第一章概论
1.基本要求
1.1了解
(1) 学习《临床检验仪器学》课程的目的
(2) 如何选用和维护临床检验仪器
(3) 临床检验仪器的分类
(4) 临床检验仪器的发展趋势
1.2 熟悉
(1) 临床检验仪器的特点
(2) 临床检验仪器的主要部件
1.3 掌握
临床检验仪器常用的性能指标
2 重点难点
2.1 重点
如何选用和维护临床检验仪器
2.2 难点
(1) 临床检验仪器常用的性能指标
(2) 临床检验仪器的主要部件
3.讲授学时
建议2学时
4.内容提要
4.1学习《临床检验仪器》课程的目的
检验医学是一门涉及范围广泛的多专业交叉性学科。随着现代医学的不断发展,检验医学已经不再是单纯地辅助临床诊断。各种检验项目的检测结果为临床医生和患者提供了真实可靠的实验室数据,对疾病的诊断、治疗、病情监测、预后判断和健康评价发挥着重要作用。培养和提高医学院校相关专业的各层次学生、实验室工作人员熟练掌握和使用各类现代化检验仪器,使之在疾病的诊断和治疗中发挥最佳
的效能,成为相当急迫,重要的任务。
使各层次学生和相关工作人员了解和掌握名目繁多的检验仪器的性能质量,掌握各种常用检验仪器的工作原理、分类结构、技术指标、使用方法、常见故障的排除、临床检验仪器中的计算机技术,关注其发展趋势及特点,以使有限的仪器得到综合应用,为他们更好地从事临床检验工作打下坚实的基础,这就是学习本课程的目的。
4.2 临床检验仪器的特点、分类和常用性能指标
4.2.1 临床检验仪器的特点
临床检验仪器多是集光、机、电于一体的仪器,使用部件种类繁多。尤其是随着仪器自动化程度的提高和仪器的自动化、智能化,仪器功能的不断增强,各种自动检测、自动控制功能的增加,使临床检验仪器结构更加复杂。一般来说,临床检验仪器具有的特点有:涉及的技术领域广、结构复杂、技术先进、精度高、对使用环境要求严格等。
4.2.2 临床检验仪器的分类
(1)分离分析检验仪器低速离心机,高速离心机,超速离心机;气相色谱仪,高效液相色谱仪;等电聚焦电泳仪,高效毛细管电泳仪。
(2)光谱分析检验仪器紫外─可见分光光度计;荧光分析仪;原子吸收光谱仪,原子发射光谱仪,荧光光谱仪。
(3)目视检验仪器普通生物显微镜,荧光显微镜,紫外线显微镜,偏光显微镜,相衬显微镜,透射电子显微镜,扫描电子显微镜。
(4)细胞及分子生物学检验仪器培养箱、生物安全柜、流式细胞仪、基因扩增仪、全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪等。
(5)临床检验常规仪器血细胞分析仪,血液凝固分析仪,血沉分析仪,血液流变学分析仪;尿液分析仪,尿沉渣分析仪;样品自动处理系统,半自动生化分析仪,全自动生化分析仪;电解质分析仪,血气酸碱分析仪;自动血培养仪,微生物快速检测仪;酶免疫分析仪,发光免疫分析仪,γ计数器,微量蛋白比浊仪,磁分离酶联免疫测定仪等。
(6)其它临床检验仪器(包括及时检测仪器和实验室自动化系统)。
4.2.3 临床检验仪器常用的性能指标
一个优良的检验仪器应具有:灵敏度、分辨率和精度高,噪音和误差小,可靠性、
稳定性和重复性好,响应时间短,测量范围、示值范围、频率响应范围和线性范围宽等性能指标。
4.3 临床检验仪器的主要部件、维护和选用标准
4.3.1 临床检验仪器的主要部件
临床检验仪器的主要部件包括: 取样(或加样)装置、预处理系统、分离装置、检测器、信号处理系统、显示装置、补偿装置、辅助装置、样品前处理系统等。
4.3.2 临床检验仪器的维护
检验仪器维护工作的目的是减少或避免偶然性故障的发生,延缓必然性故障的发生,并确保其性能的稳定和可靠。仪器的维护工作是一项贯穿整个检验过程的长期工作,必须根据各仪器的特点、结构和使用过程,针对容易出现故障的环节,制定出具体的维护保养措施,由专人负责执行。
(1)操作人员应认真阅读仪器操作说明书,正确使用仪器;
(2)检验仪器对使用环境有很高的要求,应让仪器始终处于清洁、干燥并符合要求的温、湿度环境中,要确保精密仪器远离腐蚀源。
(3)要有良好稳定的供电系统,这对于保持检验仪器的精度和性能极为重要。(4)应当按照仪器说明书提供的方法和标准(图谱)对仪器定期进行校验,同时应该认真做好仪器的各项工作记录。
4.3.3 临床检验仪器的选用标准
选用临床检验仪器应要求仪器的精度等级高、应用范围广、检测范围宽、稳定性好、灵敏度高、噪音小、响应时间短等;要求仪器的检测速度快、检测参数多,结果准确可靠,可靠性好;用户操作程序界面全中文显示,操作简便,快捷;有国内生产的配套试剂盒供应;仪器不失效的性能、寿命、可维修性和仪器的保存性能好,如仪器的装配合理、材料先进、采用标准件及同类产品通用零部件的程度高,售后维修服务好;能充分体现高效益、低成本等。
4.4 临床检验仪器的进展和发展趋势
4.4.1 临床检验仪器的进展
从十七世纪末,荷兰人Leeuwenhook在诊断中创造了显微镜开始至今,临床检验仪器的进展经历了几个关键性的阶段。其学科的发展一直与科学技术的进步密切相关,尤其是电子技术、计算机技术和生物芯片技术对其有着巨大的影响。随着医学基础
学科和生命学科的迅猛发展,许多新技术、新方法在临床检验中的广泛应用,将使得临床检验仪器的发展更加日新月异。
4.4.2 临床检验仪器的发展趋势
(1)由计算机技术和通信技术相结合而发展的计算机网络,已渗透到临床检验实验室中,形成了多用户共享高精度、高速度、多功能、高可靠性的检验仪器。
(2)利用物理学的新效应和高新技术及其成就开发新型检验仪器和新型高灵敏度、高稳定性、强抗干扰能力的新型传感器技术和纳米检测技术,研制新型的、高精度、高分辨率的检验仪器。
(3)模块式设计形成一个高质量多功能的检验系统,实现了一机多用。
(4)分子生物学技术已成为核心技术和前导技术逐渐运用到检验设备的研发中去,影响着检验仪器发展的历程。
(5)专家系统技术更趋完善,使临床检验仪器具有更高级的智能。
(6)仪器更机器人化、更个性化。
(7)自动化水平更高。
(8)检验结果标准化。
(9)仪器小型便携化。
第二章显微镜技术和显微镜
1.基本要求
1.1了解
(1) 了解显微镜技术的产生和发展现状
(2) 了解光学显微镜的常见故障及其排除方法
1.2 熟悉
(1) 熟悉临床常见显微镜的临床应用
(2) 熟悉光学显微镜的维护、调试与使用方法
(3) 熟悉扫描隧道显微镜的基本原理及特点
(4) 熟悉超高压电子显微镜的原理和特点
(5) 熟悉电子显微镜的临床应用
1.3 掌握
(1) 掌握光学显微镜的光学参数、基本原理、结构和关键部件
(2) 掌握常用显微镜的基本原理、结构和特殊部件
(3) 掌握电子显微镜的类型和组成
(4) 掌握透射和扫描电子显微镜的基本原理及特点。
2 重点难点
2.1重点
(1) 光学显微镜的光学参数、基本原理、结构和关键部件
(2) 临床常用显微镜的基本原理、结构和特殊部件
(3) 临床常用显微镜的性能、用途
(4) 光学显微镜的调试与使用方法
(5) 电子显微镜的类型和组成
(6) 透射电子显微镜、扫描电子显微镜、扫描隧道显微镜的基本原理及特点
2.2 难点
(1) 临床常用显微镜的基本原理、结构和特殊部件
(2) 临床常用显微镜的性能、用途
(3) 透射电子显微镜、扫描电子显微镜、扫描隧道显微镜的基本原理及特点
3.讲授学时
建议10学时
4.内容提要
4.1光学显微镜
4.1.1 光学显微镜的工作原理
光学显微镜是利用光学原理,把人眼所不能分辨的微小物体放大成像,供人们提取物质微细结构信息的光学仪器。显微镜是由两组会聚透镜组成的光学折射成像系统。把焦距较短、靠近观察物、成实像的透镜组称为物镜(object lens),而焦距较长,靠近眼睛、成虚像的透镜组称为目镜(ocular lens)。而相对于物镜的成像条件及最后二次成像于观察者的明视距离等条件的满足是通过仪器的机械调焦系统来实现的。被观察物体位于物镜的前方,被物镜作第一级放大后成一倒立的实像,然后此实像再被目镜作第二级放大,得到最大放大效果的倒立的虚像,位于人眼的明视距离处。
4.1.2 光学显微镜的基本结构
光学显微镜的基本结构包括光学系统和机械系统两大部分。光学系统是显微镜的主体部分,有包括物镜、目镜、聚光镜及反光镜等组成的照明装置。机械系统是为了保证光学系统的成像而配置的,包括调焦系统、载物台和物镜转换器等运动夹持部件以及底座、镜臂、镜筒等支持部件。一些特殊类型或高级显微镜还有一些附加装置。
图2-1 显微镜基本结构示意图
4.1.3 光学显微镜的性能参数
放大率:显微镜的放大率(amplification)或称放大倍数是指显微镜经多次成像后最终所成(放大的)像的大小相对于原物体大小的比值。
数值孔径:数值孔径(numerical aperture)又叫镜口率,是物体与物镜间媒质的折射率n与物镜孔径角的一半(β)正弦值的乘积,通常缩写为NA。
分辨率:显微镜的分辨率(distinguishability)又称为分辨本领(resolving power),是指分辨物体微细结构的能力。
视野:视野(visual field)又称视场(field),是指通过显微镜所能看到标本所在空间的范围。
景深与焦长:景深(depth of field)又称焦点深度,是指在成一幅清晰像的前提下,像平面不变,景物沿光轴前后移动的距离称―景深‖。景物不动,像平面沿光轴前后移动的距离称―焦长‖。
镜像亮度和清晰度:镜像亮度即显微镜的图像亮度的简称。镜像清晰度是指图像的轮廓清晰、衬度适中的程度。
工作距离:工作距离是指从物镜前表面中心到被观察标本间满足工作要求的距离范围,与物镜的数值孔径成反比。
4.1.4 像差和色差
1.像差(aberration):光学仪器不可能使物点发出而进入系统的所有光线都是沿着高斯光学的理想光路成像,从而导致成像在形状方面的缺陷。
球差( spheric aberration ):光轴上的点光源所发出的光锥入射到透镜的球折射面时,由于通过透镜边缘的光线不满足近轴光线的条件,因此不能和通过近轴曲面的光线会聚成一个理想的亮点,而是形成一个中间亮边缘逐渐模糊的弥散斑,这就是透镜的球面像差,简称为球差。
