MDA-MB-231人乳腺癌细胞
MDA-MB-231人乳腺癌细胞
Cat Number：KG033 For Research Use Only
一、组成:
组份KG033
细胞一瓶25cm2
细胞说明书1份
细胞培养注意事项1份
二、客户自备试剂:
1、PBS (凯基货号：KGB5001)
2、Complete growth medium (凯基货号：KGM 41300-500)
3、0.25% （W/V） Trypsin-0.53mM EDTA (凯基货号：KGY0012)
三、细胞简介:
Growth Properties: adherent
Organism: Homo sapiens (human)
Source: Organ: mammary gland; breast
Cell type: epithelial
Disease: adenocarcinoma
Derived from metastatic site: pleural effusion
Age: 51 years adult
Gender: female
Ethnicity: Caucasian
Propagation: Complete growth medium: L-15+10%进口FBS+P/S
Temperature: 37.C
Atmosphere: Without(CO2)
Subculturing: Protocol:
1.Remove and discard culture medium.
2.Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution
to remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor.
3.Add 2.0 to 3.0 ml of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under
an inverted microscope until cell layer is dispersed.
Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask
while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may
be placed at 37°C to facilitate dispersal.
4.Add 6.0 to 8.0 ml of complete growth medium and aspirate cells by gently
pipetting.
5.Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.
6.Incubate cultures at 37°C without CO2.
Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:2 to 1:4 is recommended
Medium renewal: 2 to 3 times per week
Preservation: Freeze medium: Complete growth medium supplemented with 5% (v/v) DMSO
Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase
四、常见问题及解决方案:
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞
活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项，确保细胞的培养条件一致，如果由于培养条件不一致导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。由于运输的情况，所以极个别细胞会出现不稳定，客户收到细胞后务必第一时间和我们联系，告知细胞具体情况，以便我们技术人员能及时有效的和老师沟通，不胜感谢！
如何看懂乳腺癌常见免疫组化指标
如何看懂乳腺癌常见免疫组化指标乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，它的发病常与遗传有关，以及40-60岁之间、绝经期前后的妇女发病率较高。仅约1-2%的乳腺患者是男性。通常发生在乳房腺上皮组织的恶性肿瘤。是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一。治疗乳腺癌主要有手术、化学药物治疗、放射治疗和现代中药治疗等手段，临床必须根据病期早晚，选择不同方法联合应用，选择合理时，比单一方法疗效好。 乳腺癌为激素依赖性肿瘤，就是说乳腺癌细胞的生长依赖雌激素和孕激素的刺激，雌孕激素通过与乳腺癌细胞上相应受体结合发挥作用，免疫组化表现为雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）阳性。PR 的形成直接受ER的控制和调节，故PR阳性的乳腺癌，ER大多为阳性。但有些细胞在癌变过程中，其受体系统保留很少或完全丧失，不能再作为激素的靶细胞，其生长不再受激素的控制与调节，表现为ER阴性乳腺癌。 乳腺癌常见免疫组化指标：雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）临床上可以通过对雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的检测，得出肿瘤细胞内激素受体含量的水平，从而提示乳腺癌的预后信息和指导内分泌治疗。据报道高分化肿瘤或临床分期较低的肿瘤ER、PR更可能阳性；乳腺癌ER阳性率约为50%～80%,PR阳性率约为50%。ER及PR阳性肿瘤对内分泌治疗反应性高，有效率达55％～60％，受体阴性者有效率5％～8％。ER和(或)PR阳性患者较ER和(或)PR阴性患者有较好的预后。
