HIV抗体检测
第二章 HIV抗体检测
1 范围
本章规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略，适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS 病人的诊断、报告和处理的实验室依据。
2 规范性引用文件
Revised recommendations for the selection and use of HIV antibody tests. WHO/UNAIDS Revised version 2001.
实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）。
3 HIV抗体检测实验室
应符合《全国艾滋病检测工作规范（1997年版）》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。
应符合《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的各项要求。
实验室的质量保证按本规范第八章规定执行。
实验室安全防护按本规范第七章规定执行。
4 HIV抗体检测的目的和要点
4.1 HIV抗体检测的目的
4.1.1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。
4.1.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。
4.1.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。
4.1.4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。
4.2 HIV抗体检测的要点
4.2.1 筛查试验阳性不能出阳性报告。
4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。
4.2.3 严格按照试剂盒说明书操作。
4.2.4 注意防止样品间交叉污染。
5 常规HIV抗体检测的方法和程序
HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确认试验。
5.1 HIV抗体检测筛查试验
5.1.1 筛查试剂
必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。
5.1.2 筛查方法
5.1.2.1 常用的筛查方法是酶联免疫试验（ELISA）
目前国内外主要使用第三代（双抗原夹心法）试剂，少数使用第二代试剂。血源筛查仍以第三代ELISA为主，国际上有些国家和地区已将线性免疫酶测定（第四代ELISA试剂）用于血源筛查。第四代ELISA试剂是最近发展起来的HIV抗原抗体联合测定试剂，可同时检测P24抗原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂相比，检出时间提前了4~9.1d。其优点在于能同时检测抗原抗体，降低血源筛查的残余危险度。
5.1.2.2 快速检测（RT）及其它检测
随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展，及对无症状HIV感染者提供自愿咨询检测（VCT）的迫切需求，简便、快速的HIV检测方法被广泛应用。常用的主要有以下几种：（1）明胶颗粒凝集试验（PA）：PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。PA试剂有两种，HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂（AFD HIV-1/2 PA），已经我国食品药品监督管理局（SFDA）注册批准；HIV-1、HIV-2抗原分别致敏的PA试剂（SERODIA-HIV-1/2）可初步区分HIV-1型和HIV-2型，目前我国尚未引进。
（2）斑点EIA或称斑点ELISA（dot-EIA）：以硝酸纤维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内，使用抗原量少。
（3）斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：与斑点EIA相似，也是以硝酸纤维膜为载体。区别在于不用酶标记抗体，而代之以红色的胶体金（或胶体硒）A蛋白，用渗滤法作为洗涤方法。试剂稳定，可室温长期保存。试验时不需任何设备，迅速、简便、特异性较好，敏感性约相当于中度敏感的ELISA，适用于应急检测、门诊急诊个体检测。目前已有在国内被SFDA批准注册的国外进口试剂和国内产品。一般可在10 30min内判读结果。
（4）艾滋病唾液检测卡：在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体，原理为酶免疫间接法。主要检测唾液中的HIV IgA与IgG 抗体，敏感性特异性与ELISA相近，可避免静脉穿刺。但样品预处理时间长且售价较高。以唾液为样品测定HIV抗体的ELISA、免疫印迹法（WB）试剂已经美国FDA批准。
（5）其它快速筛查试验方法：家庭HIV检测（Home Access System）等。
5.1.2.3 尿液HIV抗体检测
1996年美国FDA首次批准HIV-1尿液ELISA试剂，我国也正在研制尿液HIV抗体检测试剂。主要适用于静脉注射毒品（IDUs）人群和其它高危人群的大面积流行病学调查、监测。筛查阳性者仍需采血做确认试验才能确定。
5.1.3 筛查试验
根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复检测（复检）。
5.1.3.1 初筛试验：以第三代ELISA（双抗原夹心法）为例。
（1）实验准备：试验开始前将试剂和样品放置在室温(18~23℃), 按实验室SOP做好试剂准备。
磷酸盐缓冲液：若液体内有结晶,应放置在37℃直至溶解，用蒸馏水1：25稀释浓缩液，4℃保存2周。
TMB底物液：使用前配制，TMB液和过氧化脲液等量混匀。
1M硫酸终止液：85 ml蒸馏水中加入5 ml浓硫酸。
备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后，按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。
（2）实验操作
①装好所需使用数目的孔条,每孔均加入100μl样品稀释液。设3个阴性对照孔，1个HIV-1阳性对照孔，若需要可再设1个HIV-2阳性对照孔。
②每孔加入50μl待检样品及对照（对照要后加），未用孔用样品稀释液加满以溶解结合物球，以免堵塞洗板机孔。可震摇15S，37±2℃孵育60±5min。
③置洗板机上洗涤6遍（用洗液将反应孔完全加满,静置30~60S,共洗涤6遍，洗完后孔上方及底部不应残存液体,禁止在滤纸上拍干）。
④每孔加入100μl底物液，勿搅动，室温避光孵育30±2min。
⑤每孔加入100μl 1M硫酸终止反应，充分混匀。
⑥在2h内置于酶标仪读数，单波长450nm，或双波长450/630nm测OD值。
（3）实验结果
①阴性对照（NC），HIV-1阳性对照（PC1），HIV-2阳性对照（PC2）
NC 必须＜0.25方可用，排除NC≥0.25的值，计算NC平均值。
NC界限范围：0.6倍NC均值＜NC＜1.4倍NC均值。
②符合以下条件的实验成立：
两个以上的NC可用。
PC1-NC均值≥ 0.4，PC2-NC均值≥ 0.4
③Cut off值 = 阴性对照均值 + 0.100
小于Cut off为阴性，大于或等于Cut off为阳性