彗差(broom aberration):近光轴外的点光源发出的光束,经过透镜中央和边缘部分后在垂直于光轴的同一成像平面上也不能交于同一个像点。离光轴越近的像会聚越好,亮度越大,亮点越小。于是在成像平面上便形成一个顶端小而亮,远离光轴方向形成逐渐增宽且亮度减弱的模糊尾部,形如彗星,称为彗差。
像散(astigmatism):远离光轴的物点发出的光,即使是以细光束成像也不可能会聚于一点,而是在像空间不同的成像面上或者成椭圆弥散斑,或者在特殊位置形成圆形弥散斑,甚至是形成两个垂直方向上的短亮线,这种成像缺陷称为像散。
场曲:一个平面的物体通过透镜成像后,虽然像平面上任意一点仍然是清晰的,但所成的像不再是一个平面,而成了一弯曲的面,这就是场曲。
畸变(distortion):由于像平面上各处放大率不同引起的成像缺陷称为畸变。畸变的原因是由于透镜边缘与透镜近轴的放大率不同而引起的。
2.色差(chromatic aberration ):是一种由白光或复色光经透镜成像时,会因各种色光存在着光程差而造成颜色不同、位置不重合、大小不一致的不同成像效果,从而造成像和物的较大失真。
4.2 光学显微镜的分类及其应用
4.2.1 双目生物显微镜
双目显微镜(binocular microscope)的结构是利用一组复合棱镜把透过物镜后的光
束分成强度相同的两束而形成两个中间像,分别再由左右目镜放大。来自物镜的光线经棱镜组分光成两束平行光束,进入目镜,双目显微镜必须满足分光后两束光的光程必须相同和两束光的光强度大小一致这两个基本要求。
4.2.2 荧光显微镜
荧光显微镜利用物质的荧光性识别物质。荧光物质把入射的紫外线变为可见光,使荧光显微镜对可见光成像,故可以采用常规的物镜和目镜。当辐射波长在3000以下时,应采用贵重的石英玻璃作载玻片,为避免试样上的灰尘或污点产生外来的荧光,被检试样必须十分清洁。为防止紫外线进入物镜,可以采用暗视场照明。荧光显微镜既可以观察固定的切片标本,而且可以进行活体染色观察。
4.2.3 相衬显微镜
光线只有通过染色标本时其波长、振幅发生变化,人眼才能看见,但活细胞和未染色的标本由于光波长和振幅不发生变化,人眼看不到,但其相位有变化,因此利
用光的干涉和衍射效应把透过标本不同区域的光波光程差转变成振幅差,使细胞内各种结构之间呈现清晰可见的明暗对比。可用来观察活细胞和未染色的标本。
4.2.4 倒置显微镜
倒置显微镜(Inverted Microscope)的组成和普通显微镜一样,只不过物镜与照明系统颠倒,前者在载物台之下,后者在载物台之上,用于观察培养的活细胞,具有相差物镜。
4.2.5 暗视野显微镜
暗视野显微镜(dark field microscope)的聚光镜中央有当光片,使照明光线不直接进人物镜,只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜,因而视野的背景是黑的,物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至4nm~200nm的微粒子,分辨率可比普通显微镜高50倍。它可用来观察小于0.1μm物体的存在,这是其他光学显微镜观测不出来的。还可用来观察活细胞的运动,尤其是配合显微摄影技术,可记录一个细胞或细胞器的运动轨迹,借此可分析它的运动方向,乃至速度等。
4.2.6 紫外光显微镜
使用紫外光源可以明显提高显微镜的分辨率,对于生物样品使用紫外光照明还具有独特的效果。生物细胞中的原生质对可见光几乎是不吸收的,而蛋白质和核酸等生物大分子对紫外光具有特殊的吸收作用。因此,可以使用紫外光显微镜(ultraviolet microscope)研究单个细胞的组成与变化情况。
4.2.7 偏光显微镜
偏光显微镜是利用光的偏振特性,对具有双折射性(即可以使一束入射光经折射后分成两束折射光)的晶体、液晶态物质进行观察和研究的重要光学仪器。
偏光显微镜是在一般显微镜的基础上增添了使普通光转变成线偏振光和检测偏振光的装置或观察干涉图样的特殊透镜。即光源前有偏振片(起偏器),使进入显微镜的光线为偏振光,镜筒中有检偏器(一个偏振方向与起偏器垂直的起偏器)。
偏光显微镜的载物台是可以旋转的。当载物台无样品时,无论如何旋转载物台,由于两个偏振片是垂直的,显微镜里看不到光线。而放入旋光性物质后,由于光线通过这类物质时发生偏转,因此旋转载物台便能检测到这种物体。
利用它可以清楚地观察到纤维丝、纺锤体、胶原、染色体、卵巢、骨骼、毛发、活细胞的结晶或液晶态的内含物、神经纤维、肌肉纤维、植物纤维等的细微结构,从而可以分析细胞、组织的变化过程。
4.2.8 激光扫描共聚焦显微镜
激光扫描共聚焦显微镜是在荧光显微镜成像的基础上装有激光扫描装置,以单色激光作为光源,使样品被激发出荧光,利用计算机进行图像处理,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像。
共聚焦显微镜利用激光扫描束经照明孔形成点光源对标本内焦平面上的每一点扫描,由于照明孔与检测孔相对于物镜焦平面是共轭的,焦平面上的点同时聚焦于照明孔和检测孔,焦平面以外的点不会在检测孔处成像,这样就得到了标本清晰的光学切面图,克服了普通光镜图像模糊的缺点。
4.2.9 干涉相衬显微镜
干涉相衬显微镜利用偏振光,有四个特殊的光学组件:偏振器、棱镜、滑行器和检偏器。
偏振器直接装在聚光系统的前面,使光线发生线性偏振。在聚光器中安装了石英Wollaston棱镜,可将一束光分解成偏振方向不同的两束光(x和y),二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微镜光轴平行的方向。最初两束光相位一致,在穿过标本相邻的区域后,由于标本的厚度和折射率不同,引起两束光发生光程差。在物镜的后焦面处安装了第二个Wollaston棱镜(滑行器),把两束光波合并成一束。这时两束光的偏振面(x和y)仍然存在。最后光束穿过第二个偏振装置(检偏器),检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光,使二者发生干涉。
干涉相衬显微镜的优点是能显示结构的三维立体投影影像,与相衬显微镜相比,其标本可略厚一点,折射率差别更大,故影像的立体感更强,产生类似于浮雕的效果。它使细胞的内部结构,特别是一些较大的细胞器,如核、线粒体等,立体感特别强,因此适合应用于显微操作技术。
4.2.10 近场扫描光学显微镜
近场显微镜的微探头是一个中空的、针状的、顶部小于150nm,内孔直径为50nm 的玻璃微管,管壁镀铝膜,最终使光线只能从直径为50nm(可见波长的1/10左右)的内孔射入,微管的尾部接上十分灵敏的光量子探测器测量进入内孔的光量。这种技术的理论分辨率极限约10nm。由于采用可见光对生物样品损害很少,而且既可以用在空气中(与电子显微镜必须在真空条件下相比要优越),又可以用在水中(与一般的光学显微镜相比也有优越性)。
这种光学显微镜技术将对研究活体中的病毒和染色体等生物物质的结构和形态发
挥作用。由于探测器对可见光是灵敏的,还可以对生物样品进行荧光分析。这种显微镜还能用来研究材料的表面性质。
4.3 电子显微镜
4.3.1 电子显微镜的基本结构
电子显微镜主要由电子光学系统、真空系统、供电系统、机械系统和观察显示系统等几部分组成。电子光学系统主要由电子透镜和电子枪组成。
真空系统主要由机械泵、油扩散泵或离子泵、联动控制阀门、真空排气管道、空气过滤器和用于真空度指示的真空测量规等组成。
供电系统包括高压电源、真空系统供电电源、透镜电源、辅助电源及安全保护系统的电源等。
机械系统包括电镜座、标本室、磁屏蔽外壳、镜筒、制冷系统及控制工作台等。观察显示系统由荧光屏和照相室两部分组成。
4.3.2 电子显微镜的分类及其应用
1. 透射电子显微镜:透射电子显微镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像,投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。透射电镜的分辨率为0.1~0.2nm,放大倍数为几万~几十万倍。由于电子易散射或被物体吸收,故穿透力低,必须制备更薄的超薄切片(通常为50~100nm)。在生物医学中主要用于观察组织和细胞内的亚显微结构、蛋白质、核酸等大分子的形态结构及病毒的形态结构等,另外,透射电镜还是区分细胞凋亡与细胞坏死最可靠的方法。细菌细胞结构,鞭毛结构,放线菌的孢子结构及孢子表面装饰物立体形状等超微结构的观察,都需用透射电子显微镜。
图2-2 透射电子显微镜的实体图
2. 扫描电子显微镜:扫描电子显微镜的工作原理是用一束极细的电子束扫描样品,在样品表面激发出次级电子,次级电子的多少与电子束入射角有关,也就是说与样品的表面结构有关,次级电子由探测体收集,并在那里被闪烁器转变为光信号,再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束的强度,显示出与电子束同步的扫描图像。图像立体形象,反映了标本的表面结构。为了使标本表面发射出次级电子,标本在固定、脱水后,要喷涂上一层重金属微粒,重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。其分辨率一般为3nm~10nm,放大率为5倍~300 000倍,加速电压为1kV~30kV,SEM的景深长、视野大、图像有立体感、样品制备简
单、放大率范围广、能够观察较大样品的局部细微结构。扫描电镜可以观察到微观世界的立体形象, 它的图像是三维的逼真反映出样品表面结构的凹凸不平,如细菌的形态,鞭毛大小结构,放线菌的孢子表面装饰物等。在生物医学上,扫描电镜主要用来观察组织、细胞表面或断裂面的显微和亚显微结构及较大的颗粒性样品
(3nm~10nm)的表面形态结构。