乳腺癌常见免疫组化指标：雌激素调节蛋白PS2 雌激素调节蛋白PS2是由激素依赖细胞分泌的，可以通过自分泌和旁分泌起作用，是预测乳腺癌预后和内分泌治疗疗效的另一项重要指标。通常ER阳性乳腺癌细胞，PS2也呈现高水平表达。PS2在乳腺癌表达的阳性率在43%～58%之间。PS2与ER表达的正相关性，在绝经前的妇女(50岁以下)表现更为明显。PS2(+)ER(+)病例大约占83%，很少ER(-)和PR(-)，而PS2(+)(约4%)。作为乳腺癌抗雌激素治疗预测指标，PS2可能优于ER、PR，若三者结合则可达到满意的预测效果。 乳腺癌常见免疫组化指标：预后指标PS2 PS2作为预后指标，对无淋巴结转移者的意义尤为重要。No(无淋巴结转移)的乳腺癌患者，在采取单纯手术治疗的情况下,约20%～30%的患者会复发。有研究发现，PS2阳性与阴性两组在N0患者复发率相差31%,死亡率相差13%。因此PS2成为确定N0组患者属于危险组或非危险组的参考指标之一。PS2检测对淋巴结阳性(N+)患者也同样可分成危险组和非危险组,两组预后差别非常明显。乳腺癌ER(-)、PR(-)、PS2(-)的患者预后差,治疗失败率为83%,5年存活率仅为41%。 乳腺癌常见免疫组化指标：标记细胞增殖状态的抗原Ki67 Ki67是一种标记细胞增殖状态的抗原，其功能与有丝分裂密切相关，在细胞增殖中是不可少的，阳性说明癌细胞增殖活跃。Ki67的监测多用于判断肿瘤的良、恶性及恶性程度，也用于探讨细胞增殖活性、细胞周期与肿瘤的生长方式、浸润方式、复发、转移等生物学行为及预后的关系。 乳腺癌常见免疫组化指标：细胞周期蛋白(CyclinD1)
乳腺癌细胞
形态生长方式类型培养条件 人乳腺癌细胞MCF7 上皮样贴壁生长常规该细胞是从一名69岁的白人女性 乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立的。该细胞保留了多个分化乳腺上皮的特性，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构( domes );该细胞表达WNT7B 癌基因；TNF- a可以抑制MCF-7细胞的生长；抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)的分泌。ER(+),PR(+),Her-2(-) 人乳腺癌细胞MDA-MB-231 上皮样贴壁生长三阴MDA-MB-231是从一名 51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-a受体和WNT7B癌基因。属于高转移性恶性乳腺癌细胞系，易成瘤，且常用 于肿瘤转移研究 人乳腺导管癌细胞MDA-MB-435S 上皮样贴壁生长三阴，转移性乳腺导管腺 癌MDA-MB-435S 是一种纺锤形的细胞，1976年由其亲本(MDA-MB-435)中筛选得到。MDA-MB-435是从一名31岁的转移性乳腺导管腺癌女性患者胸水中分离得到的。但近来证明MDA-MB-435细胞被M14黑色素瘤细胞污染。 人乳腺癌细胞MDA-MB-453 上皮样；多角形贴壁生长三阴，转移性乳腺癌 该细胞系由Cailleau R在1976年从一名48岁的患有转移性乳腺癌的白人女性的心包渗出液中分离建立的。该细胞表达FGF的受体。 人乳腺癌细胞MDA-MB-157 上皮样贴壁生长髓样癌该细胞源自一位患有 乳腺髓样癌的44岁黑人女性，表达WNT7B癌基因，细胞与细胞边界处有细胞桥粒、微绒毛、张力细丝。 人乳腺癌细胞SK-BR-3 上皮样贴壁生长这株细胞是1970年由Trempe G和 Old LJ从一位43岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离得到的。该细胞亚显微结构特征包括微丝和桥粒、肝糖原颗粒、大溶酶体、成束的细胞质纤丝；过表达 ______________ HER2/c-erb-2 基因产物。 人乳腺导管癌细胞ZR-75-1 上皮样贴壁生长该细胞产生高水平的黏液素 MUC-1 mRNA，低水平的MUC-2 mRNA，但不表达MUC-3基因；表达雌激素受体。 人乳腺导管癌细胞HCC38 上皮样贴壁生长该细胞于1992年从一位50岁的白 人女性乳腺导管癌组织中分离建立，该患者曾有平滑肌肉瘤的病史，其母亲死于乳腺 癌；该细胞癌基因her2/neu- , p53+ ;上皮细胞特异性标志物EGP2 (上皮糖蛋白2) 和CK19
不同年龄段乳腺癌患者的临床病理特征
不同年龄段乳腺癌患者的临床病理特征 摘要目的探讨不同年龄段乳腺癌患者的临床病理特征。方法80例乳腺癌患者為研究对象，分析不同年龄段患者的病理特征。结果≥65岁患者人表皮生长因子受体-2（HER-2）阳性率、浸润性导管癌率、孕激动素受体（PR）阳性率、临床分期Ⅰ期率均低于0.05）。结论0.05）。 3 讨论 近年来，受女性生存压力增大、环境污染加剧等多因素影响，乳腺癌人群逐年增多，且呈年轻化趋势。乳腺癌发病率最高的年龄段在36～50岁，51～60岁居其次，最低年龄段为≥65岁，与报道中亚洲高发年龄符合。 研究示，病理类型是重要的对乳腺癌患者预后造成影响的因素，有文献指出，浸润性导管癌为最常见乳腺癌类型，本次研究中共61例，占76.3%，与文献报道的75%～84%一致。浸润性导管癌在≥65岁患者中发病率低于<65岁患者，但小叶癌在此年龄段发病率却成高于<65岁患者显示，相较浸润性导管癌，小叶癌有相对理想的预后[2，3]。就病理特征而言，年轻乳腺癌患者预后差，侵袭性强，年轻乳腺癌患者以浸润性癌为主，且多为浸润性导管癌，有研究示，其原发肿瘤直径也呈较大显示，pTNM分期较晚，HER-2呈高表达，是对预后造成独立影响的因素。我国老年乳腺癌的原发病灶明显大于年轻患者，但有较低的局部淋巴结转移率，表明老年乳腺癌有较好的生物学行为。有报道示，老年患者患小叶癌、小管癌及粘液癌的比例高于年轻患者，从组织学上分析，有更理想的预后[4-6]。 大量报道指出，年轻乳腺癌患者以肿瘤体积大、分期晚为主要表现，而老年患者与之相反[7，8]。本次选取的病例，肿瘤T4期在≥65岁患者中占有较高比例，表明相较其他年龄段，原发灶呈更大显示。TNM分期中，Ⅰ期在≥65岁患者中均居较低水平，Ⅳ期居较高水平，与部分文献报道不同，可能与我国妇女未彻底接受健康普查，特别是老年群体，乳腺健康常识缺乏，无法较好的对乳房自我检查，有乳房肿物出院时，也较少到院就诊相关，促使确诊时，病灶较大，临床分期较晚，严重者甚至已远处转移[4，5]。HER-2指标及孕激素受体、雌激素受体指标表达是对乳腺癌患者进行分期分型的基础，也可对治疗方案的制定和预后的评估提供重要参考。有研究示，青年患者HER-2有较高的阳性率，孕激素受体、雌激素受体有较低的阳性率[9，10]， 提示老年乳腺癌患者相较中青年患者，有更好的生物学行为。 综上所述，<65岁乳腺癌患者病情发现早，原发灶呈較小显示，但生物学行为较差，HER-2有较高阳性率；而≥65岁乳腺癌患者HER-2阳性率低，病理类型较好，但确诊时分期较晚，原发灶呈较大显示。 参考文献