（4）报告：对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。
5.1.3.2 复检试验：对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认（见图1）。
图1 HIV抗体筛查检测流程
5.1.4 初筛试验结果的报告
对HIV抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告（可用附表1）；对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复查”报告（附表1）。
5.1.5 初筛试验呈阳性反应样品的转送
如需送上级实验室进行复测或确认，需要填写“HIV抗体复测送检单”（附表2），经1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。
5.1.6 对筛查阴性和阳性者，均需做好检测后咨询。
5.2 HIV抗体确认试验
5.2.1 确认试验的试剂
必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。
5.2.2 确认试验方法
包括免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）。国内常用的确认试验方法是WB。
5.2.3 确认检测流程
有HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如果呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性；如果不满足阳性标
准，则判为HIV抗体检测结果不确定。如果出现HIV-2型的特异性指示条带，需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验，呈阴性反应，报告HIV-2抗体阴性；呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析，见图2。
图2 HIV抗体确认检测流程
5.2.5 确认试验结果的判定
下面是我国使用WB确认HIV感染的判定标准和判定结果的基本原则。在实际工作中还应参照所用试剂盒说明书综合判定，遇疑难情况应报上级实验室解决。
5.2.5.1 HIV-1抗体阳性（+）
至少有2条env带（gp41和gp160/gp120）出现，或至少1条env带和p24带同时出现。
5.2.5.2 HIV-2抗体血清学阳性（+）
同时符合以下2条标准可判为HIV-2抗体血清学阳性：
（1）符合WHO阳性判定标准，即出现至少2条env带（gp36和gp140/ gp105）。
（2）符合试剂盒提供的阳性判定标准。
5.2.5.3 HIV抗体阴性（-）
无HIV抗体特异带出现。
5.2.5.4 HIV抗体不确定（±）
出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。
注：①HIV-1抗体特异带包括：env带：gp160/gp120、gp41；gag带：p55、p24、p17（或p18）；pol带：p66（或p65）、p51、p31。②HIV-2抗体特异条带包括：env带：gp140/gp105、gp36；gag带：p56、p26、p16；pol 带：p68、p53、p34。（由于使用的毒株不同，HIV-2 env带也可为gp125/gp80、gp36）。
5.2.5 HIV抗体确认试验结果报告
确认试验由确认实验室根据检测结果出具“HIV抗体确认检测报告单”（附表3），报告HIV 抗体阳性（+）、HIV抗体阴性（-）及HIV抗体不确定（±）。
5.2.5.1 符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性（+）”，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。
5.2.5.2 符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（-）”。如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除因“窗口期”而出现的假阴性结果，建议高危行为后3个月时再做抗体检测。也可进行HIV-1 P24抗原或HIV核酸检测，作为辅助诊断。
5.2.5.3 符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定（±）”，在备注中应注明“3个月后复检”，同时进行以下处理：
(1) 随访复检：每3个月随访复检1次，连续2次，共6个月。如果检测时暴露时间已超过3个月，则在3个月后随访1次即可。将前后2份样品同时检测，仍呈不确定或阴性则报告HIV 抗体阴性，如果在随访期间发生带型进展，符合HIV抗体阳性判定标准则报告HIV-1或HIV-2抗体阳性。
(2) 必要时可做HIV-1 P24抗原或HIV核酸测定，但检测结果只能作为辅助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果。
5.2.6 发出确认报告的同时要做好检测后咨询。
5.2.7 HIV抗体确认报告由1名具有高级卫生技术职称的人员复核签字，按原送检程序反馈。如确认对象户口不属于本辖区，确认报告应同时抄送HIV感染者户口所在地的省艾滋病确认中心实验室。其它系统确认的地方人员（包括本地和外地），也应及时向当地卫生行政部门和省艾滋病确认中心实验室报告。
5.2.8 省艾滋病确认中心实验室难以确认的样品，送国家艾滋病参比实验室确认。同一受检对象的样品在不同实验室得到不一致的确认结果时，由国家艾滋病参比实验室和艾滋病确认实验室审评及技术指导专家组予以仲裁。
6 HIV抗体检测的替代策略
除上述常规检测程序以外，可以根据不同的目的，对HIV流行强度不同的地区和不同人群采用不同的替代策略，见表1。
表1 HIV抗体检测的替代策略
目的地区人群替代策略艾滋病疫情报告任何地区任何人群替代策略Ⅰ
VCT 高流行地区高危人群替代策略Ⅱ高流行地区一般人群替代策略Ⅲ其它地区任何人群替代策略Ⅲ
6.1 替代策略Ⅰ（HIV感染疫情报告检测策略）
6.1.1 适用范围
全国HIV 感染疫情报告。
6.1.2 检测程序及结果报告
6.1.2.1 先用一种筛查试剂检测，出现阴性反应则报告“HIV抗体阴性（-）”。出现阳性反应则用两种不同原理或不同厂家的试剂复测（其中包括进口第三代ELISA试剂）。
6.1.2.2 两种试剂复测均为阳性，且其中第三代ELISA试剂复测样品OD值与临界值（Cutoff）的比值（S/CO）≥6.0者可作阳性考虑，上报疫情（附表4）。两种试剂复测结果均为阳性，但第三代ELISA试剂复测S/CO比值在1.0 5.9之间，或两种试剂复测结果呈一阴一阳，应进一步作确认试验，按照确认试验的标准判断结果（图3）。
图3 替代策略Ⅰ（HIV感染疫情报告检测策略）检测流程
6.2 替代策略Ⅱ（高危人群VCT检测策略）
6.2.1 适用范围
HIV感染高流行地区高危人群的VCT。应在确认中心实验室和确认实验室或以上实验室指定的筛查实验室进行，用高质量筛查试剂检测及判断结果（见6.2.2）。使用该策略判断结果，阳性报告须由确认中心实验室和确认实验室或以上实验室认可的筛查实验室出具。
6.2.2 检测程序及结果报告
6.2.2.1 先用第一种筛查试剂（ELISA-1）检测，出现阴性反应报告HIV抗体阴性；出现阳性反应则报告“HIV抗体待复查”，并用第一种酶联试剂（ELISA-1）和第二种酶联试剂（ELISA-2）复检。