3. 扫描隧道显微镜:扫描隧道显微镜是根据量子力学原理中的隧道效应和三维扫描而设计。当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时,此处电子云重叠,外加电压(2mV~2V),针尖与样品之间产生隧道效应而有电子逸出,形成隧道电流,通过隧道电流获取显微图像,而不需要光源和透镜。扫描隧道显微镜的分辨率很高,横向为0.1~0.2nm,纵向可达0.001nm,已达原子量级的分辨率。它的优点是三态(固态、液态和气态)物质均可进行观察,可在真空、大气、常温等不同环境下工作,甚至可将样品浸在水和其它溶液中,不需要特别的制样技术。普通电镜只能观察制作好的固体标本。利用扫描隧道显微镜可直接观察生物大分子,如DNA、RNA和蛋白质等分子的原子布阵,和某些生物结构,如生物膜、细胞壁等的原子排列,特别适用于研究生物样品和在不同实验条件下对样品表面的评价。STM有两种工作方式,一种称为恒流扫描方式,即采用电子反馈线路控制隧道电流使其大小恒定,而用压电陶瓷管控制针尖的表面扫描路线保持间距不变,随着表面高低起伏而上下运动。另一种工作模式是恒高度工作,在对样品进行扫描过程中保持针尖的绝对高度不变;于是针尖与样品表面的局域距离将发生变化,隧道电流的大小也随着发生变化;通过计算机记录隧道电流的变化,并转换成图像信号显示出来,即得到了STM显微图像。
4. 超高压电子显微镜:超高压电镜是指加速电压在500kV以上的电子显微镜,目前是制作3000kV的超高压电子显微镜。普通的电子显微镜可用于观察100纳米极薄的材料,而使用超高压电子显微镜就能进一步观察到更厚、更硬的材料。超高压电镜的优点是电子束穿透力强,可观察0.5μm~10μm的厚切片。因为是超高压,所以可减少由电子线的非弹性散射对材料的损害,因而能观察到接近自然状态的材料。电压越高,电子线的波长就越短,因而提高了电子显微镜的分辨率,可以观察活细胞超微结构的动态变化。
4.4 显微镜的维护、常见故障及排除
4.4.1 显微镜的使用
低倍镜的使用:
1.对光:转动粗调节螺旋,降低载物台;旋转物镜转换器,使10倍物镜头对准镜台孔;然后升高聚光镜,打开光圈,将反光镜的凹面对准光源,直至视野明亮为止。
2.将要观察的切片放在载物台上,固定好,并将要观察的部位移至中央。
3.调焦距:旋转粗调螺旋,升高载物台,至物镜距玻片约0.5cm时,再缓慢降低镜台,直到看清图像为止。
4.调节两瞳孔间的距离:一边用双眼自目镜中观察,一边用双手握住两个目镜管,前后或左右移动,直到双眼看到一共同视野为止。
5.为使右眼图像更清晰,可轻轻转动微调螺旋,欲使左眼图像清晰,需旋转镜管长度调节环。
高倍镜的使用:
用低倍镜看清图像后,将要进一步放大的结构移至视野中央,一边从侧面观察,一边旋转物镜转换器,将高倍镜头对准镜台孔;升高聚光镜,将光线调节到最亮的程度;然后,稍微转动微调螺旋,即可观察到清晰的图像。
油镜的使用:
用低倍镜看清图像后,将所要观察的结构移至视野中央,在标本所要观察的部位滴一滴镜油,旋转物镜转换器,将油镜头对准镜台孔,使油镜头下端与镜油接触,然后,轻轻转动微调螺旋,即可看清物像。使用油镜时,应把聚光镜的光圈充分开大。用完油镜后,必须用擦镜纸蘸清洗剂,将镜头和玻片擦净。
4.4.2 显微镜的维护
1.搬动显微镜时,应该用右手握镜臂,左手托镜座,平贴胸前,以防撞碰。切勿用一只手斜提,前后摇摆。
2.每次使用显微镜前,要检查显微镜的主要部件有无缺损,发现问题,及时报告。使用时,要严格按操作程序,正确地缓慢移动有关机械部分。
3.禁止拆卸显微镜的各个部件,更不允许与其它显微镜对换,以免安装不当影响观察效果。
4.如镜头表面有灰尘,应该用擦镜纸擦,不允许用口吹、手指抹,或用其它纸、布擦。
5.显微镜用完后,将4倍镜头对准镜台孔,升高镜台,降下聚光器,打开光圈,盖好防尘罩,放回原处。
4.4.3 显微镜的常见故障及排除
4.4.4 显微镜拆装的注意事项
4.4.5 电子显微镜的维护
4.5 显微摄影术
4.5.1 成像原理与常用的装置
从显微镜目镜射出的光线都会聚在―出射点‖上,观察显微镜时人的眼睛就在这一位置。将感光胶片放于此位置并进行曝光,即可将此图像记录下来。图像的大小、放大倍率可由胶片与出射点间的距离进行调整,也可由目镜、物镜的倍数而加以改变。常用的显微摄影装置有两种:①显微照相机;②照相显微镜。
4.5.2 感光材料及其暗室加工
传统显微照相技术采用胶片作为记录介质,常用的胶片有黑白负片,彩色负片,彩色反转片几种。其中135型者更为常用。感光胶片都是将照相乳剂涂在纤维素酯的片基上而组成的。黑白胶片的乳剂层为卤化银微晶体与明胶所组成。彩色胶片的乳剂层则由分别感受三原色或三原色补色的三层乳剂叠加在一起。每层乳剂仍由卤化银微晶体与明胶所组成,但各层卤化银微晶体上偶联有不同的成色剂,而于曝光后显影时与显影剂化合而形成各种原色或补色。其中的银粒则于显影后漂白除去,最后只留下透明的色素。
4.5.3 滤色镜的使用
1. 黑白片显微摄影中滤色镜的使用:在使用黑白全色片进行显微摄影时标本上的各种颜色是以不同的灰度在胶片上显示的,而所拍的各种生物标本大都是经过染色处理的,所以反差不当的现象时有发生,不能获得满意的效果。这时,可在光源处加用滤色镜进行调整。
2. 彩色片显微摄影中滤色镜的使用:彩色胶片分为彩色负片(可直接进行扩印或转制成幻灯片)和彩色反转片(可直接制成幻灯片,或转制成扩印片)。两者又都分为日光型与灯光型。日光型者适用于5500K的照明条件(如自然光、氙灯、闪光灯等),灯光型者适用于3400K(A型)(如卤素灯),或3200K(B型)(如钨灯)的照明条件。
4.5.4 数码显微摄影技术
数码相机置于相当于显微目镜出瞳处适当的部位,使其能清晰地拍摄显微图像并经过模数转换、图像压缩、将图像储存于外置存储卡。数字式显微摄影仪可根据不同需求配置计算机系统、打印机或电视机。并可通过USB接口与计算机连结用以拍摄、储存、编辑、传送图像;也可通过AV接口与电视机连结以显示所获得的图像。
第三章离心技术与离心机
1.基本要求
1.1 了解
(1)离心技术与离心机的应用
(2)离心机的维护
(3)离心技术的应用实例
1.2 熟悉
(1)离心机的工作原理
(2)离心力与相对离心力
(3)液体中的微粒在重力场中的分离(沉降速度、沉降时间、K系数、沉降系数)
(4)液体中的微粒在离心力场中的沉降
(5)离心方法的选择
(6)离心机的转速、离心时间以及温度和pH值的确定
(7)离心机的使用
(8)离心机常见故障及排除方法
(9)离心方法和离心机的进展
1.3 掌握
(1)常用的离心方法(差速离心法、密度梯度离心法、分析性超速离心法)
(2)离心机的分类方法
(3)低速、高速、超速及专用离心机使用范围
(4)离心机的结构(低速离心机、高速(冷冻)离心机、超速(冷冻)离心机)
(5)离心转头的分类、应用及功能
(6)离心机的主要技术参数及性能指标
2 重点难点
2.1重点
(1)常用的离心方法
(2)离心方法的选择
(3)离心机的结构(低速离心机、高速(冷冻)离心机、超速(冷冻)离心机)2.2 难点
(1) 离心力与相对离心力
(2) 液体中的微粒在重力场中的分离
(3)液体中的微粒在离心力场中的沉降
(4) 分析性超速离心法
3 讲授学时
建议6~8学时
4 内容提要
4.1 离心技术的基础理论
(1)离心机工作原理:
离心是利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或浮力密度的差异进行分离、浓缩和提纯生物样品的一种方法。悬浮液在高速旋转下,由于巨大的离心力作用,使悬浮的微小颗粒(细胞器、生物大分子的沉淀等)以一定的速度沉降,从而使溶液得以分离,颗粒的沉降速度取决于离心机的转速、颗粒的质量、大小和密度。
当含有细小颗粒的悬浮液静置不动时,由于重力场的作用可使得悬浮的颗粒逐渐下沉,颗粒越重,下沉越快。微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态、密度、重力场的强度及液体的黏度有关。如红细胞颗粒,直径为数微米,可以在通常重力作用下观察到它们的沉降过程。此外,物质在介质中沉降时还伴随有扩散现象(扩散是由于微粒的热运动而产生的质量迁移现象,主要是由于密度差引起的)。对小于几微米的微粒如病毒或蛋白质等,它们在溶液中成胶体或半胶体状态,仅仅利用重力是不可能观察到沉降过程的,因为颗粒越小沉降越慢,而扩散现象则越严重。扩散现象是不利于样品分离的,如果加大重力,就可能克服扩散现象的不利影响,实现生物大分子的分离。离心机就是利用离心机转子高速旋转产生的强大的离心力,迫使液体中微粒克服扩散加快沉降速度,把样品中具有不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。
(2)离心力与相对离心力:
离心力:当物体所受外力小于运动所需要的向心力时,物体将向远离圆心的方向运动。物体远离圆心运动的现象称为离心现象也叫离心运动。离心运动是由于向心力消失或不足而造成的。
相对离心力:是指在离心场中,作用于颗粒的离心力相当于地球重力的倍数,单位是重力加速度―g‖。
(3)液体中的微粒在重力场中的分离:
重力沉降:液体中的微粒受重力的作用,较重的微粒下沉与液体分开,这个现象称为重力沉降。
沉降速度:指在强大离心力作用下,单位时间内物质运动的距离。
沉降时间:在实际工作中,常常遇到要求在已有的离心机上把某一种溶质从溶液中全部沉降分离出来需用多大转速与多长时间可达到目的的问题。如果转速已知,则需确定分离某粒子所需的时间即沉降时间。
(4)液体中的微粒在重力场中的沉降:
①当离心机开动时,离心管绕离心转头的轴旋转,作圆周运动(见图3-1),在离心管内的样品颗粒将同样运动;
②假如颗粒是处于真空中(即没有介质阻力时),颗粒会沿切线方向飞去,也就是当离心管由0位转到1位时,颗粒到达离心管底部A位。对于离心管而言,样品颗粒由顶位移到了A位,也就是由离心管顶部移到了底部,这与重力场中的由高处落到低处相似。这种颗粒在圆周运动时的切线运动称为离心沉降;