-乳腺癌中医诊疗常规
乳腺癌诊疗方案 乳腺癌中医称之为“乳岩”，其临床特点为乳房部肿块，质地坚硬，溃后凸如放莲或如菜花。据资料统计发病率占全身各种肿瘤的 7-10%,为女性最常见的恶性肿瘤之一，仅次于子宫瘤。其发病与遗传因素有关，以绝经期前后的妇女（40-60岁之间）发病率最高，多因情志不畅，肝郁不舒，气滞血瘀；或冲任失调，经络阻塞；或脾虚失运，痰浊内生，痰瘀互阻所致，治宜疏肝解郁，调理冲任，化痰散络等。 一、诊断 （一）疾病诊断 诊断标准：参照中华人民共和国卫生部医政司编<中国常见恶性肿瘤诊治规范>。 1、病史及体检 询问肿物发生时间、疼痛、及与月经关系，有无乳头溢液，有否作过治疗，既往乳房是否等大，乳头是否内陷，局部是否治检，及子宫或甲状腺功能性疾病，询问月经及婚育史，是否妊娠，哺乳期，家庭中恶性肿瘤病史，特别有否乳腺癌，体检中注意观察双侧乳房外形，有否静脉回张，乳头位置及分泌物，皮肤有否红、肿、结节及湿疹样变。记录肿块部位，大小，形状，质地，表面情况，活动度，与皮肤、
胸大肌、胸壁关系，积压乳头有否溢液，数量，性质，管口部位，注意腋窝及锁骨上淋巴结，绘图表示乳房肿块与腋窝肿大淋巴结。 2、病理、细胞学诊断 （1）脱落细胞学检查：早期管内癌有乳头溢液者，可将液体作涂片细胞学检查，乳头糜烂疑Paget病者可作刮片或印片检查。 （2）针吸细胞学检查：可部分代替冰冻切片检查，阳性可确诊，阴性不能除外，应进一步作活组织检查，操作时应注意避免造成肿瘤的播散。 （3）活组织检查：包括切除及切取活检。除非肿瘤很大，一般均以切除活检为好。最好能同时作冰冻切片检查，如果恶性的则作根治性手术。标本应常规作受体测定。如无冰冻切片检查条件，病理证实后，应在不迟于2周内作手术治疗. 3、其他辅助检查 1）、乳腺X线摄影：有干板照相和钼靶Ｘ线照相两种方法。 2）．B超检查。 3）．近红外线乳房扫描。 4）．CT：乳癌CT表现与钼靶X线片相似，并可清晰显示腋淋巴结与内乳淋巴结。 5）．疑有肺、肝或骨转移者应作相应的检查。 乳腺癌的诊断多依据临床表现、影像学检查、病理学检查和细胞学检查以及血清学检查进行综合判断，其中病理学、细胞学检查结果是诊断乳腺癌的金标准。
乳腺癌细胞培养
MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可，10－15％的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗，而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用，感觉效果还不错。因为MCF-7消化较快，一般不放到培养箱中消化，以免消化太过。需要注意的是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起，一般都来不及抢救。 MDA-MB-231人乳腺癌细胞
细胞中文名称人乳腺癌细胞 细胞英文名称 MDA-MB-231 物种人 细胞形态特征上皮样 细胞生长特性贴壁生长 细胞特种特性 MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体和WNT7B癌基因 培养基 L15: Leibovitz Medium 血清 10%FBS 细胞传代方法 1:2~1:4传代；每周2~3次 细胞传代情况 C5 细胞冻存条件MDA-MB-231 人乳腺癌细胞基础培养基 +5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性 说明 培养基：DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10% 培养条件：37℃ 5% CO2 消化条件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA溶液，消化5-10min 传代的比例：1：2~1：4 换液时间：2~3天换液一次 冻存液比例：85%培养基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO
逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响
逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响 张 虹 季有波 1 （长春医学高等专科学校，吉林长春130031） 〔关键词〕逍遥散；乳腺癌；细胞周期〔中图分类号〕R737.9 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕1005-9202（2012）24-5611-02；doi ：10.3969/j.issn.1005- 9202.2012.24.1381 吉林大学第二医院 通讯作者：季有波（1976-），男，主治医师，讲师，主要从事慢性疼痛性疾 病研究。 第一作者：张 虹（1977-），女，讲师，硕士，主要从事方剂学研究。 中医认为乳腺癌或癌前病变属于“乳岩”、“乳癖”范畴，乃由情志不畅、肝郁气滞、血瘀、脾气消沮等所致。而逍遥散行气疏肝，调畅神志，具有抗焦虑、抗抑郁作用，从而影响癌症的发生发展 〔1〕 。本课题组在前期研究中证实了逍遥散提取液对乳 腺癌细胞MCF-7有显著的生长抑制作用〔2〕 。本实验进一步探 讨逍遥散提取液对细胞周期的影响，为古方新用及乳腺癌的防 治进一步提供实验依据。 1材料与试剂1.1试剂DMEM 培养基（Invitrogen ）、RNase 、PI 购自Sigma 公司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所。1.2 药物 逍遥散的药物组成及用量为：柴胡、当归、白术、茯 苓、 芍药各30g ，炙甘草15g ，煨姜、薄荷各1g ，购自市售药店，并经过严格鉴定。