质传输进溶酶体的策略。进一步的生化和显微分析发现，有一种新型的囊泡负责运输细胞货物进入溶酶体进行降解（图1）。发现溶酶体的科学家迪夫，创造了自噬（auotophagy）这个词来描述这一过程。这种新的囊泡被命名为自噬体。 我们的细胞有不同的细胞“小隔间”，承担不同的作用。溶酶体就是这样一种隔间，里面有用于消化细胞内容物的消化酶。人们在细胞内又观察到了一种新型的囊泡，叫做自噬体。自噬体形成的时候，逐渐吞没细胞内容物，例如受损的蛋白质和细胞器；然后它与溶酶体相融，其中的内容被降解成更小的物质成分。这一过程为细胞提供了自我更新所需的营养和材料。 在20世纪70年代和80年代，研究人员集中研究阐明用于降解蛋白质的另 一个系统，即“蛋白酶体”。在这一研究领域，阿龙·切哈诺沃（Aaron Ciechanover），阿夫拉姆·赫什科（AvramHershko）和欧文·罗斯（Irwin Rose）因为“泛素介导的蛋白质降解的发现”被授予2004年诺贝尔化学奖。蛋白酶体降解蛋白质的效率很高，一个个单个降解蛋白质，但这个机制没有解释细胞是怎么解决更大的蛋白质复合物以及破旧的细胞器的。[ 2016年诺贝尔生理学或医学奖得主大隅良典曾经活跃于多个研究领域，但 自从1988年建立了自己的实验室之后，他就主要研究蛋白质在液泡中降解的过程了。液泡也是一种细胞器，它在酵母中的地位和人体中溶酶体的地位类似。酵

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张学文简历 张学文，男，理学博士，1965年6月出生于湖南省华容县，现任湖南农业大学理学院生物技术系教授。 学历及工作简历： 1982年9月—1986年7月：湖南农学院（今湖南农业大学）园艺系本科学习，毕业获学 士学位； 1986年9月—1989年7月：湖南农学院遗传育种专业硕士研究生，主攻分子遗传学研究 方向，毕业获农学硕士学位； 1989年7月—1991年4月：湖南省农业科学院从事遗传育种研究工作，任研究实习员；1991年4月—1995年7月：湖南农业大学生物技术系，任助教、讲师； 1995年9月—1999年7月：湖南农业大学植物学专业攻读博士学位，主攻生化与分子生 物学方向。1999年毕业获理学博士学位。 1996年获得副教授任职资格并被聘为生物技术系副教授。 1997年7月—1998年8月：美国戴维斯加州大学（UniversityofCaliforniaatDavis）植 物生物系访问学者，主要从事植物发育分子生物学研究；2002年9月—2003年7月：挪威王国卑尔根大学分子生物学系访问学者，主要从事肿瘤 的细胞及分子生物学研究。 2001年8月获教授任职资格。为湖南农业大学细胞生物学硕士点领衔导师。1993年被湖南省教育厅确认为高校青年骨干教师培养对象，1999年被确认为湖南农业大学中青年骨干教师。 主讲课程： 博士生“基因工程专题” 硕士生“基因工程原理”、“分子遗传学”、“分子遗传学实验技术”、“遗传工程原理”、“生物技术概论”。 本科生“基因工程”、“现代生物技术”。

