登革热实验室检测指南讲解
附件2
登革热实验室检测指南
一、目的
（一）及时发现、诊断病例。
（二）及时了解伊蚊媒介携带登革病毒状况。
（三）病毒分型和溯源。
（四）为登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。
二、检测对象
（一）疑似和临床诊断病例（按照登革热诊断标准WS216-2008）。
（二）伊蚊成蚊和幼虫。
三、样本采集、保存和运输
（一）临床标本采集
用无菌真空干燥管，采集患者非抗凝血，及时分离血清，分装2份，保存于带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内，标记清楚后低温保存，其中1份用于现场实验室检测，1份用于上级预防控制机构复核（附件1，附表1）。
1.登革热临床诊断病例及疑似病例，每次采集血液标本5mL。
2.登革热临床诊断和疑似的住院病例（包括初筛阴性），应采集双份血液标本，入院当天和出院前1天各一份。
3.疫点首发病例，必要时应采集第二份血标本，距第一份血样采集日期间隔在7天以上。
（二）蚊媒标本采集
疫点内采集的伊蚊成蚊及幼虫，分类鉴定后，填写媒介标本采集信息表，按照采集地点分装，每管10-20只。
（三）标本保存、运送
标本应-70℃以下保存，血液标本可-20℃以下保存，但不超过1周。
标本运送时采用低温冷藏运输，避免冻融，样本运输应遵守国家相关生物安全规定。
四、检测内容
（一）实验室检测
登革热疑似病例发生所在地医院和/或县（市）疾控机构采集病例血清，检测登革病毒抗原、核酸或抗体，检测流程参见图1。
（二）复核检测
1.送市或省级疾病预防控制机构的临床标本，抽样30%进行复核检测，疫点首发病例需采用病原学和/或双份标本血清学方法复核检测，暴发疫情复核检测不少于5例，疫情少于5例者应全部检测，病毒核酸阳性标本应分型检测。
2.疫点首发病例，重症病例、输入病例急性期标本应采用PCR方法进行分型检测，阳性者分离病毒，从临床标本或所分离病毒中扩增E蛋白编码基因，完成序列分析。
3.每次暴发疫情应开展病毒全基因组序列分析。
4.实验室检测阴性临床病例以及重症病例，应对恢复期血清进行IgM、IgG 抗体和/或中和抗体检测。
（三）媒介标本检测
1.核酸检测
捕获的伊蚊成蚊或幼虫，进行核酸分型检测，并扩增病毒E蛋白编码基因，完成序列分析。
2.病毒分离
病毒核酸阳性的标本由国家、省或有条件的市级疾病预防控制机构进行病毒分离、基因组序列分析。
图1登革热疑似病例实验室检测流程
五、实验室检测方法
（一）临床标本检测
1、病原学检测
病原学检测主要适用于急性期血液标本。
（1）抗原检测：一般发病后6天内血液标本NS1抗原检出率高。标本中检出NS1抗原可以确诊病毒感染，适用于现场快速检测，可用于早期诊断（附件2，
3）。
（2）核酸检测：一般发病后6天内血液标本病毒核酸检出率高。在病人血清中检出病毒核酸，可确诊而且能够分型，可用于早期诊断，但核酸检测容易因污染而产生假阳性，因此要求严格分区操作（附件4）。
（3）病毒分离：一般发病后5天内血液标本病毒分离率较高。将标本接种于蚊源细胞（C6/36）或哺乳动物细胞（BHK21、Vero）进行分离培养（附件5），出现病变以后，用检测抗原或核酸的方法鉴定病毒。分离到登革病毒可以确诊，但其耗时长，不适于快速诊断。
2.血清学检测
血清学特异性抗体检测主要适用于发病5天以后血液样本，但需注意可能与其他黄病毒感染发生交叉反应。
（1）血清特异性IgM抗体：采用ELISA、免疫层析等方法检测。IgM抗体阳性，提示患者可能新近感染登革病毒，适用于登革热早期诊断，但单份标本不能确诊（附件6）。
（2）血清特异性IgG抗体：采用ELISA、免疫荧光（IFA）、免疫层析等方法检测。患者恢复期血清IgG 抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高可以确诊（附件7，8）。
（3）中和抗体：采用空斑减少中和实验、微量中和实验等方法检测，可用于分型。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高可以确诊。
（二）媒介标本检测
1.标本处理
将分类后的伊蚊成蚊或幼虫，按照采集地点，每10～20只为一份进行研磨处理（附件9）。
2.病毒核酸检测
用RT-PCR的方法进行登革病毒核酸检测（见附件4）。
3.病毒分离
病毒核酸阳性的标本进行病毒分离（见附件5）。
六、实验室质量控制
（一）标本采集、保存和运送
采集的标本要做好标识，并记录标本的基本信息和流行病学信息，按本指南要求采集、保存和运送。
（二）实验室检测
1.根据发病时间，按本指南要求选择不同的检测方法。
2.核酸检测要防止各种污染，按操作规范设立相应对照。
3.应对检测试剂开展质控评价。
（三）各级疾病预防控制机构应定期开展督导检查、实验室技术人员培训与考核，及时发现问题。
七、结果的报告和反馈
疫点首发病例、重症病例和输入病例实验室检测结果24小时内反馈标本送检单位。
省级疾病防控机构应每年1月将上一年登革热实验室病原学（包括核酸检测、病毒分离、序列测定）监测结果，报国家疾病预防控制中心（见附表2），将结果发送至denguetest@https://www.wendangku.net/doc/969132998.html,。
八、生物安全
登革热实验室检测应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关规定要求，做好生物安全工作。
附件：
1.血液标本采集.血清分离.运送.保存标准化操作程序
2.酶联免疫法检测登革病毒NS1抗原标准操作程序
3.免疫层析法检测登革病毒NS1抗原标准操作程序
4.RT-PCR法分型检测登革病毒核酸标准操作程序
5.细胞培养分离登革病毒
6.IgM捕捉ELISA法（MacELISA）检测登革热IgM抗体
7.酶联免疫法检测登革病毒IgG抗体标准操作程序
8.免疫荧光法检测登革病毒IgG抗体标准操作程序
9.蚊媒标本处理标准操作程序
附表：
1.疑似登革热病人检材送检一览表
2.病原学检测结果一览表
附件1
血液标本采集、血清分离、运送、保存标准化操作程序
1 目的
正确采集血液标本、分离血清、运送和保存。
2 范围
适用于有资质的人采集登革热患者或疑似患者血液标本、分离血清、编号、分装、保存和运送。
3 操作步骤
3.1 采血
3.1.1 用70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒钟以上。
3.1.2 然后用一根碘酊或碘伏棉签消毒皮肤（1-2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒），从穿刺点向外以1.5-2cm直径画圈进行消毒。
3.1.3 用70%酒精脱碘。
3.1.4 严格执行三步消毒后(注意对碘过敏的患者，只能用70%酒精消毒，消毒60秒钟)，待穿刺部位酒精挥发干燥用无菌真空管，采集患者非抗凝血5mL。
3.2分离血清
3.2.1轻缓颠倒采血管数次，使血液与促凝剂混匀后静置，待血块完全凝固（放置时间过长会造成溶血，避免留置过夜）。
3.2.23000rpm离心，5分钟，然后用无菌吸管小心取上清转入3支冻存管，应避免吸取血细胞。
3.2.3 标记。用标签纸或持久性标记笔在冻存管的侧壁标记标本编号，顶端标记序列号，标记清楚后将血清放进标本盒，保存于2-8℃冰箱待初筛检测或运送保存。在编码规则为“地区拼音首字母（JH）年份（2位）月（2位）-序列号（3位）”，如景洪市2013年8月份采集的第12份血标本的血清编号为
JH1308-012，冻存管顶端分别标记012-1，012-2和012-3。
3.3 运送保存。
3.3.1 如果24小时能够完成初筛检测，并将标本运送至上级单位，运送前应将标本保存于2-8℃冰箱，运送时采用低温冷藏运输。
3.3.2 如果不能及时运送，运送前应将标本保存于-20℃冰箱，运送时采用干冰或低温冷藏运输。
3.3.3 样本长期保存应记录剩余血清量和盒中位置，保存于-70℃以下冰箱。
3.3.4 所有样本运输和保存应遵守国家相关生物安全规定。
4 注意事项
4.1 使用后的注射器和针头应放置于耐扎的容器中，最后集中高压消毒，在任何情况下均不应试图将针头重新盖帽。
4.2 采血结束后脱掉手套并弃于耐高压的废弃袋中，以备集中高压灭菌，并立即用肥皂和水洗手。
4.3 若发生针刺、皮肤破损或其它损伤，应立即用肥皂和水清洗伤口，不要立即止血。
4.4 当血液污染了身体的任何地方或发生针刺等事故时，均应及时报告上级并按医疗救护规程进行评估和救护。
附件2
酶联免疫法检测登革病毒NS1抗原标准操作程序
1 目的
酶联免疫法检测患者血清中登革病毒NS1抗原。
2 适用范围
适用于患者血清或血浆中登革热病毒NS1抗原的快速检测。
3 实验前准备
3.1 核对被检样品（血清或血浆）患者的姓名、编号及检测项目等。
3.2检测前应将待测样品置于2-8℃冰箱或冰上。
4 检测项目及参数
本方法检测项目为检测血清或血浆中登革热病毒抗原。
5 检测仪器设备和材料
加样器、温箱、洗板机、含波长450nm的酶标仪、登革病毒抗原检测试剂盒（酶联免疫法）（万泰公司）
6 检测的环境条件
生物安全二级实验室（BSL-2）中进行,灭活后样本在生物安全一级实验室（BSL-1）内进行。
7操作步骤
7.1 将试剂盒在冰箱中取出，放置室温平衡30分钟，使用前将试剂轻轻震荡混匀。
7.2 配液：将试剂盒中浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释。
7.3 编号：将样品对应微孔板编号，每板设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔。
7.4 加稀释液：每孔加稀释液50μL，空白孔除外。
7.5 加样：分别在相应孔加入待测样品或阴阳性对照各50μL，空白孔除外。
7.6 温育：用封板膜封板后，置37℃温育60分钟。
7.7 每孔加酶标试剂50μL，空白孔除外，轻轻震荡混匀。
7.8 温育：用封板膜封板后，置37℃温育30分钟。
7.9 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。
7.10显色：每孔加入显色剂A、B液各50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
7.11测定：每孔加终止液50μL，10分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处（建议使用双波长450nm/600-650nm检测），用空白孔调零后测定各孔A值。
8 结果判定
8.1 临界值计算：临界值=0.10+阴性对照孔A值均值（阴性对照孔A值低于0.05者以0.05计算）。
8.2 阴性对照的正常值范围：阴性对照孔A≤0.1（若1孔A大于0.1应舍弃，若两孔或两孔以上阴性对照大于0.1，应重复实验）。
8.3 阳性对照正常值范围：A≥0.8.
