不同植物总DNA的提取及亲缘关系的研究(合肥工业大学)

不同植物总DNA的提取及亲缘关系的研究

班级：生物技术10-1

摘要：核酸的分离纯化是核酸制备及分析的前提和基础，在本实验中我们小组成员将学会和掌握核酸制备的一些基本操作和方法，并通过分光光度法和电泳等实验技术研究核酸的性质，同时掌握用限制性内切酶酶解技术分析不同材料之间亲缘关系的方法。

关键词：核酸提取分光光度法电泳限制性内切酶酶解技术

Absract:The nucleic acid separation purification is the premise which and the foundation the calculation prepares and analyzes, our panel members will learn and grasp the nucleic acid preparation in this experiment some elementary operation eos and the method, and through experiment engineering research nucleic acid's and so on spectrophotometric method and electrophoresis nature, simultaneously grasps with the restrictive interior contact enzyme enzymolysis technical analysis different material between the sibship method.

Key words: nleic acid extractioucn spectrophotometry electrophoresis Restriction endonuclease enzyme of Enzymatic Hydrolysis technology

1.绪论

DNA是遗传的物质基础，分离纯化DNA是研究基因结构与功能的首要前提。细胞内DNA是与蛋白质结合存在的。在提取DNA的过程中必须将其中的蛋白质降解除去，同时需要尽可能保证其DNA分子的完整性，因此，必须在温和的条件下进行提取，注意避免核酸内切菌引起DNA的降解。

1.1植物组织中制备基因组DNA一般有下列几个策略：

1.1.1细胞壁的破碎。通常将植物组织放在研钵中与液氯或干冰粉末(用于冰时先将干冰碾成粉末)。

1.1.2细胞膜的破坏常用去污剂(如SDS或CTAB)。

1.1.3保护DNA免受内源核随菌的破坏，这包括多方面的措施。去污剂的加入和EDTA 的存在都能破坏或抑制酶的活性，因EDTA是种整合剂，它能结合大多数核酸酶的辅因子Mg2+。此外，用氮仿和苯酚乳化州A提取液时，同时也使蛋白质变性，分离蛋白质和DNA。

1.1.4尽量减少DNA的断裂。即使溶液的振荡也会使DNA断裂，在操作中不特别小心的话，获得的DNA是50一100 kb。

1.1.5研磨植物组织时尽量保持在冰冻状态(掖氯或于冰中)，直至与提取经冲浪混合，以避免DNA的降解。

1.1.6高等植物材料往往含有多糖，面多糖常常是某些限制酶或连接菌的抑制剂，用CTAB的核酸提取法可得到纯的高相对分子质量的DNA，它利用核随和多糖在cTAB存在时溶解度不同面分离。

1.1.7在用异丙醉或乙醇沉淀植物组织DNA时，能观察到白色的纫纤丝及纤维团，若用钩子将所有的DNA都轻轻绕在钩子上取出并洗涤，这样得到的DNA与用离心沉淀法取得的DNA相比，前者的纯度更高些。不同植物，不同组织，不同年龄的材料制备所得DNA 的产率也不同。植物幼苗或嫩叶制备DNA容易且产率高。

1.2通常，利用质粒的大小和限制性酶切位点来鉴定质粒。具体做法是：首先，选用一种或两种限制性核酸内切酶切割质粒；然后，进行琼脂糖凝胶电泳；最后，根据质粒的电泳迁移率和酶切图谱对质粒进行鉴定。

1.2.1限制性核酸内切酶是一类能够识别双链DNA分子中的某一特定核昔酸序列，并由此切割DNA双链结构的特殊核酸内切酶。

1.2.2琼脂糖凝胶电泳是鉴定质粒，特别是重组DNA分子的重要技术手段，同时，也被广泛用来分离、纯化特定的DNA片段。琼脂糖凝胶电泳的分辨率取决于凝胶的浓度，浓度越高，凝胶的空隙越小，其分辨率也就越高；反之，浓度降低，空隙就增大，其分辨率也就随之降低。

1.2.3核酸分子带有许多负电荷，当它被放置在电场中时，会向正极移动。在一定电场强度下，DNA分子移率的大小取决于其本身的大小和构型。分子量较小的DNA分子比分子量较大的DNA分子更容易通过凝胶介质，故其迁移率较大，跑在前面。所提取的质粒往往有三种构型：超螺旋、开环和线性。电泳时，由于三者的紧密程度不同，所以，它们的迁移率并不相同。一般情况下，具有超螺旋构型的质粒，由于其结构最为紧密，所以它的迁移率也就最大，跑在最前面；其次为具有线性构型的质粒；具有开环构型的质粒跑在最后。质

粒经限制性核酸内切酶切割后，其构型均为线性。

2．方法

2.1实验仪器与试剂

主要仪器器材：研钵、高速离心机、紫外分光光度计、水浴锅、微量加样器、电泳仪、紫外透射反射分析仪、试管、烧杯、试剂瓶、冰箱。

主要试剂：(1)提取缓冲液：100mmol/L Tris-HCl(pH值为8.0);20mmol/L EDTA；

1.4mo1／L氯化钠；2％CTAB。

(2)TE缓冲液：10 mmol／L Tris—HCl(pH值为8.0);1mmo1／L EDTA。

(3)氯仿：异戊醇(24：1)。

(4)异丙醇。

(5)70％乙醇。

(6)TAE电泳缓冲液；40mmol/L Tris；20mmol/L HAC;lmmol/L EDTA。

（7）上样缓冲液：3.72克EDTA，20克Ficoll，0.25克溴酚蓝，溶解后定容至100ml 以上试剂均需用蒸馏水配制；缓冲液高压灭菌后于4摄氏度保存。琉基乙醇在其

