PCR技术论文
合肥学院
HEFEI UNIVERSITY
题目: PCR技术论文系别: 生物与环境工程系专业:_ 12生物工程2班学号: 1202012043 姓名: 乐一鹏
指导教师: 阚劲松
时间： 2014年11月27日
PCR技术论文
摘要：PCR技术又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点，是基因扩增技术的一次重大革新。PCR技术可将极微量的靶DNA 特异地扩增上百万倍，从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力，能检测单分子DNA或对每10万个细胞中仅含1个靶DNA分子的样品，因而此方法立即在分子生物学、微生物学、医学及遗传学等多领域广泛应用和迅速发展。
关键词：PCR原理、PCR过程及应用、关于PCR技术要点
1、PCR技术的基本原理
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
PCR的过程类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火(复性）--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA
的变性：模板DNA经加热至93℃左右维持一定时间，使含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链，然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物，即左右引物。此引物范围就在包括所欲扩增的DNA片段，一般需20-30个碱基对，过少则难保持与DNA单链的结合；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，于72℃左右，以4种三磷酸脱氧核苷（dNTP）为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，按5'到
3'方向将引物延伸、自动合成新的DNA链、使DNA重新复制成双链。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，每次循环延伸的模板又增加1倍，亦即扩增DNA产物增加1倍，经反复循环，使靶DNA片段指数性扩增。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
2、PCR技术的反应体系与反应条件
（一）标准的PCR反应体系：
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物各200umol/L
引物各10～100pmol
模板DNA 0.1～2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
（二）PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
（1）引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA 互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度：以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
⑧引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
（2）酶及其浓度。目前有两种Taq DNA聚合酶供应，一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2。5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。
（3）dNTP的质量与浓度。dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装， -20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。
（4）模板(靶基因)核酸。模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是：溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀；蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，
消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。