③颗粒作切线运动时将由于介质的摩擦阻力,使其在离心管中依图3-1中虚线所示的曲线运动,当离心管由0位转到2位时,颗粒由顶位移到B位。介质的阻力越大,颗粒在离心管中沉降速度越小,沉降的距离也越短。旋转速度越大,颗粒在离心管中沉降越快。
图3-1 离心沉降示意图
4.2 常用的离心方法
(1)差速离心法(又称分步离心法) 采用不同的离心速度和离心时间,使沉降速度不同的颗粒分步离心的方法,称为差速离心。操作时,将含有两种不同颗粒的混悬液,以常速离心,使大的颗粒下沉,将上清液倾倒于另一离心管中,再加大离心力,离心一定时间,分离小的颗粒,反复多次分离,达到分离目的。差速离心主要用于分离大
小和密度差异较大的颗粒。差速离心法的优点是:操作简单,离心后用倾倒法即可将上清液与沉淀分开,并可使用容量较大的角式转子;分离时间短、重复性高;样品处理量大。缺点是:分辨率有限、分离效果差,沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开,不能一次得到纯颗粒;壁效应严重,特别是当颗粒很大或浓度很高时,在离心管一侧会出现沉淀;颗粒被挤压,离心力过大、离心时间过长会使颗粒变形、聚集而失活。
图3-2 差速离心法原理示意图
(2)密度梯度离心法(又称区带离心法)该法又分为速率区带离心法和等密度区带离心法。样品在一定惰性梯度介质中进行离心沉淀或沉降平衡,在一定离心力下把颗粒分配到梯度液中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。该法的优点是:具有很好的分辨率,分离效果好,可一次获得较纯颗粒;适用范围广,既能分离沉淀系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度的颗粒;颗粒不会积压变形,能保持颗粒活性,并防止已形成的区带由于对流而引起混合。缺点是:离心时间较长;需要制备梯度液;操作严格,不宜掌握。
①速率区带离心法:是根据分离的粒子在离心力作用下,在梯度液中沉降速度的不同,离心后具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内形成几条分开的样品区带,达到彼此分离的目的。临床常使用的分离液是Ficoll、Percoll及蔗糖。把静脉血中单个核细胞分离出来,前一种分离液将血液中单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)分为一个层,同时提出。而Percoll分离液将血中淋巴细胞和单核细胞分为二个梯度层,分别提取。后者分离效果优于前者,但操作繁琐。
图3-3 速率区带离心示意图
②等密度区带离心法:当不同颗粒存在浮力密度差时,在离心力场下,颗粒或向下沉降,或向上浮起,一直沿梯度移动到它们密度恰好相等的位置上(即等密度点)形成区带,称为等密度区带离心法。等密度区带离心的有效分离取决于颗粒的浮力密度差,密度差越大,分离效果越好,与颗粒的大小和形状无关,但后两者决定着达到平衡的速率、时间和区带的宽度。
图3-4 等密度区带离心示意图
(3)分析性超速离心法
①分析型超速离心机的工作原理:分析型超速离心机主要由一个椭圆形的转子、一套真空系统和一套光学系统所组成。该转子通过一个柔性的轴连接成一个高速的驱
动装置,此轴可使转子在旋转时形成自己的轴。转子在一个冷冻的真空腔中旋转,其容纳两个小室:分析室和配衡室。分析室的容量一般为1ml,呈扇形排列在转子中,其工作原理与一个普通水平转子相同。分析室有上下两个平面的石英窗,离心机中装有的光学系统可保证在整个离心期间都能观察小室中正在沉降的物质,可以通过对紫外光的吸收(如对蛋白质和DNA)或折射率的不同对沉降物进行监测。在分析室中物质沉降时重粒子和轻粒子之间形成的界面就像一个折射的透镜,结果在检测系统的照相底板上产出一个―峰‖,由于沉降不断进行,界面向前推进,故―峰‖也在移动,从峰移动的速度可以得到物质沉降速度的指标。
图3-5 分析型超速离心系统示意图
②分析性超速离心法的应用范围:测定生物大分子的相对分子重量。测定相对分子重量中应用最广的是沉降速度法,用照相记录,即可求出粒子的沉降系数。生物大分子的纯度估计。分析型超速离心机已广泛地应用于研究DNA制剂、病毒和蛋白质的纯度。分析生物大分子中的构象变化。可以通过检查样品在沉降速度上的差异来证实。
4.3 离心机的分类与结构
(1)离心机的分类国际上对离心机的分类方法有三种,按用途分、按转速分、按结构分。按用途可分为制备型、分析型和制备分析两用型;按转速分类可分为低速、高速、超速等离心机;按结构可分为台式、多管微量式、细胞涂片式、血液洗涤式、
高速冷冻式、大容量低速冷冻式、台式低速自动平衡离心机等。
(2)低速离心机它主要用作血浆、血清的分离及脑脊液、胸腹水、尿液等有形成份的分离;高速离心机:它主要用于临床实验室分子生物学中的DNA、RNA的分离和基础实验室对各种生物细胞、无机物溶液、悬浮液及胶体溶液的分离、浓缩、提纯样品等;超速离心机:超速离心机按用途分为制备型、分析型及分析制备两用型三种。制备型超速离心机主要用于生物大分子、细胞器和病毒等的分离纯化,能使亚细胞器分级分离,并可用于测定蛋白质及核酸的分子量;分析型超速离心机装有光学系统,可拍照、测量、数字输出、打印自动显示系统等,可以通过光学系统对测试样品的沉降过程及纯度进行观察。
(3)专用离心机
①免疫血液离心机:用于临床输血、血型鉴定、交叉配血、淋巴细胞分离、血小板分离以及抗人球蛋白试验等。
②微量毛细管离心机:用于血溶比试验,微量血细胞比积以及同位素微量标记物的测定。
③尿沉渣分离离心机:用于尿液中有形成份的分离与尿液工作站相配套。
④细胞涂片离心机:用于脑脊液、胸腹水的脱落细胞的分离及涂片。
(4)低速离心机、高速(冷冻)离心机及超速(冷冻)离心机的结构:
①低速离心机的结构由电动机、离心转盘(转头)、调速器、定时器、离心套管与底座等主要部件构成.
②高速(冷冻)离心机的结构由转动装置、速度控制系统、温度控制系统、真空系统、离心室、离心转头及安全保护装置等。
③超速(冷冻)离心机主要由驱动和速度控制、温度控制、真空系统和转头四部分组成。
(5)离心转头的分类应用及功能:
离心机转头一般可分为五大类有:
①固定角转头
②甩平式转头
③连续流动转头
④区带转头
⑤垂直转头。
(6)离心机的主要技术参数及性能指标:主要参数包括:最大转速;最大离心力;最大容量;电源功率;温度控制范围;工作电压;调速范围。离心机转头的常用标记及转头参数。离心机转头的常用标记是由三部分组成,第一部分为英文字母符号;
临床检验仪器复习题及 答案 集团文件版本号:(M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988)
《临床检验仪器学》 一、选择题 1.流式细胞仪检测细胞的大小的信号是.:前向角散射 2、VCS白细胞分类技术不包括:细胞化学染色技术 3.毛细管粘度计不适合检测:全血 4、尿液分析仪的测试项目中,与酸碱指示剂无关的项目是:尿葡萄糖 5.血细胞分析仪中对网织红细胞的检测原理: 光散射和细胞化学染色 6、关于光学显微镜的分辨率,下列有误的是:与照明光的波长成反比 7、流式细胞仪中的光电倍增管接收:荧光 8、前向角散射可以检测:被测细胞的大小 9、流式细胞仪测定的标本,不论是外周血细胞,还是培养细胞,首先要保证是:单细胞悬液 10、电阻抗型血细胞分析仪的缺点是只能将白细胞按体积大小分为:三个亚群或二个亚群 11、有关血细胞分析仪的叙述不正确的是:高档次血细胞分析仪白细胞的分类计数很准确 12、双磁路磁珠法中,随着纤维蛋白的产生增多,磁珠的振幅逐渐:减弱 13、毛细管黏度计工作原理的依据是:泊肃叶定律 14、尿蛋白定性干化学检测法只适用于检测:清蛋白 15、流式细胞术尿沉渣分析仪的工作原理是:应用流式细胞术和电阻抗 16、BacT/Alert血培养瓶的底部含一个传感器,用于检测:二氧化碳
17、密度梯度离心法又称为:区带离心法 18、根据样品组份的密度差别进行分离纯化的分离方法是:等密度区带离心法 19、等密度区带离心法对于密度梯度液柱的要求是:液柱顶部的密度明显小于样品组份的密度,液柱底部的密度明显大于样品组份的密度 20、表示从转轴中心至试管最内缘或试管顶的距离的转头参数是:Rmin 21、pH玻璃电极对样本溶液pH的敏感程度取决于:电极的玻璃膜 22、PCO 电极属于:气敏电极 2 23、临床上大量使用的电解质分析仪,测量样本溶液中离子浓度的电极是:离子选择电极 24、通常血气分析仪中毛细管pH玻璃电极的pH测定范围是:0?10 25、为将血气分析仪气路系统所提供的气体饱和湿化,需经过的装置是:湿化器 26、世界上最早的自动生化分析仪是:管道式自动生化分析仪 27、具有空气分段系统的自动生化分析仪是:连续流动式自动生化分析仪 28、离心式自动生化分析仪特有的关键部件是:转头 29、自动分析仪中采用“顺序分析”原理的是:连续流动式自动生化分析仪 30、微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪)的固相支持是:PVC微孔板 31、以空气为加热介质的PCR仪是:离心式实时定量PCR仪 32、能在细胞内进行PCR扩增的PCR仪为:原位PCR仪