8.4阳性判定：样品A值≥临界值者为登革病毒抗原阳性。
8.5阴性判定：样品A值＜临界值者为登革病毒抗原阴性。
9 意义
结合临床信息，阳性结果可以诊断为登革病毒感染，但阴性结果并不排除登革病毒感染的可能。
附件3
胶体金免疫层析法检测登革病毒NS1抗原标准操作程序
1 目的
检测患者血液中登革病毒抗原。
2 适用范围
检测患者血清、血浆、全血中登革热病毒抗原水平，主要用于登革病毒感染的辅助诊断。
3 实验前准备
3.1 核对被检样品（血清或血浆）患者的姓名、编号及检测项目等。
3.2检测前应将待测样品置于2-8℃冰箱或冰上。
4 检测项目及参数
本方法检测项目为检测血清或血浆中登革热病毒抗原。
5 检测仪器设备和材料
加样器、登革热病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）
6 检测的环境条件
生物安全二级实验室（BSL-2）中进行,灭活后样本在生物安全一级实验室（BSL-1）内进行。
7 检测步骤
7.1 将试剂盒和待检样本自冰箱中取出平衡至室温。
7.2 当准备好测试时，打开密封的铝箔袋，取出检测卡，平放于水平桌面上。
7.3 在检测卡上标记病人的样本号。
7.4 加样：用滴管从样本中取1滴（约30-45μL）血清或血浆标本，加于检测卡/条上的加样区内，另外加1滴（约30-45μL）稀释液，保证操作过程中没有气泡产生。（如果加样后30秒钟，没有看到样本移动，可能是由于样本太黏稠，可在样本加样孔内再加1滴样本稀释液。
7.5 加入样本后20-25分钟内判读结果，并将结果拍照。
8 结果解释
8.1 阴性结果：仅质控线C出现肉眼可见条带。
8.2 阳性结果：质控线C和检测线T均出现肉眼可见条带。
8.3 无效结果：未肉眼可见的质控线C
8.4 质量控制：如遇下列情况，请按上述操作步骤使用实验室备用的阳性和阴性样本对该批产品进行质量控制：
8.4.1 新检验员使用本产品。
8.4.2 使用新批号产品。
8.4.3 试剂卡储存温度在2-30℃以外。
8.4.4 测试区温度在2-30℃以外。
9 意义
阳性结果说明检测到登革病毒抗原，结合临床可以诊断为登革病毒感染；阴性结果说明没有检测到登革病毒抗原，但不能排除登革病毒感染。
附件4
RT-PCR法分型检测登革病毒核酸标准操作程序
1 目的
登革热患者和/或媒介伊蚊标本中病毒核酸的提取及PCR分型检测。
2 适用范围
适用于患者血标本及其传播媒介标本的检测。
3 检测的环境条件
在标本中提取登革病毒RNA的实验要求在BSL-2实验室操作，PCR分型检测在专门PCR室或区域操作。
4实验步骤
4.1实验准备
4.1.1在标本中提取登革病毒RNA要求在BSL-2实验室，PCR分型在综合实验室独立区域或专门PCR室操作。
4.1.2进入实验场所之前，要事先准备好所需试剂，样品。预约实验场所，并看前一位实验者是否已经清场。
4.2 RNA的提取
4.2.1 使用QIAampViral RNA Mini 试剂盒提取血清标本中病毒RNA
4.2.1.1 吸取560μl包含载体RNA的AVL 缓冲液至1.5ml的离心管中。
4.2.1.2 向上述的液体中加入140μl样品，脉冲涡旋式混匀15秒，室温孵育10分钟，简单离心使离心管顶端液体落到底部。
4.2.1.3 在样品中加入560μl 96－100％的乙醇，混匀15秒，再简单离心。
4.2.1.4 小心将630μl液体加入未浸湿的QIAamp小柱中，盖好盖，离心
8000rpm/min 1min,弃去收集管，将柱子置于一新的2ml收集管上。
4.2.1.5 打开QIAamp小柱的盖子，重复步骤6，直至样品全部离心。
4.2.1.6 打开盖子，向柱中加入500μl AW1 缓冲液，盖好盖，离心8000rpm/min 1min，弃去收集管，将柱子置于一新的2ml收集管上。
4.2.1.7 打开盖子，加入500μlAW2 缓冲液，盖好盖，离心14，000rpm/min 3min。
4.2.1.将柱子置于一新的2ml收集管上，空离1min。
h.将柱子置于一新的1.5ml离心管上，加入50μl A VE洗脱缓冲液，室温孵育1min,离心8000rpm/min 1min。
4.2.2 RNeasy Mini Kit提取媒介组织标本或血液标本病毒RNA
4.2.2.1 从Kit中取出RLT液，根据标本数量分装适量RLT液按照1：100体积比分别加入β-巯基乙醇，分装至相应的预先标记好的微量离心管中，每管600μL。
4.2.2.2 将150 μl组织研磨混悬液分别加入相应的RLT液管中，充分混匀。
4.2.2.3 混匀后依次加入750μl 70％的乙醇，充分混匀。
4.2.2.4 从Kit中取出带收集管的滤柱，打开包装将其做好标记。取步骤2中的混合液750μl加入滤柱中，12000rpm，离心15s，弃收集管中的离心液。
4.2.2.5 滤柱仍放回收集管上，将步骤2剩余的混合液全部转入滤柱中，12000rpm，离心15s，弃离心液；
4.2.2.6 于滤柱中加入700μl Wash Buffer RW1液，12000rpm，离心15s。
4.2.2.7 从QIAGEN RNeasy Mini Kit中取一支干净的2mL收集管，将离心后的滤柱移到新的收集管上，加入500μl Wash Buffer RPE液，12000rpm，离心15s。
4.2.2.8 弃收集管中的离心液，再于滤柱中加入500μl Wash Buffer RPE液，13000～14000rpm，离心2min。
4.2.2.9 将滤柱移到一个无RNA酶的干净的1.5mL eppendorf管上，向滤柱中加入30～50μl的RNase-free Water,室温静置1～3min。
4.2.2.10 12000rpm，离心1min，离心液即为病毒RNA，立即检测或-70℃以下保存。
4.3 常规半套式RT-PCR方法检测登革病毒核酸
4.3.1 引物：引物序列见下表
引物序列片段大小
D1 5’-TCAATATGCTGAAACGCGCGAGAAAC511
CG-3’
D2 5’-TTGCACCAACAGTCAATGTCTTCAGGT
TC-3’
511
TS1 5’-CGTCTCAGTGATCCGGGGG-3’ 482 (D1+TS1)
TS2 5’-CGCCACAAGGGCCATGAACAG-3’ 119 (D1+TS2)
TS3 5’-TAACATCATCATGAGACAGAGC-3’ 290 (D1+TS3)
TS4 5’-CTCTGTTGTCTTAAACAAGAGA-3’ 392 (D1+TS4)
4.3.2 PCR扩增
根据实验室内所使用病毒核酸PCR扩增试剂盒特点，正向引物D1和反向引物D2配置第一轮PCR体系，进行第一轮PCR扩增。推荐反应条件为94℃预变性2min，然后 94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸1分钟，反应40循环，最后72℃延伸10分钟。
第二轮分型PCR扩增体系配置采用正向引物D1与反向引物TS1、TS2、TS3和TS4。推荐反应条件为94℃预变性2min，然后 94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸1分钟，反应30循环，最后72℃延伸10分钟。
4.3.3 1.5%浓度琼脂糖电泳分析，确定病毒型别。
4.3.4 结果判读
4.3.4.1 阳性：
1型：电泳显示略小于500 bp的DNA片段。
2型：电泳显示略大于100bp的DNA片段。
3型：电泳显示略小于300bp的DNA片段。