（5）Mg2+浓度。Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少。
（三）PCR反应条件的选择：
PCR反应条件为温度、时间和循环次数。
温度与时间的设置：基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法，除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。
①变性温度与时间：变性温度低，解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下，93℃～94℃lmin足以使模板DNA变性，若低于93℃则需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。
②退火(复性)温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度：
Tm值(解链温度)=4(G+C)＋2(A+T)
复性温度=Tm值-(5～10℃)
在Tm值允许范围内，选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合，提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。
③延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性：
70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子
70℃ 60核苷酸/S/酶分子
55℃ 24核苷酸/S/酶分子
高于90℃时， DNA合成几乎不能进行。
PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够的3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。
循环次数的设置：循环次数决定PCR扩增程度。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30～40次之间，循环次数越多，非特异性产物的量亦随之增多。
3、PCR反应的基本步骤
标准的PCR过程分为三步：
1。DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。
2。退火（复性）（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
3。延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP 为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。
4、PCR技术的应用
PCR技术自1985年建立以来,发展之迅速,应用之广泛,表明其具有强大的生命力。近些年来,基于PCR的基本原理,许多学者充分发挥创造性思维,对PCR技术进行研究和改进,使PCR技术得到了进上步地完善,并在此基础上派生出了许多新的用途。
反向PCR
反向PCR是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段,而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段。实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切,然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接,再用一对反向的引物进行PCR,其扩增产物将含有两引物外未知序列,从而对未知序进行分析研究。
不对称PCR
不对称PCR是用不等量的一对引物,PCR扩增后产生大量的单链DNA(SSDNA)。这对引物分别称为非限制引物与限制性引物,其比例一般为50～100:1。在PCR反应的最初10～15个循环中,其扩增产物主要是双链DNA,但当限制性引物(低浓度引物)消耗完后,非限制性引物(高浓度引物)引导的PCR就会产生大量的单链DNA。不对称PCR的关键是控制限制性引物的绝对量,需多次摸索优化两条引物的比例。还有一种方法是先用等浓度的引物PCR扩增,制备双键DNA,(dsDNA),然后以此dsDNA为模板,再以其中的一条引物进行第二次PCR,制备ssDNA。不对称PCR制备的ssDNA,主要用于核酸序列测定。
参考文献
[1]马建岗，基因工程学原理，西安交通大学出版社，第3版
[2] 陶生策,张治平,张先恩. PCR技术研究进展[ J ]. 生物工程进展, 2001
[3] 俞华,《PCR技术发展及应用前景》,人民日报,2003.12(5),第7版
