薄层快速分析多糖的单糖组成概要
干扰物质NaCl KCl Ca(NO 32
葡萄糖麦芽糖果糖蔗糖酒石酸柠檬酸倍数
200
200
200
100
100
100
100
100
100
表 1 干扰物质的影响Table 1 Effect of foreign species 样品编号
加入 (×10-5mol/L
检出a (×10-5mol/L
10.550.5420.760.7330.790.824
0.97
0.98
表 2 样品测定结果
Table 2 Results of the determination of samples
注:a 10次检测的平均值。
误差控制在±5%之内时。因此,该电极应用于蔬菜和水果中抗坏血酸的测定将具有很好的选择性。2.3.2
样品测定
为了验证该修饰电极能否在实际样品中抗坏血酸含量进行正确的测量,我们自制了几种样品。自制样品组成为:1.0×10-4
mol/L NaCl 、KCl 、Ca(NO 32、葡
萄糖、麦芽糖、果糖、蔗糖、酒石酸及柠檬酸及0.5×10-5~1×10-5mol/L 抗坏血酸。其测定结果如表2所示。由表2可知,测定的抗坏血酸含量与已知含量基本一致。3
结论
该新型的修饰电极具有极高的化学稳定性,且对溶液中的抗坏血酸具有良好的电催化作用,已成功地应用于水果中抗坏血酸含量的测定,获得了比较满意的结
果,可望成为能满足不同需要的抗坏血酸传感器。
参考文献:
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收稿日期:2006-07-26 *通讯作者
基金项目:四川省中医药管理局重点及专项项目(2003A001、2003C001
作者简介:颜军(1971-,男,实验师,研究方向为生物活性成分的提取及检测。
TLC 快速分析多糖的单糖组成
颜军,郭晓强,李晓光,邬晓勇,苟小军*(成都大学中药化学实验室,四川成都610106
摘要:本文采用薄层色谱法分析多糖的单糖组成。从斑点分离度、清晰度、有无拖尾现象及展层时间等方面综合评价展层效果。通过实验确定了适合的展开剂为展开系统(乙酸乙脂:吡啶:无水乙醇:水=8:1:1:2、合适的显色剂为苯胺-二苯胺磷酸显色剂。通过此体系确定了单糖的Rf 值,可用于快速分析水解多糖的单糖组分。关键词:多糖;单糖组成;薄层色谱
TLC to Fleetly Analyze Monosaccharide Composition of Polysaccharide
YAN Jun ,GUO Xiao-qiang ,LI Xiao-guang ,WU Xiao-yong ,GOU Xiao-jun*
(Laboratory of Traditional Chinese Medicine, Chengdu University, Chengdu 610106, China
Abstract :Applying TLC to analyze monosaccharide composition of polysaccharides was stuided. A mixed solution composed of ethylacetate, pyridine, alcohol and water in a ratio of V C 4H 8O 2
:V C 5
H 5
N :V C 2H 6
O :V H 2
O = 8:1:1:2 by volume is used as extending system.
A solution containing aniline and diphenylamine dissolved in acetone is used as coloration system. Satisfactory separation is
acquired as shown by the thin layer chromatogram. Qualitative results can be obtained in accordance with the R f value of the standard spots. Distinct figures indicating the monosaccharide composition of polysaccharides obtained by the modified TLC.The extending system and coloration system can be used in monosaccharide composition analysis.
Key words:polysaccharide;monosaccharide composition;thin-layer chromatography ( TLC
中图分类号:TS207.3 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(200612-0603-05
多糖作为来自高等植物、动物细胞膜和微生物细胞壁中的天然高分子化合物,是构成生命的四大基本物质之一。随着人们对多糖组成、性质、结构与功能研究的不断深入。对多糖的生物活性也有了更多的认识,能提高机体免疫力,增强机体耐缺氧能力,清除自由基,抑制肿瘤,可用于治疗高血压、高血脂、糖尿病、乙型肝炎等多种现代医学中的疑难病症[1~3]。多糖的研究受到了越来越广泛的重视。并取得了丰硕的成果,已有香菇多糖、灵芝多糖等应用于临床。国内外研究表明,多糖的活性与许多因素有关,如分子量、溶解性等,特别是与其空间结构密切相关[4,5]。由于一级结构是空间结构的基础,而多糖的单糖组成是一级结构的主要内容,所以有必要找到一种简便、灵敏的方法以确定多糖的单糖组成。
单糖组分的分离测定方法目前主要有高效液相色谱法(HPLC、气相色谱法(GC、薄层色谱法(TLC等[6]。采用G C测定糖类,遇到的主要困难是糖本身没有足够的挥发性,所以必须在气相色谱分析之前预先转化成易挥发、对热较稳定的衍生物。另外,由于糖的异构化,在某些衍生物的制备过程中,会产生衍生物的异构体,使色
谱分析时每种糖产生几个峰,这往往影响组分的分离和定量。H P L C有分离速度快、分辨率高、分离效果好、重现性好、不破坏样品的优点。但糖类本身没有紫外吸收,只能采用示差折光检测器(RI或蒸发光散射检测器(ELSD检测。RI分辨率低而ELSD虽然效果好但目前价格昂贵。另外,采用H P L C分析时,色谱柱的选择也比较困难。一般采用氨基柱但分离效果欠佳,而专用的糖柱又十分昂贵。为了找到一种常规实验室即可快速分析单糖组成的方法,我们摸索了薄层色谱法(T L C。该方法是一种微量而快速的分析方法。它兼备了柱层析和纸层析两者的优点并且操作方便,设备简单,容易掌握、便宜、灵活的特点。本文采用T L C 对水解多糖的单糖组成进行分析,确定了适用于单糖分析的展开系统、显色系统及R f值。
1材料与方法
1.1药品与材料
银耳多糖本实验室自制;D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-鼠李糖、D-果糖上海试剂二厂;盐酸、乙酸乙脂、吡啶、无水乙醇、正丁醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、醋酸、磷酸、硫酸、苯胺、二苯胺皆为分析纯试剂;实验用水为蒸馏水。
微量定量点样毛细管美国科尔帕默公司;20cm×20cm硅胶层析板德国默克公司。
1.2单糖和混合单糖标准溶液的配置
分别称取果糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、鼠李糖,分别溶于蒸馏水中制得五种单糖标准液。浓度均为1.00mg/ml。
分别称取葡萄糖、半乳糖、果糖、木糖、鼠李糖,共溶于2ml蒸馏水制得混合单糖标准液。各单糖在混合单糖标准液中的浓度为0.50mg/ml。
1.3水解多糖样品的制备
称取20mg多糖,溶解在5ml重蒸水中,加入12mol/L 的HCl 0.25ml,置于高压釜中在120~126℃条件下水解4h。中和、透析后稀释至10m l。