第一章概论 一、名词解释: 1.灵敏度:检验仪器在稳态下输出量变化与输入量变化之比,即检验仪器对单位浓度或质量的被检物质通过检测器时所产生的响应信号值变化大小的反应能力,它反映仪器能够检测的最小被测量。 2.误差:当对某物理量进行检测时,所测得的数值与标称值(即真值)之间的差异称为误差,误差的大小反映了测量值对真值的偏离程度。 3. 噪音:检测仪器在没有加入被检验物品(即输入为零)时,仪器输出信号的波动或变化范围即为噪音。 4.最小检测量:检测仪器能确切反映的最小物质含量。最小检测量也可以用含量所转换的物理量来表示。如含量转换成电阻的变化,此时最小检测量就可以说成是能确切反应的最小电阻量的变化量了。 5.精度:对检测可靠度或检测结果可靠度的一种评价,是指检测值偏离真值的程度。精度是一个定性的概念,其高低是用误差来衡量的,误差大则精度低,误差小则精度高。 6.可靠性:仪器在规定的时期内及在保持其运行指标不超限的情况下执行其功能的能力它是反映仪器是否耐用的一项综合指标。 7.重复性:在同一检测方法和检测条件(仪器、设备、检测者、环境条件)下,在一个不太长的时间间隔内,连续多次检测同一参数,所得到的数据的分散程度。重复性与精密度密切相关,重复性反映一台设备固有误差的精密度。 8.分辨率:仪器设备能感觉、识别或探测的输入量(或能产生、能响应的输出量)的最小值。 9.测量范围:在允许误差极限内仪器所能测出的被检测值的范围。 10.线性范围:输入与输出成正比例的范围。也就是反应曲线呈直线的那一段所对应的物质含量范围 11.响应时间:表示从被检测量发生变化到仪器给出正确示值所经历的时间。 12.频率响应范围:为了获得足够精度的输出响应,仪器所允许的输入信号的频率范围。 第四章紫外——可见分光光度计 1.分光光度计:能从含有各种波长的混合光中将每一单色光分离出来并测量其强度的仪器称为分光光度计。它具有分析精密度高、测量范围广、分析速度快和样品用量少等优点。根据所使用的波长范围不同可分为紫外光区、可见区、红外光区以及万用(全波段)分光光度计等。 2.吸收光谱:光照射到物质时,一部分光会被物质吸收。在连续光谱中某些波长的光被物质吸收后产生的光谱被称作吸收光谱。每一种物质都有其特定的吸收光谱,因此可根据物质的吸收光谱来分析物质的结构和含量。 3.朗伯-比尔定律:是比色分析的基本原理,表达了物质对单色光吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的定量关系。当用一束单色光照射吸收溶液时,其吸光度 A 与液层厚度 b 及溶液浓度的乘积 c 成正比,此即朗伯-比尔定律。数学表达式为: A=kbc。它适用于分子吸收和原子吸收。 4.摩尔吸光系数(ε):摩尔吸光系数表示在一定波长下测得的液层厚度为 1cm, 溶液浓度 c 为1mol/L 时的稀溶液吸光度值。吸光系数与入射光波长、溶液温度、溶剂性质及吸收物质的性质等多种因素有关。当其它因素固定不变时,吸光系数只与吸收物质的性质有关,可作为该物质吸光能力大小的特征数据。 6.单色器:将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光束的装置,是分光光度计的关键部件。主要由入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜组成。 7.吸收池:又称为比色皿、比色杯、样品池或液槽等,是用来盛放被测溶液的器件,同时也决定着透光液层厚度,可用塑料、玻璃、石英或熔凝石英制成。在可见光范围内,常用无色光学玻璃或塑料制作;在紫外区,需用能透紫外线的石英或熔凝石英制作。 8.光电管:利用碱金属的外光电效应制成的光电转换元件。按电极结构不同可分为中心阳极式、中心阴极式和平行平板式几种,按管内充气与否又可分为真空光电管与充气光电管两种。光电管的质量取决于阴极灵敏度、线性范围、最大、最小可测能量等几个重要技术指标。 9.光电倍增管:利用外光电效应与多级二次发射体相结合而制成的光电元件,由一个表面涂有光敏材料的阴极和若干个(通常为 9 个~13 个)二级电子发射极(打拿极)组成,其灵敏度比光电管高 200 多倍。有三个重要指标:波长效应、灵敏度和噪声水平。 10.波长准确度:指仪器波长指示器上所示波长值与仪器此时实际输出的波长值之间的符合程度。可用二者之差来衡量分光光度计的准确性。 11.波长重复性:是指在对同一个吸收带或发射线进行多次测量时,峰值波长测量结果的一致程度。通常取测量结果的最大值与最小值之差来作为衡量分光光度计的准确性指标之一。 12.光度准确度:指仪器在吸收峰上读出的透射率或吸光度与已知真实透射率或吸光度之间的偏差。该偏差
一选择题 (1)A型题(单项选择题,每题1分,共30分) 1.具有吞噬传递免疫信息在特异免疫中起重要作用的细胞是() A中性粒细胞 B 单核细胞 C淋巴细胞 D 嗜碱性粒细胞 E红细胞 2.冲液后,计数池每个大格的体积是() A 0.1u l B 0.01 ul C 1.0 ul D 0.0001 ul 3.血片经过瑞氏染色后,成熟红细胞呈鲜红色,白细胞核染色呈浅灰色, 其原因是PH为() A 5.4 -6 B 7.4-8 C 6.5-7 D 8.2-8.6 E 8.7-9.4 4.三种粒细胞区别的要点是() A细胞大小 B特异性颗粒 C染色质结构 D浆颜色 E核浆比例 5.下列除了哪种疾病外,均是中性粒细胞增加的疾病() A猩红热 B尿毒症 C 流行性感冒 D 铅中毒 E化脓性阑尾炎 6.嗜酸性粒细胞一般分叶核常为() A一叶 B二叶 C三叶 D四叶 E 五叶 7.在血液中,中性粒细胞杆状核以上幼稚细胞增多称为() A核左移 B核右移 C中毒颗粒 D 逆行性变化 E杜勒氏小体 8.一种血红蛋白衍生物是棕红色,在波长540nm处,有一较宽的吸光带, 它是() 9.大面积烧伤患者红细胞和血红蛋白相对增高的原因是() A红细胞生成增多 B红细胞寿命延长 C 红细胞破坏减少 D 血液浓缩 E白细胞生成减少
10.诊断铅中毒的最佳指标是() A.网织红细胞增多B低色素红细胞增多 C 靶红细胞增多D 点彩红细 胞增多 11使血沉明显加快的原因是() A红细胞数量增多 B 大红细胞贫血 C 镰刀形红细胞贫血 D 球形红细胞贫血 E 红细胞凝集成团 12.关于魏氏血沉发测定下列哪项是错误的() A.深静脉血1.6ml B 用血沉管吸抗凝血至零刻度 C与0.4ml抗凝剂混匀 D垂直立于血沉架上 E 室温静置半小时 13.关于血沉的说法下列哪项是错误的() A.正常男性血沉生理变化不大 B 新生儿血沉加快C妇女月经期血沉可 加快 D 年龄超过50岁的老年人血沉可加快E 高原地区的居民血沉低于平原地区的居民 14.欲中和A型血清的天然抗体,可加哪一种唾液() A A型分泌型唾液 B B型分泌型唾液 C O型分泌唾液 D A B型分 泌唾液 E 任何唾液 15.用标准血清鉴定血型,下列哪项的结果应判断为A型血() A与抗A不凝,抗B凝抗A+B凝 B与抗A凝,抗B不凝抗A+B凝 C 与抗A凝,抗B凝抗A+B不凝 D与抗A不凝,抗B不凝抗A+B凝 E与抗A不凝,抗B凝抗A+B不凝
《临床检验仪器学》 一、选择题 I.流式细胞仪检测细胞的大小的信号是.:前向角散射2、VCS白细胞分类技术不包括: 细胞化学染色技术3.毛细管粘度计不适合检测:.全血4、尿液分析仪的测试项目中, 与酸碱指示剂无关的项目是:尿葡萄糖5.血细胞分析仪中对网织红细胞的检测原理:光散射和细胞化学染色6、关于光学显微镜的分辨率,下列有误的是:与照明光的波长成反比7、流式细胞仪中的光电倍增管接收:荧光8、前向角散射可以检测:被测细胞的大小 9、流式细胞仪测定的标本,不论是外周血细胞,还是培养细胞,首先要保证是:单细胞悬液 10、电阻抗型血细胞分析仪的缺点是只能将白细胞按体积大小分为:三个亚群或二个亚群 II、有关血细胞分析仪的叙述不正确的是:高档次血细胞分析仪白细胞的分类计数很准确 12、双磁路磁珠法中,随着纤维蛋白的产生增多,磁珠的振幅逐渐:减弱13、毛细管黏度计工作原理的依据是:泊肃叶定律14、尿蛋白定性干化学检测法只适用于检测:清 蛋白15、流式细胞术尿沉渣分析仪的工作原理是:应用流式细胞术和电阻抗16、BacT/Alert 血培养瓶的底部含一个传感器,用于检测:二氧化碳17、密度梯度离心法又称为:区带离心法18、根据样品组份的密度差别进行分离纯化的分离方法是:等密度 区带离心法19、等密度区带离心法对于密度梯度液柱的要求是:液柱顶部的密度明显小于样品组份的密度,液柱底部的密度明显大于样品组份的密度20、表示从转轴中心至试管最内缘或试管顶的距离的转头参数是:Rmin 21、pH玻璃电极对样本溶液pH的敏感 程度取决于:电极的玻璃膜22、PCO2电极属于:气敏电极23、临床上大量使用的电解质分析仪,测量?样本溶液中离子浓度的电极是:离子选择电极24、通常血气分析仪中毛细管pH玻璃电极的pH测定范围是:0?10 25、为将血气分析仪气路系统所提供的气体饱和湿化,需经过的装置是:湿化器26、世界上最早的自动生化分析仪是:管道式自动生化分析仪27、具有空气分段系统的自动生化分析仪是:连续流动式自动生化分 析仪28、离心式自动生化分析仪特有的关键部件是:转头29、自动分析仪中采用“顺序分析”原理的是:连续流动式自动生化分析仪30、微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪)的固相支持是:PVC微孔板31、以空气为加热介质的PCR仪是:离心式实时定量PCR 仪32、能在细胞内进行PCR扩增的PCR仪为:原位PCR仪33、PCR反应正确过程应为:变性一退火一延伸34、一步就可以摸索出最适合反应条件的PCR仪为:梯度PCR仪35、PCR基因扩增仪最关键的部分是:温度控制系统36、试剂空白变化速率:是在反应温度下试剂自身吸光度随时间的变化37、以下哪项不是微生物自动鉴定与药敏分析系统的性能特点:数据管理系统功能强大,但系统软件大多不可以不断升级。 38、全自动血凝仪中的免疫学方法,通常选用:免疫比浊法39、自动生化分析仪工作较长时间后个别项目出现系统误差,则首先考虑日因素是:.标准品是否变质40、比色杯清洗步骤中可以忽略的是:经吹干后可以继续循环使用41、使用(区带)转头离心时 不需要离心管,样品直接加至其中即可42、使用电阻加热和半导体冷却的PCR仪的恒 温方法属:变温金属块恒温法43、含2个加样针、灌注式加试剂装置、双圈反应盘的自 动生化分析仪的取样周期为6s,则测定单试剂法的工作效率为(1200 )测试/h 44、测最电流变化的电极是:P02电极45、血培养仪的检测信号不包括:温度46、按血凝仪检测原理,下述中不属于凝固法的是:免疫比浊法47、流式细胞术尿沉渣分析仪应用的原理是:流式细胞术和电阻抗原理48、含1个加样针、1个加试剂针、 单圈反应盘的自动生化分析仪的取样周期为 4.5s,贝删定单试剂法的工作效率为(800 ) 测试/h 49、关于底物消耗限额参数,不正确的是:目的是提高监测精密度50、全自动尿沉渣分析仪中F1几乎极低而Fsc大小不等可以为:红细胞51、以下哪项不是微生物自动鉴定与药敏分析系统的性能特点:数据管理系统功能强大,但系统软件大多不可以不断升