6.2.2.2 两种ELISA试剂检测结果均阴性则报告HIV抗体阴性；两种ELISA试剂检测结果均阳性，且S/CO比值均大于或等于6.0者，用第三种筛查试剂（高特异性筛查试剂）检测，如果第三种试剂检测结果为阳性，在符合使用该策略条件的地区和人群中可以出具“HIV-1抗体阳性（+）”报告，使用“HIV抗体替代策略检测报告单”（附表5）。
6.2.2.3 下列情况均需做确认试验，按照确认试验的结果出报告：两种ELISA试剂检测结果一阴一阳、两种ELISA试剂检测结果均阳性但一种或二种S/CO在1.0～5.9之间、第三种筛查试剂检测结果为可疑或阴性。
图4 替代策略Ⅱ（高危人群VCT检测策略）检测流程
6.2.3 在发放检测报告的同时上报疫情。
6.2.4 做好检测后咨询。
6.3 替代策略Ⅲ（一般人群VCT检测策略，图5）
6.3.1 适用范围
HIV高流行地区一般人群检测及其它地区各类人群的VCT检测。
6.3.2 检测程序及结果报告
6.3.2.1 先用一种高敏感性筛查试剂检测，出现阴性反应报告HIV抗体阴性；出现阳性则用第二种筛查试剂（高特异性）复检。
6.3.2.2 第二种筛查试剂检测阴性则用第三种筛查试剂（另一种高特异性试剂）检测；第二种筛查试剂检测为阳性则按疑似阳性咨询，建议进一步做确认试验，按确认试验的结果报告。
6.3.2.3 第三种筛查试剂检测为阴性则报告HIV抗体阴性；第三种试剂检测为阳性按疑似阳性咨询，建议进一步做确认试验，按确认试验的结果报告。
图5 替代策略Ⅲ（一般人群VCT策略）的检测及结果报告流程图
6.3.3 发放检测报告的同时上报疫情。
6.3.4 对报告阳性者做好检测后咨询。
7 HIV抗体检测情况季报的时间和程序（图6）
7.1 艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点应于每季度首月5日前填写“HIV抗体检测数季报表”（附表6），向艾滋病筛查中心实验室报告上季度检测情况。没有艾滋病筛查中心实验室的地区可直接
向艾滋病确认中心实验室报告。
7.2 艾滋病筛查中心实验室应于每季度首月10日前将本实验室和本辖区内各筛查实验室上季度报告的检测情况（附表6）汇总，报告艾滋病确认中心实验室。
7.3 艾滋病确认实验室应于每季度首月10日前将上季度检测情况汇总后（附表6），报告当地艾滋病确认中心实验室和同级卫生行政部门。
7.4 艾滋病确认中心实验室应及时收集、整理和分析辖区内HIV 抗体检测情况，于每季首月15日前向省级卫生行政部门和中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心（简称中国疾控中心性艾中心）参比实验室报告。同时，按艾滋病疫情报告的有关规定上报疫情。
7.5 在非送检样品中（如专项调查与研究等）发现的艾滋病病毒抗体阳性者，应向所在地的省疾病预防控制中心报告, 并填写“HIV 抗体确认检测报告单”（附表3），报中国疾控中心性艾中心参比实验室。
7.6 实验室上报检测结果的同时，应随时报同级监测人员，以便及时随访调查。
图6 HIV 抗体检测情况季报流程
未设置艾滋病筛查中心实验室的地区
HIV的实验室诊断
HIV实验室诊断 一、HIV病毒是带有包膜的RNA逆转录病毒，在我国流行的是HIV-1。 二、HIV实验室诊断 人体感染HIV后，血液中最先出现HIV抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出现。几周后出现IgM抗体并很快消失，此后,IgG抗体出现并一直存在。因此，HIV感染的实验室诊断以抗体检测为主，病毒及相关抗原的检测为辅。 抗体检测分为初筛试验和确证试验两种，初筛试验为阳性的血清必须进一步确证，确证实验为阳性的方可报告为HIV感染阳性。 多聚酶链式反应(PCR)主要用于检测血浆中HIV的RNA含量，目前主要用于预测母亲将HIV传染给胎儿的可能性以及新生儿的HIV感染状况。此外，尚可用于判断病人的预后及监测抗病毒治疗的效果。 （一）HIV抗体的初筛检测 初筛试验的要求是敏感性高，理论上要求达到100%，尽可能避免漏掉可能阳性的对象，相对来说，对特异性要求不是太严，允许有少量假阳性，这些假阳性可以通过重复试验和确证试验排除。 HIV抗体初筛检测的方法很多，如酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、明胶颗粒凝集实验(gelatine particle agglutination assay, PA)、乳胶凝集实验(latex agglutination assay, LA)、各种快速检测实验(rapid tests)等。 1．酶联免疫吸附实验检测HIV1/2 型抗体，酶联免疫吸附实验（ELISA）是最常见的HIV抗体检测方法，它具有准确性高、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批量标本的检测，是献血员筛选和临床诊断最常用的方法。 3．胶体金法检测HIV1/2抗体实验 胶体金法检测HIV抗体是一种不需要任何仪器设备的血清／血浆检测法，它利用免疫层析分析原理来快速检测血清／血浆中是否含有HIV抗体，从而用于判断人体是否受到HIV1型／HIV2型病毒感染。 注意：由于样本中HIV抗体滴度的不同，测试区（T）内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。 (二)、初筛试验每一次检测阴性者可报告阴性，若第一次检测阳性，则需进行复测，复测时（最好用不同类型的试剂）可同时测定两孔，判定方法如下：
全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)
附件1 全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版） 中国疾病预防控制中心 二○一五年十二月
全国艾滋病检测技术规范National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版） 中国疾病预防控制中心 二○一五年十二月
前言 艾滋病在我国的流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群的变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动计划的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。 本次《规范》修订工作立足于我国目前检测状况，结合发达国家使用的指南，主要对以下几个方面内容进行了修改、增补和完善：（1）完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；（2）增加了HIV-1新
HIV检测方法
HIV 实验室诊断
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)及其相关标志的检测是预防 HIV 感染和艾滋病临床治疗中重要的环节，在艾滋病的防治工作中具有重要作用，如艾滋病的 诊断、HIV 感染的诊断、血源及器官供体的筛选、流行病学调查、艾滋病病人及 HIV 感染 者的病情动态观察、临床治疗疗效考核以及 HIV 疫苗的安全性和效果鉴定等。 HIV 感染标志分为病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志是指直接从 HIV 感染者体内分离出病毒或检出 HIV 组成成分(抗原或核酸)。免疫标志是指 HIV 感染所产生 的 HIV 抗原、抗体等免疫物质。相关标志是指 HIV 感染后与艾滋病病情进展有密切关系的 某些标志，如 CD4 细胞、CD8 细胞，β2 微球蛋白、有关细胞因子等。这些标志的测定可 为 HIV 感染及临床疗效的考核提供极为重要的诊断、治疗和预后指征。目前 HIV 抗体的检 测是艾滋病实验室检测中最常用的方法，因为 HIV 抗体是患者感染 HIV 后最容易检出并且 持续时间最长的免疫学标志，而且抗体的检测方法大多简便、经济，易于推广应用。 在介绍各种 HIV 实验室诊断方法之前，为了使实验室工作人员能够有效地确保结果准 确、可靠、优质，我们必须对作为一种感染因子的 HIV 以及由它所导致的致命性危害有基 本的认识。实验室工作人员应特别注意病毒的结构、抗原组成，人体的免疫反应，诊断试 验的基本原理、试验结果的解释，以及为了准确而有效地提供实验诊断所必需的质量保证 措施。如果由于缺乏技术专长或基本知识而造成不正确的试验结果是不可原谅的。现将有 关内容扼要介绍如下： 一、人类免疫缺陷病毒(HIV)概述 （一） 年份 1981 艾滋病病原体的发现和命名 事 由 命 名