4型：电泳显示略小于400bp的DNA片段。
4.3.4.2 阴性：无特异性核酸片段扩增。
4.3.5 意义
阳性结果可以确诊登革病毒感染，可用于登革热早期诊断。
4.4实时定量RT-PCR法分型检测登革病毒核酸
4.4.1引物与探针
引物/探针序列荧光标记
DEN-1 8973F CAAAAGGAAGTCGTGCAATA
DEN-1 9084C CTGAGTGAATTCTCTCTACTG AACC
DEN-1 8998probe CATGTGGTTGGGAGCACGC FAM/BHQ-1
DEN-2 1443F CAGGTTATGGCACTGTCACGA T
DEN-2 1518C CCATCTGCAGCAACACCATCT C
DEN-2 1469probe CTCTCCGAGAACAGGCCTCGA
CTTCAA
HEX/BHQ-1
DEN-3 740F GGACTGGACACACGCACTCA
DEN-3 813C CATGTCTCTACCTTCTCGACTT GTCT
DEN-3 762probe ACCTGGATGTCGGCTGAAGG
AGCTTG
TesasRed/BHQ-2
DEN-4 904F TTGTCCTAATGATGCTGGTCG DEN-4 992C TCCACCTGAGACTCCTTCCA
DEN-4 960probe TTCCTACTCCTACGCATCGCA
TTCCG
Cy5/BHQ-3
4.4.2 实时荧光定量RT-PCR扩增
实时荧光定量RT-PCR扩增反应配置体系，参考如下：
RNA模板5μl，酶0.5μl，缓冲液12.5μl，引物各0.5μl(共4对,8条)，探针各0.25μl，加水至总体积25μl。
推荐反应条件为50℃30min，95℃2min，95℃15s、60℃30s反应40个循环。
4.4.3 结果判断
以荧光PCR反应的前3～15个循环的荧光信号作为本底信号，以本底信号标准差的10倍作为荧光阈值，标本扩增产生的荧光信号达到荧光阈值时所对应的循环数为循环阈值（Ct值），以Ct<35荧光信号数据线性化处理后对应循环数生成的曲线图成“S”形的标本，可判断为相应的登革病毒核酸检测阳性。
4.4.4 意义
是一种灵敏、特异、低污染的登革病毒RNA检测方法，可以定性或定量检测登革热患者血清或蚊媒标本中的登革病毒。
附件5
细胞培养分离登革病毒
1 目的
分离登革病毒。
2 适用范围
2.1无菌采集发病后5日内的登革患者血标本。
2.2经研磨处理的媒介蚊标本（参见附件11）。
4 实验前准备
4.1 核对被检样品：患者标本应核对患者的姓名、性别、年龄、编号及检测项目等。蚊媒标本应核对标本种类、编号、性状等。
4.2生长状态良好的单层登革病毒敏感细胞C6/36，BHK21，VERO等
4.3待测样品在检测前应放置于2-8℃冰箱或置于冰上。
5、操作步骤
5.1取10μL患者血清或蚊悬液20μL用Hank’s液稀按1：10稀释至0.1mL 或0.2mL备用。
5.2将在24孔细胞培养板上培养好的单层细胞上清弃掉，用Hank’s液洗涤2遍。
5.3将稀释好的标本接种细胞，接种C6/36细胞在28℃吸附1小时，BHK21细胞在37℃吸附1小时，补加维持液至1mL，C6/36细胞在28℃培养，BHK21细胞在37℃培养。
5.4第二天开始观察细胞病变情况。如果没有细胞病变，则盲传3代（每次取细胞悬液0.1ml）接种细胞传代。
5.4免疫荧光法鉴定登革病毒
5.4.1细胞抗原片的制备：
出现“++”细胞病变的细胞倒去维持液（若盲传无细胞病变出现，仍然按此方法制备），用pH7.2 PBS洗涤2次，加PBS用滴管把细胞从管壁上吹下，吹散，1000转/分钟离心5分钟，弃去PBS，细胞沉淀用0.2mlPBS吹散，滴加在抗原片上，吹干，冷丙酮固定10分钟，PBS冲洗2次，蒸馏水漂洗1次，吹
干备用；
5.4.2按顺序滴加荧光标记单克隆抗体2孔，对照2孔（加PBS），置湿盒内37℃水浴30分钟；
5.4.3取出，用PBS冲洗3次，蒸馏水漂洗1次，吹干；
5.4.4荧光显微镜观察结果。
5.5其他检测病毒抗原或核酸鉴定登革病毒参见附件2、4、5。
5.6结果判断：
免疫检测有特异性黄绿色颗粒状荧光，检测出病毒NS1抗原或病毒核酸可确定病毒分离成功。
5.7意义：从病人血清或蚊媒中分离出登革病毒，可确诊登革感染。
6废弃物处理
所有实验用品都应严格按照有关传染病处理方法高压处理。
附件6
IgM捕捉ELISA法（MacELISA）检测登革热IgM抗体
1 目的
检测出登革病毒特异性IgM抗体。
2 适用范围
适用于人血清或血浆中登革病毒特异性IgM抗体的快速检测。
3 样品接收和准备
3.1 核对被检样品（血清或血浆）患者的姓名、编号及检测项目等。
3.2 待测样品在检测前应放置于2-8℃冰箱或置于冰上。
4 检测项目及参数
本方法检测项目为检测血清或血浆中病毒特异性IgM抗体
5 检测仪器设备和材料
加样器、温箱、洗板机、含波长450nm的酶标仪、登革病毒IgM抗体检测试剂盒，或实验室自备材料：
5.1 抗原：
阳性抗原：采用C6/36细胞感染登革病毒培养物为阳性抗原。
阴性抗原：未接种病毒的正常C6/36细胞为阴性抗原对照。
5.2抗人IgM（μ链）单克隆抗体或多克隆抗体；
5.3登革病毒IgM阳性、阴性对照血清；
5.4辣根过氧化物酶标记登革病毒单克隆抗体；
5.5缓冲液：
洗涤液：pH7.4 PBS－T（0.05％吐温－20）；
稀释液：pH7.4 PBS（5％牛血清）；
封闭液：pH9.6 碳酸缓冲液（1％牛血清白蛋白）；
5.6显色液：A/B液
5.7终止液：4N H2SO4
6 检测的环境条件
生物安全二级实验室（BSL-2）中进行,灭活后样本在生物安全一级实验室（BSL-1）内进行。
7 检测原理
本方法采用抗人μ链捕获人血清IgM抗体，加辣根过氧化物酶标记的病毒抗原物，用以检测出血热特异性IgM抗体。具有较高的敏感性、特异性和重复性。适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。
8 检测步骤
8.1 用稀释液按效价稀释抗人μ链单克隆抗体，100μl/孔，加盖，4℃过夜；
8.2 弃去抗人μ链，用洗涤液重复洗3次，甩干，加封闭液，100μl/孔，置37℃水浴孵育2小时；
8.3 弃封闭液，用洗涤液重复洗3次，甩干。
8.4 将待检血清用稀释液从1：10开始作2或4倍连续稀释，加入酶标板孔中，100μl/孔，同时加入已1：10稀释的阳性血清、阴性血清对照各4孔，100μl/孔，置37℃水浴孵育2小时；
8.5 弃去血清，用洗涤液重复洗3次，甩干，分别加4个型DV抗原及阴性抗原对照，100μl/孔，4℃过夜；
8.6 弃抗原，用洗涤液重复洗3次，甩干，加用稀释液稀释至工作浓度的相应的登革热酶标单克隆抗体，正常抗原加4个型混合的酶标单克隆抗体，100μ
l/孔，37℃水浴2小时；
8.7 弃去标记物，用洗涤液重复洗3次，甩干，于各反应孔内加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分钟；
8.8 加终止液于每反应孔，一滴/孔。
9 结果判断
（1）目测方法：
阳性对照孔呈明显蓝色，阴性对照孔呈无色，对照成立；若待检血清孔呈明显淡蓝色或深蓝色（TMB），则标本为登革热IgM抗体阳性，反之阴性。
（2）酶联免疫检测仪检测：
登革热诊疗指南(第二版)