近五年研究工作简介： 1998—2000，参与国家“863”项目“草鱼抗病基因工程研究”，为项目技术负责人。2000—2003，参与国家“863”项目“草鱼抗病基因工程中试研究”。2000—2002，主持国家教育部研究课题“分离克隆水稻胚胎发生调控基因cDNA”。2001—2003，主持湖南省自然科学基因项目“水稻胚胎发生调控基因的研究”。2002—2005，主持湖南省优秀中青年基金项目“α-半乳糖苷酶基因的分离克隆及突变研究”2003—2005，主持湖南省专项科研基金项目“利用基因工程方法发酵生产α-半乳糖苷酶”。近五年主要论文著作目录 1.张学文,罗慧敏拟南芥homeobox基因A21的研究.《面向21世纪的科技进步与社会经济 发展》1999.12北京:科学技术出版社.中国科协首届学术年会交流. 2.张学文,罗泽民拟南芥同源转换盒基因A21反义RNA基因重组体构建及转化.湖南师范大 学学报.2001,27(1):79-83. 3.张学文 ArabidopsishomeoboxgeneA21isactiveindividingcells.10th InternationalCongres sonGenes,GeneFamiliesandIsozyme.1999.10Beijing. 4.张学文生物技术跨越发展的战略研究湖南省科学技术协会2001年年会优秀论文 奖,2001.9.长沙. 5.张学文,洪亚辉,赵燕植物开花时期的分子控制.湖南农业大学学报.2003,29(6):523-528. 6.唐香山,张学文饲料酶制剂研究进展广西农业科学.2004,4. 7.唐香山,张学文,章怀云α-半乳糖苷酶基因克隆及在酵母中的表达.生物工程杂志.2004,4. 8.唐香山，张学文酵母表达载体研究进展生命科学研究.2004,6. 9.陈开健,章怀云，张学文等转人α-干扰素基因草鱼饲喂大鼠的安全性研究.湖南农业大学学 报.2002.28(2):149-151.

细胞生物学在药学方面的研究综述

细胞生物学在药学方面的研究综述 摘要：细胞是生命的基础，一切生命问题的真正解决都必须在细胞中得到真正解决。细胞生物学所面临的主要任务是探索药物在细胞中的作用机制，理解新的药物靶标的细胞学基础。细胞生物学采用现代细胞生物学的原理与技术，通过揭示细胞生命活动的本质，在细胞与分子水平研究药物的吸收、转运与作用机制，来解决新药筛选，细胞工程制药等方面的难题。 关键词：细胞生物学药物筛选制药 1.新药筛选 1.1细胞周期与抗肿瘤药物 癌症的进展涉及无休止的基因突变，并通过进化选择成为最具侵袭性的肿瘤表型。这些基因突变形成了癌症的几种特质：漠视增殖、分化停止信号的存在；具备无限增殖的能力；逃避凋亡；侵袭性；新生血管生成的能力。其中前三种特质与细胞周期密切相关并为诊断及临床治疗提供了思路。[1] 林晓钢等人据Hela 细胞中的芳香族氨基酸、嘌呤以及嘧啶在细胞分裂过程中的相应变化引起的光谱变化建立Hela细胞的紫外吸收光谱模型，并且可以通过该光谱模型判读出Hela 群体大致处于细胞周期的哪一时相。[2]通过此项研究可以从细胞分子水平的变化来了解肿瘤细胞增殖周期的规律。研究细胞周期的规律与调控机制对于探索肿瘤发生机制、抗癌药物的设计和作用机制具有重要的指导意义。 1.2DNA与靶向药物 脱氧核糖核酸(DNA)是生物的基本遗传物质，是遗传信息的载体。许多分子能与DNA结合，破坏DNA的模板作用，影响基因调控和表达功能，从而诱发很多生物效应。因此DNA与靶向药物分子相互作用的研究是分子生物学和生物化学的重要领域。DNA与靶向药物分子相互作用的研究不仅可以从分子水平阐明生命过程机理、疾病的致病机制，而且可以引导药物的设计与合成、药物体外筛选以及探讨药物的治病机理。另外，对双链DNA(或单链DNA)具有选择性结合或具有序列特异性结合的靶向药物分子可以作为DNA分子杂交与否或识别特定序列

细胞生物学论文.