1.4展开系统配置
展开系统1:分别把乙酸乙脂、吡啶、无水乙醇、水按8:1:1:2(体积比的比例混合摇匀。
展开系统2:分别把正丁醇、丙酮、水按4:3:1(体积比的比例混合摇匀。
展开系统3:分别把正丁醇、乙酸乙脂、异丙醇、醋酸、水、吡啶按
35:100:60:35:30:30(体积比的比例混合摇匀。
1.5显色剂的配置
显色剂1(苯胺-二苯胺-磷酸显色剂:2%二苯胺丙酮溶液:2%苯胺丙酮溶液:85%磷酸按5:5:1的比例混合摇匀。
显色剂2:把10ml硫酸缓慢倒入90ml水中混合冷却,制得10%的硫酸溶液装瓶待用。
1.6操作步骤
1.6.1点样
将水解多糖、已知单糖标准液和混合单糖标准液,7种样品按一定顺序分别点样在薄层板上。点样量约10μl,分次滴加,使点样扩散后其直径不超过2mm。点样过程中用吹风机使样品干燥。
1.6.2展层
将点好样品的薄层板置于密闭的层析缸中,用配置的展开剂,采用倾斜上行法,将薄层板的下端浸在展
开剂中0.3~0.5cm ,至展开剂距离薄层板的上端约1cm 左右时取出自然风干。
1.6.3
显色
在除去溶剂后的薄层板上,均匀喷上显色剂,烘箱中加热显色。2结果与分析2.1展开剂的比较2.1.1
展开系统1
用展开系统1按1.6对样品(1.混合单糖;2.果糖;3.半乳糖;4.葡萄糖;5.木糖;6.鼠李糖;7.水解多糖进行T L C 分析,展层效果见图1。
图1 展开系统1的展层效果图
Fig.1 The result presented by using No.1 extending system
1234567
由图1可得,在展开系统1中混合单糖中各单糖完全分离,各单糖斑点集中无拖尾现象;水解多糖中呈现半乳糖、葡萄糖、果糖、木糖斑点。由所得的T L C ,计算展开系统1中各单糖斑点的R f 值,结果见表1。
编号2果糖3半乳糖4葡萄糖5木糖6鼠李糖R f =0.398R f =0.305R f =0.374R f =0.563R f =0.7421混合单糖+++++
7
多糖
+
+
+
+
表1 展开系统1中检出单糖组分表
Table 1 The monosaccharide composition analyzed by using
No.1 extending system
注:“+”表示存在(下同。
2.1.2展开系统2
用展开系统2按1.6对样品(1.混合单糖;2.半乳糖;
3.葡萄糖;
4.果糖;
5.木糖;
6.鼠李糖;
7.水解多糖进行T L C 分析。展层效果见图2。
由图2可得,在展开系统2中混合单糖中单糖分离不完全,单糖斑点较大有拖尾现象;水解多糖中呈现葡
图2 展开系统2的展层效果图
Fig.2 The result presented by using No.2 extending system
1234567
萄糖、半乳糖斑点。由所得的T L C ,计算展开系统2中各单糖斑点的R f 值。结果见表2。
编号2半乳糖3葡萄糖4果糖5木糖6鼠李糖R f =0.343R f =0.424R f =0.484R f =0.58R f =0.6641混合单糖+
+++
+
7
多糖
+
+
表2 展开系统2中检出单糖组分表
Table 2 The monosaccharide composition analyzed by using
No.2 extending system
2.1.3展开系统3
用展开系统3按1.6对样品(1.混合单糖;2.半乳糖;
3.葡萄糖;
4.果糖;
5.木糖;
6.鼠李糖;
7.水解多糖进行T L C 分析,展层效果见图3。
图3 展开系统3的展层效果图
Fig.3 The result presented by using No.3 extending system
1234567由图3可得,在展开系统3中混合单糖分离不完全,斑点不集中有拖尾现象;样品水解液呈现葡萄糖、半乳糖、木糖斑点出现。由所得的T L C ,计算展开系统3中各单糖斑点的R f 值,结果见表3。2.1.4
展开系统综合比较
由展层效果图1、2、3和表1、2、3的结果比较,展开系统1(乙酸乙脂:吡啶:无水乙醇:水=8:2:2:1的展
层效果好。在展开系统1的体系中,混合单糖中各单糖的层析点集中无拖尾现象。展开系统2、3中,均有明显的拖尾现象并且单糖分离的不完全。在水解多糖样品的展层中,展开系统1使半乳糖、葡萄糖、果糖、木糖四种单糖组分分离效果较好,斑点清晰。
另一方面,在展层时间上各系统有明显的差别。展开系统1所用的时间为
10min ±10s ,展开系统2为20min ±10s ,展开系统3为35min ±10s 。展开系统1所用的时间最少,有利于样品的快速分析。
所以,展开系统1适合作为水解多糖薄层层析的展开剂。三种展开系统的综合比较结果见表4。
编号2半乳糖3葡萄糖4果糖5木糖6鼠李糖R f =0.303R f =0.354R f =0.387R f =0.503R f =0.6071混合单糖+
++++
7
多糖
+
+
+
表3 展开系统3中检出单糖组分表
Table 3 The monosaccharide composition analyzed by using
No.3 extending system
系统1
系统2系统3分离程度完全较完全不完全斑点大小小大较大有无拖尾现象无有有展开所用时间
10min ±10s
20min ±10s
35min ±10s
表4 三种展开系统的综合比较
Table 4 Comprehensive contrasts among the three extending systems
图4 显色剂1的显色效果
Fig.4 The result presented by using No.1 coloration system 图5 显色剂2的显色效果
Fig.5 The result presented by using No.2 coloration system 单糖颜色葡萄糖蓝紫半乳糖蓝紫果糖橙红木糖蓝绿鼠李糖
绿
表5 显色剂1使不同单糖呈现的颜色
Table 5 Different colors presented by using No.1 coloration
system
2.2显色剂的比较2.2.1
显色效果比较
选取展开系统1作为展开剂进行展层。薄层板晾干
后喷洒显色剂1(苯胺-二苯胺磷酸显色剂进行显色。效果见图4(即图1。
选取展开系统1作为展开剂进行展层。薄层板晾干后喷洒显色剂2(10%的硫酸溶液进行显色。效果见图5。
比较图4、5,可以明显地看出,使用显色剂1的显色效果好。显色剂1使不同单糖呈现多种颜色(见表4,容易识别。而显色剂2使不同单糖均呈现褐色,对水解多糖样中的单糖组分显色不清晰且不易区分。所以显色剂1(苯胺-二苯胺磷酸更适合作为水解多糖的显色剂。
2.2.2
显色剂稳定性
分别用新配置的显色剂、放置1d 的显色剂、放置
2d 的显色剂进行显色效果比较。新配置的显色剂显色效果好。2.2.3
显色温度
温度范围70~100℃,每间隔5℃做一次实验。结果显示,苯胺-二苯胺磷酸显色剂的显色温度不宜过高。显色温度达100℃时显色效果很差,会使薄层板变色。因此,一般选择85℃为宜。在此情况下,显色时间不宜超过10min 。2.3
单糖定性R f 值的确定
用最佳体系(展开系统1和苯胺-二苯胺磷酸显色剂按1.6对单糖样品进行TLC 分析。计算各单糖在此体系下的R f 值(结果见表6。由各单糖在此体系下的R f 值,可以用于确定水解多糖中的单糖组分。3
结论
3.1
对三种展开系统T L C 展层效果从斑点清晰度、分
单糖
半乳糖葡萄糖果糖木糖鼠李糖10.3050.3740.3980.5630.7422
0.2920.3600.3890.5900.773R f
30.2910.3650.3860.5760.756平均0.2960.3660.3910.5760.757RSD(%
3.04
2.19
1.79
2.43
2.11
表6 最佳体系下各单糖R f 值