精心整理 临床检验基础病例分析题一 病例:患者,男,45岁,上腹饱胀,厌食,体重减轻,消瘦和进行性贫血,胃痛呈持续性,进食后加重。 查体:上腹部有肿块,质坚硬,有压痛,可移动,腹腔内有积液。 12患者4常,体重无变化。既往体健,个人史、家族史无特殊。 体检:T 39.5℃,P 98次/分,R 22次/分,BP 122/83mmHg 。发育正常,营养中等,神志清楚,无皮疹,浅表淋巴结不大,咽部无充血,扁桃体不大,颈静脉无怒张,胸廓无畸形,呼吸平稳,左上肺叩浊,语颤增强,有湿哕音,心界不大,心率105次/分,律齐,无杂音,腹软,肝脾未及。
实验室检查:RBC:5.5×1012/L,Hb 145g/L,WBC:12.5×109/L;分类Nsg 75%,E 1.5%,L 22%,PLT 205×109/L,尿常规(-),粪便常规(-)。 1.根据以上资料,请做出初步诊断并简述其诊断依据。 答:根据以上资料,初步诊断为:左侧肺炎(肺炎球菌性可能性大)。 其诊断依据为: ① ② ③ 2 天/28 查体: 苍白,贫血貌,皮肤粘膜无出血点,浅表淋巴结不大,巩膜无黄染,舌乳头正常,心肺无异常,肝脾不大。 实验室检查:血液检查:Hb:64 g/L,RBC:3.6×1012/L,MCV:78fl,MCH:18pg,MCHC:299g/L,HCT 28%,RDW 18%,外周血涂片红细胞以小红细胞为主;WBC:5.6
×109/L,分类:Nsg 68%,L 25%,M 2%,PLT:240×109/L,Reti 2.0%。尿蛋白(-),镜检无异常,大便隐血(-),血清铁9.5 μrnol/L(9~27μrnol/L)。1.根据以上资料,请做出初步诊断并简述其诊断依据? 答: (1)根据以上资料,该患者初步诊断为:①缺铁性贫血? ②月经过多原因待查? (2) :299g/L 2 答: 急诊。 查体:急性病容,巩膜疑有黄染。右上腹有明显压痛伴肌紧张: 实验室检查:WBC 12.4×109/L,中性粒细胞80%,淋巴细胞20%:B超:胆囊明显增大,囊壁增厚,可见反射很强的胆石数个,最大约1.5cm,提示胆囊炎、胆石症。
《临床检验仪器学》复习题 一、名词解释 灵敏度线性范围预处理系统K系数TEM SEM STM 灵敏度数值孔径离子选择性电极血细胞分析仪(BCA) 尿液分析仪自动生化分析仪自动化程度电化学分析技术流式细胞术噪音线性范围响应时间漂移电化学分析技术参比电极待测电极预处理系统实验室自动化系统全实验室的自动化(TLA)临床实验室信息系统(LIS) 医院信息系统(HIS) 化学电池离心现象离心技术扩散现象相对离心力沉降系数沉降速度沉降时间自动化程度通道差孔间差零点漂移ELISA 化学发光电化学发光发光免疫分析技术电化学性质POCT 二、填空 高速(冷冻)离心机的结构包括_________、_________、_________、________、____________、_________、_________等. 临床实验室常用的离心方法包括、和三类. 显微镜的分辨率表达式是。 流式细胞仪主要在通常在____ 和____ 这两个角度接收并检测细胞散射光强度。 电子显微镜包括_________、_________、_________ 、___________ 、____________五部分。 电子透镜包括____ 和____ 两种。 扫描隧道显微镜是根据量子力学原理中的和而设计。 STM 的两种工作模式分别是____ 和____ 。 尿液分析仪的测试原理包括、和三个原理。 尿液分析仪的反射率= 。 尿液分析仪由:、和三部分组成。 尿有形成分检验包括和两方面的检验。 流式细胞仪主要接受细胞的____ 信号和____ 信号。 流式细胞仪的基本结构由_________、_________、_________ 、___________ 、____________五部分构成。 常用参比电极主要有____ 和____ 两种 流式细胞仪中鞘液的作用是。 自动血培养系统主要由、和所构成。 电子显微镜根据成像方式的不同可以分为____ 和____ 两种类型。 生化分析仪的光路按照单色器的位置可以分为____ 和____ 两种。 自动生化分析仪的类型按反应装置的结构可分为4类:_______________、_______________、_______________、_______________。 目前临床上常用的三类免疫标记方法是______________、___________________、____________________。 临床电化学分析仪器包括____ 和____ 两种 血气分析仪的包括基本电极包括_______________、_______________、_______________、_______________四种。 血气分析仪的pH系统使用和两种标准缓冲液来进行定标;氧和二氧化碳系统用两种混合气体来进行定标。第一种混合气中含;第二种含。 电化学发光免疫分析的发光反应底物有____ 和____ 两种 生化分析仪的分析效率是指。 A/D转换的含义是。 LCD器的中文全称是。 自动生化分析仪采用后分光的含义是指。 自动生化分析仪中的通道数是指。 微生物自动化系统一般可分_______________________和____________________________ 两类。 临床电化学分析仪主要有_____________、_____________两种。 单色器包括________、_____________、_____________三种类型。 样品前处理系统占检验总工作量的。 离心机按照离心速度大小分为________、_____________、_____________。 FCM分选指标包括________、_____________、_____________。
第一章血液标本采集和血涂片检查 一、选择题 (一)、A1型题(标准型) 1.静脉采血法的采血部位首选: A. 肘部静脉 B. 手背静脉 C. 内踝静脉 D. 股静脉 E. 颈静脉 2.WHO推荐成人皮肤采血部位为: A. 无名指指端内侧 B. 中指和无名指指端内侧 C. 中指指端内侧 D. 耳垂 E. 大拇趾 3.血细胞分析中最常用的染色法为: A. 吉姆萨染色 B. 瑞氏染色 C. HE染色 D. 罗氏染色 E. PAS染色 (二)、A1型题(否定型) 3. 下列那一种抗凝剂不能与血液中的钙离子结合: A. EDTA-K2 B. 草酸钠 C. 草酸铵 D. 肝素 E. 枸橼酸钠 四、论述题 1. 试述瑞氏染色法的原理及PH值对其的影响? 参考答案 一、选择题 (一)、A1型题(标准型) 1.A 2.A 3.B (二)、A1型题3.D 四、论述题 1. ①瑞氏染色法的原理:瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料美兰组
成的复合染料。瑞氏染料溶于甲醇后,解离为带正电的美兰和带负电的伊红。由于各种细胞成分化学性质不同,对各种染料的亲和力不同,因此染色后呈现不同的色彩。如血红蛋白和嗜酸颗粒为碱性可与酸性染料伊红结合染成红色。细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美兰或天青结合染成紫蓝色或蓝色。中性颗粒呈等电状态,与伊红和美兰均可结合染成紫红色。此染色过程既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用。 ②PH值的影响:细胞各种成分均为蛋白质组成,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH值而定。在偏酸性环境中正电荷增多,易与伊红结合,染色偏红。在偏碱性环境中负电荷增多,易与美兰或天青结合,染色偏蓝。
名词解释 分辨率:显微镜可分辨的两点间的最小距离,即为显微镜的分辨率,它主要取决于照明波长以及物镜的球差系数。 朗伯比尔定律:光被透明介质吸收的比例与入射光的强度无关;在光程上每等厚层介质吸收相同比例值的光。 离子选择性电极:离子选择性电极是一类利用膜电势测定溶液中离子的活度或浓度的电化学传感器,当它和含待测离子的溶液接触时,在它的敏感膜和溶液的相界面上产生与该离子活度直接有关的膜电势。 数值孔径:数值孔径描述了物镜收光锥角的大小,而后者决定了显微镜收光能力和空间分辨率。数值孔径是物镜和聚光镜的主要技术参数,是判断两者性能高低的重要标志。 鞘流技术:为了避免计数中血细胞从小孔边缘处流过及湍流,涡流的影响,发明的技术。具体做法是用一毛细管对准小孔管,细胞混悬液从毛细管喷出。同时与四周流出的鞘液一起流过敏感区,保证细胞混悬液在中间形成单个排列的细胞流,四周被鞘液围绕。 问答题 1、影响电泳的因素 答:电场强度、溶液的PH值、溶液的离子强度、电渗作用、粒子的迁移率、吸附作用 2、离心机的离心方法 答:差速离心法、密度梯度离心法、分析性超速离心法 3、酸度计的测定原理以及常用电极 答:酸度计的测定原理:酸度计的主体是一个精密电位计,将电极插在被测溶液中,组成一个电化学原电池,通过测量原电池的电动势并直接用PH值表示出来。传感电极根据被测液氢离子浓度不同而产生不同的电位,根据能斯特方程式,酸度计将所检测到的微小电压变化值换算成PH值。 常用电极有参比电极和测量电极,参比电极包括甘汞电极和Ag-AgCl电极,测量电极为玻璃电极 简答题 1、朗伯比尔定律的成立条件 答:①入射光为单色光②溶液浓度不能过大 2、分光光度计的类型 答:单光束分光光度计、双光束分光光度计、双波长分光光度计 3、血细胞计数器的测量原理 答:当细胞通过检测器微孔的孔径感受区时,其内外电极之间的恒流电路上的电阻值瞬间增大,产生电压脉冲信号,脉冲信号数等于通过的细胞数,脉冲信号幅度大小与细胞体积成正比,根据欧姆定律,细胞体积越大,电压越高,产生信号的脉冲幅度越大。经计算机处理后,以体积直方图显示出特定细胞群中的细胞体积和细胞分布情况。 4、常用的色谱仪有哪两种以及各自的特点 答:常用的色谱仪有气相色谱仪和液相色谱仪两种。 气相色谱仪具有高分辨率、高速度、高灵敏度以及选择性好等优点。但它只能用于被气化物