美国首先在洛杉矶男性同性恋中发现 5 例以 往很罕见的卡氏肺囊虫肺炎和 26 例卡波济氏 肉瘤患者，这些病人均表现有严重的免疫缺 陷，但原因不明。
1982 年将这种新的疾病命名为 “获得性免疫缺陷综合征” Acquired Immuno Deficiency
Syndrome，AIDS，即艾滋病 淋巴结病相关病毒 Lym phadenopathy Associated
1983
从艾滋病流行学资料分析很可能是由病毒引 起的。 法国巴斯德研究所 Montagnier 等首先从 多发性淋巴结病综合症病人分离到一种新的 逆转录病毒
Virus，LAV
1984
美国国立癌症研究所 Robert Gallo 等报道从艾 滋病病人活检组织分离到一种新的逆转录病 毒与其以前发现的 HTLV-1 和 HTLV-Ⅱ不同。
人类嗜 T 淋巴细胞Ⅲ型病毒 Human T-cell Lymphatropic Virus
typeⅢ，HTLV-Ⅲ AIDS Related Virus， ARV
1984
美国加州大学分离出艾滋病相关病毒
HIV抗体检测
第二章 HIV抗体检测 1 范围 本章规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略，适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS 病人的诊断、报告和处理的实验室依据。 2 规范性引用文件 Revised recommendations for the selection and use of HIV antibody tests. WHO/UNAIDS Revised version 2001. 实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）。 3 HIV抗体检测实验室 应符合《全国艾滋病检测工作规范（1997年版）》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。 应符合《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的各项要求。 实验室的质量保证按本规范第八章规定执行。 实验室安全防护按本规范第七章规定执行。 4 HIV抗体检测的目的和要点 4.1 HIV抗体检测的目的 4.1.1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 4.1.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 4.1.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 4.1.4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4.2 HIV抗体检测的要点 4.2.1 筛查试验阳性不能出阳性报告。 4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 4.2.3 严格按照试剂盒说明书操作。 4.2.4 注意防止样品间交叉污染。
常用的HIV诊断方法
HIV/AIDS艾滋病诊断是一个十分严肃的问题，任何诊断的错误结果无论是假阴性还是假阳性，对家庭和社会都会造成十分严重的后果。HIV检测是诊断HIV感染及艾滋病的重要实验室依据之一，要知道是否感染了HIV可以通过检测病毒的抗体、抗原、核酸或通过病毒培养来确定。常用于诊断HIV/AIDS的方法是HIV抗体检测，它是诊断HIV/AIDS的主要指标，也是世界卫生组织和我国卫生部推荐使用的HIV感染诊断方法。为了最大限度地保证诊断结果准确，HIV诊断采用特殊的检测策略，即先用敏感性高的初筛试剂进行初筛，如果阳性再用特异性强的确认试剂进行确认。检测HIV抗体常用的初筛方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、凝集试验和各种快速诊断方法，确认的方法有蛋白印迹法(WB)、放射免疫沉淀试验(RIP)、间接免疫荧光试验(IFA)等。一般先用ELISA做初筛试验;如果阳性，再用蛋白印迹法来确认。以下介绍一下较常用的HIV抗体测定的方法。 一．初筛试验方法 1．酶联免疫吸附试验（ELISA） 酶联免疫吸附试验简称酶标法，是最常用初筛检测方法，在HIV抗体的测定中有四种模式：间接法、双抗原夹心法、捕获法和竞争法，其中以间接法用的最多。 1）间接法：将HIV抗原纯化后固定于微孔板上，然后加入待测标本，清洗后加酶标记抗人免疫球蛋白（IgG），清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图1） 2）双抗原夹心法：将HIV抗原固定于微孔板上,然后加入待测标本，清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图2）
3）捕获法：将非特异性的兔抗人免疫球蛋白抗体固定于微孔板上，然后加入待测标本,清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图3） 4）竞争法：：将HIV抗原固定于微孔板上,然后同时加入待测标本和一定数量的酶标HIV抗体，如果标本中有HIV抗体,即与加入的酶标HIV抗体竞争结合固定在微孔板上的抗原，标本中HIV抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体就愈少，清洗后加入底物。结果判断与间接法相反，产生有色反应即为阴性，无色反应的为阳性（见图4）
HIV抗体检测技术规范
HIV抗体检测技术规范 1 范围 本章规定了HIV抗体的检测方法、程序、结果报告、检测策略及质量控制。适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者诊断和监测的实验室依据。 2 规范性引用文件 《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008） Guidance for HIV testing in the Western Pacific Region. WHO Draft 19 July 2008. Statement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006. Guidelines for the use of the BED assay for incidence estimation and surveillance in resource-limited countries. Atlanta, 5 June 2006. Revised Guidelines for HIV Counseling, Testing, and Referral. U.S. CDC 2001. Current HIV-2 diagnostic strategy overestimates HIV-2 prevalence in China. Journal of Medical Virology,