Table 6 Monosaccharide 's R f value in the best system 离度及有无拖尾现象等方面综合比较。展开系统1(乙酸乙脂:吡啶:无水乙醇:水=8:1:1:2的展开效果好、展层速度快(10min ±10s,适合作为水解多糖薄层层析的展开剂。3.2
通过二种显色剂的比较,使用苯胺-二苯胺-磷酸
作为显色剂的显色效果比硫酸显色剂的显色效果好,且单糖呈现各自的颜色,容易识别。对水解多糖中的单糖组分显色清晰且易区分。3.3
用最佳体系对单糖样品进行T L C 展层。确定了在该体系下各单糖的R f 值,可用于水解多糖的单糖组分的
定性。
参考文献:
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收稿日期:2006-08-26 *通讯作者
基金项目:国家自然科学基金重点项目(31031040
作者简介:吕世明(1963-,教授,博士,主要从事兽医药理学研究。
应用PCR 快速检测食品中沙门
氏杆菌方法的研究
吕世明1,2,陈杖榴1,*,陈建新1,李春梅1,邱电1
(1.华南农业大学兽医学院,广东广州 510642;2.贵州大学动物科学学院, 贵州贵阳 550025
摘要:本研究利用沙门氏杆菌属特异的inv A 基因序列,设计一对特异性的引物,通过PCR 反应来检测多种样品中的沙门氏杆菌;反应的特异性和敏感性以及反应的最适条件等试验的结果显示:此PCR 方法检测沙门氏菌属的特异性为100%;样品中活菌的检测限为1.43CFU/10g ;反应的最佳退火温度是65℃;最适模板浓度范围在104~108copies/ml 。本方法与传统的沙门氏杆菌检测方法以及最近报道的相关方法比较,具有简单、快速、特异性好和敏感性高、经济等特点,并可满足大批样品沙门氏杆菌筛选检测的要求。关键词:P C R 检测;沙门氏菌;模板;引物;特异性
Study on the PCR Method of Rapid Detection to Salmonella in Food Samples
LU Shi-ming 1,2,CHEN Zhang-liu 1,*,CHEN Jan-xin 1,LI Chun-mei 1,QIU Dian 1
(1.College of Veterinary, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China ;
2.College of Animal Science, Guizhou University, Guiyang 550025, China
Abstract :In this study, a pair of specificity primers designed basis on the Salmonella 's inv A genome sequence, then ,the tests
试验2还原糖的测定方法
实验2 还原糖的测定方法 食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。 一、高锰酸钾滴定法 1.原理 样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚铜含量，再查表得还原糖量。 2.适用范围 GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。 3.仪器 （1） 滴定管 （2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚 （3） 真空泵 （4） 水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。 4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。 4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。 4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。 4.5碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。 4.6精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜乙液浸泡数小时，用水洗净。再以3mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。然后加水振摇，使成微细的浆状软纤维，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。 4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。 4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。 4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。 4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。 5. 操作方法 5.1 样品处理： 5.1.1 乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50ml水，摇匀。加入10 ml碱性酒石酸铜甲液及 4ml1mol/L氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液滤液备用。（注：此步骤目的是沉淀蛋白） 5.1.2 酒精性饮料：吸取100 ml样品，置于蒸发皿中，用1mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后（注：如果蒸发时间过长，应注意保持溶液pH为中性），移入250ml容量瓶中。加50 ml水，混匀。以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操
羊栖菜多糖简介
羊栖菜多糖简介 一、生产企业 二、生产与应用现状 三、应用前景 多年来的研究表明羊栖菜多糖(SFPS)具有抗肿瘤、调节免疫、降血脂血糖、抗氧化、抗凝血、促进生长发育、抗病毒等活性。现就羊栖菜多糖的药用活性及药理作用作一概述。 1、抗肿瘤 羊栖菜多糖Sargassum fusiforme Polysaceharide(SFPS)在抗肿瘤方面的作用及其机理研究已有很多报道，并证实具有一定的抑瘤作用，其抗肿瘤作用的机理复杂。目前研究已表明，羊栖菜多糖抗肿瘤机理和诱导肿瘤细胞凋亡有密切关系： (1)早期对羊栖菜多糖抗肿瘤研究主要以动物为对象研究，研究结果显示SFPS对于小鼠肿瘤细胞P53基因表达有影响，此外，SFPS在40mg．kg．d-1剂量下对荷瘤小鼠(S180、EAC和L615)生命延长实验，与对照组相比，其生命延长率S180为38．49％，EAC为37.00％，L615为37.99％。 (2)近年，以人体肿瘤细胞为对象的研究发现SFPS对肿瘤治疗有组织特异性，对肿瘤细胞有较好的抑制效果，并呈量效和时效关系。SFPS可通过升高肿瘤细胞内[ Ca2+]i，诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期发挥抗肿瘤作用。另外，SFPS可显著诱导肿瘤细胞野生型P53基因水平的增加，升高细胞凋亡指数(APO)；上调Fas，FasLmRNA的表达促