登革热诊疗指南 （2014年第2版） 2014-10-11 登革热是由登革病毒引起的急性传染病，主要通过埃及伊蚊或白纹伊蚊叮咬传播。 一、病原学 登革病毒属黄病毒科黄病毒属。登革病毒颗粒呈球形，直径45～55nm。登革病毒共有4个血清型（DENV-1、DENV-2 DENV-3和DENV-4），4种血清型均可感染人，其中2型重症率及病死率均高于其他型。 登革病毒对热敏感，56℃30分钟可灭活，但在4℃条件下其感染性可保持数周之久。超声波、紫外线、0.05%甲醛溶液、乳酸、高锰酸钾、龙胆紫等均可灭活病毒。病毒在pH 7～9时最为稳定，在-70℃或冷冻干燥状态下可长期存活。 二、流行病学 （一）传染源。登革热患者、隐性感染者和登革病毒感染的非人灵长类动物以及带毒的媒介伊蚊。 （二）传播途径。主要通过伊蚊叮咬传播。传播媒介主要为埃及伊蚊和白纹伊蚊。 （三）易感人群。人群普遍易感，但感染后仅有部分人发病。登革病毒感染后，人体可对同型病毒产生持久免疫力，但对异型病毒感染不能形成有效保护，若再次感染异型或多
个不同血清型病毒，机体可能发生免疫反应，从而导致严重的临床表现。 （四）流行特征。登革热流行于全球热带及亚热带地区，尤其是在东南亚、太平洋岛屿和加勒比海等100多个国家和地区。我国各省均有输入病例报告，广东、云南、福建、浙江、海南等南方省份可发生本地登革热流行，主要发生在夏秋季，居家待业和离退休人员较多。 三、临床表现 登革热的潜伏期一般为3～15天，多数5～8天。 登革病毒感染可表现为无症状隐性感染、非重症感染及重症感染等。登革热是一种全身性疾病，临床表现复杂多样。典型的登革热病程分为三期，即急性发热期、极期和恢复期。根据病情严重程度，可将登革热分为普通登革热和重症登革热两种临床类型。 （一）急性发热期。患者通常急性起病，首发症状为发热，可伴畏寒，24小时内体温可达40℃。部分病例发热3-5天后体温降至正常，1-3天后再度上升，称为双峰热型。发热时可伴头痛，全身肌肉、骨骼和关节疼痛，明显乏力，并可出现恶心，呕吐，腹痛，腹泻等胃肠道症状。 急性发热期一般持续2～7天。于病程第3～6天在颜面四肢出现充血性皮疹或点状出血疹。典型皮疹为见于四肢的针尖样出血点及“皮岛”样表现等。可出现不同程度的出血
登革热诊疗指南
登革热诊疗指南（2014年版） 登革热是由登革病毒引起的急性传染病，主要通过埃及伊蚊或白纹伊蚊叮咬传播。登革热广泛流行于全球热带及亚热带地区。为指导临床医生诊断治疗登革热，参考世界卫生组织2009年《登革热诊断、治疗、预防与控制指南》，结合我国登革热疫情及临床特点，特制定本指南。 一、病原学 登革病毒属黄病毒科黄病毒属。登革病毒颗粒呈球形，直径45～55nm。登革病毒共有4个血清型（DENV-1、DENV-2 DENV-3和DENV-4），4种血清型均可感染人。 登革病毒对热敏感，56℃ 30分钟可灭活，但在4℃条件下其感染性可保持数周之久。超声波、紫外线、0.05%甲醛溶液、乳酸、高锰酸钾、龙胆紫等均可灭活病毒。病毒在pH 7～9时最为稳定，在-70℃或冷冻干燥状态下可长期存活。 二、流行病学 （一）传染源。 登革热患者、隐性感染者和登革病毒感染的非人灵长类动物以及带毒的媒介伊蚊。 （二）传播途径。 主要通过伊蚊叮咬传播。传播媒介主要为埃及伊蚊和白纹伊蚊。 （三）易感人群。 人群普遍易感，但感染后仅有部分人发病。登革病毒感染后，人体可对同型病毒产生持久免疫力，但对异型病毒感染不能形成有效保护，若再次感染异型或多个不同血清型病毒，机体可能发生免疫反应，从而导致严重的临床表现。 （四）流行特征。 登革热流行于全球热带及亚热带地区，尤其是在东南亚、太平洋(601099,股吧)岛屿和加勒比海等100多个国家和地区。我国各省均有输入病例报告，广东、云南、福建、浙江、海南等南方省份可引发本地登革热流行，主要发生在夏秋季，居家待业和离退休人员较多。 三、临床表现 登革热的潜伏期一般为3～15天，多数5～8天。 登革病毒感染可表现为无症状隐性感染、非重症感染及重症感染等。登革热是一种全身性疾病，临床表现复杂多样。典型的登革热病程分为三期，即急性发热期、极期和恢复期。根据病情严重程度，可将登革热感染分为普通登革热和重症登革热两种临床类型。
登革热诊疗指南培训试题
登革热诊疗指南培训试题 1、登革热潜伏期一般为天？( B ) A、4-13 B、3-15 C、4-15 D、3-14 2、2014年版登革热诊疗指南，根据病情严重程度，将登革热感染分为哪两种临床类型？( A ) A、普通登革热和重症登革热 B、普通登革热和登革出血热 C、典型登革热和登革出血热 D、登革出血热和重症登革热 3、典型的登革热病程分为哪三期？( B ) A、急性发热期、休克期和恢复期 B、急性发热期、极期和恢复期 C、急性发热期、出血期和恢复期 D、急性发热期、重症期和恢复期 4、重症登革热实验室指征？( D ) A、血小板快速下降 B、血小板快速下降和白细胞升高 C、HCT升高 D、血小板快速下降和HCT升高 5、登革热急性发热期常见热型？( A) A、双峰热 B、稽留热 C、驰张热 D、波状热 6登革热的临床表现正确的是（A ） A.发热，全身疼痛和毒血症状，皮疹、出血和其他症状和体征 B.潜伏期为1—3天，发热同时出皮疹 C.没淋巴结肿大，可有肝脾肿大 D.登革热没重症病例 7登革热治疗措施中错误的是（C ） A.急性期卧床休息，流质或半流质饮食 B.口服补液为主，监测生命体征 C.高温应以药物为主 D.对中毒症状严重的患者，可短期使用小剂量肾上腺皮质激素 8登革热的诊断依据有（D ） A.流行病学资料：疫区蚊子叮咬史 B.临床表现有发热、疼痛、皮疹、出血等 C.实验室检查有包细胞减少，血小板减少、登革热病毒分离阳性、登革热抗 体阳性 D.以上都是 9登革热的临床分型有（D ） A.典型登革热
B.轻型跟重型登革热 C.登革出血热登革休克综合征 D.以上均是 10症登革热的预警指征中高危人群有( ABCDE ) A、二次感染患者 B、伴有糖尿病、肝硬化、消化性溃疡、哮喘等基础疾病者 C、老人或婴幼儿 D、肥胖或严重营养不良者 E、孕妇 11症登革热的诊断指标中包括( ABCDE ) A、退热后病情恶化 B、腹部剧痛 C、持续呕吐 D、嗜睡，烦躁 E、少尿 12据流行病学史、临床表现及实验室检查结果，诊断为登革热后，出现下列哪一种情况即可诊断为重症登革热( ABCDE ) A、皮下血肿 B、黑便 C、急性心功能衰竭 D、休克 E、肝脏损伤 13革热的治疗措施(ABCD ) A、卧床休息，清淡饮食 B、退热：以物理降温为主 C、补液：口服补液为主 D、可给与安定、安痛定等对症处理。 E、伴有胃出血时可给予插胃管引流 14预防登革热应采取下列哪些措施(ABCD ) A、睡觉的时候要挂蚊帐、点蚊香; B、出门郊游要穿长袖衣裤 C、涂防蚊水 D、填平凹陷的地面;注意盖好储水容器;消灭一切蚊子幼虫的孳生地。
疑似登革热病例处置流程图
For personal use only in study and research; not for commercial use 三水区人民医院发热病人（疑似登革热）处置流程 病人就诊 分诊 发热病人（疑似登革热）其他病人 发热门诊/感染内科门诊（先验血常规）普通诊室 疑似病例，医生填写《疑似登革热病例送检表》 发病3天后进行“登革热抗体检测” 临床诊断病例 轻症可居家隔离治疗 住院病例收入感染内科隔离病房非登革热病例 疑似/确诊病例（报疫情） 重症病例（报医务科、院感科）治愈出院（院内区内专家会诊，填表上报区卫生和人口计划生育局） 请市专家会诊转诊 三水区人民医院 2015年5月5日
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登革热诊疗指南