线粒体病的研究论文 12级生工一班蒋超（1202011023） 【摘要】线粒体产生细胞生存所必需的能量，是细胞质内带有遗传信息的细胞器。近年来，线粒体机能异常与人类疾病的关系逐渐受到人们关注，如线粒体脑肌病、线粒体心肌病、Parkinson病、Alzhcirner病等疾病相关。广义的线粒体病是指以线粒体异常为主要病因的一大类疾病。除线粒体基因组缺陷直接导致的疾病外，编码线粒体蛋白的核DNA突变也可引起线粒体病，但这种疾病变现为孟德尔遗传方式。目前还发现有一类线粒体疾病，可能涉及到mtDNA与nDNA的共同改变，认为是基因组间交流的通讯缺陷。通常所指的线粒体疾病为狭义的概念，即线粒体DNA突变所指的线粒体功能异常。 一、线粒体的功能 1.线粒体最主要的功能是氧化磷酸化氧化代谢产生的能量转化为电化学质子梯度，结果产出高能磷酸键生成ATP。在有氧条件下，电子从NADH传递到氧，获得的能量转移被用作两个线粒体膜之间质子泵。质子泵经电子向链下部传递用于能量释放并产生PH梯度和近60mv的电子梯度穿过线粒体内膜，复合物V(ATP)合成酶用这种梯度能量产生ATP。在氧化磷酸化期间，线粒体产生ROS，线粒体超氧化物歧化酶在去除反应性氧中起重要作用。ROS能损害蛋白质和核酸，如果不及时去除可引起线粒体和细胞损害。 2.线粒体在细胞凋亡中起重要作用多数凋亡前刺激需要线粒体外膜通透性，引起线粒体内膜释放蛋白质到胞浆。如细胞色素C和凋亡早期因子，这些因子释放的关键作用是通道开放（线粒体传递孔），孔的开放和凋亡活化与线粒体蛋白质降解相关。在此条件下凋亡的过度活化，线粒体氧化磷酸化与Leber遗传性视神经中细胞死亡有关。 3.线粒体在某些代谢通路中也起基本作用由于丙酮酸脱氢酶（PDH）引起丙酮酸氧化发生与线粒体内部，并提供乙酰辅酶A来燃烧Krebs循环。对Krebs循环、脂肪酸氧化、酮氧化和支链丙酮酸代谢酶全包含在线粒体内，尿素循环的某些步骤也位于线粒体内。因此线粒体功能丧失引起某些同路异常。

武汉大学-细胞生物学2001-2011考研真题

武汉大学2001年细胞生物学 一、名词解释(10*2.5) 1、apoptosis body 2、receptor mediated endocytosis 3、lamina 4、nuclease hypersensitive site 5、gap junction 6、hayflick limitation 7、kinetochore 8、molecular chaperones 9、leader peptide 10、dedifferentiation 二、简答题 (8*5) 1. 冰冻断裂术将溶酶体膜撕裂出PS，ES，PF，EF四个面，请绘一简图标明。 2. 医生对心脏已经停止跳动的病人采取电击抢救，请说明其心肌细胞是如何同步启搏的。 3. 为什么凋亡细胞的核DNA电泳图谱呈梯状分布带。而病理坏死细胞却呈弥散状连续分布？ 4. 将某动物细胞的体细胞核移植到另一去核的体细胞之中，然后其余实验步骤完全按照动物克隆的方式，问能否培育出一头克隆动物来？为什么？ 5. 切取病毒感染马铃薯植株的顶芽进行组织培养，这是大量繁育无毒苗的成功技术。试述其去除病毒的原因。 6. 有人认为既然已经有放大几十万倍的电镜，可以不用光镜了，请反驳这种观点的错误。 7. 出生6个月之内的婴儿可由母乳获得抗病的抗体，试述这些抗体是如何由母亲血液转移到婴儿血液中的。 8. 1999年报道，我国科学家成功实现将离体的B型血液改造成O型，请解释其原理。 三、问答题（前两题10分，最后一题15分） 1. 概述Cyclin与CDK在细胞周期调控的工作机制及其在各期引起的下游事件。 2. 试述在细胞质中合成的线粒体内膜蛋白及叶绿体类囊体膜蛋白是如何运送到位与装配的。 3. 综述细胞外被中糖蛋白在细胞内合成，组装和运输的全过程及其对于细胞的主要生理功能。 武汉大学2002年细胞生物学 一、名词解释（10*2.5) 1.nucleosome 2.contact inhibition 3.Telomerase