艾滋病检测点标准操作规程(胶体金法)
HIV抗体检测标准操作规程（SOP文件） 1、目的： 为了规范本卫生院艾滋病检测点的正常运行，保证艾滋病抗体检测的准确，确保实验室生物安全，特制定本操作规程。 2、适用范围： 适用于本卫生院艾滋病抗体检测从标本的采集、处理、检测到报告的全过程。 3、职责： 各检测工作人员按标准操作规程进行艾滋病抗体检测，本院艾滋病检测工作领导小组负责对检测活动全过程及各项生物安全措施执行情况进行监督。 4、标准操作程序： 4.1样品的采集和处理 4.1.1样品的采集： 4.1.1.1血清样品采集：用真空采血管抽取5mL静脉血，室温下自然放置1-2小时，待血清凝固和血块收缩后在用4000rmp离心15min，吸出血清备用。 4.1.1.2抗凝血样品采集：用加有抗凝剂的真空管或用消毒注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 4.1.1.3采样注意事项： 4.1.1.3.1采集样品应按临床采血技术规范及试剂盒说明书要求进行。 4.1.1.3.2采集标本时应注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层手套。 4.1.2样品的保存： 用于抗体检测的血清或血浆样品应存放与-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。 4.1.3样品的运送： 4.1.3.1实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类、采样时间。
4.1.3.2将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒。在试管的周围垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。 4.1.4样品的接收： 4.1.4.1含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。 4.1.4.2核对标本与送检单，检查样品管有无破损及遗漏。如发现遗漏应立即将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒，同时还要报告有关领导和专家。 4.2检验方法和步骤 4.2.2快速检测法（胶体金法） 4.2.2.1原理 采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定血清样本中的HIV1+2抗体。 4.2.2.2操作步骤 4.2.2.2.1将标本平衡至室温。 4.2.2.2.2将所需数量的测试卡从包装盒中拿出平衡至室温，打开铝箔包装袋，平置于台面上并编号（与样本编号相对应）。 4.2.2.2.3用微量加样器取试剂说明书规定的样本血清或血浆，加到测试卡的加样处。 4.2.2.2.4在试剂说明书规定的时间内观察结果。 4.2.2.3结果判定： 4.2.2.3.1阳性：在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测区的条带隐约可见，建议对该样本重复试验，并使用其他厂家的试剂确认。 4.2.2.3.2阴性：只在对照区出现一条紫红色条带。 4.2.2.3.3无效：对照区未出现紫红色条带。 4.2.2.3.4注意：在规定的时间内不论测试区内的色带颜色深浅与否均应判为阳性。 4.3仪器的使用和维护 4.3.1设立常用仪器的维护制度，以保证正常运转；根据使用情况更换必要的部件： 4.3.2冰箱 定期检查温度并作好记录，必须每天检查和记录冷冻和冷藏室的温度。 4.3.3定期检查其他仪器设备。 4.4 HIV抗体筛查结果的记录、解释与报告 4.4.1筛查试验呈阴性反应出具HIV抗体阴性报告。 4.4.2筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复检”报告，不能出阳性报告。同时应尽快进行以下处理： 4.4.2.1填写HIV抗体筛查报告，经检测者、复核者和签发者审核签字。 4.4.2.2尽可能重新采集受检者的血样。
HIV 1耐药检测技术规范
HIV-1耐药检测技术规范 1 范围 本章规定了HIV-1耐药基因型检测的实验室条件、方法、结果判定及质量控制,适用于血浆、血清和滤纸干血斑样品的HIV-1耐药基因型测定。 2 规范性引用文件 Antiretroviral drug resistance testing in adult HIV-1 infection: 2008 recommendations of an International AIDS Society-USA panel. Clin Infect Dis 47（2）: 266-85. Guidelines for the Use of Antiretroviral Agents in HIV-1-Infected Adults and Adolescents. DHHS 2008; Available at: https://www.wendangku.net/doc/105655624.html,/guidelines. Update of the Drug Resistance Mutations in HIV-1: Spring 2008, Top HIV Med. 2008;16（1）: 62-68. 3 HIV-1耐药检测的意义 3.1 耐药监测 用于HIV-1感染人群和抗病毒治疗人群的耐药性监测和检测。用于新近感染人群的耐药性监测，了解耐药毒株流行的情况，
并采取防控措施，用于治疗前人群的监测，指导制． 定一线抗病毒治疗方案；用于抗病毒治疗人群的耐药性监测，进行HIV-1耐药发生、发展趋势以及影响因素的分析，指导和完善大规模公共卫生模式抗病毒治疗的程序，以及制定二线治疗方案。 3.2 耐药检测 用于个体患者的耐药检测。在抗病毒治疗前进行耐药检测，可指导临床医生制定抗病毒治疗方案，保证抗病毒治疗的效果；在抗病毒治疗过程中进行耐药检测，可指导临床医生分析治疗失败的原因，并制定补救治疗方案。 4 HIV-1耐药检测实验室要求 4.1 实验室功能分区 实验室原则上应分为4个独立工作区：试剂准备区、样品处理区、扩增区、扩增产物分析区，并设在不同房间。前两区为扩增前区，后两区为扩增后区。见第四章“HIV核酸检测”。 4.2 人员 进行HIV-1耐药基因型检测的人员须具有艾滋病检测实验室的上岗资格，接受过省级以上艾滋病实验室生物安全培训，须具有国家级实验操作技术培训合格证。 4.3 设施和设备 HIV根据检测项目配备相应的设施和设备。见第四章“
HIV抗体检测
HIV抗体检测
第二章 HIV抗体检测 1 范围 本章规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略，适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS病人的诊断、报告和处理的实验室依据。 2 规范性引用文件 Revised recommendations for the selection and use of HIV antibody tests. WHO/UNAIDS Revised version 2001. 实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）。 3 HIV抗体检测实验室 应符合《全国艾滋病检测工作规范（1997年版）》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。 应符合《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的
