小鼠睾丸支持细胞使用说明

小鼠睾丸支持细胞

小鼠睾丸支持细胞产品说明：

为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠睾丸支持细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠睾丸支持细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。

5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。

小鼠睾丸支持细胞产品简介：

产品名称：小鼠睾丸支持细胞

组织来源：小鼠睾丸

产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶

小鼠睾丸支持细胞细胞简介：

睾丸支持细胞又称sertoli细胞。它是生精细胞的支架,为其提供必需的营养物质,能合成与分泌雄激素结合蛋白,为其提供高浓度的雄激素环境等,还具有构成血-睾屏障,形成睾丸内微环境,调节精子发生等功能。制备高活率的sertoli 不仅对sertoli的基础研究有重要价值,而且在精子发生等领域有重要意义。本研究旨在建立小鼠sertoli的快速高效分离方法,并根据其分泌FasL的特性,采用细胞免疫化学方法对分离的小鼠sertoli进行鉴定,以期为进一步研究和应用sertoli奠定基础。

本公司生产的小鼠睾丸支持细胞，细胞总量约为5×105cells/瓶，细胞纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

小鼠睾丸支持细胞培养基信息：

1）培养基类型：DMEM高糖

2）添加因子：FBS、Penicillin、Streptomycin 等

小鼠睾丸支持细胞使用方法：

1. 取出25cm2 培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO

细胞培

2

养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2. 小鼠睾丸支持细胞，建议直接使用，不建议扩大培养

3. 待细胞状态最佳时准备转孔培养，进行实验：

1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴1min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀，按适当的比例进行转孔培养实验，放入37℃，5% CO

2细胞培养箱中培养；

4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

小鼠睾丸支持细胞注意事项：

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 该细胞只可用于科研。

备注：由于实验所用试剂与操作环境的不同，以上方法供各实验室参考。

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小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞

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AMPK信号通路负向调节热应激诱导仔猪睾丸支持细胞乳酸分泌

目录 目录 中文摘要............................................................................................................................ I ABSTRCT....................................................................................................................... III 第一章文献综述. (1) 1.睾丸支持细胞概述 (1) 1.1支持细胞的结构和功能 (1) 1.2支持细胞的能量代谢 (1) 1.3支持细胞乳酸的分泌 (2) 2.热应激的研究进展 (4) 2.1热应激概述 (4) 2.2热应激对机体代谢的影响 (5) 2.3热应激对公猪繁殖性能的影响 (7) 3.AMPK的研究概况 (8) 3.1 AMPK的结构 (9) 3.2 AMPK的活性 (10) 3.3 AMPK与代谢调节 (11) 3.4 AMPK与热应激 (13) 4.结束语 (13) 第二章引言 (15) 第三章试验材料与方法 (17) 1.试验材料 (17) 1.1试验材料 (17) 1.2主要试剂 (17) 1.3试剂配置 (18) 1.4主要试验仪器 (20) 2.试验方法 (21) 2.1睾丸支持细胞分离培养 (21) 2.2支持细胞的纯度鉴定 (22) 2.3热应激处理 (23) 2.4 AMPK过表达载体的构建 (23) 2.5细胞转染 (26) 2.6蛋白免疫印迹 (26) 2.7 乳酸含量测定 (28) i

小鼠睾丸支持细胞分离培养

小鼠睾丸支持细胞分离培养 一、材料和器械： 1、材料：小白鼠（18~ 20 日龄）1只 2、配液： PBS 1L，高压灭菌 细胞洗液：DMEM+双抗 消化液：0 25% ( 质量分数) 胰蛋白酶，0 1%( 质量分数) 胶原酶 细胞培养液：DMEM+10%FBS+双抗 3、器械： 镊子、手术剪、手术刀各3-4把，高压灭菌 500mL烧杯2个，高压灭菌 25 mL离心管、5 mL离心管各20个，高压灭菌 酒精棉一瓶 细胞培养皿若干 冰块若干 二、操作步骤： 1、处死小鼠颈椎脱臼法处死； 2、消毒置于含75% ( 体积分数) 乙醇平皿中浸泡2 min, 然后置于超净台上； 3、取睾丸用中剪剪开下腹部皮肤, 眼科剪从下腹部附睾部剪断精索, 取出双侧睾丸, 放入含预冷细胞洗液的培养皿中； 4、取实质修剪睾丸附带的精索。剥除睾丸被膜, 将睾丸实质剪成约1 mm 1 mm 1 mm 碎块, 静置3~ 4 min； 5、消化转入25mL 离心管中。吸出上层细胞洗液, 每只睾丸加入1 5mL 37 预温的0 25% ( 质量分数) 胰蛋白酶，37 高速振荡消化15~ 20min, 直到残存的间质消化成粘液状, 可见成片断的曲细精管； 6、终止消化加入入少许血清终止消化,； 7、离心1000 r/ min离心5 min, 倾去上层胰酶。加入DMEM/ F12 培养基重悬, 1000r/min 离心5min。倾去上层培养液； 8、再消化每只睾丸加入1 mL 37 预温的0 1%( 质量分数) 胶原酶, 37 低速