他溶液组分灭菌后，使用之前加入。

2.2操作步骤

2.2.1植物组织中DNA的分离

(1)取新鲜植物嫩叶组织或芽1g，用蒸馏水冲洗干净后，置液氮中冷冻20一30 min，将冻结组织放入研钵中加液氮悬浮，研磨使其充分粉碎成细粉末。倒入离心管中。

(2)加入4mL 60℃保温的提取缓冲液，50微升硫基乙醇，恒温水浴锅中60℃保温45min，其问缓慢颠倒4次。

(3)取出后，放入冰浴中，加400 微升0.015mol/l 乙酸钾，颠倒混匀，放置20 min。不时摇动。

(4)4℃，8000 r／min离心15min，吸出含DNA的水相，放人另一离心管中。

(5)加入等体积的氯仿：异戊醇溶液，缓慢倒转混匀呈乳状，冰浴中放置20min。

(6)4℃，1000r／min离心15min。上清吸入另一离心管中。

(7)加入0．6倍体积的预冷异丙醇，20℃放置10 min。

(8)用玻璃棒轻轻搅动两相界面，挑出白色沉淀，70％乙醇冲洗两次。

(9)风干，加入200微升TE溶解。

2.2.2 DNA合量和纯度检测

(1)取两只0．5cm厚的石英比色杯。加入3mL TE。

(2)一只作为对照杯，一只再加入7．5微升DNA样品作为检测管。

(3)读取OD280，OD260值和比值。计算样品含量和纯度。DNA含量(微升／mL)＝OD260／0.02×稀释倍数

2.2.3限制性内切酶性质研究

表2-33-1 （单位：uL）小青菜质粒DNA 10x酶缓冲液限制性内切酶双蒸水

有酶切实验组 6 2 1 11

无酶切对照组 6 2 —12

混匀，37摄氏度水浴1—2小时。

日

2.2.4 1.0%琼脂糖凝胶板制备

(1)用配套挡板将凝胶塑料托盘短边缺口封住，置水平玻板或水平工作台面上，将样品槽模板插进长边上的凹槽内（距一边约1.5cm），梳齿底边与托盘表面保持0.5-1mm的间隙，安置好后保持静止状态。

（2）称取0.3克琼脂糖至于小锥形瓶中，加入30mlTAE稀释缓冲液，在电炉上加热融化，一定要煮沸两次排尽气泡。

（3）待琼脂糖冷却至约60摄氏度后，滴一滴gold view,然后将琼脂糖溶液在靠近挡板一侧连续地倒入托盘内，使凝胶缓慢而连续地展开直至托盘形成一层3mm厚均匀胶层。胶内不要存有气泡，室温下静置约20分钟。

（4）待凝胶完全后，用小滴管在梳齿附近加入少量TAE稀释液润湿凝胶，用双手均匀用力轻轻拔出样品槽模板，则在胶板上形成相互隔开的样品槽。

（5）取下封边的挡板，将凝胶连同托盘放入电泳槽平台，倒入大量TBE稀释缓冲液直至浸没过凝胶面2-3mm，要防止样品槽内窝存气泡，可以用微量注射器挑除。

2.2.5 加样

用微量注射器将经酶切的样品液和未经酶切的样品液（要加2微升的酶反应终止液）分别加入到凝胶板的不同加样槽内，每个槽加样不超过15微升。加样时针头穿过缓冲液小心靠近加样槽底部，但不要损坏胶槽，然后缓慢将样品推进槽内，让其集中于槽底部。

2.2.6 电泳

5V／cm电泳，当染料带移动到距离凝胶前约1cm时，停止电泳。

2.2.7 观察

小心取出凝胶至托盘上，将胶板推置预先浸湿并铺在紫外灯观察台上的玻璃纸内，在波长为245nm紫外灯下进行观察。DNA存在的位置成绿色荧光，可观察到清晰条带。

3．结果

3.1

OD280（小青菜）=0.007OD260（小青菜）=0.009

3.2 DNA条带观察如下图

.

4．讨论

OD260（小青菜）/OD280（小青菜）=1.29 <1.8

由结果得知，

4.1小青菜DNA样品属于蛋白质污染。

分析原因：

a.由于设备问题，没有在低温（4摄氏度）下进行低温离心，影响了离心效

果；

b.在加异丙醇之后，会存在一层蛋白质沉淀；

c.在将DNA沉淀挑出的过程中，会带上部分蛋白质沉淀。

d.试验中没有使用高效的蛋白质去除剂。

4.2稀释倍数：3000／7.5 =400

DNA含量[小青菜](微升／mL)＝OD260／0.02×稀释倍数=0.009／0.02×400=180(微升／mL)

分析原因：

a.操作问题，没有捣碎充分

b.由于设备问题，没有在低温（4摄氏度）下进行低温离心，会引起DNA

降解

c.在加入异丙醇之后，摇晃过于剧烈，使得DNA降解。

d.在提取离心过程中，次数过多，将DNA洗去。

e. 缓冲液PH值不合适。

4.3 DNA条带模糊。

分析原因：

a.在操作过程中由于试剂和仪器以及操作方法的问题，使得DNA降解，

导致DNA分解成很多碎片，不能够集中跑电泳。

b.试验中使用的是gold view显色剂，显色效果较EB差。

c. 提取不干净，自配缓冲液PH不合适。

d. 与内切酶的反应时间过短（用了2个小时）

5．参考资料

石庆华.生物化学实验指导[M].北京：中国农业大学出版社，20069：162-168.

邓天龙.生物化学实验[M].四川：电子科技大学出版社，20069:43-45

合肥工业大学1201管理科学与工程一级学科硕士学位标准

合肥工业大学 1201管理科学与工程一级学科硕士学位标准 （2016年5月14日校学位评定委员会审议通过） 1本学科研究方向与特色 管理科学与工程学科是一类面向国民经济和社会发展的复杂管理问题，采用系统思想、定量方法和信息技术，以提高管理效率和决策水平为目标，努力揭示领域或组织管理内在规律和有效运作机理的基础应用学科。本学科在多年研究和实践积累中，形成了如下主要研究方向： （1）信息管理与信息系统 （2）工程与项目管理 （3）电子商务与商务智能 （4）物流与供应链管理 （5）管理系统工程 （6）优化与决策理论 （7）行政管理与电子政务 （8）金融工程 本学科紧密结合国民经济和社会发展中的重大需求，探索研究有中国特色的管理理论与方法，在科学研究、人才培养和社会服务等方面均取得了有较高显示度的成果。 2应具备的知识结构与学分要求 本学科培养适应国民经济建设与社会发展需要，德、智、体、美全面发展，掌握管理科学、信息科学、系统科学、行为科学等多领域知识、相关方法技术和研究范式，以及具有系统地把握管理科学与工程学科相关研究前沿动态、提出研究问题、有效应用信息技术等工具和手段、解决管理工程实践问题和持续创新的能力的高层次管理人才。本学科硕士生应具备如下知识结构： （1）具有较坚实的数学、统计学和管理学基础，系统掌握组织理论、优化理论、决策理论等基础理论知识，能够运用系统分析与系统建模方法、信息与知识管理方法、系统仿真方法与技术、数据挖掘等方法技术独立地进行科研工作，解决一定的实际问题，并进一步加深对该学科方向的理解。

