神经元特异性烯醇化酶在肺结核检测中的作用

过氧化物酶活性测定

过氧化物酶（POD）活性测定 一、原理： 过氧化物酶含铁，广泛存在于植物组织中，可催化过氧化氢氧化酚类，产物为醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其他分子缩合，产生颜色较深的化合物。本实验以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）为过氧化物酶的底物，当有H2O2 存在时，过氧化物酶可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的4-邻甲氧基苯酚，其在470nm处有最大吸收峰，故可用分光光度计在470nm处测定其吸光值，即可求出该酶的活性。 二、实验准备： 仪器：分光光度计、离心机、秒表、研钵、磁力搅拌器、移液管、电子天平、冰箱、100ml 容量瓶、试管、胶头滴管、试管架、烧杯、吸水纸、比色皿、剪子 试剂： 0.05 mol/L愈创木酚；2%H2O2； pH 6.0的磷酸缓冲液；75%酒精；蒸馏水 试剂配制: ○1pH 6.0的磷酸缓冲液:0.2mol/l NaH2PO4 (27.6g NaH2PO4?H2O 用蒸馏水配成1000ml）取87.7ml和0.2mol/l Na2HPO4 （71.7g Na2HPO4?12H2O 或53.65g Na2HPO4?7H2O 用蒸馏水配成1000ml）取12.3ml后混合，用蒸馏水稀释至200ml即可。 ○22%H2O2：取6.7ml 30%H2O2于烧杯中，再加入93.3mL蒸馏水（或加蒸馏水稀释至100mL），搅拌均匀。 ○30.05 mol/L愈创木酚：准确称取6.2g愈创木酚，再用95%的乙醇配制定容至100ml即可。 三、步骤： ○1粗酶液的提取：称取一定质量的植物材料放入研钵中，加入提取液1 mL(pH 6.0的磷酸缓冲液)，研磨，再加入9 mL提取液，将匀浆全部转入离心管中，于4 000 r/min 4 ℃离心10 min，上清液即为酶的粗提取液，收集上清液于冷处（冰箱4℃保存）。 ○2酶活性的测定：将4 mL反应混合液( pH 6.0的磷酸缓冲液2 mL,酶液1 mL,0.05 mol/L 愈创木酚1 mL)和1 mL 2% H202加入试管中立即摇匀并迅速倒入比色皿中，于470 nm波长下用U 2800型紫外可见分光光度计比色，立刻记录吸光度值，以后每15 s记录1次，记录

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒说明书

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：体液 神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒试验原理： BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。 神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒操作注意事项 1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 试剂的准备 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。 2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。 神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒操作步骤 1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。 2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。 4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

腺苷脱氨酶测定试剂盒(过氧化物酶法)产品技术要求lepu

腺苷脱氨酶测定试剂盒（过氧化物酶法） 适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清中腺苷脱氨酶的活性。 1.1 规格 试剂盒是由试剂1和试剂2组成的液体双试剂，校准品和质控品均为冻干粉。规格及装量见表1。 表1 规格及装 量

1.2 主要组成成分试剂1主要组分: 试剂2主要组分： 校准品主要组分： 质控品主要组分：

2.1 净含量 应不低于试剂瓶标示装量。 2.2 外观 试剂1：无色或淡黄色透明溶液；试剂2：无色或淡黄色透明溶液；校准品：白色至浅黄色冻干粉，复溶后为无色至浅黄色透明液体；质控品：白色至浅黄色冻干粉，复溶后为无色至浅黄色透明液体。外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。 2.3 试剂空白 2.3.1 试剂空白吸光度 在546nm（540nm-550nm）处测定试剂空白吸光度，应≤0.3； 2.3.2 试剂空白吸光度变化率 试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.1。 2.4 分析灵敏度 测试100U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.0065 。 2.5 准确度 使用国际参考品（BCR647）对试剂（盒）进行测试，相对偏差应不大于±15%。 2.6 重复性 变异系数（CV）应不超过10％。 2.7 线性 2.7.1在(0,150]U/L区间内，线性回归的相关系数r应不低于0.990；

2.7.2（0,40）U/L区间内绝对偏差不超过±6U/L；[40,150]U/L区间内相对偏差不超过±15%。 2.8 批间差 对同一份样品进行重复测定，相对极差＜15％。 2.9校准品批内瓶间差 变异系数（CV）应≤10%。 2.10 质控品批内瓶间差 变异系数（CV）应≤10%。 2.11溯源性 根据GB/T 21415-2008的规定，本试剂盒内校准品溯源至国际参考物质BCR647。 2.12质控品赋值有效性 质控品测值应在靶值范围内。 2.13 稳定性 2.1 3.1效期稳定性 原包装的试剂盒在2℃～8℃条件下贮存达到18个月后的试剂进行检测，应符合2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.12之规定。 2.1 3.2复溶稳定性 a)校准品复溶后在2℃～8℃密闭避光保存，稳定期为7天，稳定期满后1天内，性能应符合2.5之规定。 b)质控品复溶后在2℃～8℃密闭避光保存，稳定期为7天，稳定期满后1天内，性能应符合2.12之规定。