细胞生物学实验社会实践报告

建立一个动物细胞培养室与植物细胞培养室所需的条件与社会价值无菌环境是细胞离体培养的最基本条件，所以构建一个细胞培养室需要保证工作环境不受微生物和其他有害物质污染，并且干燥无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室。 一、基础实验室配置 ⑴消毒间：消毒间主要为了处理实验器材以及实验材料，营造一个无菌的试验环境，一般消毒间会配备超净实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉、酸缸等。 ⑵无菌操作间：一般由缓冲间和操作间两部分组成。缓冲间在外侧，多用于实验之前的准备，例如：更衣，准备实验材料，处理实验数据等，可放置电冰箱,冷藏器及消毒好的无菌物品等。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱,离心机,倒置显微镜等。工作人员进入操作间一定要消毒并更衣。 （3）培养基配制间：主要用于配置细胞培养所用的培养基。主要包括冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。 （4）培养室：用于培养细胞，放置以接种的培养基等。为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺

设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。 （5）洗涤间：主要用于清洗实验之后的用具。除配置水槽外，还需配置洗液皿、落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等，有需求的还可以配置洗瓶机。 以上基础设施若实验室条件不够，可将消毒间，培养基配制间，洗涤间合并一起，但注意实验室卫生以及仪器摆放，房间要保持清洁，明亮。 二、辅助实验室 细胞学鉴定室：其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。应配置各种显微镜、照相系统等。 生化分析室：在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。离心机、酶联免疫检测仪、天平、PCR仪等。 温室：用于试管苗的锻炼和移植，为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。常用设备有：温室、弥雾装置、荫棚、移栽床、钵、盆、基质等（用于植物细胞培养室）。 实验器材汇总：

细胞生物学课程论文

细胞生物学课程论文 题名：细胞凋亡的机理与应用 姓名： 学号： 专业： 年级: 指导教师：

综述---细胞凋亡的机理与应用 摘要：细胞凋亡是一种由基因调控的细胞主动死亡过程，是机体生长发育、细胞分化、生理及病理性死亡的重要机制。线粒体、肿瘤坏死因子、受体基因DNA降解、凋亡因子、内质网以及缺氧条件都会导致细胞凋亡。细胞选择不同的死亡途径，往往由导致细胞死亡的起始原因所决定。细胞凋亡有害也有利，如会引起肿瘤、自身免疫疾病等等。 细胞凋亡在机体组织改建过程中起着不可替代的作用。细胞凋亡是机体的一种基本生理机制，贯穿机体整个生命活动过程，为机体正常细胞的更新和异常细胞的清除提供了手段，对维持个体正常生理过程和功能表达具重大生物学意义。细胞凋亡近年来已成为细胞生物学与分子生物学的研究热点，对细胞凋亡机理的深入探讨可对一些疾病包括癌症提供新的治疗方法和途径，目前药物开发多是从病理过程中的分子机制、正常生理过程起作用的因子来寻找新药。 关键词：细胞凋亡；基因调控；线粒体；肿瘤坏死因子；DNA降解 Review - cell apoptosis mechanism and application Abstract: Apoptosis is an initiative by gene.the cell death process is the body's growth and development, cell differentiation, physiological and pathological death important mechanism. Mitochondria, tumor necrosis factor, receptor gene DNA degradation, apoptosis factor, endoplasmic reticulum and anoxic conditions would lead to a cell apoptosis. Cells choose different death way by causing cell death, often determined by the initial cause. Apoptosis harmful, such as will cause was good tumors, an autoimmune disease, etc. Apoptosis body organization restructuring in plays an irreplaceable role. Apoptosis is a basic body throughout the body physiological mechanism, whole life activities, as the body's normal cells during the update and abnormal cells provides measures to remove, the physiological processes and to maintain the normal function of the individual to express a significant biological significance. Apoptosis in recent years has become the cell biology and molecular biology research hotspot, the mechanism of the depth of apoptosis of some diseases including cancer can provide new treatments and ways, currently drug development from the pathological process more than the molecular mechanism, normal physiology process effect factor to look for new drugs. Key words：apoptosis；Gene regulation；mitochondria；Tumor necrosis factor； DNA-degradation 正文