登革热诊疗指南 登革热(Dengue Fever，简称DF)是由登革病毒引起的急性传染病；登革病毒属黄毒科(F1aviviridae)黄病毒属(F1avivirus)。DEV属虫媒病毒B组，血清学上分4个血清型，主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊（俗称花斑蚊）传播。登革热广泛流行于全球热带和亚热带地区，是分布最广，发病最多，危害较大的一种虫媒病毒性疾病。 临床上主要分登革热和登革出血热(Dengue Haemorrhagic Fever，简称DHF) 两种不同临床类型。登革热主要以高热、头痛、疲乏、肌肉和关节痛为主要表现，可伴有皮疹、肝功能异常，白细胞和血小板减少，此类型传播迅速，可引起较大规模的流行，但病死率很低。登革出血热是以高热、出血、血浆外渗，休克和高病死率为特征，是较为严重的一种临床类型。伴有休克的称为登革休克综合征（DSS)。近几年来，在东南亚和西太平洋热带地区的大多数国家以及美洲的一些国家，DHF流行较为严重，已成为该地区儿童住院和死亡的主要原因。 病原学 登革病毒属B组虫媒病毒，属黄病毒科，共有四种血清型(DEN-1, DEN-2, DEN-3和DEN-4)和多种生物型。成熟的病毒颗粒核心直径约30 nm，由单股正链RNA与壳蛋白C构成，外包一层厚约10nm的脂质包膜，包含膜蛋白E和膜蛋白M。RNA有一个开放性阅读框架，约含11000个核苷酸序列，编码3种结构蛋白和7和非结构蛋白。结构蛋白包括核壳蛋白C，包膜蛋白E和M。包膜蛋白E诱导生成血凝抑制抗体，中和抗体和保护性抗体。抗Ｅ的抗体具有抗体依赖感染增强作用。最外层为两种糖蛋白组成的包膜，包膜含有型和群特异性抗原，用中和试验可鉴定其型别。登革病毒结构与其它黄病毒相近，4个血清型可与其他B组虫媒病毒如乙型脑炎病毒可交叉免疫反应。 登革病毒不耐热，60度30min，100度2min均可使之灭活，但可耐用低温及干燥，对寒冷的低抗力强，在人血清中贮存于普通冰箱可保持传染性数周，-70℃可存活8年之久；但不耐热，50℃、30min或100℃、2min皆能使之灭活；不耐酸、不耐醚。用乙醚、紫外线或0.05%福尔马林可以灭活。 流行病学 （一）传染源患者和隐性感染者为主要传染源，未发现健康带病毒者。患者在发病前6～8小时至病程第6天，具有明显的病毒血症，可使叮咬伊蚊受感染。流行期间，轻型患者数量为典型患者的10倍，隐性感染者为人群的1/3，可能是重要传染源，丛林山区的猴子和城市中某些家畜虽然有感染登革病毒的血清学证据，但作为传染源，尚未能确定。 （二）传播媒介已知有12种伊蚊可传播本病，但最主要的是埃及伊蚊和白纹伊蚊。在不同地区中不同蚊种所起的作用不一样，如在太平洋岛国及我国的广东、广西，白纹伊蚊是主要传播媒介，而雷州半岛、广西沿海、海南省和东南亚地区以埃及伊蚊传播为主。伊蚊只要与有传染性的液体接触一次，即可获得感染，病毒在蚊体内复制8～14天后即具有传染性，传染期长者可达174日。具有传染性的伊蚊叮咬人体时，即可将病毒传播给人。因在捕获伊蚊的卵巢中检出登革病毒颗粒，推测伊蚊可能是病毒的储存宿主。 （三）易感人群在新疫区各年龄均普遍易感，但青壮年的临床表现较明显。1980年在广东流行中，最小年龄3个月，最大86岁，但以青壮年发病率最高。在地方性流行区，20岁以上的居民，100%在血清中能检出抗登革病毒的中和抗体，因而发病者多为儿童。 目前确认有四种型别的登革病毒，由于对不同型别毒株感染无交叉免疫力，因此可以发生二次感染。感染一种病毒型产生的免疫对同型病毒免疫力可持续1～4年，而对异型病毒的免疫则短暂且不可靠。
登革热诊疗指南(2014年第2版)
国家卫生计生委办公厅关于印发 登革热诊疗指南（2014年第2版）的通知 国卫发明电…2014?66号 各省、自治区、直辖市卫生计生委，新疆生产建设兵团卫生局： 为进一步加强登革热患者医疗救治，保障人民群众 健康和生命安全，结合近期登革热诊疗情况，我委组织 制定了《登革热诊疗指南（2014年第2版）》（可从国 家卫生计生委网站下载）。现印发给你们，供医疗机构 在临床工作中参考使用。 国家卫生计生委办公厅 2014年10月11日 登革热诊疗指南 （2014年第2版） 登革热是由登革病毒引起的急性传染病，主要通过 埃及伊蚊或白纹伊蚊叮咬传播。 一、病原学 登革病毒属黄病毒科黄病毒属。登革病毒颗粒呈球形，直径45～55nm。登革病毒共有4个血清型（DENV-1、
DENV-2 DENV-3和DENV-4），4种血清型均可感染人，其中2型重症率及病死率均高于其他型。 登革病毒对热敏感，56℃ 30分钟可灭活，但在4℃条件下其感染性可保持数周之久。超声波、紫外线、0.05%甲醛溶液、乳酸、高锰酸钾、龙胆紫等均可灭活病毒。病毒在pH 7～9时最为稳定，在-70℃或冷冻干燥状态下可长期存活。 二、流行病学 （一）传染源。登革热患者、隐性感染者和登革病毒感染的非人灵长类动物以及带毒的媒介伊蚊。 （二）传播途径。主要通过伊蚊叮咬传播。传播媒介主要为埃及伊蚊和白纹伊蚊。 （三）易感人群。人群普遍易感，但感染后仅有部分人发病。登革病毒感染后，人体可对同型病毒产生持久免疫力，但对异型病毒感染不能形成有效保护，若再次感染异型或多个不同血清型病毒，机体可能发生免疫反应，从而导致严重的临床表现。 （四）流行特征。登革热流行于全球热带及亚热带地区，尤其是在东南亚、太平洋岛屿和加勒比海等100多个国家和地区。我国各省均有输入病例报告，广东、云南、福建、浙江、海南等南方省份可发生本地登革热流行，主要发生在夏秋季，居家待业和离退休人员较多。 三、临床表现
登革热实验室检测指南
附件2 登革热实验室检测指南 一、目的 （一）及时发现、诊断病例。 （二）及时了解伊蚊媒介携带登革病毒状况。 （三）病毒分型和溯源。 （四）为登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。 二、检测对象 （一）疑似和临床诊断病例（按照登革热诊断标准WS216-2008）。 （二）伊蚊成蚊和幼虫。 三、样本采集、保存和运输 （一）临床标本采集 用无菌真空干燥管，采集患者非抗凝血，及时分离血清，分装2份，保存于带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内，标记清楚后低温保存，其中1份用于现场实验室检测，1份用于上级预防控制机构复核（附件1，附表1）。 1.登革热临床诊断病例及疑似病例，每次采集血液标本5mL。 2.登革热临床诊断和疑似的住院病例（包括初筛阴性），应采集双份血液标本，入院当天和出院前1天各一份。 3.疫点首发病例，必要时应采集第二份血标本，距第一份血样采集日期间隔在7天以上。 （二）蚊媒标本采集 疫点内采集的伊蚊成蚊及幼虫，分类鉴定后，填写媒介标本采集信息表，按照采集地点分装，每管10-20只。 （三）标本保存、运送 标本应-70℃以下保存，血液标本可-20℃以下保存，但不超过1周。 标本运送时采用低温冷藏运输，避免冻融，样本运输应遵守国家相关生物安全规定。 四、检测内容 （一）实验室检测