第一章概论 1、一个优良的检验仪器应具有(P3):灵敏度、分辨率和精度高,噪音和误差小,可靠性、稳定性和重复性好,响应时间短,测量范围、示值范围、频率响应范围和线性范围宽等性能指标。 2、最小检测量与分辨率的区别?(P5) 答:①分辨率:仪器设备能感觉、识别或探测的输入量(或能产生、能响应的输入量)的最小值。 3、精确度与灵敏度的区别?(P3) 答:①灵敏度:检验仪器在稳态下输出量变化与输入量变化之比,即检验仪器对单位浓度或质量的被检物质通过检测器是所产生的响应信号值变化大小的反应能力,他反应仪器能够检测的最小被测量。②精确度:对检测可靠度或检测结果可靠度的一种评价,是指检测值偏离真值的程度。精度是一个定性的概念,其高低是用误差来衡量的,误差大则精度低,误差小则精度高。③区别: 4、精确度(P5):对检测可靠度或检测结果可靠度的一种评价,是指检测值偏离真值的程度。精度是一个定性的概念,其高低是用误差来衡量的,误差大则精度低,误差小则精度高。 5、重复性(P5):在同一检测方法和检测条件(仪器、设备、检测者、环境条件)下,在一个不太长的时间间隔内,连续多次检测同一参数,所得到的数据的分散程度。重复性与精密度密切相关,重复性反映一台设备固有误差的精密度。 6、准确度和精确度的区别。(P5) 第二章离心机 1、简述分析型超速离心机的工作原理。(P26) 答:分析型超速离心机主要由一个椭圆形的转子、一套真空系统和一套光学系统所组成。该转子通过一个柔性的轴联接成一个高速的驱动装置,此轴可使转子在旋转时形成自己的轴。转子在一个冷冻的真空腔中旋转,其容纳了两个小室:分析室和配衡室。配衡室是一个经过精密加工的金属块,作为分析室的平衡用。分析室的容量一般为1ml,呈扇形排列在转子中,其工作原理与一个普通水平转子相同。分析室有上下两个平面的石英窗,离心机中装有的光学系统可保证在整个离心期间都能观察小室中正在沉降的物质,可以通过对紫外光的吸收(如对蛋白质和DNA)或折射率的不同对沉降物进行监测。在分析室中物质沉降时重粒子和轻粒子之间形成的界面就像一个折射的透镜,在检测系统的照相底板上产出一个“峰”。
临床检验仪器的常用性能指标:灵敏性,误差,噪音,最小检测量,精确度,可靠性,重复性,分辨率,测量范围和示值范围,线性范围,响应时间,频率响应范围。 光学显微镜的工作原理:利用光学原理,把人眼所不能分辨的微小物体放大成像,供人们提取物质微细结构信息的光学仪器。由两组会聚透镜组成光学折射成像系统。把焦距较短、靠近观察物、成实像的透镜组成为物镜;焦距较长,靠近眼睛、成虚像的透镜组称为目镜。被观察物体位于物镜的前方,被物镜作第一级放大后成一倒立的实像,然后此实像再被目镜作第二级放大,得到最大放大效果的倒立的虚像,位于人眼的明视距离处。相对于物镜的成像条件及最后二次成像于观察者的明视距离等条件的满足,是通过仪器的机械调焦系统来实现的。 光学显微镜的基本结构:包括光学系统(物镜、目镜、聚光镜及反光镜)和机械系统(聚光镜升降、调焦系统、载物台和物镜转换器等运动夹持部件以及底座、镜臂、镜筒等支持部件) 光学显微镜照明设置部件:光源、滤光器、聚光镜、玻片。 光的吸收定律:即郎伯-比尔定律,是比色分析的基本原理。表达了物质对单色光吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的函数关系。A=-lg I/I0=lg I0/I=lg 1/T=kbc 电阻抗型血细胞分析仪的计数原理:血细胞与等渗的电解质溶液相比为不良导体,其电解质比稀溶液大。当血细胞通过检测器微孔的孔径感受区时,其内外电极之间的恒流电路上的电阻值瞬间增大,产生电压脉冲信号。脉冲信号数等于通过的细胞数,脉冲信号幅度大小与细胞体积成正比。根据欧姆定律,在恒电流电路上,电压变化与电阻变化成正比,电阻值又同细胞体积成正比,血细胞体积越大,电压越高,产生信号的脉冲幅度就越大。各种大小不同的细胞产生的脉冲信号分别被送入仪器的检测通道,经计算机处理后,以体积直方图显示出特定细胞群中的细胞体积和细胞分布情况。最后得出WBC、RBC、PLT。(该原理称库尔特血细胞检测原理 血细胞分析仪测定Hb的原理:除干式离心分层型、无创型外,各种BCA对Hb测定都采用光电比色原理。血细胞悬液中加入溶血剂后,RBC溶解释放出Hb,后者与溶血剂中有关成分形成Hb衍生物,进入Hb测试系统。在特定波长(多为530~550nm)下进行光电比色,吸光度值与所含Hb含量成正比。与不同型号BCA配套的溶血剂不同,形成Hb衍生物也不同,吸收光谱也有差异,但最大吸收峰都接近540nm,因为国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的氰化高铁(HiCN)法的最大吸收峰在540nm,仪器Hb的校正必须以HiCN值为标准。 尿液分析:是临床诊断泌尿系统疾病的重要措施之一,通过对尿液的物理学检查和化学检查,可观察尿液物理性状和化学成分的变化。在尿沉渣检查中能够看到的有形成分为红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、巨噬细胞、肿瘤细胞、细
第一章血液一般检验的基本技术 ㈠单项选择题(A型题) 1. 成人静脉采血时,通常采血的部位是(A1型题)"实践技能" A 手背静脉 B 肘部静脉 C 颈外静脉 D 踝静脉 E 股静脉 [本题答案] 2. 静脉采血时,错误的操作是(A1型题)“实践技能" A 从向外消毒穿刺部位皮肤 B 进针时使针头斜面和针筒刻度向上 C 见回血后松开压脉带 D 未拔针头而直接将血液打入容器 E 如需抗凝应轻轻混匀 [本题答案] 4. EDTA盐抗凝剂不宜用于(A1型题)“实践技能" A 红细胞计数 B 白细胞计数
C 血小板计数 D 白细胞分类计数 E 凝血象检查和血小板功能试验 [本题答案] 6. 枸橼酸钠的抗凝原理是(A1型题)"基础知识" A 阻止凝血酶的形成 B 阻止血小板聚集 C 除去球蛋白 D 与血液中的钙离子形成螯合物 E 除去纤维蛋白原 [本题答案] 7. 关于抗凝剂,错误的叙述是(A1型题)"专业知识" A EDTA-Na2溶解度大于 EDTA-K2 B EDTA盐与血浆中钙离子生成螯合物 C 肝素作为抗凝血酶Ⅲ的辅因子而抗凝 D 枸橼酸钠可用于红细胞沉降率测定 E 枸橼酸钠可用于输血保养液 [本题答案] 8. 对草酸盐抗凝剂,错误的叙述是(A1型题)"基础知识"
A 草酸铵可使血细胞膨胀 B 双草酸盐可用于血细胞比容测定 C 对Ⅴ因子保护差 D 过去用于凝血象的检查 E 可干扰血浆中钾,钠和氯的测定 [本题答案] 9. ICSH建议,血细胞计数时首选抗凝剂是(A1型题)"基础知识" A EDTA-K2 B EDTA C EDTA-Na2 D 肝素 E 枸橼酸钠 [本题答案] 11. 肝素抗凝主要是加强哪种抗凝血酶的作用(A1型题)"基础知识" A 抗凝血酶Ⅰ B 抗凝血酶Ⅱ C 抗凝血酶Ⅲ D 抗凝血酶Ⅳ E 抗凝血酶Ⅴ
临床检验仪器学第四讲第12章血细胞分析仪 (Blood Cell Analyzer) 南京医科大学第一临床医学院 临床医学工程处 刘坚
?血细胞分析仪(Blood Cell Analyzer)是指对一定体积全血内血细胞异质性进行自动分析的 常规检验仪器。 ?血液分析仪主要完成以下两大功能: ⑴血细胞计数:红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白。 ⑵血细胞分类:白细胞中的淋巴、中性、嗜酸、嗜碱、单核、 幼稚细胞;红细胞中的网织红细胞。 ?根据计数/分类的测定值计算间接测定值 红血球容积比(HCT)、平均红血球血红蛋白含量(MCH)、 血小板容积比(PCT),等等
1947年Coulter 发明了小孔电阻抗法 通过测量细胞的体积大小对细胞进行分类计数 主要是用来计数红、白细胞 该技术一直被各种血液分析仪沿用至今 1953年库尔特家族研制出全世界第一台血细胞计数仪:Model A Wallace H. & Joseph R. Coulter
血细胞计数(Blood count) 早期的血液分析仪主要用来计数红、白细胞全血细胞计数(Complete Blood cell Count) 增加光电比色系统用来同时测定血红蛋白 血小板可在同一仪器上与红细胞一起计数 利用直接测量到的项目运算得到间接计算 项目(如血球压积等参数) 不包括白细胞分类计数 测定标本采用机外人工处理的预稀释方式
白细胞分类计数 (Differential Leukocyte Cell Count) 带电脑的显微镜下辨认细胞的图象识别技术 效率低,受制片、染色技术的影响大 在计数细胞数不多时,重复性较差 没有得到普遍推广 阻抗法仪器检测白细胞“二分群、三分群” 仪器内部结构的进一步完善 微处理器分辨力的进一步提高 特殊溶血剂的应用 无法对细胞内部结构进行分析,准确性有限