细胞生物学论文 收获 感悟

<细胞--一个和谐的社会>学期总结 xxxxxxxxxxxx 收获 （一）对细胞的认识 细胞生物学是现代生命科学的重要基础学科，它联系着生物科学的许多分支学科，尤其是与分子生物学、遗传学、生物化学等学科联系密切。从1665年英国人胡克发现第一个植物细胞后,历经170多年的研究探索,科学家们创立了被认为是19世纪的三大发现之一的细胞学说，细胞学说的创立对细胞学的发展起着极大的推动作用，在19世纪的最后25年的时间里，人们相继发现了有丝分裂、无丝分裂、减数分裂等细胞生命现象，同时还发现了染色体和多种细胞器，这段时间是细胞学的经典时期。1876年,亨特等发现了动物细胞的受精现象，于是实验细胞学得以迅速发展，人们广泛应用实验手段与分析方法来研究细胞学中的一些根本问题，于是开始出现了细胞遗传学、细胞生理学、细胞化学等生物学分支。20世纪50年代以来，电子显微镜与超薄切片技术相结合，产生了细胞超微结构这一新兴领域，大大地加深与拓宽了人们对细胞的认识，不仅对已知的细胞结构，诸如线粒体、高尔基体、细胞膜、核膜、核仁、染色体结构的了解出现了全新的面貌，而且发现了一些新的重要的细胞结构，如内质网、核糖体、溶酶体、核孔复合体与细胞骨架体系等，为细胞生物学学科早期的形成奠定了良好的基础。在这时期，生物化学与细胞学的相互渗透与结合，使人们对细胞结构与功能相结合的研究水平达到了前所未有的高度。20世纪60年代，“细胞生物学”以一门新的学科出现，70年代随着分子生物学的兴起，细胞生物学对细胞的研究由细胞、亚显微结构进入了分子水平。透射电子显微镜、扫描电子显微镜与扫描隧道显微镜的发明为细胞生物学学科的建立以及发展起着重要的推动作用。PCR技术的应用及序列分析手段的改进，使人类基因组计划得以提前5年完成。 （二）加深理解和拓宽了细胞生物学的理论知识 通过一学期的学习，我从知识的深度和广度上都有较大的提高。以下几方面是本人对新知识的理解和收获。 细胞通讯 细胞的生命活动是由通讯引发的一系列生理活动现象。细胞通讯有三种方式：通过信号分子传递信息、通过相邻细胞表面分子的黏着相联系、通过细胞与胞外基质的黏着发生关系。其中通过信号分子的细胞通讯是主要的方式，也是发现最早研究最深入的细胞通讯。信号分子按组成分有激素、局部介质和神经递质三种类型。细胞内受体主要位于细胞核内，有两个不同的结构域，一个是与DNA结合的结构域，另一个是激活基因转录的N端结构域。信号在转导过程中，具有级联放大效应，细胞在接收信号之后，通过信号分子水解、受体钝化、受体减量调节以及磷酸酶作用使信号分子终止，以维持细胞正常的生命活动。 蛋白质的合成和分选机理 蛋白质的合成和分选运输是细胞中最重要的生命活动之一。核糖体是蛋白质合成的场所，其中糙面内质网上合成的蛋白质提供给内膜系统、细胞质膜以及细胞外，而内膜系统外的部分所需蛋白质则由游离核糖体合成的蛋白质提供。核糖体上合成的蛋白质为其一级结构，在导肽、信号肽的指导下，具一级结构的蛋白质以核孔运输、跨膜运输或小泡运输的方式分选定位到细胞特定部位。在蛋白质运输经过内质网、高尔基体时，在分子伴侣的帮助下进行蛋白质的加工修饰和拆叠，形成特定的蛋白质空间构象。 细胞周期调控