登革热疑似病例发生所在地医院和/或县（市）疾控机构采集病例血清，检测登革病毒抗原、核酸或抗体，检测流程参见图1。 （二）复核检测 1.送市或省级疾病预防控制机构的临床标本，抽样30%进行复核检测，疫点首发病例需采用病原学和/或双份标本血清学方法复核检测，暴发疫情复核检测不少于5例，疫情少于5例者应全部检测，病毒核酸阳性标本应分型检测。 2.疫点首发病例，重症病例、输入病例急性期标本应采用PCR方法进行分型检测，阳性者分离病毒，从临床标本或所分离病毒中扩增E蛋白编码基因，完成序列分析。 3.每次暴发疫情应开展病毒全基因组序列分析。 4.实验室检测阴性临床病例以及重症病例，应对恢复期血清进行IgM、IgG 抗体和/或中和抗体检测。 （三）媒介标本检测 1.核酸检测 捕获的伊蚊成蚊或幼虫，进行核酸分型检测，并扩增病毒E蛋白编码基因，完成序列分析。 2.病毒分离 病毒核酸阳性的标本由国家、省或有条件的市级疾病预防控制机构进行病毒分离、基因组序列分析。 图1登革热疑似病例实验室检测流程 五、实验室检测方法 （一）临床标本检测 1、病原学检测 病原学检测主要适用于急性期血液标本。 （1）抗原检测：一般发病后6天内血液标本NS1抗原检出率高。标本中检出NS1抗原可以确诊病毒感染，适用于现场快速检测，可用于早期诊断（附件2，3）。 （2）核酸检测：一般发病后6天内血液标本病毒核酸检出率高。在病人血清中检出病毒核酸，可确诊而且能够分型，可用于早期诊断，但核酸检测容易因污染而产生假阳性，因此要求严格分区操作（附件4）。
中国登革热临床诊断和治疗指南(全文)
中国登革热临床诊断和治疗指南（全文） 1 前言 登革热是由登革病毒(Dengue virus，DENV)引起的急性传染病，是全球传播最广泛的蚊媒传染病之一。近年来，我国登革热疫情逐渐由东南沿海地区向全国各地蔓延。我国登革热的临床及实验室特征与国外地方性流行地区报道有较大差异，绝大多数患者为成人，重症病例多为伴有基础疾病的老年人，临床医师对登革热早期诊断及重症救治经验不足。为规范登革热的诊断、治疗和预防，中华医学会感染病学分会、中华医学会热带病与寄生虫学分会和中华中医药学会急诊分会根据国内外最新的循证医学证据和2009年世界卫生组织(WHO)《登革热诊疗与防控指南》[1]、2014年国家卫生和计划生育委员会颁布的《登革热诊疗指南》[2]及中华人民共和国卫生行业标准《登革热诊断(WS216-2018)》[3]，于2018年组织国内有关专家制订了《中国登革热临床诊断和治疗指南》(以下简称本指南)。 本指南旨在帮助临床医师在登革热诊断和治疗中做出合理决策，但不是强制性标准，也不可能涵盖或解决登革热诊治及管理中的所有问题。因此，临床医师在面对具体患者时，应根据自己的专业知识、临床经验和可利用的医疗资源制订合理的诊疗方案。 本指南中的证据等级分为A、B和C 3个级别，推荐等级分为1和2两个等级[根据推荐意见分级评估和制定及评价(GRADE)分级修订]，见表1。
表1 推荐意见的证据级别和推荐等级 2 术语 DENV：是登革热的病原体，可分为4个血清型(DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4)。 非结构蛋白1 (Non-structural protein 1, NS1蛋白): DENV基因组编码的NS1蛋白，在病毒感染的早期大量分泌于患者血清中，可作为早期诊断的特异性指标。 抗体依赖感染增强作用(Antibody-dependent enhancement，ADE)：二次感染异型DENV可出现ADE，是重症发病机制之一。 输入性病例(Imported case)和本地感染病例(Indigenous case)：输入病例包括境外输入病例和境内输入病例两类。境外输入病例指发病前14 d内到过登革热流行的国家或地区的病例。境内输入病例是指发病前14 d 内离开本县区(现住址)、到过本县区外的登革热流行地区的病例。本地病例指发病前14 d内未离开本县区(现住址)的登革热病例[4]。
登革热的临床表现有哪些
登革热的临床表现有哪些？ 全球医院网2011-03-23我要评论 潜伏期5～8d。按世界卫生组织标准分为典型登革热、登革出血热和登革休克综合征3型。 我国近年来所见的登革热可分为典型登革热、轻型登革热和重型登革热。 一、典型登革热 （一）典型登革热 1．发热 所有患者均发热。起病急，先寒战，随之体温迅速升高，24小时内可达40℃。一般持续5～7d，然后骤降至正常，热型多不规则，部分病例于第3～5d体温降至正常，1日后又再升高，称为双峰热或鞍型热。儿童病例起病较缓、热度也较低。 2．全身毒血症状 发热时伴全身症状，如头痛、腰痛，尤其骨、并节疼痛剧烈，似骨折样或碎骨样，严重者影响活动，但外观无红肿。消化道症状可有食欲下降，恶心、呕吐、腹痛、腹泻。脉搏早期加快，后期变缓。严重者疲乏无力呈衰竭状态。 3．皮疹 于病程3～6日出现，为斑丘疹或麻疹样皮疹，也有猩红热样皮疹，红色斑疹，重者变为出血性皮疹。皮疹分布于全身、四肢、躯干和头面部，多有痒感，皮疹持续5--7日。疹退后无脱屑及色素沉着。 4．出血 25～50%病例有不同程度出血，如牙龈出血、鼻衄、消化道出血、咯血、血尿等。 5．其他多有浅表淋巴结肿大。约1/4病例有肝脏肿大及ALT升高，个别病例可出现黄疸，束臂试验阳性。 （二）轻型登革热 表现类似流行性感冒，短期发热，全身疼痛较轻，皮疹稀少或无疹，常有表浅淋巴结肿大。因症状不典型，容易误诊或漏疹。 （三）重型登革热 早期具有典型登革热的所有表现，但于3～5病日突然加重，剧烈头痛、呕吐、谵妄、昏迷、抽搐、大汗、血压骤降、颈强直、瞳孔散大等脑膜脑炎表现。有些病例表现为消化道大出血和出血性休克。 二、登革出血热 分为两型即较轻的登革出血热和较重的登革休克综合征。 （一）登革出血热 开始表现为典型登革热。发热、肌痛、腰痛、但骨、关节痛不显著，而出血倾向严重，如鼻衄、呕血、咯血、尿血、便血等。常有两个以上器官大量出血，出血量大于100ml。血浓缩，红细胞压积增加20%以上，血小板计数＜100×109/L。有的病例出血量虽小，但出血部位位于脑、心脏、肾上腺等重要脏器而危及生命。 （二）登革休克综合征 具有典型登革热的表现；在病程中或退热后，病情突然加重，有明显出血倾向伴周围循环衰竭。表现皮肤湿冷，脉快而弱，脉压差进行性缩小，血压下降甚至测不到，烦燥、昏睡、昏迷等。病情凶险，如不及时抢险，可于4～6小时内死亡。
登革热诊疗指南培训试题2017年
登革热诊疗指南培训试题2017年 科室：姓名：分数： 一、单选题:（每题2分，共10分） 1、登革热潜伏期一般为天？( ) A、4-13 B、3-15 C、4-15 D、3-14 2、2014年版登革热诊疗指南，根据病情严重程度，将登革热感染分为哪两种临床类型？( ) A、普通登革热和重症登革热 B、普通登革热和登革出血热 C、典型登革热和登革出血热 D、登革出血热和重症登革热 3、典型的登革热病程分为哪三期？( ) A、急性发热期、休克期和恢复期 B、急性发热期、极期和恢复期 C、急性发热期、出血期和恢复期 D、急性发热期、重症期和恢复期 4、重症登革热实验室指征？( ) A、血小板快速下降 B、血小板快速下降和白细胞升高 C、HCT 升高 D、血小板快速下降和HCT 升高 5、登革热急性发热期常见热型？( ) A、双峰热 B、稽留热 C、驰张热 D、波状热 二、填空题（每空2分，共60分） 1、登革热由________ 感染引起，该病毒对______ 敏感，56℃___ 分钟可灭活，但在______条件下其感染性可保持数周之久。 2、登革热主要传染源为_________ 、__________ ；主要通过_________ 传播，传播媒介主要为：_________ 和_________ ，在我国主要发生在_____ 季。 3、登革热属于______类法定管理传染病，发现后应于______小时内上报。 4、目前尚无特效的抗病毒治疗药物，主要采取______ 及_______治疗措施。治疗原则是________ 、_________、_________、_________ 。重症病例的______ 和_____ __是降低病死率的关键。 5、登革热的预防是________埃及伊蚊和白纹伊蚊是当前最有效的预防措施。 6、登革热极期通常出现在病程的第3-8天，出现__________、________等重症 预警指征往往提示极期的开始。