缓慢振荡消化20~ 25min； 9、铜网过滤取滤液800 r/ min 离心5min, 2 次去除胶原酶, 用培养液洗涤； 10、接种往离心管加入细胞培养液5ml左右，吹打均匀，接种到两个30细胞培养皿中，补加培养液到培养皿1/3~1/2,培养皿标记显微观察后放入36CO2培养箱培养。 三、换液纯化，计数结果鉴定

小鼠睾丸支持细胞体外培养特性

生物工程学报Chin J Biotech2009, May 25; 25(5): 745-753 https://www.wendangku.net/doc/9512104535.html, Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@https://www.wendangku.net/doc/9512104535.html,? 2009 Institute of Microbiology, CAS & CSM, All rights reserved 小鼠睾丸支持细胞体外培养特性 师冰洋1, 张淑香1, 郭美锦1, 王永红1, 张嗣良1, 史小林2 1 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室, 上海 200237 2 首都医科大学生殖医学中心, 北京 100069 摘要:支持细胞是睾丸的重要组成部分, 其主要功能是为生精细胞提供适宜的生长环境。从幼鼠睾丸中分离得到支持 细胞, 并通过苏木精-伊红和Fas-L免疫组化染色对分离得到的细胞进行了鉴定。通过对原代小鼠睾丸支持细胞的贴壁、 生长和培养液中葡萄糖、谷氨酰胺、氨基酸等营养底物及其副产物乳酸、铵根离子等的代谢以及培养液渗透压和pH的 研究, 发现支持细胞的贴壁时间主要集中在接种后2~4 h; 当培养液中氨根离子浓度高于 2.3 mmol/L, 渗透压高于 326 mosm/kg, pH≤6.8时支持细胞生长进入衰亡期; 在氨基酸代谢方面, 发现培养过程中丙氨酸和谷氨酸浓度迅速增加, 缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸浓度略有降低, 丝氨酸、精氨酸和甘氨酸浓度基本保持不变。因此培养液中铵根离子浓度的 过量积累、渗透压和pH的异常和贴壁面积不足是限制支持细胞静态生长的主要因素。研究结果为支持细胞大规模培养 及工艺优化奠定了基础。 关键词:支持细胞, 分离与鉴定, 体外培养, 代谢特性 Metabolic characterization of rat sertoli cell in vitro culture Bingyang Shi1, Shuxiang Zhang1, Meijin Guo1, Yonghong Wang1, Siliang Zhang1, and Xiaolin Shi2 1 State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China 2 Reproductive Medical Center of Capital Medical University, Beijing 100069, China Abstract: Sertoli cell (SC) is intrinsic to the testis and provides an appropriate growth environment for the germ cells. It was separated from rat’s testis and identified by hematoxylin and eosin staining(HE) and immunocytochemical reaction, then cultivated in vitro. Culture conditions such as pH, osmotic pressure and metabolic parameters that include consumption rates of glucose, glutamine, amino acids and formation rates of lactic acid, ammonium ion were investigated. It was showed that adhesion process of SCs was accomplished within 2?4 hours after inoculation. It was also observed that the SCs entered into the decline phase when the concentration of ammonium ion and lactic acid were above 2.3 mmol/L and 14 mmol/L, respectively, which caused osmotic pressure above 326 mosm/kg and pH below 6.8 in the medium. As the changes of amino acids during culture were concerned, Glu and Ala accumulated rapidly, while Val, Leu, Ile reduced slightly and at the same time Ser, Arg, and Gly were stable. The restrict factors for SCs grown in static culture might be high osmotic pressure and low pH, which were generated when glutamine and glucose were metabolized into lactic acid. The findings could be fundamental in the process optimization of large scale Sertoli cells in vitro culture. Received:December 9, 2008; Accepted:February 19, 2009 Supported by: National High Technology Research and Development Program of China (863 Program) (No. 2007AA02Z216), Shanghai Biotechnology Industrialized Platform (No. 07DZ22914), National Special Fund for State Key Laboratory of Bioreactor Engineering (No. 2060204). Corresponding author: Shuxiang Zhang. E-mail: zhangsx1976@https://www.wendangku.net/doc/9512104535.html, Meijing Guo. E-mail: guo_mj@https://www.wendangku.net/doc/9512104535.html, 国家高技术研究发展计划(863计划)(No. 2007AA02Z216), 上海市生物技术产业化平台(No. 07DZ22914), 国家重点实验室专项经费 (No. 2060204)资助。

组织学解剖--睾丸

组织学解剖--睾丸 睾丸(一) 一般结构 1. 被膜浆膜（睾丸鞘膜脏层）：由间皮及少量结缔组织组成白膜（tunica albuginea）：位于浆膜深层，由致密结缔组织组成睾丸纵隔（mediastinum testis）：白膜在睾丸后缘增厚形成睾丸纵隔，纵隔结缔组织呈放射状深入睾丸实质形成许多睾丸小隔 2. 实质由睾丸小隔分隔睾丸实质成250多个锥体形睾丸小叶。每个睾丸小叶含1）1～4条弯曲的小管——生精小管生精小管在近睾丸纵隔处变为短而直的直精小管 直精小管在睾丸纵隔内相互吻合形成睾丸网 即生精小管→直精小管→睾丸网2）生精小管间的结缔组织为睾丸间质,内含睾丸间质细胞 (二) 生精小管(seminiferous tubule) 是睾丸产生精子的场所它为极度弯曲的上皮性管道成人的生精小管：长30～70cm 管径150～250um，中央为管腔 管壁厚60～80um 1.结构生精上皮基膜1）生精上皮（spermatogenic epithelium）组成：两种细胞支持细胞：支持细胞作单层排列生精细胞（spermatogenic cell）生精细

