所有质粒载体汇总
酿酒酵母表达载体
pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP, 酵母载体
pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF，pY15TEF，pY16TEF, 酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47, 酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424, 酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109;质粒
pGADT7,pGBKT7 ;对照质粒pGBKT7-53 , pGBKT7-lam , pGADT7-T ，PCL1，酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,Y187,Y190,
毕赤酵母表达载体pPIC9K,pPIC9K-
His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZ a A,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-
S1,pPink hc，
配套毕赤酵母Pichiapink,
毕赤酵母宿主X33，KM71，KM71H，GS115，
原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62等原核表达载体，包括pET系列，pET-GST, pGEX 系列(含GST标签)，pMAL 系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-
p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis 系列，pQE 系列,pTrc99a,pTrcHis系列，
pBV220,221,222,pTXB 系列，pLLP-ompA,plN-HI-ompA
(分泌型表达系列),pQBI63 (原核表达带荧光)pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49b pET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9
pQE30,31,32, pQE 40 pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-C pGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPinPoint-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1,
pGEM7ZF(+) , pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk 233-
3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK
(+) ,pBlueScript SK(-) pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质粒：pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒：pACYCduet-1,pETduet-1,pCDFduet-1, pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣：pG-KJE8 pGro7
pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞：DH5a JM101 JM103
JM105 JM107 JM109 JM110 Top10 Top10F BL21（DE3）HB101 ER2529 E2566
C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21 （AI ）BL21
（DE3）plysS TG1 TB1 DH5a（pir）Tuner（DE3）Bl21 codonplusRIPL Novablue （DE3）Rosetta Rosetta（DE3）Rosetta（DE3）plys Rosetta-gam（i DE3）Rosetta-gamiB（DE3）, Rosetta-gamiB（DE3）plysS Orgam（i DE3）OrgamiB （DE3）HMS174（DE3）
植物表达/RNAi 载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301,
pUN1301,pRTL2 , pRTL2-GFP , pRTL2-CFP, pRTL2-RFP , pRTL2-YFP,pCAMBIA 1300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z,1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIA super1300,pCAMBIA
super1300-GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RNA载体
pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2,
T-DNA插入载体（随机突变体库）pSKI015,pSKI074,真菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1
枯草芽孢杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43,
pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5, pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK,
pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641,
pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01 ，配套菌株BS 168,WB600,WB800,WB700,
WB800N,1012,FZB42,1A747,广宿主质粒pVLT33
RNAi 基因沉默干扰敲除载体pSilencer1.0，pSilencer 2.1-U6 hygro，pSilencer
3.1-H1 hygro，pSilencer 3.1-H1 neo，pSilencer
4.1-CMV neo，pSilencer 4.1-CMV puro pMIR-REPORT Luciferase RNAi 载体（oligoengine）pSuper-puro RNAi 逆转录病毒载体（clontech）: RNAi-Ready pSIREN-Retro Q，RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen （Luciferase shRNA Annealed Oligonucleotide）RNAi 慢病毒载体（addgene）: pLKO.1
哺乳动物表达载体pcDNA3.1+/-,pcDNA4/HisMax B ，pSecTag2 A，pVAX1 ，pBudCE4.1,pTracer CMV2，pcDNA3.1 （-）/myc-His A ，pcDNA6-Myc/His B ，pCEP4，pIRES，pIRESneo，pIRES hyg3，pCMV-myc，pCMV-HA ，pIRES-
puro3，pIRES-neo3,pCAGGS哺乳动物双杂交系统pACT , pBIND , pACT-MyoD , pBIND-Id ，pG5luc,pCMV-BD, pCMV-AD, pBD-p53, pFR-luc,Cytotrap Two-Hybrid System:pSos, pSos MAFB, pMyr蜕皮激素诱导系统pIND, pVgRxR,LacSwith II 哺乳