进肿瘤细胞凋亡，达到治疗肿瘤的目的。 (3)，羊栖菜多糖在体外对人胃癌细胞SGC-7901、人直肠癌细胞COLO-205和人肝癌细胞HepG2的生长有明显的抑制作用，这种生长阻滞作用机制可能在于羊栖菜多糖促进肿瘤细胞凋亡。季宇彬等发现，羊栖菜多糖可明显促进腹腔接种S-180肉瘤、EAC癌和L615小鼠的生存时间，促进这些腹水型瘤小鼠的红细胞免疫功能。羊栖菜多糖通过抑制Na+，K+-ATP酶的活性，影响红细胞膜c、b受体的吸附性、红细胞免疫促进因子和抑制因子，发挥增强红细胞的免疫作用，抑制肿瘤沿血液转移，从而达到抑制肿瘤的作用。研究表明，羊栖菜多糖对 s-180实体瘤移植的小鼠的实体瘤生长有一定的抑制作用，并且可增强S-180荷瘤小鼠的胸腺和脾脏指数及ConA诱导的脾淋巴细胞增殖，提高荷瘤小鼠NK细胞活性及腹腔巨噬细胞的吞噬活性，其中以高剂量组作用最为明显。 2、调节免疫 SFPS对细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫均起着不同程度的增强作用。它不仅可以激活T细胞、B细胞、Mφ、TK细胞、TCL细胞、LAK细胞等免疫细胞的活性，促进IL-1，TNF，H202，NO，C3等效应因子的形成，还可抑制红细胞膜上Na+，K+-ATPase活性，发挥强大的免疫网络功能。 季宇彬等在SFPS细胞免疫促进作用方面作了系统化的研究，研究表明SFPS能提高巨噬细胞的吞噬能力，并能激活吞噬作用。此外，SFPS不仅对荷瘤小鼠红细胞膜上C3b受体有直接作用，还能调节血清
总糖和还原糖的测定——斐林氏法
总糖和还原糖测定方法较多，如3，5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。 一、目的 学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。 二、原理 还原糖在碱性溶液中能将Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。本实验采用斐林试剂热滴定法，氧化剂是斐林试剂，它是由甲乙两种溶液组成，甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝；乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾（黄血盐）。当甲乙两液混合时，硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀，由于溶液中存在酒石酸钾钠，它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。 酒石酸络铜（Ⅱ）钾钠盐在与还原糖共热时，二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。 此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐。 Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2 KOH + 2 H2O 亚铁氰化钾亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐 斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强，因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原，只有当二价铜被还原完毕后，才能使次甲基蓝（甲烯蓝）还原为无色，测定中以此作为滴定终点。 在测定时先做一对照管（不加样品），用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量，即测定对照管消耗的标准葡萄糖量（A）。再做样品管，样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜，剩余的量再用标准葡萄糖来滴定，即样品消耗的标准葡萄糖量（B）。将（A）减去（B）就可求得样品中还原糖量。 三、器材及试剂： 1．器材： ①山芋粉②广范试纸pH1～12。 ③吸管5毫升（×4），10毫升（×2）④容量瓶100毫升（×3）
单糖的结构：葡萄糖的构象
单糖的结构→ 葡萄糖的构象 己醛糖和己酮糖的开链结构及其相对构型己醛糖和己酮糖的环状结构 糖的哈武斯（Haworth）透视式葡萄糖的构象 哈武斯透视式比费歇尔投影式能更合理地表达葡萄糖的存在形式，但是吡喃氧环式仅简单地以一个平面表示还是不够的。从环己烷的构象分析中我们已经知道，环己烷实际上不以平面六元环存在，而是有船式和椅式两种构象，其椅式的内能较低，比较稳定。糖的吡喃环型就相当于环己烷的一个亚甲基被氧原子取代，其构象式应该是类似的，所不同是：（1）氧原子代替了一个碳原子的位置，六元环不再是均匀的环，而且氧原子的电负性大，与环上取代基的作用比碳原子更强烈，对构象稳定性影响较大；（2）环己烷碳原子上连接的都是氢，而在糖分子中环上取代基是不相同的，取代基相互之间的空间效应和电性效应更加显著。由于这两点，糖和环己烷的构象有所不同。糖的船式构象极不稳定，不能存在，只有椅式构象能稳定存在。 糖的椅式构象可能有两种，即N式（Normal form，正常式）和A式（Alternative form，交替式）存在。 对于D-系的糖来说，连在C-5上尾端羟甲基是最大的取代基，它如果处在a键则与其他C-1、C-3位置的取代基相互排挤，很不稳定。相反，此尾端羟甲基都处于e键则有利。所以D-系吡喃糖只能以N-式存在，为优势构象，而不以劣势的A-式存在，故D-吡喃葡萄糖的优势构象应取N-式。
当我们再进一步观察葡萄糖的α-和β-端基异构体的差别时，我们发现在构象式中，α-体的C-1位上羟基取a键，它与C-3和C-5位上的氢原子（a键），有空间排斥作用（1，3-干扰）。而β-体的C-1位上羟基取e键，没有这种作用。而且β-体环上所有比较大的基团都处在e键，相互之间距离最远，没有空间排斥作用，如下所示： 因此，对于α-及β-两个异构体来说，又以β-异构体占优势构象，故在平衡体系中存在量也较多，这就可以解释我们在前面说过的，葡萄糖在水溶液中达到平衡时β-体占64％而α-体占36％的原因。 从上述可知，D-系吡喃糖比较稳定的构象是其中体积最大的基团（—CH OH）占有e键位置的那种构象。例如：
薄层快速分析多糖的单糖组成概要
干扰物质NaCl KCl Ca(NO 32 葡萄糖麦芽糖果糖蔗糖酒石酸柠檬酸倍数 200 200 200 100 100 100 100 100 100 表 1 干扰物质的影响Table 1 Effect of foreign species 样品编号 加入 (×10-5mol/L 检出a (×10-5mol/L 10.550.5420.760.7330.790.824 0.97 0.98 表 2 样品测定结果
Table 2 Results of the determination of samples 注:a 10次检测的平均值。 误差控制在±5%之内时。因此,该电极应用于蔬菜和水果中抗坏血酸的测定将具有很好的选择性。2.3.2 样品测定 为了验证该修饰电极能否在实际样品中抗坏血酸含量进行正确的测量,我们自制了几种样品。自制样品组成为:1.0×10-4 mol/L NaCl 、KCl 、Ca(NO 32、葡 萄糖、麦芽糖、果糖、蔗糖、酒石酸及柠檬酸及0.5×10-5~1×10-5mol/L 抗坏血酸。其测定结果如表2所示。由表2可知,测定的抗坏血酸含量与已知含量基本一致。3 结论 该新型的修饰电极具有极高的化学稳定性,且对溶液中的抗坏血酸具有良好的电催化作用,已成功地应用于水果中抗坏血酸含量的测定,获得了比较满意的结 果,可望成为能满足不同需要的抗坏血酸传感器。 参考文献: [1] D W Martin Jr. Harper's Review of Biochemistry, 19th ed Eds: D W Martin Jr, P A Mayes, V W Rodwell. Lange, Los Altos, CA, 1983. 112.[2]胡慰望, 谢笔钧. 食品化学[M]. 北京: 科学出版社, 1992. 243.[3]黄伟坤, 等. 食品检验与分析[M]. 北京: 中国轻工业出版社, 1989.96.[4] A H Ensminger, M E Ensminger, J E Konlande, 等. 食品与营养百科全书[M]. 王淮洲, 王惟球, 王模善, 等译. 北京:农业出版社, 1989.