各项要求。 实验室的质量保证按本规范第八章规定执行。 实验室安全防护按本规范第七章规定执行。 4 HIV抗体检测的目的和要点 4.1 HIV抗体检测的目的 4.1.1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 4.1.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 4.1.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV 感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。4.1.4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4.2 HIV抗体检测的要点 4.2.1 筛查试验阳性不能出阳性报告。 4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 4.2.3 严格按照试剂盒说明书操作。 4.2.4 注意防止样品间交叉污染。
艾滋病检测质量控制试题
艾滋病检测质量控制试题 （总分：100分） 单位：姓名：得分： 一、填空题：（30分，每空2分） 1、常规HIV抗体检测分为和。 2、在艾滋病病毒感染的窗口期进行HIV抗体检测，结果呈 ，这段时期 已具有 ，时间一般为 。 3、WHO推荐，在为病人提供医疗服务时，无论是血液还是体液，也不论它们 是阳性还是阴性，都应当采取 原则。 4、艾滋病职业暴露的处理原则包 括 、 、和 。 5、HIV检测实验室污物处理的推荐消毒方法为： 。 6、质量管理包 括 、 、 。 二、判断题：（27分，每题3分） 1、HIV抗体快速检测结果阳性即表示受检者已感染HIV。（） 2、HIV抗体快速检测结果阴性一定表示受检者未感染HIV。（） 3、HIV确证结果为阳性，表明受检者感染了HIV。( ) 4、对HIV抗体不确定样本应进行追踪检测。（） 5、艾滋病检测点经现场验收并在卫生行政部门备案后可开展检测工作。（） 6、艾滋病检测点的技术人员需要有相关的检验或医学知识、经过县级以上相关专业技术部门培训并取得合格证书。（） 7、快速检测中，只要检测带出现阳性反应，就可以判断为阳性结果。（） 8、艾滋病检测点必须与艾滋病筛查实验室建立密切的联系，并接受筛查实验室的技术指导和督导。（） 9、艾滋病检测点发现的艾滋病抗体筛查阳性反应样品必须及时送艾滋病 筛查实验室或确证实验室，不得擅自处理。（） 三、问答题：（43分） 1、简述快速检测试剂使用要求。（7分）
2、艾滋病检测点必须具备的条件有哪些？（8分） 3、简述HIV抗体快速检测的原理。（8分） 4、简述艾滋病快速检测点的检测程序。（8分） 5、请分别阐述HIV职业暴露的预防及暴露后的处理原则。（12分）
艾滋病检测
艾滋病检测 包括筛查试验(含初筛和复检)和确证试验。HIV1/2抗体筛查方 法包括ELISA法、化学发光法或免疫荧光试验、快速检测(斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒快速试验、明胶颗粒凝集试验、 免疫层析试验)等，确证试验常用的方法是免疫印迹法。 筛查试验呈阴性反应可出具HIV1/2抗体阴性报告，见于未被 HIV感染的个体，但处于窗口期的新近感染者筛查试验也可呈阴性 反应。若呈阳性反应，应用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂 家的试剂进行重复检测，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进 行重复检测，如两种试剂复测均呈阴性反应，则为HIV抗体阴性;如 有一种或两种试剂呈阳性反应，需进行HIV抗体确证试验。确证试 验无HIV特异性条带产生，报告HIV1/2抗体阴性。确证试验出现 HIV1/2抗体特异带，但不足以判定阳性，报告HIV1/2抗体不确定，可在4周后随访。如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性;如随 访期间发生带型进展，符合HIV抗体阳性判定标准则为HIV抗体阳性，如带型仍不满足阳性标准，继续随访到8周。如带型没有进展 或呈阴性反应则报告阴性;满足HIV阳性诊断标准则报告阳性，不满 足阳性标准可视情况决定是否继续随访。经确证试验HIV1/2抗体阳 性者，出具HIV1/2抗体阳性确认报告，并按规定做好咨询、保密和 报告工作。 抗原检测：主要检测HIV1的P24抗原核心蛋白。感染早期和晚期，P24抗原以游离形式出现，多数情况下以抗原抗体复合物形式 存在。P24一般在感染后1-2周内即可检出，随P24抗体产生而减少。一般持续0.5-5个月，如持续存在或再度出现则提示预后不良。 HIV感染人体后，出现CD4+T淋巴细胞进行性减少，CD4+/CD8+T 细胞比值倒置，细胞免疫功能受损。如果进行HAART，CD4+T淋巴细 胞在病程的不同阶段可有不同程度的增加。目前常用的CD4+T淋巴 细胞亚群检测方法为流式细胞术，可以直接获得CD4+T淋巴细胞数
艾滋病病毒抗体快速检测技术手册
艾滋病病毒抗体快速检测技术手册
艾滋病病毒抗体 快速检测技术手册 （2011年版） 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心
前言 近年来，在党和政府的高度重视和领导下，各项艾滋病防治措施得到有效落实，艾滋病疫情快速上升的势头有所减缓， 病死率有所下降，艾滋病病毒感染者、病人的生活质量明显改 善，社会歧视有所减少。但我国艾滋病流行形势依然严峻，艾 滋病传播方式更加隐蔽，性传播已成为主要的传播途径，男男 性行为传播上升明显，许多感染者和病人尚未发现。2009年中 国艾滋病疫情估计有74万HIV感染者，但截至2010年底，通过网 络直报累计数只有38.6万人，还有近一半的感染者和病人没有被 发现。 为了尽早、尽快发现感染者，《国务院关于进一步加强艾 滋病防治工作的通知》（国发【2010】48号），明确提出要进 一步加强监测检测网络建设，依托现有医疗卫生资源，配备必 要的设备和人员，扩大检测服务范围，推广使用快速简便的检 测方法，提高检测可及性。组织各级各类医疗卫生机构主动开 展艾滋病病毒检测咨询。目前我国已经建成了较为完整的艾滋 病检测实验室网络，截止2010年底，全国共有318个艾滋病检测 确证实验室、10944个艾滋病检测筛查实验室，它们在艾滋病检 测过程中发挥着不可替代的主导作用。但我国地域辽阔，在一 些有检测需求、尚不具备条件建立实验室的单位，包括医疗机 构、农村乡（镇）卫生院、社区卫生服务中心和艾滋病自愿咨 询点等，需要建立快速检测点，以扩大检测覆盖面、发现更多 的感染者。为规范、有效地开展艾滋病病毒快速检测，在《全 国艾滋病检测技术规范（2009年版）》的基础上，国家参比实 验室对快速检测的使用进行了细化，在广泛征求专家和基层工 作人员意见的基础上，起草了《艾滋病病毒抗体快速检测技术 手册》，以下简称《手册》。
HIV抗体快速检测的方法与步骤