（2）掌握文献检索、调研、资料查询、系统仿真和建模以及研究报告撰写技能，掌握数据分析和学术交流等能力。 （3）具有较强的外语能力，能比较熟练地运用一种主要外语阅读本学科文献，能比较熟练地运用一种主要外语进行学术交流，并撰写规范和高质量的学术论文。硕士生须在规定期限内完成《管理科学与工程一级学科硕士研究生培养方案》规定的必修课程、学位课程、非学位课程、讨论专题、实践环节，并获得规定的学分。其中，学位课程成绩不低于75分，非学位课不低于60分。 3应具备的学术素养 （1）对学术研究具有敏锐的洞察力和浓厚的兴趣,具有较好的学术悟性和语言表达能力,具备一定的学习和实践能力,有从事研究必备的学术热情和创新精神。 （2）治学严谨，掌握本学科坚实的基础理论和系统的专门知识，具有较强的信息技术运用能力、分析和解决实际问题的能力,具有高度的社会责任感和服务于社会展的技能。 （3）具备较强的语言文字表达能力，熟练掌握一门外语，能比较熟练地运用一种主要外语阅读本学科国内外研究文献和进行口头或书面交流，能熟练正确地运用一种主要外语撰写学术论文。 4应具有的基本学术能力 （1）获取知识能力。能够通过多种方式和渠道获取研究所需知识,了解当前研究的前沿问题、热点和难点问题,掌握知识搜索、逻辑整理和内容分类的技能，并通过系统的课程学习掌握专业知识和研究方法的能力。硕士学习期间，研读国内外高水平文献不少于60篇，其中外文文献不少于1/3。 （2）科学研究能力。能够从前人研究成果或生产实践中发现有价值的科学问题,并针对科学问题、提出研究思路、设计技术路线,在研究过程中能够理性思辨,利用基础理论、数据资料进行科学严谨的分析与推理,通过清晰的语言表达和逻辑严谨的归纳总结,论证科学问题的解决过程。 （3）实践能力。在导师指导下参与科研课题并进行实际调研,掌握从事科学研究的基本要求、方法和步骤,能独立提出研究问题，撰写研究报告，具备良好的协作精神和一定的组织能力。 （4）学术交流能力。具备良好的学术表达和交流能力,善于表达学术思想、阐述研究思路和技术手段、展示自己的学术成果。硕士学习期间，应至少参加校内外学术活动（包括参加学术会议）并进行分组报告1次；参加校内举办的各种学术报告和学术讲座等学术活动

全国翻译硕士专业学位(MTI)

附件1 全国翻译硕士专业学位（MTI）教育试点单位名单(215所)序号院校名称序号院校名称序号院校名称序号院校名称 1 安徽大学27 南昌大学53 华南师范大学79 太原理工大学 2 中国科学技术大学28 江西师范大学54 广东外语外贸大学80 山西师范大学 3 合肥工业大学29 辽宁大学55 广西大学81 西北大学 4 安徽师范大学30 大连理工大学56 广西师范大学82 西安交通大学 5 北京大学31 东北大学57 广西民族大学83 西北工业大学 6 北京交通大学32 大连海事大学58 贵州大学84 西安电子科技大学 7 北京航空航天大学33 辽宁师范大学59 贵州师范大学85 复旦大学 8 北京理工大学34 沈阳师范大学60 海南大学86 同济大学 9 北京科技大学35 大连外国语学院61 河北大学87 上海交通大学 10 北京邮电大学36 内蒙古大学62 华北电力大学(保定) 88 上海理工大学 11 北京林业大学37 内蒙古师范大学63 河北联合大学89 上海海事大学 12 北京师范大学38 宁夏大学64 河北师范大学90 东华大学 13 首都师范大学39 山东大学65 燕山大学91 河南科技大学 14 北京外国语大学40 中国海洋大学66 郑州大学92 河南大学 15 北京第二外国语学院41 中国矿业大学67 山东科技大学93 河南师范大学 16 北京语言大学42 中国石油大学68 南京理工大学94 信阳师范学院 17 对外经济贸易大学43 中国地质大学69 青岛科技大学95 黑龙江大学 18 外交学院44 中国科学院研究生院70 济南大学96 哈尔滨工业大学 19 国际关系学院45 厦门大学71 山东师范大学97 哈尔滨理工大学 20 华北电力大学46 福州大学72 曲阜师范大学98 哈尔滨工程大学 21 南京航空航天大学47 福建师范大学73 聊城大学99 东北林业大学 22 河海大学48 兰州大学74 鲁东大学100 哈尔滨师范大学 23 南京农业大学49 西北师范大学75 青岛大学101 武汉大学 24 南京师范大学50 中山大学76 烟台大学102 华中科技大学 25 徐州师范大学51 暨南大学77 山东财经大学103 东南大学 26 扬州大学52 华南理工大学78 山西大学104 武汉理工大学105 华中师范大学133 陕西师范大学161 大连海洋大学189 沈阳理工大学106 湖北大学134 西安外国语大学162 东北财经大学190 首都经济贸易大学