动物诱导表达系统:pOPRSVI ，pOPI3CAT，pCMVLacI,GeneSwitch System:pSwitch 哺乳动物表面展示系统:pDisplay,四环素调控系统(Invitrogen): pcDNA4/TO/Myc-His
A ，pcDNA4/TO/Myc-His
B ，pcDNA4/TO/Myc-His
C ，pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ ，pcDNA6/TR 四环素调控系统 ( Clontech)：pTet-On，pTet-Off，
pTRE2,pRevTRE，pRevTet-On，pRevTet-off 信号通路报告载体:pGAS-TA-Luc , pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc , pI K B-EGFP, pNFAT-TA-Luc ，pCaspase3-senso，r pAP1( PMA) -
Luc;pGL4.26[luc2P/minP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.30[luc2P/NFA T-RE/Hygro] ，pGL4.75;p53-Luc，pAP-1-Luc，pNF-k B-Luc，pSRE-Luc，pFA2-Elk1 , pFC-MEKK , pFR-luc,Gateway系统(invitrogen) pcDNA6.2-GWEmGFP-miR negative, pLenti 6/TR,pcDNA 6.2-GW EmGFP-miR ，
乳酸菌表达载体及各种乳酸菌乳酸杆菌菌株，
pNZ8148,pLEISS,pMG36e,pBBR1MCS-5,pBBR1MCS-6,pRV610,pLEM415,pHY3 OOPLK,分泌型乳酸菌表达载体pVE5523, pPG611.1,pPG612.1等和乳酸杆菌菌株宿主菌NZ9000,MG1363,Lactobacillus casei 1.539,Lactobacillus casei,acidophilus NCFM,1.2,Lactobacillus sakei 23K,L.plantarum,L.rhamnosus
GG,B.coagulans,Bifidobacterium bifidum,Bifidobacterium infantis,Lactococcus lactis
M17,1663,Lactobacillus reuterii
广宿主表达载体链球菌表达敲除载体假单胞菌表达载体pVLT33,pBBR1MCS-2,3,4,5,6, pJRD215,pJN105,pME6032,Cos 载体pLAFR3,pMP2444 (GFP) ,
pHY3OOPLK,pRT1O2,pRL1O63a, 转座子载体pUT-miniTn5,pMGS100,
pWHM10,pKC1139,pSET152, pOJ260,pPG611.1,pPG612.1，
腺病毒载体/慢病毒，逆转录病毒表达载体及包装包膜质粒，腺病毒系统
( Stratagene) : pAdEasy-1,pShuttle-CMV,pShuttle,pAdTrack, pAdTrack-CMV, pShuttle-IRES-hrGFP-1、pShuttle-IRES-hrGFP-2、pShuttle-CMV-lacZ, pShuttle-CMV-EGFP-C,pXC1, pBHGE3, 配套大肠杆菌BJ5183,293,293T cell line 腺相关病毒系统( Stratagene)：pAAV-MCS ，pAAV-RC ，pHelper，pAAV-LacZ ，pAAV-IRES-hrGFP ，pCMV-MCS ，慢病毒载
体:pLVX-DsRed-Mo no mer-N1,pLVX-IRES-ZsGree n1,pLVX-AcGFP1-N1 丄en ti6/v 5-EDST-EGFP,pWPXL, FUGW,pLentilox 3.7,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q, RNAi-Ready pSIREN-Retro Q-ZsGreen, pSUPER.Retro-GFP/Neo,pSUPER-Retro-Neo,
pSUPER.Retro-puro,PLNCX PLNCX2 pMSCV-HYG pMSCV-neo pMSCV-puro pLEGFP-C1 pLOX-CW-CRE pLOX-GFP-IRES-TK pRetroX-IRES-DsRedExpress, pLVX-IRES-mCherry 质粒载体。病毒包装：二质粒包装系统一：psPAX2 pMD2.G 二质粒系统二：pCMV-dR8.2 dvpr pCMV-VSVG 三质粒包装系统具有更高的包装效率：pMDLg/pRRE pRSV-Rev pMD2.G Invitrogen 包装系统：PLP1 PLP2 PLP/VSVG
基因重组载体敲除载体自杀质粒RED 重组系统载体
pKD3,pKD13,pKD4,pCP20,pKD46, pCVD442,pk18mobsacB,p2NIL, pMAD （革兰氏阳性菌基因敲除），pBT2,RN4220,pKC1139,pOJ260,
pJQ200SK,pSET152,pWHM10, pk18mobsacB, pGOAL17,pGOAL19,基因打靶载体
PL253, PL451, PL452, PL453,配套菌株EL250,EL350,pMLM290,292,
KJBAC1,pST1374
荧光蛋白表达载体荧光定位质粒报告基因载体pEGFP,pEYFP,pECFP,pDsRED, pmCherry,pAcGFP,hrGFP,ZsGreen，pDsRed1-C1, pDsRed1-N1, pDsRED-Monomer-N1, pEYFP-C1, pEYFP-N1, pEGFP-1，pEGFP-C1, pEGFP-N1, pEGFP-
N3, pcDNA-EGFP1,pECFP-N1,pECFP-C1, pAcGFP1-1 pDsRED2-ER, pDsRED2-Mito, pDsRED2-Nuc，pDsRED2-Peroxi , pEYFP-Golgi, pEYFP-Mem, pEYFP-ER , pEGFP-Actin, pECFP-ER, pIRES2-EGFP, pLEGFP-C1，pLEGFP-N1，pDsRED-Express-
N1,plRES2-DsRed,plRES-AcGFP1,pmCherry-C1,N1 启动子增强子报告载体（Promega,带有Luc荧光报告基因）：pGL3-basic, pGL3-control, pGL3-enhancer，pGL3-promoter，pRL-TK ，pRL-CMV ，pRL-SV40, 信号通路报告载体（Clontech）: pGAS-TA-Luc，pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc , pI K B-EGFP, pNFAT-TA-Luc , pCaspase3-sensqr pAP1 （PMA）-Luc 信号通路报告载体（Promega）：
pGL4.26[luc2P/minP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.30[luc2P/NFAT-RE
/Hygro] ，pGL4.75 信号通路报告载体 (Stratagene)：p53-Luc，pAP-1-Luc ，pNF-
K B-Luc, pSRE-Luc, pFA2-Elk1 , pFC-MEKK , pFR-luc
昆虫表达载体杆状病毒表达载体系统pFastBac1,pFastBac1-Gus,pFastBacHT A pFastBacHT-CAT,pFastBacDual,pBlueBacHis2 A DHIOBac配套大肠杆菌，pMIB v5-His B ,pIZT/V5-His ,