标题：HIV抗体快速检测的方法与步骤 1、目的 采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定全血或血浆样本中的HIV1/2型抗体。同时规范本实验室HIV抗体检测的方法与步骤，保证检测质量和实验工作有序进行。 2、适用范围 适用于本中心艾滋病筛查中心实验室及艾滋病确证实验室。 3、职责 3．1 检测人员须严格遵守本操作程序。. 3．2 实验室负责人负责监督检测人员履行相关职责。 4、操作程序 4．1 HIV抗体快速检测步骤： 4.1.1 实验前检测环境应符合要求（温度：湿度：），检查仪器设备是否运行正常。 4.1.2 开启实验室环境消毒设施和生物安全柜紫外线灯进行消毒（不少于30min）。同时取样品与检测试剂放置室温下平衡30min。 4.1.3核对样品编号，填写于《HIV抗体快速检测实验室原始记录》，实验按填写顺序依次加样。 4.1.4 严格按照试剂操作说明书操作，并做好质量控制（见《质量控制程序》）。 4.1.5 将检毕样品分类放入血清库保存，关闭生物安全柜及其它设备，清理消毒实验室。 4.1.6 及时填写实验室各相关记录并发出报告。 4．2 检测方法： 血清、血浆样本： 4.2.1HIV快速抗体快速检测细则： 4.2.1.1 按说明要求，采集静脉的血清、血浆或全血应在无菌条件下、并避免样品溶血。 4.2.1.2 将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 4.2.1.3 将所需数量的测试试剂从包装盒中取出来平衡至室温，打开铝箔包装袋，平衡于台面。 4.2.1.4用微量加样器取60UL血清或血浆样本，或用试剂盒内所配塑料滴管吸
取样本，垂直滴加两滴于试剂的加样处。 4.2.1.5加样后，阳性标本可在1-30分钟内检出。经过试验确证，反应时间（从加样后计算起）超过30分钟将对实验结果的观察造成影响，因此，建议30分钟内最终观察并记录实验结果。 4.2.1.6 结果分析及判断标准： 阴性：测试条/卡只在对照区位置出现一条紫红色条带。 阳性：测试条/卡在检测区和对照区位置各出现一条紫红色条带如果检测区的紫红色条带隐约可见，建议对该样本重复试验，并使用其他方法确认。 5、支持性文件 5．1 《全国艾滋病检测工作管理办法》 5．2 《全国艾滋病检测技术规范》（2015版） 5.3 《人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒说明说》 6、相关记录表单 6．1《HIV抗体快速检测原始记录》 6．3《I级生物安全实验室使用登记表》 6．4《艾滋病检测实验室检测试剂使用登记表》 6．5《HIV抗体检测样品血清库登记表》
两种HIV抗体检测方法与确证方法比较
两种HIV抗体检测方法与确证方法比较 发表时间：2012-07-24T16:04:40.597Z 来源：《中外健康文摘》2012年第13期供稿作者：马金旗 [导读] 两种HIV抗体检测方法与确证方法比较，选择适合输血前筛查HIV感染患者的方法。 马金旗 (中南大学湘雅三医院湖南长沙410013) 【中图分类号】R575【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）13-0280-02 【摘要】目的两种HIV抗体检测方法与确证方法比较，选择适合输血前筛查HIV感染患者的方法。方法用酶联免疫吸附试验(抗- HIV ELISA)对48621例输血前标本进行HIV抗体筛查，对阳性标本进行金标法测定，同时随机抽取的20例阴性标本也进行金标法测定，作为对照。对任一试剂检测阳性的标本和对照标本都按规定送检HIV确诊实验室进行确证［1］。结果抗-HIV ELISA法特异性较高，达92.0%，HIV金标法特异性高，达98.7%，与确证方法接近。结论抗-HIV ELISA法特异性较高，特别适合批量标本的检测，可以作为临床HIV初筛试验。用金标特异性高操作简便，快速，对ELISA法检测出的阳性标本进行复检，能较快确认标本HIV阳性可能性，评估感染的风险程度。两种方法可相互结合，及时对患者做出诊断，及早采取措施保护职业暴露人员［2］。 【关键词】HIV AIDS ELISA人类免疫缺陷病毒获得性免疫缺陷综合征酶联免疫吸附试验 HIV抗体检测职业暴露 ADIS是一种严重危害人类健康的疾病，当前我国HIV流行呈逐年上升的趋势［3,4］，在一些高危人群中尤为严重。人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）的病原体，以侵犯CD4细胞为主，造成细胞免疫功能缺损，并继发体液免疫功能缺损为基本特征的传染病。其传播途径有三条：性接触传播、血液传播和母婴传播。血液传播途径与临床输血和接受血液制品相关，为了区分患者是否是由于接受血液和血液制品而感染HIV，我们对患者输血前血清样本进行HIV抗体检测。 对输血前标进行HIV抗体筛查，对阳性标本进行金标法测定，同时随机抽取的20例阴性对照标本也进行金标法测定。对阳性标本和对照标本送检HIV确诊实验室进行确证实验，现报道如下。 1 材料和方法 1.1 标本 2009年9 月至1日至2012年2月我科输血患者输血前的标本48621例分离血清后用ELISA法检测HIV抗体，初筛阳性55例，另随机抽取20例阴性结果的标本。 1.2 试剂 HIV ELISA试剂盒（珠海丽珠试剂股份有限公司提供）；胶体金试剂（天津中新科炬生物制药有限公司提供）。 1.3 仪器 RT-6100酶标工作站 (深圳雷杜生命科学股份有限公司)、RT-3000洗板机(深圳雷杜生命科学股份有限公司)。 1.4 试验方法用抗-HIV ELISA法检测全部标本,对阳性标本进行双孔复检，一孔或两孔阳性均视为阳性，获初筛阳性血清55份。对55份阳性标本和随机抽取20例阴性结果的标本用金标法检测，并送检此75份血清至湖南省疾病预防控制中心的 HIV确证实验室进行确证实验。以上各项试验操作及结果判读均严格按操作规程和试剂说明书进行,所有试剂均在有效期内。 2 结果 确认结果阳性即认为感染HIV病毒，阴性即认为未感染，在此基础上得出ELISA法和金标法的真实性指标（见表3）。金标法与确证方法的符合率很高可达到98.7%，漏检率低0.4%（见表3），ELISA法无漏检作为初筛方法是一种较好的方法，其特异性不是很高92.0%，用金标法对其阳性标本进行复查，可以得出与确证方法相近的结果。 表1 59例ELISA法、金标法和确证法检测结果分布情况（例数） 表2 两组患者术中、术后情况比较 表3 ELISA 、金标法与确证方法的符合率 3 讨论 抗HIV检测是一项较为特殊的检测，会涉及病人隐私、工作人员的职业防护、国家传染病防治等许多方面。出现假阳性会给病人造成巨大的精神压力，甚至会引起医疗纠纷，假阴性会漏检感染者，不利于早发现，早诊断，早治疗，早控制病情。 HIV无症状感染期可长达6个月至10年，最后发展为艾滋病，出现中枢神经系统等多器官多系统损害，合并各种条件致病菌、寄生虫、其它病毒感染，或并发肿瘤。5年死亡率约为90%，死亡多发生在出现临床症状的2年之内[5]。 血液传播途径与临床输血和接受血液制品相关，如果输入被HIV感染献血员的血液可能会感染HIV,即输血感染HIV，为了区分是输血前还是输血后感染，输血患者输血前应做抗－HIV的检测，这样既可以保护相关工作人员，也可以减少医疗纠纷，维护医院利益，还可以早发现感染患者，以便治疗及控制疫情。选择敏感性、特异性都高的检测方法有助HIV感染的诊断，HIV抗体的检测是最主要的检查方法，也是疾病预防控制中心规定的初筛实验室的检测方法［1］。 抗-HIV ELISA法特异性较高，特别适合批量标本的检测，可以作为临床HIV初筛试验。用金标特异性高,操作简便、快速，对ELISA法检测出的阳性标本进行复检，能较快确认标本HIV阳性可能性，评估感染的风险程度。两种方法可相互结合[1]，及时对患者做出诊断，及
两种HIV抗体检测方法与确证方法比较