胞镶嵌在支持细胞侧面及腔面 由上皮基部到腔面作多层（5～8层）排列2）基膜较厚外周覆以胶原纤维和一些梭形的具有收缩功能的类肌细胞(myoid cell)肌样细胞收缩有助于精子排出 2.生精细胞与精子的发生生精细胞精原细胞 初级精母细胞 次级精母细胞 精子细胞 精子青春期前，生精小管管腔很小或缺如，管壁中只有支持细胞和精原细胞青春期开始，在垂体促性腺激素的作用下，生精细胞不断增殖分化形成精子，生精小管壁内可见不同发育阶段的生精细胞。 1）精原细胞（spermatogonium）位置紧贴生精上皮基膜细胞形态圆形或椭圆形，直径约12um细胞结构细胞质内除核糖体外，细胞器不发达。是各级生精细胞中最幼稚的细胞细胞分类精原细胞分A、B两型A型精原细胞是生精细胞中的干细胞，经过不断地分裂增殖，一部分A型精原细胞继续作为干细胞，另一部分分化为B型精原细胞B型精原细胞经过数次分裂后，分化为初级精母细胞

睾丸性索间质肿瘤

由正常发育和演化的间质细胞成分构成的睾丸肿瘤。2004年世界卫生组织WHO《泌尿系统及男性生殖器官肿瘤病理学和遗传学》中将其分为间质细胞瘤和恶性间质细胞瘤。睾丸问质细胞瘤罕见，间质细胞瘤占睾丸肿瘤的1%～3%，是最常见的性索/间质肿瘤。儿童睾丸间质细胞瘤为良性，约有10%成人的睾丸间质细胞瘤为恶性，可能发生腹膜后淋巴结转移或远处脏器转移。恶性睾丸间质细胞瘤肿瘤体积常大于5cm，核分裂象增多，有坏死或血管浸润。1895年由Sacchi 首先报道。该病可发生于任何年龄段，其中，约有20%发生于儿童，约80%发生于成人。 目录 1病因 2临床表现 3检查 4治疗 1病因 病因不清。可能与先天性睾丸发育不全、隐睾有关。 2临床表现 儿童睾丸间质肿瘤高发年龄为3岁～9岁，成人睾丸间质肿瘤高发年龄为21岁～59岁。5%～10%的患者有隐睾史。常为单侧，3%为双侧。成人患者最常见的临床表现是无痛性睾丸增大或肿物，30%的患者有乳房增大，男性乳房增大的表现往往较睾丸肿物更早，平均比睾丸间质细胞瘤的诊断早3年。儿童患者常见症状为无痛性睾丸肿大，假性性早熟，如出现喉结、声音低沉、阴毛增生，阴茎增粗、时常勃起。 3检查 超声检查是临床上辅助诊断睾丸病变的首选方法。B超对于判断睾丸肿瘤的性质、大小、部位、肿瘤所占睾丸组织的比例甚至选择治疗方式等具有重要的临床价值。睾丸内可见单发，均呈类圆形，界清，体积小，实性低回声/中等回声/

高回声，与正常睾丸组织有明显的边界，形态不规则，内部回声均匀。丰富的动、静脉血流信号。 成人睾丸间质细胞瘤患者的血清和尿中的雌激素常常升高。儿童睾丸间质细胞瘤患者的血清睾酮升高，部分患儿的尿17-酮升高。间质细胞瘤患者的血清甲胎蛋白（AFP）和人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）多在正常范围。 4治疗 外科手术切除是惟一有效的治疗方法，对儿童睾丸畸胎瘤患者术中冰冻病理检查结果排除恶性肿瘤者，可以考虑行保留睾丸手术。根治性睾丸切除术能够治愈大多数患者，对于病理怀疑恶性的病例，可以考虑腹膜后淋巴结清扫术。远处转移的患者对放疗或化疗不敏感。