Taq,Pfu高表达载体菌株KOD, T4连接酶高表达质粒载体，高产基因工程菌株、酶
基因KOD,T4 kinase 激酶，Tth 反转录酶MMLV，Klentaq PCR酶，Cre酶，RNA inhibitor 抑制酶，DL2OOO 质粒
BiFC 双分子荧光表达载体FRET 系统载体pBiFC-VC155，pBiFC-VN173，pBiFC-bFosVC155，pBiFC-bFos(deltaZIP)VC155，pBiFC-bjun-VN173，pCE-BiFC-
VN173，pCE-BiFC-VC155，
真菌表达载体黑曲霉米曲霉黄曲霉表达质粒pBC-hygro,pAN7-1,pBARGPE1, 真菌ATMT农杆菌介导转化载体pBHt1,pBIG2RHPH2-GFP-GUS等，
酵母单杂交三杂交载体，酵母双杂交系统pGBKT7，pGADT7，pCL1 ，pGBKT7-53 ，pGADT7-T, pGBKT7-Lam，配套酿酒酵母AH109酵母单杂交系统(Clontech):pHISi,pLacZi,pHis2,pHIS2.1 酵母三杂交系统:pBridge, YBZ1 菌株Cytotrap Two-Hybrid System(Stratagene): pSos, pSos MAFB, pMyr
噬菌体展示系统载体1.噬菌体展示抗体scFv质粒：pCANTAB5E宿主菌：TG1辅助噬菌体：M13K07 可溶表达菌：HB2151 2.噬菌体展示抗体Fab 质粒：pcomb3 宿主菌：XL1-Blue 辅助噬菌体：VCSM13
pEVOL，pBudCE4.1,pBudCE4.1-EGFP,Zeocin,pEGFP-C3,2,1,pmCherry-C1,-
N1,pLOVE-mi R302/367,pDsRed2-N1,pAcGFP1.1,TALE toolbox kit,pIRES-
hyg3,pIRES-Neo3,pIRES-puro3,pSIREN-RetroQ-ZsGreen,GST 14-3-3,pDsRed-Monomer-N1,M50 super8x
TOPFlash,pRK793,pCMV-tag5B,pCMV-tag2B，pCMV-N-HA ，
pUAST,pw-25,PAC-5.1-HISA ，pSLIK-Neo,pCMV-myc-cyto,pCMV-myc-nuc, 疫苗表达载体pVAX1,pAdEasy-1,pShuttle,pAdTrack,pAdTrack-CMV,-polyA,pShuttle-EGFP,BJ51 83,pXC1,pBHGE3,pSUPER-retro-GFP-Neo,pORF-lacZ，pORF-TK ，pCOX2-Luc,pcDNA3.1 （-）-myc-His A,pcDNA3.1-p300,pINP, pOprE, pCR2.1 TOPO,pLP1,pLP2,pLP/VSVG,Stbl3,plenti6/V5-DEST,pLVX-shRNA1,2,pLVX-IRE
S,tdTomato,FUW-teto-hOCT4,hSOX2,hMYC,hKLF4,FUW-M2rtTA,pSecTag2
A,pEYFP-C1,pEGFP-N1,-C1,pcDNA3.1-V5-His
A,B,C,pcDNA3.1-EGFP,pLEGFP-C1, a -MHC Promoter,Marc-145猴肾细胞，Sf9,
BmN 昆虫家蚕细胞，酵母载体
pYES2,pYES2.0,INVSc1,pYES3,pYES6,pRS41H,pRS303,304,305，
306,pRS424,425,426,414,415,416,pY13,14,15,16,YBZ1,L4（酵母菌，pESC-
His,pYIP5,pHIS2,pHIS2.1,pHISi,pLacZi,酵母重组载体pUG6,pSH47植物载体pCAMBIA1300-EGFP,
pTCK303,pTRV1,pTRV2,pFGC5941,pUN1301,pSN1301,C58C1，R1601,AGL1 农杆菌感受态，原核载体pQE3,pQE30,31,32,pQE60,61,62,M15,DH10Bac,Origami （B）DE3,XL1-Blue,Rosetta gamiB（DE3）pLysS,TKB1,ER2566，DB3.1，
JM105,T0P10,DH5a,DH5alpha lambda pir,C43 （DE3）菌株感受态，pTrcHis
A,B,C,pTWIN1,pTYB1,pTYB11,pACYC184,pMAL-c5x,c2x,p5x,c4x,pBV220,221,2
22,pCold
I,II,III,TF,pET22a,pET29a,pET28a,pET39b,pET41a,pET42a,p15A,pET-sumo,pBAD His A,B,C,pBAD24,34,pETDuet-1 ,pRSFDuet-1 ,pCDFDuet-1 ,pACYCDuet-1 ,原核荧光pQBI63,pMP2444,链球菌表达、敲除载体pKC1139、pOJ260 pWHM3 , pSET152，pVA981 ，多宿主载体pGOAL19,pBBR1MCS-2,-5,-6,pDSK519,pLA2917，
pRK2013，pVLT33,pMAD,RN4220 金葡菌株，真菌载体pBARGPE1,pAN7-
1,pBHt1,pBIG2RHPH2-GFP-GUS,乳酸菌载体
MG1363,pNZ8148,NZ9000,pNZ9530,pMG36e,枯草芽抱杆菌载体
pHT43,pWB980,pHT300PLK,pMA5,pUTminiTn5, 巨大芽孢杆菌表达载体
pHIS1525,WH320菌谷氨酸棒状杆菌表达载体pEC-XK99E,敲除载体pk18mobsacB, pET载体
3a, 3d
3c-sumo
5b
11a A+
12a A+ 15b A+ 16b A+ 17b A+ 19b A+ 20b A+ 21a,21b,21d A+ 22b A+ 23a,23b A+ 23a-tev 24a K+ 25b K+ 26b K+ 27b K+ 28a,28b,28c K+ 28a-sumo 28a-p53 29a K+ 30a ,30c K+ 31b A+ 32a A+ 32a pelB A+ 35b K+ 39b K+ 40b K+ 41a,41b k+ 42a,42b K+ 43b A+ 43.1a A+
44a A+
48b K+
49b K+
50b K+ pETduet-1 pACYCduet-1 pCDFduet-1 pRSFduet-1 pColAduet-1 pET His pET DsbA pET GST pET Trx
pQE载体
PQE2 pQE9
pQE30,31,32, pQE30UA pQE30LacIq
pQE40L pQE60 pQE70 pQE80L
其他原核表达载体
PBBR1 MCS Cm+ PBBR1 MCS-2 K+ PBBR1 MCS-3 Tet+ PBBR1 MCS-4 A+
PBBR1 MCS-5 庆大霉素
pMal c2x,p2x,5x,5E pBV220,221,222 pTrc99a,pTrcCKS，pTrcHis A,B,C
pBAD24,33,43,pBADHis A,B,C,pBADmycHisA pEZZ18
pThio HisA A+ pGEX4T-1,4T-2，4T-3，5X-1,6p-1,2t,3x pColdI
pColdII pColdIII pColdTF pTwin1 pRsetA,B,C PLLP-STQ
pIN 川-ompA pkk223-3 pSE380 pJLA502 pMBP-C，pMBP-p pTYB11,pCYB1 Origene-N-His GST A+ pPin point CAT A+ pPin point xa1 A+ pPin point xa2 A+ pPin point xa3 A+ pCW ori
常见克隆载体
puc18,puc19，puc118，puc119 pBlue Script SK+,
pBlue Script n SK+
pEGM-3ZF（+）A+
pEGM-11ZF（+ ）A+ pACYC184 pBR322 基因敲除pKD3,pKD4 ，pKD46,pcp20 pK18mobSacB
海肾荧光素酶报告基因pGL3basic，promotor，enhance，r control pGL3 CM
pGL4.29,4.30
维真生物-如何阅读基因载体图谱
如何阅读基因载体图谱 基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 一、载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞，进行感染的分子机制。可发生于完整活体或是细胞培养中。可应用于基础研究、基因疗法或疫苗。用于基因治疗和疫苗的病毒载体应具备以下基本条件： （1）携带外源基因并能包装成病毒颗粒； （2）介导外源基因的转移和表达； （3）对人体不致病； （4）在环境中不会引起增殖和传播。 非病毒载体一般是指质粒DNA。 2、按进入受体细胞的类型分类：原核载体、真核载体、穿梭载体（含原核和真核2个复制子，能在原核和真核细胞中复制，并可以在真核细胞中有效表达）。 3、按功能分类：克隆载体、表达载体 克隆载体：具有克隆载体的基本元件（Ori，Ampr，MCS等），可以携带DNA片段或外源基因进入受体细胞并克隆和大量扩增DNA片段（外源基因）的载体。 表达载体：克隆载体中加入一些与表达调控（具有转录/翻译所必需的DNA顺序）有关的元件即成为表达载体。 载体组成元件 1、复制起始位点Ori：即控制复制起始的位点。Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 2、抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 3、多克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段，它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。还要再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 4、P/E：启动子/增强子 5、Terms：终止信号 6、加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用 示例阅读载体： pENTER载体 1）human ORF + pENTER载体 2） CMV启动子，T7启动子 3） ORF的C端融合了Flag和His tag 4) 多克隆位点，常用AsisI 和 MluI(人源基因上不常见的)
如何阅读质粒图谱(更新版本)
如何阅读质粒图谱 最近由于实验需要,需要查阅载体图谱,到园子里搜罗一番,发现虽然有人问载体图谱阅读的问题,也有前辈回答,但都不详细,借自己也在琢磨这个问题的机会,将我学到的东西整理一下,于 大家分享。 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素 #复制起始位点Oril 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 ＃抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+l ,Kan+ ＃多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段l ＃P/E 启动子/增强子l ＃Termsl 终止信号 ＃加poly（A）信号l 可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（卡那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 ＃启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 ＃增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。 ＃核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。l ＃转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。
如何阅读分析质粒图谱
如何阅读分析质粒图谱 日期：2012-04-18来源：未知作者：xilu点击：次 如何阅读分析质粒图谱 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素 1. 复制起始位点Ori即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 2. 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ 3. 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 4. P/E 启动子/增强子 5. Terms 终止信号 6. 加poly(A)信号可以起到稳定mRNA作用 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒) 所谓穿梭质粒是指一类人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，因而可以在两种不同类群宿主中存活和复制的质粒载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到真核生物表达载体的构建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti 质粒。这些穿梭质粒不仅可以在大肠杆菌中复制扩增，也可以在相应的枯草、酵母、动物或植物细胞中扩增和表达。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 1. Ampr水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 2. tetr可以阻止四环素进入细胞。 3. camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
4. neor(kanr) 氨基糖苷磷酸转移酶使G418(长那霉素衍生物)失活 5. hygr使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点(MCS)。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号
所有质粒载体汇总
酿酒酵母表达载体 pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP, 酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF pY15TEF, pY16TEF, 酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47, 酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424,酵母双杂交系统：酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109;质粒pGADT7,pGBKT7 ;对照质粒pGBKT7-53 , pGBKT7-lam , pGADT7-T , PCL1，酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,丫187,丫190, 毕赤酵母表达载体 pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZ a A,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPink hc , 配套毕赤酵母Pichiapink, 毕赤酵母宿主X33, KM71 , KM71H , GS115, 原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62等原核表达载体，包括pET系列，pET-GST, pGEX 系列(含GST标签)，pMAL 系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,- p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis 系列，pQE 系列,pTrc99a,pTrcHis系列， pBV220,221,222,pTXB 系列，pLLP-ompA,pIN-III-ompA (分泌型表达系列),pQBI63 (原核表达带荧光)pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49b pET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9 pQE30,31,32, pQE 40 pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-C pGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPi nPoi nt-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1, pGEM7ZF (+) , pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk 233- 3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK (+) ,pBlueScript SK (-) pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C,大肠杆菌冷激质粒：pColdI pColdII pColdIII pColdTF原核共表达质粒：pACYCduet-1,pETduet- 1,pCDFduet-1, pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣：pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞：DH5a JM101 JM103
质粒图谱的阅读方法
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 质粒图谱的阅读方法 质粒图谱的阅读方法载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 a. 复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。 原核生物 DNA分子中只有一个复制起始点。 而真核生物 DNA分子有多个复制起始位点。 b. 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ c. 多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 d. P/E 启动子/增强子 e. Terms 终止信号 f. 加 poly（A）信号可以起到稳定 mRNA 作用二、如何阅读质粒图谱第一步： 首先看 Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）。 第二步： 再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1） Ampr 水解－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2） tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3） camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4） neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使 G418（长那霉素衍生物）失活（5） hygr 使潮霉素失活。 第三步： 1 / 6
看多克隆位点（MCS）。 它具有多个限制酶的单一切点。 便于外源基因的插入。 如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。 决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步： 再看外源 DNA 插入片段大小。 质粒一般只能容纳小于 10Kb 的外源 DNA 片段。 一般来说，外源DNA 片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步： 是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。 这是用来区别克隆载体与表达载体。 克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。 选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 a. 启动子－促进 DNA 转录的 DNA 顺序，这个 DNA 区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是 DNA 分子上可以与 RNApol 特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 b. 增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）
如何阅读质粒图谱
一、载体主有病毒和非病毒两大类，其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ 多 克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子 Terms：终止信号 加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记： （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆
载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 相关概念： 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或 操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 增强子/沉默子－为真核λ基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子－负增强子，负调控序列。 核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。 λ转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT 或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。 三、载体及其分类 载体：即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。 P.S.基因工程所用的vector实际上是DNA分子，是用来携带目的 基因片段进入受体细胞的DNA。 载体的分类 按功能分成：（1）克隆载体：都有一个松弛的复制子，能带动 外源基因，在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA片段（基因）的载体。（所以有时实验时扩增效率低下，要注意是不是使用的严谨型载体）（2）表达载体：具有克隆载体的基本元件 （ori,Ampr,Mcs等）还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体。
常用pGEX载体图谱
Rosetta系列的表达菌株可以提供T7 RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因。。。pGEX系列载体上的外源基因不需要T7 RNA聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达 Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子，受Lac阻遏蛋白的负调节，它的启动能力比Lac和trp都强。其中Tac 1是由Trp启动子的－35区加上一个合成的46 bp DNA片段(包括Pribnow 盒)和Lac操纵基因构成，Tac 12是由Trp的启动子-35区和Lac启动子的-10区，加上Lac操纵子中的操纵基因部分和SD序列融合而成 蛋白标签： A myc tag is a polypeptide protein tag derived from the c-myc gene product that can be added to a protein using recombinant DNA technology. It can be used for affinity chromatography, then used to separate recombinant, overexpressed protein from wild type protein expressed by the host organism. It can also be used in the isolation of protein complexes with multiple subunits. A myc tag can be used in many different assays that require recognition by an antibody. If there is no antibody against the studied protein, adding a myc-tag allows one to follow the protein with an antibody against the Myc epitope. Examples are cellular localization studies by immunofluorescence or detection by Western blotting. The peptide sequence of the myc-tag is (in 1- and 3-letter codes, respectively): N-EQKLISEEDL-C, N-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-C, where N stands for Amino-terminus and C stands for Carboxy terminus. The tag is approximately 1202 Daltons in atomic mass and has 10 amino acids. It can be fused to the C-terminus and the N-terminus of a protein. It is advisable not to fuse the tag directly behind the signal peptide of a secretory protein, since it can interfere with translocation into the secretory pathway. A monoclonal antibody against the myc epitope, named 9E10, is available from the non-commercial Developmental Studies Hybridoma Bank
质粒载体分类及阅读
质粒载体分类及阅读 一.九种表达载体 Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19R DNA pUC57 DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1 PBR322 pbv220 pBluescript II KS (+) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Dsb Fusion Systems 39b and 40b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression System 33b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? p ET Expression Systems Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems plus Competent Cells Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET GST Fusion Systems 41 and 42 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET NusA Fusion Systems 43.1 and 44 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Vector DNA Protein Purification ? Purification Systems ? Strep?Tactin Resins and Purification Kits 四.PGEX系列表达载体 T EcoR pGEX-1 I/BAP pGEX-2T pGEX-2TK pGEX-3X
认识质粒图谱
一、如何阅读质粒图谱 载体主要有病毒和非病毒两大类，其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。 而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ 多l克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子 Terms：终止信号 加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记： （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。 如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。 一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。 这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 二、相关概念： 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 增强子/沉默子－为真核l基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子－负增强子，负调控序列。 核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。 l转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA 的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。 三、载体及其分类 载体：即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载
表达载体的构建方法及步骤
表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 （4）P/E 启动子/增强子 （5）Terms 终止信号 （6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA 作用 选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目 的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。 载体选择主要考虑下述3点： 【1】构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。 【2】.载体的类型： （1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb 选
质粒。 （2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。 【3】载体MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。 综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求： （1）选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载 体）； （2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。 （3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地； （4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。 （5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。 无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA 进行切割，获得线性载体分子，以便于与目的基因片段进行连接。 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）
质粒载体基础
第一节质粒载体 一、质粒的基本特性 1．质粒的复制 通常一个质粒含有一个与相应的顺式作用控制要素结合在一起的复制起始区（整个遗传单位定义为复制子）。在不同的质粒中，复制起始区的组成方式是不同的，有的可决定复制的方式，如滚环复制和θ复制。在大肠杆菌中使用的大多数载体都带有一个来源于pMB1 质粒或ColE1 质粒的复制起始位点。图3-1 是其复制其始示意图。 在复制时，首先合成前RNAⅡ，即前引物，并与DNA 形成杂交体；而后RNase H 切割前RNAⅡ，使之成为成熟的RNAⅡ，并形成三叶草二级结构，该引物引导质粒的复制。形成的RNAⅠ可控制RNAⅡ形成二级结构，同时Rop 增强RNAⅠ的作用，从而控制质粒的拷贝数。削弱RNAⅠ和RNAⅡ之间相互作用的突变，将增加带有pMB1 或（ColE1）复制子的拷贝数。 图3-1 带pMB1（或ColE1）复制起点的质粒在复 制起始阶段所产生的转录的方向及其粗略大小。 2．质粒的拷贝数 质粒拷贝数分为严谨型与松驰型。严谨型质粒每个细胞中拷贝数有限，大约1 ～几个；松驰型质粒拷贝数较多，可达几百。表5-1 就是不同类的质粒与复
制子及拷贝数的大致关系。 表3-1 ：质粒载体及其拷贝数 pUC 系列质粒的复制单位来自质粒pMB1 ，但其拷贝数较高。pMB1 质粒的复制并不需要质粒编码的功能蛋白，而是完全依靠宿主提供的半衰期较长的酶（DNA 聚合酶Ⅰ，DNA 聚合酶Ⅲ），依赖于DNA 的RNA 聚合酶，以及宿主基因dnaB 、dnaC 、dnaD 和danZ 的产物。因此，存在抑制蛋白质合成并阻断细菌染色体复制的氯霉素或壮观霉素等抗生素时，带有pMB1（或ColE1）复制子的质粒将继续复制，最后每个细胞中可积聚2～3 千个质粒。3．质粒的不相容性 两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第二个质粒导入后，在不涉及DNA 限制系统时出现的现象。不相容的质粒一般都利用同一复制系统，从而导致不能共存于同一宿主中。两个不相容性质粒在同一个细胞中复制时，在分配到子细胞的过程中会竞争，随机挑选，微小的差异最终被放
所有质粒载体汇总
酿酒酵母表达载体 pYES2,ｐYES２／NT,ｐYＥS２/CT,pYES3,pYES6,pYCｐlａｃ2２-GＦP, 酵母载体pAUR12３,pRS３03TEF,pRS30４, pRS305,pRS306,ｐY13ＴEF,ｐ Y14TEＦ,pY１５TEF,pＹ16TEF, 酵母基因重组表达载体pUG6,pＳH４７, 酵母单杂载体pHISｉ,pLacZi,pHIＳ2, pGＡD4２4, 酵母双杂交系统:酿酒酵母 Y187, 酿酒酵母AＨ109;质粒pGADＴ7,pGBＫT７;对照质粒pGBKT7－5３,pGBKT７-lam,pGＡDＴ７-T,PCＬ1, 酿酒酵母菌株ＩＮＶＳc1,YM42７1, AH109,Y1８７,Y１９0, 毕赤酵母表达载体pPＩＣ9K,pPIC9Ｋ-His,pPＩＣ3.5K,ｐＰICZalｐhaＡ,B,C,ｐP ＩCZA,B,C,ｐGAPZαA,ｐAＯ8１5,pPIC9k-Hｉs,pＨIL-S1,pＰink ｈc, 配套毕赤酵母Pｉcｈiaｐiｎk, 毕赤酵母宿主Ｘ33,KＭ７１,KM71H,GS115, 原核表达载体pQＥ30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括ｐET系列,ｐＥ T-GST,pGEX系列(含GＳT标签),pMAL系列pMＡL-c2x,－c4x,－ c4e,-c5x,-p5x,pＢＡD,pBAＤHis,ｐＢADmycHis系列,ｐQE系列,pＴｒｃ9９ a,pTrcＨis系列,pＢV２2０,22１,222,pTＸＢ系列,ｐLＬP-oｍ pA,pIN-III-ompA(分泌型表达系列),pQBI6３(原核表达带荧光)pEＴ3a, pET 3d, pET 11a,ｐEＴ12a, ｐEＴ14b, ｐＥT 15b, pＥT 16b, pＥT 17b,pET 19b, pET 2０b, pET 21a,b,d, pET ２2b,ｐET ２3a,ｐET 23b, pET24a,b,pET ２5ｂ, pET 2６b, ｐEＴ27b, pET ２8a,b, pET 29a,pET 30a, pET 31b, pET32a, pEＴ35b, pET 38b, pEＴ３９b,pET 40b, pEＴ４１ａ,b pET 42a,pＥT 43、1ａ,b pET 44ａ, ｐEＴ49ｂpEＴ３０2,303 pET His,pET Dsｂ,ｐET GST,ｐＥT Trx pＱE2, ｐQE9 pQE30,31,32, pQE 4０ｐQＥ７０pQE80L pＱＥTirs sｙstem pR ＳET-A pRSEＴ-B pRSET－C pGEX4T-1,-2,－3,５ｘ-１,6p-1,６p-2,2ｔk,3c ｐＢV22０,221,222 ｐTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAＤＨｉsＡ,B,C pPinPoiｎｔ-Ｘa1,Xa2,Xａ3 pMALc2x, p2x pＢV220 pGEM Ex1, pGEＭ7ZF(+), pＴrｃ99Ａ,ｐTwin1, pEZZ18ｐkk232－８,pｋk ２33-３,pAＣYＣ１８4,pBR３２2,ｐ UC119 pＴYB1,pTYB2,pTYB4,pTＹB11 pＢlueＳcript SK(+),pＢlueSｃript SK(－) ｐLＬP ompA, ｐＩNIIIomｐA,ｐMＢP-P,pＭBP-Ｃ, 大肠杆菌冷激质粒: p ＣｏｌdＩpColｄII ｐColdIIＩpCｏldTF 原核共表达质粒:pＡCYCｄuet－1,ｐ
如何阅读分析质粒图谱
基因酷质粒图谱https://www.wendangku.net/doc/6418176984.html,/bbs/forum-38-1.html，收藏了将近800种质粒的图谱及相关信息 特向大家推荐，介绍及使用方法见： https://www.wendangku.net/doc/6418176984.html,/bbs/thread-417-1-1.html 质粒图谱信息 一.九种表达载体 Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19R DNA pUC57 DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1 PBR322 pbv220 pBluescript II KS (+) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Dsb Fusion Systems 39b and 40b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression System 33b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems plus Competent Cells Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET GST Fusion Systems 41 and 42 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET NusA Fusion Systems 43.1 and 44 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Vector DNA Protein Purification ? Purification Systems ? Strep?Tactin Resins and Purification Kits 四.PGEX系列表达载体
pcDNA3.1质粒图谱
pcDNA?3.1(+) pcDNA?3.1(–) Catalog nos. V790-20 and V795-20 Version K 10November2010 28-0104 User Manual
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Table of Contents Important Information (v) Accessory Products (vi) Methods (1) Overview (1) Cloning into pcDNA?3.1 (2) Transfection (6) Creating Stable Cell Lines (7) Appendix (10) pcDNA?3.1 Vectors (10) pcDNA?3.1/CAT (12) Technical Support (13) Purchaser Notification (13) References (15) iii
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Important Information pcDNA? Vectors This manual is supplied with the following products. Product Catalog no. pcDNA?3.1(+) Vector V790-20 pcDNA?3.1(–) Vector V795-20 Shipping and Storage Vectors are shipped on wet ice. Upon receipt, store at –20°C. Contents The pcDNA?3.1 vector components pcDNA?3.1 are listed below: Item Concentration Volume pcDNA?3.1 Vector pcDNA?3.1(+) or pcDNA?3.1(–)20 μg at 0.5 μg/μl, in TE buffer, pH 8.0 (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0) 40 μl Control Plasmid pcDNA?3.1/CAT 20 μg at 0.5 μg/μl, in TE buffer, pH 8.0 (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0) 40 μl Product Qualification The Certificate of Analysis provides detailed quality control information for each product. Certificates of Analysis are available on our website. Go to https://www.wendangku.net/doc/6418176984.html,/support and search for the Certificate of Analysis by product lot number, which is printed on the box. v
质粒图谱大全
（转载） 一.九种表达载体 Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19RDNA pUC57DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1 PBR322 pbv220 pBluescriptIIKS( ) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNA ProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits 四.PGEX系列表达载体 TEcoR?pGEX-1I/BAP
如何阅读质粒图谱
如何阅读质粒图谱 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一个合格质粒的组成要素 1.复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一 个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 2.抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ 3.多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 4.P/E 启动子/增强子 5.Terms 终止信号 6.加poly（A）信号可以起到稳定mRNA作用 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 所谓穿梭质粒是指一类人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，因而可以在两种不同类群宿主中存活和复制的质粒载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到真核生物表达载体的构建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti 质粒。这些穿梭质粒不仅可以在大肠杆菌中复制扩增，也可以在相应的枯草、酵母、动物或植物细胞中扩增和表达。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 1.Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 2.tetr 可以阻止四环素进入细胞。 3.camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 4.neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活 5.hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA 片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。