第一章血液一般检验的基本技术㈠单项选择题(A型题) 1. 成人静脉采血时,通常采血的部位是(A1型题)"实践技能" A 手背静脉 B 肘部静脉 C 颈外静脉 D 内踝静脉 E 股静脉 [本题答案] B 2. 静脉采血时,错误的操作是(A1型题)“实践技能" A 从内向外消毒穿刺部位皮肤 B 进针时使针头斜面和针筒刻度向上 C 见回血后松开压脉带 D 未拔针头而直接将血液打入容器 E 如需抗凝应轻轻混匀 [本题答案] D 4. EDTA盐抗凝剂不宜用于(A1型题)“实践技能" A 红细胞计数 B 白细胞计数 C 血小板计数 D 白细胞分类计数 E 凝血象检查和血小板功能试验 [本题答案] E 6. 枸橼酸钠的抗凝原理是(A1型题)"基础知识" A 阻止凝血酶的形成 B 阻止血小板聚集 C 除去球蛋白 D 与血液中的钙离子形成螯合物 E 除去纤维蛋白原 [本题答案] D 7. 关于抗凝剂,错误的叙述是(A1型题)"专业知识" A EDTA-Na2溶解度大于 EDTA-K2 B EDTA盐与血浆中钙离子生成螯合物 C 肝素作为抗凝血酶Ⅲ的辅因子而抗凝 D 枸橼酸钠可用于红细胞沉降率测定 E 枸橼酸钠可用于输血保养液 [本题答案] A 8. 对草酸盐抗凝剂,错误的叙述是(A1型题)"基础知识" A 草酸铵可使血细胞膨胀
B 双草酸盐可用于血细胞比容测定 C 对Ⅴ因子保护差 D 过去用于凝血象的检查 E 可干扰血浆中钾,钠和氯的测定 [本题答案] D 9. ICSH建议,血细胞计数时首选抗凝剂是(A1型题)"基础知识" A EDTA-K2 B EDTA C EDTA-Na2 D 肝素 E 枸橼酸钠 [本题答案] A 11. 肝素抗凝主要是加强哪种抗凝血酶的作用(A1型题)"基础知识" A 抗凝血酶Ⅰ B 抗凝血酶Ⅱ C 抗凝血酶Ⅲ D 抗凝血酶Ⅳ E 抗凝血酶Ⅴ [本题答案] C 13. 关于双草酸盐抗凝剂,错误的说法是(A1型题)"专业知识" A 草酸钾可使红细胞缩小 B 草酸铵可使红细胞胀大 C 不可用于血细胞比容测定 D 过去用于凝血象的测定 E 目前应用较少 [本题答案] C 14. 凝血象检查时,抗凝剂最好用(A1型题)"专业知识" A EDTA-K2 B 38g/dl枸橼酸钠 C 109mmol/L枸橼酸钠 D 肝素 E 草酸钠 [本题答案] C 16. 关于细胞成分的特性,正确的说法是(A1型题)"基础知识" A 嗜酸性颗粒为酸性物质 B 中性颗粒为酸性物质 C 细胞核蛋白为碱性物质 D Hb为碱性物质 E 淋巴细胞浆为嗜酸性物质
第一章概论 1.临床检验仪器常用性能指标(可能考问答题) 1灵敏度 2 误差3噪声4最小检测量5精确度6可靠性7重复性8分辨率9测量范围和示值范围10线性范围11响应时间12 频率影响范围 1 灵敏度:检验仪器在稳态下输出量变化与输入量变化之比。 2 误差:当对某物理量进行检测时,所测得的数值与真值之间的差异。 3 噪音:检测仪器在没有加入被检物品时,仪器输出信号的波动或变化范围。 4 最小检出量:检验仪器能确切的反应最小物质含量。 5 精确度:检测值偏离真值的程度。 6 可靠性:仪器在规定时期内及在保持运行不超限的情况下执行其功能的能力,反应仪器是否耐用的一项指标。 第二章离心机 1.离心技术:应用离心沉降进行物质的分析和分离的技术 2. 离心机的工作原理:利用离心转子高速旋转产生的强大离心力,迫使液体中的微粒克服扩散,加快沉降速度,把样品中具有不同沉降系数和浮力密度的物质分离。颗粒的沉降速度取决于离心机的转数、颗粒的质量、大小和密度。 3. 离心力:由于物体旋转而产生的力,物体作圆周运动所产生的向心力的反作用力。
4. 相对离心力:通常颗粒在离心过程中的离心力是相对于颗粒本身所受的重力而言,因此把这种离心力叫做相对离心力。 5. 离心机的分类:按转数分为:低速、高速、超高速。 6. 离心机的最大容量:离心机一次可分离样品的最大体积,m ×n,一次可容纳最多离心管×一个离心管容纳样品最大体积。 7. 沉降系数:颗粒在单位离心力场作用下的沉降速度,其单位为秒。 8. 离心机的基本结构 低速离心机的结构较简单,由电动机,离心转盘(转头)、调速器、定时器、离心套管与底座等主要部件构成。其最大转速在10000r/min以内,相对离心力在15000xg以内。 高速(冷冻)离心机最大转速为20000~25000r/min 超速(冷冻)离心机最大转速可达50000~80000r/min 9. 差速离心法:差速离心法又称分步离心法,根据分离物的沉降速度不同,采用不同的离心速度和时间分步离心的方法。10. 差速离心法的优缺点: 优点:操作简单,离心后用倾倒法即可将上清液与沉淀分开,并可使用容量较大的角式转子;分离时间短、重复性高;样品处理量大。 缺点:分辨率有限、分离效果差,沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开,不能一次得到纯颗粒;壁效应严重,特别是当颗粒很大或浓度很高时,在离心管一侧会出现沉淀,颗
临床检验基础试题答案 一、选择题 1-5 : DEECB 6-10:BDACD 11-15: CCEBC 16-20: DAABC 二、填空题 1. ①大红细胞;②小红细胞,③棘形红细胞,④环形红细胞(面包圈红细胞),⑤新月形红细胞,⑥颗粒形红细胞,⑦皱缩红细胞,③影细胞,⑨红细胞碎片。 2. 皱缩、胀大、渗出。 3. 大小不均、中毒颗粒、空泡变性、Dvohie小体、退行性变。 4. 3 /HPF,镜下血尿,肉眼血尿。 5. 流动,凝胶。 三、名词解释 1、核右移:外周血的中性粒细胞以若5叶以上者超过3%^称为核象右移,此时常伴有白细胞总数减少。 2、中毒颗粒:中性粒细胞中比正常中性颗粒大,大小不等,分布不均匀,染色较深,呈黑色或紫黑色。有时颗粒很粗大,与嗜碱性粒细胞易混淆,有时又小而稀少,散杂在正常中性颗粒中。 3、渗出液:多为炎症性积液,炎症时由于病原微生物的毒素、缺氧以及炎症介质作用使用血管内皮细胞受损,血管通透性增加,以致血管内大分子物质和细胞通过血管壁而渗出血管外、组织间隙及浆膜腔所形成的积液。
四、简答题 1、异型淋巴细胞种类
I型(空泡型):胞体比正常淋巴细胞稍大,多为圆形、椭圆形或不规则形。核圆形、肾形或分叶状、常偏位。染色质粗糙,呈粗网状或小块状,排列不规则。胞质丰富,染深蓝色,含空泡或呈泡沫状。 H型(不规则型):胞体较大,外形常不规则,可有多数足。核形状及结构与I型相同或更不殊途同归,染色质较粗糙致密。胞质量丰富,染色淡蓝或灰蓝色,有透明感,边缘处着色较深蓝色。可有少数空泡。 皿型(幼稚型):胞体较大,核圆形或卵圆形。染色质细致呈网状排列,可见1-2个核仁,胞质深蓝色,可有少数空泡。 2、血沉增快的病理临床意义? ①各种炎症:细菌性急性炎症时,血中急性反应物质释放增多所致。风湿热的病理改变,结缔组织性炎病症,其活动期血沉增快。慢性炎症如结核病时,血沉增快。 ②组织损伤及坏死:较大的手术创伤可导致血沉增快,如无合并症,一般2-3周内恢复正常。心肌梗塞时血沉增快,,心绞痛时血沉正常,故可借血沉结果加以鉴别。 ③恶性肿瘤:良性肿瘤血沉多正常,恶性肿瘤病人增快的血沉,可因手术切除或化疗放疗较彻底而渐趋正常,复发或转移时又见增快。 ④各种原因导致的高球蛋白血症:亚急性感染性心内膜炎、黑热病、系统性红斑狼疮等所致的高球蛋白血症时,血沉常明显增快,慢性肾炎、肝硬化时血沉亦常增快。⑤贫血:轻度贫血对血沉尚无影响,若血红蛋白低于90g/L时,血沉可增快。 ⑥高胆固醇积压症:特别是动脉粥样硬化血胆固醇明显增高者,血沉常见增快。 3、大便OE试验临床意义是什么? 粪便隐血阳性见于①消化性溃疡、药物致胃粘膜损伤(如服用消炎痛、糖皮质激素等)、肠结核、克罗恩病、溃疡性结肠炎、结肠息肉、钩虫病及胃癌、结肠癌等消化肿瘤时。②消化性溃疡和消化道肿瘤鉴别诊断:在消化性溃疡时呈间断性阳性。消化性
第十章临床微生物检测仪器 一、名词解释 1.自动血培养检测和分析系统:主要由培养系统和检测系统组成。培养系统包括培养基、恒温装置和震荡培养装置。检测系统由计算机控制,对血培养实施连续、无损伤瓶外监测。通过自动监测培养基中的混浊度、pH 值、代谢终产物CO2 的浓度、荧光标记底物或代谢产物等的变化,定性地检测微生物的存在。 2.检测导电性和电压的血培养系统:血培养基中因含有不同电解质而具有一定导电性。微生物在生长代谢的过程中可产生质子、电子和各种带电荷的原子团 (例如在液体培养基内CO2 转变成CO3- ) ,通过电极检测培养基的导电性或电压 可判断有无微生物生长。 3.应用测压原理的血培养系统:许多细菌生长过程中,常伴有吸收或产生气体现象,如很多需氧菌在胰酶消化大豆肉汤中生长时,由于消耗培养瓶中的氧气而首先表现为吸收气体。而厌氧菌生长时最初均无吸收气体现象,仅表现为产生气体(主要为 CO2),因此可利用培养瓶内压力的改变检测微生物的生长情况。 4.采用光电检测原理的血培养系统:微生物在代谢过程中必然会产生终代谢产 物C O2,引起培养基p H 值及氧化还原电位改变。利用光电比色检测血培养瓶中某 些代谢产物量的改变,可判断有无微生物生长。 5.BacT/Alert自动血培养系统:系统在每个培养瓶底部装置一带含水指示剂的CO2 感受器,当培养瓶内有微生物生长时,其释放出的CO2 可渗透至感受器, 并与感受器指示剂上饱和水发生化学反应,产生游离氢离子使pH 值降低,感 受器上的指示剂由绿变黄。感受器上方的光发射二极管每 10min 发一次光投 射到感受器上,再由一光电探测器测量其产生的反射光。反射光强度传送至 微机后,会自动连续记忆并绘成生长曲线图,由微机分析判断阴性或阳性, 以此确定是否有微生物生长。 6.Bactec9000自动血培养系统:系统利用荧光法作为检测手段,其C O2 感受器上含有荧光物质。当培养瓶中有微生物存在时,产生的C O 可与感受器中的水发生反应 产生H + ,使pH 值降低,酸性环境促使感受器释放出荧光物质。从光发射二极管发射 的光激发荧光感受器而产生荧光。光电比色检测仪每10min 直接对荧光强度进行检测,此荧光强度随C O2 的产生量增多而增强。数据传输到计算机后,生长监测系 统根据荧光的线性增加或荧光产量的增加等特有标准,分析细菌的生长情况,最终判断阳性或阴性。 7.Vital血培养系统:系统采用同源荧光技术来监测微生物的生长。与培养基结合