小鼠睾丸发育过程中Si1基因表达的研究

云南大学学报(自然科学版),2007,29(2):208～212CN53-1045/N　ISSN0258-7971 JournalofYunnanUniversit y Ξ 小鼠睾丸发育过程中Si1基因表达的研究 罗　兰1,2,李水冰1,余　敏1,谭德勇1 (1.云南大学生命科学学院生物化学与分子生物学实验室,云南昆明　650091; 2.昆明医学院基础医学院细胞生物学暨医学遗传学教研室,云南昆明　650031) 摘要:以1天龄、未成熟(3周龄)、成熟期(10周龄以上)的昆明正常小鼠睾丸组织为实验材料,利用地高辛标记的Si1基因探针在其组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交,探讨Si1基因在小鼠睾丸发育过程中的表达变化.同时,分别在生后15,20d及25d的昆明小鼠睾丸组织切片上进行凋亡细胞原位检测,验证小鼠睾丸上述发育时期的细胞凋亡情况.结果发现:①Si1基因在1天龄小鼠的睾丸组织生精上皮内无杂交信号; 在未成熟小鼠的睾丸组织部分生精上皮内有极强的杂交信号;在成熟小鼠的睾丸组织生精上皮内无杂交信号. ②小鼠睾丸组织生精上皮内,凋亡细胞数从生后第15～20天呈增加趋势,于生后第20天出现峰值,生后第25 天又降低.上述结果表明Si1基因可能参与了小鼠睾丸的发育过程,在小鼠睾丸发育的特定时期发挥作用,由于Si1基因的表达与小鼠生精细胞凋亡发生的时期同步,表明该基因可能与小鼠睾丸发育过程中的细胞凋亡有关. 关键词:小鼠;睾丸;Si1基因;基因表达;凋亡 中图分类号:Q344.13 文献标识码:A 文章编号:0258-7971(2007)02-0208-05 Si1基因是一个新的功能基因(GenBank接受号:AY050169),目前对于Si1基因的功能还知之甚少,以往的研究中表明它与细胞周期的增殖调控有关,可能是一个细胞生长抑制基因,即一个细胞周期负调控基因[1].在肿瘤中,一个SNP位点被发现,该位点在非肿瘤人群中的分布频率为14%,而在肠癌中的分布频率达到51.5%.表明该基因与肠癌有密切关系[2]. 生殖细胞的发育是一个极为特殊的分化过程,也是一个极特殊的细胞周期运行过程.在这一过程中,既有生殖细胞本身的频频分裂增殖,又有其不断地发育分化和死亡[3].研究细胞周期调控基因在生殖细胞发育过程中的表达既可探讨生殖细胞的发育机制,也可从另一个角度探讨细胞周期调控机制,并可探讨细胞周期调控基因在生殖细胞发育过程中的生理功能.此外,近年来的研究表明,小鼠睾丸发育过程不仅存在细胞的生长和分化过程,也涉及了生精细胞的退化过程.有形态学及生化研究表明,生精细胞的退化主要通过细胞凋亡来实现[4].有学者对不同发育阶段小鼠生精细胞的凋亡作了系统的研究,发现凋亡细胞数从生后1d到生后3周有增加的趋势,于生后第3周出现峰值,之后降低[5]. Si1基因既然与细胞周期和肿瘤发生有关[1,2],它与发育过程也许有一定的联系.探讨Si1基因在小鼠睾丸生殖细胞发育过程中的表达,对探讨小鼠睾丸中生殖细胞发育的分子机制有重要的参考意义.由于小鼠睾丸生精细胞在发育过程中存在退化,因此本文同时考察小鼠睾丸生精细胞发育过程的凋亡,以探讨Si1基因与生精细胞凋亡过程的联系. 1　材料与方法 1.1　生物学材料 Ξ收稿日期:2006-06-10 　基金项目:国家自然科学基金资助项目(39960030,30360040);云南省应用基础研究基金资助项目(1999C002Z).　作者简介:罗　兰(1973-),女,湖南人,硕士,主要从事细胞生物学及医学遗传学方面的研究.