神经元特异烯醇化酶检测作业指导书医学检验

《文件已阅声明表》 《Procedure circulation form》 文件名称: 神经元特异烯醇化酶检测作业指导书表号: KM-MP03?02?02 《文件修改记录页》

《Procedure amendment form》 表号:KM-MP03.02.03 《文件信息表》 《Procedure information form》表号:KM-MP03?02?04

神经元烯醇化酶（NSE）检测作业指导书 （Standard operation procedure for analysis of NSE）1.原理（Test principle）: 反应原理“三明治”法，总检测时间：18 分钟。 第一次孵育：20μl 标本和一份生物素抗NSE 特异性单克隆抗体一起孵育，一份钌复合体标记的NSE 特异性单克隆抗体后，反应形成一“三明治”样抗原－抗体复合

体。 第二次孵育：加入链酶亲和素包被的微粒，复合体在链酶亲和素和生物素相互作用下形成固相。将反应液吸入检测池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。未结合的物质通过ProCell 除去。在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。 通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线是通过2 定标点和试剂条形码上获得的主曲线生成的。 2.样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）: 2.1样本收集（specimen collection）：类型（type）：血清（serum）；用量（volume）50μL，仪器加样量（sample volume ）20μL。 2.2拒收标本（specimen rejection）：EDTA抗凝血、严重脂血标本、接受过鼠单克隆抗体者、严重溶血（hemolysis）标本拒收 2.3标本储存条件(sample storage conditions)：室温（room temperature）保存6小时； 2-8℃24小时； -20℃3个月；十五天后处理标本。 2.4其他（others）：为避免纤维蛋白对结果的影响，必须确定离心处理前样本已经完全充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。 3.试剂(Reagent)： 3.1Elecsys NSE 试剂盒, 产品目录号12133113 3.1.1试剂内组份： 试剂包装，100个检测 M 链酶亲和素包被的微粒（透明瓶盖）每瓶6.5ml 链酶亲和素包被的微粒：0.72mg/ml，结合力：470ng 生物素/mg 微粒，微粒经防腐处理。 R1 生物素化NSE 特异性抗体（灰色瓶盖）每瓶10ml。生物素化单克隆抗NSE 抗体18E5 （小鼠）：2mg/L；磷酸盐缓冲液：100mmol/L，PH值7.4；经防腐处理。 R2 钌复合物标记的NSE 特异性抗体（黑色瓶盖）每瓶10ml。钌复合物标记抗NSE 单克隆抗体（小鼠）：84B10 1.0mg/L； 磷酸盐缓冲液：100mmol/L，PH 值7.2；经过防腐处理。 3.1.2未随试剂盒提供的组分 Modular Analytics COBAS601 免疫分析仪所需材料:

植物组织中过氧化物酶活性的测定

实验四植物组织中过氧化物酶活性的测定 一、实验目的： 1、学习测定植物组织中过氧化物酶活性的方法。 二、实验原理： 过氧化物酶（POD）广泛存在于植物体中，该酶催化H2O2氧化，以清除H2O2对细胞生物功能分子的破坏作用。在有H2O2存在的条件下，过氧化物酶使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测定470nm处茶褐色物质的生成量以检测POD活性。 三、实验仪器及材料： 1、仪器：研钵、剪刀、天平、量筒、试管、分光光度计、移液管、比色皿、离心机、秒表 2、材料与试剂：苹果、经逆境处理的绿豆幼苗、反应混合液、20mmol/LKH2PO4 四、实验步骤： 1、POD的提取 分别称取绿豆幼苗、苹果果肉各2g,分别加入预冷的10ml 20mmol/LKH2PO4，于研钵中研磨成匀浆，以4000r/min离心10min，收集上清液，待用。 2、POD活性的测定 取分光光度计比色杯2只，在其中一只加入3ml反应混合液和1ml KH2PO4作为对照；另一只加入3ml反应混合液，1ml苹果上清液，立即开启秒表计时，测定470nm处OD值，每隔30s读数一次。 取1ml绿豆幼苗上清液重复上述操作。 五、实验结果： 1、在酶液中加入3ml反应混合液后，苹果酶液立即呈茶褐色，而绿豆幼苗酶液的茶褐色深至黑褐色。 2、苹果酶液以及绿豆幼苗酶液在470nm处OD值如下： 苹果酶液OD值与时间的关系曲线图

以每分钟光密度（OD470nm）变化0.01为一个过氧化物酶活力单位，即： 苹果POD活性=[ΔOD470/(0.01×wt)] ×D =[（0.28－0.249）/（0.01×3×2）] ×D=0.52D （此值忽略稀释倍数） 其中w为样品鲜重，t为反应时间，D为稀释倍数 绿豆幼苗酶液OD值与时间的关系曲线图 绿豆幼苗POD活性=[ΔOD470/(0.01×wt)] ×D =[（0.940－1.56）/（0.01×3·2）] ×D =6.3 D （此值忽略与苹果酶液相同的稀释倍数） 由于绿豆幼苗酶液浓度较大，测OD值前稀释了两倍，所以绿豆幼苗酶液POD 活性为12.67D 六、结果分析： 1、由苹果酶液OD值与时间的关系曲线图中，OD值与时间的关系基本呈线性关系，故任取变化较均匀的一段数据均可计算出POD活性。 2、由于仪器较少，等待测OD值的时间较长，且没有放在低温下保持，导致酶活性的测定结果出现一定的偏差。