DNS法测定总糖和还原糖
实验九总糖和还原糖的测定（二） ──3,5－二硝基水杨酸法 一、目的要求： 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。 二、实验原理: 在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 黄色桔红色 三、试剂和器材 1、试剂 （1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。 （2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 （4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。 （5）0.1% 酚酞指示剂。 （6）6 mol/L HCl溶液 2、材料 小麦淀粉或玉米淀粉。 3、器材 分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。 四、操作方法 1、葡萄糖标准曲线制作
取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。 管号 试剂 0 1 2 3 4 5 6 7 8 葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温， 再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。 λ=540nm处测定吸 光度 以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。 2、样品中还原糖的提取 准确称取0.5g小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml 蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在50ml 的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。 3、样品总糖的水解及提取 准确称取0.5g小麦(淀)粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml 于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。 4、样品中含糖量的测定 试剂空白还原糖总糖样品溶液(ml)0 1.0 1.0 蒸馏水(ml) 2.0 1.0 1.0 水杨酸(ml) 1.50 1.50 1.50 将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。 λ=540nm处测定吸光度 样品溶液中还原糖和总糖
还原糖的测定方法_国标.pdf
食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。 一、高锰酸钾滴定法 1.原理 样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧 化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查 表得还原糖量。 2.适用范围 ，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的 测定。 3.仪器 （1）滴定管 （2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚 （3）真空泵 （4）水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。 碱性酒石酸铜甲液：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石 棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。 L高锰酸钾标准溶液。 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。 5. 操作方法 样品处理： 乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约～ 2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。加入10 ml碱性酒石酸铜甲液及 4 ml1mol/L氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。（注：此步骤目的是沉淀蛋白） 酒精性饮料：吸取100 ml样品，置于蒸发皿中，用 1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至 原体积1/4后（注：如果蒸发时间过长，应注意保持溶液pH为中性），移入250 ml容量瓶中。加50 ml 水，混匀。以下按自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。 含多量淀粉的食品：称取2～10 g样品，置于250 ml容量瓶中，加200 ml水，在45℃水浴中加热 1 h，并时时振摇。（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解， 影响检测结果。）冷却后加水至刻度，混匀，静置。吸取200 ml上清液于另一250 ml容量瓶中，以下按自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。 含有脂肪的食品：称取2～10 g样品，先用乙醚或石油醚淋洗3次，去除醚层。加入50ml水混匀，以下按自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。 汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取100 ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250 ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，备用。 样品测定： 吸取50ml处理后的样品溶液，于400ml烧杯中，加入25ml碱性酒石酸铜甲液及25ml乙液，于烧杯上盖一表面皿，加热，控制在4min内沸腾，再准确煮沸2min，乘热用铺好石棉的古氏坩埚或G4垂融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不成碱性为止。（注：还原糖与碱性酒石酸铜试剂的反应一定要在 沸腾状态下进行，沸腾时间需严格控制。煮沸的溶液应保持蓝色，如果蓝色消失，说明还原糖含量过高， 应将样品溶液稀释后重做。）将古氏坩埚或垂融坩埚放回原400ml烧杯中，加25 ml硫酸铁溶液及25ml水，用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以L高锰酸钾标准液滴定至微红色为终点。 同时吸取50ml水，加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲、乙液，硫酸铁溶液及水，按同一方法做试剂空 白实验。 6. 计算： X1=（V-V0）×N×（1） 式中： X1--样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量，mg；
羊栖菜多糖饮料开发可行性分析报告
琥珀之恋 羊栖菜多糖饮料可行性报告
编制单位：浙江新科技集团股份有限公司 浙江工商大学食品学院 2007年11月 目录 一、立项的背景和意义 二、我国饮料市场进展概况 三、研究开发内容和技术关键 四、研究方案、技术路线、组织方式 五、打算进度安排 六、企业标准 七、厂址设置 八、资金筹备
