色氨酸残基对有机阴离子运转多肽2B1功能和表达的影响
录
第一章前言 (1)
第二章丙氨酸替换对OATP2B1功能和表达影响的研究 (4)
2.1实验目的 (4)
2.2实验部分 (4)
2.2.1 试齐U (4)
2.2.2细胞系人体胚胎肾细胞 (5)
2.2.4质粒构建 (6)
2.2.5细胞培养及转染 (8)
2.2.6细胞表面生物素酰化及免疫印迹分析 (8)
2.2.7摄取实验 (9)
2.2.8底物LC-MS/MS检测方法的建立 (9)
2.3结果与讨论 (12)
2.3.1 OATP2B1六个色氨酸残基突变质粒构建 (12)
2.3.2单突变及三突变对OATP2B1功能的影响 (14)
2.3.3突变对OATP2B1蛋白表达的影响 (15)
2.3.4四个对功能有显著影响的突变动力学考察 (17)
2.3.5 OATP2B1色氨酸突变介导的其他底物转运 (18)
第三章苯丙氨酸替换对OATP2B1功能和表达影响的研究 (20)
3.1实验目的 (20)
3.2实验部分 (20)
3.2.1试剂与仪器 (20)
3.2.2质粒构建 (20)
3.2.3细胞培养，转染及功能和表达的考察 (21)
3.3结果与讨论 (21)
3.3.1 OATP2B1四个苯丙氨酸替换的质粒构建 (21)
3.3.2苯丙氨酸替换后对OATP2B1功能的影响 (23)
3.3.3突变对OATP2B1蛋白表达的影响 (23)
3.3.4 W611F动力学考察 (25)
第四章W611更多突变体的功能分析 (26)
4.1实验目的 (26)
4.2实验部分 (26)
4.2.1试剂与仪器 (26)
4.2.2质粒构建 (26)
4.2.3细胞培养，转染及功能和表达的考察 (27)
4.3结果与讨论 (27)
4.3.1 OATP2B1 611位点3个氨基酸替换的质粒构建 (27)
4.3.2三种W611突变对OATP2B1功能的影响 (29)
4.3.3突变对OATP2B1蛋白表达的影响 (29)
第五章E3S与OATP2B1分子对接模型 (31)
5.1实验目的 (31)
5.2实验部分 (31)
5.3结果与讨论 (31)
第六章总结与展望 (33)
6.1总结 (33)
6.2展望 (34)
##嫌 (36)
综述跨膜结构域和关键氧基酸残基对人OATPs功能的影响 (41)
参考文献 (46)
攻读硕士期间发表的论文 (49)
中英文缩略词表 (50)
⑶M (51)
色氨酸残基对有机阴离子转运多肽2B1功能和表达的影响第一章前言
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弟一早刖目
有机阴离子转运多肽（在人体中命名为OATPs，在其他物种中命名为Oatps)被归类在溶质载体超家族（S L C)的有机阴离子转运蛋白家族（S L C O)内，是一类重要的细胞膜摄取转运蛋白，能摄取大量结构各异的内源性和外源性化合物进入细胞 [1’2]。图1-1所示是OATP基因超家族系统进化树[3]，其中人OATPs广泛分布于胃肠道、肝脏、肾脏、心脏、肺、胎盘血脑屏障等器官组织的内皮和上皮细胞，以非Na+和ATP 依赖的方式跨膜转运结构多样、范围广泛的一系列有机溶质，包括胆汁盐、类固醇以及类固醇缀合物、甲状腺激素、阴离子寡肽、药物和毒物[4_6]。目前文献报道分离鉴 定的人OATP家族包含11个成员，分别为OATP1A2、OATP1B1、OATP1B3、OATP1C1、OATP2A1、OATP2B1、OATP3A1、OATP4A1、OATP4C1、OATP5A1 及OATP6A1[M]。?ATP2家族包括两个成员，其中OATP2A1也被称为前列腺素转运体，是介导几种花 生酸类物质运输的普遍表达载体；另一个成员是OATP2B1，是一个相对有较窄的底 物特异性的转运体，最初从人大脑中分离，在随后实验中发现在肝脏和小肠中高表达，以及其他组织中也有表达[1°_1'O A T P2B1在肝脏和小肠中高表达可能是其底物肠道吸 收和肝脏摄取的关键因素[13_15]。因此，OATP2B1可能对包括阿利吉仑、非索非那定、格列本脲和他汀类在内的药物在体内吸收分布有重要影响[16_2°]。
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