按上述组方和单品药当归取生药，加蒸馏水回流提取3次， 每次分别为60、30、30min ，浓缩药液，再加入DMEM 培养液稀释，配成浓度为1g /ml 药液，过滤除菌，4?保存备用。1.3 细胞培养 人乳腺癌细胞系（MCF-7）购自吉林省肿瘤研究所，置于含10%胎牛血清的DMEM 培养基中，在37?、5%CO 2空气及饱和湿度条件下培养。以每5?104 细胞/瓶接种，24h 换液1次并加入相应浓度的逍遥散提取液。1.4 FCM 检测细胞检测细胞周期 取对数生长期细胞用于 实验，随机分5组：对照组、逍遥散提取液低剂量组（2mg /ml ）、中剂量组（5mg /ml ）、高剂量组（10mg /ml ）、当归组（5mg /ml ）。 按照常规方法用PI 染色，流式细胞仪检测细胞周期 〔3〕 。 经低、中、高剂量的逍遥散提取液和当归分别作用48h ，收集MCF-7细胞，用PBS 冲洗两次， 70%冷乙醇固定过夜。PBS 冲洗2次，加RNase ，37?水浴30min 降解RNA ；再用PBS 洗2次后，加PI 染液，4?避光反应30min ，经PBS 洗涤后上机检测。用FACScan 流式细胞仪Cellfit 软件收取细胞测定DNA 含量的 变化，每个样品收集细胞数为1?104 个。 1.5统计学分析所有数据均采用SAS 统计软件进行检测， 数据用x ?s 表示，两组间比较采用t 检验。2 结 果 经流式细胞仪检测，不同剂量的逍遥散提取液和当归提取液对乳腺癌细胞MCF-7作用48h 后，各周期细胞比例见表1。 表1 逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响（x ?s ， %）组别G 0/G 1 S G 2/M 逍遥散低剂量组 63.813?0.78335.828?0.9551）0.480?0.1231）中剂量组55.615?1.4532）28.258?3.7201）0.207?0.1001）高剂量组54.463?2.6962） 25.430?4.2461）0.190?0.1471）对照组64.763?2.20236.238?1.1100.597?0.076当归组 68.250?3.990 31.500?4.210 0.250?0.250 与对照组比较：1）P ＜0.05， 2）P ＜0.013讨论 细胞周期是指细胞从第一次分裂结束产生新细胞到第二次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期（M 期）两个阶段。分裂间期是物质准备和积累阶段，分裂期则是细胞增殖的实施过程。间期又分为休眠期（G 0期）、 DNA 合成前期（G 1期）、DNA 合成期（S 期）与DNA 合成后期（G 2期），在此期间主要完成染色质中的DNA 复制和相关蛋白质的合成。M 期为细胞分裂期， 在此期间进行细胞物质的平均分配，一个细胞经过分裂形成两个新的细胞。 在细胞周期中，S 期是细胞增殖的关键，其最主要的特征是
【CN109694853A】一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910151712.6 (22)申请日 2019.02.28 (71)申请人 贵州省人民医院 地址 550002 贵州省贵阳市南明区中山东 路83号 (72)发明人 侯净 倪青 魏娜 贾琦 刘欣 胡诗航 (74)专利代理机构 北京栈桥知识产权代理事务 所(普通合伙) 11670 代理人 潘卫锋 (51)Int.Cl. C12N 5/09(2010.01) C12N 15/85(2006.01) (54)发明名称 一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构 建方法 (57)摘要 本发明公开了一种HER2基因过表达的乳腺 癌细胞系的构建方法，包括以下步骤：S1：对乳腺 癌细胞进行培养；S2：通过对乳腺癌细胞PCR扩 增，建立表达系统；S3：对乳腺癌细胞系进行构 建，S4：进行细胞观察和荧光强度对比。本发明通 过实时荧光定量PCR检测HER2基因在mRNA中的表 达情况，以证明细胞系构建成功。本发明构建的 乳腺癌细胞系可以稳定表达HER2基因，具有整合 效率高，假阳性率低等优点，为进一步研究HER2 基因乳腺癌发生、发展、治疗及后续耐药过程中 提供基本且有力的研究工具。权利要求书2页 说明书7页CN 109694853 A 2019.04.30 C N 109694853 A
权 利 要 求 书1/2页CN 109694853 A 1.一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤： S1：将新鲜的乳腺癌细胞在含有10％FBS的液体培养基中，在温度为30-35℃条件下培养1-2h,然后用FBS充分洗涤后，置于转动频率为50-80r/min、温度为20℃的恒温摇床上进行悬浮细胞培养，对培养后的细胞通过灭菌处理，再100目过滤，进行转接培养3-5次，再在水浴温度为30℃、通气量为5-10m3/h的条件下震荡处理2-4h，得到乳腺癌细胞； S2：提取乳腺癌细胞的总mRNA，将总mRNA进行稀释后放入到反应离心管，在温度为60-75℃的条件下，加入反转录缓冲液，然后温度按照1.5℃/min的降温速率下降至20-30℃，向其加入反转录酶、DNA聚合酶，期间不断用磁力棒搅拌处理，处理30-45min，得到cDNA，再对得到的cDNA通过上下引物分别进行PCR扩增，通过切酶SnaBI剪切，进行琼脂凝胶电泳，通过pBS-T Mini Kit中片段连接的方法，分别克隆到pBS-T载体中，通过电泳结果筛选及其琼脂糖凝胶电泳，获得质粒； S3：所述质粒作为模板，pGenesil-1载体，构建出相应的pGenesil-ETV1A、pGenesil-ETV1B、pGenesil-ETV1C、pGenesil-NC重组siRNA表达载体；在200μlPCR管中配制如下连接体系：pGenesil-1/HindⅢ/BamHⅠ载体大片段1μl；双链片段DNA5ul；T4DNAligase1ul；10×T4DNAligasebuffer1ul；ddH2O2μl。