神经系统的组成和功能

神经系统的组成和功能 神经系统的组成： 人体神经系统是由脑、脊髓和它们 所发出的神经组成的。其中，脑和脊髓是 神经系统的中枢部分，组成中枢神经系 统；脑神经和脊神经是神经系统的周围部 分，组成周围神经系统。神经系统的组成 可概括为： 神经元： 神经元又叫神经细胞，是神经系统结构和功能的基本单位。 脑： 脑位于颅腔内，包括大脑，小脑和脑干三部分 （1）大脑 大脑由左、右两个大脑半球组成。大脑皮层是覆盖大脑半球表面的一层灰质，大脑皮层表面具有许多深浅不同的裂或沟以及沟裂之间隆起的回，因而大大增加了大脑皮层的总面积和神经元的数量。大脑皮层是调节人体生理活动的最高级中枢，其中比较重要的中枢有：躯体运动中枢(管理身体对侧骨骼肌的运动)、躯体感觉中枢(与身体对侧皮肤，肌肉等处接受刺激而使人产生感觉有关)、语言中枢(说话、书写、阅读和理解语言关，为人类特有)、视觉中枢(与产生视觉有关)。 （2）小脑 小脑位于脑干背侧、大脑的后下方。小脑的主要功能是使运动协调、准确，维持身体的平衡。人喝酒喝醉了，走路摇晃，站立不稳，这是由于小脑被酒精麻痹而引起的。 （3）脑干 脑干灰质中，有一些调节人体基本生命活动的中枢，如心血管运动中枢、呼吸中枢等。如果这一部分中枢受到损伤，会立即引起心跳、呼吸停止而危及生命。 脊髓： 脊髓位于脊柱的椎管内，上端与脑相连，下端与第一腰椎下缘平齐。脊髓是脑与躯体、内脏之间的联系通道。 （1）脊髓的结构 从脊髓的横切面可以看出，脊髓包括灰质和白质两部分。灰质在中央，呈蝶形；白质在灰质的周围。白质内的神经纤维在脊髓各部分之问以及脊髓和脑之间，起着联系作用。（2）脊髓的功能 反射功能：人的脊髓灰质里有许多低级中枢，可以完成一些基本的反射活动，如膝跳反射、排便反射等。但是，脊髓里的神经中枢是受大脑控制的。 传导功能：脊髓能对外界或体内的刺激产生有规律的反应，还能将这些刺激的反应传导到大脑。反之，脑的活动也要通过脊髓才能传递到身体各部位。因此脊髓是脑与躯干、内脏之间联系的通道。

神经元特异性烯醇化酶临床意义

神经元特异性烯醇化酶临床意义： (1)小细胞肺癌患者(SCLC)血清NSE明显增高，60-81%小细胞肺癌病例NSE浓度升高。尽管NSE浓度与转移部位或脑部转移没有相关性，但是与临床分期如疾病进展有很好的相关性。NSE的诊断灵敏度达80%，特异性达80%～90%，而非小细胞肺癌(NSCLC)患者并无明显增高，故可作为SCLC与NSCLC的鉴别诊断。血清NSE水平与SCLC的临床分期呈正相关，因此，血清NSE检测对SCLC的监测病情、疗效评价及预测复发具有重要的临床价值。 (2)神经母细胞瘤时，NSE阳性率可达96%～100%，其测定值明显增高，血清NSE 水平与病期及预后相关。测定血清NSE对该类肿瘤的早期诊断及预后判断具有较高的临床价值。 (3)血清NSE增高还可见于少数NSCLC、甲状腺髓样癌、嗜铬细胞瘤、转移性精原细胞癌、黑色素瘤、胰腺内分泌瘤等。 临床医学的研究表明，神经元特异性烯醇化酶(NSE)是一种在临床上很有应用价值的分子学标记物。这是从2个方面的应用来评述的，一是NSE可以作为肺癌和儿童神经母细胞瘤的肿瘤标记物，用于肺小细胞癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)的鉴别诊断；监测肺小细胞癌和神经母细胞瘤的病情、治疗反应和预报复发。二是NSE的活性改变同神经损伤所致的许多神经性疾病关系密切。本文将主要对NSE作为一种有用的肿瘤标记物来评述其临床意义。 胸膜腔穿刺记录 患者入院诊断“冠状动脉粥样硬化性心脏病心功能II-III级右侧胸腔积液右肺占位？高血压病脑梗塞”，为缓解症状及明确胸水原因，予以胸腔置管，相关利弊均已向患者家属说明，表示理解，患者取坐位，穿刺点定于右肩胛下线第9肋间为穿刺点，常规消毒，2%利多卡因自皮肤至胸膜壁层逐层浸润麻醉后，胸穿针自穿刺点刺入胸腔，沿穿刺针导入导丝，沿导丝导入深静脉导管，深度约12cm，胶布固定，术中术后患者无不适，外接引流袋，引流出黄色胸水800ml，予封管，胸水标本患方拒绝检查，嘱注意休息，继续给予休息、抗血小板、减轻心脏负荷、活血化瘀对症支持治疗，注意病情变化。