《细胞生物学》考试大纲.doc

《细胞生物学》考试大纲 一、大纲综述 细胞生物学作为现代生命科学发展的分支学科，是高等院校本科生物学各专业的必修专业基础课，是生命科学重要的基础学科之一。通过细胞生物学的学习，要求全面系统地掌握细胞生物学的基本内容和主要研究方法，并从分子水平上了解细胞的各基本生命活动过程及其调控。本考试大纲主要根据北京林业大学本科生物科学、生物技术专业《细胞生物学》教学大纲编制而成，适用于报考北京林业大学硕士学位研究生的考生。 二、考试内容 (1）绪论 细胞生物学的主要研究内容；当前细胞生物学研究的总趋势与重点领域；细胞的发现与细胞学说的建立及其所起的承前启后的重要作用，细胞学与细胞生物学发展简史。 （2）细胞的统一性与多样性 细胞相关的概念、细胞的基本共性；最小、最简单的细胞——支原体、原核细胞的两个重要代表：细菌与蓝藻；真核细胞的基本结构体系、细胞的大小及其分析、细胞形态结构与功能的关系、原核细胞与真核细胞的比较、植物细胞与动物细胞的比较。 （3）细胞生物学研究方法 细胞形态结构的观察方法和相关仪器的原理和应用范围、细胞化学组成及其定位和动态分析技术的原理和应用范围、细胞培养类型和方法、细胞工程的主要成就以及用于细胞生物学研究的模式生物。 （4）细胞质膜 生物膜的化学组成及结构模型、膜蛋白的种类及跨膜方式、膜的流动性和不对称性、细胞质膜的功能、膜骨架的结构与功能。 （5）物质跨膜运输 物质跨膜运输的主要方式、运输的基本过程及特征；胞饮作用和吞噬作用的过程及异同、受体介导的胞吞作用、组成型外排与调节型外排的过程及异同。 （6）细胞的能量转换——线粒体和叶绿体 线粒体的形态结构、化学组成、酶的定位和线粒体的功能；氧化磷酸化的分子基础、偶联机制和ATP 合成酶的作用机制；叶绿体的形态、结构、主要功能——光合作用；半自主性细胞器的概念；线粒体和叶绿体的蛋白质合成、运送与装配；线粒体和叶绿体的增殖、起源。 （7）真核细胞内膜系统、蛋白质分选与膜泡运输 细胞质基质的涵义、主要功能；细胞内膜系统的组成、动态结构特征与功能；高尔基体的极性及其与细胞内的膜泡运输；溶酶体的发生及其与过氧化物酶体的差异；信号假说与蛋白质分选信号；蛋白质分选

细胞生物学实验实验报告

细胞生物学实验 班级：生科142 姓名：旷江 学号：10143131 组号： 2 小组成员：旷江、韦立尧、莫霞指导老师：范立强、李鹏飞 华东理工大学 应用生物学系

摘要 本次细胞生物学实验通过细胞形态与结构的观察技术，细胞化学，细胞生理，细胞培养与分析，细胞周期分析，细胞成分分离与分析，细胞增殖与染色等技术对动植物细胞进行细胞形态结构的观察、细胞生理过程的研究、细胞培养与细胞分析、细胞冻存与复苏等，以此来研究动植物细胞的结构、功能和各种生命规律。 关键词：细胞增殖、细胞染色、冻存复苏、生理过程、形态结构