睾丸细胞的生物学特征及研究进展

睾丸细胞的生物学特征及研究进展 周文钧 摘要：睾丸形态与功能的维持主要依靠生精细胞、支持细胞、管周肌样细胞、间质细胞发挥作用。生精细胞、支持细胞功能的正常是精子发生的基础，管周肌样细胞的收缩促使精子排出至睾丸网，间质细胞是睾酮的主要来源。目前，睾丸细胞研究主要集中在细胞体外培养、细胞基因组学、细胞应用三大领域。本次研究将分别探讨生精细胞、支持细胞、管周肌样细胞、间质细胞的的生物学特征及其研究进展。 关键词：生精细胞；支持细胞；管周肌样细胞；间质细胞；生物学；应用 睾丸由生精小管和间质构成，1～4条生精小管（seminiferous tubule）高度盘曲于睾丸小叶中。管壁上皮为特殊的生精上皮，是精子发生的场所，主要由支持细胞（Sertoli cell）、生精细胞（spermatogenic cell）组成。小管上皮基膜外有胶原纤维和管周肌样细胞（peritubularmyoid，PTM）。睾丸间质是含有大量的血管及淋巴管的疏松结缔组织，其中含有大量的间质细胞（Leydig cell），其主要功能为合成和分泌雄激素。本次研究将分别探讨生精细胞、支持细胞、管周肌样细胞、间质细胞的的生物学特征及其研究进展。 1 睾丸细胞生物学特点 1.1生精细胞精子发生既是一个复杂的生物形态与遗传变化过程，又是一个复杂、特异的细胞分化过程，是生命周期循环的重要环节之一，其中生精细胞生物学变化起到关键作用。人的精子发生需要（64±4.5）d，需要经过精原细胞增殖分化、精母细胞减速分裂、形成精子三个阶段。 精原细胞位于生精小管基底室，基膜与之相接触。其分化起始于胚胎时期的原始生殖细胞，分化形成生殖母细胞并逐渐迁移至生精上皮基膜，经过细胞分裂分化成为以精原干细胞（SSCs）为主的精原细胞，SSCs可自我更新，又能定向分化成精母细胞。大鼠的精原细胞可分为A型、中间型、B型精原细胞，Huckins提出将大鼠的精原细胞分为三部分，即贮备型精原干细胞（As），更新或增值型精原细胞（Apr-Aal）和分化型精原细胞（A1～A4-In-B）[1]，前两者也可以称之为未分化型精原细胞。As一般情况下处于休止状态，只有在其他类型的精原细胞耗尽的情况下才会进行分裂。单个的精原细胞As分裂形成成对Apr精原细胞，Apr精原细胞再分裂分化成4、8、16个链状精原细胞（Aal），Aal再分裂形成分化型A型精原细胞（A1～A4）四个亚型及中间型（In）、B型精原细胞。初级精母细胞内细胞器增多，有发达的高尔基复合体，在组织切片中可观察到大量处于各阶段的初级精母细胞，分裂完成后次级精母细胞便很快开始第二次减数分裂，因次级精母细胞存在时间短，故在组织切片中不易看到，此时次级精母细胞不进行染色体复制，形成单倍体圆形精子细胞，最终形态改变形成精子。 1.2支持细胞支持细胞（Sertoli cell）是维持生殖上皮稳定性与维持睾丸功能的关键细胞，是一种滋养型细胞，位于基部紧贴基膜，顶部伸向腔面，侧面和管腔面有很多不规则的凹陷，其内镶嵌着各级生精细胞。支持细胞之间的连接复合体将生精上皮分为了基底室和近腔室，基底室有精原细胞和细线前期精母细胞，近腔室有精母细胞、精子细胞和精子[1]，为精子发生内环境的稳定提供了保障，支持细胞和精子细胞之间存在缝隙连接，此连接就像锚一样在精子细胞镶嵌在支持细胞上发挥作用[2]。 支持细胞可分泌生长因子（如TGFα、TGFβ、IGF-1、IL-1）、转运蛋白（如雄激素结合蛋白、转铁蛋白、铜蓝蛋白）、类固醇等物质，为精子细胞提供营养物质，同时还起到包裹生殖细胞质突起和释放管腔作用。支持细胞分泌的生长因子可支持精原细胞的增殖分化[3]。支持细胞具有免疫豁免作用[1]，还可以通过自分泌与旁分泌作用调节睾丸间质细胞的功能。