工商管理学院信息管理与信息系统专业

工商管理学院 信息管理与信息系统专业 一.指导思想 信息管理是通过对信息和数据资源的收集、处理、存贮、分析和利用以提高管理绩效的活动，信息系统则是现代管理的基本工具。随着信息和数据时代的到来，信息和数据资源对国民经济与社会发展的作用变得越来越重要。各行各业广泛需要大量既具有管理学知识、又掌握信息技术的中高级专门人才 ，以有效开发信息与数据资源。本专业侧重培养当前信息与数据时代所需要的通用型信息与数据管理专门人才。 二.培养目标 本专业培养具备现代管理学基础知识、系统掌握信息管理与信息系统专业知识、熟练掌握计算机系统开发和管理知识，能胜任各类政府机关、企事业单位和专业信息和数据机构的信息资源管理、数据分析的高级专门人才。 三.毕业要求 1、热爱祖国、具有高度的事业心、责任感和良好的道德品质，具有为国家发展努力工作的强烈愿望。 2、掌握较扎实的数学、经济学和管理学专业知识，熟练掌握信息管理的理论知识、数据分析的方法工具和计算机信息系统的实用技术。 3、掌握信息管理与信息系统基础知识，熟悉信息检索、信息处理、信息与数据分析、信息咨询与服务的专门知识，具有较强的分析与解决日常信息管理问题的能力，具备初步从事本专业理论研究的能力。 4、掌握一门外国语，并具备一定的专业外语会话能力。 5、学生在院系指导下选择自己的学习进程，修满教学计划规定的148学分，并通过《形势与政策》考核要求，方能毕业。达到学位要求者授予管理学学士学位。 6、建议学生在一、二年级选课最多不超过27学分，最低不低于20学分。三、四年级最高不超过28学分，最低不低于18学分。 7、通识教育课程必修模块要求在文化传承类中任选一门2学分，要求在通识教育精品课程中修读2学分。 8、允许学生提前毕业或延长学习年限，但学习年限最长不得超过6年（含休学）。 四.课程结构比例 1、 总学分： 148。 2、 通识教育课程49 学分， 占 33%。 3、 学科基础课程31学分， 占21%。 4、 专业教育课程68学分， 占46 %。 五.专业核心课程 管理信息系统、电子商务、信息分析、数据挖掘、知识管理、商业数据分析实务 六.培养计划表

植物基因组DNA的提取

植物基因组DNA的提取及其定性定量分析 【实验目的】 通过本实验学习利用CTAB法从植物组织中提取DNA并通过琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法对DNA进行定性定量分析。 【实验原理】 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种阳离子型去污剂，可溶解细胞膜，在高离子强度下(大于0.7 M NaCl)，与蛋白和中性多糖形成复合物沉淀出来。利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。然后加入CTAB缓冲液将DNA溶解出来，再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，最后经乙醇沉淀得到DNA。 琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA片段的常用技术。把DNA样品加入到一块包含电解质的多孔支持介质(琼脂糖凝胶)的样品孔中，并置于静电场上。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此，在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系，分子量小的DNA分子比分子量大的DNA分子迁移速率快，迁移距离远，由此得到分离。凝胶电泳也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA分子，超螺旋质粒DNA(cccDNA)泳动最快，其次为线状DNA(L DNA)，最慢的为开环质粒DNA(ocDNA)。 核酸分子(DNA或RNA)由于含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键，在260 nm波长处有特异的紫外吸收峰，其吸收强度与核酸的浓度成正比，这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。 1 OD260相当于dsDNA 50 μg/ml，ssDNA 33 μg/ml和ssRNA 40 μg/ml。可以此来计算核酸样品的浓度。紫外分光光度法不但能确定核酸的浓度，还可通过测定260 nm和280 nm 的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度，若DNA的A260/A280比值高于2.0，则可能有RNA污染，低于1.8则有蛋白质污染。 【仪器、材料与试剂】 一、仪器及耗材离心机、恒温水浴器、台式离心机、电子天平、水平电泳槽、电泳仪、凝胶成像分析系统、高压灭菌锅、紫外线透射仪、微波炉、紫外分光光度仪、微量移液器(10、100、1000 μl量程各一支)、100 ml或250 ml锥形瓶、量筒、液氮、研磨棒、点样板或parafilm、吸头、1.5 ml EP管、PE手套和乳胶手套。 二、药品 三羟甲基氨基甲烷(Tris)、CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)、β-巯基乙醇、氯仿、苯酚、乙醇、氯化钠(NaCl)、盐酸、液氮、硼酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、溴酚蓝、蔗糖、琼脂糖、核酸染料。 三、试剂 1. 2×CTAB buffer 70%乙醇 RNaseA 0.5×TBE缓冲液(工作浓度) 凝胶加样缓冲液(6×) 6. 核酸染料 7. DNA marker 8. 酚/氯仿(1:1, V/V)

合工大生化习题

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生化测试一：蛋白质化学 一、填空题 1.氨基酸的结构通式为 。 2.氨基酸在等电点时，主要以_____________离子形式存在，在pH>pI 的溶液中，大部分以______离子形式存在，在pH

植物基因组DNA提取

植物基因组DNA提取 一、实验目的 1、掌握植物基因组总DNA的抽提方法和基本原理。 2、学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。 二、实验原理 通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。 十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。 三、实验仪器及试剂 实验仪器：高速离心机；烘箱；冰箱；水浴锅；高压灭菌锅；Nanodrop。 实验试剂：玻璃珠，十二烷基磺酸钠(SDS)；三羟甲基氨基甲烷（Tris）；乙二胺四乙酸（EDTA）；氯化钠；苯酚；氯仿；无水乙醇等。 四、实验步骤 1.SDS提取缓冲液在65℃水浴中预热。 2.将叶片置于1.5ml离心管中，液氮速冻，组织研磨器打样。 3.加入700 l的SDS提取缓冲液，涡旋摇匀。 4.置于65℃的水浴中，每隔10 min轻轻摇动，30 min后取出。

5.加入200 μl KAc溶液，摇匀，放入-20℃冰箱30 min。 6.10000 rpm离心5 min，上清移至新离心管中，12000 rpm离心5 min。 7.上清移至新离心管中，加入700 μl异丙醇，-20℃冰箱30 min。 8.10000 rpm离心5 min，弃上清，加入500 μl 70%乙醇漂洗。 9.弃液体，晾干。 10. DNA纯度与浓度测定（使用nanodrop）。 （1）DNA纯度：DNA的OD260/OD280一般为1.8左右。 OD260/OD280 ≈ 1.8：说明较纯； OD260/OD280 > 1.8：说明可能有RNA污染； OD260/OD280 < 1.8：说明可能有蛋白质污染。 五、注意事项 1. 叶片磨得越细越好。 2. 注意移液器的正确使用。 3. 由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA降解。 六、结果与分析 1.植物DNA提取所用试剂的作用？ 2.植物DNA提取的关键步骤有哪些？ 3.植物DNA提取后的用途有哪些？ 4.从化学结构、化学性质、存在场所以及功能等方面比较DNA和RNA的异同。