以上体系配制好后放入金属浴，16℃反应4小时，将连接产物全部加入到100μlDH5α感受态中，冰浴15min，加入500μlLB液体培养基，在温度为30℃，70rpm条件下，振荡培养1h，然后在35℃热激90s后立即冰浴100s，取150μl培养物涂布于LB/ Kan平板上37℃倒置培养10小时； S4：对培养后培养物进行转染Marc-145细胞，通过消化，振荡过滤将Marc-145细胞重选，调节细胞悬浮液密度，培养3-6h，然后将培养后的Marc-145细胞放入到四孔板中培养，待细胞密度为60-70％时，向四孔中分别加入转染试剂离心搅拌，观察细胞病变，培养4代后，加入含有乳腺癌细胞的新鲜培养基培养3-5h，洗涤，观察细胞状态及荧光强度。 2.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤S1中液体培养液为硝酸铵15-20g/L、黄豆粉3-7g/L、磷酸氢二钾0.03-1g/L。 3.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤S1中液体培养液为黄豆粉3-7g/L、磷酸氢二钾0.03-1g/L、硝酸铵15-20g。 4.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤S2中PCR反应体系及反应条件：通过无菌超纯水稀释至10μM/L；取已经稀释好的两条互补的mRNA靶点序列片段各1.5μl，10×T4buffer1μl，加水至总体积20μl，放于200μl的PCR管中，RT产物8.7uL，4×PCR缓冲液3uL，15mM的氯化钾3uL，PCR引物溶液1.5uL，DNA聚合酶0.5uL混匀后加入到87孔样品板上进行PCR反应，反应条件：85℃，8min；90℃，25min，60℃，30秒钟，65℃，2min，循环30次；70℃1min；4℃直至收取PCR产物。 5.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤S2中所得的质粒通过阳性克隆筛选，进行阳性克隆筛选时，先平均取得质粒，均匀涂布到含去去甲基金霉素培养基平板上，培养6h，然后抽提质粒，将培养物在温度为20-30℃的条件下，滤膜过滤，通过EcoRI进行单酶切鉴定，被EcoRI切开的可能是阳性克隆。 6.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤S4中从-70℃中取出质粒细胞，冰上放置4min，待质粒细胞解冻后，加入9μL连接产物，轻柔混匀内容物，冰中放置10min；然后将之放到预加温到30℃的水浴锅中，静置70s；快 2
乳腺癌细胞培养
MCF-7是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可，10- 15%的小 牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基，加入0.25%的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶(25ml 培养瓶)静置消化2—5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗，而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用，感觉效果还不错。因为MCF-7消化较快，一般不放到培养箱中消化，以免消化太过。需要注意的是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起，一般都来不及抢救。 MDA-MB-231人乳腺癌细胞 细胞中文名称人乳腺癌细胞 细胞英文名称MDA-MB-231 物种人 细胞形态特征上皮样 细胞生长特性贴壁生长 细胞特种特性MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该 细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-a受体和WNT7BS基因 培养基L15: Leibovitz Medium 血清10%FBS 细胞传代方法1:2~1:4 传代；每周2~3次 细胞传代情况C5 细胞冻存条件MDA-MB-231人乳腺癌细胞基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性 说明 培养基：DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10% 培养条件：37 C 5% CO2 消化条件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA 溶液，消化5-10min 传代的比例：1 : 2~1: 4 换液时间：2~3天换液一次 冻存液比例：85%培养基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO 冻存密度：1-2 X 10 6/管，液氮保存 MDA-MB-231人乳腺癌细胞复苏方法：取出冻存管后，投入37 C水浴中，震荡解冻2 min , 酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞转移至离心管中，加入 5 ml 37 C预热的培养基，并清洗冻存管一次，将离心管离心( 1000 rpm , 5 min),弃去上清液，再加入 2 ml培养■基，转入培养瓶中培养。 产品名称：人正常乳腺细胞Hs 578Bst 规格：70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶 特点：细胞代数为4-5代左右 包装：内层无菌自封袋；专用防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书 细胞来源：ATCC、sciencell、ICLC
乳腺癌细胞培养