Oct4在不同时期牛睾丸组织中的表达

Oct4在不同时期牛睾丸组织中的表达 黄伟玲，宋锐，陶勇，张运海，曹鸿国*，章孝荣* （安徽农业大学动物科技学院，安徽地方畜禽遗传资源保护与生物育种省级实验室，安徽合肥230036） 摘要：为探明不同时期牛睾丸组织中干细胞的表达特点，以2.5月龄、4月龄牛胎儿和出生后1年牛、2年牛睾丸为试验材料，通过HE染色和免疫组化法染色，探讨了不同时期牛睾丸的组织学特征及Oct4在睾丸组织中的表达。结果显示，早期胎儿阶段的牛睾丸组织细胞呈现团状，睾丸组织中细胞随着年龄增长逐步分化形成管状，在2.5月龄和4月龄胎牛睾丸组织中，Oct4阳性细胞广泛分布于睾丸组织生精小管细胞团和睾丸间质中；在出生后1年牛睾丸组织中，阳性细胞主要分布于牛睾丸组织生精小管基底膜，在睾丸间质中数量较少或没有；在出生后2年牛睾丸组织中，仅在睾丸组织生精小管基底膜的少量细胞呈现Oct4阳性。试验证实了随着牛年龄的增长，牛睾丸组织中Oct4阳性细胞逐渐减少或消失。关键词：Oct4；牛；睾丸组织 中图分类号：S814.1文献标识码：文章编号：0529-5130（2011）01-0036-03 睾丸组织是生殖系统的重要组成部分，Guan 等［1］和Valenzuela等［2］先后从睾丸组织中分离出具有胚胎干细胞（embryonic stem cells，ES细胞）特性的多能性细胞，为干细胞的分离培养和应用奠定了基础。Oct4又称Oct3或Pou5f1，是由Pou5f1基因编码产生的，是POU（Pit-Oct-Unc）结构域的转录因子家族中的一员［3］，Oct4作为干细胞的主导基因广泛表达于各种类型的干细胞，本次试验采用免疫组织化学方法探讨Oct4阳性细胞在不同时期牛睾丸组织中的分布及表达，为从牛睾丸中分离培养多能性干细胞奠定基础。 1材料与方法 1.1试验材料 PV-9000二步法免疫组化检测试剂盒和显色用浓缩型DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，Oct4兔多克隆抗体购自Abcam公司。 牛睾丸分别取自2.5月龄、4月龄的黑白花奶牛胎儿以及出生后1年、2年的黑白花奶牛；12.5d昆明白小鼠胎儿生殖嵴用作阳性对照。 1.2切片制作与观察 试验材料取出后，用生理盐水冲洗，4%多聚甲醛固定48h，将固定好的各睾丸组织样本流水冲洗24h后，依次经梯度酒精脱水、二甲苯透明、常规石蜡包埋、切片等处理，然后将切片贴于预先用多聚 收稿日期：2010-02-24；修回日期：2010-10-25 基金项目：国家“863”重点项目（2008AA101003）；安徽农业大学资助引进与稳定人才科研启动项目（yj2007-10）。 作者简介：黄伟玲（1984-），女，硕士研究生。 *通讯作者：曹鸿国，副教授，主要研究方向为动物干细胞与胚胎工程，E-mail：caohongguo1@https://www.wendangku.net/doc/9512104535.html,；章孝荣，教授，主要研究方向为动物胚胎工程，E-mail：zxr@https://www.wendangku.net/doc/9512104535.html,。赖氨酸处理过的干净载玻片上。选取连续相邻的四张切片分别作HE、免疫组化染色、免疫染色阴/阳性对照。 石蜡切片60?烤30min，经二甲苯脱蜡，酒精梯度复水。用含Triton X-100和双氧水的通透液孵育10min，柠檬酸缓冲液中微波抗原修复20min，0.025%Triton X-100的TBS冲洗，3%双氧水孵育10 min，含1%BSA的TBS封闭30min，1?2500稀释的Oct4一抗湿盒4?孵育过夜，二抗添加按照试剂盒操作说明书进行，DAB显色1min。显色后的切片经苏木精衬染，酒精梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，在显微镜下观察拍照。 2结果 2.1不同年龄牛睾丸组织的结构特征 在2.5月龄牛胎儿睾丸组织中，未形成曲细精管结构，不同类型的细胞开始分区，原始生殖细胞聚集明显，呈现明显的团状细胞集落，各细胞集落之间被支持细胞分隔（图1A）。4月胎牛睾丸组织中生精小管结构初步显现，生精小管的管腔还没有形成，睾丸组织间质分布于生精小管周围（图1B）。1年牛睾丸组织生精小管结构形成，但生精小管管腔仍处于闭锁状态，睾丸间质细胞呈梭形分布于生精小管周围，精原细胞沿生精小管基底膜整齐分布（图1C）。2年牛睾丸组织中生精小管的管腔已经形成，管腔壁上有多层细胞分布（图1D）。 2.2Oct4在不同年龄牛睾丸组织的表达 表达Oct4是干细胞的普遍特征，牛睾丸组织切片免疫组织化学检测显示在2.5月龄和4月龄胎牛睾丸组织中，在牛睾丸组织生精小管细胞团和睾丸间质细胞中Oct4阳性细胞较多，阳性细胞在睾丸组织的实质和间质中均有较多分布（图2A，2B）；伴随着 · 63 ·Animal Husbandry＆Veterinary Medicine2011Vol.43No.1

小鼠睾丸生殖细胞标本制作及减数分裂期染色体观察

Isolation and staining of mouse meiotic metaphase chromosomes 小鼠睾丸生殖细胞标本制作及减数分裂期染色体观察 xx 2011级生科四班201100140120 同组者：xx 【实验目的】 1、learn to isolate mouse testes cells and stain with Giemsa. 学会分离小鼠睾丸细胞并用Giemsa染液染色 2、Observe the number and morphology of mouse chromosomes 观察小鼠染色体的数目及形态特征 【实验材料】 【Reagents】 秋水仙素colchicine solution 吉姆萨染液Giemsa stains solution 生理盐水physiological saline 氯化钾溶液KCl solution 固定液fixation solution 【Tools and equipments】 Dissecting tray，beaker，centrifuge tube，microscope，glass slide，pipette，scissors，forceps，copper mesh. 解剖盘，烧杯，离心管，显微镜，载玻片，吸管，剪刀，镊子，铜网 【实验原理】 meiosis is a process of reductional division in which the number of

chromosomes per cell is cut in half. In animals, meiosis always results in the formation of gametes, while in other organisms it can give rise to spores. 减数分裂是细胞分裂染色体数减半的过程，在动物中,减数分裂的结果总是在形成配子,而在其他生物可以产生孢子。 Testosterone is the place where the male germ cell develop and mature,it is the organ that produce sperm. After sexual maturation, sex cells of mammals in the testis is always mature partially. Therefore,have an appropriate treatment to testis enables us to get a variety of chromosomes of different process. 睾丸是雄性动物生殖细胞发育和成熟的部位，是产生精子的器官。哺乳动物在性成熟以后，精巢内的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理，随时都可以获得减数分裂过程中各个时期染色体的标本。 Inject an amount of colchicine solution into the abdomen cavity can prevent the formation of the spindle fiber, so that a large amount of cells in the process of meiotic metaphase can be accumulated. By the normal way of making specimen,we can observe the chromosomes of mouse testosterone 用适量的秋水仙素溶液注入动物腹腔内，可以阻止分裂细胞纺锤丝的形成，从而积累大量处于分裂中期的细胞。利用上述原理，通过常规的制片方法，观察小鼠睾丸细胞的染色体。 Chromosomes are not visible in the cell’s nucleus—not even under a microscope—when the cell is not dividing. However, the DNA that makes up chromosomes becomes more tightly packed during cell division and is then visible under a microscope. Most of what researchers know about