九、经济预算 十、包装设计 十一、环境爱护 十二、营销方案 一、立项的背景和意义 羊栖菜（sargassum fusiforme (harv.) satchel）又名海大麦，海菜芽，海茜菜，大麦菜，海草等，属褐藻类马尾科植物，在我国分布专门广，北起辽东半岛，山东，南至浙江，福建和广东浅海及滩头均有生长，是一种重要的经济海藻资源。[1]羊栖菜性味苦，咸，寒，具软坚散结，利水消肿，泻热化痰功能。民间常用来治疗甲状腺肿，颈淋巴结肿，浮肿，脚气等[2,3]。沿海地区的群众常在夏秋高温季节用羊栖菜制作凉拌菜和汤料，具有清
凉和去暑的作用。羊栖菜还含有较高的微量元素，人称长寿菜[4]。 羊栖菜在浙江洞头地区已进行大规模人工养殖，并要紧加工成淡干制品出口日本。国内羊栖菜的开发刚刚起步，羊栖菜即食方便食品、调味品、保健食品的开发几乎处于空白。开发羊栖菜多糖饮料使之成为一种健康营养的食品，具有深远的意义。 1 要紧功效 羊栖菜多糖(Sargassum fusiformepolysaccharide，SFPS)对多种免疫细胞的增殖活性具有促进作用[5,6]；实验还发觉SFPS 具有清除自由基、降血脂的作用。实验表明一定浓度的羊栖菜多糖可增强血管内皮细胞增殖活性，并可对抗H2O2对此活性的抑制作用。高浓度的羊栖菜多糖抑制血管内皮细胞增殖活性。国内外报道，羊栖菜多糖(SFP)具有增强机体免疫力，抑制肿瘤细胞、抗菌和抗病毒等生理活性。将羊栖菜多糖对肿瘤细胞进行体外毒性实验，结果表明它是通过增强机体免疫能力的介导作用[7,8]显著提高机体非特异性细胞免疫功能和特异性的体液免疫功能间接抑制癌细胞的．综合结果表明，羊栖菜多糖具有提高机体免疫功能的作用，对免疫功能的促进作用强． 二、我国饮料市场进展概况 目前市面上多糖饮料产品不多，要紧有：银杏多糖饮料，茯
多糖结构的分析
多糖结构分析 多糖在生物学上的重要意义，尤其是在医药学上的重要意义决定了多糖研究的迅速发展，多糖构效关系的研究已成为多糖研究的热点。但由于多糖结构的复杂性和多样性，其结构测定远远落后于蛋白质和核酸,本实验选择天然多糖（半乳葡萄甘露聚糖）作为实验材料，对其一级结构做初步的分析。 多糖一级结构的分析包括：纯度鉴定，分子量测定，单糖组成测定和糖链的序列测定。糖链的序列测定包括：单糖残基在糖链中的次序，单糖残基间连键的位置，链的分支情况等诸多方面。 【实验目的】 1.了解多糖结构分析的内容及方法。 2.了解多糖一级结构分析的基本原理。 3.掌握多糖一级结构分析的基本方法。 一、糖含量测定 【实验原理】 苯酚—硫酸试剂与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应，己糖在490nm 处有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。 【实验材料】 1. 实验器材 721型分光光度计。 2. 实验试剂 (1)98％的浓硫酸。 (2)80％苯酚：80g苯酚加20ml水使之溶解，可置冰箱中避光长期贮存。 (3)6％苯酚：临用前用80％苯酚配制。 (4)标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：取100mg葡萄糖，用蒸馏水溶解，定容至1L。 (5)多糖样品：半乳葡萄甘露聚糖溶液（0.1 mg/ml）。 【实验操作】 1. 制作标准曲线： 取9支干燥试管，按下表操作 横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，绘制标准曲线。 2. 样品含量测定： 取样品液1.0ml，按上述步骤操作，测光密度。
3．计算: 糖含量(%)=C /（C0× V）×100% C: 由标准曲线查得的糖微克数 C0：样品溶液的浓度（0.1 mg/ml） V：测定时用的样品溶液体积（1.0ml） 二、单糖组成分析 【实验原理】 多糖在浓硫酸中保温一定时间可完全水解为单糖，通过纸层析分离，特定试剂显色后与已知糖的标准混合物作对比，可以鉴定多糖水解产物中单糖的组成。 【实验材料】 1. 实验器材 水解管；滤纸；玻璃毛细管；层析缸；喷雾器。 2. 实验试剂 ⑴标准糖溶液: 称取一定量的半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖，用蒸馏水溶解，得标准糖混合溶液(每种糖的点样量为20微克~30微克)。 ⑵展层剂：正丁醇：乙酸：水=4：l：5 (上层)。 ⑶显色剂：苯胺-邻苯二甲酸-正丁醇饱和水溶液(邻苯二甲酸1.6g溶于水饱和的正丁醇100 ml，加苯胺0.93g（相当于0.9 ml）。 ⑷BaCO3；1mol/L硫酸。 【实验操作】 l．完全酸水解： 称取20 mg多糖样品，加入1mol/L H2S04 2ml；封管，l00℃水解8小时，然后加入BaC03中和，定量滤纸过滤，滤液留作分析。 2．纸层析： 将层析滤纸剪成7cm×40cm的纸条，距层析滤纸一端2cm处画一横线作为点样线,在点样线上画两个点分别作为标准糖溶液和多糖水解液的点样位置。用玻璃毛细管点样，斑点尽可能小，而且每点一滴，待点样点干燥后，在同一位置再点第二滴。然后将滤纸条悬挂于层析缸中进行层析，展层时间约为36小时。 3．显色： 将滤纸取出，自然干燥，喷上苯胺-邻苯二甲酸-正丁醇饱和水溶液，100℃条件下15分钟即可显色。标准单糖混合物色斑在滤纸上由下而上的顺序是：半乳糖-葡萄糖-甘露糖-阿拉伯糖。与标准单糖混合物色斑比较，即可判断多糖样品的单糖组成。 三、糖链的序列测定 （一）高碘酸氧化 【实验原理】 高碘酸可以选择性地氧化和断裂糖分子中连二羟基或连三羟基处，生成相应的多糖醛、甲醛或甲酸。反应定量地进行，每开裂—个C-C键消耗一分子高碘酸。通过测定高碘酸消耗量及甲酸的释放量，可以判断多糖分子中糖苷键的位置、类型、多糖的分枝数目和取代情况等。 【实验材料】
实验一 还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定 （3,5-二硝基水杨酸比色法） 一．目的 1.掌握还原糖定量测定的基本原理； 2.学习比色定糖法的基本操作； 3.熟悉分光光度计的使用方法。 二．原理 在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。 三．仪器.试剂和材料 1.仪器： （1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂； （1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH 3.材料：食用面粉 四．操作步骤 将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
2.样品中还原糖和总糖含量的测定 （1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。 （2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。精确吸取10ml 定容过的水解液，移入另一100ml的容量瓶中，以水稀释定容，混匀，作为总糖待测液。 六、结果处理 （1）由管○1、○2吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.167mg
直接滴定法测定还原糖的原理与主要影响因素
直接滴定法测定还原糖的原理与主要影响因素 日常食品检测中，还原糖是一个常规理化检验项目，涉及的样品种类很广，如乳制品、肉制品、发酵酒及果蔬制品叶等。目前还原糖的检测分二大类，一类是具体检测某一还原糖含量，如葡萄糖、果糖等；一类是测定还原糖总量，还原糖总量目前应用较多的是化学滴定法，食品检测中最常用的是国标GB/T 中的第一法：直接滴定法。本文讨论的是后者。 检测原理 （1）碱性酒石酸铜甲液与乙液混合后，生成蓝色氢氧化铜沉淀，此沉淀立即与酒石酸钾钠反应生成深蓝色的酒石酸钾钠铜络合物。 （2）当碱性酒石酸铜甲、乙液与还原糖共热时，酒石酸钾钠铜被还原生成红色的氧化亚铜沉淀物，而还原糖的醛基或酮基则被氧化为羧基，生成还原糖酸。 （3）当还原糖将溶液中酒石酸钾钠铜耗尽时，稍微过量的还原糖可将亚甲基蓝还原而呈无色，指示滴定终点的到来。 （4）为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，与红色的氧化亚