两种HIV抗体检测方法与确证方法比较 摘要】目的两种HIV抗体检测方法与确证方法比较，选择适合输血前筛查HIV 感染患者的方法。方法用酶联免疫吸附试验(抗-HIV ELISA)对48621例输血前标本进行HIV抗体筛查，对阳性标本进行金标法测定，同时随机抽取的20例阴性标本也进行金标法测定，作为对照。对任一试剂检测阳性的标本和对照标本都按规定送检HIV确诊实验室进行确证［1］。结果抗-HIV ELISA法特异性较高，达92.0%，HIV金标法特异性高，达98.7%，与确证方法接近。结论抗-HIV ELISA法特异性较高，特别适合批量标本的检测，可以作为临床HIV初筛试验。用金标特异性高操作简便，快速，对ELISA法检测出的阳性标本进行复检，能较快确认标本HIV阳性可能性，评估感染的风险程度。两种方法可相互结合，及时对患者做出诊断，及早采取措施保护职业暴露人员［2］。 【关键词】HIV AIDS ELISA人类免疫缺陷病毒获得性免疫缺陷综合征酶联免疫吸附试验 HIV抗体检测职业暴露 ADIS是一种严重危害人类健康的疾病，当前我国HIV流行呈逐年上升的趋势［3,4］，在一些高危人群中尤为严重。人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）的病原体，以侵犯CD4细胞为主，造成细胞免疫功能缺损，并继发体液免疫功能缺损为基本特征的传染病。其传播途径有三条：性接触传播、血液传播和母婴传播。血液传播途径与临床输血和接受血液制品相关，为了区分患者是否是由于接受血液和血液制品而感染HIV，我们对患者输血前血清样本进行HIV抗体检测。 对输血前标进行HIV抗体筛查，对阳性标本进行金标法测定，同时随机抽取的20例阴性对照标本也进行金标法测定。对阳性标本和对照标本送检HIV确诊实验室进行确证实验，现报道如下。 1 材料和方法 1.1 标本 2009年9 月至1日至2012年2月我科输血患者输血前的标本48621例分离血清后用ELISA法检测HIV抗体，初筛阳性55例，另随机抽取20例阴性结果的标本。 1.2 试剂 HIV ELISA试剂盒（珠海丽珠试剂股份有限公司提供）；胶体金试剂（天津中新科炬生物制药有限公司提供）。 1.3 仪器 RT-6100酶标工作站 (深圳雷杜生命科学股份有限公司)、RT-3000洗板机(深圳雷杜生命科学股份有限公司)。 1.4 试验方法用抗-HIV ELISA法检测全部标本,对阳性标本进行双孔复检，一孔或两孔阳性均视为阳性，获初筛阳性血清55份。对55份阳性标本和随机抽取20例阴性结果的标本用金标法检测，并送检此75份血清至湖南省疾病预防控制中心的 HIV确证实验室进行确证实验。以上各项试验操作及结果判读均严格按操作规程和试剂说明书进行,所有试剂均在有效期内。 2 结果 确认结果阳性即认为感染HIV病毒，阴性即认为未感染，在此基础上得出ELISA法和金标法的真实性指标（见表3）。金标法与确证方法的符合率很高可达到98.7%，漏检率低0.4%（见表3），ELISA法无漏检作为初筛方法是一种较好的方法，其特异性不是很高92.0%，用金标法对其阳性标本进行复查，可以得出与确证方法相近的结果。
艾滋病快速抗体检测标准操作规程
艾滋病快速抗体检测标准操作规程(sop) 编写日期：2012-7-4 报送日期：2012年7月 生效日期：2012年7月 审批人员：毕永章 版本号: 1.0 批准日期:2012-7-4 审阅人:毕永章 1、目的 1.1本SOP规定本实验室HIV快速检测标准操作程序。 1.2本SOP为本院临床检验室HIV检测操作手册。 2、范围 2.1实用于本院临床检验室HIV1+2抗体快速检测。 3、责任和要求 3.1为保证HIV检测结果准确无误，实验室操作人员请按此标准操作程序要求操作。 3.2凡违反此SOP操作程序的检测，将视为无效检验。 4、试剂与方法 4.1试剂：人类免疫缺陷病毒（HIV1+2）抗体检测试剂盒。 4.2方法：胶体金法。 5、检测原理 5.1本检测采用基因工程制备的gP41、gP120、gP36抗原为包被和金标抗原，应用双抗原夹心法检测HIV抗体。当待检标本中含HIV抗体时，先与金标抗原反应，形成抗体—金标抗原复合物，在虹吸作用
下向前移动，遇到包被抗原形成抗原—抗体—金标抗原复合物，并出现红色沉淀线。 6、样本要求及实验条件 6.1样本为血清或血浆，无明显溶血、污染、混浊及脂质。 6.2样本在2小时内完成HIV快速检测，注意无菌操作。 6.3检测在8——30℃下进行，多余试剂存冰箱2——8℃保存，检测前需要与室温平衡。 6.4样本冷冻保存一年以上，申请上报经领导批复后方能作消毒消毁处理。 7、检测流程 7.1以发现更多的HIV感染者为目的，本实验室只做初筛检测。 7.2阳性结果报送CDC复检，附HIV检测流程图。 8、检测方法 8.1撕开HIV1+2检测板包装袋，取出检测板水平放置于实验台。8.2在S加样孔中滴2——3滴血清或血浆，不再加稀释液。 8.3在15——30分钟内观察结果，超时需重新检测。 9、检测结果判断 9.1阳性：出现质控线和任意一条或两反应线均为阳性。 9.2阴性：仅在质控区出现一条红线，则实验结果为阴性。 9.3无效：无质控红线，或只有反应线，检测无效。须重新检测。 10、结果解释与咨询 10.1阳性结果解释为可疑或待复查，填HIV抗体复检表（HIV抗体
艾滋病抗体检测初筛实验室资格评审考核标准
艾滋病抗体检测初筛实验室资格评审考核标准 一、人员要求： 有3名以上的医技人员，其中中级技术职称人员1名以上（采供血机构从事HIV抗体检测人员须具有技师以上卫生技术职称）；从事病毒血清学检测技术工作2年以上；接受过省疾病预防控制中心艾滋病确认实验室举办的HIV抗体检测技术培训，并获得合格证书。 二、设备要求： （一）有独立的实验用房，实验室墙面、地板及工作台面必须采用耐酸、耐碱材料，工作台面上方按规定安装紫外灯。实验室内污染区和清洁区标志明显，易于区分。 （二）具有从事艾滋病抗体检测工作所必需的仪器设备并能正常使用，通过强制性计量检定合格。 仪器设备包括： 1、酶标读数仪和洗板机各1台； 2、可调精确微量移液器（10—50ul;50—250ul;1000ul）各2支； 3、普通冰箱1台； 4、低温冰箱1台； 5、离心机1台； 6、恒温培养箱或水浴锅1台； 7、恒温空调设备1台以上； 8、相应的消毒与污物处理设施。 （三）所用检测试剂齐全,符合国家质量要求，并经国家药品监督管理局批准，有批准检验号和注册文号，经过检定合格且在有效期内。 三、实验室质量管理 （一）实验室工作管理制度健全并上墙。包括：样品采集运送与保存制度，样品处理制度，实验室消毒隔离制度，检测仪器使用、保管与维护制度，安全和事故处理制度，实验操作规程等，并遵照执行。
（二）仪器设备有专人管理。千元以上仪器设备建卡，万元以上仪器设备建档（包括使用说明书，使用、维护记录等，并按照计量检定的规定进行检定且有检定证书）。 （三）采用国家和省艾滋病抗体检测确认实验室规定的检测方法进行检测，遵守操作规程，不得自行更改检测方法及操作规程。 （四）检测所用的仪器、试剂必须采用国家推荐的产品，不得使用过期试剂或劣质品牌试剂。 （五）原始记录有专用记录本。记录内容包括：送样单位（样品来源）、样品名称、收（采）样日期、送（采）样人；被采样人姓名、性别、年龄、职业、国籍或民族、住址；检测日期、检测方法、所用试剂名称及厂家、批号、有效期；空白、阴性和阳性及样品检测所呈现现象及结果等； （六）原始记录书写规范。要用钢笔或签字笔，不得用铅笔和圆珠笔书写，字迹清晰。如记录有错误应在错误处划2条横线，在其上方写下纠正文字，不随意涂改、删减，不得在其它纸上记录然后再誊抄。 （七）检测报告按照《全国艾滋病检测工作规范》中规定的“HIV抗体初筛阳性送检化验单”统一格式填写，检验人员签名齐全，文字简洁，字迹清楚。检测报告书由检验人员填写或打印。 （八）原始记录和检验报告书必须经同一检测室的审核人员审核签字，由检测机构负责人终审签字发出。 四、检测资料的档案管理 检测技术资料完整，原始记录及有关资料随检测报告书编号按顺序存档。 五、考核方法 根据本考核标准要求，逐条逐项进行资料核查，同时进行现场条件考核及质控样品考核，符合标准要求的，由现场考核组写出书面意见，省艾滋病抗体检测初筛实验室资格评审委员会评审后，报省卫生厅审批，颁发资格证书。