2007-2016年合肥工业大学811生物化学(二)考研真题及答案解析 汇编

2017版合肥工业大学《811生物化学（二）》全套考研资 料 我们是布丁考研网合工大考研团队，是在读学长。我们亲身经历过合工大考研，录取后把自己当年考研时用过的资料重新整理，从本校的研招办拿到了最新的真题，同时新添加很多高参考价值的内部复习资料，保证资料的真实性，希望能帮助大家成功考入合工大。此外，我们还提供学长一对一个性化辅导服务，适合二战、在职、基础或本科不好的同学，可在短时间内快速把握重点和考点。有任何考合工大相关的疑问，也可以咨询我们，学长会提供免费的解答。更多信息，请关注布丁考研网。 以下为本科目的资料清单（有实物图及预览，货真价实）： 2017版合肥工业大学《生物化学（二）》考研复习全书是合肥工业大学高分已录取的学长收集整理的，全国独家真实、可靠，是真正针对合工大考研的资料。我们将所有的资料全部WORD化，高清打印。真题编写了详细的答案解析，即使是小题也明确指出了考察的知识点，对于做题帮助更大。同时，我们在分析历年考研真题的基础上，针对合工大考研，编写了详细的复习备考讲义，明确列出考研的重点、难点和考点，可在短时间内快速把握重点，提升成绩。初试大家只需要准备我们的资料+教材+配套辅导书就足够了，不用再四处寻找其它资料。 全套资料包括以下内容： 一、合肥工业大学《生物化学二》考研内部信息汇总 “备考篇”主要汇总了考安徽大学生物专业必备的一些信息，主要包括：历年复试分数线，本专业报考难度及竞争情况分析，根据历年真题的考察范围而归纳的考试大纲，学长对于政治、英语等公共课及本专业课的复习策略等。掌握初试必备的信息，才可安心复习。 二、合肥工业大学《生物化学二》历年考研真题及答案解析 注：后期真题及答案均免费更新，请在备注处留下邮箱，更新后会第一时间将电子档发给大家。 1、2015年合工大《生物化学（二）》考研真题（含答案解析） 2、2014年合工大《生物化学（二）》考研真题（含答案解析） 3、2012年合工大《生物化学（二）》考研真题 4、2011年合工大《生物化学（二）》考研真题 5、2010年合工大《生物化学（二）》考研真题 6、2008年合工大《生物化学（二）》考研真题 7、2007年合工大《生物化学（二）》考研真题 三、合工大《生物化学（二）》2017版精品复习笔记（高分版） 教材的作用是学习知识点，但知识点分散性很大，而且无法区分重点、难点，不太适用于考试。为此，我们完全从考试的需求出发，对教材的章节重新进行了整理，将内容相关的章节合并，汇总为专题，并通过分析历年真题提取出考点、重点和难点，将知识点与考研真题融为一体，形成这一套精品的复习笔记。通过本笔记，可在短时间内快速抓住重点和考点，提升成绩显著。本笔记主要包括以下几个版块：

合肥工业大学数字电路习题

2010-2011学年第二学期数字电路试卷 计算机与信息学院杨萍 姓名：__ _______ 班级：__________ 考号：___________ 成绩：____________ 本试卷共 6 页，满分100 分；考试时间：90 分钟；考试方式：闭卷 1. 有一数码10010011，作为自然二进制数时，它相当于十进制数（），作为8421BCD码时，它相当于十进制数（）。 2.三态门电路的输出有高电平、低电平和（）3种状态。 3．TTL与非门多余的输入端应接（）。 4．TTL集成JK触发器正常工作时，其和端应接（）电平。 5. 已知某函数，该函数的反函数=（）。 6. 如果对键盘上108个符号进行二进制编码，则至少要（）位二进制数码。 7. 典型的TTL与非门电路使用的电路为电源电压为（）V，其输出高电平为（）V，输出低电平为（）V，CMOS电路的电源电压为（）V 。 8．74LS138是3线—8线译码器，译码为输出低电平有效，若输入为A2A1A0=110时，输出应为（）。 9．将一个包含有32768个基本存储单元的存储电路设计16位为一个字节的ROM。该ROM有（）根地址线，有（）根数据读出线。 10. 两片中规模集成电路10进制计数器串联后，最大计数容量为（）位。 11. ）；Y3 ＝（）。 12. 某计数器的输出波形如图1所示，该计数器是（）进制计数器。13．驱动共阳极七段数码管的译码器的输出电平为（）有效。二、单项选择题（本大题共15小题，每小题2分，共30分） （在每小题列出的四个备选项中只有一个是最符合题目要求的，请将其代码填写在题后的括号内。错选、多选或未选均无分。） 1. 函数F(A,B,C)=AB+BC+AC的最小项表达式为( ) 。 A．F(A,B,C)=∑m（0，2，4） B. (A,B,C)=∑m（3，5，6，7） C．F(A,B,C)=∑m（0，2，3，4） D. F(A,B,C)=∑m（2，4，6，7） 2．8线—3线优先编码器的输入为I0—I7，当优先级别最高的I7有效时，其输出的值是（）。 A．111 B. 010 C. 000 D. 101 3．十六路数据选择器的地址输入（选择控制）端有（）个。 A．16 B.2 C.4 D.8 4. 有一个左移移位寄存器，当预先置入1011后，其串行输入固定接0，在4个移位脉冲CP作用下，四位数据的移位过程是（）。 A. 1011--0110--1100--1000--0000 B. 1011--0101--0010--0001--0000 C. 1011--1100--1101--1110--1111 D. 1011--1010--1001--1000--0111 5．已知74LS138译码器的输入三个使能端（E1=1，E2A = E2B=0）时，地址码A2A1A0=011，则输出Y7 ～Y0是( ) 。 A. 11111101 B. 10111111 C. 11110111 D. 11111111 6. 一只四输入端或非门，使其输出为1的输入变量取值组合有( )种。 A．15 B．8 C．7 D．1 7. 随机存取存储器具有( )功能。 A.读/写 B.无读/写 C.只读 D.只写 8．N个触发器可以构成最大计数长度（进制数）为( )的计数器。 A.N B.2N C.N2 D.2N 9．某计数器的状态转换图如下， 其计数的容量为( ) A．八 B. 五 C. 四 D. 三 10．已知某触发的特性表如下（A、B A． Q n+1＝A B. C. D. Q n+1＝ B