登革热概述
登革热 登革热（dengue fever）是由登革热病毒引起的伊蚊传播的一种急性传染病。临床特点为突起发热，全身肌肉、骨、关节痛，极度疲乏，皮疹淋巴结肿大及白细胞减少。 登革热主要在热带和亚热带地区流行，在世界各地曾多次发生地区性流行。我国首次经病原学证实的登革热流行发生于1978年的广东省佛山市。我国广东、香港、澳门、台湾是登革热流行区，随着气候变暖和交通便利，近年发现病例的省区有向北扩展的趋势。已知的4个血清型登革热病毒均已在我国发现。 【病原学】 登革病毒归为黄病毒科中的黄病毒属。病毒颗粒呈哑铃状、棒状或球型，直径40~50nm。基因组为单股正链RNA，长约11kb，编码3个结构蛋白和7个非结构蛋白，基因组与核心蛋白一起装配成20面对称体的核衣壳。外层为脂肪蛋白组成的包膜，包膜含有型和群特异性抗原。根据抗原的差异，登革病毒可分为4个血清型，各型之间及与乙型脑炎病毒之间有部分交叉免疫反应。 登革病毒不耐热，60℃30分钟或100℃2分钟即可灭活，但耐低温及干燥，在人血清中贮存于普通冰箱可保持传染性数周，-70℃可存活8年以上。登革病毒对酸、乙醚、紫外线、0.65%福尔马林敏感【流行病学】 （一）传染源 患者和隐性感染者为主要传染源。患者在潜伏期末及发热期内有
传染性，主要局限于发病前6~18小时至发病后第3日，少数患者在病程第6日仍可在血液中分离出病毒。在流行期间，轻型患者和隐性感染者占大多数，可能是更重要的传染源。本病尚未发现慢性患者和病毒携带者，在野外捕获的猴子、蝙蝠等动物体内曾分离出登革病毒，但作为传染源的作用还未肯定。 （二）传播途径 埃及伊蚊和白纹伊蚊是本病的主要传播媒介。在东南亚和我国海南省，以埃及伊蚊为主；在太平洋岛屿和我国广东、广西，则以白纹伊蚊为主。伊蚊吸入带病毒血液后，病毒在唾腺和神经细胞内复制，吸血后10天伊蚊即有传播能力，传染期可长达174天。在非流行期间，伊蚊可能是病毒的储存宿主。研究人员曾在致乏库蚊和三带喙库蚊中分离出登革病毒，但其密度高峰与登革热流行高峰不一致，因此，可能不是登革热的主要传播媒介。 （三）易感人群 在新流行区，人群普遍易感，但发病以成人为主。在地方性流行区，当地成年居民，在血清中几乎都可检出抗登革病毒的中和抗体，故发病以儿童为主。 感染后对同型病毒有固有免疫力，并可维持多年，对异型病毒也有一年以上的免疫力。对其他黄病毒属成员，如乙型脑炎病毒和圣路易脑炎病毒，有一定的交叉免疫力。 （四）流行特征 1. 地理分布登革热主要在北纬25°到南纬25°的热带和亚
登革热中医诊疗方案
登革热中医诊疗方案 （2018年版） 一、诊断 （一）疾病诊断 西医诊断标准 参考2014年国家卫生和计划生育委员会发布的《登革热诊疗指南》第2版。 （1）登革热的诊断 根据流行病学史、临床表现及实验室检查结果，可作出登革热的诊断。在流行病学史不详的情况下，根据临床表现、辅助检查和实验室检测结果作出诊断。 1.疑似病例：符合登革热临床表现，有流行病学史（发病前15天内到过登革热流行区，或居住地有登革热病例发生），或有白细胞和血小板减少者。 2.临床诊断病例：符合登革热临床表现，有流行病学史，并有白细胞、血小板同时减少，单份血清登革病毒特异性IgM抗体阳性。 3.确诊病例：疑似病例或临床诊断病例，急性期血清检测出NS1抗原或病毒核酸，或分离出登革病毒或恢复期血清特异性IgG抗体滴度呈4倍以上升高。 （2）重症登革热的诊断 有下列情况之一者： 1.严重出血：皮下血肿、呕血、黑便、阴道流血、肉眼血尿、颅内出血等； 2.休克：心动过速、肢端湿冷、毛细血管充盈时间延长＞3s、脉搏细弱或测不到、脉压差减小或血压测不到等； 3.严重的器官损害：肝脏损伤（ALT和/或AST＞1000 IU/L）、ARDS、急性心肌炎、急性肾功能衰竭、脑病和脑炎等表现。 （二）证候诊断 参照国家中医药管理局印发的“登革热中医诊疗方案（2017年版）”。 1.急性发热期－邪犯肺卫证 临床表现：发热，畏寒，头痛，身痛，面红目赤，倦怠，舌淡红，苔薄白或厚白，脉浮滑或数。 2. 极期 （1）湿热郁遏证 临床表现：高热畏寒、或不畏寒，身热不扬，头痛，周身疼痛，倦怠乏力，口渴，呃逆或呕吐，小便短赤，大便黏腻不爽，舌红，苔黄厚或厚腻，脉滑数或洪数。 （2）气营（血）两燔证
登革热诊疗指南培训考试题及答案
先锋街道社区卫生服务中心 登革热诊疗指南培训考试题 科室：姓名：分数： 一、单选题: （每空5分，共20分） 1、登革热潜伏期，一般为天？ ( B ) A、4-13， B、3-15， C、4-15， D、3-14 2、2014年版登革热诊疗指南，根据病情严重程度，将登革热感染分为哪两种临床类型？( A) A、普通登革热和重症登革热。 B、普通登革热和登革出血热 C、典型登革热和登革出血热。 D、登革出血热和重症登革热 3、典型的登革热病程分为哪三期？( B ) A、急性发热期、休克期和恢复期 B、急性发热期、极期和恢复期 C、急性发热期、出血期和恢复期 D、急性发热期、重症期和恢复期 4、重症登革热实验室指征？( D ) A、血小板快速下降 B、血小板快速下降和白细胞升高 C、HCT 升高 D、血小板快速下降和HCT 升高 二、填空题（每空2分，共50分） 1、登革热由登革病毒感染引起，登革病毒对热敏感，56℃ 30分钟可灭活，但在4℃条件下其感染性可保持数周之久；超声波、紫外线、0.05%甲醛溶液、乳酸、高锰酸钾、龙胆紫等均可灭活病毒。 2、登革热主要传染源为患者和隐性感染者；传播媒介主要为：埃及伊蚊和白纹伊蚊，主要通过伊蚊叮咬传播。在我国主要发生在夏秋季； 3、登革热属于乙类法定管理传染病，发现后应于 24小时内上报。
4、目前尚无特效的抗病毒治疗药物，主要采取支持及对症治疗。治疗原则是早发现、早治疗、早防蚊隔离。重症病例的早期识别和及时救治是降低病死率的关键。 5、登革热的预防是控制和消灭埃及伊蚊和白纹伊蚊是当前最有效的预防措施 二、问答题：（共30分） 1、重症登革热的预警指征中高危人群是哪几类？ 答：高危人群是：1、二次感染患者； 2、伴有糖尿病、高血压、冠心病、肝硬化、消化性溃疡、哮喘、慢阻肺、 慢性肾功能不全等基础疾病者； 3、老人或婴幼儿； 4、肥胖或严重营养不良者； 5、孕妇
登革热诊疗指南第二版
登革热诊疗指南第二版 Final revision on November 26, 2020
登革热诊疗指南 （2014年第2版） 2014-10-11 登革热是由登革病毒引起的急性传染病，主要通过埃及伊蚊或白纹伊蚊叮咬传播。 一、病原学 登革病毒属黄病毒科黄病毒属。登革病毒颗粒呈球形，直径45～55nm。登革病毒共有4个血清型（DENV-1、DENV-2 DENV-3和DENV-4），4种血清型均可感染人，其中2型重症率及病死率均高于其他型。 登革病毒对热敏感，56℃30分钟可灭活，但在4℃条件下其感染性可保持数周之久。超声波、紫外线、%甲醛溶液、乳酸、高锰酸钾、龙胆紫等均可灭活病毒。病毒在pH 7～9时最为稳定，在-70℃或冷冻干燥状态下可长期存活。 二、流行病学 （一）传染源。登革热患者、隐性感染者和登革病毒感染的非人灵长类动物以及带毒的媒介伊蚊。 （二）传播途径。主要通过伊蚊叮咬传播。传播媒介主要为埃及伊蚊和白纹伊蚊。 （三）易感人群。人群普遍易感，但感染后仅有部分人发病。登革病毒感染后，人体可对同型病毒产生持久免疫力，但对异型病毒感染不能形成有效保护，若再次感染