铜发生络合反应，生成可溶性无色络合物，利于终点的判定。 检测原理的补充性解释 酒石酸钾钠作用。既然实验须在碱性条件下进行，那么硫酸铜遇碱生成氢氧化铜沉淀后，不利于实验正常进行，必须使其（铜离子）在可溶状态下才行，酒石酸钾钠与铜离子络合物酒石酸钾钠铜是可溶的，从而达到了目的。 亚铁氰化钾作用。当样品中存在大量的如铁、锰、钴等金属离子，或样品处理时，沉淀剂乙酸锌过量了，都会消耗碱性酒石酸铜乙液中的亚铁氰化钾，当亚铁氰化钾被过量消耗时，不能有效络合氧化亚铜，致使滴定终点不显无色而显暗红色。可另配制亚铁氰化钾溶液，滴定时往锥形瓶中适量添加，标准与样液添加量一样。 定量标准物质。碱性酒石酸铜甲液中的硫酸铜的铜离子（Cu2+）为此滴定反应的定量标准物质，碱性酒石酸铜乙液中氢氧化钠提供了强碱性环境，故国标GB/T 中：“吸取碱性酒石酸铜甲液”的体积量取精度应改为“”，否t检测结果的有效位数达不到该标准的要求：“还原糖含量≥10g/100g时计算结果保留三位有效数字”。 还原糖被氧化反应式。还原糖与酒石酸钾钠铜的反应，以葡萄糖为例，常见的有下面3式，（6）式中，电子转移数为2，葡萄糖被氧化为葡萄糖酸；（7）式中，电子转移数为6，葡萄糖被氧化为葡萄糖二酸；（8）式中，电子转移数为6，
实验一 总糖和还原糖的测定
实验一总糖和还原糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法） 171850044钱诗晨 一、实验目的 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。 二、实验原理 单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。 还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸及其他产物，3，5-二硝基水杨酸（DNS）则被还原为红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在540nm处一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量和总糖的含量。 三、实验器材 1.面粉 2.试管 3.吸管 4.水浴锅 5.电炉 6.紫外可见分光光度计 7.PH试纸 8.容量瓶 9.量筒、研体、三角烧瓶、玻璃漏斗 10.电子分析天平 面粉里含多糖淀粉，遇碘变蓝 四、实验试剂 1.标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。 2.3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂:将6.3gDNS和262ml2mol/L NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸甲钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml贮于棕色瓶中备用。 3.6mol/L HCl:取250ml浓HCl(35%~38%),用蒸馏水稀释到500ml。 4.6mol/L NaOH：称取24g NaOH溶于蒸馏水并稀释至100ml。 5.碘—碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 五、实验操作 1.葡萄糖标准溶液曲线的制作 取干净试管6支，按表7进行操作。以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线
单糖的结构
一、单糖的结构 （一）葡萄糖的开链结构和构型 葡掏糖是己醛糖，分子式是C6H12O6。实验已经证明葡萄糖具有开链的2，3，4，5，6-五羟基己醛的基本结构。 上述结构式中C2、C3、C4、C5都是手性碳原子，每个碳原子上的原子和原子团都可有不同的空间排布。经过研究，存在于自然界的葡萄糖中，四个手性碳原子上的空间排布除C3上的-OH在左边外，其它三个手性碳原子上的羟基都在右边。葡萄糖的费歇尔投影式如下： 单糖的构型仍沿用D，L衷示构型的方法，这种方法只考虑与羰墓相距最远的一个手性碳原子的构型。即根据与羰基相距最远的那个手性碳原子上的羟基在右边的为D-型，羟基在左边的为L-型。 自然界存在的单糖都属于D-型。 （二）变旋光现象和葡萄糖的环状结构 葡萄糖有两种结晶，一种是从乙醇中结晶出来的，熔点146℃，新配制的溶液经测定比旋光度﹝α﹞D为+112℃，此溶液经放置后比旋光度逐渐下降，达+52.5℃以后维持不变。另一种是从吡啶中结晶出来的，熔点150℃，新配制的溶液比旋光度﹝α﹞D为+18.7℃，此溶液经放置后比旋光度逐渐上升，也达到+52.5℃后维持不变。为了区别两种结晶，前者叫做α-D-（+）-葡萄糖，后者叫做β-D-（+）-葡萄糖。这种糖的晶体溶于水后，比旋光度自行转变为定值的现象称为变旋光现象。显然，葡萄糖的开链结构不能解释此现象。 经过物理及化学方法证明结晶状态的单糖并不是链状结构，而是以环状结构存在的。在前面第八章醛和酮的性质学习过，醛与一分子醇加成生成半缩醛，通常把半缩醛反应新形成的羟基称为半缩醛羟基。在单糖分子中同时存在羰基和羟基，因而在分子内便能由于生成半缩醛而构成环：即羟基中的氢原子加到羰基的氧上，而羟基中的氧与羰基中的碳原子可连接成环。对于葡萄糖来说，分子中有五个羟基，究竟哪一个羟基与羰基生成环状的半缩醛?由
羊栖菜简介
羊栖菜 羊栖菜，一种藻类植物，藻体黄褐色，肥厚多汁，叶状体的变异很大，形状各种各样。生长在低潮带岩石上，多分布于我国沿海。在医学上有食疗的功效。基本信息 基本信息 学名：Sargasum fusifOrme（ Hary ，） Seichell分类：藻类植物，属褐藻门马尾藻科 别名：海藻、虎酋菜、鹿角尖、海菜芽、羊奶子、海大麦等 形态：藻体黄褐色，肥厚多汁，高15—40 厘米，可达2 米以上。叶状体的变异很大，形状各种各样。生长在低潮带岩石上，多分布于我国沿海。 羊栖菜每百克含水分17.5 克，蛋白质20.9 克，脂肪3.7 克，碳水化合物29 克，钙329 毫克，磷203 毫克，铁99.4 毫克，褐藻胶22.7 克，甘露醇6.6 克，碘63 毫克等。 基础生物学 从生态学上讲，羊栖菜是暖温带一亚热带性海藻，主要生长在太平洋西北部。在我国沿海北自辽东半岛南到广东雷州半岛，日本(北海道南部、经本州至九州)和朝鲜沿岸(东岸、南岸及西南岸)都有羊栖菜的分布。 在分类学上，羊栖菜隶属褐藻门，墨角藻目，马尾藻科。早先学名为Sargassumfusifor (H ．)Setch．，关于该藻列为那个属国际上有不同的意见。日本藻类学家冈村 (1932)和Yoshida(1998)将它放在羊栖菜属 (Hizikia)中，而美国藻类学家Setchell(1931)认为和马尾藻属(Sargasssum)相同，放到马尾藻属反曲叶亚属中。依据曾呈奎和陆保仁(2000)的观察，认为将其放在羊栖菜属中更适宜，因此暂名为Hizikiafusiformis。同时还对形态和结构等进行了描述，羊栖菜成熟后株高一般在 30～60cm间，有时长达 2iTI。主干直立，圆柱形，羊栖菜藻体可分为假根、茎、叶片、气囊及生殖托等部分。由于生长环境不同引起体形变异，枝叶和气囊不一定同时存在于同一藻体上(曾呈奎等 2000)。羊栖菜雌、雄异株、异托，生殖托圆柱状顶端钝，表面光滑，基部具有柄，单条或偶有分枝，雌性生殖托粗短(长约2～4mm，直径 1．5～2mm)，雄托稍细长(长约4～10mm，直径 1～1．2 mm)，精子囊和卵子囊分别位于雄、雌生殖窝内。 生长发育 羊栖菜的生长和发育季节随着生长的地区而不同，黄、渤海产幼苗初见8～11月，次年 5～10月成熟；东海产幼苗见于9月至次年 2月，4～8月间成熟；南海产幼苗成熟期很早，一般为2～6月(曾呈奎等 2000)。繁殖期一般在 5～10月，南方由于气温较高，比北方要提前些。 羊栖菜的藻体生长及发育明显受温度、光照、盐度及潮汐、营养盐等环境因子的影响。其中温度和光照是最主要的影响因子。
201011298银耳多糖单糖组成分析的三种色谱方法比较