[4] 马中声等,《分子生物学》,教育出版社,北京,2004
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浅析计算机网络的浅析计算机网络的前沿技术计算机网络摘要：计算机网络技术是当前发展速度最快、生命力最强、对人类社会影响最大、摘要：新技术新工艺涌现最多和最猛烈的前沿技术。目前比较热门的关键技术有云计算、软交换以及IMS 等。关键词：关键词：计算机网络、云计算、软交换、IMS 21 世纪已进入计算机网络时代。计算机网络极大普及，成为了计算机行业不可分割的一部分。计算机网络，是指将地理位置不同的具有独立功能的多台计算机及其外部设备，通过通信线路连接起来，在网络操作系统，网络管理软件及网络通信协议的管理和协调下，实现资源共享和信息传递的计算机系统。而计算机网络技术则是通信技术与计算机技术相结合的产物，它在迅速地发展着，对世界、社会和人类都产生了巨大的影响。目前，计算机网络学术界和技术界对许多计算机网络的前沿技术进行着认真刻苦的研究工作。其中比较热门的研究技术涵盖了云计算、软交换以及IMS 等。一、云计算云计算(Cloud Computing)是分布式处理(Distributed Computing)、并行处理(Parallel Computing)和网格计算(Grid Computing)的发展，或者说是这些计算机科学概念的商业实现；云计算也是虚拟化(Virtualization)、效用计算(Utility Computing)、IaaS(基础设施即服务)、PaaS(平台即服务)、SaaS(软件即服务)等概念混合演进并跃升的结果。其最基本的概念，是透过网络将庞大的计算处理程序自动分拆成无数个较小的子程序，再交由多部服务器所组成的庞大系统经搜寻、计算分析之后将处理结果回传给用户。透过这项技术，网络服务提供者可以在数秒之内，达成处理数以千万计甚至亿计的信息，达到和“超级计算机”同样强大效能的网络服务。所以从最根本的意义来说，云计算就是利用互联网上的软件和数据的能力。最简单的云计算技术在网络服务中已经随处可见，例如搜寻引擎、网络信箱等，使用者只要输入简单指令即能得到大量信息。未来如手机、GPS 等行动装置都可以透过云计算技术，发展出更多的应用服务。进一步的云计算不仅只做资料搜寻、分析的功能，未来如分析DNA 结构、基因图谱定序、解析癌症细胞等，都可以透过这项技术轻易达成。笔者认为，云计算技术具备以下四个显著特征。第一，云计算提供了最可靠、最安全的数据存储中心，用户不用再担心数据丢失、病毒入侵等麻烦。大家应该都能体会到，数据保存电脑里实际上并不安全。电脑可能会因为损坏，或者被病毒攻击，导致硬盘上的数据无法恢复，而有机会接触私人电脑的不法之徒也可能利用各种机会窃取里面的数据。反之，当用户的文档保存在类似Google Docs 的网络服务上，当用户把照片上传到类似Google Picasa Web 的网络相册里，就再也不用担心数据的丢失或损坏。因
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互联网接入技术论文
互联网接入技术论文 当今发展一大显著特色就是互联网技术的接入以及运用。下面是由 ___的互联网接入技术，谢谢你的阅读。 互联网固定接入方式的发展变化及展望 摘要：本文主要从互联网的接入方式入手，简要的介绍了几种常见的互联网接入方式，并对其中的无线接入方式中的固定接入方式进行了重点的阐述。互联网接入方式中的固定无线接入技术主要有多路多点分配技术以及本地多点分配技术两种，在重点对这两种技术进行说明的基础上，再对互联网固定接入方式今后的发展、变化做重点的描述。 关键词：互联网;固定接入;发展;展望 ：TN929.5 当今科技发展一大显著特色就是互联网技术的发展以及运用。互联网因为其自身具有的无可比拟的优点渐渐渗透到了人们所处、所行的各个领域，已然是人民生活中不可缺少的重要以部分。而对于互联网而言，其接入方式则也是一个十分重要的方面，在互联网的使用以及建设中占有重要的地位。
1 互联网常用接入方式 在当今世界大放异彩的互联网的主要接入方式总的来讲主要有两种，分别是有线接入方式以及无线接入方式。下面就对这两种方式进行简要的介绍。 1.1 有线接入系统。在有线接入这个大方向下，依据接入互联网中的传输介质的不同，又可以分为铜线接入，光纤接入等类型。铜线接入技术又包括了窄带拨号以及DSL宽带接入技术两种。其中，窄带拨号主要是适用于互联网建设的初期。互联网发展的初期主要传输的是字符、文本、数据等，需要的速率不高。DSL宽带接入技术则是随着互联网的传输资料变为为各种可传递的声音、图像，对互联网的传输速度要求提高的现状而产生的。DSL接入技术基于现有的电话线传输介质，充分扩展利用电话线的可用频带，实现了互联网传输速度的极大提高。光纤接入网(OAN)技术的出现也是对于互联网的传输速度的要求的基础上实现的。互联网在各个领域都发挥着巨大的服务作用，如视频流媒体、VOIP语音视频等。这些都要求互联网速度的进一步提升。光纤技术接入网正是在这种形式下应运而生的，光纤接入网的技术主要有两种：有源光网络(AON)和无源光网络(PON)。ON当前主流的代表技术有GPON和EPON两种。中国移动主要使用的是GPON技术。
网络技术与应用的论文
中外网络教育对比分析 马克思主义教育学院思想政治教育专业1112303 朱晓妍 摘要：网络已经成为当今世界重要的组成部分，人们的生活、学习、娱乐等诸多社会时间活动都离不开网络。现代网络的兴起和发展带来了学习方式和内容的革新，网络教育是未来社会发展的方向。本文通过对中外网络教育发展的现状、发展特点、发展差异的分析，试图找到中国网络教育的机会点，从而对于我国网络教育有更进一步的认识，为日后中国的网络教育提供借鉴。 关键词：网络教育；中外差异；机会点 网络在学习中发挥着日益重要的作用。美国是网络教育的发源地，欧盟在网络教育方面的发展起步也很早，而中国则起步较晚，发展状况也不如发达国家充分和完备。我国提出科教兴国和人才强国战略，指明科学技术是第一生产力，而教育则是培养人才，科技创新的源泉。网络日趋成为推动教育事业发展不容小觑的动力，对比中外，有利于中国汲取别国网络教育发展的经验和长处，不断完善自我，推进中国网络教育事业的发展。 一、国内外网络教育发展概况 1、网络教育的产生及内涵 网络发源于美国，网络教育亦是在美国最早起步。自从世界上第一个网络APPANET产生以后，美国的企业、高校等机构就试图将网络和教育结合，研究怎样把网络应用于教育之中。尤其是1992年克林顿在竞选美国总统演说时提到的“信息高速公路”的设想正式将网络教育的发展提到日程上来，导致其快速发展；在1993年9月,美国政府制定实施“国家信息基础设施战略”。这一战略的主要目的是：学生通过NII和多媒体交互式远距离教学设备,以达到不必到学校上课就能接受教师的授课；克林顿又于1996年10月,宣布了“下一代网络计划”。通过实行此计划，各大学和国家实验室的网络速度大大提升。至此，网络教育具备了初步的发展，并且欧洲、日本等发达国家和部分发展中国家也随后产生。 此外，清楚什么是“网络教育”也是我们进行中外网络教育对比和发展我国网络教育的前提。国内关于网络教育的解释是：网络教育是现代信息技术应用于教育后产生的新概念，即运用网络技术与环境开展的教育，教育部出台的文件中指出，网络教育也称现代远程教育。 ①现代远程教育是指利用网络技术、多媒体技术等现代信息技术手段开展的新型教育形态，是建立在现代电子信息通信技术基础上的网络教育。现代远程教育是相对于函授教育、广播电视教育等传统远程教育形态而言。网络媒体具有的实时互动、远程交流、信息共享等特点让其成为一种实施性强、实际应用效果好、优势独特的新兴教育形式。 2、国外网络教育发展现状 （1）美国网络教育发展现状 美国的网络教育起步最早，从克林顿政府的大力推行以来，网络教育的发展日趋规模化和系统化。因为网络教育受到了政府的大力推广，所以在资金和技术方面有比较成熟的条件，目前，美国已经发展成为世界上网络教育规模最大、水平最高的国家。 从规模上看，据统计，美国目前大学里高年级学生使用网络的比率是100%，90%的学生每天或经常使用电子邮件。据美国联邦教育部教育统计中心2000年2月公布的一份统计摘要报告称：1999年初,几乎所有公立中小学校均已接入国际互联网。美国中小学校全部上网 ①https://www.wendangku.net/doc/3f130886.html,/link?url=hTcWHCdTCsejhJ7_PtAh_JggAaHOdpCmgpx3PXQFqIlJukv4 hzcIuSnROByig4aX
PCR技术的原理和方法
PCR技术的原理和方法 1.PCR定义 PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。 2.PCR技术的基本原理 即在高温（95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～55℃）情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在Taq酶的最适温度（72℃）下，以引物3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新链。这样，每一双链的DNA模板，经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行，每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍，PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增，经过25～30个循环后，理论上可使基因扩增109倍以上，实际上一般可达106～107倍。 PCR基本原理示意图 假设扩增效率为“X”，循环数为“n”，则二者与扩增倍数“y”的关系式可表示为：y=(1+X)n。扩增30个循环即n=30时，若X=100%，则y=230=1073741824(>109)；而若X=80%时，则y=1.830=45517159.6(>107)。由此可见，其扩增的倍数是巨大的，将扩增产物进行电泳，经溴化乙锭染色，在紫外灶照射下（254nm）一般都可见到DNA的特异扩增区带。 3.PCR反应基本步骤 3.1 变性(denaturation)：通过加热使模板DNA的双链之间的氢键断裂，双链分开而成单链的过程（94℃，30s）。 3.2 退火(annealling)：当温度降低时，引物与模板DNA中互补区域结合成杂交分子（55℃，30s）。如下图所示
互联网技术软件工程论文
互联网技术软件工程论文 软件工程不仅仅是一种理论，对于它来说更重要的是如何实践，能够充分地运用手头的资源，将整个团队调动起来，并根据相关的规范，在最短的时间内达到预定的目标。不管任何软件工程的开展，方法和工具固然很重要，但是真正起到核心作用的是先进的软件工程思想。只有在正确的思想指导下，才能确保相关的技术方法不出错，才能高效率高质量地达到既定的目标。 首先，从操作系统发展的角度来说，计算机的环境不断变化，而软件提供资源共享的范围也在不断扩大。而从软硬件异构性的角度来说，为了使异构性之间的桥梁更加平缓，使软硬件的互操作性加强，软件技术在不断地发展，比如为了使不同软件之间有更好的操作性，操作系统应运而生，为了使不同操作系统之间的异构性有所减缓，就诞生了中间软件，而web技术又是为了使中间软件的异构性和多样性有所减少才发明的，由此可见，软件技术的发展实质是一种不断桥接异构性的过程，也就是正确地解决概念和处理逻辑两者的问题。而从软件生产方式这个角度来说，为了使软件之间的共性增加，使开发软件不再过于复杂，并有效提高软件开发的质量和效率，因此软件技术不断快速发展。 3.1全球化软件协作交付
随着全球化的不断加速，全球化软件协作交付模式也是势在必行的。根据Forrester的数据，现在不少开发团队呈现分布式的状态，超过一半的团队游两个以上的开发点，而且随着目前企业合并和收购的形式的家具，新的分布式开发团队也在不断增加。而企业为了使开发能力和支持能力达到24×7的状态，也推动者全球化软件协作交付的不断发展。软件外包市场的不断繁荣发展，软件工程工具的不断进步，不少企业都开始发展软件交付项目，举个简单的例子：不少企业选择在美国完成软件的概念设计，然后将系统架构设计安排到欧洲，而在中国进行软件的编码和测试，在这样一个大环境中，24小时不间断的软件交付和支持服务完全可以实现，减少了对员工的压榨，有大大提高了交付的速度。 3.2社区驱动的软件交付 社区驱动的软件交付是IT文化不断发展的产物，现在的年轻人更倾向于社交导航，通过人和人之间的交流，使他们能够更好地获取信息，从而顺利完成指定的任务。这就使得社区驱动的软件交付应运而生，也同时出现了相应的方法和平台。在这种交付模式中，虽然每个项目都会有一个领导者，但是相对而言，它更强调个体的能力和创造性。由世界上不同国家和地区的技术人员和最终用户共同协作，从而完成项目的交付。他们以公共社区作为协作环境，然后将创新思想
互联网技术论文
互联网技术、计算机技术等现代信息技术的发展和普及，促进了大数据这一全新概念的产生，将社会代入了大数据时代，做好对大数据概念及特点的研究，成为未来发展中的一项必然选择。大数据背景下，人力资源管理面临着全新的机遇和挑战，如何通过有效调整，使得人力资源管理能够更好地适应时代发展要求，是相关管理人员必须高度重视的问题。 一、相关概念 （一）大数据。大数据，指使用当前主流计算机软件无法进行有效处理的庞大数据，其本身不仅体量巨大，而且类型复杂，传输速度快，大数据应用的关键在于加工后得到的增值信息，简单来讲，就是结合现有数据进行分析，预测行业未来发展趋势，通过科学建模的方式形成分析模型，将新数据输入后得到结论，作为行业发展过程中的一种参考依据。大数据不单单指数据量巨大，其本身包含了几个相当显著的特点，如处理速度快、种类繁多、价值密度低等，对于社会经济发展有着不容忽视的影响。 （二）人力资源管理。人力资源管理，指针对组织人力资源需求进行预测分析，制定相应的人力需求计划，在招聘和选择人员的基础上开展组织调度、绩效考核等相关工作，配合人才开发，推动组织绩效的最优化。简单来讲，人力资源管理就是针对企业或者团体在某个时间段内所拥有并且能够实际利用的劳动力进行运用和管理的过程。新时期下，人力资源管理呈现出了几个新的特点：一是时限性，即人力资源的形成与作用效率会受到其自身生命周期的限制。作为生物有机体的个人具备劳动能力的时间仅是生命周期中的某一阶段，而在不同时期，资源可利用程度有所不同，如果没有能够在合适的时期进行人力资源开发，则可能导致浪费问题。因此，人力资源的开发与管理必须关注其时效性特征，在保证人力资源产出的同时，延长其发挥作用的时间；二是再生性，人的知识和技能可以通过教育培训等方式得到更新，在人力资源管理中，需要重视对于人才的后期开发与培训工作，确保其能够适应时代发展要求；三是磨损性，包括了疾病、衰老等有形磨损和知识技能老化等无形磨损。新时期，科学技术更新的速度不断加快，个体知识与技能的老化也在加剧，人力资源磨损速度快，补偿难度大，给人力资源管理工作带来许多问题。 二、大数据背景下人力资源管理的机遇 （一）提升战略地位。人力资源管理的对象是人，与制度、流程、资产等“物” 相比，可定量程度远远不足，在这种情况下，人力资源管理的难度相对较大，其价值很难被客观评估，专业性也无法得到充分认同，而如果能够将大数据作为决策工具，则能够显著提升人力资源管理的战略地位。一是人力资源管理决策的制定和实施需要大量的信息作为支撑，大数据技术能够对更多的组织人事信息进行收集和整理，确保人力资源管理人员能够将人员、岗位、组织等联系在一起，保证人才决策的准确性和有效性；二是将大数据技术应用到人力选拔、任用和培训等环节，能够提升管理的科学性，提升管理效率；三是以大数据技术为支撑，人力资源管理部门在组织中能够发挥出更大的影响力，为组织发展战略的达成奠定坚实基础。
PCR技术的种类及应用分解
PCR技术的发展及应用 平骏 14112822276摘要：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）是1985年由美国PE- Cetus 公司的科学家Kary Banks Mullis发明的一种可在体外快速扩增特定基因或DNA序列的技术。经历了近30年的技术发展，现如今PCR技术在生命科学研究以及相关的很多领域都得到广泛的应用。本文主要对PCR的基本原理、反应组份作简要的介绍；同时也对在PCR基础上发展起来的相关技术作简要综述。 关键词：PCR技术；PCR原理；PCR新技术 对核酸的研究己有100多年的历史，20世纪70年代初人们就致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想，该设想在1985年被Mullis等人实现，他们发明了具有划时代意义的聚合酶链反应[6]。这项新技术是根据生物体内DNA序列能进行快速复制的特点，实现在体外对特定DNA序列进行快速扩增，可在短时间内从试管中获得数百万个特异DNA序列拷贝。PCR技术操作简便、结果可靠，被世界各国广泛应用于医学、农业、考古学等各个领域的基因研究和分析，对分子生物学的发展产生了深远的影响[18]。发明人Kary Banks Mulis也因此荣获了1994年的诺贝尔化学奖。 1、PCR 技术的原理[1,2] PCR技术是模拟细胞内DNA的天然复制过程，DNA 聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA 来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA 模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA 聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3，- OH 末端，并以此为起始点，沿模板5，→3，方向延伸，合成一条新的DNA互补链。简言之，其基本原理包括3个基本反应过程：变性→退火→延伸。PCR 反应的基本成分包括：模板DNA( 待扩增DNA )、引物、4种脱氧核苷酸( dNTPs)、DNA 聚合酶和适宜的缓冲液。每一循环中所合成的新链，又都可作为下一循环中的模板。PCR 合成的特定的DNA序列产量随着循环次数呈指数增加，每完成一次循环需2-4min，2-3h就能将目的基因扩增，从而达到迅速大量扩增的目的。 2、PCR技术的反应组份 2.1 模板DNA PCR反应的模板可以是单链DNA也可以是双链DNA，可以是基因组DNA 或cDNA，
计算机网络互联技术论文
一、一套四室二厅的居室，包括主卧、小卧、客卧、书房、客厅、餐厅。要求所有的室内网点都访问internet，且不需要专门的服务器提供服务（即所有的站点可以随意启动、关闭计算机），试给出网络拓扑结构，布线图，联网设备和耗材清单和路由配置的说明。 1、网络拓扑结构 家庭网络的拓扑结构，由于接入的电脑数量很少，而且房间较小，布线长度较短，因而采用家庭的性型拓扑结构。星形拓扑是通过一个中心结点连接，这个中心结点为控制结点，任意两个结点的通信都必须通过它。这种拓扑结构通常使用集线器（HUP）作为中心设备，连接多台计算机。 3、联网设备 ADSL宽带业务、电话线-猫-无线宽带路由器-最近的网络点、交换机、网卡、以及准备几根网线。
4、耗材清单 电话线-猫-无线路由器，-在6根网线汇总的地方加个6口交换机，网卡、网线、集线器以及插座。 5、路由配置 宽带路由器有两个作用，一个作用是连通不同的网络，另一个作用是选择信息传送的线路，它是共享宽带连接的最佳解决方案。并以易使用、易管理、零维护的优点成为Internet共享接入的首选设备。在家庭网络中，一般是直接采用无线路由器来实现集中连接和共享上网两项任务的，因为无线路由器同时兼备无线AP的集结中连接功能。路由器执行大部分工作，负责控制相互连接的设备之间的通信。通过将路由器连接到拨号、DSL或电缆调制解调器，还可以让多台计算机共享一个互联网连接。 无线路由器通常是即插即用设备，就像有线网络中的桌面集线器或交换机一样，所以无需安装任何驱动程序。它的配置基本上都是通过浏览器进行Web方式配置。因为一般家庭采取的都是ADSL虚拟拨号上网，首先选择“ADSL虚拟拨号”，配置ADSL帐户，接着，配置专线以太网接入静态IP地址信息，因为家庭用户通常没必要为各用户配置静态的IP地址，直接可采用无线路由器的DHCP服务功能为各连接客户机自动分配IP地址。由于是家庭配置无线网络，所以启用DHCP服务，省去IP地址配置麻烦，IP地址池也按系统默认设置即可。其它选项也就无需配置了。路由就配置妥当了。 二、设想三种和互联网相关的对未来具有重要影响的新发明。 1、电子商务 现在我国的电子行业已逐步发展茁壮起来，尤其是电子商务。现在网购已经越累越流行。我认为将来电子商务会越来越被人们所接受。为了提高网购的成功率，提高买家的满意度，可以在网络上建立一个模拟世界，如买衣服，买家可以在虚拟世界中体会衣服穿在身上的感觉，模样。总之，在将来，大家都可以足不出户就买到自己喜欢的东东。 2.智能机器人 现在，我们正在努力使机器达到智能化。让计算机想人脑一样工作，是一些科学家致力追求的。我认为，将来这种电影里高智能的“人”型机器人管家一定可以发明研究出来。代替人来做一些科研调查工作，而且也肯能像今天的电脑、手机一样普及，每家一台，解决我们不少的困难。
PCR技术简述
PCR技术简述 北京大学医学部基础医学院 07级临床一班陈依然 90701114 一、摘要 早在高中时期，生物课教程中就已经出现了“PCR技术”的字样。但是由于当时知识深度与教学要求、目的所限，教师并未对“PCR技术”即行明确的讲解。这个疑问一直延伸到今天。 结合查阅的资料，本文对PCR技术进行了简要而比较全面地介绍，内容主要涉及PCR技术的发展历程、原理、主要步骤、反应特点、反应的关键因素——引物与DNA聚合酶、荧光实时定量技术以及PCR在医学与法医学领域的应用，并且将该项技术与用于DNA扩增的常规基因工程技术进行了比较。 基于以上内容，本文呈现了有关PCR技术的基本知识。 二、关键词 PCR技术基本知识原理应用与常规方法的比较 三、正文 3.1 PCR技术简介 多聚酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是近十年来发展最快、应用最广的分子生物学技术。PCR是在细胞外（体外）快速扩增特定DNA序列的技术，故又称体外基因扩增技术或无细胞分子克隆技术（Cell-free molecular cloning）。 该项技术采用定向酶促扩增法，选择性地富集某一特异性DNA序列，将被认为不可能监测到的极微量靶DNA分子扩增到足以方便地进行监测和分析的数量级。PCR不但有高的监测能力，还简化了操作程序，省去了诸多繁琐的操作，被人们称为分子克隆技术中的一次重大革命，对基础研究、实际应用，推动现代分子生物学技术的发展，具有难以估量的作用。而且由于PCR技术在理论和应用上的跨时代意义，该项技术的发明者Mullis也于1993年获得了诺贝尔化学奖。 3.2 PCR技术发展历程 PCR技术的最初设想是由美国Cetus公司的Kary Mullis博士于1983年提出的。 自1993年至今，该项技术一共经历了手动/机械手式水浴基因扩增、自动化控制型定性基因扩增、终点定量/半定量PCR、实时定量PCR四代产品。随着产品的发展，操作大幅简化，成本迅速降低，而这些都有赖于DNA聚合酶的改良和荧光定时定量PCR等技术的发明与应用。 目前的第四代产品，对PCR可以进行精确的定时定量控制，并采用了微电脑控制全部反应过程，大大简化了操作过程，节省了实验时间，降低了成本，极大促进了PCR 技术的实际应用与发展。迄今PCR技术在生物科研和临床应用中得到广泛应用，成为分子生物学研究的最重要技术之一。 3.3 PCR技术原理 DNA的半保留复制是生物遗传物质向后代传递的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两个DNA分子。在实验中发现，DNA分子在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。 PCR是根据以上原理，以特定顺序DNA的两条链为模板，在一对引物的介导下，在
移动互联网技术论文
移动互联网技术论文Last revision on 21 December 2020
论文题目： 姓名：朱强 专业：2013级物联网工程 班级：1班 学号： 联系电话：
摘要 ，的分析师团队结合科学发展的理论认为，是指互联网的技术、平台、商业模式和应用与结合并实践的活动的总称。和互联网成为当今世界发展最快、市场潜力最大、前景最诱人的两大业务，它们的增长速度都是任何预测家未曾预料到的，所以移动互联网可以预见将会创造经济神话。移动互联网的优势发展与趋势决定其用户数量庞大，截至2012年9月底，全球移动互联网用户已达15亿。 关键字：移动互联网；移动通信；发展趋势
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一、移动互联网的定义 移动互联网是移动和互联网融合的产物，继承了移动随时随地随身和互联网分享、开放、互动的优势，是整合二者优势的“升级版本”，即运营商提供无线接入，互联网企业提供各种成熟的应用。移动互联网被称为下一代互联网。比如dropbox，uDrop这类应用就是典型的移动互联网应用。移动互联网业务和应用包括移动环境下的网页浏览、文件下载、位置服务、在线游戏、视频浏览和下载等业务。随着宽带无线移动通信技术的进一步发展，移动互联网业务的发展将成为继宽带技术后互联网发展的又一个推动力，为互联网的发展提供一个新的平台，使得互联网更加普及。并以移动应用固有的随身性、可鉴权、可身份识别等独特优势，为传统的互联网类业务提供了新的发展空间和可持续发展的新商业模式；同时，移动互联网业务的发展为移动网带来了无尽的应用空间，促进了移动网络宽带化的深入发展。移动互联网业务正在成长为移动运营商业务发展的战略重点。
PCR技术综述
PCR技术综述 摘要：PCR（polymerasechainreaction）即聚合酶链式反应，是一种通过体外酶促合成，扩增特定DNA片段的方法。本文主要针对PCR的概念，原理和方法，简要介绍常用的PCR相关技术及其原理，方法及应用。 关键词：PCR；原理；应用及展望 聚合酶链式反应（polymerasechainreaction），简称PCR，又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，是体外酶促合成特异DNA 片段的一种方法，由变性、退火及延伸等反应构成一个周期，可循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有高特异性、高度灵敏性、高丰产量等特点，此方法在分子生物学、微生物学、医学及遗传学等多领域都被广泛应用。 1、PCR技术发展史 上个世纪60年代末，人们开始致力于基因体外分离技术的研究，但由于核酸含量较少，大大限制了DNA的体外操作。Khorana在1971年最早提出了核酸体外扩增的设想，DNA经变性之后与合适的引物杂交，再用DNA聚合酶延伸引物，不断重复该过程就可以克隆出tRNA基因。但是，由于当时的基因序列分析方法不是很成熟，热稳定性较强的DNA聚合酶也还没有发现，相关引物的合成处在手工合成阶段，所以这种想法没有什么实际意义。 1985年，美国科学家KaryMullis在高速路的启发下，经过两年努力，发明了PCR技术，并在Science杂志上发表了关于PCR技术的第一篇学术论文。其原理类似于DNA的体内复制，只是在试管中给DNA的体外合成提供了合适的条件——模板DNA，寡核苷酸引物，DNA聚合酶和合适的缓冲体系。自此，PCR技术得到了生命科学界的一致认可，KaryMullis也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。然而，最开始的PCR技术还很不成熟，在那个时候是一种操作复杂、成本高昂的实验室技术。直到Saiki等人从一种嗜热杆菌提取到一种耐热DNA聚合酶，才使得PCR的扩增效率得以提高，PCR技术也开始得到广泛应用，成为遗传与分子生物学分析的根本基石。在以后的几十年里，PCR方法被不断改进：从定性发展到定量；从原先只能扩增几个kb到目前已能扩增几十个kb的DNA片段。到目前为止，PCR技术已有十几种之多。 2、PCR技术原理 基本PCR条件：1、DNA模板(Template)，2、引物(Primers)，3、DNA聚合酶(Polymearse)，4、合成的原料及水。 PCR的反应包括三个主要步骤，分别是：Denaturation、Annealing，andExtension。Denaturing即将DNA加热变性转为单链DNA作为复制的模板；而Annealing则是令引物于一定的温度下附着于模板DNA两端，最后在DNA聚合酶的作用下进行引物的延长(Extensionofprimers)及另一条链的合成。