合工大考研《企业管理学》杨善林编

合工大考研《企业管理学》杨善林编 本文由cyjiang716贡献 ppt文档可能在WAP端浏览体验不佳。建议您优先选择TXT，或下载源文件到本机查看。 企业管理学 合肥工业大学管理学院 第二章计划 2.1 计划及其流程2.2 计划的类型及影响计划的因素2.3 目标与目标管理2.4 现代计划方法与技术 2.1 计划及其流程2.1.1 计划1. 计划的定义 计划（Plan）这个术语的含义是什么？狭计划义的计划是计划工作中计划编制的结果。它告诉人们为实现既定目标需要在什么时间、由什么人、采取什么方法、去开展什么活动最终实现既定的目标。计划具有两种特性：严肃性和灵活性。 2.1 计划及其流程 广义的计划是指人们编制、执行计划，以及检查计划执行情况等一系列计划管理工作。计划工作的特点①计划工作的首要性 ②计划工作的普遍性③计划工作的重要性 2.1 计划及其流程 计划的作用与要求作用：①计划是管理者进行指挥的依据②管理者实施控制的标准③降低未来不确定因素的手段④提高效

率和效益的工具⑤激励人员士气的武器 2.1 计划及其流程 计划的基本要求：①可行性②指导性③预见性④目的性 2.1.2 计划的内容 通俗地说，可以将计划工作的任务和内容概括为“5W1H 5W1H”，即：5W1H 做什么（What to do）?要明确计划的具体任务和要求，明确每一个时期的中心任务和工作重点。为什么做（Why to do it）？要明确计划的宗旨，目标和战略，并论证其可行性。何时做（When to do it ）？规定计划中各项工作的开始和完成的进度，以便进行有效的控制和对能力及资源进行平衡。 2.1.2 计划的内容 何地做（Where to do it?）规定计划的实施地点或场所，了解计划实施的环境条件和限制，以便合理安排计划实施的空间组织和布局。谁去做（Who to do it?）要明确规定由哪个主管部门负责,哪些部门协助,明确责任部门或责任人. 怎么做(How to do it?) 制定实现 计划的措施以及相应的政策和规则，对资源进行合理分配和集中使用，对人力，生产能力进行平衡，对各种派生计划进行综合平衡等。 2.1.3 计划流程 1. 明确企业的使命 2. 估量机会，确定目标 3. 拟定计划方案 4. 选择确定计划方案 5. 制定派生计划 2.2 计划的类型及影响计划的因素 2.2.1 计划的类型①长期(5a以上)、中期(5a以内)和短期(1a) 计

植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根)培训资料

植物基因组D N A提取试剂盒(北京天根)

植物基因组DNA提取试剂盒 1 取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg，加入液氮充分研磨。 2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μL 65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。 3 加入700 μL氯仿，充分混匀，12,000 rpm（~13,400×g）离心5 min。 注：若提取富含多酚或淀粉的植物组织，可在第3步前，用酚：氯仿/1:1进行等体积抽提。 4 小心的将上一步所得水层上相转入一个新的离心管中，加入700 μL缓冲液GP2，充分混匀。 5 将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，弃掉废液。（吸附柱容积为700μL左右，可分次加入离心。） 6 向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 7 向吸附柱CB3中加入600 μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 8 重复操作步骤7。 9 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂

洗液。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中的乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。 10 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，将溶液收集到离心管中。 注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μL，体积过小影响回收率。洗脱液的PH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12,000 rpm （~13,400×g）离心2 min。

新版合肥工业大学药学考研经验考研参考书考研真题

刚上大学的时候，我的家人希望我能考研，因为我的本科学校很普通。 当时，我并没有想过。直到这几年的学习，出于自身对专业课的兴趣越来越浓厚，想要继续深入系统的学习，而我们本科对专业课的学习知识一点皮毛，是远远不够的！ 怀着专业的热爱，我毅然决定考研，在大三上册就开始准备复习。充满信心地去下定决心做一件事情是做好它的前提，最开始自己像一只无头苍蝇一般，没有方向。只能靠自己慢慢摸索，查资料、看考研经验分享、问学长学姐，虽然这个过程很繁琐，但是我已经下定决心考研，所以无所畏惧！ 对于考研来说最关键的就是坚持。一年的考研时间，我想，对于这个词，我是有很多话要说的。 我以为自己是个能坚持的人，但是考研这一年来，真正让我体会到了坚持的不易！ 正如很多研友的分享所说，考研谁不是一边想放弃一边又咬牙坚持着，那些坚持到最后的人，都会迎来他们的曙光。 文章可能有点长，末尾我也加了一些真题和资料的下载方式，大家放心阅读即可。 合肥工业大学药学的初试科目为： (101)思想政治理论 (204)英语二 (349)药学综合 参考书目为： 《药理学》第8 版，朱依谆、殷明，人民卫生出版社

《生物化学》第三版，王镜岩、朱圣庚、徐长法，高等教育出版社 《有机化学》（第五版），张文勤、郑艳、马宁、赵温涛，高等教育出版社，2014 关于英语复习的建议 考研英语复习建议:一定要多做真题，通过对真题的讲解和练习，在不断做题的过程中，对相关知识进行查漏补缺。对于自己不熟练的题型，加强训练，总结做题技巧，达到准确快速解题的目的。 虽然准备的时间早但因为各种事情耽误了很长时间，真正复习是从暑假开始的，暑假学习时间充分，是复习备考的黄金期，一定要充分利用，必须集中学习，要攻克阅读，完形，翻译，新题型！大家一定要在这个时间段猛搞学习。 在这一阶段的英语复习需要背单词，做阅读（每篇阅读最多不超过20分钟），并且要做到超精读。无论你单词背的多么熟，依然要继续背单词，不能停。 真题是木糖英语的真题手译，把阅读真题争取做三遍，做到没有一个词不认识，没有一个句子不懂，能理解文章的主旨，每道题目选项分析透彻。 完型填空的考察重点就是词汇辨析，逻辑关系，固定搭配和语法等。完型一般放在最后一步做，所以时间有限，不需要把文章通读一遍，只要把握首句，即文章的中心大意，不要脱节文章主题意思即可。 做题的时候多联系理解上下文，精读空格所在句，根据前后的已知信息寻找相关的线索去选择合适的单词，所以建议大家练习完形填空要注重思路和寻找文章的线索。另外，要注重固定搭配与常见词组，完型填空常常和搭配有关系，平