Abstract The cell biology experiment was carried out by cell morphology and structure observation technique, cytochemistry, cell physiology, cell culture and analysis, cell cycle analysis, cell fractionation and analysis, cell proliferation and staining. Observation of cell physiological processes, cell culture and cell analysis, cell cryopreservation and resuscitation, in order to study the structure of animals and plants, functions and a variety of laws of life. Key words: cell proliferation, cell staining, cryopreservation, physiological processes, morphological structur

细胞生物学综述论文

细胞生物学 课程论文 题目：第二信使cAMP/cGMP对大鼠 卵巢功能的调控机制 第二信使cAMP/cGMP信号通路对大鼠卵巢功能的调控机制 摘要： 在哺乳动物卵巢中，卵泡的生长发育及分化需要颗粒细胞和卵母细胞特异性基因的协同表达.这一程序的执行依赖于卵母细胞与颗粒细胞之间交换的局部信号，以及促性腺激素的调控。因此，用信号转导通路来解释促性腺激素对哺乳动物卵巢卵泡生长发育的调控作用，可以很好的解释在这些过程中那些基因的适时表达与调控.卵巢卵泡的生长发育以及卵母细胞的成熟与排卵是一个复杂的内分泌、旁分泌和自分泌的’作用过程，其都可以转为对环核普酸水平的调控.胞内cAMP的变化可以调控促性腺激素对颗拉细胞与膜细胞功能的调节作用。由此可见，第二信使cAMP在细胞信号转导中起着重要作用，

但为什么相同的cAMP加印信号可以诱导不同的生理反应。20年前，cAMP信号区域化的提出似乎解答了这一疑惑.哺乳动物卵巢产生可用的卵母细胞主要取决于促性腺激素对卵泡发育、颗粒细胞成熟，排卵及黄体化的调节作用.LH和FSH的作用很大程度上取决于cAMP依赖性信号转导，现在也已经发现许多其他因子可以通过激活其他信号转导通路来调节促性腺激素对卵巢的作用.因此，目前研究表明第二信使。cGMP田对卵巢功能有重要的调节作用. 关键词：第二信使磷酸二脂酶卵巢细胞 1第二信使cAMP/cGMP通路对大鼠颗粒细胞体外成熟的调控及其机制研究：颗粒细胞中第二信使。cAMP/cGMP的失活很大程度上取决于一系列相应的PDE的表达及其活性的变化.为了研究第二信使通路在大鼠颖粒细胞体外成熟过程中的调控作用，本试验体外培养了未成熟大鼠卵巢颗粒细胞，利用FSH处理颗粒细胞，并检测了E2，cAMP/cGMP浓度的变化，同时分析了PDE4蛋白的表达及cAMP一PDE活性的变化.结果清楚地表明颗粒细胞在48h成熟时，试验组cAMP浓度显著高于对照组，而cGMP没有明显变化;蛋白印迹试验发现试验组出现两条PDE4条带，约80和70KDa;cAMP一PDE活性分析结果表明对照组在整个48h过程中的活性都较低，而试验组在6到12h时，cAMP一PDE活性显著升高.综上所述，在大鼠颗粒细胞体外成熟过程中FSH使cAMP 一PDE活性升高主要与PDE4蛋白的表达有关，同时颗粒细胞中cAN于的累积不是通过cAMP一PDE活性的变化来实现的.