过氧化物酶活性的测定

过氧化物酶活性的测定（比色法） 过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。 在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量470 nm 处的吸光度变化速率来测定过氧化物酶活性。 一、仪器、药品与材料 （一）实验材料 新鲜植物组织。 （二）仪器与用品 分光光度计，研钵，恒温水浴锅，100 mL 容量瓶，吸管，高速冷冻离心机，秒表，磁力搅拌器。 （三）试剂 １．愈创木酚。 ２．30％过氧化氢。 ３．100 mmol/L 磷酸缓冲液pH 6.0。 ４．反应混合液：取100 mmol/L 磷酸缓冲液（pH 6.0）50 mL 于烧杯中，加入愈创木酚28 μL，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30 % 过氧化氢19 μL，混合均匀，保存于冰箱中备用。 二、实验步骤 1．称取植物材料0.1 g ，剪碎，放入研钵中，加入适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，残渣再用5 mL 磷酸缓冲液提取一次，以4000 rpm 低温离心15 min ，上清液即为粗酶液，定容至10 mL刻度，贮于低温下备用。 2．取2支试管，于1只中加入反应混合液3 mL 和磷酸缓冲液1mL，作为对照，另1支中加入反应混合液3 mL和上述酶液1mL（如酶活性过高可稀释之）。迅速将两支试管中溶液混匀后，倒入比色杯，置于分光光度计样品室内，立即开启秒表记录时间，于470 nm 处测定吸光度（OD）值，每隔10S读数一次。

急性脑梗死患者神经元特异性烯醇化酶水平检测的临床意义

急性脑梗死患者神经元特异性烯醇化酶 水平检测的临床意义 （作者： ________ 单位：____________ 邮编： ___________ ） 【关键词】急性脑梗死；神经元特异性烯醇化酶；梗死面积；认知功能障碍 因急性脑梗死（ACI）常伴有较高的病死率和致残率，故临床医生对其病情发展及预后判断十分重视。神经元特异性烯醇化酶（NSE）是一 种细胞内蛋白质，特异地存在于神经细胞和神经内分泌细胞。当缺血、缺氧、中毒或损伤时，细胞膜的完整性受到破坏，NSE便从细胞内释放出来。动物实验表明，脑脊液NSE可用来判断脑梗死急性期脑损伤程度和鉴别脑的可复性与不可复性变化，这是许多现代影像学技 术如CT磁共振成像等所不能代替的〔1〕。本文检测206例ACI患者血清NSE水平，探讨其对ACI病情及预后判断的临床意义。 1对象与方法 1.1研究对象2008年1月至2009年12月我科住院ACI患者206 例，男112例，女94例，年龄48~79〔平均（5 2.3 士 2.8）丨岁。病程

4~24 h;均符合全国第四届脑血管病学术会议修订的标准〔2〕，并经头颅CT和（或）MRI证实。正常对照组为同期我院健康查体者120 例, 其中男女各半，年龄50~80〔平均(55.3 士 2.1)丨岁，排除心血管疾病、糖尿病及最近有感染史、严重肝肾功能障碍及外伤者。ACI组于入院次日清晨以及正常对照组体检日清晨抽取空腹静脉血，分离血清保存待测。根据患者临床神经功能缺损程度评分标准〔3〕按病情轻重分为轻度组69例，年龄49~72岁，男42例，女27例；中度组56 例,年龄52~79岁，男28例，女28例；重度组91例，年龄48~75岁，男42例，女39例。参照陈明生等〔4〕对脑梗死灶大小的分类标准， 将患者分为大面积梗死组(10 cm3)65例，男37例，女28例，年龄 50~72岁；中面积梗死组(5?10 cm3)77例，男43例，女34例，年龄48~75岁；小面积梗死组(5 cm3)64例，男女各半，年龄49~79岁。根据简易精神状态检查量表(MMSE于入院当天对ACI患者认知功能进行评定。MMS评分小于等于参考值者〔评分标准：满分30分,文盲W 17分；小学(受教育年限w 6年)<20分；初中及以上者w 4分〕为脑卒中后认知功能障碍者124例;评分24分者为非脑卒中后认知功能障碍者82例。根据MMS评分结果，将脑卒中后认知功能障碍者分为轻度组52例，男30例，女22例，年龄48~76岁；中度组38例，男20例，女18例，年龄52~73岁；重度组34例，男18例，女16例，年龄 50~79岁。 1.2标本采集和处理ACI组于入院次日清晨以及正常对照组体检日

过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制

过氧化物酶（POD ）活性测定 【实验原理】 过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H 202存在条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。 【实验试剂】 愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L 磷酸缓冲液（pH6.0）、反应混合液[100mmol/L 磷酸缓冲液（Ph6.0）50mL ，加入愈创木酚28uL,加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢19uL ，混合均匀保存在冰箱中] 【方法步骤】 （1）、粗酶液的提取 称取小麦叶片0.25g ，加20mmol/LKH2PO4 2.5mL ，于研钵中研成匀浆，以4000r/min 离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO4 2.5mL 提取一次，全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液(酶活性过高，稀释10倍)。 （2）、酶活性的测定 取试管3只，于一只中加入反应混合液3mL ，KH2PO41mL ，作为校零对照，另外三只中加入反应混合液3mL ，稀释后的酶液1mL （如表1），立即开启秒表，于分光光度计470nm 波长下测量OD 值，每隔1min 读数一次（4min ）。以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD 值增加0.01定义为一个活力单位。 表1 紫外吸收法测定POD 酶活性配置表 4.结果计算 以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min · g （鲜重） ]表示之。也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。 POD 总活性[u/g(FW)]= 式中：POD 总活性以酶单位每克鲜重表示。其中 △470=ACK-AE 比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示。 ACK ——照光对照管的吸光度。 AE ——样品管的吸光度。 Vt ——样品液总体积，mL 。 FW t V . V A T ? ? ? ? 1 470 01 0 ?

神经元特异性烯醇化酶临床意义

神经元特异性烯醇化酶 神经元特异性烯醇化酶(Neuron—specific enolase，NSE)是神经母细胞瘤的肿瘤标志物，由于小细胞肺癌(SCLC)是最常表现由神经内分泌性质的肿瘤，目前NSE也是SCLC 最敏感最特异的肿瘤标志物。近年来，NSE作为神经元损伤的敏感性和特异性标志其与中枢神经系统疾病的关系已引起了国内外学者的极大关注。 一、生化特性 NSE是催化糖原酵解途径中甘油分解的最后的酶。由3个独立的基因片段编码3种免疫学性质不同的亚基α、β、γ，组成5种形式的同工酶αα、ββ、γγ、αγ、βγ。二聚体是该酶分子的活性形式，γ亚基同工酶存在于神经原和神经内分泌细胞的胞浆中，称为NSE。α亚基同工酶定位于胶质细胞，其结构和免疫学特性与肝脏中的烯醇化酶相同，称为非神经原特异性烯醇化酶(NNE)；NSE和NNE的分子量分别为78kD和87kD。 二、测定方法与正常参考值 烯醇化酶的测定方法主要有两类，一是酶活性测定法，一是酶含量测定法。酶活性测定法主要有直接分光光度法、酶偶联速率法、生物发光法和琼脂糖凝胶电泳法等，酶含量测定主要采用免疫化学法。 目前NSE测定最常用的方法有RIA和ELISA两种，RIA有放射污染，而ELISA无RIA的不足，并且灵敏度较高。国内陈惠鹏等建立的ABC-ELISA灵敏度为2ng/ml;军事医学科学院建立的ELISA测定试剂盒，灵敏度达1ng/ml,且操作简便，重复性好。最近国外学者报道用时间分辨荧光免疫分析法测定血清NSE,其重复性好，灵敏度、特异性与RIA法一致，相关系数为0.99,正常参考值女性为2.9?9.6μg/L，男性为3.4?11.7μg/L,性别间有显著差异（P<0.001）。不同方法的NSE测定值有一定差异，一般说来，健康成人血清NSE水平在10ng/ml以下均属正常。

神经元的结构 分类和功能

神经元的结构、分类和功能: 神经系统的细胞构成包括两类细胞：神经细胞和神经胶质细胞，一般将神经细胞称作神经元（neuron），被认为是神经系统行使功能、信息处理最基本的单位。而胶质细胞则主要起支持、营养和保护的作用，但随着人们积累知识的增加，逐渐发现胶质细胞也能够行使一些特殊的生理功能。 在人类的中枢神经系统中约含有1011个神经元，其种类很多，大小、形态以及功能相差很大，但它们也具有一些共性，例如突起。我们以运动神经元为例介绍神经元的典型结构，如图2-37所示。与一般的细胞一样，神经元也是由细胞膜、细胞核、细胞质组成的胞体（cell body）和一些突起（neurite）构成的。胞体为代谢和营养的中心，直径大小在μm级别。除胞体外，与神经元行使功能密切相关的结构是各种各样的特异性突起，也称为神经纤维。其中自胞体一侧发出、较细长的圆柱形突起为轴突（axon），每个运动神经元一般只有一个轴突，其功能是信息的输出通道，代表着神经元的输出端；同时还可以借助轴浆进行物质的运输，主要包括由胞体合成的神经递质、激素以及内源性的神经营养物质，这种运输称为轴浆运输。轴突从胞体发出的部位呈椎状隆起，称为轴丘（axon hillock），并逐渐变细形成轴突的起始段（initial segmeng），这一部分的功能及其重要，它是神经元产生冲动的起始部位，并随后继续沿着轴突向外传导。轴突通常被髓鞘（myelin）包裹，但并非是完全的将其包裹，而是分段包裹，髓鞘之间裸露的地方为郎飞结（node of Ranvier），其上含有大量的电压门控钠离子通道。轴突末梢（aoxn terminal）膨大的部分称为突触小体（synaptic knob），这是信息在某个神经元传递的终点，它能与另一个神经元或者效应器细胞相接触，并通过突触结构（synapse）进行信息的传递。 神经元中另一类重要的突起为树突（dendritic），一般是从胞体向外发散和延伸构成，数量较多，由于与树枝的分布类似而得名，是神经元进行信息接收的部位。树突表面长出的一些小的突起称为树突棘（dendritic spine），数目不等，它们的大小、形态数量与神经元发育和功能有关。当神经元活动较为频繁时，树突棘的数量和形状会发生相应的变化，是神经元可塑性研究的重要方面。轴突和树突的作用反映了功能两极分化的基本原理。 图2-37神经元的一般结构 按照不同的分类方法可以将神经元进行如下分类： （1）根据细胞形态分类 神经元形态的多样性令人印象深刻，根据树突和轴突相对于彼此或胞体的方向形态进行的分类如图2-38所示，可分为单极神经元、双极神经元、和多级神经元。形态学相似饿神经元倾向于集中在神经系统的某一特定区域，并具有相似

植物体内过氧化物酶活性的测定

植物体内过氧化物酶活性的测定 一、目的 过氧化物酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能有一定关系，它在代谢中调控IAA水平，并可作为一种活性氧防御物质，消除机体内产生的H2O2的毒害作用。故在科研上常加以测定。 二、原理 在过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶竭色4－邻甲氧基苯酚，在470nm波长处测定生成物的吸光度（A）值，即可求出该酶活性。 三、材料、仪器设备及试剂 1. 材料：植物叶片 2. 仪器设备：分光光度计；离心机；离心管；研钵；移液管；移液管架；试管；试管架；洗耳球。 3. 试剂及配制： 0.1mol·L－1磷酸缓冲液（pH7）。 反应液（100ml 0.1mol·L－1磷酸缓冲液（pH6）中加入0.5ml 愈创木酚、1ml 30﹪H2O2，充分摇匀）。 四、实验步骤 1. 酶液提取 称取植物叶片1g，剪碎置于已冷冻过的研钵中，加入少量石英砂，分两次加入总量为1 0ml pH7磷酸缓冲液，研磨成匀浆后，倒入离心管中，在8000 r / min离心15min，上清液即为粗酶提取液，倒入小试管低温下放置备用。 2. 酶活性测定 吸取反应液3ml 于试管中，加入酶提取液0.02ml（视酶活性可增减加入量），迅速摇匀后倒入光径1cm的比色杯中，以未加酶液之反应液为空白对照，在470nm波长处，以时间扫描方式，测定3min内吸光度值变化，取线性变化部分，计算每分钟吸光度变化值（△A47 0）。 五、酶活性计算 按下式计算酶的相对活性 △A470 ×酶提取液总量（ml）酶活性（△A470·g－1Fw·min－1）= ——————————————————— 样品鲜重（g）×测定时酶液用量（ml）

谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测试剂盒说明书 微量法

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。货号:BC1195规格:100T/48S 产品简介： 谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px 或GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。GPX 能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。 GPX 催化H 2O 2氧化GSH，产生GSSG，GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。产品内容： 提取液：液体80mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5.5mL 蒸馏水溶解；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3.3mL 蒸馏水溶解备用； 试剂三：液体10μL×1支，临用前按1μL 试剂三：499μL 蒸馏水的比例稀释试剂三，4℃保存。现用现配； 试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可； 试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存； 试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL 蒸馏水溶解备用； 标准品：粉剂×1支，10mg 还原型谷胱甘肽，4℃保存。临用前加入1.62mL 蒸馏水溶解为20μmol/mL 的标准溶液备用。

操作步骤： 一、粗酶液的提取： 1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.05g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。 2、细菌、真菌：按照细胞数量104个：提取液体积（mL）500~1000:1的比例，建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。 3、血清（浆）等液体：直接测定。 二、测定步骤： 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。 2、将20μmol/mL标准液用提取液稀释为0.3125μmol/mL的标准溶液。再吸取20μL各标准溶液与80μL 试剂四混匀待用，此标准液混合物的浓度为0.0625μmol/mL。标准液混合物现用现配。 3、将30μL样本与30μL试剂一混合后室温放置5min。 4、操作表：(在1.5mL离心管中依次加入下列试剂) 测定管对照管样品混合物（μL）20- 试剂二（μL）2020 37℃下预热5min 试剂三（μL）2020 37℃下反应5min 试剂四（μL）200200 样品混合物（μL）-20 4000rpm常温离心5min，取上清于EP管或者96孔板中。 试剂名称(μL)测定管对照管标准管空白管上清液100100--标准液混合物--100-试剂四---100 试剂五40404040 试剂六40404040 蒸馏水20202020

过氧化物酶活性的测定

实验六：过氧化物酶活性的测定 左哥 一、实验目的： 过氧化物酶是植物体内重要的呼吸酶类，其活性高低与酶类物质代谢，植物抗性密切相关。通过实验掌握提取POD和测定其活性方法和原理。 二、实验原理： 过氧化物酶催化H2O2氧化酶类，生成醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其它分子缩合，产生颜色较深产物。本实验以愈创木酚为底物，过氧化物酶催化H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物，次产物在470nm波长处有最大吸收峰，故可通过测定470nm波长下的吸收光度变化得知过氧化物酶的活性。 三、材料与试剂 材料：马铃薯 试剂：20m mol/L KH2PO4,反应混合液 四、方法步骤： 1、酶液制备：称取材料1.079g，加入20m mol/L KH2PO4 5ml,于研钵中研磨成匀浆，在 3000r/min，下离心10min,上清液转入25ml,容量瓶，残渣再用5ml, KH2PO4,提取一次，定容，混匀，贮于冷凉处备用。 2、比色测定：光径1cm比色杯两只，1只先加1ml KH2PO4，再加3ml混合液作参比液； 另一只加1ml,酶液，3ml混合液，立即计时并置于分光光度计中，在470nm下测定光密度，每隔1min读数一次，连续测8min，每次测定前重新对照校准。 五、实验结果 酶活力（0.01 A470/L）=(A2-A1)/0.01(t2-t1)*(V2/V1) =328.2μ 酶的比活力（μ/g）=酶活力/样品重 =304.2μ/g

实验七：种子生活力快速测定 一、实验目的： 种子生活力即种子发芽潜力，是鉴定种子力量研究种子储藏生理的重要指标，本实验运用TTC，红墨水发快速测定种子生活力。 二、实验原理： 1、TTC法：有生活力的种子呼吸作用产生的NADH能还原TTC，生产的红色的TPE，将胚染成红色，无生活力的种子，无呼吸代谢活动，不能还原TTC，肧不着色。 2、红墨水法：植物活细胞的原生质膜有选择透性，某些染料分子不能透过。如红墨水，因而不能将种肧染色，而死的种肧，其细胞膜结果破坏，选择透性丧失，因而染料分子能透过膜进入细胞将种肧染色。 三、材料和试剂: 材料：玉米种子 试剂：0.4%TTC，5%红墨水 四、方法和步骤： 1、取吸胀玉米种子25粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，各置一半与烧杯。 2、将其中一烧杯加入0.4%TTC(以淹没种子为度)，然后置于30度很温箱中30分钟，观察记录种肧着色情况。 3、将其中另一烧杯加入5%红墨水（以淹没种子为度），5分钟，倒去红墨水，用自来水清洗多次，直至种子表面无燃料为止。观察记录种子染色情况。 五、实验结果： =21/25 =84%

愈创木酚法测定过氧化物酶活性

愈创木酚法测定过氧化物酶活性 一、实验目的 过氧化物酶是植物体内普遍存在的?活性较高的一种酶，它与呼吸作用?光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断变化，可以反映某一时期植物体内代谢的变化? 二、实验原理 在过氧化物酶(peroxidase POD)催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物?此产物在470 nm处有最大光吸收值，故可通过测470 nm 下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性? 三、实验材料 海滨锦葵叶片 四、实验设备与试剂 1、实验设备 ①可见光分光光度计；②离心机；③研钵；④容量瓶；⑤量筒；⑥试管；⑦吸管? 2、实验试剂 0.05 mol/L的磷酸缓冲液(pH 5.5)； 0.05 mol/L愈创木酚溶液； 2% H2O2； 20%三氯乙酸 五、实验步骤 (一)酶液的制备 取 1.0~5.0 g 洗净的海滨锦葵叶片，切碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆。将匀浆液全部转入离心管中，于3000rmp离心10 min，上清液转入25 mL容量瓶中。沉淀用5 mL 磷酸缓冲液再提取两次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，低温下保存备用。 (二)过氧化物酶活性测定 酶活性测定的反应体系包括: 2.9 mL 0.05 mol/L磷酸缓冲液；1.0 mL 2% H2O2； 1.0 mL 0.05 mol/L愈创木酚和0.1 mL 酶液。用加热煮沸5 min 的酶液为对照，反

应体系加入酶液后，立即于37℃水浴中保温15min，然后迅速转入冰浴中，并加入20%三氯乙酸2.0mL终止反应，然后过滤（或5000r/min离心10min），适当稀释，470nm波长下测定吸光度。 六、实验结果 以每分钟内A470变化0.01 为1 个过氧化物酶活性单位(U)? 过氧化物酶活性U = △A470×V T S 式中:△A470——反应时间内吸光度的变化； W——马铃薯鲜重(g)； t——反应时间(min)； V T——提取酶液总体积(mL)； V S——测定时取用酶液体积(mL)? 七、注意事项 酶液的的提取过程要尽量在低温温条件下进行?H2O2要在反应开始前加，不能直接加入?

神经元的结构分类和功能

神经元的结构分类和功 能 SANY标准化小组 #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#

神经元的结构、分类和功能: 神经系统的细胞构成包括两类细胞：神经细胞和神经胶质细胞，一般将神经细胞称作神经元（neuron），被认为是神经系统行使功能、信息处理最基本的单位。而胶质细胞则主要起支持、营养和保护的作用，但随着人们积累知识的增加，逐渐发现胶质细胞也能够行使一些特殊的生理功能。 在人类的中枢神经系统中约含有1011个神经元，其种类很多，大小、形态以及功能相差很大，但它们也具有一些共性，例如突起。我们以运动神经元为例介绍神经元的典型结构，如图2-37所示。与一般的细胞一样，神经元也是由细胞膜、细胞核、细胞质组成的胞体（cell body）和一些突起（neurite）构成的。胞体为代谢和营养的中心，直径大小在μm级别。除胞体外，与神经元行使功能密切相关的结构是各种各样的特异性突起，也称为神经纤维。其中自胞体一侧发出、较细长的圆柱形突起为轴突（axon），每个运动神经元一般只有一个轴突，其功能是信息的输出通道，代表着神经元的输出端；同时还可以借助轴浆进行物质的运输，主要包括由胞体合成的神经递质、激素以及内源性的神经营养物质，这种运输称为轴浆运输。轴突从胞体发出的部位呈椎状隆起，称为轴丘（axon hillock），并逐渐变细形成轴突的起始段（initial segmeng），这一部分的功能及其重要，它是神经元产生冲动的起始部位，并随后继续沿着轴突向外传导。轴突通常被髓鞘（myelin）包裹，但并非是完全的将其包裹，而是分段包裹，髓鞘之间裸露的地方为郎飞结（node of Ranvier），其上含有大量的电压门控钠离子通道。轴突末梢（aoxn terminal）膨大的部分称为突触小体（synaptic knob），这是信息在某个神经元传递的终点，它能与另一个神经元或者效应器细胞相接触，并通过突触结构（synapse）进行信息的传递。 神经元中另一类重要的突起为树突（dendritic），一般是从胞体向外发散和延伸构成，数量较多，由于与树枝的分布类似而得名，是神经元进行信息接收的部位。树突表面长出的一些小的突起称为树突棘（dendritic spine），数目不等，它们的大小、形态数量与神经元发育和功能有关。当神经元活动较为频繁时，树突棘的数量和形状会发生相应的变化，是神经元可塑性研究的重要方面。轴突和树突的作用反映了功能两极分化的基本原理。 图2-37神经元的一般结构 按照不同的分类方法可以将神经元进行如下分类： （1）根据细胞形态分类 神经元形态的多样性令人印象深刻，根据树突和轴突相对于彼此或胞体的方向形态进行的分类如图2-38所示，可分为单极神经元、双极神经元、和多级

实验十 过氧化物酶活性测定

实验十、过氧化物酶活性测定 【实验目的】 掌握测定过氧化物酶活性常用的比色法及其原理 【实验原理】 过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，本实验以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）为过氧化物酶的底物，在此酶存在下，H 2O 2可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的4-邻甲氧基苯酚，此产物在470nm 处有最大光吸收，因此可通过测量OD 470，以每分钟OD 变化值表示酶活性大小。 【实验试剂】 20mmol/L KH 2PO 4 反应混合液：100mmol/L 磷酸缓冲液(pH6.0) 50ml 于烧杯中，加入愈创木酚28μl ，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30%过氧化氢19μl ，混合均匀，保存于冰箱中。 【实验步骤】 l ． 粗酶液的制备：取马铃薯块茎洗净去皮，称取2g ，切碎置入研钵中，加20mmol/L KH 2PO 4 10ml 研成匀浆转入离心管中，4000r/min 离心10min ，取上清液转入试管保存于冷处，残渣再用10mL KH 2PO 4提取1次，合并上清液并记录总体积（提取酶液的总体积），低温下保存备用。 2．酶活性测定：取4只试管编号，1号管加入反应混合液3ml+ KH 2PO 4 1ml 作为参比；2号管、3号管、4号管均加入反应混合液6ml+提取的酶液2ml ，立即测定2、3、4号管OD 470值，然后将2号管放入4℃冰箱，3号管放于室温，4号管沸水浴，10min 后再分别读数。 3．结果计算： 以每分钟内OD 470变化0.0l 为1个过氧化物酶活性单位(U)，分别计算2、3、4号管过氧化物酶的活性。 过氧化物酶活性＝min)]/([01.0470??????g u t s V W T V D 式中， △D 470——反应时间内吸光度的变化； W ——马铃薯鲜重（g ）； t ——反应时间（min ）； V T ——提取酶液总体积（mL ）； V S ——测定时取用酶液体积（mL ）。 【注意事项】 酶液要低温保存。 【思考题】 酶活性的影响因素有哪些？分析温度对酶活性的影响？