MCF-7 就是一种很好养的人乳腺癌细胞,培养基用DMEM或RPMI1640均可, 10－15％的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基,加入0、25％的胰酶1ml,轻轻晃动培养瓶,使胰酶流遍瓶壁,以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶(25ml培养瓶)静置消化2－5min,待细胞缩起变圆,将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗,而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用,感觉效果还不错。因为MCF-7消化较快,一般不放到培养箱中消化,以免消化太过。需要注意的就是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起,一般都来不及抢救。 MDA-MB-231人乳腺癌细胞 细胞中文名称人乳腺癌细胞 细胞英文名称 MDA-MB-231 物种人 细胞形态特征上皮样 细胞生长特性贴壁生长 细胞特种特性 MDA-MB-231就是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体与WNT7B癌基因 培养基 L15: Leibovitz Medium 血清 10%FBS 细胞传代方法 1:2~1:4传代;每周2~3次 细胞传代情况 C5 细胞冻存条件MDA-MB-231 人乳腺癌细胞基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性 说明 培养基:DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10% 培养条件:37℃ 5% CO2 消化条件:0、25% (w/v) Trypsin-0、53mM EDTA溶液,消化5-10min 传代的比例:1:2~1:4 换液时间:2~3天换液一次 冻存液比例:85%培养基,10%FBS, 5% (v/v) DMSO 冻存密度:1-2 ×10 6/管,液氮保存 MDA-MB-231 人乳腺癌细胞复苏方法:取出冻存管后,投入37 ℃水浴中,震荡解冻2 min,酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,加入5 ml 37 ℃预热的培养基,并清洗冻存管一次,将离心管离心(1000 rpm,5 min),弃去上清液,再加入2 ml培养基,转入培养瓶中培养。 产品名称:人正常乳腺细胞 Hs 578Bst 规格:70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶 特点:细胞代数为4-5代左右 包装:内层无菌自封袋;专用防压泡沫盒;外层防压保温气泡袋;说明书 细胞来源:ATCC、sciencell、ICLC
刘胜治疗乳腺癌的辨治特点与遣方规律_程旭锋
咳嗽,咳痰较前明显减轻,憋气明显好转,痰色转白,纳可,大便调,舌红,苔薄黄,脉沉细。燥热已减,重点攻破痰瘀热毒之结,拟以小陷胸汤合千金苇茎汤化裁,药用:瓜蒌皮15g,薤白10g,清半夏10g,桃仁5g,沙参15g,海浮石10g,川贝母10g,百合30g,枇杷叶15g,芦根30g,杏仁10g,生薏苡仁15g,金荞麦15g,桔梗10g,旋覆花10g,白花蛇舌草30g,草河车15g,鸡内金30g,生麦芽30g,鱼腥草15g,炙甘草10g,14剂。2天1剂。上药煎2次合在一起约500mL,分4次服,每日2次。 方中小陷胸汤清热化痰,宽胸理气,千金苇茎汤清热生津散结,鸡内金、生麦芽开胃进食散结。 2006年6月26日。左肺癌术后3年多,CT示:肺外缘、左肺门小结节与前比无明显变化。已不咳嗽,晨起有少量黏痰,上腹胀,舌红,苔少黄,脉沉细。病情稳定,上方加鳖甲、炮山甲以加强软坚散结消瘤之效。14剂。2天1剂。上药煎2次合在一起约500mL,分4次 收稿日期:2009-09-30 作者简介:程旭锋(1976-),男,河南郑州人,主治医师,博士研究生,主要从事中西医结合防治乳腺癌的研究。 通讯作者:刘胜。服,每日2次。 2009年4月29日。左肺癌术后6年4个月。复查双肺小结节灶无明显变化。现有时前胸、后背间断性疼痛,咳嗽,少量白痰,右腰部酸痛,纳可,眠可,尿频。脉弦细,舌红,苔薄黄。药用:百合30g,浙贝母10g,鼠妇10g,生地10g,熟地10g,桔梗10g,杭白芍15g,金荞麦15g,炮山甲10g,鳖甲15g,灵芝10g,橘核10g,乌药10g,僵蚕10g,桑寄生15g,桑螵蛸10g,代赭石15g,鸡内金30g,生麦芽30g,白花蛇舌草30g,14剂。2天1剂。上药煎2次合在一起约500mL,分4次服,每日2次。 方中僵蚕,鼠妇皆虫类药之轻清者,善入肺化痰逐瘀散结;患者有前列腺肥大症,桑螵蛸、桑寄生补肾,橘核、乌药、灵芝理下焦,愈尿频。 现患者已术后6年余,仍在治疗中。 按本例患者肺癌术后肺外缘、左肺门小结节, CEA高于正常值,辨证为肺燥津伤,肺失清肃,兼气阴两伤,痰瘀互结。治疗给予清肺润燥,益气养阴,兼以清热解毒,软坚散结等治疗,之后根据病情变化随证用药,坚持治疗4年(术后6年),病情一直稳定,收到了延长寿命,改善生活质量的理想效果。 刘胜治疗乳腺癌的辨治特点与遣方规律 程旭锋,刘玲琳,吴春宇,宋晓芸 (上海中医药大学附属龙华医院乳腺外科,上海200032) 摘要:从辨证论治、立法原则、遣方规律、用药经验四方面总结了刘胜教授防治乳腺癌复发转移的经验,强调了重视辨病、扶正为主、擅用温补、兼顾变证的学术特点。 关键词:乳腺癌;中医药;经验 中图分类号:R249文献标识码:A文章编号:1000-1719(2010)05-0793-02 Character istis of D ifferen tiati on w it h Treat m en t and R egu lar Patteron of Prescr i p ti on of LI U Sh eng Treati ng Breast Cancer C H ENG X u-feng,LIU L ing-lin,W U Chun-yu,S HONG X i ao-yun (Longhua H osp ital A ff itiarted to Shangha i Unorersit y of TCM,Shanghai200032,China) Abstrac t:P ro fesso r L i u-sheng c s exper i ences of t he preventi on and cure fo r t he re l apse and m etastasis o f breast cancer w ere su