1997-2016年武汉大学661细胞生物学考研真题及答案解析-汇编

2017版武汉大学《661细胞生物学》全套考研资料 我们是布丁考研网武大考研团队，是在读学长。我们亲身经历过武大考研，录取后把自己当年考研时用过的资料重新整理，从本校的研招办拿到了最新的真题，同时新添加很多高参考价值的内部复习资料，保证资料的真实性，希望能帮助大家成功考入武大。此外，我们还提供学长一对一个性化辅导服务，适合二战、在职、基础或本科不好的同学，可在短时间内快速把握重点和考点。有任何考武大相关的疑问，也可以咨询我们，学长会提供免费的解答。更多信息，请关注布丁考研网。 以下为本科目的资料清单（有实物图及预览，货真价实）： 2017版武汉大学《661细胞生物学》考研复习全书是武汉大学高分已录取的学长收集整理的，全国独家真实、可靠，是真正针对武汉大学考研的资料。我们将所有的资料全部WORD化，高清打印。真题编写了详细的答案解析，即使是小题也明确指出了考察的知识点，对于做题帮助更大。同时，我们在分析历年考研真题的基础上，针对武大考研，编写了详细的复习备考讲义，明确列出考研的重点、难点和考点，可在短时间内快速把握重点，提升成绩。初试大家只需要准备我们的资料+教材+配套辅导书就足够了，不用再四处寻找其它资料。 全套资料包括以下内容： 一、武汉大学《细胞生物学》考研内部信息汇总 “备考篇”主要汇总了考武汉大学生物专业必备的一些信息，主要包括：历年复试分数线，本专业报考难度及竞争情况分析，根据历年真题的考察范围而归纳的考试大纲，学长对于政治、英语等公共课及本专业课的复习策略等。掌握初试必备的信息，才可安心复习。 二、武汉大学《细胞生物学》历年考研真题及答案解析 注：后期真题及答案均免费更新，请在备注处留下邮箱，更新后会第一时间将电子档发给大家。 2015年武汉大学《细胞生物学》考研真题（含答案解析） 2014年武汉大学《细胞生物学》考研真题（含答案解析） 2013年武汉大学《细胞生物学》考研真题（含答案解析） 2012年武汉大学《细胞生物学》考研真题（含答案解析） 2011年武汉大学《细胞生物学》考研真题（含答案解析） 2010年武汉大学《细胞生物学》考研真题 2009年武汉大学《细胞生物学》考研真题 2008年武汉大学《细胞生物学》考研真题 2007年武汉大学《细胞生物学》考研真题 2006年武汉大学《细胞生物学》考研真题 2005年武汉大学《细胞生物学》考研真题 2004年武汉大学《细胞生物学》考研真题 2003年武汉大学《细胞生物学》考研真题 2002年武汉大学《细胞生物学》考研真题 2001年武汉大学《细胞生物学》考研真题

细胞生物学实验报告

细胞生物学实验报告 脂类细胞化学 【实验目的】 熟悉苏丹Ⅲ染色技术，了解脂肪在脂肪细胞中的分布。 【实验原理】 脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。 脂肪不溶于水，易溶于浓酒精、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或铺片法以保存脂类。固定多用甲醛类固定剂。其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。 脂溶性染料显示法，即采用苏丹染料中的苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ或苏丹黑等溶于脂类使脂类显色的原理显示脂类，使用时，注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。 苏丹染料染脂类是一种简单的物理变化，即苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于酒精但更易溶于脂肪，所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时，苏丹染料即脱离酒精而溶于该含脂结构中而被染色。 苏丹Ⅲ是可溶于脂肪的染料，用于冰冻切片中显示甘油三酸酯，但是也可用于染色石蜡切片中与蛋白质结合的脂类。苏丹Ⅲ的70%酒精饱和液或丙酮和70%酒精等量饱和液，可将脂肪染为橙红色。 苏丹Ⅲ化学结构 1-[4-(苯基偶氮)苯基偶氮]-2-萘酚 【实验用品】 ⒈材料 小白鼠 ⒉试剂 甲醛钙溶液，70％乙醇，苏丹Ⅲ染液，蒸馏水 ⒊器材 解剖刀、镊子、载玻片、盖玻片、解剖盘等 【实验步骤】 ⒈断头法处死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，用剪连同盖玻片和其上粘的肠系膜取下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定 20 分钟。 ⒉吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗，用滴管不断吸去液体以去除固定液。 ⒊用 70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2的操作，再进行一次冲洗。 ⒋用苏丹Ⅲ染色30分钟 ⒌吸去溢出染液，擦净盖玻片表面及周边，用显微镜观察。 【实验结果】