异型或多个不同血清型病毒，机体可能发生免疫反应，从而导致严重的临床表现。 （四）流行特征。登革热流行于全球热带及亚热带地区，尤其是在东南亚、太平洋岛屿和加勒比海等100多个国家和地区。我国各省均有输入病例报告，广东、云南、福建、浙江、海南等南方省份可发生本地登革热流行，主要发生在夏秋季，居家待业和离退休人员较多。 三、临床表现 登革热的潜伏期一般为3～15天，多数5～8天。 登革病毒感染可表现为无症状隐性感染、非重症感染及重症感染等。登革热是一种全身性疾病，临床表现复杂多样。典型的登革热病程分为三期，即急性发热期、极期和恢复期。根据病情严重程度，可将登革热分为普通登革热和重症登革热两种临床类型。 （一）急性发热期。患者通常急性起病，首发症状为发热，可伴畏寒，24小时内体温可达40℃。部分病例发热3-5天后体温降至正常，1-3天后再度上升，称为双峰热型。发热时可伴头痛，全身肌肉、骨骼和关节疼痛，明显乏力，并可出现恶心，呕吐，腹痛，腹泻等胃肠道症状。 急性发热期一般持续2～7天。于病程第3～6天在颜面四肢出现充血性皮疹或点状出血疹。典型皮疹为见于四肢的针尖样出血点及“皮岛”样表现等。可出现不同程度
登革热试题及答案完整版
登革热试题及答案 Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】
登革热诊疗指南培训试题 1、登革热潜伏期一般为天( B ) A、4-13 B、3-15 C、4-15 D、3-14 2、2014年版登革热诊疗指南，根据病情严重程度，将登革热感染分为哪两种临床类型( A ) A、普通登革热和重症登革热 B、普通登革热和登革出血热 C、典型登革热和登革出血热 D、登革出血热和重症登革热 3、典型的登革热病程分为哪三期( B ) A、急性发热期、休克期和恢复期 B、急性发热期、极期和恢复期 C、急性发热期、出血期和恢复期 D、急性发热期、重症期和恢复期 4、重症登革热实验室指征( D ) A、血小板快速下降 B、血小板快速下降和白细胞升高 C、HCT升高 D、血小板快速下降和HCT升高 5、登革热急性发热期常见热型( A) A、双峰热 B、稽留热 C、驰张热 D、波状热 6登革热的临床表现正确的是（ A ） A.发热，全身疼痛和毒血症状，皮疹、出血和其他症状和体征 B.潜伏期为1—3天，发热同时出皮疹 C.没淋巴结肿大，可有肝脾肿大 D.登革热没重症病例 7登革热治疗措施中错误的是（ C ） A.急性期卧床休息，流质或半流质饮食 B.口服补液为主，监测生命体征 C.高温应以药物为主 D.对中毒症状严重的患者，可短期使用小剂量肾上腺皮质激素 8登革热的诊断依据有（ D ） A.流行病学资料：疫区蚊子叮咬史
B.临床表现有发热、疼痛、皮疹、出血等 C.实验室检查有包细胞减少，血小板减少、登革热病毒分离阳性、登革热 抗体阳性 D.以上都是 9登革热的临床分型有（ D ） A.典型登革热 B.轻型跟重型登革热 C.登革出血热登革休克综合征 D.以上均是 10症登革热的预警指征中高危人群有( ABCDE ) A、二次感染患者 B、伴有糖尿病、肝硬化、消化性溃疡、哮喘等基础疾病者 C、老人或婴幼儿 D、肥胖或严重营养不良者 E、孕妇 11症登革热的诊断指标中包括( ABCDE ) A、退热后病情恶化 B、腹部剧痛 C、持续呕吐 D、嗜睡，烦躁 E、少尿 12据流行病学史、临床表现及实验室检查结果，诊断为登革热后，出现下列哪一种情况即可诊断为重症登革热( ABCDE ) A、皮下血肿 B、黑便 C、急性心功能衰竭 D、休克 E、肝脏损伤 13革热的治疗措施 (ABCD ) A、卧床休息，清淡饮食 B、退热：以物理降温为主 C、补液：口服补液为主 D、可给与安定、安痛定等对症处理。
登革热诊疗指南培训考试题及答案
登革热诊疗指南培训考 试题及答案精选文档 TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-
先锋街道社区卫生服务中心 登革热诊疗指南培训考试题 科室：姓名：分数： 一、单选题:（每空5分，共20分） 1、登革热潜伏期，一般为天？(B) A、4-13， B、3-15， C、4-15， D、3-14 2、2014年版登革热诊疗指南，根据病情严重程度，将登革热感染分为哪两种临床类型？(A) A、普通登革热和重症登革热。 B、普通登革热和登革出血热 C、典型登革热和登革出血热。 D、登革出血热和重症登革热 3、典型的登革热病程分为哪三期(B) A、急性发热期、休克期和恢复期 B、急性发热期、极期和恢复期 C、急性发热期、出血期和恢复期 D、急性发热期、重症期和恢复期 4、重症登革热实验室指征(D) A、血小板快速下降 B、血小板快速下降和白细胞升高 C、HCT升高 D、血小板快速下降和HCT升高 二、填空题（每空2分，共50分） 1、登革热由登革病毒感染引起，登革病毒对热敏感，56℃30分钟可灭活，但在4℃条件下其感染性可保持数周之久；超声波、紫外线、%甲醛溶液、乳酸、高锰酸钾、龙胆紫等均可灭活病毒。 2、登革热主要传染源为患者和隐性感染者；传播媒介主要为：埃及伊蚊和白纹伊蚊，主要通过伊蚊叮咬传播。在我国主要发生在夏秋季；
3、登革热属于乙类法定管理传染病，发现后应于24小时内上报。 4、目前尚无特效的抗病毒治疗药物，主要采取支持及对症治疗。治疗原则是早发现、早治疗、早防蚊隔离。重症病例的早期识别和及时救治是降低病死率的关键。 5、登革热的预防是控制和消灭埃及伊蚊和白纹伊蚊是当前最有效的预防措施 二、问答题：（共30分） 1、重症登革热的预警指征中高危人群是哪几类？ 答：高危人群是：1、二次感染患者； 2、伴有糖尿病、高血压、冠心病、肝硬化、消化性溃疡、哮喘、慢阻 肺、慢性肾功能不全等基础疾病者； 3、老人或婴幼儿； 4、肥胖或严重营养不良者； 5、孕妇
国家登革热防控工作方案
竭诚为您提供优质文档/双击可除国家登革热防控工作方案 篇一：xx医院防控登革热工作应急预案和实施方案及六、登革热诊疗指南(20XX年版) xx医院登革热救治及防控工作应急预案和实施方案 为有效应对可能出现的登革热疫情，充分做好前期的防控工作和疫情发生后的应急反应，切实做好应对流感流行的准备工作，进一步增强防控登革热工作的责任意识，根据卫计委关于印发《广东省登革热防控工作指引》的通知、关于《登革热诊疗指南（20XX年版）》的通知的具体要求和实施 意见，根据登革热的流行病学特点，针对传染源、传播途径和易感人群，结合我院实际情况，特制定《xx医院登革热工作应急预案和实施方案》和疑似、确诊患者隔离、转出和救治的工作流程。 一、成立组织，加强领导，认真组织实施各项措施。 （一）、领导小组： 组长xxx院长 副组长xxxx副院长
成员：xxxxxxxxxxx。 职责：全面负责登革热应急处置相关工作的组织、协调和部署，上传下达等工作，确保保项工作，措施到位，责任到人。领导小组下设办公室在医务科，由xxx同志兼任办公室主任，负责日常工作和信息的收集上报。充分准备应对可能发生的疫情，做好技术、人员，物资，及思想准备，进行必要的登革热病人救治及转运演练，确保一旦疫情发生时，能够提供及时有效的救治工作，急诊做好重症或疑似病人的急救转诊等工作的准备和演练，如果有疫情发生，各科医护人员，随时听从调配 （二）、疫情(:国家登革热防控工作方案)防控与医疗救治专家组 1．发热门诊管理小组 组长：xxxx主任 成员：门诊全体医师 职责：负责发热预检，一旦发现登革热疑似病例，当事人在做好防护和隔离的同时，严格按照疫情信息报告制度，向医务办或院感上报并积极进行诊疗或抢救及转诊，做好登革热相关知识的培训。 2．院内医疗救治专家小组 组长：xxx副院长 副组长：xxx主任、xxx主任