mm ar i zed i n Syndrom e D iffe renti a tion and T reat m ent,the princ i p l e of trea t m en t and prescr i pti on,experiences of medicati on,aca-de m i c characte ristics of reconstruction of t he d ifferenti a l diagnosis of diseases,m a i n o f t he strengthen i ng body res i stance,be i ng ex-pert i n supple m ent and warm,conside ration o f de teriorated case w ere e m phasized. K ey word s:Breast cance r;T rad iti ona l Chinese M ed i c i ne;Exper i ences 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率呈明显上升趋势。目前国际公认乳腺癌是全身性疾病,并强调综合治疗和个体化治疗,中医药调治在乳腺癌治疗中的重要性也逐步被认同。中医药治疗有助于减轻乳腺癌西医疗法的不良反应,提高疗效,调节免疫功能,从而达到改善生活质量,抑制肿瘤生长、延长生存期的目的。刘胜教授是上海中医药大学附属龙华医院乳腺外科主任医师,中华中医药学会外科分会副主任委员。师从我国著名中医外科专家陆德铭教授,深得其真传,形成了独到的中医药治疗乳腺癌的思路与方法。现将其辨证及用药经验报道如下。 1辨病分期结合辨证 对于乳腺癌术后患者,刘师强调应遵循辨病与辨证相结合的原则,根据患者所处的不同治疗阶段,一般将患者分为3期:即手术放化疗期、内分泌治疗期、相对稳定期。然后根据临床分期,结合患者接受的西医治疗手段,分清虚实主次,辨明邪正盛衰,综合论治。刘师通常认为,乳腺癌术后患者,虽然临床分期不同,
小鼠乳腺癌模型的建立
小鼠乳腺癌模型的建立 乳腺癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤，目前，国内外乳腺癌发病率均呈显著上升趋势，在西方发达国家和我国主要城市女性乳腺癌发病率已居妇女恶性肿瘤的首位。与某些恶性肿瘤不同的是，及时正确的诊断与干预能显著改善乳腺癌患者的生存率及生活质量，甚至能获得终生治愈的效果。为了探索乳腺癌的生物学特征和探讨新的治疗方法，国内外研究者借助乳腺癌动物模型，对乳腺癌的病因、发病机制、早期诊断和治疗等方面开展研究。 目前乳腺癌动物模型的建立可分为自发型、诱发型和移植型三种，每种方法各有利弊，实验室使用最多的是移植型。自发型乳腺癌模型多采用近交系小鼠，如C3H，其生长到一定年龄便自然发生乳腺肿瘤。这种模型最大的特点是实验动物未经任何有意识的人工处理，其发生的条件比较自然，与人类患病过程更为相似。目前此种动物模型是乳腺肿瘤多级预防、治疗和研究发病机制的良好模型。但自发型乳腺癌模型生长缓慢，不易同时获得大批病程基本一致的动物，观察时间长，实验耗费大。诱发型乳腺癌模型是通过经口、涂抹、注射和埋藏等方法应用于实验动物，使之发生乳腺癌。用二甲基苯蒽为诱癌剂诱发乳腺癌，是应用较多的一种方法。这种方法形成的肿瘤与人体肿瘤增殖动力学基本类似，但诱癌过程较长，成功率不高，肿瘤发生的潜伏期个体变异较大，不易同时获得病程或肿块大小均一的模型。相比之下，移植型动物模型克服了上述缺点。迄今，进入移植型动物
模型实验研究的人乳腺癌细胞系有20多种，其中较为常用的有MCF7、MDA．MB-231和MDA．MB-435等。采用移植法建立的乳腺癌模型周期短，成本低，可使实验动物均带有同样的肿瘤，生长速度也较一致，个体差异小，无自发缓解，成瘤率高，是目前实验室应用最多的模型。 对此，重点查阅资料关于移植性乳腺癌动物模型制作的具体步骤。 材料与方法 （1）实验材料 a.动物及分组：取20只昆明鼠随机分成A组（10只），B组（5只），C 组对照组（5只），编号饲养。 b.试剂：无菌水，生理盐水，台酚蓝，2%冰醋酸，甲醛，乙醇，二甲苯，石蜡等。 c.仪器：离心机，显微镜，计数板，电子称，超净工作台，温箱，切片机等。 （2）实验方法 a.模型建立：取H22肿瘤细胞，3000转离心分钟，再用无菌生理盐水洗涤肿瘤细胞3次，并做适当稀释，取40微升细胞悬液加入10微升0.4%台酚蓝染色并镜检计数，制成浓度为3*106个/ml的肿瘤细胞悬液，每只小鼠右腋皮下接种肿瘤细胞悬液0.2毫升。 b.细胞计数：细胞计数液2%冰醋酸溶液。取50微升细胞悬液加入450微升的细胞计数液中计数。 （3）记录： 接种完成后,逐日观察接种部位有无感染,肿瘤生长后有无自然消退,
乳腺癌细胞株
细胞英文名称MDA-MB-231 细胞中文名人乳腺癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体和WNT7B癌基因。 培养基L15: Leibovitz Medium 血清10%FBS其它因子无 传代方法1:2~1:4传代；每周2~3次。传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 同工酶染色体58~61，有巨核 使用权限A类实物状态可用 细胞英文名称MDA-MB-468 细胞中文名人乳腺癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性该细胞是1977年由Cailleau R等从一位患有转移性乳腺癌的51岁黑人女性的胸腔积液中分离得到的。虽然供体组织的G6PD等位基因杂合，但此细胞株始终表现为G6PD A表型。P53基因273位密码子存在G→A突变，从而导致Arg→His替代。每个细胞上存在1×106个EGF 受体。 培养基L15: Leibovitz Medium 血清10%FBS其它因子无 传代方法1:2~1:4传代；每周换液2~3次。传代情况C4 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 细胞英文名称SK-BR-3 [SKBR-3；SKBR3] 细胞中文名人乳腺癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性这株细胞是1970年由Trempe G和Old LJ从一位43岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离得到的。