合肥工业大学 管理学院博士招生简章

011 管理学院 各专业初试业务课考试内容覆盖范围 学科专业研究方向考试科目覆盖范围120100 管理科学与工程 01.信息管理与信息系统 02.决策科学与技术 03.优化理论与方法 04.电子商务 05.商务智能 06.物流与供应链管理 07.工程与项目管理 08.行政管理与电子政务 09.服务科学与工程 10.社会管理工程 11.管理系统工程 1.英语 2.企业管理学 3.人工智能（二） 4. 运筹学(二) 注：各方向，1、2 必考；3、4 任选一门。企业管理学：

管理的基本原理及管理理论的发展；计划的流程及目标管理；组织结构与设计、组织力量整合及组织文化；领导理论、领导方式与员工激励；控制原则、控制过程及控制方法；管理理论新进展；现代企业制度及企业管理基础工作；战略环境分析、战略类型及其选择；经营决策程序及方法；市场营销观念的演变及理论的新发展、STP 战略及市场营销组合；MRP、MRPⅡ及 ERP、新型生产方式；质量管理含义及其发展、全面质量管理及六西格玛管理；绩效与薪酬管理、员工职业发展与劳资管理；财务管理目标、企业投资管理及运营资金管理；企业信息管理内涵及组织、信息管理与管理变革；知识管理战略、组织结构与企业文化； 项目管理含义及基本要素、项目实施与控制；物流与供应链管理含义、供应链中库存管理；企业并购与风险投资；进入国际市场的模式及其选择、国际企业经营战略。 人工智能（二）： 绪论，人工智能逻辑，知识表示（状态空间、问题规约法、谓词逻辑、产生式、语义网络、框架、剧本），搜索技术（盲目搜索、启发式搜索），推理技术（消解、定性推理、约束 推理、案例推理、概率推理、证据推理、非单调推理），机器学习（归纳学习、解释学习、强化学习、统计学习），计算智能（人工神经网络、模糊计算、粗糙集、遗传算法、蚁群算法、粒子群算法、人工生命、免疫计算），知识发现（关联规则、分类、聚类），知识系统（专家系统、知识库系统、智能决策支持系统、知识管理系统），智能 Agent

植物DNA提取方法

1.2实验方法 1.2.1 茶花基因组DNA的提取 采用CTAB法[8]提取DNA，所有试剂（有机溶剂除外）和器皿都经高压灭菌，主要步骤如下： （1）取两片幼嫩新鲜叶片，置于预冷的研钵中，倒入适量液氮，迅速研磨成粉末状，随后加入3ml预热的2%CTAB抽提缓冲液和50ul抗氧化剂2-巯基乙醇，继续研磨成略有流动性的糊状或粥状，转入1.5ml的离心管中，于65℃水浴锅中保温约60min. (2)待混合物冷却至室温后加入等600ul的CI（氯仿：异戊醇=24：1）溶液混匀，轻轻颠倒离心管几次使管内混合物成乳浊液，常温下10000rpm离心10min,取上清液转入另一干净的离心管中。 （3）重复步骤（2）一次。 （4）取步骤（3）上清液加入2.5倍体积无水乙醇，仔细混匀，-20冰箱30min以上，沉淀DNA 4℃，12000rpm离心10min. (5)弃去上层有机溶剂，加500ul75%乙醇洗涤沉淀，4℃下8000rpm离心5min,弃去上清，洗涤沉淀3次。 （6）倒置或者37度培养箱烘干. (7)加50ulTE缓冲液溶解DNA，于-20℃冷藏备用。 1.2.2 DNA含量和质量的测定 （1）紫外分光光度法：取4ml提取的DNA，将之稀释200倍，测定提取的DNA在260nm 和280nm处的吸光度值，得出OD260/280的值以及DNA和蛋白质浓度。如蛋白质浓度过高，需纯化。 （2）琼脂糖凝胶电泳：配制1.0%琼脂糖凝胶，在0.5×TBE缓冲液中，电压5V/cm电泳约60min，溴化乙锭染色20min,在凝胶成像系统上观察并拍照。 1.2.3 PCR扩增 (1)PCR反应在Biometro PCR仪上进行，反应体系为25ul:ddH2O 14ul,10×Buffer 2.5ul,MgCl(25mM) 2.5ul,dNTPs(2.5mM) 2.0ul,primer(2.0uM) 1.0ul,DNA 2.7ul(约

翻译硕士专业学位培养单位名单

专心翻译 做到极致 翻译硕士专业学位培养单位名单 2007年，国务院学位委员会批准设置翻译硕士专业学位，以培养高层次、应用型、专业化的翻译人才，并成立全国翻译硕士专业学位教育指导委员会（简称“MTI 教指委”），具体负责指导这一新兴学位课程。 截至2011年12月，获准试办翻译硕士专业的高校已达159所。 名单如下（按院校拼音顺序排列）： 第一批培养单位（2007年，共15所） 北京大学 北京外国语大学 复旦大学 广东外语外贸大学 湖南师范大学 解放军外国语学院 南京大学 南开大学 上海交通大学 上海外国语大学 同济大学 西南大学 厦门大学 中南大学 中山大学 第二批培养单位（2008年，共25所） 北京第二外国语学院 北京航空航天大学 北京师范大学 北京语言大学 大连外国语学院 东北师范大学 对外经济贸易大学 福建师范大学 河南大学 黑龙江大学 湖南大学 华东师范大学 华中师范大学 吉林大学 南京师范大学 山东大学 首都师范大学 四川大学 四川外语学院 苏州大学

专心翻译 做到极致 天津外国语学院 武汉大学 西安外国语大学 延边大学 中国海洋大学 第三批培养单位（2010年，共118所） 安徽大学 安徽师范大学 北华大学 北京交通大学 北京科技大学 北京理工大学 北京林业大学 北京邮电大学 长沙理工大学 成都理工大学 大连海事大学 大连理工大学 电子科技大学 东北大学 东北林业大学 东华大学 东南大学 福州大学 广西大学 广西民族大学 广西师范大学 贵州大学 贵州师范大学 国际关系学院 哈尔滨工程大学 哈尔滨工业大学 哈尔滨理工大学 哈尔滨师范大学 海南大学 合肥工业大学 河北大学 河北理工大学 河北师范大学 河海大学 河南科技大学 河南师范大学 湖北大学 湖南科技大学 华北电力大学 华南理工大学 华南师范大学