转录因子Ets1和Ets2在小鼠睾丸组织中的表达及其意义

［文章编号］　１６７１－５８７Ⅹ（２０１１）０１－０００６－ ０５［收稿日期］　２０１０－０８－ １６［基金项目］　国家自然科学基金资助课题（３０７７１５５５ ）［作者简介］　刘　洋（１９８５－），男，黑龙江省大庆市人，基础兽医学硕士，主要从事Ｅｔｓ转录因子对小鼠睾丸组织调控 研究。 ［通信作者］　张学明（Ｔｅｌ：０４３１－８７８３６１６２，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｘｕｅｍ＠ｊｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ）［ＤＯＩ］ ＣＮＫＩ：２２－１３４２／Ｒ．２０１０１１３０．１１０８．０００［网络出版时间］　２０１０－１１－３０　 １１：０８［网络出版地址］　ｈｔｔｐ ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／２２．１３４２．ｒ．２０１０１１３０．１１０８．０００．ｈｔｍｌ转录因子Ｅｔｓ１和Ｅｔｓ２在小鼠睾丸组织中的表达及其意义 刘　洋，金　波，郭　斌，赵丽红，韩玉帅，岳占碰，张学明 （吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室，吉林长春１３００６２ ）［摘　要］　目的：检测Ｅｔｓ家族转录因子Ｅｔｓ１和Ｅｔｓ２在小鼠睾丸组织中的表达，探讨其对小鼠睾丸发育的调控及其对精原干细胞（ＳＳＣｓ）增殖、分化的可能影响。方法：取生后第１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０和 ７０天的小鼠睾丸组织，对成年小鼠进行白消安１０ｍｇ·ｋｇ－１ 腹腔注射，分别在注射后第０、３、５、８、１ ０和１８天取睾丸组织，用半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法对比内参β－ａｃｔｉｎ在对应组织内的表达水平，分析Ｅｔｓ１、Ｅｔｓ２ｍＲＮＡ在睾丸组织中的相对表达量。结果：Ｅｔｓ１的表达量在生后第１～３０天显著高于出生后第３５天（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），之后明显降低并保持稳定；Ｅｔｓ２在生后第１～２５天表达量显著高于第３５天（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），之后明显下降并保持稳定。白消安处理后，Ｅｔｓ１的表达量于第５天降至最低，随后逐渐恢复，第９天后基本达到处理前水平并保持相对稳定，其中第５、８天表达量均显著低于处理后第０天（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；Ｅｔｓ２的表达量在白消安处理后前期变化不明显，第１０天时明显降低，与第０和１８天比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），之后缓慢回升，第１８天左右恢复至处理前水平。结论：转录因子Ｅｔｓ１和Ｅｔｓ２可能对睾丸早期发育、成年精子发生的维持及精原细胞的增殖、分化具有调节作用。 ［关键词］　Ｅｔｓ转录因子家族；Ｅｔｓ１；Ｅｔｓ２；睾丸；白消安；小鼠［中图分类号］　Ｑ５１；Ｒ－３３２ ［文献标志码］　Ａ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐ ｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ　Ｅｔｓ１ａｎｄ　Ｅｔｓ２ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｔｅｓｔｉｓ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｓｉｇ ｎｉｆｉｃａｎｃｅｓＬＩＵ　Ｙａｎｇ，ＪＩＮ　Ｂｏ，ＧＵＯ　Ｂｉｎ，ＺＨＡＯ　Ｌｉ－ｈｏｎｇ，ＨＡＮ　Ｙｕ－ｓｈｕａｉ，ＹＵＥ　Ｚｈａｎ－ｐｅｎｇ ，ＺＨＡＮＧ　Ｘｕｅ－ｍｉｎｇ（Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｅｍｂｒｙｏ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　 ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ　 Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００６２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｅｔｓ　ｆａｍｉｌｙ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ　Ｅｔｓ１ａｎｄ　Ｅｔｓ２ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｔｅｓｔｉｓｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｅｔｓ１ａｎｄ　Ｅｔｓ２ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｔｅｓｔｉｓ　ａｎｄ　ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ　ａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ（ＳＳＣｓ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ　ｔｅｓｔｉｓ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　ｓｔａｇｅｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｐｏｓｔｎａｔａｌ　ｄａｙｓ　１，５，１０，１５，２０，２５，３０，３５，４０，５０ａｎｄ　７０；Ｂｕｓｕｌｆａｎｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ａｎｄ　ｍｏｕｓｅ　ｔｅｓｔｉｓ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　０ｔｈ，３ｒｄ，５ｔｈ，８ｔｈ，１０ｔｈ，１８ｔｈｄａｙｓ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　Ｅｔｓ１ａｎｄ　Ｅｔｓ２ｉｎ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｓｅｍｉ－ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＲＴ－ＰＣＲ　ｗｉｔｈβ－ａｃｔｉｎ　ａｓ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｔｓ１ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　 ｈｉｇｈｅｒ６ 第３７卷　第１期２０１１年１月吉　林　大　学　学　报　（医　学　版） Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌ．３７Ｎｏ．１　 Ｊａｎ．２０１１