该细胞亚显微结构特征包括微丝和桥粒、肝糖原颗粒、大溶酶体、成束的细胞质纤丝；过表达HER2/c-erb-2基因产物。 培养基RPMI 1640 (w/o Hepes) 血清10%FBS其它因子无 传代方法1:2传代；每周换液2~3次。传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 同工酶染色体69~80 细胞英文名称MCF7 [MCF-7] 细胞中文名人乳腺癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性该细胞是从一名69岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立的。该细胞保留了多个分化乳腺上皮的特性，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构（domes）；该细胞表达WNT7B癌基因；TNF-α可以抑制MCF-7细胞的生长；抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）的分泌。 培养基DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 血清10%FBS其它因子无 传代方法1:3~1:6传代；每周2~3次。传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 同工酶染色体72~84 查询培养基,定制缺陷型培养基,规模培养用培养基订购(可参与实验) 培养用常用试剂各品牌评定\推荐(您用过好的产品也可以列出\说明理由,统计后的结果共享) 细胞培养条件查询.细胞订购,细胞规模培养技术交流,培养条件方案交流,
基因敲除MDA-MB-231细胞系,乳腺癌研发福音
MDA-MB-231细胞系是从一名51岁的白种女性转移性乳腺癌的胸腔积液建立的人乳腺细胞系。该上皮细胞系是医学研究实验室中使用最广泛的乳腺癌细胞系之一，特别是涉及CRISPR/Cas9基因敲除的那些。 由于缺乏ER和PR表达以及HER2扩增，该细胞系最初被归类为“基础”乳腺癌细胞系。然而，由于它表现出claudin-3和claudinin-4的下调，Ki-67增殖标记物的低表达，与上皮-间质转化有关的标记物的富集，因此现在被认为属于claudin-低分子亚型。以及与乳腺癌干细胞（CSC）相关的特征的表达，例如CD44 + CD24- /低表型。这就是为什么许多研究一直专注于基因编辑 MDA-MB-231细胞系的原因。 应用：
1. CRISPR / Cas9诱变使靶向MDA-MB-231细胞的推定癌症依赖性无效。癌细胞需要表达某些基因的表达，这些基因编码肿瘤生长所必需的蛋白质。沉默这些基因的表达或阻断蛋白质的活性可以触发细胞死亡和持久的肿瘤消退。因此，识别和表征癌症依赖性是临床前癌症研究的关键目标。MELK被认为是多种癌症类型的癌症依赖性和推定药物靶标，其中之一是MDA-MB-231细胞系。MELK在乳腺癌细胞中过表达，与患者预后不良有关。此外，据报道，使用RNAi 敲低MDA-MB-231细胞中的MELK可阻止癌细胞增殖并触发细胞周期停滞或有丝分裂灾难。 研究人员设计了针对MELK的七个指导RNA（gRNA），并将每个指导RNA 克隆到一个表达GFP的载体中，并将该指南转导到了三个表达Cas9细胞系中：三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231据报道会上瘾。MELK表达。对过表达的MDA-MB-231细胞中MELK蛋白水平的蛋白质印迹分析证实，CRISPR系统可有效消除MELK表达。
乳腺癌动物模型的研究现状与评价
乳腺癌动物模型的研究现状与评价 【摘要】乳腺癌动物模型的建立方法主要可分为自发性、诱发性和移植性3种，每种方法都有其各自的特点和应用条件。 【关键词】乳腺癌;动物模型;现状与评价;综述 乳腺癌是一种严重威胁女性健康和生命安全的恶性肿瘤。乳腺癌在世界范围内呈上升趋势［1］，乳腺癌动物模型的制作对进一步研究乳腺癌的病因、发病机理，从而对其进行有效预防、提高治疗效果将起到非常关键的作用。在这方面，国内外有关学者已做了大量工作，现将其研究状况作一综述。 1 实验动物的选择 建立乳腺癌模型时对动物一般要求其癌诱发率高，饲养方便。常选用的动物主要有大鼠、小鼠、裸鼠、猫、犬及兔。其中，大鼠、小鼠由于成本低，易饲养，且诱癌周期相对较短，故多用于大批量的实验研究。但由于不同科系、性别乃至不同鼠龄的大鼠均会直接影响到诱癌率和造模时间，因此，诱癌率较高的Wistar系雌性大鼠常被选用。 裸鼠因先天性缺乏胸腺，T细胞免疫功能接近于零，所以人体肿瘤异种移植时无排斥反应，移植后的人体肿瘤保持其原有的组织形态，免疫学特点以及特有的染色体组型和对抗肿瘤药的原有敏感
性，且对培养条件等要求比SCID鼠低，无毛，易于动态观察肿瘤的生长状态，同时浸润与转移是人类恶性肿瘤的两个重要特征，在裸鼠上可以通过接种方式、部位的选择，达到较满意的转移效果，因此，目前多选择其进行人乳腺癌细胞异位移植。 2 造模方法 2.1 自发性乳腺癌动物模型 实验动物各群中自然发生或通过遗传育种而保留下来的一类肿 瘤称为自发性肿瘤。C3 H小鼠最常用于自发产生乳腺癌的动物，一般生后6个月可100%产生乳腺癌。自发性肿瘤模型有一定的优点，首先从肿瘤发生来看，与人类肿瘤相比更相似，实验结果更易于外推于人;其次，对影响肿瘤发生、发展的原因更有可能被发现。但其肿瘤发生、发展的时间参差不齐，使实验时间延长，实验所需动物数量多，耗费大。 2.2 诱发性乳腺癌动物模型 使用化学物质、物理、生物因素等可在实验动物中诱发乳腺癌的发生 ［2］，目前较多用的是化学诱导方式。用致癌物质二甲基苯蒽（DMBA）和甲基胆蒽可诱发乳腺癌。以灌胃［3］、局部涂抹［4］或皮下注射来作用于Wistar雌性大鼠。胃管灌注低剂量DMBA，持续3个月，可建立乳腺癌癌前病变动物模型［5］。化学诱导乳腺癌发生的动物模型常用于乳腺癌的病因学研究及预防性研究［6］。实验性肿瘤诱