管理学院18种期刊及CSSCI

北京科技大学东凌经济管理学院（1）18种重要期刊：（此外，影响因子>=1的SCI，SSCI期刊） 管理科学学报 中国社会科学 科研管理 管理工程学报 中国管理科学 研究与发展管理 管理学报 中国工业经济 数量经济技术经济研究经济研究 中国软科学 南开管理评论 会计研究 管理世界 系统工程学报 金融研究 世界经济 系统工程理论与实践 （2）重要期刊： ①.全部重点期刊 ②.自然科学基金管理科学部重要学术期刊 ③.SCI，SSCI，EI，及CSSCI中经济类与管理类刊源 ④.CSSCI中法学和统计学类刊源（考核法学和统计学学科老师） ⑤.以下10中期刊： 冶金自动化 制造业自动化工业工程 信息与控制 计算工程与应用计算机应用研究信息系统学报 中国管理信息化中国教育信息化数学的认识与实践 （3）一般期刊： ①.未列入上述目录的中文核心期刊及其他类别的SSCI刊源 ②.有国际连续出版刊物号（ISSN）的外文期刊 ③.被ISTP收录或有书号（ISBN）的会议文集和丛刊

CSSCI（2012-2013） 管理学（29种） 序号期刊名称主办（管）单位 1 管理世界国务院发展研究中心 2 南开管理评论南开大学商学院 3 科研管理中科院科技政策与管理科学研究所等 4 科学学研究中国科学学与科技政策研究会 5 管理科学学报国家自然科学基金委员会管理科学部 6 中国软科学中国软科学研究会 7 外国经济与管理上海财经大学 8 研究与发展管理复旦大学 9 公共管理学报哈尔滨工业大学管理学院 10 科学学与科学技术管理中国科学学与科技政策研究会等 11 管理科学哈尔滨工业大学 12 管理工程学报浙江大学 13 中国管理科学中国优选法统筹法与经济数学研究会等 14 管理学报华中科技大学 15 管理评论中国科学院研究生院 16 中国行政管理中国行政管理学会 17 预测合肥工业大学预测与发展研究所 18 系统工程理论与实践中国系统工程学会 19 科技进步与对策湖北省科技信息研究所 20 中国科技论坛中国科学技术发展战略研究院 21 科学管理研究内蒙古自治区软科学研究会 22 软科学四川省科技促进发展研究中心 23 系统工程湖南省系统工程与管理学会 24 经济管理中国社会科学院工业经济研究所 25 经济体制改革四川省社会科学院 26 系统管理学报上海交通大学 27 华东经济管理安徽经济管理学院 28 宏观经济管理国家发改委宏观经济管理编辑部 29 管理现代化中国管理现代化研究会

植物DNA提取

实验1 植物DNA的提取 实验目的 采用CTAB法从植物叶片中提取基因组DNA，并进行纯度分析。 掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。 实验原理 1、原理 核酸是生物有机体中的重要成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类，在真核细胞中,前者主要存在于细胞核中，后者主要存在于细胞质及核仁里。在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。 在浓氯化钠溶液(1～2mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA 核蛋白的溶解度很 小；而在稀氯化钠溶液(0.14mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。分离得到核蛋白后，需进一步将蛋白等杂质除去，常采用的去除蛋白的方法有3种：①用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间，而DNA溶于上层水相。用两倍体积95％乙醇溶液将DNA钠盐沉淀出来。如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀，得到的是游离的DNA。②用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，与核酸分离，从而从材料中直接提取出DNA。③用苯酚处理，然后离心分层，DNA或溶于上层水相，或存在于中间残留物中，蛋白变性后则停留在酚层内。吸出上面水层，将其注入两倍体积的95％乙醇溶液中，得到白色纤维状DNA沉淀。反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的

DNA制品。为了彻底除去DNA制品中混杂的RNA，可用RNA酶处理。生物材料中含有的脂肪物质和大部分的多糖，在用盐溶液分离核蛋白和用乙醇或异丙醇分级沉淀时即被除去。 在DNA提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构：①化学因素，核酸的结构在pH值4.0—11.0间较稳定，pH值在此范围外就会使核酸变性降解，故制备过程应避免过酸过碱。②物理因素，DNA分子链很长，是双螺旋结构，既有一定的柔性。又有一定的刚性，故强机械作用如剧烈搅拌会令DNA分子断裂，不利于收集，应加以避免。③酶的作用，细胞中普遍存在的核酸酶在细胞壁或膜遭到破坏时被释放出来，它会降解DNA分子。故须用酶的变性剂、抑制剂使之失活。操作过程最好在低温(0℃左右)下进行。常用的酶抑制剂有柠檬酸盐、氟化物、砷酸盐、乙二胺四乙酸盐、(ETDA-Na)等。SDS和苯酚作为蛋白变性剂，同时可使核酸酶被破坏而失活。 2、DNA的提取原理 （1）CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法：先将新鲜的叶片在液氮中研磨，破碎其细胞，然后加入CTAB分离缓冲液，将DNA溶解出来，再经氯仿-异戊醇抽提除去蛋白质，最后得到DNA。 （2）SDS法是植物总DNA的提取方法。先将新鲜的叶片在液氮中研磨以机械力破本碎细胞壁，然后加入SDS使细胞膜破裂，并同时将蛋白质和多糖等杂质与核酸分开。加入KAc可使SDS—蛋白质复合物转变为溶解度更小的钾盐形式，使沉淀更加完全。 3、DNA的浓度测定和纯度分析 （1）定磷法：是对样品中核酸（DNA和RNA）含量的准确定量。将样品中的核酸用强酸（硫酸或高氯酸）消化成无机磷，然后用定磷试剂对生成的无机磷酸进行滴定。定磷试剂是酸性钼酸铵溶液，钼酸铵能与无机磷酸定量结合成磷钼酸络合物，该络合物能被抗坏血酸等还原剂还原成兰色的钼蓝，在660nm处有最大光吸收。 （2）紫外光吸收法：核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm。