酵母在造纸法再造烟叶中的初步应用研究

江西农业学报2011,23(1):18~19

Acta Agr i culturae Jiangxi

酵母在造纸法再造烟叶中的初步应用研究

戴丽君,黄申元,郑彬,林登铨

收稿日期作者简介戴丽君(),女,福建莆田人,助理工程师,硕士,研究方向再造烟叶化学。(福建金闽再造烟叶发展有限公司,福建福州350600)

摘要:在造纸法再造烟叶制备中,利用1种酵母微生物对烟梗原料的萃取液进行了处理,并对处理后的萃取浓缩液及其再造烟叶成品的烟碱、糖、氯、硝酸盐、钾、总氮等成分进行了测定。结果表明:利用酵母处理,在优化条件下,烟梗萃取浓缩液糖含量降至空白对照的一半,再造烟叶成品糖含量明显下降,糖碱比趋于更合理。对经处理后形成的再造烟叶进行感官质量评吸,结果表明:酵母具有明显提高造纸法再造烟叶整体吃味质量的作用。

关键词:再造烟叶;酵母;造纸法;应用

中图分类号:TS444文献标识码:A 文章编号:1001-8581(2011)01-0018-02

P reli m i nary Study on App licati on of Y east i n R econstituted

T obacco L eaf by P aperm aki ng

DAI L i -j un ,HUANG Shen-yuan ,Z HENG B i n ,LIN Deng-quan

(Ji nm i n R econstituted To bacco Leaf Deve l op m ent Li m ited Co m pany i n F ujian Province ,F uzho u 350600,Ch i na)

Abstra ct :In t he preparati on of reconstituted t obacco l ea f by paper m aki ng metho d ,yeast was used to treat the extracted co ncen trated sol utio n of to bacco pedunc l e stuf.f The res u lts sho wed t hat t he sugar co ntent i n t he trea ted extracted concentrated soluti o n was half of that i n t he untreated extracted co ncentrated sol utio n .The s ugar content i n t he fi n i shed pro duct of reco nstituted tobacco leafw it h yeast app licati on was si gnificantl y reduced ,and its ra tio of sugar to a l ka li tended m ore reaso nab le .The sensory quality of the reconsti t u ted tobacco leaf wh i ch was formed by the app lica tio n of yeast was eva l uated ,t he result i ndica ted that yeast had si gnificant effect o n the i m prove ment of the co m prehensive qua lity of the reco nstituted to bacco lea f by papermaki ng .

K ey wor ds :R econstituted tobacco l ea;f Y east ;Paper m ak i ng m ethod ;App licati on

造纸法再造烟叶是以烟梗、烟碎片、烟末等为原材

料,经过萃取分离、浓缩调制、制浆、抄造、涂布等工艺而

成(见图1)。生物技术尤其是酶解和微生物发酵技术在

烟草中的应用研究,已成为当前科技工作者关注的热点。

酶和微生物在造纸法再造烟叶中的应用研究在国内刚刚

起步,且大多是在原料或是萃取浓缩液方面的应用研

究[1~5]。目前尚未见酵母(微生物)处理萃取液的研究报道。

1材料与方法

1.1试验材料和仪器设备试验材料:酵母(国内某品

牌)、烟梗、造纸法再造烟叶。仪器设备:恒温水浴锅、旋转蒸发仪、FZ102型微生物植物试样粉碎机、S KAL AR 连续流动分析仪、切丝机、电子天平、恒温恒湿箱。1.2酵母的添加方法和添加工艺将酵母用一定量的营养物质搅拌浸泡一定的时间,加至烟梗萃取液中,置于恒温水浴锅中进行恒温反应。萃取液于80

条件下进行灭活处理后,采用旋转蒸发仪进行真空浓缩,得烟梗浓

缩液。图1造纸法再造烟叶的工艺流程

1.3烟梗萃取浓缩液及其再造烟叶成品各项常规化学

成分的测定所得烟梗浓缩液直接用于分析。再造烟叶成品在低于40条件下,用植物粉碎机粉碎后用于分析。烟碱、总糖、还原糖、钾、氯化物、硝酸盐和总氮含量

:2010-10-19

:1982:

造纸法再造烟叶废水的处理研究_陈正春

2014年08月云南化工 Aug．2014第41卷第4期 Yunnan Chemical Technology Vol．41，No．4 收稿：2014-01-10基金项目：中国烟草总公司资助项目（110201201020（ZZ －01））“云南昆明造纸法再造烟叶生产线技术升级”。作者简介：陈正春（1975－），男，主要从事分析检测、质量管理。 *通信联系人：冯文超，男，硕士研究生，主要从事精细化学品方面研究。Email ：fengwenchao@gmail．com doi ：12．3969/j．issn．1004-275X．2014．04．007 造纸法再造烟叶废水的处理研究 陈正春1 ， 李军3，冯文超2，3，冀雅文2，3，朱红琴2，3，刘旭强 2，3 （1．云南中烟再造烟叶有限责任公司，云南昆明650106；2．昆明理工大学化学工程学院，云南昆明650500；3．云南瑞升烟草技术（集团）有限公司，云南昆明650106） 摘 要： 从物理化学法、生物化学法和深度处理法3个方面总结了国内对造纸法再造烟叶废水的处理研究进展。 关键词：造纸法；再造烟叶；废水处理 中图分类号： X798 文献标识码： A 文章编号： 1004-275X （2014）04-0026-03 造纸法再造烟叶（又称造纸法烟草薄片）是 目前国际上烟草废弃物再利用的最先进技术［1］ 。造纸法再造烟叶在产品质量稳定性、填充值、成丝率和耐机械加工性能等方面均优于辊压和稠浆法 的再造烟叶，它能提高烟支燃烧速率并降低焦油含量，可塑性也高且较易加工［2］ 。目前，造纸法再造烟叶已在国内外广泛应用。造纸法再造烟叶的生产过程类似于制浆造纸过程，其废水中除了含有与制浆造纸废水共有的纤维外，还含有低分子和不挥发性有机酸、烟碱、焦油、酚类等物质。这些物质导致了烟草废水色度高、可生化性差，废水中的烟碱也不利于微生物的生长。同时，造纸法再造烟叶产生的废水浓度波动较大，属于难处理的高浓度有机废水 ［3，4］ 。国内部分造纸法再造 烟叶生产线建设了相应的废水处理工程，但都存 在诸如运行费用高、废水处理系统未能正常运行、 处理后的废水未能达标等问题［5］。 目前，国内外对于造纸法再造烟叶废水处理 的工艺研究还较少，通常采用与制浆造纸废水相同的处理方法，如物理化学法、生物化学法和深度处理法等 ［6］ 。 1物理化学法 造纸法再造烟叶废水中含有大量的悬浮物 （细小纤维、碎烟丝烟末以及一些胶体物质）会极 大的影响生化处理效果，因此，生化处理前先采用物理或者物化法去除悬浮物。目前，烟草企业采用较多的过滤设备有过滤机、筛网（斜筛）及格栅等，其投资成本低、运行动力能耗小，不但能够初 步净化废水还能回收细小纤维［6］ 。 黄申元［7］ 将一种特殊多元催化剂固化于填料表面，使其与废水中许多组分发生氧化还原作用，在适宜的工艺参数条件下，用催化微电解－沉淀或气浮法降低COD ，取得了非常明显的效果。孙德平等 ［8］ 自制了Ca －Mg 复合凝聚剂，对造纸法再造烟叶的废水进行了高效固－液分离。该法降低了废水70%以上的COD ，大大降低了后续生化处理负荷，而且，分离后获得的污泥固体含有丰富的烟碱类物质，可用作生物源杀虫剂的活性成份或粉状杀虫剂的载附剂。因此，该法充分利用了资源，具有一定的实用价值。高洋［9］ 研究了电絮凝、电化学氧化及电絮凝－电化学氧化耦合处理再造烟叶废水的影响因素、最佳处理条件及不同处理方法对废水可生化性改进的程度和处理成本，并通过气质联用（GC －MS ）分析了处理前后废水中有机污染物的变化情况，探讨了不同处理技术对再造烟叶废水中污染物的去除机理。陈昭毅等 ［10］ 探讨了煤渣处理造纸法再造烟叶废水的

作业成本法在 的应用分析

1.绪论 1.1选题背景 在我国制造业成本管理实践中，管理者一般都把重点放在生产环节和各种费用的控制上，往往忽视产品成本的计算方法。目前，我国大多数生产企业仍在沿用传统的制造成本法，采用产品生产工时、人工工资等单一的标准，对不同产品“贡献”差别各异的间接生产费用进行分配的做法，显得草率武断，成本计算的“误差”越来越大，必然造成有些产品成本虚增，有些虚减，不符合“谁受益，谁负担；多受益，多负担”的公平配比原则和信息相关性原则，导致成本信息失真，管理者的成本决策失误。 随着经济社会的不断发展，人们不断地追求高品质、低成本的产品和高附加值的产品，这就给企业的成本管理带来了挑战，如何加强企业的成本管理，控制和降低各种成本费用，为提高企业的核心竞争力服务，成为企业面临的一个新课题。经济的全球化，同样深远地影响着我国企业的生存和发展。对于处在日益激烈的竞争中的企业如何才能在生存和发展的道路上走的更稳更远，有一点是任何企业都给予高度关注的，那就是企业所提供产品的成本信息。市场竞争的关键问题是价格和品质。成本信息的准确性无疑直接影响企业对产品的定价决策，管理者对产品营销策略的制定。所以，相对准确的成本信息能帮助企业在参与市场竞争中更具主动性。面对人们需求的变化和激励的竞争环境，对成本管理提出了新要求，许多企业仍然沿用以生产数量为基础的传统成本计算方法，对间接费用采用单一成本分配基础分摊到产品成本。这种分配方式的合理性完全取决于间接费用是否与产量相关联，事实情况是间接费用并不是单一与产量有关，在现代有许多间接费用并不是受生产数量或其相连带的指标所影响，例如生产准备所发生的制造费用与准备次数直接相关联等等。在传统成本计算方法下，单一的基础分配间接费用的方法忽略了发生间接费用是由多种原因所造成，各原因在各生产阶段及各个生产中的作用程度不同。高新技术的发展，企业生产模式上机械化程度普遍提高，直接材料成本和直接人工成本在产品成本中所占的比重大幅降低，而间接费用在产品成本中所占比重大幅上升。传统成本计算方法下间接费用采用单一的分配基础往往会造成各生产阶段或产品真实成本的扭曲，严重影响成本信息的准确性。随着企业生产工艺、产品结构、管理手段等方面的变化、不

毕赤酵母化学转化

（化学转化） 如果没有电转仪，LiCl转化是一种可供选择的方法，转化率是102到103cfu/ug。 主要过程为： 取过夜活化培养的菌液按1：1000接种于15ml新鲜的YPD液体培养基，30℃培养至OD600达到0.8-1.0；4℃，4500rpm离心5分钟，用8ml冰预冷的无菌水洗涤菌体，倾除洗涤液，用1mL ，4℃，4500rpm离心5分钟，沉淀用50μl冰预冷的100mmol/L LiCl悬浮，最后定容至80-90ml。 LiCl转化取适量单链鲑精DNA（2mg/mL）煮沸5min，立即置于冰上备用，取上述制备好的感受态细胞12 000rpm，离心15s，吸弃LiCl溶液，按顺序依次加入 50%PEG 240ml 1mmol/L LiCl 36 ml 单链鲑精DNA 25ml 线性化质粒DNA 10 ml (约10mg) 用吸头反复吹打，使细胞沉淀与加入的溶液混匀，30℃静置温育30min，42℃热击20-25min，4500rpm离心10min，吸弃转化液，细胞沉淀加1ml YPD培养基于30℃200 rpm培养2-4hr，取转化混合液100ml涂布含100μg/mL ZeocinTM 的YPDS平板，30℃培养2-3天。 LiCl 转化方法 作为电转化的替代方法，在线性化DNA条件下，转化效率介于102~103cfu/ug 之间 溶液： 1M LiCl 用无离子水溶解，过滤除菌。（稀释使用无菌水。） 50% PEG 3350 无离子水溶解，过滤除菌，密封保存 2mg/ml变性的鲑精DNA片段（10mM Tris-HCl，pH 8.0,10mM EDTA）-20℃保存。 准备感受态细胞： 1.在50ml YPD中，培养至OD600 在0.8~1.0之间（大约108个/ml）。 2.收集细胞，用25ml无菌水洗涤，1500g室温离心10min。 3.重悬细胞于1ml 体积的100mMLiCl中，将悬液转移至1.5ml离心管中。 4.使用最大转速离心15s，吸去LiCl上清。 5.重悬细胞于400ul体积的100mMLiCl中。 6.每个转化组取50ul细胞悬液置于1.5ml离心管中，立即使用。勿要存于冰上或冻存于 -20℃。 转化： 1.取1ml单链DNA鲑鱼精标准煮沸5min，后快速于冰上降温并存于冰上。注意：不需要 也不推荐在每次使用前煮沸载体DNA。分装冻存于-20℃，并且每使用3-4次后再次煮沸更加适宜。 2.离心上面步骤6的细胞，吸去残留的LiCl。 3.每次转化都要向细胞中顺次加入下列试剂。PEG可以保护细胞不会因高浓度的LiCl而受 到损伤。 I.240 ul50% PEG 3350 II.36 ul 1M LiCl III.25 ul 2mg/ml 单链鲑鱼精DNA IV.质粒DNA（5~10ul）溶于50ul无菌水中。

!!酵母双杂交操作步骤(中文翻译)

各种SD培养基： 1)SD/-ade（腺嘌呤）/-leu（亮氨酸）/-trp（色氨酸）/-his （组氨酸）(1000 ml)（？ “四缺”） 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -ade/-leu/-trp/-his DO supplement 0.60g （购买来就配好的） ; 葡萄糖20g (即2%) 2)SD/-leu/-trp/-his (1000 ml) 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -leu/-trp/-his DO supplement 0.62g ; （购买来就配好的） 葡萄糖 20g. (即2%) 3)SD/-leu/-trp (1000 ml) （？“二缺”） 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -ade/-leu/-trp/-his DO supplement 0.64g （购买来就配好的）; 葡萄糖 20g (即2%) 4)SD/-leu (1000 ml) 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -leu DO supplement 0.69g ; （购买来就配好的） 葡萄糖 20g (即2%) 5)SD/-trp (1000 ml) 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -ade/-leu/-trp/-his DO supplement 0.74g ; （购买来就配好的） 葡萄糖 20g (即2%) 注意：YNB有两种，一种含有硫酸胺，另外一种不含硫酸胺。我们这用的是含硫酸铵的。（买来就加进去了的）。如果不含硫酸铵，那么要在终浓度0.17%的YNB中再加入0.5%的硫酸铵，即最终在1000 ml溶液中加入总量为6.7g的YNB与硫酸铵。 实际配制的方法是： 1.配制40%的葡萄糖贮存液（贮存在4℃），过滤除菌，待高压灭菌的溶液温度降至55℃ 以下时，再将50ml葡萄糖贮存液加入。（李博士经验这一步不高压，过滤即可使用）2.酵母氮源6.7g，加DO supplement 在920ml水中溶解，调PH至5.8（李博士的经验大 约加10M NaOH 200ul即可），之后补水至950 ml。 3.高压完后待温度降至55℃以下，加入50 ml40%葡萄糖。

再造烟叶生产废水处理研究

验研究［Ｊ］．中国环境科学，１９９５，１５（１）：１－４． ［３］刘和．固定化微生物技术处理含酚废水［Ｊ］．中国给水排水，２００３， １９（５）：５３－５５． ［４］ＹａｎｇＰＹ．Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇｅｎｔｒａｐｐｅｄｍｉｘｅｄｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｅｌｌ（ＥＭＭＣ）ｐｒｏ－ ｃｅｓｓｆｏｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｍｏｖａｌｏｆｃａｒｂｏｎａｎｄｎｉｔｒｏｇｅｎｆｒｏｍｄｉｌｕｔｅｓｗｉｎｅｗａｓｔｅｗａｔｅｒ［Ｊ］．ＢｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００３，８６：２４５－２５２．［５］ＷａｎｇＪｉａｎｌｏｎｇ． Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｑｕｉｎｏｌｉｎｅｂｙｇｅｌｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｓｐ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｏｓｐｈｅｒｅ，２００１，４４：１０４１－１０４６．［６］ＬｕＣｈｉｈＪｅｎ．Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｌｓｂｙｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｐｕｒｅ－ ｃｕｌｔｕｒｅｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｗａｔ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈ．，１９９６，３４（１０）：６７－７２．［７］ＣｈｅｎＷｅｎ－Ｃｈｉｎ，ＣｈｅｎｇＳｈｅｎｇ－Ｓｈｕｎｇ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｍｍｏｂｉ ｌｉｚｅｄｃｅｌｌｓｉｎｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆＡＢＳｒｅｓｉｎｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇｗａｓｔｅｗａｔｅｒ［Ｊ］． Ｗａｔ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈ．，１９９６，３４（１０）：５１－５８． ［８］赵美云，雷中方．高效微生物菌种强化聚酯（ＰＥＴ）废水生物处理 的试验研究［Ｊ］．复旦学报（自然科学版），２００４，４３（４）：６４６－ ６５０． ［９］赵亚乾，杨镭．海藻酸钠包埋活性炭与活性污泥的固定化技术［Ｊ］． 上海环境科学，１９９７，１６（９）：２８－３０． ［１０］吴晓磊．海藻酸钠和聚乙烯醇作为固定化微生物包埋剂的研究 ［Ｊ］．环境科学，１９９２，１４（２）：２８－３０． ［作者简介］赵美云（１９７９—），在读硕士研究生。电话： １３８１８４４５０４０。 ［收稿日期］２００５－１０－１８（修改稿） 再造烟叶生产废水处理研究 邱晔１，２，胡群２，陈辉敏２，彭金辉１ （１．昆明理工大学，云南昆明６５００３１；２．云南烟草科学研究院，云南昆明６５０１０６） ［摘要］以再造烟叶（造纸法）生产废水为研究对象，对生产中两种主要工艺废水及生产综合废水进行了多项水质分析。研究结果表明，生产线中提取浓缩段与抄造成型段排放的工艺废水具有不同的水质特性，而生产综合废水则表现为一种弱酸性、中高浓度有机废水特性，可生化性较好。根据废水的上述特性，设计了一种“混凝—生化—脱色”的三级废水处理工艺并应用于２０００ｔ／ａ再造烟叶生产试验基地的废水处理中，工程实施运行后效果良好，吨水处理成本低，治理后的废水排放可达到国家《污水综合排放标准》ＧＢ８９７８—１９９６一级标准，该工艺具有推广应用于治理规模化再造烟叶生产废水或其他烟草类似废水的良好前景。 ［关键词］再造烟叶；生产废水；处理工艺［中图分类号］Ｘ７０３．１ ［文献标识码］Ｂ ［文章编号］１００５－８２９Ｘ（２００６）０３－００２３－０３ 第２６卷第３期２００６年３月 工业水处理 ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＷａｔｅｒＴｒｅａｔｍｅｎｔ Ｖｏｌ．２６Ｎｏ．３Ｍａｒ．，２００６ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｉｍｉｎｇａｔｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｗａｓｔｅｗａｔｅｒｐｒｏｄｕｃｅｄｆｒｏｍｔｈｅｗｏｒｋｓｈｏｐｏｆｔｈｅｐａｐｅｒ－ｐｒｏｃｅｓｓｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄｔｏｂａｃｃｏ，ａｓｅｒｉｅｓｏｆｗａｔｅｒｑｕａｌｉｔｙｔｅｓｔｓｈａｖｅｂｅｅｎｄｏｎｅｆｏｒｔｈｅｗａｓｔｅｗａｔｅｒｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｕｒｃｅｓｉｎｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｌｉｎｅｓ，ｓｕｃｈａｓｔｈｅｔｏｂａｃｃｏ－ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｓｐｏｔａｎｄｔｈｅｐａｐｅｒ－ｆｏｒｍｉｎｇｓｐｏｔ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｉｓｋｉｎｄｏｆｗａｓｔｅｗａｔｅｒｉｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆｓｕｂ－ａｃｉｄ，ｆｕｌｌｏｆｒｅｌａｔｉｖｅｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｒｇａｎｉｃｃｈｅｍｉｃａｌｓ，ａｎｄｄｅｇｒａｄａｂｌｅ．Ｆｏｒｔｒｅａｔｉｎｇｔｈｅｗａｓｔｅｗａｔｅｒ，ａｔｒｅａｔｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｓｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆｔｈｒｅｅｔｒｅａｔｉｎｇｓｔａｇｅｓ：ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ，ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，ａｎｄｄｉｓｃｏｌｏｒｉｓｄｅｓｉｇｎｅｄ．Ａｆｔｅｒｒｕｎｎｉｎｇｆｏｒ１８ｍｏｎｔｈｓ，ｉｔｓｈｏｗｓｔｈｅｔｒｅａｔｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｉｓｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｎｄｅｃｏｎｏｍｉｃｓｔｏｔｈｅｗａｓｔｅｗａｔｅｒ．Ｔｈｅｗａｔｅｒｑｕａｌｉｔｙｏｆｔｈｅｔｒｅａｔｅｄｗａｔｅｒａｃｃｏｒｄｓｗｉｔｈｔｈｅｇｒａｄｅ－１ｄｅｍａｎｄｓｏｆＧＢ８９７８—１９９６，ｗｈｉｃｈｗａｓｄｒａｆｔｅｄｂｙＣｈｉｎｅｓｅｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔｆｏｒｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｗａｓｔｅｗａｔｅｒ．Ａｎｄｔｈｉｓｔｒｅａｔｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｏｆｗａｓｔｅｗａｔｅｒｉｓａｌｓｏｅｘｐｅｃｔｅｄｔｏｔｒｅａｔｏｔｈｅｒｔｏｂａｃｃｏｗａｓｔｅｗａｔｅｒｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐａｐｅｒ－ｐｒｏｃｅｓｓｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄｔｏｂａｃｃｏ；ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｗａｓｔｅｗａｔｅｒ；ｔｒｅａｔｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓ Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｗａｓｔｅｗａｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｔｈｅ ｐａｐｅｒ－ｐｒｏｃｅｓｓｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄｔｏｂａｃｃｏ ＱｉｕＹｅ１，２，ＨｕＱｕｎ２，ＣｈｅｎＨｕｉｍｉｎ２，ＰｅｎｇＪｉｎｈｕｉ１ （１．ＫｕｎｍｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５００３１，Ｃｈｉｎａ； ２．ＹｕｎｎａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｏｂａｃｃｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０１０６，Ｃｈｉｎａ） ［基金项目］云南省技术创新人才培养专项基金（２００４ＰＹ０２－９） !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! ２３

酵母转化问题参考

5 Ways to Destroy Your Yeast Transformation by Emily Crow on 27th of July, 2011 in Cell / Tissue Culture Transforming yeast with DNA is a very similar process to transforming E. coli, but with just enough differences to trip you up if you let your attention slip. Whether you’re doing a yeast two-hybrid screen, or using yeast as a model system, here are a some mistakes to to avoid… 1. Forgetting to add single stranded DNA While E. coli readily takes up double-stranded DNA, yeast requires the addition of single-stranded “carrier DNA” to enhance uptake of your plasmid or fragment. If you only add your plasmid to the transformation mix, chances are you’ll be confronted with a pristinely sterile plate after three days of incubation. 2. Using old PEG PEG (polyethylene glycol) is a crucial ingredient in the yeast transformation buffer. Unfortunately, it’s annoying to make and goes bad quickly. The percentage of PEG will make or break the success of your transformation; an old PEG solution has had a chance to evaporate, so that the water to PEG ratio is off. If you can stand it, make new PEG for every transformation. Otherwise, make it in small batches, and seal tightly with parafilm between uses to minimize evaporation. 3. Using cells in stationary phase Cells in log phase, or exponential growth, take up DNA with much better efficiency. This is not to say that cells from a stationary culture can’t be transformed –only that your successful transformation rate will be much lower. Your best bet is to use cells that are growing rapidly at the time of transformation. 4. Using the wrong selective marker A stupid mistake, but one that I’ve made more times than I’d like to admit. Double check to save yourself some tears! 5. Cutting corners when heat-shocking This is a major difference between E. coli and yeast transformations: while E. coli is relatively delicate, and requires a heat-shock of less than a minute to take up DNA, the cell wall makes yeast more hardy and resistant to shock. Thus, for efficient transformation, yeast are generally heat-shocked for up to 45 minutes. I’ve gotten away with as little as 15 minutes, but any shorter and the transformation efficiency is drastically reduced. If you’re not in a hurry, let it go the whole 45 minut es, or you’ll get to experience the joy of doing it all over again.

造纸法再造烟叶工艺规范

造纸法再造烟叶工艺规范 编制说明 2017.10.

造纸法再造烟叶工艺规范 编制说明 一、工作简况 1．任务来源 国家烟草专卖局关于印发2014年度烟草行业标准制修订项目计划的通知》（国烟科〔2014〕127号）要求，《造纸法再造烟叶工艺规范》行业标准修订项目被国家烟草专卖局确定为2014年度烟草行业标准制修订项目之一。合同号：2014B028。 2．必要性 （1）国产造纸法再造烟叶已逐步成为中式卷烟重要而不可或缺的原料。 再造烟叶经过近10年的发展，在生产工艺流程、工艺控制水平，设备保障能力，产品技术含量、质量检测手段等日趋成熟，为制定工艺规范提供了必要条件。 （2）“卷烟上水平”对国产造纸法再造烟叶发展提出了更高的要求，客观上要求制定工艺规范来保障产品质量。 随着近年来造纸法再造烟叶质量水平的提高，卷烟企业在低焦油卷烟产品开发中普遍利用造纸法再造烟叶降低卷烟焦油，为低焦油卷烟产品的开发提供了一种新的原料，且缓解了部分企业烟叶紧张的局势。不同再造烟叶生产企业，根据卷烟生产企业产品风格的不同，生

产出各种风格或特殊功能的再造烟叶，满足了不同卷烟产品的需求。随着再造烟叶在卷烟产品中的大规模应用，为了确保卷烟产品质量，卷烟企业对再造烟叶提出了更高的要求，客观上要求制定工艺规范来保障再造烟叶产品质量。 （3）再造烟叶行业标准修改的需要 原标准于2002年颁发并实施，当时制定的各项指标主要是基于再造烟叶当时的技术水平：造纸法再造烟叶在国内还处于研发阶段，尚未形成大规模的成型产品，且没有相应的工艺规范，只有将部分过程控制指标和产品指标写进了行业标准中。而再造烟叶经过近10年的发展，生产工艺流程、工艺控制水平，设备保障能力，产品技术含量、质量控制手段等发生了显著变化，特别是造纸法再造烟叶生产规模，如今已有9个生产点生产不同风格的造纸法再造烟叶。为提高产品质量，顺应再造烟叶制造技术发展，满足工业企业多样性的要求，修改后的产品标准中不再涉及过程控制指标，因此有必要制定相应的工艺规范，确保产品质量的同时更好的满足卷烟企业对再造烟叶多样化要求。 3．项目承担单位、协作单位及主要分工 本项目由主要湖南中烟工业有限责任公司牵头，参加单位中国烟草总公司郑州烟草研究院、广东省金叶科技开发有限公司、云南中烟再造烟叶有限公司、河南卷烟工业烟草薄片有限公司、中国烟草标准化研究中心、福建中烟工业有限责任公司、上海烟草集团有限责任公

造纸法烟草薄片废水处理实例

造纸法烟草薄片废水处理实例 干仕伟 （广州市环境保护工程设计院有限公司，广东广州510115）摘要：造纸法烟草薄片废水具有水质水量变化大、有机物浓度高、固体悬浮物浓度较高、色度高等特点。本文介绍了絮凝-沉淀-气浮-脉冲上流式厌氧污泥床反应器（UASB）-好氧-气浮-臭氧曝气生物滤池（BAF）组合工艺在COD Cr浓度较高的烟草薄片废水治理上的应用，工程规模4000m3/d，该工艺自2011年12月投产至今处理效果稳定，各项出水指标均可达到广东省地方标准《水污物排放限值》（DB44/26-2001）第二时段第二类污染物最高允许排放浓度的一级标准。 关键词：烟草薄片废水；脉冲UASB；臭氧BAF； 中图分类号：X703文献标识码：A文章编号： 造纸法烟草薄片废水主要来源于萃取制浆、浆料洗涤、抄造白水溢流及其他洗涤废水。因此，烟草薄片生产废水含有大量的烟草物质、细纤维、以及水解了的半纤维素、木质素，具有有机污染物浓度高、悬浮物比重较轻、难于沉淀的有机物含量高、色度较高等特点。本工程实例处理的烟草薄片废水除了包括烟草薄片生产废水以外，还混合有生活污水和锅炉除尘废水。此外，该废水还具有间歇排放、废水成分复杂、水质水量变化大等特点。对于此类废水采用常规的处理方法难以达到排放要求，特别是COD Cr 和色度难以达标，因此工程处理难度较大。本工程实例针对废水的排放规律和特性，采用絮凝-沉淀-气浮-脉冲上流式厌氧污泥床反应器（UASB）-好氧-气浮-臭氧曝气生物滤池（BAF）组合工艺，该工艺自建成后运行稳定良好，出水达到广东省地方标准《水污物排放限值》（DB44/26-2001）第二时段第二类污染物最高允许排放浓度的一级标准。 1工程概况 1.1废水水质水量 设计水量为4000m3/d，进水和出水水质指标根据实测值及广东省《水污物排放标准》（DB44/26-2001）第二时段第二类污染物最高允许排放浓度的一级标准的要求确定，见表1。 表1进水和出水水质 项目进水水质排放标准 COD Cr/mg/L12000≤90 BOD5/mg/L5700≤20 SS/mg/L7000≤60 pH7-86-9 色度/倍2500≤40 1.2工艺流程 针对该企业间歇排放、水质水量变化大、悬浮物较多、有机物浓度高、色度高、成份复杂的特点，采用“物化＋生化”的处理工艺，具体设计工艺流程见图1。

作业成本法在企业的应用研究

XXXXXX大学毕业论文（设计）作业成本法在企业的应用研究 学院： 学生姓名： 学号： 专业： 年级： 完成日期：2016年3月22日 指导教师：

作业成本法在企业的应用研究 摘要 作业成本法作为一种全新的会计成本计算方法，是一种全新的会计管理模式。它源于美国，在欧美企业有一定的实施广度，也取得了不错的效果。但引入我国后，我国的企业却对此却难以实施，或者是实施效果一般。 本文将就作业成本法的概念、意义和使用条件进行说明，并与传统的成本计算方法进行对比分析，结合作业成本法在我国的使用情况，深入剖析其中的原因，对现阶段企业应用作业成本计算法提出建设性建议和措施。 关键词：作业成本法，应用研究

As a new accounting method, activity based costing is a kind of new accounting management mode. It comes from the United States, in Europe and the United States have a certain extent of the implementation of the enterprise, but also achieved good results. But the introduction of China, China's enterprises are difficult to implement this,or the implementation of the general effect. This article will discuss the activity-based costing concept, significance and conditions of use is described. And with the traditional cost calculation method were compared and analyzed, activity-based costing method in our country, in-depth analysis of the reasons and of enterprises at this stage of the application of activity-based cost calculation of extracting constructive suggestions and measures. Key words: activity based costing, application research

酵母双杂交操作步骤(中文翻译)

（酵母菌储存在-70℃中，引物和质粒DNA储存在-20℃中） 概念： 1. 次序转化:指的是先将一种质粒转化进酵母中（常是DNA-BD/bait plasmid），在选择培养基中选择出阳性克隆，之后再将另外一个质粒（AD fusion library）转化进去。优点：就是比共转化使用更少的质粒DNA，也就是节约质粒DNA。 2. 共同转化：将两种质粒一起转化进酵母中。优点：比次序转化更容易操作。 pGBKT7----的选择物是：kanamycin（卡那霉素）？ pGADT7----的选择物是：ampicillin (氨苄西林) ？ 各种SD培养基： 1) SD/-ade（腺嘌呤）/-leu（亮氨酸）/-trp（色氨酸）/-his （组氨酸）(1000 ml)（？“四缺”） 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -ade/-leu/-trp/-his DO supplement 0.60g （购买来就配好的）; 葡萄糖 20g (即2%) 2) SD/-leu/-trp/-his (1000 ml) 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -leu/-trp/-his DO supplement 0.62g ; （购买来就配好的） 葡萄糖 20g. (即2%) 3) SD/-leu/-trp (1000 ml) （？“二缺”） 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -ade/-leu/-trp/-his DO supplement 0.64g （购买来就配好的）; 葡萄糖 20g (即2%) 4) SD/-leu (1000 ml) 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -leu DO supplement 0.69g ; （购买来就配好的）

再造烟叶 热水可溶物含量的测定 索氏提取法(标准状态：现行)

I C S65.160 X85 备案号:69311 2019 中华人民共和国烟草行业标准 Y C/T571 2018 再造烟叶热水可溶物含量的 测定索氏提取法 R e c o n s t i t u t e d t o b a c c o D e t e r m i n a t i o no f t h e r a t i o o f h o tw a t e r s o l u b l e s S o x h l e t e x t r a c t i o nm e t h o d 2018-12-17发布2019-01-15实施

前言 本标准按照G B/T1.1 2009和G B/T20001.4 2015给出的规则起草三 请注意本文件的某些内容可能涉及专利三本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任三 本标准由国家烟草专卖局提出三 本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会(S A C/T C144/S C1)归口三 本标准起草单位:云南中烟工业有限责任公司二郑州烟草研究院二云南中烟再造烟叶有限责任公司二广东省金叶科技开发有限公司二中国烟草标准化研究中心二福建中烟工业有限责任公司二中烟施伟策(云南)再造烟叶有限公司二国家烟草质量监督检验中心二安徽中烟工业有限责任公司二河南卷烟工业烟草薄片有限公司二上海烟草集团太仓海烟烟草薄片有限公司二杭州利群环保纸业有限公司三本标准主要起草人:吴丽君二王保兴二徐亮二白晓莉二倪军二殷艳飞二李正勇二李栋二段如敏二李华杰二徐广晋二陈宸二叶长文二张文军二唐纲岭二周桂园二葛少林二陈正春二刘晶二林瑜二郑创雄二李跃锋二田泱源二李新生二陶丰三

酵母转化

酵母转化（By HMM） 1.取50mL YPD液体培养基于100mL已灭菌的三角锥形瓶中，从中吸取1mL培养基于已灭菌的管，挑单克隆接种于1mL YPD培养基中，吹吸混匀（可再vortex继续混匀）后转移至50mL 的YPD液体培养基中，过夜培养约11h45min； PS: 晚上21:15开始准备，21:30接种完毕开始摇菌。（30℃ 250rpm）。 2.第二天早上9:15开始准备，取出1mL菌液用于测OD600，用1mL YPD培养基作为Blank. 9:30测完。 PS: a.要求OD600在至之间。 b.测完OD后打冰盒，将ssDNA置于冰上融化。 3.将菌液分装在2支50mL离心管（蓝色，无菌）中（锥形瓶留用），2500Xg常温离心5min.弃上清于之前的锥形瓶中，各用1mL灭菌ddH2O重悬转移至管中，共水洗两次，再各用1mL 灭菌ddH2O重悬后转移至同一个5mL无菌EP管中，吹吸混匀置于冰上。 PS：a.离心期间将灭菌水置于65℃烘箱中预热，将所需平板置于30℃培养箱中预热。 b.为避免菌液浓度差异，故将重悬后的菌液混匀，因重悬后体积大于2mL，因此转移至5mLEP管中，也可在2mL EP管中混匀后分装出一部分在一个管中。 4.待ssDNA溶化后根据所需量在无菌管中分装几管，各100uL（有助于煮沸后迅速冷却）。 PS: a. ssDNA要尽量多出一些，煮沸和转移过程中均有损失。 b.看ssDNA快融化时即可打开水浴锅，中频煮沸（800即可），煮沸ssDNA时用最低频120. 5.将ssDNA沸水浴5min, 然后迅速冰浴5min; PS：a.重复沸水浴5min与冰浴5min可提高转化效率。 b.冰浴ssDNA时将50％PEG与1M LiOAc也置于冰上。 6.在超净台中配制mix，vortex混匀。

作业成本法的影响及其应用

作业成本法的影响及其应用 现代企业要在激烈的市场竞争中生存和发展，谋求其股东财富最大化，必须对其投入物一各 种生产要素（即资源）进行合理配置和有效使用，使其产出物的代价（即产品成本）最小。作业成本法是适应现代企业和制造环境而产生，弥补了传统成本会计在现代企业制造系统中的一 些缺陷。 一、作业成本法的特征 （一）作业成本法根据“产品消耗作业、作业消耗资源”的指导思想对成本计算方法进行 了根本性的变革。它着眼于依据作业资源的消耗情况（资源动因），将资源成本分配到作业， 再依据作业对最终产品的贡献方式（作业动因），将作业成本迫踪到产品，由此得出最终产品 的成本。 （二）作业成本法不再直接区分直接费用和问接费用，而将它们都视为产品消耗作业所什 出的代价同等对待。对直接费用的确认和分配，作业成本法与传统成本计算并无差别；对间接费用的分配则不局限于单一的工时或机时分配标准。而是依据作业成本动因，采用多样化 分配，从而使成本的归属性大大提高，所得出的产品成本信息更为客观、真实。 （三）作业成本法不仅是一个成本分配、计算的过程，更重要的是依据因果关系分析资源 流动的过程首先要根据市场发出的信息决定该生产哪些产品，生产多少，分析生产这些产品 需要哪些作业及其数量，然后再分析完成这些作业需要哪些资源。这一系列的分析不仅提供 了分配资源成本和作业成木的依据，而且也为管理者进行成本预测、决策和控制提供了翔实、准确的资料。 （四）作业成本法融合了作业管理和过程管理等先进的管理思想。作业管理的出发点是将 企业看作由顾客需求驱动的系列作业组合成的作业集合，在管理中以努力提高增加顾客价值 的作业效率，消除遏制不增加顾客价值的作业为方向。过程管理是对作业链、价值链进行分 析和管理，找出企业业务活动各个环节的症结。作业成本法不仅是先进的成本计算方法，也是成本计算与成本控制相结合的全面成本管理制度，它融合了作业管理、过程管理等先进的 管理思想，形成了一个综合管理体系。 二、作业成本法对传统成本管理的影响 作业成本法促使人们对传统成本管理的企业观和成本观进行重新思索，形成了新的企业 观和成本观。 （一）断的企业观。传统成本管理将企业作为一个职能价值链来看待，这个职业价值链是由1.研究与开发；2.产品、服务或生产过程的设计；3.生产;4.营销;5.配送6客户服务这样一系列企业职能组成，企业通过这些职能逐步使其产品或劳务具有有用性。在新的制造环境下， 企业组织价值链被进一步扩展，“扩展的价值链”强调这种观点：（上游货各方和“下游，’（如顾客整个价值链分析的基本组成部分。“扩展的价值链”分析以“从摇 篮到坟墓”方式管理的产品或服务相关的所有企业职能为中心，而不管那些职能是在同一部 门内发生，还是在一系列的法律上非独立的组织中发生。 作业成本法把企业看作是多职能组合的价值链，并以多职能为中心进行管理，这是与日 益激烈的国际竟争相适应的。与此不同的是，传统成本管理主要关注企业的生产职能，而忽

酵母感受态的制备(化学法)

1、毕氏酵母氯化锂转化法 （1）试剂 1M LiCl（用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌；必要时用消毒去离子水稀释） 50% PEG3350（Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装） 2mg/ml salmon sperm DNA / TE（10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA）-20℃保存 注：醋酸锂对毕氏酵母无效，仅氯化锂有效；PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用； （2）感受态毕氏酵母的制备 接种Pachia pastoris到50ml YPD培养基中，30℃摇菌过夜（约24～28h）培养到OD值为0.8～1.0（约108 Cells/ml）； 收获细胞，用25ml无菌水洗涤一次，室温下1500g离心10min； 重悬细胞于1ml 100mM LiCl溶液中，将悬液转入1.5ml离心管； 离心机最大速度离心15秒沉淀菌体，重悬菌体于400ul 100mM LiCl溶液中； 按50ul/管分装，立即进行转化； 注：不要将感受态酵母菌冰浴； （3）毕氏酵母的转化 煮沸1ml鲑鱼精DNA 5min，迅速冰浴以制备单链担体DNA； 将感受态酵母菌离心，以Tips去除残余的LiCl溶液； 对于每一个转化，按以下顺序加入： 50% PEG3350 240ul

1M LiCl 36ul 2mg/ml 单链Salmon sperm DNA 25ul 5～10ug/50ul H2O 质粒DNA 50ul 剧烈旋涡混匀直至沉淀菌体完全分布均匀（约1min）； 30℃水浴孵育30min； 42℃水浴热休克20～25min; 6000～8000rpm离心收集酵母菌体； 重悬酵母于1ml YPD培养基，30℃摇床孵育； 1～4h后，取25～100ul菌液铺选择性培养基平板，于30℃培养2～3天鉴定； 2、毕氏酵母PEG1000转化法 （1）试剂 缓冲液A：1.0M Sorbitol，10mM Bicine，pH8.35（sigma）,3%（v/v）ethylene gl ycol 缓冲液B：40%（w/v）PEG1000（sigma），0.2M Bicine，pH8.35 缓冲液C：0.15M NaCl，10mM Bicine，pH8.35 未污染的新鲜、试剂级DMSO，-70℃保存 注： 缓冲液A、B、C均用滤膜过滤，-20℃保存; 将DNA直接加在冻结的酵母细胞上是本实验的关键之处（即使在冰上解冻的待转化细胞，其摄取外源DNA的能力也在解冻过程中迅速下降；如进行多样品的转化，建议按6样品/组进行）; （2）待转化毕氏酵母的制备

外加纤维造纸法再造烟叶生产过程中的应用研究进展

外加纤维造纸法再造烟叶生产过程中的应用研究进展 摘要：本文主要总结了不同种类外加纤维对造纸法再造烟叶质量的影响以及外加纤维的含量对造纸法再造烟叶物理指标的影响。 关键词：外加纤维；造纸法再造烟叶；质量；物理指标 在现代再造烟叶生产中制作烟草薄片有三种方法：堒压法、稠浆法、造纸法，造纸法是三种技术中应用较为广泛的[1]，相较于其他两种工艺技术造纸法本身具有很多优势：密度小、燃烧性能好、焦油量释放率低、填充值高、耐机械加工性能好、外观色泽好等[2]。造纸法的应用充分的实现了废烟料再利用的途径。是再造烟叶生产过程中的主要方法[3]。因烟草浆料含有的成分比较特殊，在再造烟叶的生产过程中不能达到其物理要求，所以在加工过程中我们加入外加纤维，通过外加纤维用量改变对再造烟叶影响。仅仅通过加入外加纤维改变烟草薄片的物理变化还不能最大化的利用外加纤维再生过程中的作用。我们还需要对外加纤维的种类进行选择。 一、不同种类的外加纤维对造纸法再造烟叶的影响 目前我国选用造纸法再造烟叶的外加纤维多为漂白针叶浆、阔叶浆。随着科技的发展人们可以选择的外加纤维种类越来越多。选取不同种类的的外加纤维对再造烟叶的影响不同，本文主要是考察外加纤维在再造烟叶中抗张强度、松厚度、柔软性的比较[4]，对比各种外加纤维在造纸法再造烟叶的作用。 1.1外加纤维针叶木浆打浆和阔叶木浆打浆对造纸法再造烟叶的影响 通过刘良才[4]实验研究表明针叶木浆打浆和阔叶木浆打浆的增加，烟草薄片的抗张能力逐渐上升，松厚度逐渐下降，但是幅度较小。这是因为随着外加纤维打浆度的提高，纤维之间结合面积增大，分子之间氢键的结合数量增加，因此提高烟草薄片的强度打浆度也随之提高，暗示也导致了松厚度和柔软性的下降。在再造烟叶生产过程中单一的提高抗张能力是不够的，我们还要有松厚度和柔软度。所以我们需要一个平衡点既提高了烟草薄片的抗张能力又保持其柔软性和松厚度，那么在选取打浆料时选取打浆度较低的浆料。选取针叶木浆打浆度为20°SR，选取阔叶木浆打浆度为16°SR～18°SR。 1.2外加纤维蔗渣纤维打浆对造纸法再造烟叶的影响 李文昱[5]在试验中得出在造纸法再造烟叶中蔗渣纤维相对于木浆纤维成本更低，在生产过程中大大节省了经济资源，并且纤维含量较烟梗纤维含量高，在再造烟叶生产过程中纤维含量明显提高。通过曾健[6]实验可以得出木浆纤维含量在3%～15%抗张强度最大。采用相同方法抄样，测定其物理指标得出在纤维含量5%、10%、15%、20%中蔗渣纤维在5%～10%中抗张强度最适合打浆。