银耳多糖单糖组成分析的三种色谱方法比较 韩威1，姜瑞芝2，陈英红2，高阳3，高其品3* （1．延边大学，吉林延吉133002；2．吉林省中医药科学院，吉林长春130012；3．长 春中医药大学，吉林长春130117） 摘要：为选择一种准确快捷的方法测定银耳多糖的单糖组成，对薄层色谱法（TLC）、气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）三种色谱方法进行比较。结果表明，前两种方法的测定结果均不理想，而HPLC法，操作简便，灵敏度高，分离效果好，信息完整。测定结果为由葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖、岩藻糖组成，其摩尔比为0.24：1.00：0.06：0.29：0.25。HPLC法对酸性杂多糖组成糖分析是一种比较理想的选择。 关键词：银耳多糖；单糖组成；TCL；GC；HPLC Comparison of three kinds of chromatographic methods for monosaccharide composition analysis of Tremella polysaccharide Han Wei1, Jiang Rui-zhi2, Chen Ying-hong2, Gao Yang3, G ao Qi-pin3* (1. Yanbian University, Yanji 133002, China; 2. Academy of Traditional Chinese Medicine and Material Medical of Jilin Province, Changchun 130012, China; 3. Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China) Abstract：To find an accurate and fast method to determine the monosaccharide composition of Tremella polysaccharide, thin layer chromatography (TLC), gas chromatography (GC) and high performance liquid chromatography (HPLC) was compared. The results of TLC and GC were not significant. However, HPLC was a simple method, showed high sensitivity, good resolution and integrity information. The result of HPLC analysis showed that the monosaccharide composition were Glc, Man, GlcA, Xyl and Fuc, with the mole percentage of 0.24:1.00:0.06:0.29:0.25. Consequently, HPLC is the most suitable method for monosaccharide composition analysis. Key words：Tremella polysaccharide; monosaccharide composition; TLC; GC; HPLC 银耳（Tremella fuciformis Berk）是真菌类银耳科银耳属植物，也叫白木耳， 基金项目：十一五国家科技重大专项（No. 2009ZX09103-333）；国家自然科学基金（No. 30873370） *通讯作者Tel：（0431）86172070；E-Mail：gaoqipin@https://www.wendangku.net/doc/184450947.html,
淀粉、总糖、还原糖的测定方法
淀粉、总糖、还原糖的测定方法 淀粉的测定方法---蒽酮法 一( 原理 用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去，而后烟叶中淀粉用适量Hcl，因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进行。根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。二( 仪器设备 三角瓶50ml 容量瓶100ml 移液管10ml、1ml 漏斗圆底烧瓶1000ml 离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计 三( 试剂 盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮 四、试剂的配制和标准曲线的绘制 1. 葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖(AR级)0.1g溶于蒸馏水中，定容至100毫升，用前取此液10毫升，再用水稀释至100毫升。 2. 标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管，依次移入葡萄糖标准液 (100μg/ml)0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml后，再从1至6试管依次补加1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0ml蒸馏水后，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，以吸光值为纵坐标，糖含量为横坐标，绘出标准曲线 3. 80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至 500ml 4. 1当量的盐酸配制 43毫升浓盐酸加水定容至500ml 5. 10%氢氧化钠配制 10g氢氧化钠溶于100ml水中 6. 蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的HSO1000ml(98%的HSO+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱2424
保存2,3周。 五实验步骤 1. 分离出水溶性糖 0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇 80?水浴浸 提30分钟冷却后离心(3600转)5分钟残渣再加入 8ml80%乙醇。重复三次 2. 水解 残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶，摇匀后烘箱105度加热3.5小时，冷却后加10%氢氧化钠6ml中和，过滤，蒸馏水定容100ml。 3. 测定 取滤液1ml(空白用1ml蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5ml，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色 六结果的计算与表述 C=AN*0.9/W C—样品淀粉含量(μg/g) W—样品重量(g) A—标准曲线查得的糖量(μg) N—样品提取液占样品反应液的倍数 蒽酮比色法测总糖: 实验步骤: 1、可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80?水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。 2、总糖的测定:取提取液1毫升于试管中(空白中用1毫升蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5毫升，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色。