小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察

姓名系年级组别同组者 科目细胞生物学实验题目小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察学号 小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察 一．实验目的 1．了解快速制备动物染色体标本的方法，掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的制备方法。 2．观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征。 3．掌握小鼠睾丸染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。 二．实验原理 （一）染色体 染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。制备染色体标本无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。 染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。 染色体特征： 1.数目（2n=？） 2.长度（绝对长度、相对长度） 3.着丝粒位置（M/SM/ST/T） 4.随体与次溢痕的数目、大小和位置 5.带型分析 （二）操作方法 小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可以）。利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。 由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理、低渗、固定、制片、染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。 减数分裂是细胞分裂染色体数目减半时发生在性细胞的形成过程中。哺乳动物在性成熟以后，精巢内的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理，随时都可以获得减数分裂过程中各个时期染色体的标本。 用适量的秋水仙素溶液注入动物腹腔内，可以阻止分裂细胞纺锤丝的形成，

小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察

小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察 一、实验目的 1、了解快速制备动物染色体的方法，掌握小鼠睾丸细胞染色体的制备方法； 2、观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征； 3、掌握小鼠睾丸染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。 二、实验原理 染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。制备染色体标本无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体（由于分裂旺盛）。本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。 染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。 用适量的秋水仙素溶液注入动物腹腔内，可以阻止分裂细胞纺锤丝的形成，从而积累大量处于分裂中期的细胞。利用上述原理，通过常规的制片方法，观察小鼠睾丸细胞的染色体。 三、实验用品 解剖盘解剖剪镊子 10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜小鼠秋水仙素 0.3% KCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1） Giemsa染液 0.9%生理盐水

四、实验步骤 （一）标本的制备 1、取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法 杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl）洗去血污。 2、放入装有1ml 0.3%KCl液的小烧杯中剪碎至呈乳白色。 3、用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCl液至4ml。37℃静置30分钟， 进行低渗处理。以800～1000转/分离心8分钟。 4、弃上清液，加入2ml甲醇·冰醋酸固定液（3：1），并用吸管至管底吹气， 轻轻打散细胞，固定8分钟。 再以800～1000转/分离心8分钟。 5、弃上清液，加1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5分钟。 6、取洁净的低温预冷载片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液， 从载片一边向另一边轻轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。 7、将玻片竖直放置于玻片盒中 一周后 （二）标本的染色与观察 1、用 Giemsa染色20 ～ 30分钟，采用倒置染色法：在玻璃板上用废旧玻 片做支架，使标本玻片的标本面朝下放置到支架上，在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液。 2、细水冲洗玻片背面，去多余染液，气干。 3、镜检：低倍镜下寻找分散良好、染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观 察染色体形态并计数。 五、实验结果 显微镜下（共有20个染色体）

睾丸肿瘤诊疗指南

睾丸肿瘤诊疗指南目录 1.背景 1.1.方法 1.2.出版史 1.3.热点问题的潜在争议 2.病理学分类 3.诊断 3.1 临床体检 3.2 睾丸影像学检查 3.3 血清肿瘤诊断标记物 3.4 腹股沟探查和睾丸切除 3.5 保留脏器手术 3.6 睾丸病理检查 3.7 睾丸上皮瘤的诊断与治疗 3.8 肿瘤筛查 4．肿瘤分期 4.1 诊断工具 4.2 血清肿瘤标记物：睾丸切除术后半衰期动力学4.3 腹膜后、纵膈及锁骨上淋巴结和内脏 4.4 分期和预后分类 4.5 预后危险因素 4.6 对生育能力及生育相关问题的影响 5. 睾丸肿瘤诊断和分期指南 6. 治疗：原发生殖细胞肿瘤 6.1 原发精原细胞瘤 6.1.1 监控 6.1.2 辅助化疗 6.1.3 辅助放疗 6.1.4 腹膜后淋巴清扫（RPLND）

6.1.5 治疗相关风险 6.2 原发性精原细胞瘤治疗原则 6.3 原发性非精原细胞瘤的生殖细胞肿瘤（NSGCT） 6.3.1 监控 6.3.2 基本化疗 6.3.3 治疗相关风险 6.3.4 腹膜后淋巴清扫（RPLND） 6.4 持续增高的血清肿瘤标记物 6.5 原发性非精原细胞瘤的生殖细胞肿瘤治疗原则 7 治疗：转移性生殖细胞肿瘤 7.1 低危的转移性疾病（IIA/B期） 7.1.1 IIA/B期精原细胞瘤 7.1.2 IIA/B期非精原细胞瘤 7.2 晚期转移疾病 7.2.1 主要化疗 7.3 二次分期和治疗 7.3.1 二次分期 7.3.2 残留肿瘤切除 7.3.3. 手术质量 7.3.4 二次手术后辅助化疗 7.4 复发性或难治疗疾病的系统性补救治疗 7.4.1 迟发型复发(一线之后2年以上) 7.5 补救手术 7.6 脑转移的治疗 7.7 转移性生殖细胞肿瘤治疗原则 8 . 根治性治疗后肿瘤随访 8.1一般原则 8.2随访：I期非精原细胞瘤 8.2.1随访期间监测 8.2.2 保留神经的RPLND术后随访